Octubre del 2014

REPORTE DE PRCTICA.
Esterilizacin en el auto clave.
Preparacin de las 6 cajas Petri.
1.- se envuelven las 6 cajas Petri en forma tubular con el papel estraza
2.- se recortan en cada extremo el papel estraza sobrante, dejamos lo
suficiente para poder taparlo y posteriormente lo encintamos, marcando
el lado de las tapas para no estropearlas.

Esterilizacin

1.-se checa la cantidad de agua a la medida

2.- se introducen las cajas Petri envueltas
3.- se cierra el autoclave en par (forma de cruz)
4.-se sube el break (el enchufe)

Se espera 1 hora a 121 a o.15 libras

Cuando haya transcurrido la hora y el autoclave suene, esperamos 15
minutos para apagarlo
5.- Se baja el break de operacin y se espera a que la aguja llegue a 0
6.- Se abre en par y se saca con cuidado las cajas Petri
7.-Se extrae la olla y se vaca el agua para que no le salga sarro
8.- se tira el agua y se lava la olla.
*Una vez descubiertas las cajas Petri no se pueden abrir para no
contaminarse.
Preparacin del Cultivo
*Es importante que el equipo tenga puesto su cubre bocas.
-Agar Sangre
-Caldo urea
* Se realiza la regla de 3 para saber la cantidad que estamos buscando:
Agar Sangre: 40g 1000ml
(40)(250)/1000 = 10 gr
X=? - 250ml

(3.87)(50)/100 = 1.935gr
Caldo Urea: 3.87g 100ml
X=? - 50 ml

Antes de pesar debemos calibrar la balanza.

Agar Sangre
1.-Se pesa el papel de base y se suma la cantidad del agar: 0.9gr del
papel +10gr del agar de sangre = 10.9 gr.
2.- Se pesa la Cantidad deseada (10.9gr).
3.-En un Matraz Colocamos 250 ml de agua.
4.- Mezclamos.
5.- Se calienta hasta que este empezando a e bullir (cuando salen las
primeras 2 burbujas) se cuenta un minuto y se retira cuidando que no e
bulla ms, y tapamos con el tapn previamente elaborado.
Caldo Urea
1.- Se pesa el papel de base y se suma la cantidad del agar: 0.9 gr del
papel + 1.935gr del agar = 2.835gr.
2.- Se pesa la cantidad deseada (2.835gr).
3.-En un matraz colocamos 50 ml de agua.
4.-Mezclamos.
5.- Se introduce 3.5ml con ayuda de una pipeta en tubos de ensaye.

3 de Noviembre del 2014

Preparacin del medio
*colocamos las cajas petri alrededor del mechero, sin abrirlas para no
contaminarlas.

-Agar Sangre
1.-Se realiza la puncin venosa por mtodo de vacotainer, se llenan
aproximadamente 3 tubos de ensaye.
2.-Se vacan los 3 tubos con la muestra biolgica (sangre) en el agar de
sangre.
3.-Se mezcla.
4.-Con El mechero, se esteriliza la boquilla del matraz (tapa).
5.-Se vaca el agar en las cajas petri, esterilizando el matraz y el tapn
en cada vaciado.
6.-Despus del vaciado, se flamean las cajas petri procurando qu no
quede el agar en la tapa de las cajas petri.
7.- Se tapan, y etiquetan (marcando con la
fecha, cultivo, grado, grupo, mesa).
8.- Se apilan y se encintan volvindolos a marcar.
9.- Los llevamos a gelificar.
Noviembre del
2014

COPROCULTIVO
INTRODUCCIN
Es de reconocer la importancia de la tcnica, recalcando que las
enterobacterias representan la mayor parte de la flora microbiana del
tracto intestinal del hombre. En ella se incluyen grmenes comensales
(Proteus y bacilos coliformes), as como patgenos del gnero
Salmonella y Shigella . Pueden estar presentes tambin estreptococos
intestinales (enterococos), Clostridium, levaduras (incluso Candida
albicans) y ocasionalmente estafilococos patgenos. El Vibrin colrico
puede ser aislado en casos de clera; ocasionalmente es necesario
tratar de aislar Mycobacterium tuberculosis en materia fecal.
MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

*Para este proceso, requerimos el uso de cubre bocas, y para el manejo

de la muestra, uso de guantes.
-Siembra de Bacterias.
1.-Caractersticas de la muestra:
-Examen macroscpico
Presencia de restos de comida.
Consistencia fecal: Slida.
No tiene mucosidad.
Sin presencia de parsitos.
2.- Despus del examen fsico, le agregamos solucin salina para poder
homogeneizar la muestra.

*Para el coprocultivo, es importante mencionar qu el agar para esta

muestra son:

Agar Sangre.

Verde Brillante.

Salmonella Shigella.

Para el sembrado:
*Se realizarn 4 estriados, de los cuales se harn uno por uno y tomaran
la siguiente forma:

A
B
D

B
C

1.-Esterilizamos el asa hasta qu quede rojo, dejamos enfriar por unos

segundos (cuando ya no este rojo), lo ponemos en una parte del agar
para qu no est muy caliente.
2.-Se toma una pequea porcin de la muestra.
3.-Se hace el primer estriado.
4.-Se esteriliza el asa, se enfra y se hace el segundo estriado.
5.-Se esteriliza el asa de nuevo, se enfra y se hace el tercer estriado.

6.- Nuevamente se esteriliza el asa y se enfra, realizando as el ltimo

estriado, podemos observar qu es ms pequeo qu los estriados
anteriores.
*Se repiten los 6 pasos anteriores para las 3 cajas Petri con el agar:

Agar Sangre.

Verde Brillante.

Salmonella Shigella.

7.-Cuando terminemos Con la siembra, esterilizamos el asa.

8.- Apilamos las cajas petri ya con el sembrado.
9.-encintamos, marcamos con fecha, mesa, grado y grupo.
10.-Lo ponemos a encubar en la estufa bacteriolgica.

Noviembre del 2014.

Observacin de Colonias
*Es importante destacar que para todo el proceso debemos
llevar cubre bocas, y guantes para el manejo de la muestra, as
como trabajar en rea estril.
Examen macroscpico.
AGAR

Verde brillante

FORMA

OPALENCIA

DIAMETRO
APROXIMA
DO
Umbonada, Verde
pastel,con 2mm
circulares
blanco
y
forma
viscosa
poco
transparente.

Salmonella Shigella

Elevacin
Rosado
salmn, 2mm
convexa,
shigella:
plataforma, transparente,
crecimient pigmentacin.
o
de
ambas
bacterias.

Irregular
Agar sangre

plido,
transparente
blanco.

4mm
y

Examen microscpico
1.-Colocar una gota de solucin salina en el porta objetos y esterilizamos
el asa.
2.-seleccionamos una colonia, y con ayuda del asa, agarramos una
muestra.
3.-realizamos el frotis.

Solucin salina

Asa de siembra

Frotis
4.-Fijamos con el mechero.
5.-Realizamos la tincin de gram:

Cubrimos con cristal violeta 1 minuto.

Enjuagamos cuidadosamente con agua.

Cubrimos con Lugol 1 minuto.

Enjuagamos con agua cuidadosamente.

Cubrimos con alcohol-cetona por 30 segundos.

Cubrimos con safranina 30 segundos.

Enjuagamos.

Dejamos secar.

6.-Observamos con objetivo 100x con aceite de inmersin.

*Realizamos los 6 pasos anteriores con las 3 muestras del cultivo.
Resultados.
Agar sangre
Gram Positivo
Presencia de bacterias como:
cocos, diplococos, estreptococos
Verde brillante
Gram negativo
Presencia de bacterias como
bacilos, Cvica diplococos. *poca
presencia de shigella.

Salmonella shigella
Gram positivo
Posibilidad de presencia de
shigella.