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REPORTE DE PRCTICA DEL CURSO DE ECOLOGA

QUMICA DE INSECTOS
ENT-665

4-FEBRERO-2011

PREPARACIN DE DILUCIONES Y LAVADO DE SEPTOS

Alfonso Luna Cruz1
1

Posgrado en Fitosanidad. Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo. Km. 36.5 Carr. Mxico-

Texcoco. Montecillo, Estado de Mxico. C. P. 56230. aluna@colpos.mx

RESUMEN
El efecto de pequeos errores de dilucin demuestra que es importante cuando se hacen
diluciones seriadas y que son necesarias para calcular las concentraciones deseadas. El
objetivo de este trabajo fue aprender a preparar diluciones en concentraciones muy bajas y
conocer el lavado de septos para la colocacin de feromonas. Se realizaron mediciones
repetidas de 25, 50 y 100 uL y el lavado de los septos se realiz con el mtodo Soxhlet.
Los resultados demostraron que si no existe exactitud y precisin en las mediciones, el
coeficiente de variacin es alto, por tanto se debe adiestrar para ser ms exacto y lograr ser
ms certeros para disminuir el error en las cantidades a medir en un compuesto, sobre todo
cuando las diluciones son cada vez ms bajas y que el error va en aumento.
Palabras clave: diluciones, concentraciones, septos.

INTRODUCCIN
Trabajar con diluciones es importante y rutinario en un laboratorio de investigacin
porque se necesitan concentraciones muy pequeas de productos con un alto grado de
pureza. A menudo es necesario o conveniente diluir la concentracin inicial antes de tomar
la muestra final que se utilizar. Un ejemplo, donde la dilucin es un esquema de
valoracin es dado por Alling (1971), hay diluciones que se requieren para obtener una
estimacin de un parmetro desconocido. El efecto de pequeos errores de dilucin
demuestra que es importante cuando se hacen diluciones seriadas necesarias para calcular
las concentraciones requeridas (Chase y Hoel, 1975). La variabilidad se estima
generalmente sin considerar posibles errores de la dilucin y por tanto el investigador
creer falsamente que su precisin experimental es exacta, cuando realmente puede ser
ms alta o ms baja. Esto puede explicar por qu en algunas situaciones hay carencia de la
reproductibilidad

y los

resultados de un estudio subsecuente se

diferencian del

experimento original (Chase y Hoel, 1975).

Las diluciones son concentraciones de una disolucin disminuida al aadir un
disolvente. Su preparacin a partir de estndares de alta pureza, requiere de atencin
cuidadosa y detallada, sobre todo, el conocimiento de la identidad y masa (o volumen) de
los estndares puros, las caractersticas del disolvente, los volmenes utilizados y en
especial el clculo de las mismas. Por lo tanto, es importante saber prepararlas, debido a
que cualquier imprecisin en su elaboracin afecta directamente nuestros resultados (Hill,
2000).

Estas diluciones nos sirven para la preparacin de soluciones que se ponen en

campo a partir de compuestos que se han probado como atrayentes de algunos lepidpteros.
La recepcin de estos qumicos en insectos se produce en clulas llamadas sensilas, las
cuales las rodean estructuras caractersticas como pelos, cerdas, placas, hendiduras,
presentes en la epidermis del insecto (Matthews y Matthews, 1978).
La hiptesis que se plantea en esta prctica es que existen diferencias al preparar
diluciones repetidamente. Por lo que se plante el objetivo de medir diluciones y conocer el
porcentaje de variacin, y conocer el lavado de septos.
MATERIALES Y MTODOS
Este ensayo se realiz en el Colegio de Postgraduados campus Montecillo dentro
del laboratorio de Ecologa Qumica del postgrado de Fitosanidad.
1. Clculo de diluciones
Se determin la variacin al medir el volumen de agua a 100, 50 y 25 uL. Seis
compaeros, dos por cada volumen, realizaron 10 mediciones (repeticiones) cada uno. Se
utiliz la siguiente metodologa.
Se seleccionaron tres Microjerigas para cromatografa (Marca Hamilton,USA)
(Figura 4) de 100, 50 y 25 uL, que posteriormente se utilizaron en la preparacin de las
diluciones. Se pes y se tar un vial mbar de 2 ml en una balanza electroanaltica (Marca
Ohaus, USA) (Figura 4).Cada uno de los compaeros realiz 10 repeticiones de acuerdo
al volumen asignado (100, 50 25 uL), cada vez que se midi la cantidad de agua se coloc
en el vial, ste se tar y se procedi a pesar para conocer el volumen multiplicando el peso
por la densidad (1 g/mL) de la misma (Cuadro 1).

En el desarrollo de diluciones partiendo de compuestos puros se emple la siguiente

frmula:
V=

FCxFV
d

FC= concentracin final.

FV= volumen final.
d= densidad.
V= volumen necesario del compuesto puro.
Sustituyendo en la formula tenemos:
Si se desea preparar diluciones menores a la calculada, se consider la siguiente frmula:
C1V1=C2V2
V1= Volumen de inters
C1= 10 mg/mL
C2 = Concentracin que se desea preparar (1000 ppm)
V2 = Volumen final (1 mL).

2. Lavado de septos
Se lavaron mediante el mtodo de Soxhlet que consisti en verter 300 mL de
hexano en un matraz (Marca Pyrex, USA) que presenta dos salidas para conectar dos
mangueras por donde entra y sale agua para enfriar los vapores del hexano y hacer que se
precipite nuevamente al fondo del matraz. El agua es movida con una bomba que se utiliza
en las peceras, y estuvo contenida en un recipiente plstico (jarra), cuando sta empez a
calentarse se utiliz hielo dentro del recipiente para circular el agua fra. Los septos (Figura
1) (Marca Adrich, China) se colocaron (n=25) en el sistema de extraccin Soxhlet y se
colocaron en el sistema con el matraz ms hexano (Aldrich, USA) sobre una plancha
elctrica (Thermolyne, USA) a una temperatura de 80 C. Posteriormente se cuantific

ocho sifoneos(ciclos de lavado), para asegurar la limpieza y eliminacin de olores de los

septos (Figura 2).

Figura 1. Septo
para eliminar los olores de los septos.

Figura 2. Mtodo de Soxhlet

Despus del lavado de los septos se retiraron del matraz y se colocaron en una
cmara (Figura 3) a temperatura ambiente para el enfriamiento y para que volvieran a su
tamao normal, debido a la alta temperatura incrementaron su tamao. De esta forma
quedaron listos para verterles las feromonas.

Figura 3. Cmara de enfriamiento a

temperatura ambiente.

Figura 4. Balanza electroanaltica

y Microjeringa.

El estudio se realiz en un diseo estadstico completamente al azar, con tres

tratamientos (compaeros) y diez repeticiones por tratamiento. El experimento se realiz
dos veces. El efecto de los tratamientos se determin con un anlisis de varianza utilizando
como variable respuesta la variacin al preparar la misma dilucin. Para el anlisis slo se
utiliz el coeficiente de variacin. Se realiz mediante el programa estadstico Statistix 8.1
(Analytical Software 2003) y funciones estadsticas de Excel ver. 2010.
RESULTADOS Y DISCUSION
La variacin en la preparacin de las diluciones se present indistintamente de cul
fue el volumen medido de agua. Se puede apreciar (Cuadro1) que a pesar de medir el
mismo volumen repetidamente y por ms de una persona (Figura 5),no siempre se tiene la
misma exactitud y se pueden presentar variaciones en la cantidad a determinar
encontrndose un coeficiente de variacin alto, no importando cual sea el volumen que
intenta medirse.Sin embargo el coeficiente de variacin ms alto se present en 25 uL.
Cuadro 1. Datos obtenidos en las diluciones.
DATOS DE DILUCIONES
100 uL
Repeticin
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
ED3

Jorge Zambrano
0.0993
0.1000
0.0995
0.0997
0.1002
0.0993
0.0998
0.1005
0.1000
0.1006
0.999
0.100
0.000

50 uL
Dulce
0.1019
0.1010
0.1002
0.1006
0.1008
0.0995
0.0819
0.1002
0.0994
0.0997
0.985
0.099
0.006

Carlos Riquelme
0.0509
0.0510
0.0495
0.0495
0.0500
0.0496
0.0495
0.0500
0.0499
0.0495
0.499
0.050
0.001

25 uL
Claudia
0.0488
0.0498
0.0522
0.0487
0.0489
0.0476
0.0482
0.0527
0.0492
0.0497
0.496
0.050
0.002

Estrella Mendoza
0.0247
0.0249
0.0253
0.0245
0.0248
0.0245
0.0256
0.0248
0.0247
0.0248
0.249
0.025
0.000

Haidel Vargas
0.0245
0.0250
0.0245
0.0250
0.0191
0.0250
0.0237
0.0249
0.0250
0.0244
0.241
0.024
0.002

7
CV (%)4
0.459
5.980
1.145
3.630
1.383
7.500
1 Suma total por tratamiento, 2 promedio por tratamiento, ED3 desviacin estndar, CV (%)4
coeficiente de variacin.

Figura 5. Variacin en la medicin de volumen es baja.

Chase y Hoel (1975) mencionan que la precisin de la calibracin de equipos tales
como las pipetas utilizadas en el proceso de dilucin a menudo se expresa en trminos del
coeficiente de variacin y que si ste es menor de dos por ciento se acepta. Sin embargo,
cuando ste es tan grande como cuatro o cinco por ciento es muy posible cuando se utiliza
el equipo. Por tal razn, una mezcla incompleta y el error humano, as como una restriccin
de tiempo en el proceso, puede contribuyen al problema. Por ello se ver que los errores de
sta magnitud pueden resultar dramticos y aumentar la variacin de la estimacin de la
concentracin inicial.
En los resultados encontrados en esta prctica se aprecia claramente que al no tener
la prctica necesaria se incurre en errores de precisin y exactitud y si no se tiene el
cuidado necesario, si se continua diluyendo cada vez una solucin, el error ir aumentando

hasta llegar al punto donde se est muy alejado (por abajo o por arriba) de la concentracin
deseada y no se tenga el efecto esperado en el caso de tratarse de feromonas de atraccin.
El clculo y diluciones a partir de compuestos puros son de suma importancia y se
deben saber cmo llevarlos a cabo para no incurrir en errores que nos puedan costar no
cumplir con los objetivos y para ello se debe estar bien entrenado y conocer la metodologa
y aplicarla de manera correcta.
Clculo de diluciones.
Cuadro 2. Caractersticas de los compuestos puros.
Compuesto

Concentracin
(%)
54
42
4

ZE9-12-14-AC
ZE9-12-14-OH
Z-9-C-14-AC

Densidad
mg/uL
0.885
0.862
0.874

Cuadro 3. Calcular las siguientes diluciones.

Compuesto

Dilucin A
1000

100

Diluciones (ppm)
80
50
20
10

0.5

0.5

5
5
5

2
2
2

1
1
1

0.5
0.5
0.5

ZE9-12-14-AC
ZE9-12-14-OH
Z-9-C-14-AC

Cuadro 4. Clculo de las diluciones.

Compuesto

Dilucin A

ZE9-12-14-AC
ZE9-12-14-OH
Z-9-C-14-AC

1000
*
1.13 uL
1.16 uL
1.14uL

100
100
100
100

Diluciones (ppm)
80
50
20
10
uL(Microlitros)
80
50
20
10
80
50
20
10
80
50
20
10

*Este es el valor que se obtiene del compuesto puro, se debe aforar a un mililitro y a partir
de ste mililitro se van haciendo las dems diluciones (a partir de 100 ppm en este caso)
1. Primeramente se utiliz la siguiente frmula:
FCxFV
V=
d
Sustituyendo valores tenemos que;
1 ppm (1 mg)
V= (1 mg/mL*1 mL)/0.885 mg/uL = 1.13 uL
Para el clculo de las diluciones siguientes se procedi de acuerdo a la frmula
C1V1=C2V2
Sustituyendo valores y despejando V1, 1mg=1000 ug
V1=(C2*V2)/C1
V1=(100ug/mL*1mL)/1000 ug
V1=0.1 ml = 100uL

CONCLUSIONES

10

En la realizacin de esta prctica se puede concluir que al tener tanta variacin en la

medicin de las diluciones se hace necesario adiestrarse y familiarizarse en el uso de
herramientas como las Microjeringas que son capaces de medir cantidades muy pequeas
como los microlitros.
La persona o personas que se dediquen a esta actividad deben practicar
repetidamente esta actividad de tal forma que la variacin sea mnima entre una medicin y
otra, y as asegurar mayor exactitud y precisin en la concentracin deseada.
El lavado de los septos debe hacerse con mucho cuidado para eliminar todos los
olores impregnados y que al aplicar la feromona, sta pueda actuar adecuadamente como
atrayente.
BIBLIOGRAFIA
Alling, D.W. 1971. Estimation of hit number.Biometrics 27, 605-614.
Analytical Software. 2003. Statistix 8.1. Users Manual. Tallase, Florida.
Chase, G.Rr. and D. G. Hoel. 1976. Serial dilutions: Error effects and optimal designs.
Biometrika.Great Britain. 62:2,.329-334.
Hill, A. 2000.Quality control procedures for pesticide residues analysis-guidelines for
residues monitoring in the European Union. 2nd ed, 1999/2000. Document
SANCO/3103/2000, European Commission, Athens, Greece.30 p.
Matthews, R. W.; Matthews, J. R. 1978.Insect behavior.John Wiley and Sons, Inc. 507 p.