Aunquelas protenasdel VHA fue adaptado con xito a primera

cultivo celular hace 20 aos201, sus protenas constituyentes no han

sido completamente definidos115.Las clulas infectadas contienen
slo ttulos bajos de virus, y por consiguiente la qumica de protenas
ha sido limitada.La regin P1 codifica las tres principales protenas de
la cpside viral, VP1, VP2, y VP3.Una cuarta protena de la cpside
viral (VP4), esencial para la formacin de viriones199, no se detecta
en las partculas virales maduras.Cada una de las protenas de la
cpside se escinde de la poliprotena precursora por la proteasa 3C
viral, codificada en la regin P3.La conformacin nativa de las
protenas de la cpside VP1 y VP3 forma un nico eptopo serolgica,
dominante, sobre la cpside viral y provoca una respuesta de
anticuerpos neutralizantes.Protenas no estructurales codificadas en
las regiones P2 y P3 se predicen para funcionar en la sntesis de ARN
y la formacin de viriones.VPg (protena del virin, genoma
vinculado), tambin codificada en la regin P3, est enlazado
covalentemente al extremo 5 'del genoma y la implicada en la
iniciacin de la sntesis de ARN.
Ciclo de vida de losdatos disponibles sobre el destino exacto de
viriones inmediatamente despus de la ingesta oral son incompletos
(ver Fig.1).En la infeccin experimental de monos lechuza con HAV
humano, antgeno viral era detectable por inmunofluorescencia en el
estmago, el intestino delgado y el intestino grueso no slo despus
de la inoculacin oral inicial, pero tambin ms tarde en el curso de la
enfermedad20.La capacidad para detectar antgenos virales en
clulas de las criptas intestinales utilizando inmunofluorescencia
sugiere que la replicacin viral puede ocurrir en el intestino20.Los
viriones alcanzan presumiblemente el hgado en la sangre portal (o
despus de la circulacin sistmica) y son tomados por los
hepatocitos.Un receptor de unin para VHA en nonliver clulas de
primates se ha caracterizado21,77,131;sin embargo, la relacin
de esta clase I glicoprotena de membrana integral de mucina-como a
la absorcin de hepatocitos del virus no est claro.Una vez HAV se ha
replicado en el hgado y ha liberado en la bilis (ver ms abajo), el ciclo
enteroheptico de la captacin y transferencia gastrointestinal para el
hgado podra continuar hasta neutralizantes o otros anticuerpos
interrumpieron el ciclo.
ReplicacinLa evidencia actual indica que la replicacin del VHA es
probablemente exclusiva a los hepatocitos y las clulas epiteliales
gastrointestinales en vivo, aunque la infeccin del cultivo celular y la
replicacin en lneas celulares nonhepatocyte estn bien
documentados115.Protenas del virus codificado por replicar el
genoma de ARN a travs de un intermedio de cadena negativa y ellos
mismos son sintetizados a partir de la cadena positiva del
genoma.Viriones intactos contienen el genoma de ARN, la protena
VPg unido covalentemente, y una cpside de las protenas de la
cubierta VP1, VP2, VP3 y con simetra icosadrica.Las partculas de
virus aparecen en la bilis y la sangre, presumiblemente de ser
liberado a travs de la membrana de los hepatocitos apical en el
canalculo biliar y travs de la membrana basolateral en el torrente

sanguneo.El mecanismo de liberacin viral y la secrecin es

desconocida, pero claramente no depende de la destruccin de las
clulas, ya que los ttulos virales altos estn presentes en las heces
antes de que haya evidencia de necrosis de hepatocitos51,
139,245.
HAVdeteccinse visualiza primero despus de la agregacin de la
materia fecal con suero que contiene anticuerpos homlogos
especficos78.La materia fecal se recogi de Joliet voluntarios
prisin34inoculadas con la cepa MS-1 del virus de la hepatitis
caracterizado por Krugman y sus colegas138.A continuacin se
utiliz la tcnica de microscopa electrnica inmune de las heces para
el ensayo de anticuerpos especficos anti-VHA en el suero de la fase
convaleciente despus de los episodios de hepatitis de origen natural
y para investigar la transmisin del virus67,70.HAV ahora se puede
detectar mediante una variedad de tcnicas inmunolgicas y
moleculares, incluyendo el radioinmunoensayo (RIA), DNA-RNA de
hibridacin245, y PCR transcriptasa amplificacin (RT-PCR)
inversa.Amplificacin por RT-PCR se utiliz para identificar cepas
virales especficos implicados en la transmisin parenteral de
virus7,159.
INMUNOLOGA
La inmunologa de la hepatitis A es importante por dos razones. En
primer lugar, las pruebas de diagnstico especficas para la
confirmacin de HAV como el agente etiolgico dependen de la
produccin de anticuerpo por la respuesta inmune humoral (ver
abajo). La respuesta inmune humoral tambin lleva al desarrollo de
complejos inmunes circulantes 160 , 248 con los sntomas y signos
asociados en algunos pacientes 122 , 123 . En segundo lugar, el
aclaramiento de la infeccin viral y las manifestaciones de la
enfermedad asociados con este proceso es casi seguro producido por
la respuesta inmune celular.
Respuesta inmune humoral de inmunoglobulina M (IgM), los
anticuerpos IgG e IgA dirigidos contra eptopos conformacionales
sobre la partcula HAV son inducidos y por lo general puede ser
detectada por la aparicin de la enfermedad clnica 228 . Adems, los
niveles totales de IgM a menudo son elevados en la hepatitis A aguda
de la infeccin (28 de 33 casos [85%]), pero no en la infeccin de
hepatitis B aguda (3 de 24 casos [13%]) 175 . La respuesta de la
hepatitis-A IgM especfica se limita a la infeccin inicial, excepto en
casos raros y por lo tanto se convierte en un marcador til de la
enfermedad aguda. IgA tambin se produce durante un perodo de
tiempo limitado. Su papel en la inmunidad es incierto. En teora, si
anticuerpos tales como IgA de secrecin fueron transportados en el
tracto intestinal, a continuacin, la circulacin enteroheptica de las
partculas virales podra ser interrumpido mediante la neutralizacin
del virus. En la hepatitis experimental y naturalmente adquirida A, sin
embargo, los anticuerpos neutralizantes se encuentran con poca
frecuencia en los extractos fecales 229 . Por el contrario, otro
picornavirus, el virus de la polio, intestinal y provoca salival efectiva

anticuerpos neutralizantes 229 . La respuesta de IgG al VHA se

retrasa en comparacin con las respuestas de IgM e IgA, pero es de
larga duracin y es responsable de la resistencia a la reinfeccin. En
una tribu amerindia aislada, anticuerpo anti-VHA estuvo presente en
todas las personas mayores de 50 aos, pero en nadie ms
joven 31 . Esta observacin sugiere que los miembros de la tribu no
haban sido expuestos al VHA durante 50 aos y que IgG anti-VHA
persisti durante ese periodo de tiempo y sin necesidad de exposicin
adicional. La prdida de anticuerpo detectable despus de la
inmunosupresin para el trasplante de rganos puede ocurrir 19 . Si
esto representa riesgo de infeccin de repeticin no se ha
documentado.
Los anticuerpos son generalmente dirigidos contra protenas de la
superficie. Las protenas de la cpside VP1 y VP3 y la protena
precursora VP0 pueden ser reconocidos 256 . Casi todos los pacientes
expresaron ambos anticuerpos IgG e IgM para VP1. La respuesta de
IgG para VP3 fue detectable durante aos despus de la resolucin de
la enfermedad 256 . Tambin se inducen anticuerpos frente a
protenas no estructurales. A pesar de que son menos abundantes y
carecen de actividad neutralizante, se producen en la mayora de los
individuos al principio de la infeccin 210 . La deteccin de
anticuerpos que reconocen P2 permite la diferenciacin entre la
infeccin (anticuerpos presentes) y la vacunacin (sin anticuerpos)
como fuentes de determinantes antignicos 210 .
Respuesta inmune celular Los cambios patolgicos descritos
anteriormente se consideraron inicialmente para ser secundaria a la
infeccin viral por s solo. Sin embargo, grandes cantidades de virus
infeccioso se producen en el hgado y se excreta en las heces antes
de la aparicin de cualquier enfermedad reconocible heptica 51 ,
139 , 245 . Adems, HAV no es directamente citopticos en cultivo
celular, sino ms bien se asocia con una infeccin persistente sin
lesin de las clulas 115 , 201 . En conjunto, estas observaciones
condujeron al reconocimiento de la lesin inmune mediada como la
explicacin ms plausible para la inflamacin heptica. Consistente
con esta hiptesis es la observacin de que los linfocitos citotxicos
aislados de pacientes con hepatitis aguda A autlogo infeccin lisan,
las clulas diana infectadas con el VHA 83 , 249 . Otras clulas
citotxicas, tales como las clulas asesinas naturales, tambin
pueden estar involucrados 83 , 142 . Su papel puede ser limitada, ya
que carecen de especificidad antignica. En general, por lo tanto, la
hepatitis A y hepatitis B son similares no slo en sus manifestaciones
clnicas sino tambin en el mecanismo que subyace a su produccin,
el de reconocimiento de clulas T citotxicas y la destruccin de las
clulas infectadas por virus.
http://cmr.asm.org/content/14/1/38.full
. ElgenomadelaHAVesdeaproximadamente7,5kb,secomponedeunaregin
altamenteconservadaextremo5'notraducida(NTR)ytieneunaprotenadelvirus
unidocovalentementeespecfico(Vpg)enlugardeunaestructuradetapa(Weitzetal.,
1986). Latraduccinseproduceenunpatrndetapaindependientebajoelcontrolde

unsegmentodeentradaderibosomainternodentrodelNTR5'(Brownetal.,1991). El
extremo3'NTRtieneunacolapoliA(Cohenetal.,1987),yelrestodelgenomase
componedeunnicomarcodelecturaabiertoquesetraduceapoliprotenagrande
nica. Lapoliprotenaseescindeposteriormenteporunaproteasaviralquedacomo
resultadolaproduccindecuatroprotenasdelacpsideyalgunasprotenasno
estructurales(Schultheissetal.,1994).
Genoma y las protenas del virus de la hepatitis A
Genoma del virin consiste en positivo de cadena
ARN que es de aproximadamente 7,5 kb de longitud. Ah
son regiones no traducidas (NTR) en ambos extremos
del genoma viral. El extremo 5 'altamente conservado
NTR se extiende sobre 10% del genoma total y es
unido covalentemente a la protena viral, VPg (2.5kD)
(Brown et al, 1991;. Melnick, 1992). En el otro
lado, el extremo 3 'termina con un poli (A) de la cola de 40
80 nucletidos. Un marco de lectura abierto individual (ORF)
que codifica una nica poliprotena de 2227 aminocidos,
se divide en tres regiones funcionales denominan P1, P2
y P3. P1 codifica para los polipptidos que son
despus de la traduccin procesado en la cpside, mientras
P2 y P3 codifican los polipptidos no estructurales
que estn asociados a la replicacin (Totsuka y
Moritsugu, 1999). Tanto las protenas de la cpside del virin
VP1 a VP4 y las protenas no estructurales se generan
de la poliprotena por una serie de proteasa viral
(3Cpro) de escisin (Toyoda et al, 1986;. Sommergruber
et al., 1989).
http://www.ifrj.upm.edu.my/16%20(4)%202009/01%20IFRJ-2009101%20Abbie%20Malaysia%20done%20Rev%20Article%204th
%20proof.pdf

Inicio GAR

Operaciones de Alerta y Respuesta

enfermedades

Alerta de ataques Global y la Red de Respuesta

Reduccin de los riesgos biolgicos

Hepatitis A
El HAV hepatitis A virus
-Propiedades fsico-qumicas y Morfologa
-Genoma y protenas
-La antigenicidad
-Estabilidad
VHA, identificada por primera vez en 1973, es un sin envoltura, esfrica,
ARN de cadena positivadel virus, que se clasifica dentro de la hepatovirus
gnero de la familia de los picornavirus.18 21 de 23 de
La infeccin por VHA no conduce a hepatitis crnica o
persistente.18 23 40
,

Cepas del VHA recuperados de regiones muy distantes del mundo

sonantignicamentesimilares.En los seres humanos, un
soloserotipoexiste de HAV.18 21 23 39
HAV se conoce para producir la enfermedad en los seres humanos y los
primates no humanos.In vitro, el tipo salvajeviruses generalmente difcil de
cultivar y noefecto citopticose observa.Cepas atenuadas HAV
adaptadas al cultivo celular se han utilizado para
desarrollarvacunas.18 21 23 40
La infeccin por VHA induce una proteccin de por vida contra la
reinfeccin.
Haga clic aqu para obtener:la imagen de Microscopa Electrnica (EM)
del VHA
Morfologa y propiedades fsico-qumicas
HAV se encuentra entre el ms pequeo y estructuralmente ms simple de
los ARN de animalesvirus.
Elvirines sin envoltura y, con un dimetro de 27 a 32 nm, se compone en
su totalidad de viralde protenasy ARN.La microscopa electrnica (EM)
analiza partculas muestran con simetra icosadrica, aunque no hay detalles
estructurales se podan discernir.Morfolgicamente, HAV partculas son
indistinguibles de otros picornavirus.18 22 40
Completovirionestienen una densidad de flotacin de 1,32 - 1,34 g /
cm en CsCl y un coeficiente de sedimentacin de 156 -. 160 S en
soluciones de sacarosa neutros18 21
Vacoscpsides, abundante en las heces recogidas durante la infeccin
temprana, banda a 1.20 y 1.29 a 1.31 g / cm 3, con coeficientes de
sedimentacin que van desde 50 S a 90 S, predominantemente 70 S. 18 21
Genoma y protenas
La hepatitis A genoma consiste en una lineal, de cadena simple, ARN de
sentido positivo de aproximadamente 7,5 kb que contiene una regin 5 'no
traducida con estructura secundaria y terciaria compleja. 18 21 22 40
El extremo 5 'representa una regin no codificadora (NCR) que se extiende
ms de 10% del genoma, es destapado y unido covalentemente a la
viralprotenaVPg (2,5 kD).18 21 22 40
Una gran poli solaprotenase expresa a partir de un marco de lectura
abierto grande extiende a travs de la mayor parte del ARN genmico. Este
poliprotenase escinde posteriormente por una proteasa viral (3C pro) para
formar tres (posiblemente cuatro)de la cpsideprotenasy varios no
estructuralesprotenas.18 21 23 40
El extremo 3 'termina con un poli (A) de la cola de 40 -. 80
nucletidos18 22
,

, 40

18

Hepatitis Acpsidescontienen 60 copias de VP1 (30 a 33 kD), VP2 (24 a

30 kD) y VP3 (21 a 28 kD).Las partes expuestas de VP1 (residuos Ser102 y
Ser114) y de VP3 (Asp70 residuos) en lacpsidesuperficie de definir la
conformacininmunodominanteantignicasitio del VHA.18 22 23 40
Las secuencias para los aislados conocidos HAV humanos son muy
similares incluso cuando orgenes geogrficos y temporales estn muy
separadas, sin embargo, siete distintosgenotiposse han identificado hasta
la fecha.
HAV replicacin genmica se produce exclusivamente en el citoplasma de
los infectadosde hepatocitospor un mecanismo que implica una ARN
polimerasa dependiente de ARN.
antigenicidad
HAV tiene slo un conocidoserotipo, y un sitio de neutralizacin
esinmunodominante.Las diferentes cepas virales muestran reactividad
similar amonoclonalanti-HAVanticuerpos.18 22 39 40
Los antgenosde la intactavirinson conformacional y diferentes de las de
aisladosde protenas.Los anticuerpospara purificarla
cpsideprotenaso sintticospptidosno tienen actividad neutralizante
detectable dbil o.18 23
VHA se neutraliza por tanto anti-VHAIgGy anti-VHAIgM.
No serolgica o la hibridacin de reactividad cruzada entre HAV y otros
agentes de la hepatitis virales, incluyendo hepatitis E virus(HEV), se han
observado.18 22
Los no estructuralesprotenasde HAV son
tambininmunognicosdurante las infecciones naturales y
experimentales.
http://www.who.int/csr/disease/hepatitis/whocdscsredc2007/en/index2.htm
l
Diagramas estreo que muestran las estructuras de las protenas de la cpside
VP1, VP2 y VP3, respectivamente. La columna vertebral C se muestra como
una lnea delgada, la N y C terminales estn etiquetados, cada residuo 10a
est marcado con una pequea esfera y cada 20a est numerada. D, VP1 se
produce inicialmente con una extensin de 8 kDa C-terminal ( conocido como
PX) nica para el VHA entre los picornavirus. PX se escinde de la partcula
completa por una proteasa host desconocido. De acuerdo con los datos
mostrados en Extended Data Fig. 1 y los mapas de densidad de electrones, las
partculas que hemos analizado no contienen PX, pero si estuviese presente
esperaramos que su curso para iniciar en las posiciones de color prpura (C
termini de VP1) en la superficie del virus.
http://www.nature.com/nature/journal/v517/n7532/fig_tab/nature1380
6_SF2.html
,

18

21

18

Hepatitis A Virus de la cpside VP1 de la protena tiene un heterogneo C

Siguiente Seccin
ABSTRACTO
Hepatitis A (VHA) codifica una nica poliprotena que se procesa
despus de la traduccin en las protenas estructurales y no
estructurales funcionales.Slo una proteasa, la proteasa 3C viral, se
ha implicado en los nueve escisiones de protenas.El procesamiento
de la regin precursora protena de la cpside genera un nico
intermedio, PX (VP1-2A), que se acumula en las clulas infectadas y
se supone que servir como precursor para VP1 encontrado en
viriones, aunque no se han determinado los detalles de esta
reaccin.La coexpresin en clulas transfectadas de una variedad de
protenas precursoras P1 con 3C proteasa viral demostr la
produccin eficiente de PX, as como VP0 y VP3;sin embargo, no se
detect protena VP1 maduro.Para identificar el residuo de
aminocido C-terminal de HAV VP1, se realiz anlisis de la secuencia
del pptido por la proteasa catalizada por [18 O] H 2 O incorporacin
seguido de cromatografa lquida de iones trampa microaspersin
espectrometra de masas tndem de HAV VP1 aislado a partir de
viriones purificados.Dos cepas adaptadas cultura diferente de clulas
de VHA, cepas HM175pE y HM175p35, se utilizaron para estos
anlisis.Preparados VP1 de virus tanto aislamientos contenan termini
C heterogneo.El predominante C-terminal de aminocidos en ambas
preparaciones de virus era VP1-Ser274, que se encuentra el terminal
N a un residuo de metionina en VP1-2A.Adems, el anlisis de
HM175pE recuper cantidades ms pequeas de aminocidos de VP1
Glu273 y VP1-Thr272.En el caso de HM175p35, que contiene valina
en la posicin del aminocido VP1-273, VP1-Thr272 se ha encontrado
adems de VP1-Ser274.Los datos sugieren que HAV 3C no es la
proteasa responsable de la generacin del terminal C
VP1.Proponemos la participacin de la proteasa (s) de la clula
husped en la produccin de HAV VP1.
La hepatitis A (VHA) es el nico miembro
delgneroHepatovirusdentro de la familiaPicornaviridae.La cpside
del VHA encierra un genoma de ARN monocatenario de
aproximadamente 7,5 kb que se traduce en una nica
poliprotena.Las protenas del virin VP1 a VP4 y las protenas no
estructurales se generan a partir de la poliprotena por una cascada
de escisiones proteolticas.Aunque la estrategia general de la
replicacin del virus y la mayora de las protenas virales se conserva
entre todos los picornavirus, incluyendo HAV, los detalles de la
poliprotena de escisin difieren considerablemente entre los
diferentes gneros picornavirus.Por ejemplo, en los enterovirus y
rinovirus, la escisin primaria que libera el precursor de la protena
estructural est mediada por la proteasa 2A en la unin VP1 / 2A
(40,44).Poliprotenas Cardiovirus se someten a una reaccin
autocataltica intramolecular causada por enlaces peptdicos tensas
en las secuencias que rodean la unin 2A / 2B escindible, seguido de
la escisin mediada por 3C entre VP1 y 2A (28).Una reaccin similar

se produce en aftovirus, cuya 2A regin de codificacin se compone

de solamente una secuencia homloga 16-amino-cido a la terminal C
del gen cardiovirus 2A (35).En el VHA, proteasa viral 3C (3Cpro) se ha
notificado a ser responsable de todas las escisiones de protenas
(37,38);la protena 2A tiene ninguna funcin proteoltica inherente
ni cataltica (19,22).La escisin primario para liberar la protena de
la cpside a partir de la poliprotena HAV est mediada por 3C entre
2A y 2B en los aminocidos Gln836 y Ala837 (25).3C tambin es
responsable de la escisin dentro de las protenas estructurales entre
VP3 / VP2 y VP2 / VP1 (24).Este procesamiento de la regin
precursora protena de la cpside del VHA genera un nico 38- a 40kDa intermedio, PX (VP1-2A) (1), que se piensa para producir
posteriormente VP1.Aunque se han presentado pruebas de que
3C podra catalizar la escisin de un pptido que contiene
secuencias de VP1-2A (37), los detalles de la formacin de VP1 su
presunta precursor no se han dilucidado, y los aminocidos terminales
de los productos de VP1 y 2A resultantes tienen no se han
identificado bioqumicamente.Un sitio de escisin en VP1-300 residuo
de aminocido fue propuesto inicialmente por anlisis de secuencias
de alineacin (8), que result ser incorrecto (14).Basado en la
suposicin de que 3C es la proteasa responsable de la escisin dentro
de la secuencia VP1-2A, se propusieron varios sitios potenciales de
escisin 3C.Modelizacin de la estructura de la protena VP1, la
alineacin de secuencia con otras protenas de la cpside
picornaviral, y / o movilidades comparativas de protenas
recombinantes de secuencia conocida favoreci VP1 residuos de
aminocidos Glu273 / Ser274 como el sitio probable de escisin de 3C
(14,31).Sin embargo, no se ha ofrecido explicacin de las mltiples
protenas inmunorreactivas anti-VP1 con masas moleculares (de 29 a
36 kDa) intermedias entre las de VP1-2A y VP1 que se observan en
las clulas infectadas por el VHA-(1,7,45).Algunas diferencias en
los patrones y / o cantidades relativas de estos productos se han
detectado, presumiblemente dependiendo de la cepa HAV y la clula
husped (14).Dudas adicionales se plantearon para las cepas de
HAV que contienen una sustitucin de Glu a Val en el sitio de escisin
de VP1 / 2A favorecida, dando como resultado un sustrato Val / Ser
muy improbable para HAV 3C (21,30).
Hemos tratado de determinar la secuencia C-terminal de HAV VP1
mediante el uso de anlisis de la secuencia del pptido por la
proteasa catalizada por [18O] H O incorporacin seguido de
cromatografa lquida de iones trampa microaspersin espectrometra
de masas tndem (LC-MS / MS) de purificado VHA VP1.La tcnica
implica la incorporacin de O en todos los grupos a-carboxi liberado
durante la hidrlisis parcial catalizada por la enzima de la protena,
seguido por MS para identificar el pptido C-terminal como el nico
pptido que no incorpora ningn O (33,34,36,41,46).La
aplicacin de este enfoque LC-MS / MS ha llevado a la identificacin
con xito y anlisis de secuencias de los pptidos C-terminal de VP1
HAV.Curiosamente, nuestros anlisis indican la presencia de una
mezcla de molculas de VP1 en los viriones maduros hepatitis A, que
pro

pro

pro

pro

18

18

contiene residuos de aminocidos consecutivos de VP1-274 a VP1-272

como C
representacin chematic de constructos HAV subgenmicos utilizados
para examinar el corte de la protena de la cpside mediada por HAV
3C. Los constructos codifican diversas longitudes de secuencias de
protenas HAV hasta la posicin de nucletido se indica a la derecha
de cada diagrama de HAV, aguas abajo de la EMCV IRES. Todos los
plsmidos contienen un promotor de la ARN polimerasa T7 aguas
arriba de la secuencia EMCV. La masa molecular predicha (MW) de
cada protena sin escindir se indica a la derecha. Un diagrama de la
poliprotena HAV se muestra en la parte superior para la comparacin.
DISCUSIN
La mayor parte de las divisiones que generan las protenas
funcionales HAV de sus precursores de poliprotena han sido
identificados y estn mediados por la proteasa 3C viral.La escisin
primario de la poliprotena HAV se produce entre 2A y 2B (25), y PX
(VP1-2A) se acumula como una protena principal intermedio (1).El
proceso mediante el cual se libera de VP1 PX todava no est claro.No
se ha observado actividad autocataltica de 2A.Demostracin de que
3C podra catalizar la escisin de un pptido que contiene
secuencias de VP1-2A in vitro proporcionan apoyo a la suposicin
general de que 3C, la nica proteasa viral identificado, mediada la
liberacin de VP1 de PX (37,38).Sobre la base de esa suposicin, se
predijo un sitio de escisin probable entre los residuos Glu273 y
Ser274 de VP1 (14,31), aunque nunca confirmada
bioqumicamente.La proteasa HAV 3C muestra alta especificidad para
un residuo de glutamina seguido de un residuo de aminocido
pequeo (30).La sustitucin de Gln por Glu, como se ha propuesto
para la unin VP1 / 2A, se prev para formar un sustrato que va a ser
escindido por HAV 3C, aunque muy mal (3).De hecho, la existencia
de cepas de HAV con una sustitucin de Glu273 Val plante preguntas
acerca de la idoneidad de Val / Ser como un enlace escindible por
3Cpro;Estudios posteriores demostraron que se puede escindir de
manera menos eficiente por 3C in vitro (31).No hay diferencias
aparentes en las tasas de replicacin de virus o patrones de protenas
entre las diferentes variantes.Adems, la observacin de una serie de
protenas intermedios en la movilidad entre PX y VP1 que estn
presentes en las clulas infectadas se mantuvo sin explicacin por el
modelo de que la escisin de PX 3C-mediada generado VP1.
En el presente estudio, la coexpresin de varias protenas precursoras
de la cpside del VHA con HAV 3C o protenas totales P3 no pudo
efectuar la escisin en la unin VP1 / 2A, aunque se detect
fcilmente la produccin de VP0 y VP3.Estos resultados fueron
consistentes con estudios previos en nuestro laboratorio que
examinaron escisiones despus de la traduccin in vitro de
construcciones de HAV (23), pero parecan contradecir resultados de
los estudios realizados por otros (31,38).Durante la infeccin por
virus, la escisin de PX parece ocurrir solamente bastante tarde en la
pro

va de la morfognesis de las partculas de virin (1,4,6,47);Por lo

tanto, el procesamiento de VP1-2A que se produce en las clulas
infectadas podra requerir una conformacin ensamblada de sustrato,
y las reacciones modelo estudiado in vitro o en clulas transfectadas
no puede imitar la reaccin biolgica relevante.
La identificacin del aminocido C-terminal (s) de protenas sigue
siendo una de las tareas ms difciles en bioanalyses.Qumica Cterminal anlisis de la secuencia anloga a la anlisis de la secuencia
N-terminal de la protena (degradacin Edman) se ha intentado por un
nmero de aos (2).Sin embargo, el enfoque tiene varias
desventajas, incluyendo el hecho de que ciertos aminocidos no
pueden ser identificados y que se requieren grandes cantidades de
protena.Los intentos anteriores para secuenciar el extremo C de VHA
VP1 utilizando el mtodo qumico fallado (resultados no
publicados);En retrospectiva, dificultades eran probablemente debido
a la heterogeneidad C-terminal y la consiguiente carga de la muestra
insuficiente.Otra estrategia para revelar la secuencia C-terminal de
un polipptido es el uso de proteasas-carboxi terminal especfico en
combinacin con el anlisis de espectro de masas (29).Aunque este
es un enfoque razonable sensible para el C-terminal anlisis de la
secuencia de pptidos puros o protenas ms pequeas,
generalmente es inadecuado para las biomolculas ms grandes y
molculas en mezclas.Adems, ciertos aminocidos son resistentes a
carboxi-terminal proteolisis catalizada por carboxipeptidasas.Tambin
se intent anlisis espectral de masas de VP1 intacta VHA virin;la
resolucin del anlisis de masas no era suficiente para determinar las
masas individuales de las especies individuales de la protena.La
heterogeneidad de la terminal C, adems de la oxidacin parcial de
posiblemente todos los residuos de metionina contribuido a la
dificultad en la determinacin de la masa (s) de la protena completa.
Por lo tanto, se establecieron en una caracterizacin bioqumica de
VP1 productos de escisin para la identificacin de la terminal C de
HAV VP1 a partir de viriones purificados por LC-MS / MS despus de la
hidrlisis proteoltica parcial en presencia deagua Oenriquecido.Este enfoque identificado con xito los residuos de
aminocidos carboxi-terminales finales de molculas de VP1 que
estn presentes en los virus maduros.
La proteasa catalizada por [18O] H O incorporacin seguida por LCMS / MS y la identificacin de secuencias de pptidos representa una
alternativa adecuada a los mtodos mencionados anteriormente. A
travs de la aplicacin de microaspersin LC-MS / MS, las cantidades
de protena en el rango de femtomol se vuelven susceptibles de
anlisis C-terminal.La sensibilidad de este enfoque, que se demuestra
por el hecho de que tres diferentes pptidos C-terminal de VP1
pudieron ser identificados en el caso de HM175pE, es superior. Todos
los pptidos terminales se encontraron en sus formas no oxidado y
oxidado, resultando en la presencia de seis pptidos Cterminales.Adems, la muestra de protena no necesita ser altamente
purificada, siempre y cuando se resuelve como una nica banda en
un gel de SDS-poliacrilamida.En los casos en los que se conoce la
18

secuencia completa de la protena de inters, el anlisis puede

llevarse a cabo con mezclas, as, ya que slo los pptidos de
estructura conocida se examinarn para O incorporacin.El pptido
relevante que no muestrala incorporacin O rpidamente se puede
seleccionar de los pptidos restantes.
El anlisis LC-MS / MS identific una mezcla de tres pptidos Cterminales derivados de HAV HM175pE, que contena tres
aminocidos consecutivos, VP1-Thr272, VP1-Glu273, y VP1-Ser274,
como residuos C-terminales de HAV VP1.El anlisis de HAV
HM175p35, que contiene Val en la posicin VP1-273, identific dos
pptidos C-terminales con VP1-Thr272 y Ser274 de VP1 como
aminocidos C-terminales.En ambos casos, la especie predominante
de VP1 terminados con Ser274, que es un residuo de aguas abajo del
sitio de escisin de 3C previamente predicha.Estos resultados hacen
que sea muy poco probable que 3C era responsable de generar el
extremo C terminal de VP1, desde Ser274 / Met275 no tiene
propiedades de un sustrato de escisin de 3C y la proteasa viral no se
conoce para producir extremos heterogneos.
Proponemos que 3C escinde la poliprotena del VHA en el cruce 2A /
2B para dar P1-2A y, posteriormente, en el cruce VP3 / VP1 para
generar VP1-2A, que participa en el montaje de eventos
iniciales.Durante la formacin de partcula de virus, las proteasas
celulares pueden recortar secuencias 2A a partir del precursor para
generar una serie de molculas que contienen VP1.El sustrato preciso
para el recorte no se conoce.Las personas que se someten suficiente
recorte (a Ser274) parece acumularse partculas de viriones como
estables.Recorte de la C-terminal de VP1 por proteasas celulares se
ha informado anteriormente para Mengovirus (5).Tras 3C escisin
en una unin Glu / Ser, tres residuos de aminocidos se eliminan
durante el ensamblaje del virus, generando Leu274 como el trmino C
de la VP1 Mengovirus maduro.
18

18

pro

pro

pro

Los datos presentados aqu en los residuos de aminocidos C-terminal

heterogneas de molculas de HAV VP1 en cpsidas de virus maduros
no proporcionan informacin directa sobre el mecanismo de
procesamiento o la enzima (s) responsable de generar el extremo C
terminal de VP1.Los datos hacen, sin embargo, descartan la unin
Glu273 / Ser274 previamente predicha como una unin de escisin
que genera VP1, desde el residuo Ser274 todava est presente en la
mayora de las molculas de VP1 del virin
http://jvi.asm.org/content/73/7/6015.full
nucleocpside

Figura 1: La cpside del VHA es icosadrica en forma.

La hepatitis viral es causada por una variedad de virus;procedentes

cada uno de las diferentes familias virales.VHA se diferencia de otras
cepas de hepatitis porque es un miembro de la familia de los
picornavirus.Los picornavirus son virus pequeos, no envueltos, en
forma de icosaedro que contienen una sola cadena de ARN.Un
icosaedro es una figura de 3 dimensiones con 20 caras parecido a un
baln de ftbol.La estructura viral se describe ms adelante.
cpside

Figura 2: La cpside del virus est hecho de subunidades

llamadas protmeros.Cada protmero est hecho de tres
protenas.

La cpside del VHA se compone de subunidades

llamadas capsmeros,como se muestra en la Figura 2. Cada
capsomere se compone de cinco protmeros.Cada protmero de HAV
est hecho de tres protenas;VP1, VP2, y VP3, que tienen un papel en
la entrada en la clula.
genoma

Figura 3: El genoma de HAV es una sola cadena de ARN que se divide en

tres secciones.

El genoma del VHA es de sentido positivo, ARN de cadena simple,

escrito como ss ARN (+).Debido a que el virus es ARN de sentido
positivo, que puede ser utilizado como ARNm y se convierte
(traducido) en la protena al entrar en la clula.El genoma tiene una
VPg protena adjunto que acta como cebador para la copia del
genoma (replicacin).
Como se muestra en la figura 3, el genoma se divide en tres
segmentos: P1, P2, y P3.El primer segmento codifica genes para
producir protenas de la cpside.Los otros dos segmentos hacen otros
genes necesarios para la replicacin.
http://study.com/academy/lesson/hepatitis-a-virus-structure-andfunction.html
HAVCR1 Hepatitis A 1 receptor celular (HAVcr-1)
favorito de la etiqueta
La protena tambin conocido como: inmunoglobulina de clulas T y
de mucina dominio que contienen protenas 1 (TIMD-1).
Gen: HAVCR1
Apellido: Inmunoglobulina TIM

Pueden desempear un papel en el desarrollo de clulas T

cooperadoras y la regulacin de asma y enfermedades
alrgicas. Receptor para TIMD4 (Por similitud). Pueden desempear
un papel en la lesin renal y reparacin.
(Infeccin microbiana) acta como un receptor para el virus de
hepatitis A (PubMed 9.658.108 ). Acta como un receptor para el virus
bola y Marburg virus por expuesto fosfatidil-serina de unin en la
superficie de membrana del virin (PubMed 21536871 ). Acta como
un receptor para el virus de Dengue por expuesto fosfatidil-serina de
unin en la superficie de membrana del virin (PubMed 23084921 )
http://www.nextprot.org/db/entry/NX_Q96D42
Hepatitis A (VHA) codifica una nica poliprotena que se procesa
despus de la traduccin en las protenas estructurales y no
estructurales funcionales. Slo una proteasa, la proteasa 3C viral, se
ha implicado en los nueve escisiones de protenas. El procesamiento
de la regin precursora protena de la cpside genera un nico
intermedio, PX (VP1-2A), que se acumula en las clulas infectadas y
se supone que servir como precursor para VP1 encontrado en
viriones, aunque no se han determinado los detalles de esta
reaccin. La coexpresin en clulas transfectadas de una variedad de
protenas precursoras P1 con 3C proteasa viral demostr la
produccin eficiente de PX, as como VP0 y VP3; sin embargo, no se
detect protena VP1 maduro. Para identificar el residuo de
aminocido C-terminal de HAV VP1, se realiz anlisis de la secuencia
del pptido por la proteasa catalizada por [ 18 O] H 2 O incorporacin
seguido de cromatografa lquida de iones trampa microaspersin
espectrometra de masas tndem de HAV VP1 aislado a partir de
viriones purificados. Dos cepas adaptadas cultura diferente de clulas
de VHA, cepas HM175pE y HM175p35, se utilizaron para estos
anlisis. Preparados VP1 de virus tanto aislamientos contenan termini
C heterogneo. El predominante C-terminal de aminocidos en ambas
preparaciones de virus era VP1-Ser274, que se encuentra el terminal
N a un residuo de metionina en VP1-2A. Adems, el anlisis de
HM175pE recuper cantidades ms pequeas de aminocidos de VP1
Glu273 y VP1-Thr272. En el caso de HM175p35, que contiene valina
en la posicin del aminocido VP1-273, VP1-Thr272 se ha encontrado
adems de VP1-Ser274. Los datos sugieren que HAV 3C no es la
proteasa responsable de la generacin del terminal C
VP1. Proponemos la participacin de la proteasa (s) de la clula
husped en la produccin de HAV VP1.
En el VHA, proteasa viral 3C (3C pro ) se ha notificado a ser responsable
de todas las escisiones de protenas ( 37 , 38 ); la protena 2A tiene
ninguna funcin proteoltica inherente ni cataltica (19 , 22 ). La
escisin primario para liberar la protena de la cpside a partir de la
poliprotena HAV est mediada por 3C pro entre 2A y 2B en los
aminocidos Gln836 y Ala837 ( 25 ). 3C protambin es responsable de
la escisin dentro de las protenas estructurales entre VP3 / VP2 y VP2
/ VP1 ( 24 ). Este procesamiento de la regin precursora protena de
la cpside del VHA genera un nico 38- a 40-kDa intermedio, PX (VP12A) ( 1 ), que se piensa para producir posteriormente VP1. Aunque se

han presentado pruebas de que 3C pro podra catalizar la escisin de un

pptido que contiene secuencias de VP1-2A ( 37 ), los detalles de la
formacin de VP1 su presunta precursor no se han dilucidado, y los
aminocidos terminales de los productos de VP1 y 2A resultantes
tienen no se han identificado bioqumicamente. Un sitio de escisin
en VP1-300 residuo de aminocido fue propuesto inicialmente por
anlisis de secuencias de alineacin ( 8 ), que result ser incorrecto
( 14 ). Basado en la suposicin de que 3C es la proteasa responsable
de la escisin dentro de la secuencia VP1-2A, se propusieron varios
sitios potenciales de escisin 3C.Modelizacin de la estructura de la
protena VP1, la alineacin de secuencia con otras protenas de la
cpside picornaviral, y / o movilidades comparativas de protenas
recombinantes de secuencia conocida favoreci VP1 residuos de
aminocidos Glu273 / Ser274 como el sitio probable de escisin de 3C
( 14 , 31 ). Sin embargo, no se ha ofrecido explicacin de las
mltiples protenas inmunorreactivas anti-VP1 con masas moleculares
(de 29 a 36 kDa) intermedias entre las de VP1-2A y VP1 que se
observan en las clulas infectadas por el VHA-( 1 , 7 , 45 ). Algunas
diferencias en los patrones y / o cantidades relativas de estos
productos se han detectado, presumiblemente dependiendo de la
cepa HAV y la clula husped ( 14 ). Dudas adicionales se plantearon
para las cepas de HAV que contienen una sustitucin de Glu a Val en
el sitio de escisin de VP1 / 2A favorecida, dando como resultado un
sustrato Val / Ser muy improbable para HAV 3C pro ( 21 , 30 ).
Hemos tratado de determinar la secuencia C-terminal de HAV VP1
mediante el uso de anlisis de la secuencia del pptido por la
proteasa catalizada por [ 18 O] H 2 O incorporacin seguido de
cromatografa lquida de iones trampa microaspersin espectrometra
de masas tndem (LC-MS / MS) de purificado VHA VP1. La tcnica
implica la incorporacin de 18 O en todos los grupos a-carboxi liberado
durante la hidrlisis parcial catalizada por la enzima de la protena,
seguido por MS para identificar el pptido C-terminal como el nico
pptido que no incorpora ningn 18 O (33 , 34 , 36 , 41 , 46 ). La
aplicacin de este enfoque LC-MS / MS ha llevado a la identificacin
con xito y anlisis de secuencias de los pptidos C-terminal de VP1
HAV. Curiosamente, nuestros anlisis indican la presencia de una
mezcla de molculas de VP1 en los viriones maduros hepatitis A, que
contiene residuos de aminocidos consecutivos de VP1-274 a VP1-272
como C termini.
http://jvi.asm.org/content/73/7/6015.full
Protena
poliprotena genoma
Gene
N/A
Organismo
la hepatitis A humana genotipo del virus IB (aislar HM175) (HHAV)
(hepatitis A humana del virus (cepa humana / Australia / HM175 /
1976))
Estado

Revisado - puntuacin de Anotacin: - La evidencia experimental a

nivel de protenas i
funcin

Protenas de la cpside VP1, VP2, y VP3 forman una cpside cerrado

que encierra el genoma de ARN de cadena positiva viral. Todas estas
protenas contienen una estructura de lmina beta llamada beta-barril
rollo de gelatina. Juntos forman una cpside icosadrica (T = 3),
compuesto de 60 copias de cada VP1, VP2, y VP3, con un dimetro de
aproximadamente 300 Angstroms. VP1 est situado en los 12 ejes de
cinco veces, mientras que VP2 y VP3 se encuentran en los ejes cuasiseis veces. La cpside interacta con HAVCR1 para proporcionar
unin del virin a la clula diana (por similitud). Por similitud
Protein VP0: precursor VP0 es un componente de procapsids
inmaduros. El dominio N-terminal de VP0, la protena VP4, se
necesita para el montaje de 12 pentmeros en la estructura
icosadrica. A diferencia de otros picornavirus, no parece HAV VP4
ser myristoylated y no ha sido detectada en viriones maduros,
supuestamente debido a su pequeo tamao.
precursor VP1-2A es un componente de procapsids inmaduros y
corresponde a una forma extendida de la protena estructural VP1. El
dominio C-terminal de VP1-2A, 2A protenas, acta como una seal
de montaje que permite pentamerizacin de P1-2A, que es el
precursor de las protenas estructurales. 2A se elimina
proteolticamente de VP1-2A partculas por una proteasa de acogida y
no parece que se encuentran en las partculas maduras.
2B protenas y precursor 2BC afectan a la integridad de membrana y
causan un aumento de la permeabilidad de la membrana.
La protena 2C: Asociados con e induce reordenamientos
estructurales de las membranas intracelulares. Muestra de unin al
ARN, la unin de nucletidos y actividades NTPase (por similitud). Por
similitud
Protein 3A, a travs de su dominio hidrofbico, sirve como anclaje a
la membrana de los precursores 3AB y 3ABC.
El precursor 3AB interacta con el precursor 3CD y con las
estructuras de ARN que se encuentran tanto en el 5'-y 3'-terminales
del genoma viral. Dado que el precursor 3AB contiene el dominio
hidrfobo 3A, es probable que ancla todo el complejo de replicasa
viral a las membranas intracelulares en las que se produce la sntesis
de ARN viral.
El precursor 3ABC est dirigida a la membrana mitocondrial, donde la
proteasa 3C escinde actividad e inhibe los Mavs protenas antivirales
anfitrin, alterando de esta manera la activacin de IRF3 travs de la
va / MDA5 IFIH1. In vivo, la actividad de la proteasa de precursor
3ABC es ms eficiente en la escisin del precursor 2BC que la de 3C

protena. Por consiguiente, el precursor 3ABC puede jugar un papel

en el procesamiento proteoltico de la poliprotena.
Protein 3B est enlazado covalentemente al extremo 5 'tanto de los
ARN genmicos positivos hebra y de cadena negativa. Acta como un
cebador de la replicacin del genoma ligada.
Proteasa 3C: proteasa de cistena que genera protenas virales
maduras a partir de la poliprotena precursora. Adems de su
actividad proteoltica, se une a ARN viral, y por lo tanto influye en la
replicacin del genoma viral. ARN y se unen sustrato de manera
cooperativa para la proteasa. Tambin escinde protenas del husped
tales como PCBP2.
Dirigida por ARN polimerasa de ARN 3D-POL se replica el ARN
genmico y antigenmico mediante el reconocimiento de repeticiones
seales especficas.

La actividad cataltica

nuclesido trifosfato + RNA (n) = difosfato + RNA (n + 1). la escisin

selectiva de Gln | Gly enlace en la poliprotena poliovirus. En otras
reacciones de picornavirus Glu puede ser sustituido por Gln, y Ser o
Thr por Gly.
NTP + H 2 O = NDP + fosfato.

Subcelular localizacin

La protena VP2 :

virin

Anfitrin citoplasma Curated

VP3 Protein :

virin

Anfitrin citoplasma Curated

Protena VP1 :

virin

Anfitrin citoplasma Curated

VP1-2A protena :

virin

Anfitrin citoplasma Curated

2B protena :

Anfitrin membrana de la vescula

citoplasmtica Curada ; protena de membrana
perifrica Curated ; lado citoplsmico Curated
Nota: se localiza probablemente en la superficie de vesculas de la
membrana intracelulares que son inducidas despus de la infeccin
de virus como el sitio para la replicacin del ARN viral. Estas vesculas
se derivan del retculo endoplsmico.
2C Protein :

Anfitrin membrana de la vescula

citoplasmtica Curada ; protena de membrana
perifrica Curated ; lado citoplsmico Curated

Nota: se localiza probablemente en la superficie de vesculas de la

membrana intracelulares que son inducidas despus de la infeccin
de virus como el sitio para la replicacin del ARN viral. Estas vesculas
se derivan del retculo endoplsmico. Pueden asociar con las
membranas a travs de una hlice anfiptica N-terminal.
3ABC protena :

Anfitrin membrana de la vescula citoplasmtica ; protena de

membrana perifrica ; lado citoplsmico

Sede de la membrana externa de la mitocondria ; protena de

membrana perifrica lado citoplsmico
Nota: se localiza probablemente en la superficie de vesculas de la
membrana intracelulares que son inducidas despus de la infeccin
de virus como el sitio para la replicacin del ARN viral. Estas vesculas
se derivan del retculo endoplsmico.
3AB Protein :

Anfitrin membrana de la vescula citoplasmtica ; protena de

membrana perifrica ; lado citoplsmico
Nota: se localiza probablemente en la superficie de vesculas de la
membrana intracelulares que son inducidas despus de la infeccin
de virus como el sitio para la replicacin del ARN viral. Estas vesculas
se derivan del retculo endoplsmico.
Protein 3A :

Anfitrin membrana de la vescula citoplasmtica protena de

membrana perifrica lado citoplsmico
Nota: se localiza probablemente en la superficie de vesculas de la
membrana intracelulares que son inducidas despus de la infeccin
de virus como el sitio para la replicacin del ARN viral. Estas vesculas
se derivan del retculo endoplsmico.
3B Protein :

virin
Proteasa 3C :

anfitrin citoplasma
Dirigida por ARN polimerasa de ARN 3D-POL :

Anfitrin membrana de la vescula citoplasmtica protena de

membrana perifrica lado citoplsmico
Nota: interacta con las membranas en un complejo con 3AB protena
viral. Probablemente se localiza en la superficie de vesculas de la
membrana intracelulares que son inducidas despus de la infeccin

de virus como el sitio para la replicacin del ARN viral. Estas vesculas
se derivan del retculo endoplsmico

Modificacin postraduccional

Escisiones enzimticas especficas por parte de la proteasa viral in

vivo producen una variedad de precursores y protenas
maduras. Intermedios de procesamiento de la poliprotena se
producen, como P1-2A que es un precursor funcional de las protenas
estructurales, VP0 que es un precursor VP4-VP2, precursor VP1-2A,
precursor 3ABC que es un precursor estable y catalticamente activa
de 3A, 3B y protenas 3C, 3AB y 3CD precursores. La 2A seal
conjunto se retira de VP1-2A por una proteasa host. Durante la
maduracin del virin, las partculas no infecciosas se vuelven
infecciosos despus de la escisin de VP0. Esta escisin de
maduracin es seguido por un cambio de conformacin de la
partcula. 9 Publicaciones
VPg se uridylylated por la polimerasa y se une covalentemente al
extremo 5 'del ARN genmico. Esta forma uridylylated acta como un
cebador de nucletidos-pptido para la polimerasa (por similitud). Por
similitud
interaccin

Estructura de la subunidad

precursor 3AB es un homodmero. precursor 3AB interacta con

precursor 3CD. La protena 3ABC interacta con MAVS humana
http://www.uniprot.org/uniprot/P08617#PRO_0000308970
protena de la membrana Human Tim-3 facilita hepatitis A la entrada del
virus en las clulas diana.
En Este estudio, el UNA PROTENA de membrana de la superficie
celular de la inmunoglobulina (Ig) Superfamilia (IgSF) se identific A
partir de Una clula dendrtica de la biblioteca de ADNc humano (DC)
por secuenciacin al azar un gran escala, Que es identica a la ya se
ha Informado Tim-3 (de Clulas T Ig Y Que Contiene mucina-DominioMolcula 3). Los Datos Recientes de han Sugerido La Asociacin de la
281-residuo de ratn Tim-3 Molcula con las respuestas de Clulas T
relacionadas con Th1 y La Enfermedad en Ratones. Tim-3 humana es
Un tipo 301-I residuo protein de membrana Cuya regin extracelular
Contiene ONU Dominio rico bao Cys similares a Ig y Un Dominio de
mucina, las Caractersticas de las proteinas Tim. Se Muestra Una
homologa Significativa con la hepatitis humana A (VHA) celular del
receptor-1 (HuHAVcr-1) / Tim-1. ARNm humano Tim-3 FUE Muy
expresado en monocitos o Clulas Derivadas de monocitos, y El Nivel
de Expresin disminuy CUANDO DC se someti a maduracin y
activation. No hay ningn report anterior Sobre las Funciones
biolgicas de origen humano Tim-3, especialmente la Participacin en

la Infeccin por el virus. HEMOS demostrado Que Las Clulas HeLa,

hijo Que refractarias a por Infeccin La VHA, adquirieron Una
susceptibilidad limitada al VHA Infeccin Despues De Que
sobreexpresan de forma estable Tim-3 humana Tal Como se confir por
Anlisis de transferencia de Western Usando anticuerpo anti-Tim- 3,
Pero la protein de fusin Tim-3-Fc tenian Ninguna Actividad directa de
Unin-VHA. Los Resultados indicaron Que Tim-3 humana PUEDE
PROMOVER La Entrada VHA en las Clulas diana, Pero En Si No Puede
funcionar Como un receptor celular de VHA.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16685421
La replicacin de virus de hepatitis A (HAV) en clulas cultivadas es
ineficiente y difcil de estudiar debido a su ciclo prolongado y
generalmente no citoptico. Para obtener una mejor comprensin de
los mecanismos implicados, se construy un replicn subgenmico
HAV mediante la sustitucin de la mayor parte de la secuencia de
codificacin de la cpsida P1 a partir de una copia de ADNc infeccioso
de la cultura-adaptado HM175 / 18f genoma del virus de la clula con
la secuencia que codifica la luciferasa de lucirnaga. La replicacin de
este ARN en las clulas Huh-7 transfectadas (derivada de un
carcinoma hepatocelular humano) condujo a un aumento de
expresin de luciferasa en relacin con la de las clulas transfectadas
con transcritos de ARN similar que contiene una mutacin de
terminacin prematura letal en 3D pol (ARN polimerasa). Sin embargo,
la replicacin no se pudo confirmar en clulas FrhK4 o clulas BSC-1,
las clulas que se utilizan normalmente para la propagacin de
HAV. La replicacin era sustancialmente ms lento que el observado
con replicones derivadas de otros picornavirus, como la actividad
luciferasa basal producido por la traduccin de ARN de entrada no
comenz a aumentar hasta 24 a 48 h despus de la transfeccin. La
replicacin del ARN se reversiblemente inhibida por guanidina. La
inclusin de la secuencia de VP4 aguas abajo del sitio de entrada
ribosomal interno viral no tuvo efecto sobre el nivel basal de
luciferasa o posteriores aumentos de la luciferasa en relacin con su
amplificacin. Por lo tanto, en este sistema de esta secuencia no
contribuye a la traduccin viral o la replicacin, como se sugiri
anteriormente. La amplificacin del ARN del replicn fue
profundamente mejorada por la inclusin de P2 (pero no 5 'no
codificante o secuencia P3) mutaciones segmento asociado con la
adaptacin del virus de tipo salvaje para el crecimiento en cultivo
celular. Estos resultados proporcionan un sistema indicador simple
para el control de la traduccin y la replicacin del HAV ARN y
muestran que mutaciones crticas que mejoran el crecimiento del
virus en clulas cultivadas lo hacen mediante la promocin de la
replicacin de ARN viral en ausencia de encapsidacin, el envasado, y
la exportacin celular de el genoma viral.
De tipo salvaje HAV se replica muy mal en clulas cultivadas, pero se
adapta a medida que se passaged in vitro. Las mutaciones crticos
responsables de este fenotipo de clulas de cultivo de adaptacin se
encuentran en la regin P2 y la 'NTR 5, pero las mutaciones en otros
lugares en el genoma pueden contribuir a las propiedades de

replicacin de altamente adaptadas, rpidamente replicar, variantes

de virus citopticos, tales como HM175 / 18f
( 11 , 13 , 15 , 27 , 48 ). Muchas de estas mutaciones no funcionan
de forma independiente en el aumento de la replicacin, sino ms
bien actuar en colaboracin con mutaciones en otros lugares en el
genoma ( 48 ). Diferentes mutaciones se han identificado en las
cepas de HAV que se han adaptado de forma independiente para el
crecimiento en diferentes clulas. Sin embargo, ciertas mutaciones en
el 2B y 2C protenas parecen ser los ms importantes para la
replicacin del virus en clulas cultivadas. En particular, una
sustitucin C a T en el nucletido (nt) 3889 que codifica una
sustitucin de Ala-a-Val en el residuo 1052 de la poliprotena (2B) se
ha identificado en varias variantes HAV de cultivo adaptado diferente
celulares ( 9 , 12 , 21 , 24 ).
A pesar de la identificacin de mutaciones que mejoran el crecimiento
de HAV en clulas cultivadas, hay poca comprensin de los pasos en
el ciclo de vida viral en la que la replicacin del virus de tipo salvaje
est restringido. El hecho de que las mutaciones en el 2B y 2C
protenas mejoran el crecimiento de virus sugiere indirectamente que
la sntesis de nuevas copias de ARN viral puede estar restringido en
clulas cultivadas ( 9 , 12 , 21 , 24 ). Sin embargo, aparte de la
ubicacin de estas mutaciones, no hay evidencia directa de que
apoya esta hiptesis sobre una restriccin en algn otro paso en el
ciclo de vida viral. En contraste, no hay evidencia directa de que la
secuencia de cambios dentro de la 'NTR 5 mejorar la replicacin viral
mediante el aumento de la actividad de traduccin de los IRES virales
de una manera especfica del tipo celular ( 11 , 16 , 42 ). En
consonancia con la idea de que la replicacin del ARN puede ser
restringido, Anderson et al. han planteado la hiptesis, adems, que
la sntesis de ARN se ve obstaculizada por una frecuencia
inusualmente alta de encapsidacin de ARN de cadena positiva,
secuestrar eficazmente potenciales molculas de molde y sacarlos de
la piscina de replicar ARN ( 1 ).
En un esfuerzo para poner a prueba estas dos hiptesis, se construy
de replicacin autnoma, ARN subgenmicos HAV que carecen de la
secuencia que codifica las protenas de la cpside viral. Estos
replicones son reminiscencias de los genomas defectuosos putativo
reportados en las primeras descripciones de cultivos de clulas HAV
infectados, as como en muestras clnicas de pacientes con hepatitis A
( 35 , 36 ). Estos ARN se someten a la replicacin en clulas Huh-7,
que se derivan de clulas de carcinoma hepatocelular humano. El uso
de este nuevo sistema, se muestra que P2 (pero no 5 'NTR)
mutaciones asociadas con la adaptacin del virus al crecimiento en
cultivo celular contribuyen directamente a una mayor eficiencia de la
replicacin del ARN viral en estas clulas. Sin embargo, la replicacin
del ARN viral sigue siendo muy lento e ineficaz en comparacin con la
de otros picornavirus, incluso en la ausencia de expresin de la
protena que conduce a RNA encapsidacin.
http://jvi.asm.org/content/76/3/1171.full
Ciclo eplication

LahepatitisAsereplicausandoelcicloltico.Seunealosreceptoresenloshepatocitosyotrasclulas.Sepasatodasuexisten
puedereplicaratravsdelciclolisognico,yaquetendraqueintegrareselmaterialgentico.SereplicautilizandounaRNAp
codificadaporelvirus.Se libera entonces para atacar a otras clulas. Desde Hepatitis A utiliza el ciclo ltic
enfermedad virulenta.

Despus de la hepatitis se da una vacuna, su cuerpo produce anticuerpos que lo protegern contra es
describe cmo el cuerpo reacciona a la vacuna.

https://sites.google.com/site/hepatitiscbiology/replication-cycle
IntroduccinElintercambiogenticoporrecombinacinhomlogaynohomlogaes
unfenmenocomnentrelosvirusdeARNypuedeconducirainterferenciamolculas
deARNohbridosdefectuosos(Lai,1992;NagyySimon,1997).productoshbridos
quecontienenlainformacingenticademsdeunaespeciemoleculartienen
importanciaevolutivaparaestaclasedevirusysonlabasedeladiversidadgenticade
virus.Aunquelarecombinacintambinsehaobservadoconlosgenomasno
replicantes(Gmyletal.,1999),enelmecanismomscomnybiolgicamenterelevante
delarecombinacin,lasmolculasdeARNnocontiguosestnunidosporunaARN
polimerasacopiaactivaquecambiadeunaplantillaaotradurantelasntesisdecadena
negativa(eleccindecopia;KirkegaardyBaltimore,1986;JarvisyKirkegaard,
1992).Losmodelosparaelmecanismodecambiodemoldeyelpapeldelassealesde
plantilla,comolasecuenciaolasestructurassecundarias,sehanpropuesto(Kim&
Kao,2000).DemanerasimilaraotrosvirusdeARNdecadenapositiva,elgenoma
picornaviralsirvecomoplantillaparalatraduccineAutorparalacorrespondencia:
VerenaGaussMu$ller.Faxgaussmue494515003637.email!Replicacin
molbio.muluebeck.de.Inicialmente,elARNviralsetraduceenunapoliprotena(P1
P2P3),queseescindeenlasprotenasviralesmadurasporproteinasascodificadaspor
elvirus,porloquelaexpresindegenespicornaviraldependeprincipalmenteenel
procesamientodelapoliprotena.Elviralestructuralprotenas,VP1,VP2,VP3yVP4,
sonliberadosdesuprecursorcomn,P1.Enunamaneraregulada,lasprotenasno
estructurales,incluyendolaproteinasaviral(3C)ydelapolimerasa(3D),seliberande
dominiosP2yP3delapoliprotenaysonlosprincipalesconstituyentesdelcomplejode
replicacindelvirus(RC),quecatalizareplicacindelgenomadeARN.Unavez
formadoelRC,elARNviralseusacomolaplantillaparalareplicacin,queprocedeen
ladireccinopuestaalatraduccinylomsprobablecompiteconl(Gamarniky
Andino,1998).Ademsdelasprotenasvirales,elementosdereplicacinqueactanen
cis(CRE)enelRNAviralsonesencialesparalaformacindelaRCyportantoparala
replicacindelgenomaviral.Laparticipacindeloscomponentesviralesydelhusped
individualesenesteprocesosehainvestigadousandountraduccin}sistemade
replicacininvitro(Mollaetal,1991;.Barton&Flanegan,1993)orepliconesvirales
quecodificanungenindicadorenlugardelasprotenasdelacpsideviral.la
replicacinautnomadelreplicnpuedeserseguidamidiendoelincrementodesu
actividaddelgenindicador(Andinoetal.,1993).
IntroduccinElintercambiogenticoporrecombinacinhomlogaynohomlogaes
unfenmenocomnentrelosvirusdeARNypuedeconducirainterferenciamolculas
deARNohbridosdefectuosos(Lai,1992;NagyySimon,1997).productoshbridos
quecontienenlainformacingenticademsdeunaespeciemoleculartienen
importanciaevolutivaparaestaclasedevirusysonlabasedeladiversidadgenticade
virus.Aunquelarecombinacintambinsehaobservadoconlosgenomasno
replicantes(Gmyletal.,1999),enelmecanismomscomnybiolgicamenterelevante

delarecombinacin,lasmolculasdeARNnocontiguosestnunidosporunaARN
polimerasacopiaactivaquecambiadeunaplantillaaotradurantelasntesisdecadena
negativa(eleccindecopia;KirkegaardyBaltimore,1986;JarvisyKirkegaard,
1992).Losmodelosparaelmecanismodecambiodemoldeyelpapeldelassealesde
plantilla,comolasecuenciaolasestructurassecundarias,sehanpropuesto(Kim&
Kao,2000).DemanerasimilaraotrosvirusdeARNdecadenapositiva,elgenoma
picornaviralsirvecomoplantillaparalatraduccineAutorparalacorrespondencia:
VerenaGaussMu$ller.Faxgaussmue494515003637.email!Replicacin
molbio.muluebeck.de.Inicialmente,elARNviralsetraduceenunapoliprotena(P1
P2P3),queseescindeenlasprotenasviralesmadurasporproteinasascodificadaspor
elvirus,porloquelaexpresindegenespicornaviraldependeprincipalmenteenel
procesamientodelapoliprotena.Elviralestructuralprotenas,VP1,VP2,VP3yVP4,
sonliberadosdesuprecursorcomn,P1.Enunamaneraregulada,lasprotenasno
estructurales,incluyendolaproteinasaviral(3C)ydelapolimerasa(3D),seliberande
dominiosP2yP3delapoliprotenaysonlosprincipalesconstituyentesdelcomplejode
replicacindelvirus(RC),quecatalizareplicacindelgenomadeARN.Unavez
formadoelRC,elARNviralseusacomolaplantillaparalareplicacin,queprocedeen
ladireccinopuestaalatraduccinylomsprobablecompiteconl(Gamarniky
Andino,1998).Ademsdelasprotenasvirales,elementosdereplicacinqueactanen
cis(CRE)enelRNAviralsonesencialesparalaformacindelaRCyportantoparala
replicacindelgenomaviral.Laparticipacindeloscomponentesviralesydelhusped
individualesenesteprocesosehainvestigadousandountraduccin}sistemade
replicacininvitro(Mollaetal,1991;.Barton&Flanegan,1993)orepliconesvirales
quecodificanungenindicadorenlugardelasprotenasdelacpsideviral.la
replicacinautnomadelreplicnpuedeserseguidamidiendoelincrementodesu
actividaddelgenindicador(Andinoetal.,1993).
http://www.microbiologyresearch.org/docserver/fulltext/jgv/83/9/0832
183a.pdf?
expires=1460066380&id=id&accname=guest&checksum=787F3B26
40340A956BD14313254997A6
Las protenas
Aunque el VHA fue adaptado con xito a primera cultivo celular hace 20
aos 201 , sus protenas constituyentes no han sido completamente
definidos 115 . Las clulas infectadas contienen slo ttulos bajos de virus, y
por consiguiente la qumica de protenas ha sido limitada. La regin P1 codifica
las tres principales protenas de la cpside viral, VP1, VP2, y VP3. Una cuarta
protena de la cpside viral (VP4), esencial para la formacin de viriones 199 ,
no se detecta en las partculas virales maduras. Cada una de las protenas de
la cpside se escinde de la poliprotena precursora por la proteasa 3C viral,
codificada en la regin P3. La conformacin nativa de las protenas de la
cpside VP1 y VP3 forma un nico eptopo serolgica, dominante, sobre la
cpside viral y provoca una respuesta de anticuerpos neutralizantes. Protenas
no estructurales codificadas en las regiones P2 y P3 se predicen para funcionar
en la sntesis de ARN y la formacin de viriones. VPg (protena del virin,
genoma vinculado), tambin codificada en la regin P3, est enlazado
covalentemente al extremo 5 'del genoma y la implicada en la iniciacin de la
sntesis de ARN.

Ciclo vital
Los datos disponibles sobre el destino exacto de viriones inmediatamente
despus de la ingesta oral son incompletos (ver Fig. 1 ). En la infeccin
experimental de monos lechuza con HAV humano, antgeno viral era detectable
por inmunofluorescencia en el estmago, el intestino delgado y el intestino
grueso no slo despus de la inoculacin oral inicial, pero tambin ms tarde
en el curso de la enfermedad 20 . La capacidad para detectar antgenos virales
en clulas de las criptas intestinales utilizando inmunofluorescencia sugiere que
la replicacin viral puede ocurrir en el intestino 20 . Los viriones alcanzan
presumiblemente el hgado en la sangre portal (o despus de la circulacin
sistmica) y son tomados por los hepatocitos. Un receptor de unin para VHA
en nonliver clulas de primates se ha caracterizado 21 ,77 , 131 ; sin embargo,
la relacin de esta clase I glicoprotena de membrana integral de mucina-como
a la absorcin de hepatocitos del virus no est claro. Una vez HAV se ha
replicado en el hgado y ha liberado en la bilis (ver ms abajo), el ciclo
enteroheptico de la captacin y transferencia gastrointestinal para el hgado
podra continuar hasta neutralizantes o otros anticuerpos interrumpieron el
ciclo.
Replicacin
La evidencia actual indica que la replicacin del VHA es probablemente
exclusiva a los hepatocitos y las clulas epiteliales gastrointestinales en vivo,
aunque la infeccin del cultivo celular y la replicacin en lneas celulares
nonhepatocyte estn bien documentados 115 . Protenas del virus codificado
por replicar el genoma de ARN a travs de un intermedio de cadena negativa y
ellos mismos son sintetizados a partir de la cadena positiva del
genoma. Viriones intactos contienen el genoma de ARN, la protena VPg unido
covalentemente, y una cpside de las protenas de la cubierta VP1, VP2, VP3 y
con simetra icosadrica.Las partculas de virus aparecen en la bilis y la sangre,
presumiblemente de ser liberado a travs de la membrana de los hepatocitos
apical en el canalculo biliar y travs de la membrana basolateral en el torrente
sanguneo. El mecanismo de liberacin viral y la secrecin es desconocida,
pero claramente no depende de la destruccin de las clulas, ya que los ttulos
virales altos estn presentes en las heces antes de que haya evidencia de
necrosis de hepatocitos 51 , 139 , 245 .
http://www.biology-online.org/articles/hepatitis/hepatitis_virus.html
Al igual que todos los genomas picornavirales, VHA se divide en tres
partes: (i) 5 'regin no codificante (NCR), que comprende
aproximadamente el 10% del genoma (ii)
La hepatitis viral - Cuestiones particulares de la patognesis y
diagnstico
(ORF) de 2227 aminocidos, que codifican todas las protenas virales,
con regiones designadas como P1 para protenas de la cpside, P2 y
P3 para las protenas no estructurales y (iii) corto 3 'no codificante
regin (Fig. 3).genomas de ARN HAV carecen de la conjunto de la tapa
se encuentra en el extremo 5 'de las especies de ARNm que
normalmente gua el complejo ribosomal al sitio de inicio de la
traduccin (Najarian, 1985).

En su lugar, un sitio de entrada de ribosoma interno (IRES) formado

por las funciones 5'NCR para iniciar traducciones en HAV incluyendo
otros picornavirus (Borman, 1997; Totsuka, 1999). Sin embargo, a
diferencia de otros IRESes picornavirus, el HAV IRES requiere un
intacta factor de iniciacin eucariota 4G para su actividad ptima
(Totsuka, 1999). Varias otras protenas del husped se encuentran
para ser asociada con los ARN sintticos que representan los
segmentos de la 'NCR 5 (Chang, 1993). La protena de la cpside viral
(P1) se divide en regiones VP4, VP2, VP3 y VP1. Los P2 y P3
poliprotenas no estructurales se dividen en 2A, 2B, 2C y 3A, 3B, 3C,
3D, respectivamente (Fig. 3). VHA poliprotena se procesa en
intermedios precursoras y maduras
protenas por las actividades proteolticas de las protenas virales
codificadas. HAV 2A, 2B, 2C protena codifica 45, 251 y 335
aminocidos respectivamente. La 2A y 3C son identificados
como enzimadeprocesamientoenlahepatitisAvirus.Lasregiones2Atraducidas
funcionancomointermediario,parcialmentesituadoenlasuperficie(VP1)yalgunosse
montanenelinteriordelvirin(Totsuka,1999).Ambasprotenas2By2Cjueganun
papelimportanteenlareplicacindelRNAviral.PoliprotenasP3codificaprotenas
3A,3B,3Cy3Dcon74,23,219y489aminocidos,respectivamente.3Cprotena
actacomonicaproteasaparaelprocesamientodelaprotenaHAV,mientrasque3D
eslaARNpolimerasadependientedeARN(Schultheiss,1994).
http://cdn.intechopen.com/pdfs-wm/22633.pdf
protein del virus de la hepatitis A 2B del suprime el interfern beta
(IFN) la transcripcin de genes por interferencia con IFN regulador
Activacin del factor de 3
Tropismoheptico:papeldelosReceptoresreceptorcelularparaVHA(HAVcr1):
glicoprotenademembranaanalogaalamucinadeclaseI.PHbajoDurantela
endocitosisinducira:cambiosconformacionalesenlacpsideviraldesempacamiento
prr.ElreceptorseExpresaenMltiplesrgano