UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNMA DE MXICO

Facultad de Estudios Superiores Iztacala

METDOLOGA DE PRCTICAS
MDULO DE INTRUMENTACIN Y LABORATORIO I

METODOLOGA
Biometra Hemtica
Sabemos que la sangre est compuesta por una parte lquida conocida como
plasma, y una slida a base de eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Se conocen
diversos mtodos para analizar la sangre y de entre estos destacan como tal la
biometra hemtica (BH), el cual es un conjunto de pruebas de laboratorio clnico
enfocados en el estudio cualitativo y cuantitativo de los elementos que forman la
sangre. La BH es un auxiliar en el diagnstico de mltiples enfermedades con
base en un estudio comparativo de las cifras de referencia y determinados
factores que ejercen cierta influencia sobre dichas cifras, como son la altitud, raza,
sexo, edad o las actividades fsicas que el individuo realice.
Como tal la biometra hemtica o frmula roja tiene ciertas determinaciones a
observar en la prctica, las cuales son: la hemoglobina (Hb), el nmero de
eritrocitos por mm3, el hematocrito (Hto), la velocidad de sedimentacin
eritrocitaria o velocidad de sedimentacin globular cuyas abreviaturas son VSE o
VSG y los ndices eritrocitario (ndices globulares medios), dentro de los cules
especficamente se atiende a la observacin de el volumen globular medio (VGM)
y la hemoglobina globular media (HbGM).
Para llevar a cabo una biometra hemtica es necesario contar con un
espectrofotmetro, un microscopio, un microcentrfuga, una pipea de Shali de
2mL., un tubo de ensayo que contenga 0.25mL. de EDTA al 10%, una pipeta de
Thoma de glbulos rojos, una cmara de Neubauer

(tambin conocida como

hematocitmetro o cmara contadora, 1 tubo de Wintrobe, una gradilla de

sedimentacin globular ( tambin llamada Wintrobe), cuatro portaobjetos, dos
tubos capilares y una pipeta de Pasteur con bulbo. En cuanto a los qumicos que
requiere se encuentran un frasco con solucin salina isotnica y un frasco con
reactivo de Drabkin.
a) Deteccin de los niveles de Hemoglobina

Ya que tenemos el material y el rea as como las condiciones adecuadas para

llevarlo a cabo, habremos de determinar en primera instancia la hemoglobina, por
la formacin del complejo cianometahemoglobina por medio del reactivo de
Drabkin.
Para llevar a cabo el proceso, en primer lugar debemos marcar dos tubos de
ensayo de 13 x 100: uno con la letra b (blanco) y otro con la letra p (problema).
Dentro de dichos tubos se debe depositar 5mL. De reactivo de Drabkin y con la
ayuda de una pipeta se Shali con boquilla se debe aspirar la sangre hasta superar
la marca sealada en la pipeta con el nmero 20, limpiar el exceso de sangre y
aforar a la marca con el nmero 20.
Luego, en el tubo marcado con la letra p debe asrarse y soplar en repetidas
ocasiones sobre el reactivo hasta que nuestra mezcla quede completamente
homogenizada para despus dejarle en reposo por 30 minutos, a temperatura
ambiente.
Para medir la densidad ptica de este pigmento se emplea el espectofotmetro a
540nm de absorbancia: una vez obtenido un valor debe multiplicarse por el factor
36.8

(valor

previamente

establecido)

reportar

nuestro

resultado

en

gramos/100mL.
A continuacin

se

presentan

los

valores de

hemoglobina

referenciales

considerados como normales:

Hombre 15.5-20g/100mL.
Mujeres: 13.5-17g/100mL.

b) Cuenta de eritrocitos
Para llevar a cabo esre procesos debemos aspirar la sangre con una pipeta de
Thoma, empleada comnmente para los glbulos rojos, hasta llegar a la marca de
0.5 y una vez hecho, debe limpiarse el extremo de la pipeta para despus llenar
con lquido de Gowers hasta la marca 101 cuidando que no entre aire en el
interior de la pipeta. Despus, usando la tcnica de soplar debe eliminarse de 3 a

5 primeras gotas de la pipeta, luego debe llenarse la cmara contadora o de

Neubauer mediante un goteo parejo nico del lquido que se encuentra debajo del
cubreobjetos. Una vez que se ha realizado esto deben transcurrir 4 minutos con el
fin de que se sedimenten los eritrocitos, para despus colocarlos en una cmara
sobre la platina del microspio con el objetivo de 10x y observar la cuadrcula para
asegurarse que hay una distribucin homognea de esto.

De manera

consiguiente se debe cambiar el objetivo de 40x y reducir la iluminacin para una

mejor apreciacin de la mezcla.
Dentro de la cuadrcula del hematocitrometro de Neubauer cuyas medidas son
9mm2, nos permitir tener una escala adecuada para medir por ejemplo, huevos de
parsitos: dentro de la camra cuentaclulas, cuya profundidad es de 0.1mm se
debe de llevar a cabo el conteo de los eritrocitos situados en los lmites superior
izquierdo de los cuadros R, pero no aquellos toquen los lmites derecho e inferior
de la cuadrcula. Consiguiente a esto, debe registrarse la cantidad hallada en cada
uno de los cuadros R y finalmente debe multiplicarse la cantidad hallada por
10,000 para obtener el nmero de eritrocitos por microlitro de sangre.
Como valores de referencia debe tomarse:

Hombres: 5 000 000 a 6 000 000 millones/mm 3

Mujeres: 4 500 000 a 5 500 000 millones/mm 3

R= 5 cuadros pequeos, cada uno contiene 16 cuadritos y a su vez cada uno

contiene 1/400mm2 . En estos 80 cuadritos nicamente se lleva a cabo el conteo
de eritrocitos, con un aumento elevado.
W= 4mm2, se cuentan los leucocitos con poco aumento.
X= 4mm2, que se emplean con otros cuadrados para el conteo de clulas en
lquido cefalorraqudeo.
c) Hematcrito
Para detectar al hematocrito se emplea la tcnica de micohematcrito mediante la
recoleccin de la sangre por el medio capilar y se llene hasta las partes de su
longitud total del tubo capilar mediante la inclinacin de este para facilitar su
llenado. A continuacin se tapa uno de sus extremos con una pequea porcin de
plastilina o se flamea con un cerillo para cerrarlo (extremo que no ha estado en
contacto con la sangre) y se limpian los excesos de sangre. Despus colocamos
de manera adecuada en la microcentrifuga clnica, con la parte cerrada sobre la
empaquetadura de caucho (alrededor de la microcentrifuga), se coloca entonces la
tapa, se atornilla y se centrfruga a 16 000rpm durante 5 minutos.

Para la valoracin del microhematocrito como el porcentaje de toda la sangre

venosa ocupada por eritrocitos y se interpreta de la forma siguiente:

Con una regla se mide desde la superficie de separacin de plastilina hasta

el menisco del plasma (100%), despus medimos el paquete globular y se
determina el % que le corresponde.

Como valores de referencia tenemos:

Hombre: 45-57%
Mujeres: 42-48%

Velocidad de sedimentacin globular

Una vez que la sangre con anticoagulante se tiene se debe determinar la
velocidad de sedimentacin globular, se toma la sangre con una pipeta Pasteur y
se transfiere a un tubo de Wintrobe hasta llenarlo a la marca 0. S lleva el tubo de
Wintrobe a la gradilla de sedimentacin previamente rotulado y entonces
anotamos la hora a la cual fue depositsa la muestra en el tubo, se debe dejar
reposar 1hr.
Valores de referencia

Hombres:0-5mm/hora
Mujeres: 0-13mm/hora

Indices globulares medios

Debemos obtener:

Volumen Glubular Medio (VGM)

Es una forma de expresar el tamao de los eritrocitos .El valor normal es de 80100 fl (femtolitros por hemate).

Hemoglobina Globular Media (HbGM)

Consiste en el promedio del peso de la hemoglobina en el eritrocito. Lo

obtenemos multplicando la hemoglobina x 10.

Concentracin de Hemoglobina Globular Media (CHBGM)