COLORACIONES BACTERIANAS

Primero:
1. Contar con los accesorios de bioseguridad en laboratorio.
2. Desinfectar con alcohol el ambiente a trabajar.
3. Limpiar el microscopio adecuadamente.

Procedimiento:
I.

Con el hisopo de madera frotar la parte superficial del cultivo.

II.
III.

Dejar secar la muestra a temperatura ambiente.

Aadir en lmina Cristal violeta por un minuto.

IV.

Lavar la
lento.

lmina con chorro

V.
VI.
VII.
VIII.
IX.
X.
XI.

Aadir Lugol por 1 minuto

Lavar la lmina con chorro lento.
Aadir alcohol cetona de 5 a 10 segundos.
Lavar la lmina.
Aadir la Safrina por 30 segundos.
Llevar la lmina al microscopio.
Observar en un lente de 40x de inmersin.

XII.
XIII.
XIV.
XV.

Se observan colonias de bacterias como puntos de color morado.

Cambiar el lente del microscopio a 100x de inmersin.
Agregar en la muestra 1 gota de aceite de inmersin.
Observar detenidamente.

XVI.
XVII.
XVIII.

Se visualiza con mayor claridad a los Diplococos Gram positivos.

Dejar el microscopio en buen estado.
Ordenar el ambiente.

CUESTIONARIO
1. Cul es la funcin de cada reactivo en la coloracin Gram?
Permite diferenciar qumicamente una bacteria gram positiva de una gram
negativa. La diferencia entre las bacterias gran positivas y negativas es su
pared celular. La gran positiva tiene una pared gruesa, lisa, compuesta pero
cido teicoico, pero esta pared tiene muchos poros diminutos.
La pared de la gran negativa es ms delgada, ondulada y est formada de
lipopolisacarido.
2. Qu otras coloraciones bacterianas existen?
Tipos de Tincin:
Tincin Simple: utiliza un solo colorante.
Tincin de Gram: Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado
con alcohol, Safranina 30 seg)
Tincin cido Resistente: Una vez teidos, conservan su color resistiendo al
lavado con cido mineral reducido. En esta tincin las bacterias cido
resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los dems
microorganismos son decolorados por el cido y toman el color azul.
Tincin de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza
cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias ncleos
de las clulas.
Tincin de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.
Tincin de Cpsula: Colorante nigrosina, aqu se observa microorganismos
encapsulados creando resistencias.
Tincin de Flagelos:Se usa mordiente el cual aumenta el tamao
del microorganismo.
3. En qu consiste la coloracin o tincin Zich Neelsen?
La tincin de Ziehl-Neelsen es una tcnica de tincin diferencial rpida y
econmica, usada para la identificacin de bacterias cido-alcohol resistentes
(BAAR), como M. tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios intestinales)
entre otros. Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes: Franz
Ziehl, un bacterilogo, y Friedrich Neelsen, un patlogo.
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos (cidos
miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la
propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin
con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las
micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan
por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con
agua, provoca una nueva solidificacin de los cidos grasos de modo que el
colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento
aumenta la energa cintica de las molculas del colorante lo cual tambin
facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin

son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de
metileno como tincin de contraste.
MATERIALES:
Aceite de inmersin
Alcohol cetona
Hisopo de madera
Lmina porta objeto
Microscopio
Papel toalla

COLORANTES:
Cristal Violeta
Lugol
Safrina

MUESTRAS:

Cultivo de bacterias en Agar TSI