UNIVERSIDAD POLITCNICA DE

PUEBLA
Programa Acadmico de Maestra en Ingeniera en Automatizacin de
Procesos Industriales

MONITOREO Y CONTROL DE UN BIORREACTOR

ESCALA LABORATORIO PARA PROCESOS DE
FERMENTACIN DE CULTIVOS CELULARES
TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRO EN INGENIERA

PRESENTA:
ING. ALDO HERNNDEZ DAZ

DIRECTOR
DRA. MARA LETICIA RAMREZ CASTILLO

Juan C. Bonilla, Puebla

13 de Diciembre del 2013

El presente trabajo fue realizado en el

Laboratorio de Investigacin y Posgrado y en
los

Departamentos

de

Biotecnologa

Mecatrnica de la Universidad Politcnica de

Puebla, con el apoyo del Consejo de Ciencia
y

Tecnologa

del

Estado

de

Puebla

(CONCYTEP). El programa de Maestra en

Ingeniera pertenece al Programa Nacional de
Posgrados de Calidad (PNPC-CONACYT).

La presente tesis titulada Monitoreo y control de un biorreactor escala

laboratorio para procesos de fermentacin de cultivos celulares y realizada
por el Ing. Aldo Hernndez Daz, ha sido revisada y aprobada por el Jurado para
obtener el Ttulo de:

MAESTRO EN INGENIERA EN AUTOMATIZACIN DE PROCESOS

INDUSTRIALES

PNPC-CONACYT
UNIVERSIDAD POLITCNICA DE PUEBLA

Jurado integrado por:

Firma

Director: Dra. Mara Leticia Ramrez Castillo

___________________________

Asesor:

___________________________

Asesor:

___________________________

Revisor:

___________________________

Juan C. Bonilla, Puebla, Mxico.

Agosto 2013
2

Contenido
Resumen ................................................................................................................. 8
Captulo 1 Planteamiento del problema de investigacin ...................................... 10
1.1 Introduccin ................................................................................................. 10
1.2 Objetivos ...................................................................................................... 12
1.2.1 Objetivo general ..................................................................................... 12
1.2.2 Objetivos especficos ............................................................................. 12
1.3 Justificacin ................................................................................................. 12
Captulo 2 Estudio del estado del

arte ................................................... 15

2.1 Antecedentes ............................................................................................... 15

2.1.1 Caractersticas de un biorreactor ........................................................... 18
2.1.2 Parmetros de operacin de un biorreactor ........................................... 20
2.1.3 Equipos existentes. ................................................................................ 22
2.1.3.1 BIOSTAT ORB ................................................................................. 24
2.1.3.2 Biorreactor LAMBDA MINIFOR ........................................................ 25
2.1.3.2 Biorreactor BIO FLO 310.................................................................. 26
2.2 Modos de operacin de cultivo..................................................................... 27
2.3. Parmetros de operacin ............................................................................ 32
2.3.1 pH (potencial de Hidrgeno) ................................................................. 34
2.3.2 Oxgeno Disuelto (OD) ........................................................................... 35
2.3.3 Temperatura .......................................................................................... 37
2.3.4 Agitacin del medio de cultivo ............................................................... 40
2.3.5 Alimentacin de sustrato........................................................................ 41
2.4 Simulacin de los sistemas de cultivo .......................................................... 43
La simulacin de los sistemas de cultivo se bas en los puntos siguientes: .. 43
2.4.1 Cultivo lote ............................................................................................. 44
2.4.2 Cultivo continuo ..................................................................................... 46
2.4.3 Cultivos alimentados o cultivos lote alimentado ..................................... 48
3

2.4.3.2 Cultivo alimentado lineal ..................................................................... 50

Captulo 3 Implementacin del sistema ................................................................. 52
3.1 Biorreactor ................................................................................................... 52
3.2 Control para los cultivos ............................................................................... 54
3.2.1 Cultivo alimentado exponencial. ............................................................ 54
3.2.2 Alimentacin lineal ................................................................................. 56
3.2.3 Cultivo continuo ..................................................................................... 57
3.3 Agitacin de medio de cultivo....................................................................... 57
3.4 Medicin de pH. ........................................................................................... 58
3.5 Medicin del oxgeno disuelto ...................................................................... 59
3.6 Interfaz de usuario ....................................................................................... 60
Captulo 4 Resultados y discusiones ..................................................................... 63
4.1 Medicin de pH. ........................................................................................... 63
4.2 Medicin del oxgeno disuelto ...................................................................... 66
4.5. Agitacin del medio de cultivo. ................................................................ 70
4.5 Panorama general del equipo ...................................................................... 71
4.6Simulacin de los cultivos ............................................................................. 72
4.6.1 Cultivo Lote ............................................................................................ 73
4.6.2 Cultivo Continuo..................................................................................... 74
4.6.3 Cultivo lote alimentado........................................................................... 77
Captulo 5. Conclusiones ...................................................................................... 84
5.1 Conclusiones................................................................................................ 91
Captulo 6 Referencias bibliogrficas .................................................................... 93

ndice de figuras
Figura 1.1. Diagrama a bloques del proceso de fermentacin. ............................. 14
Figura 2.1 Configuracin de un biorreactor agitado (Ramrez 2004). .................... 19
Figura 2.2 Perspectivas de reaccin y proceso involucrados en el crecimiento
celular y formacin de producto. ........................................................................... 22
Figura 2.3 Representacin de cultivo lote, esquema general en (a) y cintica de
cultivo en (b). ......................................................................................................... 29
Figura 2.4 Representacin de cultivo continuo. 2.4a. Esquema del biorreactor.
2.4b. Cintica de cultivo continuo. ......................................................................... 30
Figura 2.5. Representacin de cultivo lote alimentado. 2.4a. Esquema de
biorreactor. 2.4b. Cintica del cultivo lote alimentado. .......................................... 31
Figura 2.6. Electrodo de vidrio para medir pH. ...................................................... 35
Figura 2.7. Electrodo de Oxgeno disuelto. Instrumento. ...................................... 36
Figura 2.8. Electrodo de Oxgeno disuelto. Conexiones. ...................................... 37
Figura 2.9. Termopar convencional. ...................................................................... 39
Figura 2.10. Agitacin del medio de cultivo. .......................................................... 41
Figura 2.12. Bomba peristltica. ............................................................................ 42
Figura 3.1. Procesos e fermentacin en biorreactor escala laboratorio. ............... 53
Figura 3.2. Biorreactor de 4 litros de la UP-Puebla. .............................................. 53
Figura 3.3. Estructura del controlador PID y la planta a controlar. ........................ 56
Figura 3.4. Esquema del sistema de control como entrada al biorreactor de una
bomba peristltica. ................................................................................................ 56
Figura 3.5. Diagrama a bloques del controlador PID del motor de corriente directa.
.............................................................................................................................. 57
Figura 3.6. Diagrama a bloques del controlador PID del motor de corriente directa.
.............................................................................................................................. 58
Figura 3.7 Experimento de mediciones de porcentaje de saturacin de oxgeno. 60
Figura 3.8. Diagrama general de interfaz de usuario. ........................................... 61
Figura
3.9
Diagrama
de
interfaz
en
Labview
y
mbed
(http://mbed.org/cookbook/Homepage.). ............................................................... 62
Figura 4.1 Relacin Voltaje-pH.............................................................................. 64
Figura 4.2 electrodo de pH. ................................................................................... 65
Figura 4.3. Grfica de pH, datos tomados en lnea. .............................................. 65
Figura 4.4. Datos obtenido y exportados en hoja de clculo. ................................ 66
Figura 4.5. Mediciones de porcentaje de saturacin de oxgeno, ......................... 67
aireacin 1vvm. ..................................................................................................... 67
5

Figura 4.6. Control de velocidad dando un flujo constante como alimentacin de

sustrato ................................................................................................................. 67
Figura 4.7. Implementacin de tarjeta de potencia................................................ 68
Figura 4.8. Termopar convencional. ...................................................................... 69
Figura 4.9. Circuito de conexiones del MAX6675 al microcontrolador MBED. ...... 70
Figura 4.10. Velocidad de agitacin en medio de cultivo. ..................................... 71
Figura 4.11. Implementacin de tarjeta de potencia. ............................................. 71
Figura 4.12 Panorama general de una fermentacin. ........................................... 72
Figura 4.13 Dinmica del cultivo lote. .................................................................... 74
Figura 4.14.Comportamiento de la velocidad especfica de crecimiento, en funcin
del flujo para un tiempo dado. ............................................................................... 76
Figura 4.15. Simulacin del cultivo continuo simple etapa. ................................... 77
Figura 4.16. El cultivo alimentado exponencialmente de Klebsiellapneumoniaesp
pneumoniaeK63, =0.05 h-1. ................................................................................. 79
Figura 4.17. Cultivo alimentado exponencialmente de Klebsiella pneumoniae sp.
pneumoniae, =0.05 h-1. A) Evolucin de la biomasa total y B) Concentracin de
biomasa. ................................................................................................................ 79
Figura 4.18. Cultivo alimentado creciente de Klebsiella pneumoniae sp.
pneumoniae. Evolucin del A) Flujo, B) Volumen. ................................................ 80
Figura 4.19 Incremento del volumen a diferentes flujos constantes en biorreactor.
.............................................................................................................................. 82
Figura 4.20. Evolucin de la concentracin de biomasa para cultivos lote
alimentado lineal. .................................................................................................. 83
Figura 4.21. Evolucin de la biomasa total para cultivos lote alimentado lineal. ... 83

ndice de tablas
Tabla 2.1 Productos obtenidos por fermentacin (Quintero 1997) ........................ 16
Tabla 2.2 Aplicaciones de las enzimas producidas por fermentacin, extrado de
Quintero (1997) ..................................................................................................... 17
Tabla 2.3 Variables comnmente medidas en fermentadores y dispositivos
utilizados para su determinacin (Ramrez 2004). ................................................ 33
Tabla 2.4. Caractersticas de termopares de acuerdo al tipo. ............................... 39
Tabla 2.5. Clasificacin de procesos de agitacin. ................................................ 40
Tabla 3.1 Relaciones estndar del reactor de 4 litros utilizado. ............................ 54
Tabla 3.2 Voltajes obtenidos con sustancias buffer y amplificadas. ...................... 58
Tabla 4.2.Caracterizacin de la bomba peristltica. .............................................. 68
Tabla 4.3. Caractersticas de termopares de acuerdo al tipo. ............................... 69
Tabla 4.4. Parmetros de simulacin. ................................................................... 73
Tabla 4.5. Condiciones de operacin. ................................................................... 74
Tabla 4.6 Condiciones de operacinutilizadas en la simulacin del cultivo continuo
simple etapa. ......................................................................................................... 75
Tabla 4.7 Parmetros cinticos utilizados en la simulacin del cultivo continuo
simple etapa .......................................................................................................... 75
Tabla 4.7. Condiciones de operacin. ................................................................... 78
Tabla 4.8. Parmetros de simulacin. ................................................................... 78
Tabla 4.9 Parmetros cinticos utilizados en la simulacin de cultivo lote
alimentado lineal. .................................................................................................. 81
Tabla 4.10 Condiciones de operacinutilizadas en la simulacin de cultivo lote
alimentado lineal. .................................................................................................. 82

Resumen
Los biorreactores son recipientes en los que se pueden realizar reacciones
bioqumicas, con microorganismos, enzimas, clulas vegetales o clulas animales.
Su funcin es proveer un medio controlado para llevara cabo las reacciones en las
mejores condiciones y de esa forma lograr la transformacin de sustratos y
biosntesis de productos con altos rendimientos. En la mayora de los
biorreactores comerciales, el control de los parmetros se lleva a cabo
manualmente y la medicin de estos datos no es almacenada, el costo se va
incrementando conforme se aumentan los dispositivos para controlar los
parmetros y adquirir los datos en lnea, almacenarlos y graficarlos. En este
trabajo se desarroll un sistema de medicin y control de los parmetros de
operacin as como de adquisicin de los datos en lnea que permite almacenarlos
y graficarlos. Los parmetros medidos fueron pH, temperatura y oxgeno disuelto;
los parmetros controlados fueron pH y alimentacin de sustrato, este ltimo
mediante el flujo controlado por una bomba peristltica que permite llevar a cabo
cultivos alimentados y continuos. Se estudiaron los transductores que se utilizan
para dichas tarea. Adems se llevaron a cabo las simulaciones de los cultivos
(cultivos lote, continuo, lote alimentado exponencial y lineal) realizando los
balances de masa de acuerdo al modo de operacin y utilizando los modelos de
crecimiento y produccin establecidos por la bibliografa. El desarrollo de este
sistema fue menos costoso que un biorreactor comercial y presentar mayor
flexibilidad al poder realizar cultivos alimentados.

Abstrac
The bioreactors are containers in which biochemical reactions can be performed,
using microorganisms, enzymes, plant cells or animal cells. Its function is to
provide a controlled environment to carry out the reactions in the best condition
and thus transform substrates and synthesize products with high yields. In most
commercial bioreactors, the control of parameters is carried out manually and the
measurement of such data is not stored, the cost will increase with the increase of
devices to control the parameters, for online data acquisition, their storage and
graphing. In this work a system for measuring and controlling the operating
parameters was developed as well as acquisition of online data, storage and
graphing. The measured parameterswere pH, temperature and dissolved oxygen;
the controlledparameterswere pH and substrate feeding, the latter by the flow
control of a peristaltic pump that allows to perform fed-batch and continuous
cultures. The transducersfor these tasks were studied. Culture simulations were
also carried out (batch, continuous, fed batch lineal and exponential cultures) by
mass balances according to the operating mode and using models of growth and
8

production established in the bibliographic references. The development of this

system was less expensive than a commercial bioreactor and provides greater
flexibility, for example the fed-batch culture can be performed.

Captulo 1 Planteamiento del

problema de investigacin
1.1 Introduccin
Una de las metas importantes en cualquier industria de los procesos, es el
incremento de la produccin asegurando que el producto fabricado sea de calidad,
lo anterior sin importar cul sea el proceso que se est manejando; una de las
maneras de conseguir esto es la implementacin de tcnicas de control para
mantener las condiciones adecuadas necesarias para llevar a cabo el proceso.
Familiarizado con el trmino de control de proceso est el trmino de
automatizacin que es usado para describir la operacin automtica, en aos
recientes la automatizacin ha sido utilizada en la manufactura moderna de
productos, operando de manera automtica las mquinas, es decir, con la mnima
interaccin del humano (Bolton 2002).
Las tcnicas de control tambin son utilizadas para los procesos biolgicos, mejor
conocidos como bioprocesos. Las principales preocupaciones en la industria de
los bioprocesos es poder controlar el proceso manteniendo las condiciones de la
reaccin biolgica en todo el medio de cultivo. El control de un bioproceso est
10

definido como proveer las condiciones adecuadas para que los microorganismos
puedan crecer, reproducirse y sintetizar el producto deseado en las cantidades
esperadas, esto incluye: i) una concentracin correcta de nutrientes en el cultivo
(fuentes de carbono, nitrgeno, fsforo, oligoelementos y oxgeno); ii) remover las
toxinas producidas por el propio metabolismo de las clulas (dado el caso del
CO2), iii) controlar las condiciones de operacin (temperatura, pH, aireacin y
agitacin)(Alford2006, Wang y col. 2009). Lo anterior permitir controlar al
microorganismo y en el mejor de los casos su metabolismo para producir lo
previsto.

El desarrollo del monitoreo y control de un biorreactores indispensable en el

estudio de las condiciones adecuadas para llevar a cabo el metabolismo y
reproduccin celular, proporcionando al cultivo celular un medio adecuado de
reproduccin, detallando la dinmica de crecimiento celular y de los sustratos
importantes para que sta tarea sea llevada a cabo, tal es el objeto de este
trabajo. En este la dinmica de crecimiento celular es representada por medio de
modelos matemticos establecidos y estudiados ampliamente por diversas
bibliografas. Tambin se muestran las diversas tcnicas de control que pueden
implementarse a los bioprocesos y los instrumentos que se utilizan para llevar a
cabo el sensado de los parmetros ms importantes, as como los mecanismos
que ejecutan el control de dichos parmetros para propiciar a las clulas para su
apto desarrollo. Se logr desarrollar un sistema de adquisicin de datos para los
parmetros de operacin de pH y temperatura, asimismo se implement un
dispositivo que permitir controlar los motores para el control de flujo y de
agitacin.

11

1.2 Objetivos
1.2.1 Objetivo general
Monitorear y controlar un biorreactor escala laboratorio para procesos de
fermentacin de cultivos celulares.

1.2.2 Objetivos especficos

Identificar y caracterizar el biorreactor.

Establecer una estrategia para medir pH deseado en el rango de operacin

Establecer una estrategia para medir temperatura a lo largo del proceso de

fermentacin.

Implementar un sistema para controlar la velocidad de un motor de

corriente continua para la agitacin del biorreactor.

Manipular el flujo de entrada de sustrato para realizar cultivos lote

alimentados en modos exponencial, lineal e intermitente.

Desarrollar una interfaz en la que se puedan visualizar y almacenar los

parmetros de operacin.

1.3 Justificacin
El cultivo de microorganismos requiere de un ambiente controlado que slo se
logra con un biorreactor, los existentes en el mercado, adems de alto costo son
limitados en su funcionamiento. En su mayora en estos biorreactores el control de
los parmetros se lleva a cabo imponiendo manualmente un valor y la medicin de
estos datos no es almacenada en caso de que se vare. El costo se va
incrementando conforme se aumentan los dispositivos para adquirir los datos en
lnea, almacenarlos y graficarlos. Los biorreactores para llevar a cabo cultivos
alimentados an no se existen en el mercado. Por lo anterior es necesario
desarrollar un biorreactor con mayor flexibilidad disminuyendo los costos; un
biorreactor que no solamente cuente con sistema de medicin y control de
12

temperatura y pH sino tambin de adquisicin de datos en lnea almacenarlos y

observar directamente las grficas con el fin de poder actuar rpido. Adems en
este Biorreactor tambin se podrn poder realizar cultivos alimentados al tener un
sistema automtico de adicin de nutrientes. Se propondr un diseo para los
cultivos continuos en los que el flujo de entrada y salida deben ser similares sino
es que iguales.
Partiendo de la existencia de un biorreactor en el laboratorio de biotecnologa, el
trabajo a realizar es posible de alcanzar ya que se cuenta con el biorreactor con la
funcionalidad de operar procesos de fermentacin en diferentes modos de
operacin, as tambin cuenta con puertos para la medicin de los parmetros de
operacin y entradas para realizar la tarea de mantener en un valor deseado dicho
parmetro, en este caso slo para pH y temperatura, y en el caso de oxgeno
disuelto slo llevar a cabo la medicin. Ya que el biorreactor cuenta con entradas y
salidas es posible manejar el modo de operacin lote, lote alimentado y cultivo
continuo.
Debido a que los equipos existentes en el mercado son de alto costo, es necesario
reducir los mismos mediante la implementacin de sistemas capaces de realizar la
medicin y mantener parmetros de operacin en valores deseados segn el
cultivo que se quiera realizar. La Figura 1.1 hace notar en el proceso de
fermentacin, identificando las entradas y salidas de las variables en el
biorreactor.

13

Figura 1.1. Diagrama a bloques del proceso de fermentacin.

14

Captulo 2 Estudio del estado del

arte
2.1 Antecedentes
La ingeniera bioqumica es una disciplina que estudia el procesamiento de
materiales de origen biolgico para generar bienes y servicios, los materiales
biolgicos que competen a sta disciplina son primordialmente aquellos derivados
de microorganismos, clulas o sus partes. La contribucin de la ingeniera
bioqumica es generar productos a los menores costos, mejor calidad y mayor
seguridad posibles tanto para el ser humano como para el medio ambiente, para
esto, el tema central de atencin es el diseo y operacin de bioprocesos
eficientes y reproducibles mediante la integracin de las ciencias biolgicas con
diversas ingenieras como la mecnica, elctrica, econmica e industrial, por
mencionar algunos (Aiba y col. 1973, Belter y col. 1988, Stanbury y Whitaker 1995,
Ramrez 2004).
En la Tabla 2.1 se observan los productos de inters industrial obtenidos por
fermentacin en biorreactor y en la Tabla 2.2 se observan las aplicaciones de las
enzimas

que

son

de

los

productos

biotecnolgicos

ms

aceptados

y
15

comercializados. Muchos productos biotecnolgicos ya han sido aceptados y

algunos estn en su etapa de desarrollo, las aplicaciones van desde alimentos,
medicina, ambiental, vegetal, industrias textiles y del petrleo.
Tabla 2.1 Productos obtenidos por fermentacin (Quintero 1997)
Compuesto

Ejemplo

cidos orgnicos

Actico,ctrico, fumrico, glucnico, itacnico, lctico

Aminocidos

Glutamato de sodio, L-lisina, DL-metionina, L-triptofano,

L-valina

Alcoholes y solventes

Etanol, acetona, glicerol, butanol, 2,3- butanodiol

Antibiticos

Bacitracina, estreptomicina, neomicina, penicilina,

tetraciclina

Esteroides

Cortisona, hidrocortisona, prednisolona, testosterona,

triamcinolona

Protena unicelular

Alga, bacteria, levadura, hongo

Vitaminas

cido ascrbico, cianocobalamina, -caroteno, rivoflavina

Otros

Alcaloides, enzimas, insecticidas biolgicos, metano,

nucletidos (saborizantes),promotores de crecimiento,
recuperacin de minerales (Fe, Cu, Pb, Zn, etc.).

Polisacridos

Goma xantana

La generacin del mejor ente biolgico para un bioproceso en particular es materia

de la biologa celular, biologa molecular, microbiologa e ingeniera de protenas,
entre otras disciplinas. No obstante, para que el desempeo del material biolgico
(derivados de microorganismos, clulas o sus partes) sea el ms adecuado es
necesario proporcionarle un entorno adecuado, lo cual es el tema principal de la
ingeniera bioqumica. Para lograr dar al ente biolgico las condiciones adecuadas
para su desarrollo, es necesario del diseo de reactores y sus estrategias para
operarlos y controlarlos.
16

Tabla 2.2 Aplicaciones de las enzimas producidas por fermentacin, extrado

de Quintero (1997)
Alimento

Enzima

Accin

Glucosa
oxidasa/catalasa
(hongo)

Elimina el oxgeno

Diacetilreductasa
(levadura)

Convierte el
radical diacetilo en
acetona (requiere
NADH)

Lactasa (hongo)

Rompe la lactosa

Amilasa

Hidroliza
almidones

Naringinasa

Destruye la
naringina

Gelatina

Lipasa (hongo)

Rompe grasa

Glucosa

Celulasa

Hidroliza la
celulosa

Cerveza

Pan

Jugos de
frutas

Posible utilidad
Impide el crecimiento
de microorganismos
aerbicos que
generan
cidosvoltilesy
empobrecen el sabor.
Elimina el diacetilo
que contribuye a la
aparicin de sabores
indeseables en la
cerveza.
Provee de ms
azcares
fermentables a la
levadura de pan a
partir de la leche
utilizada en la mezcla.
Con pectinasa
clarifica los jugos de
fruta
Elimina el sabor
amargo del jugo
ctrico y de las
cscaras
Aumenta el
rendimiento de
gelatina de hueso de
alta calidad por
desengrasado
Hidrlisis de pulpa de
papel, peridico o
desperdicio agrcola
para producir glucosa
o azcares
fermentables.

17

El trmino biorreactor o fermentador se refiere al equipo donde se efecta la

transformacin biolgica, particularmente el crecimiento celular, y aunque
generalmente los trminos de biorreactor y fermentador se usan de forma
indistinta, en general, el segundo se aplica slo para el caso de cultivos
microbianos. Los biorreactores son equipos donde se realiza el proceso de cultivo,
sea en estado slido o lquido. El diseo de un biorreactor debe ser tal que
asegure homogeneidad en el sistema y condiciones ptimas para el crecimiento
microbiano y la obtencin del producto deseado (Ramrez 2004).

2.1.1 Caractersticas de un biorreactor

Un biorreactor tiene como funcin principal contener al ente biolgico en un
entorno adecuado, garantizando la seguridad tanto del medio ambiente, el de los
operadores y el del propio cultivo mismo, es por eso que los biorreactores estn
diseados para ser esterilizados y mantener la esterilidad durante su operacin, se
construyen de acero inoxidable y vidrio que soporte las temperaturas y presin de
la autoclave. Los reactores de escala laboratorio son construidos generalmente en
vidrio (pero si los hay en acero inoxidable) y los de mayor escala, arriba de 15
litros, son en acero inoxidable.
Los biorreactores pueden ser agitados de forma mecnica o neumtica, los ms
comunes son los primeros. En la Figura 2.1 se observa la configuracin de un
reactor agitado mecnicamente (Ramrez 2004, Asenjo 2007).

18

Figura 2.1 Configuracin de un biorreactor agitado (Ramrez 2004).

Los criterios ms importantes para el diseo de un biorreactor pueden resumirse a
continuacin.

El tanque debe disearse para que funcione aspticamente durante varios

das, para evitar la aparicin de contaminantes en las operaciones de
bioprocesos de larga duracin.

Se debe proporcionar un sistema adecuado de aireacin y agitacin para

cubrir las necesidades metablicas de los microorganismos.

El consumo de energa debe ser el mnimo posible.

Debe contar con entradas para la adicin de nutrientes y el control de pH.

El crecimiento microbiano es generalmente exotrmico, por lo que el

biorreactor debe facilitar la transferencia de calor, del medio hacia las
clulas y viceversa, a medida que se produce el crecimiento celular,
adems de mantener estable la temperatura deseada.

Mantener las clulas uniformemente distribuidas en todo el volumen de

cultivo.

Suministrar oxgeno a una velocidad tal que satisfaga el consumo.

19

El diseo debe ser tal que permita mantener el cultivo puro; una vez que
todo el sistema ha sido esterilizado y posteriormente inoculado con el
microorganismo deseado (Ruiz 2007).

2.1.2 Parmetros de operacin de un biorreactor

El desarrollo de bioprocesos tiene como objetivo entender y mejorar dicho proceso
midiendo la mayor cantidad de parmetros o variables posibles. En la prctica,
durante la ejecucin del proceso los parmetros crticos que se encuentran
disponibles para su medicin y que son los adecuados para controlar el proceso y
con esto asegurar la mayor calidad y rendimiento, se encuentran limitados por la
escasez de un sensor adecuado para su posterior manipulacin. Aunque existen
vigorosas investigaciones en el desarrollo de sensores, slo una pequea fraccin
de stos es adecuada para su uso durante la fermentacin, ya que los
bioprocesos son sorprendentemente difciles tanto de sensar y de controlar.
Los sensores que se pueden utilizar a lo largo de una fermentacin y que se
encuentran dentro del cultivo celular no deben contaminar el bioproceso, por lo
tanto stos deben ser previamente esterilizados. Debido a que la produccin de
clulas debe efectuarse en condiciones adecuadas, es necesario otorgarle a ste
un medio propicio para su desarrollo y que adems se pueden medir durante una
fermentacin, en la prctica son:

pH (potencial de hidrgeno). Es uno de los parmetros ms comnmente

medidos, ya que las clulas durante la fermentacin producen un cambio
en el pH como producto de su propio metabolismo. Por lo cual para generar
el mayor crecimiento celular depende altamente del pH.

Oxgeno disuelto. Ya que es un sustrato limitante para el crecimiento

celular debido a su baja solubilidad en agua.

20

Temperatura. Debido a que el metabolismo del microorganismo es

exotrmico, es necesario regular la temperatura dentro de la fermentacin
para una buena funcin celular (Harmsy col. 2002).

Biomasa. El mejor desempeo en una fermentacin es logrando el mayor

crecimiento celular, o la mayor produccin de un metabolito; a la mayor
cantidad de clulas producidas se le conoce como biomasa. La conversin
de sustrato a biomasa es claramente el resultado de un largo nmero de
reacciones qumicas. (Nielseny col. 1994)

Agitacin. Cabe destacar de igual manera que aunque no es un parmetro

que se pueda medir dentro de la fermentacin, tambin es de gran
importancia controlar la velocidad de agitacin en el medio de cultivo, ya
que al mantener la distribucin homognea de todo el cultivo celular,
tambin rompe las burbujas de oxgeno lo cual logra que ste se encuentre
disponible para el consumo dentro del metabolismo celular.

Sustratos. De igual manera la adicin de sustratos (dependiendo del tipo

de cultivo) es de gran importancia a lo largo de una fermentacin, ya que
sin esta funcin dentro de un bioproceso no se llevara a cabo el mejor
crecimiento celular, por lo cual es importante aadir de manera automtica
nutrientes suficientes para el mejor desempeo metablico de las clulas.
La Figura 2.2 muestra la reaccin y proceso envuelta en el crecimiento
celular y formacin de producto.

Sin embargo, no slo la medicin y control adecuado de estos parmetros

puede garantizar el mejor desempeo de un bioproceso, tambin hay que
referirse al modo de operacin, los cuales son, cultivos por lote, cultivo
alimentado y cultivo continuo, estos modos de operacin de un biorreactor se
describen a continuacin.

21

Figura 2.2 Perspectivas de reaccin y proceso involucrados en el

crecimiento celular y formacin de producto.

2.2.3 Control de bioprocesos

En la actualidad la industria biotecnolgica necesita cumplir con estndares
nacionales e internacionales de seguridad industrial, legislacin ambiental y
produccin continua de alta calidad, por lo cual es de vital inters el desarrollo e
implementacin de sistemas de optimizacin lo cual lleva a implementar sistemas
de optimizacin eficientes, principalmente con informacin en tiempo real de las
variables crticas del proceso. Los procesos biotecnolgicos implican la
incorporacin de microorganismos creciendo mediante la catlisis de reacciones
bioqumicas. Los sistemas biolgicos presentan comportamientos singulares tales
como oscilaciones en las concentraciones de uno o ms metabolitos, multiplicidad
de estados estacionarios, histresis y caos. Lo anterior es de especial inters para
los sistemas biolgicos con aplicacin industrial, por ejemplo: la produccin de
enzimas, antibiticos, vacunas,

colorantes, combustibles o la remocin de

diversos contaminantes recalcitrantes, entre ellos la gran familia de pesticidas,

herbicidas, metales pesados y derivados del petrleo, por mencionar algunos.
22

La estructura de estos esquemas se basa en la integracin de un modelo

matemtico basado en balances de materia y energa que representen a nivel
macroscpico y microscpico el comportamiento de las variables implicadas en el
bioproceso, simulando y validando con la parte experimental el modelo propuesto
utilizando diversas herramientas computacionales. Una vez representada la
dinmica del bioproceso, se disean estructuras de estimacin y lazos de control
mediante pruebas analticas asegurando su convergencia con el sistema
experimental para una aplicacin viable; estas estructuras se implementan en
algoritmos computacionales en una unidad virtual (virtual instrument-software
sensor) en una PC, en donde se alimentan las mediciones de los sensores en
lnea salidas de control hacia el biorreactor y mediante un mecanismo de tipo
interface-operador se pueden modificar los objetivos de control, as como el
diagnstico del sistema buscando una mejora continua para cada etapa del
bioproceso. La figura 2.3 muestra las caractersticas generales del control de un
bioproceso, en ella se muestra, el biorreactor como planta, la parte del sensado, la
interfaz y la parte de control.

Figura 2.3 Diagrama general del control de un biorreactor.

23

2.1.3 Equipos existentes.

Existen equipos existentes en el mercado, cada uno con diferentes caractersticas
y funciones, adems de capacidad y costo; algunos de estos equipos varan en
precio de los $700,000 hasta llegar a los $2,000,000 el cual depende de las
funciones y la capacidad de los biorreactores. Algunos de ellos se mencionan a
continuacin.

2.1.3.1 BIOSTAT ORB

El ORB BIOSTAT 200 es una nueva generacin de biorreactores de un solo uso
con la tecnologa contrastada de agitador y costos operativos excepcionalmente
bajos. El principio de agitacin orbital garantiza una alta capacidad de
transferencia de oxgeno por aireacin superficial y una mezcla eficiente con bajo
cizallamiento. Al eliminar la necesidad de dispositivos de mezcla interna y
aspersin, las bolsas constituyen una alternativa econmica a la agitacin con
biorreactores de un solo uso. El biorreactor de este tipo se muestra en la figura 2.4
y es ideal para:

Cultivos de clulas de mamferos, insectos y plantas

Transicin de frascos agitadores a un biorreactor de mayor tamao

Suministro de protenas

Sistemas piloto de produccin a gran escala de hasta 200 litros

Cultivo de semillas para biorreactores a gran escala

Tiene sensores de pH, OD precalibrados y esterilizados.

Gran variedad de tubos y puertos que permiten gran flexibilidad para conectarse a
otros biorreactores.

24

Figura 2.4 Biorreactor BIOSTAT ORB.

2.1.3.2 Biorreactor LAMBDA MINIFOR

Un fermentador ms con caractersticas diferentes al BIOSTAT es el LAMBA
MINIFOR que vara en sus caractersticas as como en la funcionalidad y
capacidad, el biorreactor se muestra en la figura 2.5 y las caractersticas se
mencionan a continuacin:

Volmenes de cultivo desde 35ml hasta 6 litros en un solo equipo.

Radiador patentado IR (Infrarrojo) con reflector parablico baado en oro se

utiliza para calentar suavemente el medio de cultivo.

Nueva agitacin fish-tail (cola de pez) para sueve mezclado en cultivos

celulares.

Ideal para cultivos continuos, procesos batch y fed-batch.

Esterilizable en autoclave comn.

25

Figura 2.5 Biorreactor LAMBDA MINIFOR.

2.1.3.3 Biorreactor BIO FLO 310

El biorreactor BIO FLO 310 que se muestra en la figura 2.6 tiene las siguientes
caractersticas:

El recipiente de vidrio se puede intercambiar en autoclave y existen de 2.5,

5, 7.5 y 14 litros.
Medicin de Ph, OD por medio de software.
Cuenta con sistema de transferencia de oxgeno al medio.
Cuenta con 2 puertos USB, y conexiones input-output.
Cuenta con sistemas de aireacin.

26

Figura 2.6 Biorreactor BIO FLO 310.

Los precios de estos biorreactores oscilan entre los $600,000 pesos y $900,000
pesos dependiendo de las funciones que contenga, los mostrados anteriormente
contienen

funciones superiores a los que contienen solamente la medicin y

control de los biorreactores comunes. Los mostrados en la seccin 2.2.3.1 a la

2.2.3.3 muestran caractersticas superiores, como lo es la supervisin de los datos
adquiridos en lnea, lo cual hace que el valor del biorreactor pueda alcanzar ms
de $1,200,000 pesos en el precio de ctlogo, aumentando su costo en la
transportacin hasta Mxico.

2.2 Modos de operacin de cultivo

Una de las formas prcticas de controlar el desempeo de un bioproceso es
manipulando la forma o modo en que se opera el cultivo celular, as como tambin
stos se deben apoyar en la elaboracin de modelos matemticos. Los modos de
operacin ms comunes son: cultivo lote, cultivo continuo y cultivo alimentado o
tambin llamado cultivo lote alimentado.

27

2.2.1 Cultivo lote

Este es el modo de operacin ms sencillo, y por ende el ms frecuentemente
empleado en la industria debido a su bajo costo ya que no requiere de dispositivos
adicionales para su funcionamiento; sin embargo es el menos productivo ya que
las concentraciones celulares y producto alcanzadas son bajas y el tiempo muerto
entre lotes puede ser significativo. En un cultivo lote se cargan inicialmente los
nutrimentos los cuales se agotarn a medida que el cultivo crece, es decir, la
concentracin de sustratos decrece con el tiempo mientras que la formacin de
productos aumenta.
Al final de la fermentacin, el reactor es vaciado, limpiado y preparado para otro
cultivo por lotes con diferente fermentacin, de aqu viene el problema de los
tiempos muertos entre fermentaciones. Un inconveniente ms que se tiene con
este modo de operacin es, que la qumica y la reaccin de crecimiento no son
conocidas con precisin. En la Figura 2.6 se muestra un esquema general del
funcionamiento del cultivo por lote, en la Figura 2.6a se muestra el
comportamiento cintico tpico de la biomasa () y sustrato (), as como el valor
del volumen del cultivo (). En la Figura 2.6b se muestra como el valor del
volumen a lo largo de la fermentacin permanece constante, esto se debe a que
no existen entradas de sustrato o salidas producto, mientras que los valores de
biomasa crecen durante un tiempo y decrecen (representando la muerte de las
clulas) despus de que se ha terminado el sustrato; de la misma forma se
muestran los valores de sustrato, que decrecen debido al consumo de las clulas
a lo largo de la fermentacin.

28

(a)

(b)

Figura 2.6 Representacin de cultivo lote, esquema general en (a) y cintica

de cultivo en (b).
Los modelos que rigen este modo de operacin por medio de balances de materia
son los denotados por las ecuaciones 2.1 para consumo de sustrato y la ecuacin
2.2 el cultivo celular, la ecuacin 2.3 representa el consumo de sustrato en
relacin al cultivo celular y la ecuacin 2.4 representa la generacin de producto.

(2.1)
(2.2)

= (
+
+ )

/ /

(2.3)

(2.4)

2.2.2 Cultivo continuo

Es uno de los modos de operacin ms poderosos ya que permite manipular las
condiciones de crecimiento y al mismo tiempo mantener un ambiente constante
durante todo el transcurso del cultivo. En este modo de cultivo se alimenta
constantemente una corriente con medio de cultivo fresco y se cosecha al mismo
29

flujo de alimentacin una corriente conteniendo clulas, medio agotado y

productos. La gran utilidad del cultivo continuo radica en que permite operar un
cultivo bajo rgimen de estado estacionario, es decir aquella situacin en que
todas las variables permanecen constantes con respecto al tiempo (Doran1995,
Ramrez 2004). La figura 2.7 representa de manera esquemtica al cultivo
continuo y la cintica de crecimiento celular.

(a)

(b)

Figura 2.7 Representacin de cultivo continuo. 2.4a. Esquema del

biorreactor. 2.4b. Cintica de cultivo continuo.

2.2.3 Cultivos alimentados

En este modo de operacin se suplementa uno o varios nutrimentos limitantes a lo
largo del cultivo en vez de agregarlos todos al inicio. Existen adems muchas
formas de alimentar tales sustratos, como por ejemplo por pulsos, continuamente
de forma constante (cultivo alimentado lineal) o de forma creciente (cultivo
alimentado exponencial), con esto se evita, por un lado que se agoten los
sustratos esenciales y por otro lado se previenen efectos negativos que resultaran
si tales substratos fueran adicionados inicialmente a altas concentraciones. Entre
los efectos negativos del cultivo alimentado se encuentran, la inhibicin al
crecimiento celular por la alta concentracin de sustrato o el desvo del
metabolismo hacia vas improductivas y que generan subproductos txicos. La

30

Figura 2.8 representa de manera esquemtica el modo de operacin

y el

comportamiento cintico del cultivo alimentado respectivamente; en la Figura 2.4b

(a)

(b)

Figura 2.8. Representacin de cultivo lote alimentado. 2.4a. Esquema de

biorreactor. 2.4b. Cintica del cultivo lote alimentado.
Se puede ver que, mientras exista una entrada de sustrato constante, la cantidad
de biomasa permanecer constante y el volumen ir en aumento con forme dure
el tiempo de la fermentacin.

La ecuacin 2.5 describe el comportamiento del cultivo celular, la ecuacin 2.6

representa el consumo de sustrato en relacin al cultivo celular y la ecuacin 2.7
representa el cambio de volumen en el biorreactor a lo largo de la fermentacin
por una entrada de flujo de sustrato(Doran1995).

= ( )

=
( )

= ()

(2.5)
(2.6)
(2.7)

Por lo tanto, para generar el mayor crecimiento celular en unafermentacin, no

basta

con controlar las variables involucradas en dicho crecimiento (PH,

31

temperatura, etc.) sino que tambin depende del modo de operacin del
biorreactor (cultivo

lote,

cultivo

continuo

cultivo

alimentado), descrito

anteriormente.

2.3. Parmetros de operacin

Una vez identificados los parmetros a controlar, y los modos de operacin de un
biorreactor para el crecimiento celular, el trabajo inmediato es proponer la manera
de cmo controlar dichas variables, la eleccin de sensores y actuadores capaces
de dar al microorganismo las condiciones adecuadas de crecimiento; tambin, es
necesario que los actuadores sean regidos por leyes de control para lograr la
estabilizacin

de

dichas

variables

con

respecto

las

demandas

del

microorganismo. En la tabla 2.3 se muestran los parmetros que ms

comnmente se manejan en una fermentacin.

32

Tabla 2.3 Variables comnmente medidas en fermentadores y dispositivos

utilizados para su determinacin (Ramrez 2004).
Parmetro medido en lnea
Fsicos
Temperatura
Presin
Nivel del lquido
Peso
Flujo (volumtrico, msico)
Velocidad
Tamao y velocidad de burbujas
Hidrodinmica
Potencia
Fisicoqumicos
pH
Oxgeno disuelto

Dixido disuelto

Capacitancia y conductancia
Potencial redox
Composicin de gases a la salida
Biolgicos o bioqumicos
NADH Y NADPH
Densidad celular

Dispositivo/Instrumento
Termopar
Manmetro
Manmetros, sensor de conductividad
o capacitancia
Balanza, celdas de carga
Rotmetro, controladores de flujo
msico
Tacmetro
Sensor de conductividad o fibra
ptica, ultrasonido.
Anemmetros
Torqumetro y tacmetro

Electrodo de vidrio, electrodo de fibra

ptica y agente fluorescente
Electrodo
galvnico/polarogrfico,
electrodo de fibra ptica y agente
fluorescente
Electrodo de fibra ptica y agente
fluorescente, electrodo de pH y
solucin de bicarbonatos
Monitor de biomasa
Electrodo de referencia
Espectrometra infrarroja o de masa.

Sensores de fluorescencia
Sensores de turbidez, absorbancia,
amperomtricos o ultrasnicos.
Parmetros medidos en sistemas de flujo inyectado
cidos orgnicos
Aminocidos
Carbohidratos
Densidad y ciclo celular
Actividades enzimticas
Contenido de cidos nucleicos
Equipos conectados a travs de sistemas de flujo inyectado
Cromatgrafo de gases, cromatgrafo de alta resolucin (HPLC), cromatografa
de protenas (FLPC), Cromatografa de iones, espectrmetro de masas,
espectrofotmetro, analizadores bioqumicos (basados en biosensores), citmetro
de flujo, resonancia magntica nuclear.
33

Un recurso ms que se tiene para lograr el mayor crecimiento microbiano, es

basarse en los modelos de crecimiento celular establecidos, esto con el fin de
conocer la dinmica del crecimiento celular, y por medio de stos modelos
consumir el mnimo de recursos (adicin de lcali en el balance del pH, control de
la temperatura tomando en cuenta las reacciones bioqumicas que generan
temperatura adicional al bioproceso durante la fermentacin, etc.) y as lograr un
sistema adecuado de crecimiento celular de lo que se desea producir (Morris
1975,Macarullay Goi1994, Haberman1998, Inghamy col 2000, Najafpour 2007).

2.3.1 pH (potencial de Hidrgeno)

Es uno de los parmetros ms comnmente medidos, ya que las clulas durante
la fermentacin producen cidos como producto de su propio metabolismo. Por lo
cual para generar el mayor crecimiento celular depende altamente del pH. Para
medir el potencial de hidrgeno (pH) es necesario constar con un transductor
adecuado que pueda ser capaz de ofrecer una seal elctrica como un nivel de
voltaje a partir de la seal fsica que queremos medir, como lo es el pH, y uno de
estos transductores es el electrodo de vidrio. Los electrodos de vidrio son
instrumentos de lectura directa, leyndose el pH de la disolucin donde se
introduce el electrodo de vidrio en una escala con unidades de pH, la cual se
grada con valores de pH de referencia, suministrados por disoluciones tampn
estndar. Po tanto, la determinacin del pH de una disolucin con este
instrumento no requiere clculos, pero debe tenerse en cuenta que:
a) El instrumento mide actividades del ion + ;
b) Debido a las restricciones propias de la composicin qumica de las
membranas de vidrio normales, los instrumentos de electrodo de vidrio
pueden usarse solamente en una margen de valores de pH de 1 a 10;

34

c) La membrana de vidrio debe mantenerse limpia; cuando se use para

determinar el pH de extractos celulares, etc., se debe tener mucho cuidado
en no permitir la desecacin de una pelcula de protena en su superficie.
Un medidor de pH, mide en realidad una diferencia de potencial entre el llamado
electrodo de referencia y un electrodo de vidrio. El electrodo de vidrio consiste en
esencia en una membrana selectivamente permeable a los hidrogeniones
(Douglas y col. 2001, Creus 2006). En la figura 2.9 se muestra el electrodo de pH.

Figura 2.9. Electrodo de vidrio para medir pH.

2.3.2 Oxgeno Disuelto (OD)

Uno de los parmetros importantes a medir a lo largo de una fermentacin es el
oxgeno disuelto, ya que es un sustrato importante para que se lleve a cabo el
metabolismo celular, y a partir de ste se calcule el coeficiente volumtrico global
de transferencia de masa , y ste a su vez depende de otros factores en el
diseo de operacin como lo es la velocidad de agitacin que modifica el rgimen
de turbulencia y disminuye el tamao de burbuja manteniendo as el oxgeno
disponible para la clula y su metabolismo; tambin es importante la temperatura
del medio de cultivo ya que dependiendo esta, har que vare la cantidad de
oxgeno disuelto, as como tambin lo es la presin del biorreactor a lo largo de la
fermentacin. Es as como la medicin de oxgeno disuelto es muy importante
para saber qu cantidad del oxgeno es transferido al medio de acuerdo con la
35

aireacin suministrada al biorreactor y las revoluciones que permiten la agitacin

(Najafpour 2007,Mettler Toledo Operation manual transmitter M300).

Para medir la cantidad de oxgeno disuelto en el medio de se utiliza un electrodo

del tipo Clark polarogrfico que mide la concentracin de oxgeno en agua o
soluciones acuticas, este a su vez contiene un ctodo de platino y un nodo de
cloruro de plata separados por una membrana de plstico permeable llena de
gas(Mettler Toledo. Operation manual transmitter M300, Creus 2006).

La Figura 2.10 muestra de manera esquemtica al electrodo de oxgeno disuelto, y

las conexiones con las que cuenta, mientras que la Figura 2.11 muestra la
configuracin de las conexiones y la asignacin de las mismas, as como la
configuracin interna del electrodo.

Figura 2.10. Electrodo de Oxgeno disuelto. Instrumento.

36

Figura 2.11. Electrodo de Oxgeno disuelto. Conexiones.

2.3.3 Temperatura
La medicin de temperatura es un parmetro del crecimiento celular muy
importante debido a la relacin que tiene con la cantidad de oxgeno disuelto en el
biorreactor, as como permitir un funcionamiento adecuado en el mismo debido a
las reacciones bioqumicas que se suscitan. El cambio de temperatura dentro de
un biorreactor se produce debido al metabolismo celular, ya que mientras este se
lleva a cabo se linera energa y esto le da condiciones inadecuadas al
microorganismo para realizar su metabolismo, durante el anlisis de crecimiento
celular y produccin de producto generalmente no se considera modelar el
balance de energa, es decir el cambio de temperatura ya que si se mantiene la
temperatura constante, puede considerarse despreciable. Una razn ms de
mantener la temperatura constante.
37

En el campo de la instrumentacin, las mediciones de temperatura son de lo ms

comn, sin embargo, si no se emplean las tcnicas o los equipos adecuados,
estas mediciones pueden ser errneas. El termopar es por mucho el sensor de
temperatura ms usado en la industria por diferentes razones, podemos
mencionar entre otras el amplio intervalo de temperatura de uso, su robustez, la
relativa buena exactitud, rpida respuesta a cambios de temperatura, versatilidad
de uso y bajo costo. De acuerdo al uso o aplicacin en la cual se desea utilizar el
termopar, es necesario recurrir a la informacin y especificaciones que el
fabricante ofrece, para seleccionar el ms conveniente (Creus 2006).

Una de las caractersticas que debe tomarse en cuanta es el rango de temperatura

a la cual se trabajar a lo largo de la fermentacin, adems de que dependiendo el
materia de construccin del termopar est la funcionalidad; ya que el material con
el que est construido est en funcin de la precisin de la medicin de la
temperatura, ofreciendo ms fidelidad al momento de la medicin. La tabla 2.4
muestra el tipo de termopar y el tipo de calibre, caractersticas de construccin
especficas, y las temperaturas mximas que pueden manejar, dependiendo el tipo
de termopar seleccionado. Mientras que la figura 2.12 muestra la imagen de un
termopar convencional.

38

Tabla 2.4.Caractersticas de termopares de acuerdo al tipo.

CALIBRES AWG = (mm)
TERMOPAR
TIPO

8 = 3.25

14 = 1.63

20 = 0.81

24 = 0.51

28 = 0.33

***

370 C

260 C

200 C

150 C

760 C

590 C

480 C

370 C

320 C

860 C

650 C

540 C

430 C

430 C

1260 C

1090 C

980 C

870 C

760 C

***

***

***

1480 C

***

***

***

***

1480 C

***

***

***

***

1700 C

***

1260 C

1090 C

980 C

870 C

760 C

La caracterizacin del termopar en cualquier experimento es fundamental, ya que

aunque el fabricante ofrezca ciertas especificaciones, siempre es mejor constatar
cada una de ellas, ya que al momento de fabricar puede que las caractersticas
lleguen a variar, adems de que es una tarea importante para obtener un
polinomio de interpolacin, el cual ser utilizado posteriormente en la
programacin, indispensable para la visualizacin de la medicin realizada en el
hyperterminal

de Windows,

conectado

al

microcontrolador

(Rowe

1995,

Anatychuk1998).

Figura 2.12. Termopar convencional.

39

2.3.4 Agitacin del medio de cultivo

La mezcla de fluidos es un proceso importante en los procesos de fermentacin,
por lo general el ms crtico, dado que es un parmetro importante en las
fermentaciones aerobias, sin embargo tambin es utilizado en los procesos
anaerobios. Los procesos de agitacin pueden ser clasificados en dos grupos, el
primero es aquel en el que se necesita algn tipo de uniformidad en el medio de
cultivo y el segundo es para aquellos en los que se necesite algn tipo de
transferencia de masa o reaccin qumica como criterio de operacin (Perry y col.
2001). La Tabla 2.5 muestra una clasificacin de los procesos de agitacin por
tipo(VogelyTorado1997).
Tabla 2.5. Clasificacin de procesos de agitacin.
Tratamiento fsico
Suspensin
Dispersin
Emulsin
Mezcla
Bombeo

Tipo de aplicacin en medio

Lquido-slido
Lquido-gas
Lquido inmisible
Lquido misible
Fluido en movimiento

Tratamiento qumico
Dissolving
Absorcin
Extraccin
Reaccin
Transferencia trmica

En este contexto la agitacin forma parte de los procesos de transferencia de

masa, debido a que el oxgeno que es un sustrato importante para el metabolismo
en las fermentaciones anaerobias, debe encontrarse disponible para el
microorganismo en todo momento. La agitacin permite que el oxgeno se
disuelva en el medio de cultivo y as que el tamao de burbuja sea los
suficientemente pequeo para el consumo del microorganismo y permitir que
exista el suficiente oxgeno a lo largo de la fermentacin. La agitacin puede
llevarse a cabo de distintas maneras, la ms utilizada para medios lquidos es por
impulsores, los cuales son implementados con motores. La Figura 2.13 muestra
un esquema de la agitacin mecnica de un medio de cultivo.

40

Figura 2.13. Agitacin del medio de cultivo.

2.3.5 Alimentacin de sustrato.

La alimentacin de sustrato en un biorreactor a lo largo de una fermentacin es
importante cuando se trabaja en los modos de operacin lote alimentado y
continuo, las formas ms comunes de alimentar un biorreactor segn su modo de
operacin son de forma creciente, de forma constante y por pulsos, y se utilizan
segn el operador lo necesita; es decir, si lo que se quiere es producir algn
metabolito como resultado del metabolismo celular o aumentar la produccin de
clulas, es necesario determinar el tipo de alimentacin a utilizar Figura 2.14. La
forma ms comn de suministrar sustrato es por medio de bombas peristlticas,
dichas bombas simulan el movimiento peristltico del sistema digestivo y
funcionan bsicamente con un motor elctrico, y un cabezal con 2 o 3 rodillos que
aprietan la manguera que suministra el sustrato generando as un vaco que
empuja el lquido haca el sentido donde se quiere suministrar el lquido. La Figura
2.15 muestra de manera esquemtica la parte interna de una bomba peristltica
(Flinkingery Drew1999).

41

Figura 2.14. Tipos de alimentacin en bioproceso.

Figura 2.15. Bomba peristltica.

2.3.5.1 Alimentacin de sustrato de forma creciente.
El tipo de alimentacin de forma creciente, como su nombre lo indica, es agregar
sustrato limitante de manera exponencial para el microorganismo dando a este
tipo de cultivo la propiedad de mantener la velocidad especfica de crecimiento
constante, en el biorreactor. Este cultivo es conocido como cultivo alimentado
exponencial.

42

2.3.5.2 Alimentacin de sustrato de forma constante.

La alimentacin de sustrato limitante que se agrega de forma constante es la ms
comnmente utilizada, y consiste en suministrar sustrato en una cantidad en /
que no vara a lo largo del proceso de fermentacin. Este cultivo es conocido
como cultivo alimentado lineal.

2.4 Simulacin de los sistemas de cultivo

La simulacin de los sistemas de cultivo se bas en los puntos siguientes:

Ecuaciones de balance de masa para biomasa, sustrato y producto

Modelos de crecimiento, consumo de sustrato y produccin

Condiciones de operacin.

La Ecuacin General de Balance de masa se observa en la ecuacin 2.8 que es

vlida para todos los sistemas de cultivo y dependiendo del tipo (lote, continuo,
alimentado) y de la variable (biomasa, sustrato y producto) varan los trminos.
= +

(2.8)

Esta ecuacin se debe plantear para cada variable, es decir: biomasa, sustrato y
producto.
Una extensa revisin bibliogrfica permiti desarrollar las ecuaciones para cada
tipo de cultivo y revisar los principios de modelado (Pirt 1975, Levenspiel 1985,
Atkinson 1986, Bailey 1986, Lee 1992, Geankoplis 1998, Jakymec y col. 2001,
Najafpour 2007) y obtener la solucin de las ecuaciones diferenciales para realizar
la simulacin (Cooker 2001, Zill 2002, Kreyszig 2003, Chung 2004, Yang y col.
2005).

43

2.4.1 Cultivo lote

2.4.1.1 Balance de biomasa
Es un sistema cerrado como el cultivo lote, el balance para biomasa es:
=

(2.9)

Utilizando el modelo de Monod para crecimiento

+
0
=
0
=

(2.10)
(2.11)

( 0 + 0 )
=
+ 0 + 0

(2.12)

La ecuacin diferencial se resuelve analticamente para la obtener la evolucin de

la biomasa en funcin del tiempo. Tambin se puede utilizar el modelo logstico
para crecimiento quedando la ecuacin la ecuacin de la siguiente forma:

= (1
)

(2.13)

Esta ecuacin diferencial tambin se resuelve analticamente para la obtener la

evolucin de la biomasa en funcin del tiempo.
2.4.1.2 Balance de Sustrato
Es un sistema cerrado como el cultivo lote, el balance para sustrato es:
=

(2.14)
44

Utilizando la ecuacin de Aborhey y Williamson que incluye el modelo de

crecimiento logstico y de produccin de Luedekin-Piret, la ecuacin diferencial
queda de la siguiente forma:

1
1
=

(2.15)

1
1

(
+ )

(2.16)

= ( +
)
(
+ )

(2.17)

Utilizando el modelo logstico para crecimiento desarrollado en la parte de

biomasa se resuelve la ecuacin diferencial de forma analtica.
2.4.1.3 Balance de Producto
Es un sistema cerrado como el cultivo lote, el balance para producto es:
=

(2.18)

Utilizando el modelo de produccin parcialmente asociado crecimiento de

Luedeking-Piret.

= +

(2.19)

Utilizando el modelo logstico para crecimiento desarrollado en la parte de

biomasa se resuelve la ecuacin diferencial de forma analtica. Tambin utiliz el
modelo logstico para produccin, dado por la ecuacin:

= 0 (1
)

(2.20)

45

2.4.2 Cultivo continuo

2.4.2.1 Balance de Biomasa
Es un sistema abierto como el cultivo continuo, el balance para biomasa es:
=

= ( )

(2.21)

En estado de equilibrio dinmico la acumulacin es 0

=0

(2.22)

Por lo tanto: =
A se le llama velocidad de dilucin, manipulando su valor se puede controlar la
velocidad

especfica

de

crecimiento,

es

decir

el

metabolismo

del

microorganismo. se calcula con los parmetros de operacin y , es el flujo

de entrada (dado por la bomba peristltica) y es el volumen de operacin del
reactor. Dado que el volumen del reactor permanece constante, se puede
manipular para variar mediante la frmula siguiente:
=

(2.23)

2.4.2.2 Balance de Sustrato

Es un sistema abierto como el cultivo continuo, el balance para sustrato es:
=

= ( )

(2.24)
(2.25)

46

= ( )

(2.26)

En estado de equilibrio dinmico la acumulacin es 0:

=0

(2.27)

= ( )

(2.28)

Para el clculo de s, dada una , se utiliz el modelo de Monod, despejando s y

sustituyendo . Conocida la s se puede calcular x.

(2.29)

2.4.2.3 Balance de Producto

Es un sistema abierto como el cultivo continuo, el balance para producto es:
=

(2.30)

En estado de equilibrio dinmico la acumulacin es 0:

=0

(2.31)
(2.32)

Para el clculo de se us el Modelo de la triple constante de Luedeking-Piret

= +

(2.33)

47

2.4.3 Cultivos alimentados o cultivos lote alimentado

Los cultivos lote alimentado son sistemas semicerrados, es decir, pueden existir
tanto entrada como salidas del biorreactor existen 3 tipos de cultivos de a cuerdo a
su modo de alimentacin

Cultivo alimentado exponencial. Caracterizado por el incremento del flujo

en forma exponencial, bajo ciertas condiciones es posible mantener la
velocidad especfica decrecimiento constante, dado que el volumen se
incrementa tambin de manera exponencial. Presenta

las ventajas del

cultivo lote por su bajo costo en implementarlo y del cultivo continuo por su
alta productividad.

Cultivo alimentado lineal. Se caracteriza por mantener un flujo de entrada

de sustrato constante, y el incremento de volumen en el biorreactor
aumenta de forma lineal.

Cultivo alimentado por pulsos. Se adiciona

el sustrato de manera

discreta, y esta operacin se realiza cuando por ejemplo se observa una

disminucin en la medicin del oxgeno disuelto.
2.4.3.1 Cultivo alimentado exponencial
2.4.3.1.1 Balance de Biomasa
Es un sistema semicerrado como el cultivo lote alimentado exponencial, el balance
para biomasa es:
=
En este cultivo tanto la biomasa como el volumen varan por lo que el crecimiento
se expresa en dos diferenciales, el balance volumtrico queda expresado como:

()

= ( ) + ( ) =

(2.34)
(2.35)
48

= ( )

= ( )

El balance global se formula para la biomasa total, = .

(2.36)
(2.37)
(3.38)

(2.39)

Resolviendo la diferencial:
= 0

(2.40)

= 0 0

(2.41)

2.4.3.1.2 Balance de Sustrato

Es un sistema semicerrado como el cultivo lote alimentado exponencial, el balance
para sustrato es:
=
En este cultivo tanto la biomasa como el volumen varan por lo que el crecimiento
se expresa en dos diferenciales.
()

= ( ) + ( ) =

()

= ( ) + ( ) =

(2.42)
(2.43)

(2.44)

(2.45)

= ( )

(2.46)

49


0 0
==

( )

(2.47)

2.4.3.1.3 Balance de Producto

Es un sistema semicerrado como el cultivo lote alimentado exponencial, el balance
para sustrato es:
=
En este cultivo tanto la biomasa como el volumen varan por lo que el crecimiento
se expresa en dos diferenciales.
()

= ( ) + ( ) =

(2.48)
(2.49)
(2.50)

El balance global se formula para el producto total, P =pV.

= 0 0

(2.51)

2.4.3.2 Cultivo alimentado lineal

En este tipo de cultivo el Flujo, F, es contante y el volumen vara de acuerdo a la
ecuacin:

(2.52)
=

= 0 +

(2.53)

Se establecen los balances de manera similar al cultivo exponencial:

Balance de Biomasa: Acumulacin = Generacin

Balance de Sustrato: Acumulacin = Entrada Consumo

Balance de Producto: Acumulacin = Generacin

Las ecuaciones diferenciales para cada balance son:

50

= ( )

= ( )

(2.54)
(2.55)
(2.56)

Considerando los modelos de, consumo de sustrato y formacin de producto:

=
(2.57)
+

= + +
(2.58)

= +

(2.59)

La variacin de x, s, p en funcin del tiempo, se obtienen resolviendo el sistema

de ecuaciones diferenciales mediante el mtodo numrico de Runge-Kutta de
cuarto orden (Zill 2002).
1 + 22 +23 +4
6
1 + 22 +23 +4
() = ()1 +
6
1 + 22 +23 +4
() = ()1 +
6
() = ()1 +

(2.60)
(2.61)
(2.62)

Las constantes K, L y M son evaluadas al tiempo = 1 + . El valor de h es

un intervalo de tiempo arbitrario.

51

Captulo 3 Implementacin del

sistema
3.1 Biorreactor
La figura 3.1 muestra el proceso de fermentacin que actualmente se lleva a cabo
en los biorreactores con los que se cuenta en el Departamento de Biotecnologa
de la UPP. En estos biorreactores todos los parmetros medidos, como el pH,
temperatura, alimentacin de sustrato agitacin de medio de cultivo son
registrados de manera manual y no existe ningn programa de adquisicin de
datos. Cabe mencionar que en el Departamento de Biotecnologa contamos con
varios biorreactores de diferentes capacidades que vas desde 0.5l a 900 l que
requieren un sistema de adquisicin automatizado, como el que aqu se propone.

52

Figura 3.1. Procesos e fermentacin en biorreactor escala laboratorio.

La Figura 3.2 muestra al biorreactor de 4 litros en vidrio con medidas estndar con
sensores de oxgeno disuelto y pH, as como las bombas peristlticas para adicin
de sustrato y sustancias cidas y lcali.

Figura 3.2. Biorreactor de 4 litros de la UP-Puebla.

La tabla 3.1 muestra las medidas estndar de un reactor de 4 litros (que se

encuentra en la Universidad Politcnica de Puebla), y la relacin entre todas las
medidas que tiene, como lo es la altura el dimetro, la medida de las paletas, etc.
Cuenta con 2 impulsores tipo Rushton de 6 paletas planas.

53

Tabla 3.1Relaciones estndar del reactor de 4 litros utilizado.

Relacin

Nomenclatura

Valor

Altura del lquido en el reactor/Altura del reactor

HL/Ht

~0.7-0.8

Altura del reactor/Dimetro del reactor

Ht/Dt

Dimetro del impulsor/Dimetro del reactor

Da/Dt

1/3

Dimetro del bafle/Dimetro del reactor

Db/Dt

0.1

Altura de la paleta del impulsor/Dimetro del

impulsor

W/Da

0.2

Ancho de la paleta del impulsor/Dimetro del

impulsor

L/Da

0.25

Distancia media de la paleta del impulsor al

difusor/Dimetro del impulsor

E/W

3.2 Control para los cultivos

3.2.1 Cultivo alimentado exponencial.
El problema consiste en suministrar una entrada de sustrato de forma creciente
por medio de una bomba peristltica que funciona con un motor de corriente
directa, esto es, adicionar al biorreactor un flujo de entrada de sustrato de manera
creciente. Para resolver este problema es necesario generar una estrategia de
control que realice la tarea de aumentar las revoluciones del motor de corriente
directa de la bomba peristltica de forma exponencial. Adems, hay que tener en
cuenta el dimetro y tipo de material de la manguera con el que se realizar la
alimentacin (Astrom y Hagglund 2000).
Para anlisis de simulacin podemos representar las ecuaciones 2.5, 2.6 y 2.7 en
espacio de estados y utilizando el modelo de Monod de la ecuacin 3.3(Nielsen y
col. 1994, Inghamy col. 2000, Harms y col. 2002) se obtienen las ecuaciones 3.56,
3.57 y 3.258.

54

1 =

1 2
1

+ 2 3 1

2 =

1 1 2
2

1
+ 2
3

3 = () = 1

(3.1)

(3.2)

(3.3)
(3.4)

donde1 , 2 y 3 son biomasa, sustrato y volumen respectivamente; y es el flujo

de entrada de sustrato. Dado que la entrada puede ser de flujo constante y de
flujo en incremento creciente es necesario relacionarla con la velocidad especfica
de crecimiento , la concentracin celular inicial 0 , el volumen de operacin inicial
en el biorreactor 0 , el rendimiento de biomasa sobre sustrato y la concentracin
de sustrato de entrada , mostrado en la ecuacin 3.59.
() =

0
exp()

(3.5)

Esta deduccin es posible si se considera que la fermentacin se realiza

inicialmente en cultivo lote hasta alcanzar una concentracin celular alta, y
posteriormente comenzar una fermentacin en cultivo lote alimentado con entrada
creciente, considerando una velocidad especfica de crecimiento constante.
Una de las maneras de controlar el flujo de una bomba peristltica es controlar la
velocidad del motor dado que el motor a utilizar es de corriente directa, la
estrategia de control que se utiliza convencionalmente es un PID (Morris 1975). El
diagrama de bloques que ilustra esta estrategia de control se encuentra en la
figura 3.3 Se observa la estructura general de un controlador PID aplicado a un
motor elctrico.

55

PID

Referencia

Proceso

u
Medicin

Figura 3.3. Estructura del controlador PID y la planta a controlar.

Mientras que la figura 3.4 muestra a la planta o biorreactor representada por
ecuaciones de estado a la cual se le agrega un flujo de sustrato de entrada de
manera creciente, dando como resultado a la salida del sistema un crecimiento de
biomasa y un aumento en el volumen del biorreactor.
u

Yref
Control de Flujo

= ()

= ()

Figura 3.4. Esquema del sistema de control como entrada al biorreactor de

una bomba peristltica.

3.2.2 Alimentacin lineal

Dado que la alimentacin de un cultivo alimentado linealmente requiere una
alimentacin de sustrato constante, es necesario mantener la velocidad del motor
que tiene la bomba a una velocidad constante, para lo cual se realiz una
simulacin con un control de velocidad PID al motor por medio de simulink. El
diagrama se muestra en la figura 3.5.
La simulacin consisti en la sintonizacin del controlador por mtodo de ZieglerNichols(Kuo2002), o mtodo de respuesta en frecuencia.La dificultad de controlar
los cultivos alimentados radica en las mltiples variables que se deben considerar
que van desde la velocidad de la bomba peristltica, el cabezal, el tipo de
manguera, el material de la manguera, el microorganismo utilizado (parmetros

56

cinticos), el volumen inicial y final de operacin y la velocidad especfica de

crecimiento deseada.

Figura 3.5. Diagrama a bloques del controlador PID del motor de corriente
directa.

3.2.3 Cultivo continuo

Un cultivo continuo descrito en la seccin 2.2.3 describe que existe tanto entrada
de sustrato y salida de medio de cultivo, por lo cual debe considerarse en primer
lugar que la entrada de sustrato al biorreactor es constante, as como tambin lo
es la salida de medio de cultivo. Dado que la bomba que alimenta de sustrato al
biorreactor funciona con un motor de corriente directa, as como tambin la bomba
que sustrae medio de cultivo del mismo, es necesario controlar las revoluciones
del motor para controlar el flujo de entrada y salida del biorreactor. Lo ms
conveniente es utilizar una estrategia de control PID; la simulacin del control de
las revoluciones del motor a una entrada constante de voltaje es la misma que
para el modo de operacin cultivo lote alimentado linealmente descrito en la
seccin 3.3.1.2.

3.3 Agitacin de medio de cultivo

Como se mencion en la seccin 2.3.4 la agitacin en el medio de cultivo favorece
los fenmenos de transferencia de masa y es as como es considerado de gran
importancia en una fermentacin, la intencin de aumentar las revoluciones en el
medio de cultivo es para aumentar el ndice volumtrico de transferencia de masa,
57

que es un parmetro importante para conocer la cantidad de oxgeno que se

transfiere al medio de cultivo y est disponible a manera de sustrato para el
metabolismo celular del microorganismo. La agitacin del medio de cultivo se lleva
a cabo por un motor de corriente directa con reduccin de velocidad que va de 0 a
1800 rpm ,el cual se controla de manera conveniente por medio de un controlador
PID. Y la simulacin de se muestra en la figura 3.6.

Figura 3.6. Diagrama a bloques del controlador PID del motor de corriente
directa.

3.4 Medicin de pH.

Se cuenta con un electrodo de pH de vidrio, marca Conductronic, las lecturas de
voltaje con sustancias buffer de pH conocido son en el orden de milivolts, pero
amplificados posteriormente a la salida del electrodo por un amplificador TL081.
La Tabla 3.2 muestra las mediciones con las sustancias buffer.
Tabla 3.2 Voltajes obtenidos con sustancias buffer y amplificadas.
pH Buffer
4
7
10

Voltaje con
amplificacin (V)
4.32
0.33
-3.55

Con los datos obtenidos se pretende conocer que voltajes sern medidos con
cualquier sustancia de pH desconocido, una buena aproximacin a partir de la
58

informacin obtenida mostrada en la tabla 3.2 es realizar una interpolacin de

Lagrange, y de ste modo obtener un polinomio que represente la relacin voltajepH que es necesaria para ofrecer una medicin durante el proceso de
fermentacin para el usuario. El polinomio que se obtuvo a partir de las tres
sustancias base es el siguiente.
() =

191 2 1943

+7
10000
2500

(3.60)

3.5 Medicin del oxgeno disuelto

En los procesos aerobios, el oxgeno es un sustrato limitante, ya que sus
caractersticas fisicoqumicas limitan su solubilidad en lquidos, por lo que el
transporte de oxgeno del exterior al reactor es necesario para el crecimiento ideal
de microorganismos. El transporte de oxgeno est directamente relacionado con
las caractersticas fsicas de cada biorreactor como: geometra, diseo, nmero de
agitadores, tipo de dispersor de aire, etc.
Se utiliz un electrodo de oxgeno disuelto marca Mettler Toledo de 30 cm de largo
y media pulgada de dimetro en acero inoxidable, Figura 3.7. Se realiz la tcnica
dinmica para poder caracterizar el electrodo y el reactor, medicin del coeficiente
de transferencia de oxgeno (). Para la determinacin de la transferencia de
oxgeno en biorreactores es necesario calcular el coeficiente volumtrico de
transferencia de oxgeno () como lo describe (Garca-Ochoa y Gmez 2009)
mediante el mtodo de eliminacin de oxgeno burbujeando nitrgeno en agua
destilada, el medidor de oxgeno disuelto fue calibrado a 0% con una solucin
saturada de nitrgeno y a 100% con otra solucin saturada con oxgeno al
bombear aire. Todas las determinaciones fueron determinadas a una temperatura
de 20C, con condiciones de operacin fijadas como la velocidad de agitacin
(350 y 700 rpm), aireacin (1.33 y 2.66 vvm). Suponiendo que el sistema est bien
agitado, el fue determinado midiendo el porcentaje de oxgeno disuelto
medido por la sonda cada 15 segundos. La tcnica de eliminacin de oxgeno
59

consiste en la desorcin de este por burbujeando nitrgeno, entonces la

concentracin de O2 est ahora en funcin del tiempo.

Figura 3.7 Experimento de mediciones de porcentaje de saturacin de

oxgeno.

3.6 Interfaz de usuario

La interfaz del usuario es la relacin que debe existir entre la mquina y el humano
mediante una relacin de entradas y salidas que deben existir de forma fsica, esto
logra dar comunicacin entre las dos partes involucradas, la parte informtica y la
parte humana, dando con ello el mejor desempeo en cuanto a comunicacin se
trata. La figura 3.8 muestra de manera general un diagrama de la interfaz con todo
el sistema, es decir,

la parte fsica del sistema (fermentador, sensores,

actuadores, parmetros de operacin, etc.) la parte informtica (la programacin

necesaria de los componentes fsicos, como actuadores, sensores, visualizacin,
grficos, etc.) y la parte de visualizacin (la parte visual para el humano, la manera
en la cual ingresa parmetros de operacin, establece parmetros de referencia
como en el caso de la temperatura, adems de poder monitorearlos de manera
visual mediante grficas o tablas de datos).

60

Figura 3.8. Diagrama general de interfaz de usuario.

La interfaz fue programada en un microcontrolador de 32 bits el cual es un MBED
NXP LPC11U24, el cual se programa en lenguaje C, especializado para
microcontroladores, basndose en la arquitectura de este, la gran ventaja de este
dispositivo es la gran cantidad de libreras con las que se cuenta, las cuales
reducen la cantidad de cdigo dentro de las instrucciones y comandos de
programacin. El MBED NXP LPC11U24 contiene puertos especializados para un
mejor uso en cuanto a tratamiento de seales. dando la facilidad de conectar a
programas de visualizacin como lo es LabVIEW, que en este caso funciona
como visualizador de las variables manejadas en el proceso de fermentacin,
adems de contar con un ADC interno de 16 bits, lo cual reduce la programacin
requerida para manejar seales analgicas.La instrumentacin en Labview es
virtual y para lalectura de los datos semuestra elsiguiente diagrama, el cual se
puedeencontrar en la pgina del mbed.org, para que los usuarios que utilizan el
microcontroladorMBED NXP LPC11U24 puedan utilizarlos.

61

Figura 3.9 Diagrama de interfaz en Labview y

mbed(http://mbed.org/cookbook/Homepage.).

3.7 Puesta en marcha del sistema integrado

Se llev a cabo una fermentacin con Saccharomyces cerevisiae para
probar el sistema integrado.

2% de glucosa
0.1% de sulfato deamonio
0.1% de fosfato de potasio
0.05% de Sulfato de magnesio heptahidratado
Para la fermentacin la glucosa se sustituyo con sacarosa
62

se inicio con un volumen de 1.5 L y su pH inicio en 6

En el cultivo alimentado la alimentacin fue de 150 g/L

Captulo 4 Resultados y
discusiones
4.1 Medicin de pH.
La figura 4.1 muestra la curva de interpolacin voltaje-pH que fue implementada
en un microcontrolador de 32 bits, de acuerdo al polinomio encontrado en la
Ecuacin 3.60. La figura 4.2 muestra al electrodo de pH utilizado.
63

Figura 4.1 Relacin Voltaje-pH

El trabajo posterior en el anlisis de cada una de las secciones de
implementacin, es la instrumentacin, ya sea fsica o virtual, dependiendo la
complejidad y los costos. Como ya se haba comentado, obtener los datos de
forma automtica es importante. Dentro de la etapa de instrumentacin, hay dos
formas de obtenerlas, de forma grfica y en una tabla de datos, la figura 4.3,
muestra la medicin del pH de forma grfica, ya que esto es ms sencillo de
visualizar para el operador, y as verificar si dicho parmetro de operacin est
dentro del rango usual de operacin. Tambin, es necesario obtener los datos en
una tabla, para su posterior anlisis, ya que es unos de los trabajos del operador
del biorreactor, Esta tabla se obtiene en una hoja de clculo de Excel, mostrado en
la figura 4.4.

64

Figura 4.2 electrodo de pH.

Figura 4.3. Grfica de pH, datos tomados en lnea.

65

Figura 4.4. Datos obtenido y exportados en hoja de clculo.

4.2 Medicin del oxgeno disuelto

En la Figura 4.5 se muestras las curvas caractersticas para la determinacin del
coeficiente de transferencia de oxgeno que permite observar el comportamiento
de este a diferentes agitaciones.

66

60

% de saturacin

50
N=6 (2)

40

N=8 (2)

30

N=8 (1)

20

N=6 (1)

10

Revoluciones (6)

0
0

200

400

600

800

Revoluciones (8)

Tiempo (s)

Figura 4.5.Mediciones de porcentaje de saturacin de oxgeno,

aireacin 1vvm.

4.3 Flujo volumtrico

Utilizando bomba peristltica y manguera con dimetro conocido. Se realiz una
simulacin del flujo volumtrico a partir del control de velocidad de un motor de
corriente directa. El cual se muestra en la figura 4.6 y la caracterizacin de la
bomba peristltica con la manguera que se indica en la tabla 4.2.

Figura 4.6. Control de velocidad dando un flujo constante como alimentacin

de sustrato
67

Tabla 4.2.Caracterizacin de la bomba peristltica.

Voltaje MangueraMasterflexdeneopreno
Dimetro
(V)
(calibre)
interior (mm)
3.6
2.5
1.7

25
25
14

4.5
4.5
5

Dimetro
exterior
(mm)
8
8
1.5

Flujo
(l/h)
1.612
0.502
0.021

La implementacin fsica de la tarjeta que suministra potencia a los motores de

corriente continua se muestra en la figura 4.7 y en ella se tiene una parte de
potencia y una parte de la seal de control que sirve para que las seales estn
desacopladas y as se puedan controlar la velocidad que es lo que se requiere, ya
que el flujo volumtrico est en funcin de la velocidad. Para controlar la velocidad
del motor se utiliza una ley de control PI, ya que es la de uso comn, y ms
funcional. Y para ello se utiliza un microcontrolador de 32 bits mbed.

Figura 4.7. Implementacin de tarjeta de potencia.

68

4.4 Medicin de temperatura

Las mediciones adquiridas en un ensayo con agua se muestran en la tabla 4.3. Y
la figura 4.8 muestra una grfica de temperatura en grados centgrados contra
voltaje en milivolts. Estas mediciones fueron realizadas con un termopar tipo K.

Tabla 4.3. Caractersticas de termopares de acuerdo al tipo.

T(C)
25
30
35 40
45
50
55
60
65
70 75
80
V (mV) 0.13 0.36 0.6 0.87 1.15 1.32 1.58 1.85 2.32 2.4 2.61 2.39

Figura 4.8. Termopar convencional.

El circuito integrado MAX6675 de Maxim/Dallas Semiconductor es un convertidor
analgico-digital para termopares tipo K. Dentro de este pequeo circuito se
encuentra la electrnica necesaria para amplificar, compensar y convertir a digital
el voltaje generado por el termopar, lo que hace muy sencilla la tarea de conectar
un termopar a un microcontrolador. La figura 4.9 muestra las conexiones al
microcontrolador MBED.

69

Figura 4.9. Circuito de conexiones del MAX6675 al microcontrolador MBED.

4.5. Agitacin del medio de cultivo.

La simulacin del medio de cultivo est en funcin de la velocidad de un motor de
corriente continua, y as aumentar la aireacin en el medio de cultivo; la cantidad
de oxgeno disuelto se puede ver en la medicin de oxgeno disuelto en medio. La
figura 4.10 muestra la simulacin de la velocidad del motor utilizando la ley de
control PID, mientras que la figura 4.11 muestra la implementacin de la tarjeta de
potencia.

70

Figura 4.10. Velocidad de agitacin en medio de cultivo.

Figura 4.11. Implementacin de tarjeta de potencia.

4.5 Panorama general del equipo

La figura 4.12 muestra un panorama general

del biorreactor junto con la

adquisicin de datos, mostrando un poco de la instrumentacin virtual. Es

importante mantener la visualizacin de alguno de los parmetros operados en la
fermentacin, la importancia del manejo de los parmetros de operacin radica en

71

la visualizacin inmediata, y de esta manera actuar rpidamente y evitar

desviaciones en el metabolismo celular.
Los datos pueden almacenarse a lo largo de la simulacin para ser analizados
posteriormente, aunadoa que se ahorran horas de mano de obra y la reduccin de
errores de medicin, dando a los resultados una mayor fiabilidad, adems de que
se evita la contaminacin del medio de cultivo entre la toma de muestras

Figura 4.12 Panorama general de una fermentacin.

4.6 Simulacin de los cultivos

Para la simulacin de los cultivos se tomaron los parmetros cinticos obtenidos
de Ramrez Castillo y Uribelarrea(2006)los cuales utilizaron la bacteria productora
de exopolisacridoKlebsiellapneumoniaesp. pneumoniae.
72

4.6.1 Cultivo Lote

La figura 4.13 muestra la dinmica en el modo de operacin en el cultivo lote,
mostrando en ste, el crecimiento de biomasa, la produccin de producto y el
consumo de sustrato, esto se logra con las condiciones de operacin de la tabla
4.5 y los parmetros de simulacin de la tabla 4.4.En la figura 4.13 tambin se
puede ver la simulacin con los modelos de Monod y Logstico; endicha figura se
observa que el modelo logstico es el que mejor se acerca a los datos
experimentales, tanto en crecimiento como cuando se utiliza en los modelos para
producto y consumo de sustrato.
Hay que mencionar que en este modo de operacin slo es necesario el control de
la temperatura, el del pH y el seguimiento de la medicin del oxgeno disuelto, es
decir, sin entrada o salida de sustrato y/o de medio de cultivo respectivamente.
Las ecuaciones que se refieren a la produccin de biomasa o crecimiento celular
se enumeran en la seccin 2.3 y son las ecuaciones numeradas de 2.9 a la 2.13.
Las ecuaciones enumeradas de 2.14 a 2.17 representan al consumo de sustrato;
Y las ecuaciones 2.18 a 2.20 representan a la produccin de producto.

Tabla 4.4. Parmetros de simulacin.

Parmetros

Valor

Velocidad especfica de crecimiento mxima, max(h-1)

0.5

Rendimiento celular terico mximo, Yg(gx/gs)

0.5

Rendimiento celular, Yxs(gx/gs)

0.216

Constante de saturacin, Ks(gs/l)

0.37

Rendimiento celular de producto, Yps(gp/gs)

0.4

Energa de mantenimiento, m (gs/gxh)

Modelo de produccin, qp=n+

0.226

gp/gx)

0.6

n (adim)

1
73

 gp/gxh)

0.035

Tabla 4.5. Condiciones de operacin.

Condiciones de operacin
Concentracin de sustrato de entrada, S0(gs/l)

Valor
40
2

Biomasa inicial, xo(gx/l)

0.11

Producto inicial, po (gp/l)

0.12

16

45

14

40

12

35
30

10

25

20

Sustrato (g/l)

Biomasa, Producto (g/l)

Volumen de operacin, 0 (l)

15

10

0
0

10

15

20

25

Tiempo (h)
x Experimental
p con X logstico

x Monod
Sustrato

x logstico
s con X logstico

Producto

Figura 4.13 Dinmica del cultivo lote.

4.6.2 Cultivo Continuo

En la Tabla 4.6 y 4.7 se observan las condiciones de operacin y los parmetros
de simulacin respectivamente para el cultivo continuo, en el cual se hace un
barrido de la velocidad especfica de crecimiento () por debajo de la velocidad
especfica de crecimiento mxima ( ). Para poder controlar y mantener un
valor de constante se debe de controlar y mantener constante el flujo de 2
74

bombas peristlticas, una de entrada y otra de salida, el volumen de operacin del

reactor se mantiene constante.
Tabla 4.6 Condiciones de operacinutilizadas en la simulacindel cultivo
continuo simple etapa.
Condiciones de operacin
Concentracin de sustrato de entrada, so(gs/l)

Valor
10

2
Volumen de operacin, 0 (l)
Tabla 4.7 Parmetros cinticos utilizados en la simulacindel cultivo
continuo simple etapa
Parmetros

Valor

Velocidad especfica de crecimiento mxima, max(h-1)

0.5

Rendimiento celular terico mximo, Yg(gx/gs)

0.5

Rendimiento celular, Yxs(gx/gs)

0.216

Constante de saturacin, Ks(gs/l)

0.37

Rendimiento celular de producto, Yps(gp/gs)

0.4

Energa de mantenimiento, m (gs/gxh)

Modelo de produccin, qp=n+

0.226

gp/gx)

0.6

n (adim)

gp/gxh)

0.035

En figura 4.14 se observa que variando el flujo y manteniendo ste constante

sepuede controlar y mantenerconstante la velocidad especfica decrecimiento
celular, la cual es independientedel tiempo, en teora si no hay contaminacin,
puedemantenerse laoperacin indefinidamente. Para alcanzar un estado de
equilibrio dinmicoo se deben cumplir 3 tiempos de residencia (tr) los cuales se
obtienen con el inverso de la velocidad especfica de crecimiento. El tiempo de
residencia es el tiempo necesario para el recambio de volumen de operacin
delreactor.
75

1
1

tr9

0.8

tr8

0.8

0.7

tr7

Flujo, F (l/h)

0.9

0.6

tr6

0.6
0.5

tr5

0.4

tr4

0.4

0.3

tr3
tr2

0.2

0.2

tr1

F
0

0.1
0

Velocidad especfica de crecimiento, (h1)

tr10

Tiempo (h)
Figura 4.14.Comportamiento de la velocidad especfica de crecimiento, en
funcin del flujo para un tiempo dado.

El la figura 4.15 se muestra la simulacin del cultivo continuo simple etapa, en la

cual se muestra la produccin de biomasa que se mantiene aproximadamente
constante. Se puede mencionar que a velocidades especficas de crecimiento
bajas la produccin de producto y el crecimiento celular tienen su mayor valor.

76

1.0
0.9

2.5

0.8
0.7

2.0

0.6
1.5

0.5
0.4

1.0

Flujo (l/h)

Sustrato, Biomasa, Producto (g/l)

3.0

0.3

0.2

0.5

0.1
0.0

0.0
0.0

0.1
0.2
0.3
0.4
Velocidad especfica de crecimiento, (h-1)

Sustrato, S

Biomasa, x

Producto, P

0.5

Flujo, F

Figura 4.15. Simulacin del cultivo continuo simple etapa.

4.6.3 Cultivo lote alimentado

4.6.3.1 Cultivo alimentado exponencial
La simulacin se llev a cabo con los parmetros cinticos y las condiciones de
operacin que se muestran en las tablas 4.7 y 4.8. La figura 4.16 representa el
flujo exponencial que alimentar el biorreactor, el cual depende de las condiciones
iniciales en la fermentacin, como lo es el volumen inicial, la concentracin inicial
de biomasa y la concentracin de sustrato de entrada.

En la figura 4.16 se muestra como el flujo aumenta exponencialmente con

respecto al tiempo y con la ayuda de los modelos matemticos establecidos por
las ecuaciones provenientes del modo de operacin de cultivo lote alimentado en
el apartado 2.2.2 se puede esperar una produccin de biomasa como la que
representa la figura 4.17 a manera de simulacin.
77

Tabla 4.7. Condiciones de operacin.

Condiciones de operacin
Velocidad especfica de crecimiento de operacin, max(h-1)

Valor
0.05

Biomasa inicial, xo(gx/l)

4.5

Concentracin de sustrato de entrada, s0(gs/l)

250

Concentracin de sustrato de salida, s (gs/l)

0.01

Producto inicial, p0(gp/l)

4.43

Volumen inicial, V0 (l)

13.9

Volumen final, Vf (l)

17

Tabla 4.8. Parmetros de simulacin.

Parmetros

Valor

Velocidad especfica de crecimiento mxima, max(h-1)

0.5

Rendimiento celular terico mximo, Yg(gx/gs)

0.5

Rendimiento celular, Yxs(gx/gs)

0.216

Constante de saturacin, Ks(gs/l)

0.37

Rendimiento celular de producto, Yps(gp/gs)

0.4

Energa de mantenimiento, m (gs/gxh)

Modelo de produccin, qp=n+

0.226

gp/gx)

1.4

n (adim)

gp/gxh)

78

0.3

0.25

Flujo (l/h)

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0

10

12

14

16

18

Tiempo (h)

Figura 4.16. El cultivo alimentado exponencialmente de

Klebsiellapneumoniaesp pneumoniaeK63, =0.05 h-1.
160
140

Biomasa total (g)

120

100
80
60
40

Simulado

20

Experimental

0
0

8
10
Tiempo (h)

12

14

16

18

9
8

Biomasa (g/l)

5
4

3
2

Simulado

Experimental

8
10
Tiempo (h)

12

14

16

18

Figura 4.17. Cultivo alimentado exponencialmente de

Klebsiellapneumoniaesp.pneumoniae, =0.05 h-1. A) Evolucin de la
biomasa total y B) Concentracin de biomasa.
79

Se realizaron simulaciones para diferentes velocidades especficas de crecimiento,

mostradas en la Figura 4.18, en la cual se observ cmo se incrementa el flujo a
altas velocidades especficas de crecimiento alcanzando el volumen final ms
rpido, lo cual implica una menor duracin del proceso. Con respecto a la biomasa
tanto la total como la concentracin son mayores a altas velocidades especficas
de crecimiento.
18

A
Volumen (l)

17
16
0.25

15

0.1
0.05

14

0.025
0.01

13

10

15

20
25
Tiempo (h)

30

35

40

1.2

Flujo (l/h)

1.0

0.25
0.1

0.8

0.05
0.025

0.6

0.01

0.4
0.2
0.0

10

15

20
25
Tiempo (h)

30

35

40

Figura 4.18. Cultivo alimentado creciente de

Klebsiellapneumoniaesp.pneumoniae. Evolucin del A) Flujo, B) Volumen.

80

4.6.3.2 Cultivo alimentado lineal

En la tabla 4.9 y 4.10 se muestran los parmetros y las condiciones de operacin
utilizados para el cultivo lote alimentado linealmente. La figura 4.19 muestra la
evolucin del volumen a diferentes flujos constantes, observndose que a flujos
bajos el volumen final tarda ms en alcanzarse y lo contrario sucede con los flujos
altos. Cabe destacar que en este tipo de cultivo las velocidades especficas de
crecimiento no son constantes dado que el flujo es constante y el volumen va
variando. En la Figura 4.20se observa laconcentracin de biomasa simulada, en la
cual a flujos altos biomasas mayores y viceversa. Lo mismo pasa con la biomasa
global, Figura 4.21.
Tabla 4.9 Parmetros cinticos utilizados en la simulacin de cultivo lote
alimentado lineal.
Parmetros

Valor

Velocidad especfica de crecimiento mxima, max(h-1)

0.5

Rendimiento celular terico mximo, Yg(gx/gs)

0.5

Rendimiento celular, Yxs(gx/gs)

0.216

Constante de saturacin, Ks(gs/l)

0.37

Rendimiento celular de producto, Yps(gp/gs)

0.4

Energa de mantenimiento, m (gs/gxh)

Modelo de produccin, qp=n+

0.226

gp/gx)

1.4

n (adim)

gp/gxh)

81

Tabla 4.10 Condiciones de operacinutilizadas en la simulacin de cultivo

lote alimentado lineal.
Condiciones de operacin
Biomasa inicial, xo(gx/l)

Valor
4.5

Concentracin de sustrato de entrada, s0(gs/l)

250

Concentracin de sustrato de salida, s (gs/l)

0.01

Producto inicial, p0(gp/l)

4.43

Volumen inicial, V0 (l)

13.9

Volumen final, Vf (l)

18

17

Volumen (l)

17
16

Flujo (l/h)
15
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8

14

13
0

10

20
Tiempo (h)

30

40

Figura 4.19Incremento del volumen a diferentes flujos constantes en

biorreactor.

82

Biomasa (g/l)

12
11
10
9
8
7
6
5
4

Flujo (l/h)
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8

10

20
Tiempo (h)

30

40

Figura 4.20.Evolucin de la concentracin de biomasa para cultivos lote

alimentado lineal.

Biomasa total (g)

200

Flujo (l/h)

175

0.1
0.2
0.4
0.6
0.8

150
125
100
75
50
0

10

20
Tiempo (h)

30

40

Figura 4.21.Evolucin de la biomasa total para cultivos lote alimentado lineal.

83

Captulo
sistema

5.

Validacin

del

5.1 Mediciones realizadas en lnea

Las mediciones fueron tomadas en dos partes, unas realizadas con la ayuda de
instrumentos comerciales para medir pH y temperatura, y otras con el sistema de
adquisicin de datos que se realiz en este trabajo. Los instrumentos comerciales
con los que se realiz la comparacin con el sistema de adquisicin de datos son
confiables, ya que el fabricante garantiza su correcto funcionamiento. Para tomar
dichas mediciones fue necesario lanzar una fermentacin que consisti en dos
modos de operacin; el primero, un cultivo lote, esto para generar un crecimiento
celular suficientemente alto para lanzar un segundo modo de operacin que es un
lote alimentado, esto para garantizar el correcto metabolismo celular respecto al
consumo del sustrato de entrada al biorreactor, y averiguar cual era el
comportamiento del microorganismo en cuanto su crecimiento. Mientras se
realizaba la fermentacin se realizaron diferentes medidas en diferentes tiempos,
de forma manual y de forma automtica, esto con el fin de validar el sistema que
84

se diseo para presentar este trabajo. Una imagen que muestra el lanzamiento de
la fermentacin, es la que se muestra en la figura 5.1, que muestra el biorreactor y
todos los aditamentos que son necesarios para su correcto funcionamiento.
Para llevar a cabo la fermentacin es necesario seguir pasos estrictos para que
esta sea un xito, lo primero que debe hacerse es esterilizar, tanto el frasco que
contendr al microorganismo, as como los puertos de sensores y puertos de
entrada y salida tanto de sustrato, como de sustancia cida o lcali, y toma de
muestra. Posterior a esto se procede a inocular o sembrar al microorganismo que
en este caso se trat de Saccharomyces cerevisiae, como se mencion al
principio, la primera etapa de la fermentacin es realizar un cultivo lote el cual tuvo
un proceso de duracin de 18 horas aproximadamente, para despus agregar
sustrato y el modo de operacin sea cultivo lote alimentado.

Figura 5.1. Fermentacin con aditamentos para su funcionamiento.

85

5.1.1 Medicin de pH
Las mediciones de pH se realizaron con un equipo

comercial demarca

Conductronic, y el realizado a lo largo de este trabajo mencionado en la seccin

4.1. e implementado en un microcontrolador mbed de 32 bits y la interfaz grfica
Labview, el cual ofrece que los datos sean visualizados en tiempo de
procesamiento, almacenados y que se pueden obtener en diferentes formatos
como lo es Excel, para su posterior procesamiento y anlisis, la figura 5.2 muestra
los datos medidos de manera manual y automtica, y as validando el sistema ya
que muestra que no existe gran diferencia entre dichos datos.
7
6
5
4
pH auto

pHmanu

2
1

00:00
00:37
01:20
02:09
02:45
03:12
03:50
04:21
05:04
05:48
06:31
07:10
08:10
09:00
12:51
15:20
20:13
21:51
22:44
23:25

Figura 5.2. Comparacin de datos de pH, manual y automtico.

En la figura 5.2 se puede observar que la diferencia entre el valor medido
manualmente y el valor medido automticamente son muy similares, comprobando
as la funcionalidad del sistema, Tambin es pertinente mencionar que se puede
observa con la misma grfica, que el metabolismo del microorganismo afecta el
pH, esto quiere decir que las secreciones de la clula son cidas, y esto puede
afectar al crecimiento celular.
86

5.1.2 Medicin de Temperatura

La figura 5.3 muestra la diferencia entre la temperatura medida manualmente y la
temperatura medida automticamente, mostrando as un mnima diferencia entre
el sistema comercial de la marca Conducronic. Dicha comparacin muestra que el
sistema que se realiz en este trabajo es confiable y seguro para la medicin a lo
largo de una fermentacin. Una de las ventajas de este sistema es que la
temperatura se adquiere automticamente, al igual que se hizo con el pH.
32
31
30
29

Temperatura manu
Temperatura auto

28
27

00:00
00:46
01:34
02:24
03:07
03:40
04:21
05:08
05:58
06:48
07:53
08:51
12:51
16:20
21:26
22:12
23:12

26

Figura 5.3. Comparacin de datos de Temperatura, manual y automtico.

5.1.3 Flujo volumtrico

La tabla 5.1 muestra el flujo suministrado al biorreactor. Se agregaron 3 flujos
volumtricos diferentes, uno diferente cada 2 horas, y en consecuencia se
agregaron, 0.2664 litros las primeras dos horas, 0.3528 litros de la hora 2 a la 4 y
0.4384 litros en las ltimas dos horas de la fermentacin, esto para completar un
litro de sustrato de entrada a lo largo del cultivo lote alimentado, el cul en su
totalidad duro 6 horas. Durante la operacin del reactor cultivo lote alimentado se
87

observaron diferencias significativas en el consumo de oxgeno disuelto, en

palabras ms precisas, se consumi el sustrato de forma rpida durante la entrada
de sustrato, el consumo de oxgeno disuelto es un indicador de que el
microorganismo est realizando su metabolismo. Los parmetros de pH y
temperatura se mantuvieron sin cambio significativo.
Tabla 5.1 Flujos de entrada en el cultivo lote alimentado.
Flujo (l/h)
Tiempo de aplicacin Volumen aplicado al reactor en tiempo
(h)
de aplicacin (l)
0.1332
2
0.2664
0.1764
2
0.3528
0.21924
2
0.4384

La grfica de la figura 5.4 muestra el consumo de oxgeno disuelto, durante las

primeras 21 horas la fermentacin corri en cultivo lote, a partir de la hora 21 se
empez el cultivo lote alimentado, la grfica muestra como hasta antes de de
agregar sustrato limitante al reactor no haba consumo de oxgeno, mostrando as
que el metabolismo celular se encontraba estancado en cuanto a crecimiento
celular, y esto debe observarse en el crecimiento celular, es decir en la produccin
de biomasa.

5.1.3 Medicin de agitacin, pH y temperatura simultneamente.

La grfica de la figura 5.5 muestra el comportamiento de los parmetros de
operacin en la fermentacin, los cuales son, pH, temperatura y agitacin, cada
uno analizado por separado no ofrece mucha informacin del comportamiento del
sistema el cual es el cultivo celular, sin embargo si se analizan simultneamente
puede obtenerse informacin del comportamiento del microorganismo, es decir, si
se est consumiendo o no el sustrato en base al consumo de oxgeno disuelto, y si
el aumento o disminucin de pH est afectando el metabolismo celular as como la
temperatura.
88

En la grfica de la figura 5.5 muestra como la temperatura se mantiene en un

rango de 28 a 32 C durante a fermentacin, esto se debe a que el metabolismo
celular provoca una reaccin exotrmica, es decir, aumenta la temperatura. De
igual manera la misma grfica muestra como el valor de pH, disminuye
gradualmente, de una valor de 7 hasta un valor de 2.6 a partir de la hora 15 y
despus de la hora 25 disminuy hasta un valor de 2.2. As mismo se muestra el
aumento de las revoluciones, estas aumentan conforme disminuye el oxgeno
disuelto, ya que la agitacin, mediante el aumento de las revoluciones por minuto
de un motor, se favorecen los fenmenos de transferencia de masa en el medio de
cultivo, es decir el oxgeno que se encuentra dentro del biorreactor por encima del
medio de cultivo, pasa al medio de cultivo y puede ser consumido por el

40

140

35

120

30

100

25

80

20
60

15

40

10
5

20

0
0

10

15
20
Tiempo (h)

Abs 600 nm

25

Oxpgeno Disuelto, pO2 (%)

Abs 600 nm

microorganismo.

30

pO2 (%)

Figura 5.4. Anlisis simutaneo de los parmetros de operacin.

89

1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0

30
25
20
15
10
5
0
0

pH

10

15
20
Tiempo (h)

Temperatura (C)

25

Agitacin (rpm)

pH, Temperatura (C)

35

30

Agitacin (rpm)

Figura 5.5. Consumo de oxgeno disuelto en fermentacin en modo de

operacin cultivo lote y cultivo lote alimentado.

90

Captulo 6. Conclusiones
6.1 Conclusiones

Se logr una interfaz que permite manipular los parmetros en pantalla.

La interfaz adems permite la medicin, el almacenamiento y la graficacin

de los parmetros.

Se construy una tarjeta para la manipulacin de los motores de las

bombas peristlticas y del sistema de agitacin.

La interfaz permitir introducir datos metablicos que se traducirn en el

control del modo de operacin.

Con el presente trabajo se da una percepcin clara del diseo de los

controladores y la manera de medir los parmetros que pueden conocerse
en una fermentacin, como lo son el pH, la temperatura y el oxgeno
disuelto, adems de que se conoci los mecanismos de funcionamiento de
los transductores existentes para realizar dicha tarea. Una de las
aportaciones importantes de este trabajo es la relacin que se hizo con
respecto a la parte bioqumica y la parte electrnica, adems del
tratamiento de las seales elctricas que surgen por la parte biolgica
dentro del biorreactor.
91

Se pueden resaltar, la incursin de la instrumentacin en el rea de los

bioprocesos, adems de analizar los sistemas de control, ya que tienen
gran potencial de aplicacin. El sensado de manera automtica de los
parmetros de aplicacin, resaltando su visualizacin en lnea, son de gran
inters para el experto en bioprocesos, ya que con esto, puede identificar
en el menor tiempo posible alguna anomala en la fermentacin, y de esta
manera ocupndose en el menor tiempo posible y corregir el error.

Sin duda la formacin de recursos humanos en el rea de control de

bioprocesos es necesaria para nuestro pas ya que existen pocos expertos
en esta rea.

92

Captulo 7. Referencias
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