LA SEROLOGA COMO

INSTRUMENTO
DIAGNSTICO EN
FAUNA SALVAJE:
EL CUANDO, QUE, Y COMO DE LAS
PRUEBAS DIAGNSTICAS DE AGENTES
ETIOLGICOS

Ursula Hfle, Juan Manuel Blanco Aquila

Foundation y Centro de Estudios de Rapaces
Ibricas, Junta de Copmunidades de Castilla La Mancha, 45671 Sevilleja de la Jara. e-mail:
Uholfeh@nexo.es y
aquilafoundation@hotmail.com

1- INTRODUCCIN
La serologa aprovecha la habilidad de los organismos de defenderse ante una
infeccin por un patgeno. Esta defensa incluye diferentes mecanismos especficos e
inespecficos, de los cuales los inespecificos son innatos e incluyen mucosas, sistemas
mecnicos, macrofagos etc. Algunos componentes de este sistema constituyen la base
sobre la que funciona el sistema especifico dado que es un sistema que adquiere
inmunidad tras la fagocitosis y exposicin de un antgeno por los macrofagos, su
posterior reconocimiento e interaccin con los linfocitos que estimula la formacin de
anticuerpos.
Tras una infeccin la presencia de anticuerpos se puede detectar en general en un plazo
de entre 10 y 15 das dependiendo del tipo, cantidad, virulencia y patogenidad del
antgeno y del estado, la va de infeccin y la capacidad inmune del animal infectado.
Tambin influye si se trata de una primera exposicin o de si un animal ya ha tenido
contacto con el antgeno en cuestin. Cuando un animal entra en contacto por segunda o
consecutiva vez con un antgeno al que ya ha estado expuesto se produce una respuesta
ms alta, durante mas tiempo y tras un periodo mas corto de latencia (periodo entre la
infeccin y la aparicin de anticuerpos en la circulacin). La respuesta ante una primera
infeccin se llama respuesta primaria, mientras la respuesta seguida a una reinfeccin se
denomina respuesta secundaria. La rapidez de la respuesta secundaria se debe a la
creacin de una "memoria" del antgeno tras su primera aparicin - y la reaccin
desencadenada despus de la segunda exposicin es una reaccin anamnestica.
La deteccin de anticuerpos circulantes no solo depende de factores ligados al individuo
o el patgeno investigado, sino tambin de los mtodos empleados para su deteccin,
hecho que tratamos en un captulo posterior. Para la demostracin de una infeccin
activa o una respuesta anamnestica hacen en general falta varios (mnimo dos) anlisis
consecutivas para visualizar un aumento en los anticuerpos.

2- LAS TCNICAS DE SEROLOGA

Los diferentes test serolgicos aprovechan una serie de fenmenos fisiolgicos
como son el sistema de complemento, las reacciones entre anticuerpo y antgeno, la
precipitacin y la aglutinacin.
Los sistemas ms importantes aprovechados para estas pruebas son:
a) El sistema de complemento
El sistema o la cascada de complemento consiste en veinte protenas sricas algunas
de ellas termolabiles. La formacin de un complejo de antgeno y anticuerpo activa este
sistema de protenas que interaciona de forma secuencial. Su activacin resulta en una
reaccin con las membranas de clulas que puede causar bien su activacin, la
alteracin de su estructura o su destruccin. Eritrocitos sobre la superficie de los cuales
se han fijado anticuerpos son destruidos mediante lisis por el sistema de complemento.
Una de las pruebas conocidas de serologa aprovecha esta accin litica del
complemento. La tcnica utiliza cantidades conocidas de complemento para medir la

cantidad de anticuerpos presentes en una muestra. Para no medir concentraciones

errneas los factores de complemento prprios de la muestra, todos ellos termolabiles,
se desactivan mediante calentamiento a 56C durante 30 minutos previamente a la
realizacin de la prueba.
b) La reaccin de anticuerpos con el antgeno
La reaccin entre anticuerpos y antgeno es muy especfica, y por esta razn
constituye un instrumento muy valioso para mediante un componente conocido
(antgeno) identificar la presencia de uno desconocido con un alto nivel de seguridad.
La applicacin de estos recursos es muy amplia, sobre todo en el diagnstico y en la
monitorizacin de enfermedades infectocontagiosas. La reaccin de un antgeno con
anticuerpos resulta en la formacin de complejos inmunes de diferentes tpos
(precipitantes, etc.). Dependiendo del antgeno y el sistema de prueba utilizados se
pueden obtener y medir diferentes tipos de estos complejos. En general, en las pruebas
de serologa se emplea una cantidad conocida de antgeno y se diluye el suero que se
investiga de forma seriada. Se mide la concentracin del suero que an inhibe (mediante
complejos anticuerpo antgeno) una accin concreta del antgeno, o la que an forma
complejos que provocan una reaccin demostrable. Esta concentracin del suero es
expresado como el ttulo de anticuerpos del suero.

3- LAS DIFERENTES PRUEBAS SEROLGICAS

En el momento de realizar pruebas diagnsticas de enfermedades
infectocontagiosas hay dos posibles vas principales: pruebas directas encaminadas a la
deteccin del agente etiolgico o de parte de su ADN en el animal afectado, o pruebas
indirectas que demuestran que el sistema inmune del individuo afectado ha estado en
contacto con el agente en cuestin. Cualquiera de los tipos de prueba aporta una
informacin diferente y las pruebas aplicables varan en especfidad y sensibilidad. En
lo presente nos centramos principalmente en las pruebas que permiten la deteccin de
anticuerpos aunque algunas tcnicas son parecidas para la deteccin de anticuerpos y
antgeno.
1- Precipitacin/
La adicin de un antgeno soluble a una solucin con anticuerpos homlogos resulta
en la formacin de complejos inmunes que precipitan de la solucin. Cuando se
aumenta la cantidad de antgeno que se aade se forman cantidades variables de
complejos y con esto de precipitado, obteniendo la mayor cantidad de complejos cuando
la proporcin de antgeno y anticuerpo en la solucin es equivalente o ptimo. Esto se
aprovecha en los test serolgicos de inmunoprecipitacin como por ejemplo para la
identificacin de diferentes estreptococos.
2- Inmuno difusin

Cuando esta tcnica se utiliza en un medio semisolido como los geles de agar en
los cuales los dos componentes el antgeno y el anticuerpo migran a travs del agar
hasta que se encuentren y precipitan en el lugar donde su proporcin es optima, se trata
de inmunodifusin. Este mtodo permite identificar anticuerpos y antigenos
desconocidos y comparar antgenos parecidos entre si (mtodo de Ouchterloney).
Tambin permite cuantificar el antgeno presente en una solucin determinada. Para ello
se pueden obtener resultados mas exactos mediante inmunodifusin radial (el antgeno
se encuentra en pequeas indentaciones y difunde por un gel que contiene una
concentracin conocida de antisuero, de modo que dimetro del anillo de precipitacin
que se forma es proporcional a la cantidad de antgeno.
3- Inmunoelectroforesis
En lquidos que contienen mezclas de antgeno se puede aplicar primero una
electroforsis para separar los antgenos presentes y luego la inmunodifusin para su
identificacin.
4- Aglutinacin
Anticuerpos pueden reaccionar con un antgeno determinado y luego
interconectar entre ellos o diferentes componentes antgenos presentes por ejemplo en la
superficie de una bacteria. Este proceso resulta en la aglutinacin que es visible
macroscopicamente y es un instrumento til en la identificacin de bacterias, hongos e
incluso protozoos medinte antisueros especificos. Del mismo modo utilizando un
antgeno purificado especifico se puede demostrar la presencia de anticuerpos frente a
este antgeno en una muestra. Ambos mtodos se realizan con frecuencia de forma
directa en un porta y estan conocidos como Aglutinacin en porta. Ejemplos son la
aglutinacin en porta para la deteccin rpida de anticuerpos frente a diferentes
Mycoplasma spp. o Salmonella spp. as como el test de rosa bengala para la deteccin
de anticuerpos frente a Brucella abortus. Para determinar anticuerpos frente a
Leptospira spp. se utilizan cultivos vivos de Leptospira en una aglutinacin en porta
bajo el miscroscopio en campo obscuro. Para cuantificar anticuerpos mediante
aglutinacin se puede utilizar el test de aglutinacin en tubo, diluyendo el antisuero en
pasos de dos en dos (a veces dificl de interpretar y requeriendo muestras seriadas). En
el caso de antgenos que se pueden fijar sobre glbulos rojos (de for ma pasiva o
mediante tratamiento qumico), por ejemplo de ovejas, la hemaglutinacin en placas de
microtitracin se puede utilizar para cuantificar anticuerpos (la mnima concentracin
que an aglutina los glbulos rojos).
5- Fijacin de complemento (CFT)
El test de fijacin de complemente utiliza el hecho de que complejos de
anticuerpo y antgeno activan el sistema de complemento que, entre otras actuaciones,
causa la lisis de eritrocitos que muestran antgeno. la prueba se desarolla en dos pasos:
Tras la inactivacin de los sueros (para eliminar la actuacin del complemento proprio
del suero), en una placa de microtitracin (pozos en V) se aade antgeno y una cantidad
conocida de complemento (de cobaya). Tras 30 minutos de incubacin se aaden

eritrocitos de oveja (sensibilizados mediante suero de conejo con hemolysina) y se

incuba otra media hora. En los sueros que contenan anticuerpos, se han formado
complejos que se han ligado al complemento y han evitado la destruccin de los
eritrocitos mientras que en las muestras en las que no hay anticuerpos se lisan los
glbulos rojos. Por ejemplo para deteccin de anticuerpos frente a Chlamydia psittaci
(mamferos).
6- Hemaglutinacin e inhibicin de la misma (HA y HAI)
Algunos virus, especialmente los Paramixovirus aviares o los virus de influenza,
pueden adherirse a la superficie de los glbulos rojos y aglutinarlos. Esto, y el hecho
que la presencia de anticuerpos inhibe esta aglutinacin es utilizado en una tcnica
serolgica que se aplica con frecuencia. Primero se suele probar la actividad aglutinante
del virus que se va a utilizar como antgeno y determinarse su concentracin en cuatro
unidades hemaglutinantes. El anlisis tambin discurre en dos pasos: Los sueros a
analizar se diluyen en dos por dos en una placa de microtitracin, y se aade el antgeno
en una concentracin de 4 unidades aglutinantes. Tras 30 minutos de incubacin se
aaden eritrocitos lavados y se incuba otros 30 minutos y luego se determina el ttulo de
inhibicin de hemaglutinacin de los sueros analizados.
7- Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
El descubrimiento de que una serie de encimas como por ejemplo la fosfatasa
alcalina se podan ligar a anticuerpos sin perder su actividad ni interferir con la accin
de los anticuerpos llevo al desarrollo de un gran grupo creciente de pruebas diagnsticas
que aprovechan la posibilidad de detectar los anticuerpos mediante la actividad de la
encima ligada. Los llamados Enzyme-linkedimmunosorbent assays (ELISA) son
seguros y faciles de utilizar y permiten tanto la determinacin y cuantificacin de
anticuerpos (ELISA indirecto, competitivo, o blocking) como de antgeno (ELISA
directo o Sandwich) y por eso tienen una amplia aplicacin en el diagnstico tanto de
enfermedades viricas y bacterianas como las causadas por hongos o parsitos.
El ELISA indirecto para la deteccin de anticuerpos utiliza antgeno adherido a
membranas o recipientes de poliestireno, al que se adiciona el suero a analizar y sueros
de control. Tras una incubacin y el lavado para eliminar los anticuerpos sobrantes se
aade un suero anti-inmunoglobulina conyugado con una encima y se incuba y lava de
nuevo. Aadiendo ahora un substrato para la encima que esta transforma causando una
reaccin de color que se puede determinar visualmente o mediante un
espectrofotometro. El problema de esta prueba es la necesidad de una antiinmunoglobulina que sobre todo en aves es un impedimiento por que no hay reacciones
cruzadas entre las inmunoglobulinas de especies diferentes y las inmunoglobulinas
comerciales existentes solo pertenecen a muy pocas especies. Un intento de obviar esta
necesidad son los ELISAS bloqueantes (blocking ELISA).
Para la deteccin de antgeno se utiliza una versin directa del ELISA o el
mtodo de sandwich y se puede aplicar tanto en suero como en otras secreciones. Este
test utiliza anticuerpos especficos fijados en placas de poliestireno y que capturan el

antgeno al adicionar el suero. Tras incubacin y un lavado se adiciona otor anticuerpo

especifico ligado una encima que al igual que con el mtodo indirecto luego transforma
un substrato produciendose una reaccin de color que se puede leer luego.
8- Radioimmunoassay (RIA)
Este sistema utiliza una metodologa similar a la del ELISA o de la
inmunofluorescencia, pero aplicando moleculas marcados con radioisotopos. Esto hace
el test extremadamente sensitivo y permite detectar cantidades mnimas de antgeno o
anticuerpos.
9- Inmunofluorescencia
En la inmunofluorescencia se utilizan inmunoglobulinas marcadas con
sustancias fluorescentes como isotiosyanato de fluorescina o rhodamina, parecido a las
encimas empleados en los ELISA. Se trata de un mtodo muy sensible pero que
requiere el uso de un microscopio de fluorescencia con lampara de mercurio y
experiencia en la interpretacin para evitar errores. Tiene un campo muy amplio de
aplicacin y se utiliza con frecuencia para la deteccin de antgeno en tejidos.
10- Inmunoperoxidasa
Este mtodo permite la deteccin de entgeno en tejidos mediante el uso de
inmunoglobulins marcadas con una encima (peroxidasa o fosfatasa alcalina) que
generan una coloracin desde un substrato sin color. La ventaja ante las tcnicas de
fluorescencia son el equipo necesario y que se puede aplicar en material incluido en
parafina. Para eata prueba tambin hace falta mucha experiencia para su correcta
interpretacin.
11- Test de neutralizacin de virus
Este mtodo utiliza la habilidad de los anticuerpos de anular la accin biolgica
de un virus o de una toxina. Esto se aplica en algunas pruebas para la neutralizacin de
toxinas bacterianas (prueba de Nagler para Clostridium perfringens) y sobre todo para
un gran nmero de virus. El mtodo consiste en la infeccin de un cultivo celular
receptivo con un virus que causa lesiones visibles en este cultivo. La concentracin del
virus es conocido mientras que los sueros a analizarse diluyen en pasos de dos en dos.
Si el suero contiene anticuerpos especficos estos inhiben la infeccin de las celulas por
el virus en cuestin y con ello la aparicin de lesiones en el cultivo celular. Para muchos
virus de importancia para los animales domsticos el test de neutralizacin de virus
constituye el "gold standard" por su especifidad y sensibilidad. Sin embargo tambin es
el anlisis mas costoso y que ms tiempo requiere debido a la necesidad de trabajar con
cultivos celulares o huevos embrionados.
12- Test de proteccin

Este mtodo funciona segn el mismo principio que el test de neutralisacin de

virus, pero se realiza en vivo. Se aplica por ejemplo para la deteccin de txinas
producidas por Clostridium botulinum.
13- Tcnicas nuevas
Algunos laboratorios de diagnstico clnico ya disponen de tcnologa moderna
aplicada de momento prioritariamente a medicina humana, que principalmente aplica
alguna de las tcnicas anteriormente marcadas de forma automatizada (VIDAS).
Anlisis de inters para la fauna silvestre mediante estos aparatos incluyen la deteccin
de Salmonella spp. y Clamydiophila.
Mtodos moleculares como la Polymerase Chain Reaction (PCR) estn
encaminados a la deteccin de antgeno en una muestra determinada.

4- ESPECIFIDAD Y SENSIBILIDAD
La validez de una prueba diagnstica en cuanto a una enfermedad
infectocontagiosa depende de su especifidad (capacidad de distinguir el material
(anticuerpo, antgeno) objetivo de la prueba de otro parecido) y de su sensibildad
(capacidad de detectar cantidades pequeas del material objetivo de la prueba). El deal
sera una prueba que al mismo tiempo garantizara la mxima especifidad (sin falsos
positivos) y la mxima sensibilidad (sin falsos negativos) y que la mismo tiempo diera
resultados rpidos. Cada prueba tiene una sensibilidad determinada (tabla 1).
Tabla 1. Sensibilidad relativa de diferentes pruebas serolgicas (segn Tizard,
1992 y Ritchie et al., 2000)

Tipo de prueba

Concentracin de protenas que puede

detectar (g/ml)

Inmunodifusin

3 a 30

Inmunofluorescencia

0,1 a 1

Fijacin de complemento

0,1 a 0,05

Aglutinacin

0,05 a 0,001

Inhibicin de la Hemaglutinacin

0,01 a 0,005

ELISA
Neutralizacin de virus

0,01 a 0,0005
0,00005

5- APLICACIONES PARA LA SEROLOGA EN LA

FAUNA SILVESTRE
Ante todo hay que tener en cuenta que la gran mayora de la tcnicas serolgicas
existentes han sido desarrollados para su uso con animales domsticos, bien de
produccin o bien de compaa. Esto significa que muchas de las tcnicas existentes no
han sido validadas para las especies silvestres para los que nosotros necesitamos
efectuar un diagnstico. Adems algunas de estas tcnicas, especialmente las ELISAS
necesitan disponer de reactivos (por ejemplo anticuerpos anti IgG) especificos de la
especie a analizar. Por estas razones hay que seleccionar con mucha prudencia los tests
que se vayan a utilizar en funcin de la especie y de la enfermedad que se quiere
investigar.
Principalmente hay dos posibles campos de utilidad para la serologa:
a) El diagnstico de un proceso infeccioso en curso
Si se utiliza con este fin hay que observar una serie de requerimientos muy concretos:
La deteccin de anticuerpos (inmunoglobulinas G) frente a un antgeno especfico
significa que el animal ha sido recientemente expuesto a este antgeno y que se ha
producido una infeccin. Para poder determinar que hay una infeccin en curso e
incluso que una enfermedad clnica este relacionado con el patgeno en cuestin
hace falta el examen de muestras seriadas es decir al mnimo dos muestras en una
distancia de 10 das en las que se demostrara un aumento del ttulo de anticuerpos
cuatro veces la primera cifra.
En algunas infecciones, que producen inmunidad persistente la deteccin de
anticuerpos en una sola muestra si puede ser diagnstica (Herpesvirus, HIV).
Las tcnicas existentes de deteccin de anticuerpos generalmente no pueden
distinguir entre anticuerpos procedentes de una infeccin o de una vacunacin
Para la deteccin de anticuerpos es necesario que el animal infectado tenga un
sistema inmune funcional que produce anticuerpos.
Los anticuerpos producidos con respuesta a una infeccin desaparecen con el tiempo
de la circulacin sangunea, y en algunos individuos o especies la respuesta a un
infeccin determinada es muy dbil. Por estas dos razones la ausencia de
anticuerpos no necesariamente significa la ausencia de una infeccin.
Algunos anticuerpos producidos contra un antgeno pueden tener reacciones
cruzadas con otro antgeno y producir resultados falsos positivos (APMV-1 y
aPMV-3)
En el caso del diagnstico clnico en general es mejor la deteccin del patgeno o de su
ADN que la presencia de anticuerpos frente a el.

b) La monitorizacin de la presencia y prevalencia/la exposicin a un patgeno en

concreto en un individuo o en una poblacin; por ejemplo en chequeos previos a
una translocacin o reintroduccin.
Una de las grandes utilidades de la serologa es la imagen momentan que se puede
obtener sobre la presencia y prevalencia de un patgeno en un apoblacin o en grupo
determinado de individuos. Esto es especialmente verdad en relacin con proyectos de
reproduccin ex situ, en translocaciones de animales, y en situaciones de
reintroducciones de individuos en una poblacin salvaje.
Aunque el papel de las enfermedades como factor influyente en el xito de este tipo de
actuaciones solo se ha reconocido recientemente existen ya documentos elaborados por
organismos de reconocida autoridad en la conservacin de especies amenazadas como
la IUCN en las que se hacen recomendaciones sobre la monitorizacin de enfermedades
y anlisis previos a translocaciones, etc.
La serologa permite tambin un paso previo con la monitorizacin del estado sanitario
de poblaciones y la determinacin de este modo, por ejemplo, de que patgenos pueden
ser de importancia al convertirse una poblacin determinada en receptora de individuos
reintroducidos, o de nuevos ejemplares (stock de cra).

6- QUE MTODO ELEGIR?

En muchas ocasiones existen varios tipos de pruebas serolgicas diferentes para
detectar anticuerpos frente a un antgeno determinado, pero segn la informacin que se
quiere obtener, la especie con la que se trabaja o la situacin es preciso elegir la prueba
mas adecuada.
Dado que las diferentes pruebas existentes varan tambin frecuentemente en su
especfidad y sensibilidad (ver tabla 1) la OIE (office internationale des epizooties) ha
editado un manual de estandard para las pruebas diagnosticas para las enfermedades
infectocontagiosas mas importantes de los animales domsticos en los que define los
gold standard la prueba referencia o mejor y hace recomendaciones sobre que
mtodos a emplear. En muchos casos esta informacin es tambin aplicable a las
especies de fauna silvestre, mientras que en otros no, siendo otro factor de importancia
el coste de las pruebas.
La siguiente tabla 2 resume las enfermedades infectocontagiosas mas
importantes y las pruebas serolgicas u otras, mas recomendadas:

Tabla 2. Anlisis mas adecuadas para diferentes enfermedades infectocontagiosas

de interes en avifauna silvestre

Enfermedad
Enfermedad
Newcastle
Influenza aviar
??Enteritis etc.
Gumboro

Agente
etiolgico

Especies
afectadas

de Paramyxovirus aviar Aves

1 (aPMV-1)
Influenzavirus
Aves

Prueba serolgica
recomendada
HAI

Adenovirus
Aves
Infectious
Bursal Aves (gallina)
Disease Virus
Inclusion
Body Herpesvirus (FHV, Rapaces,
Disease (IBDV)
OHV, PHV)
palomas
Viruela aviar
Poxviridae
Aves

HAI, AGID (ELISA para

galliformes)
NT
NT, AGID
NT

inmunodifusin en gel o
NT en huevos, histologa
y cultivo mejor
incl. NT o PCR

(PBFD
solo Avian Polyomavirus Aves,
psitacidas)
rapaces
Diferentes procesos Circovirus aviar
Aves (hasta la No hay serologa vlida :
fecha
en PCR
psitacidas,
palomas,
gaviotas,
paseriformes)
Ornitosis
Chlamydiophila
Aves
Antigen ELISA. (IgM:
infeccin actual y clnica,
IgG exposicin en el
pasado
inmunolgico),
mejor cultivo
Spirochaetosis
Borrelia anserina
Acuaticas
y AGID
galliformes
Micoplasmosis
Micoplasma spp.
Aves
Aggl. en porta con
validez
limitada
(ausencia), es necesario
aislar o detectar el
germen por PCR
Salmonellosis
Salmonella spp.
Aves
Aggl. en porta puede dar
primera
aprox
para
alguna cuestin (tambin
de yema de huevo ) pero
mejor es cultivar
Aspergilosis
A. fumigatus, niger, Aves
ELISA de anticuerpos o
etc.
antgeno
idealmente
ambos al mismo tiempo.
Resultado depende de la
calidad de la muestra

7- QUE UTILIZAR? COMO TOMAR Y

CONSERVAR LA MUESTRA?
Para la deteccin de anticuerpos se utiliza generalmente plasma o suero obtenido
de forma estril, o, en ocasiones suero extrado de leche o de yema de huevo.
Idealmente las pruebas se realizan con suero, obtenido tras la extraccin de sangre de
forma estril en un tubo estril sin anticoagulante. Tras la coagulacin de la sangre a
temperatura ambiente la sangre se centrifuga y el sobrenadante se separa en por ejemplo
de tubos eppendorf de tamao adecuado y se guarda congelado (a -20 o -80 C). Las
inmunoglobulinas, especialmente las IgG que se miden en la gran mayora de las
pruebas serolgicas (excepcin IgM para Clamidiofila) son relativamente estables y
aguantan varios ciclos de congelacin y descongelacin. Sin embargo por seguridad y
cuando se quieren realizar varias pruebas distintas (pre-translocacin/-reintroduccin,
estudios) es recomendable guardar varias copias de la misma muestra.
Si la extraccin de sangre se realiza con el fin de realizar varias pruebas al mismo
tiempo (bioqumica..etc.) y/o no hay disponibilidad de tubos estriles sin
anticoagulante, se puede obtener plasma tras la centrifugacin de sangre obtenida en
heparina ltio. Antes de analizar muestras de plasma sanguneo sin embargo es
imprescindible realizar una inactivacin a 56 C durante media hora.
Para serologa de antigenos adems de suero o plasma sanguneo se pueden emplear
otros liquidos como exudados, saliva, synovia etc.. Es muy importante tener encuenta
que un anlisis slo puede ser tan bueno como la muestra tomada, es decir hay que
observar mucho tomar una muestra de forma que sea representativa y que no se midan
contaminantes.

8- CONCLUSIONES
La serologa es un instrumento versatil y de gran inters para el tarbajo de
conservacin y de los centros de recuperacin. Como prueba diagnstica, mtodo de
monitorizacin e instrumento para la evaluacin de riesgos su validez depende de la
correcta seleccin, aplicacin e interpretacin de la prueba a utilizar.

9- BIBLIOGRAFA RECOMENDADA
1- OIE (Office Internationale des Epizooties). Manual of standards for diagnostic tests
th
and vaccines, 4 edition, 2000.
2- Ritchie, B.W., Harrison, G.J., Harrison, L.R. (Eds): Avian Medicine: Principles
and Applications, Winger's Publishing, Inc., Lake Worth, Florida, 1994.
3- Quinn, PJ; Carter, ME; Markey, B.; Carter, G.R. Clinical Veterinary Microbiology.
Mosby-Year Book Europe Limited. 1994.

4- Swayne, D.E., Glisson, J.R., Jackwood, M.W., Pearson, J.E. and Reed, W.M.
(editorial committee). A laboratory manual for the isolation and identification of
th
avian pathogens. 4 edition, American Association of Avian Pathologists Inc.,
Kennett Square, Pennsylvania. 1998.
th

5- Tizard, I. Veterinary Immunology. 4 ed. Philadelphia PA, WB Saunders, 1992.

6- Woodford, M.H. (ed.). 2001. Quarantine and health screening protocols for wildlife
translocation and release into the wild. OIE, EAZWV, IUCN, Care for the Wild
International. 99 pp.