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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE BAJA

CALIFORNIA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS E
INGENIERA

Bioqumica
Practica # 5
``PUNTO ISOELCTRICO DE LAS PROTENAS

Equipo:
Snchez Torres Joselyn
Soto Salcedo Victoria Giselle
Profesor:
Mijangos Montiel Jos Luis
Grupo 151

Fecha de entrega
20/03/2016

Generalidades
PUNTO ISOELCTRICO
Todas las macromolculas de la naturaleza adquieren una carga cuando se dispersan
en agua. Una caracterstica de las protenas y otros biopolmeros es que la carga total
que adquieren depende del pH del medio.
As, todas las protenas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el
que se encuentren y de los aminocidos que la componen, as como de las cargas de
cualquier ligando que se encuentre unido a la protena de forma covalente
(irreversible).
Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden
existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos.
Cualquier protena tendra una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo
suficientemente cido debido a que los grupos COOH de los aminocidos asprtico y
glutmico estaran en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina
estaran protonados (-NH3+).
De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un pH muy alto estara
cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estaran
desprotonados (COO-) y los grupos amino estaran en su forma neutra (NH2).
De lo anterior se deduce que las protenas tienen un pH caracterstico al cual su carga
neta es cero. A este pH se le denomina punto isoelctrico (pI).
En el punto isoelctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y
negativas por lo que la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada
al disminuir su solubilidad y facilitar su agregacin.
Si suponemos una protena formada nicamente por aminocidos sin grupos laterales
ionizables la carga neta de la protena dependera exclusivamente de la
protonacin /desprotonacin de los grupos amino y carboxilo terminal. En la realidad
las protenas estn formadas por multitud de aminocidos unidos mediante enlaces
peptdicos y la carga va a depender de los grupos ionizables que poseen los
aminocidos que la componen (anexo I) y del pH del medio.

PRECIPITACIN POR PUNTO ISOELCTRICO


Precipitacin por punto isoelctrico (IEF, siglas en ingls) es un mtodo electrofortico
para la separacin de protenas, de acuerdo a su punto isoelctrico, en un gradiente
de pH estable. El mtodo consta de una capa de soporte (usualmente un gel de
poliacrilamida, pero tambin puede usarse agarosa) que contiene una mezcla de
anfolitos (cidos polyamino-plicarboxlico sintticos).
Cuando un campo elctrico es aplicado al gel, los anfolitos se auto ordenan de
acuerdo a su punto isoelctrico desde el nodo hasta el ctodo. Cada anfolito
mantiene un pH local correspondiente con su punto isoelctrico y este pH uniforme se
expresa en capas en el gel. Si una protena es depositada en un extremo del gel, esta
migrar bajo la influencia del campo elctrico hasta que encuentre la regin de pH
que le corresponde a su punto isoelctrico. A este punto la protena tendr carga neta
y quedar estacionada en ese lugar.
En esta tcnica las protenas son separadas de acuerdo a su carga.

Referencia: http://labmol15044.blogspot.mx/2010/02/practica-2-precipitaccionisoelectrica.html Fecha de consulta: 20/marzo/2016

Fundamento
Una protena se forma por cadenas de aminocidos, su actividad elctrica depende
entonces del nmero y la carga de cada uno de los grupos ionizables de los
aminocidos que la forman (radicales y grupos amino y carboxilo terminales).
Entonces las protenas al igual que los aminocidos poseen un PUNTO ISOELCTRICO
caracterstico y que es igual a EL VALOR DE PH EN EL CUAL EL NMERO DE CARGAS
ELCTRICA POSITIVAS ES IGUAL AL DE CARGAS ELECTRICAS NEGATIVAS, POR LO
TANTO LA MOLCULA TIENE UNA CARGA NETA DE CERO.

Tablas de Resultados
CASENA
Pka acetato de Sodio: 4.8
Turbidez =O
Grado= + o -,
Precipitacin X.
Incolora sin precipitacin = NP
No. De Tubo

PH (calculado)

Estado de la
solucin

Observaciones

6.0

NP

5.7

NP

5.4

NP

5.1

NP

4.8

O, -

4.5

4.2

O+

3.9

O++

3.6

O+++

La solucin no precipito ni
mostro ningn signo de
turbidez
La solucin no precipito ni
mostro ningn signo de
turbidez
La solucin no precipito ni
mostro ningn signo de
turbidez
La solucin no precipito ni
mostro ningn signo de
turbidez
Se mostr turbidez color
blanco
Turbidez un poco ms
notoria color blanco
La turbidez de la solucin
era bastante
a turbidez de la solucin
era bastante
Mucha turbidez, nada de
visibilidad clara

GELATINA
Pka acetato de Sodio: 4.8
Turbidez =O
Grado= + o -,
Precipitacin X.
Incolora sin precipitacin = NP
No. De Tubo

PH (calculado)

Estado de la
solucin

Observaciones

0.10

O,-

6.10

O,-

5.80

O,+

5.40

5.10

O,++

4.80

O,-

4.50

O,--

4.20

O,---

3.90

NP

La solucin mostro signo


de turbidez leves
La solucin mostro signo
de turbidez leves
Se mostr un poco ms de
turbidez
La solucin mostro signo
de turbidez
Se mucha turbidez color
blanco
La solucin mostro signo
de turbidez leves
La turbidez de la solucin
era muy leve
la turbidez de la solucin
era bastante leve
La solucin no precipito ni
mostro ningn signo de
turbidez

Conclusin
Este mtodo es til para mostrarnos el punto isoelctrico, por medio de
precipitacin o turbidez, aunque es probable que hallamos cometido algn
error durante el experimento 2, en el primero se puede ver claramente como el
valor va decreciendo en ph mientras que inverso a este se muestra el aumento
de turbidez. El valor de ph se calcul con la ecuacin de HendersonHasselbalch. (PH=pka+LOGbase/acido)

Bibliografa Referencia: http://labmol15044.blogspot.mx/2010/02/practica-2precipitaccion-isoelectrica.html

Fecha de consulta: 20/marzo/2016