UNIVERSIDAD SAN IGNACIO DE LOYOLA

FACULTAD DE INGENIERA
PRCTICA DE LABORATORIO N 1
NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
OBSERVACIN MICROSCPICA DE MICROORGANISMOS EN MUESTRAS
NATURALES

BLOQUE
FC-PREIAM05B1M

PROFESORA
GUTIERREZ MORENO, SUSANA MONICA

ALUMNO:

MARTINEZ PEA, Juan Carlos

2016-01

16

I. INTRODUCCION

Es muy importante recordar que el trabajo en los laboratorios de microbiologa

constituye un riesgo, ya que pueden presentar riesgos de enfermedades
infecciosas para las personas que estn dentro de l. El trabajo en el
laboratorio implica un trabajo de grupo, en donde cada uno de los integrantes
va adquiriendo nuevos conocimientos y desarrollando las distintas tcnicas de
trabajo ante las prcticas. Adems estas determinan su propia seguridad, as
como la de sus compaeros y la de la colectividad en general.
Es por ello que antes de comenzar con las prcticas en el laboratorio, debemos
conocer cules son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio y
seguirlas correctamente, de manera que el trabajo se realice con un riesgo
mnimo de exposicin, tanto para las personas que lo ejecutan como para el
medio ambiente.
El objetivo de este informe, es ofrecerle al estudiante una gua que contribuya
a lograr un ambiente de trabajo adecuado y seguro, durante la ejecucin de las
actividades prcticas en el Laboratorio de Microbiologa.
Adems

en

el

presente

informe

se

brindara

conocimiento

de

los

microorganismos visibles en preparacin en fresco, ya que es muy importante

tener un conocimiento acerca de estos, que nos permita identificarlos en las
muestras observadas. As finamente poder reconocerlas y ampliar nuestro
conocimiento sobre estos microorganismos. Se trabaj con las muestras de
agua estancada y yogurt.
.

II. FUNDAMENTO TEORICO

17

 PRINCIPIOS BSICOS DE LA SEGURIDAD BIOLGICA.

Clasificacin de los agentes biolgicos por grupos de riesgo.

El RD 664/97 clasifica los agentes biolgicos en cuatro grupos en
funcin

del riesgo de infeccin:

a. Agente biolgico del grupo 1: Aquel que resulta poco probable que
cause una enfermedad en el hombre.
b. Agente biolgico del grupo 2. Aqul que puede causar una
enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los
trabajadores, siendo poco probable que se propague a la
colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
c. Agente biolgico del grupo 3. Aqul que puede causar una
enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los
trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y
existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
d. Agente biolgico del grupo 4. Aqul que causando una enfermedad
grave en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores,
con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y
sin que exista generalmente frente a l profilaxis o tratamiento
eficaz.

Tcnicas de laboratorio.
El elemento ms importante para contener los riesgos biolgicos es el
seguimiento estricto de las prcticas y tcnicas estndar microbiolgicas.

Equipo de seguridad (barreras primarias).

Son los dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad (por
ejemplo, las cabinas de seguridad biolgica), como las prendas de
proteccin personal (guantes, mascarillas, batas, calzado...).

18

Diseo y construccin de la instalacin (barreras secundarias)

Se incluyen la separacin de las zonas donde tiene acceso el
pblico, la disponibilidad de sistemas de descontaminacin (autoclaves),
etc.

Caractersticas del nivel de contencin 3.

Debe

utilizarse

grupo
difcil

cuando

se

manipulan

agentes

biolgicos

del

3, microorganismos que cursan con patologa grave, de

y

largo

tratamiento,

que pueden curar con secuelas y

ocasionalmente producir la muerte.

El mayor y ms frecuente peligro que entaan estos es la infeccin
adquirida a travs de aerosoles y por fluidos biolgicos. Por ello, las
principales medidas a tomar en este caso son la correcta manipulacin y
la utilizacin de cabinas de seguridad.
En los Laboratorios de Microbiologa Clnica los ejemplos ms
tpicos de este tipo de microorganismos son M. Tuberculosis,
Brucella, Coxiella burneti, Francisella tularensis, etc. Slo pueden ser
procesados apropiadas.

NORMAS

GENERALES

DE

SEGURIDAD

BIOLGICA

EN

EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CLNICA.

Normas generales.
La peligrosidad de un agente est directamente relacionada con el
tipo

de manipulacin a la que es sometido. Por ello es bsico:

19

1. Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que

existen en el laboratorio.
2. Conocer la metodologa de trabajo de cada seccin del
laboratorio.
3. Conocer el equipamiento del laboratorio.
4. Conocer las medidas a tomar en caso de emergencia.
5. Respetar y hacer cumplir todo lo anterior.
Las rutas de transmisin ms comunes en el laboratorio son la
area y la inoculacin directa, muy por encima de todas las dems,
aunque la oral, la percutnea y el contacto directo con la piel o las
mucosas tambin son posibles.
Siendo imposible determinar a ciencia cierta si cualquier material
biolgico est contaminado con microorganismos del grupo 2 3,
ciertas muestras (respiratorias, sinoviales, etc.) en las que sea posible
que exista un microorganismo del grupo 3 deben manipularse
rutinariamente en las cabinas de Seguridad Biolgica (CSB).

Medidas a aplicar.
El acceso al laboratorio estar limitado al personal autorizado.
No deben entrar en el laboratorio, ni familiar ni amigos.
El personal del laboratorio debe implicarse en el cumplimiento de las
normas de seguridad.
Todas las reas estarn debidamente marcadas con la seal de riesgo
biolgico y su nivel de contencin.
Las

puertas

ventanas

deben

permanecer

cerradas

para

mantener la adecuada contencin biolgica.

20

 Todas las superficies de trabajo se limpiarn y desinfectarn

diariamente y siempre que se produzca un derrame.
Los

residuos

incinerados

fuera

muestras
del

peligrosas

que van

ser

laboratorio deben ser transportados en

contenedores adecuados siguiendo las normas especficas para

cada tipo de residuo.
El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado y no es
aconsejable utilizar los pasillos como almacn.
El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se
realizar de tal manera que, en caso de cada, no se produzcan
salpicaduras. Lo recomendable es hacerlo en cajas hermticas o
neveras

transportables.

Bajo

ningn

concepto

se

pueden

transportar las muestras a mano.

La ropa protectora, fcilmente ajustable y confortable, as como

guantes, gafas, etc. debe estar disponible en todo momento. La ropa
protectora de las reas con nivel de contencin 3 (cubrebatas) nunca
debe ser usada fuera del rea de trabajo y si se quita debe de ser
desechada

automticamente

en

una

bolsa

de

material

contaminado. Jams debe volver a ser usada.

Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de
la piel con materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben
usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que
contengan

posibles

patgenos.

Los

guantes

siempre

sern

desechados antes de salir del rea de trabajo. Jams se saldr

de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se coger el
telfono, se tocarn los volantes, etc.
Tras quitarse los guantes, se realizar un lavado de manos.

21

 Se usarn gafas protectoras y mascarillas faciales si existe riesgo de

salpicaduras y/o aerosoles.
Se pondr extremo cuidado en minimizar el riesgo de auto
inoculacin y de generacin de aerosoles.
Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente.
Est rigurosamente prohibido pipetear con la boca.
No debern usarse lentes de contacto.

Normas de higiene
El personal con el cabello largo debe llevarlo recogido.
Comer, beber, fumar y aplicarse cosmticos esta formalmente
prohibido

en

el

rea de trabajo del laboratorio, as como el

almacenamiento de comida o bebida.

El personal debe lavarse las manos frecuentemente durante las
actividades rutinarias, tras acabar la jornada laboral y siempre
antes de abandonar el laboratorio (almorzar).
Las heridas y cortes en las manos, si se han producido en el
Laboratorio, sern comunicados al responsable.
Las heridas y cortes deben ser convenientemente vendados y
despus es imprescindible ponerse guantes.
El personal debe aplicarse solucin hidroalcohlica en las manos
despus del lavado y con las manos secas, sobre todo cuando
vaya a abandonar el rea de trabajo.

22

Manejo de objetos punzantes y cortantes.

El uso de agujas hipodrmicas y jeringas debe ser limitado.
Nunca se debe volver a poner la capucha a las agujas y stas
no deben ser torcidas ni separadas de la jeringa.
Las agujas y jeringas usadas, as como los bistures, deben ser
desechados slo en contenedores especiales rgidos diseados para
este propsito.

MICROORGANISMO
Los microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza.
Sus

habitas

naturales

extremadamente

diversos.

Prcticamente

los

encontramos en todas partes: en el agua que bebemos, en el aire que

respiramos, en el suelo, en los alimentos que ingerimos, algunos pueden vivir
en el interior de plantas y animales, sobre nuestra piel, y en general sobre
cualquier material que les proporcione El Reino Protista, definido en el sistema
de clasificacin de Haeckel (1866) comprende a las materias nutritivas y las
condiciones de humedad y temperatura sean favorables para su desarrollo y
multiplicacin. Hay muchos hbitats donde, debido a las extremas condiciones
fsicas o qumicas, no se encuentran organismos superiores, sin embargo, en
ellos pueden existir microorganismos que en algunos casos, incluso crecen
mejor all. Los protozoarios, particularmente, son organismos unicelulares,
incapaces de llevar a cabo la fotosntesis, que pertenecen al grupo de los

23

protistas. La mayora mide entre 0,01 y 0,05 mm. Aunque la mayora viven en
lugares hmedos

algunos son parsitos que viven en organismos

multicelulares. Se dividen en varias categoras, las cuales incluyen:

1. Phylum Sarcomastigophora, que incluye a las amibas, opalinidos y
flagelados.
2. Phylum Esporozoa, estos organismos son parsitos que carecen de
estructuras locomotrices.
3. Phylum Ciliophora, son los organismos que presentan cilios.

EXAMEN EN FRESCO (PREPARACIONES SIN TEIR)

Consiste en observar los microorganismos vivos que puede haber en el
producto examinado, sin fijacin ni tincin, en suspensin acuosa, pudiendo
objetivar su cantidad, sus caractersticas morfolgicas y su movilidad. Es una
tcnica de fcil realizacin, en la que el producto a examinar se sita entre
porta y cubre. Si el material procede de una toma en medio slido o de una
toma directa, se emulsionar en una gota de agua destilada o solucin salina.
Si el material es lquido se depositar directamente entre porta y cubre. El
volumen de la gota debe ser adecuado a las dimensiones del cubreobjetos ya
que, en caso contrario, un exceso de lquido se traducir en un desbordamiento
de ste bajo los lmites del cubre, o un cubre "flotante" que dificultar nuestra
observacin por la formacin de corrientes lquidas. Si el producto va a

24

permanecer mucho tiempo en el portaobjetos, es conveniente prevenir la

desecacin mediante la aplicacin de parafina en los bordes inferiores del
cubreobjetos.
La observacin se realiza, en general, con objetivo de 40x en microscopio de
campo claro. La microscopa de contraste de fases y de campo oscuro facilita
mucho la visin en fresco. Los exmenes en fresco permiten, adems,
observar la presencia de otros elementos formes, como leucocitos, cristales,
etc., que pueden ser de gran ayuda en la valoracin de las muestras

III. OBJETIVOS Y MATERIALES

Conocer las normas de trabajo en el laboratorio de microbiologa, el

acondicionamiento y manipulacin de materiales y el uso de los equipos
bsicos.

Examinar comparativamente la morfologa y movimiento de los

microorganismos presentes en algunas muestras naturales, as como
interiorizar el tamao de las bacterias.

Guardapolvo blanco y limpio (a cargo del alumno).

Lminas porta y cubre objetos.

Asa y aguja de Klle.

25

Tubos de prueba.

Placas Petri.

Mecheros Bunsen.

Autoclave.

Espectrofotmetro.

Agitadores magnticos.

Balanza analtica.

Muestras de agua estancada.

Muestras de leche fermentada (de 24-48 horas).

Goteros.

Agua destilada.

Solucin fisiolgica (NaCl 0.9%).

IV. PROCEDIMIENTO
1. Se procedi a vaciar las muestras en los tubos de ensayo, para su
posterior anlisis microscpico.

26

2. Luego

se

mechero

prendi
Bunsen

el
para

esterilizar la asa en argolla.

3. Se aadi unas gotas de solucin fisiolgica en el portaobjeto bien limpio.

Luego,

con la asa en argolla

esterilizada se tom un

poco de

la

muestras

se
27

emulsion perfectamente en la gota del portaobjeto y finalmente se

cubri suavemente con el cubreobjeto sin formar burbujas.

4. Finalmente se procedi a examinar las muestras en el microscopio a 10x

y 40x.

RESULTADOS
Observaciones:

28

Descripcin de las bacterias:

Las bacterias son microorganismos u bacterias

unicelulares

procariticos, los cuales normalmente, poseen una rgida pared celular que les
permite protegerse del exterior. Algunas segregan, exteriormente, una envuelta
denominada cpsula bacteriana.
Son de vida auttrofa o bien hetertrofa. Se multiplican por divisin. Son de
muy pequeo tamao, el cual oscila entre 1 y 100 u. y esto hace que solo sea
posible observarlas y estudiarlas con un microscopio electrnico.
Observamos diferentes tipos de microorganismos como:
-BACILOS: son pequeos bastones de forma alargada.
-VIBRIOS: curvados y aparentemente se asemejan a las comas.
-ESPIRILOS: cuya forma es helicoidal.
-DIPLOCOCOS: asociados por parejas.

VI.CUESTIONARIO
1.

Cul

es

la

diferencia

entre

pasteurizacin

la

tindalizacin?

29

PASTEURIZACIN

Proceso

de

esterilizacin

TINDALIZACIN
con

menor tiempo de duracin.

Elimina

afecta

sus

Elimina

microorganismos

totalidad.

propiedades

Afecta

sus

propiedades

qumica.

organolpticas y dems sustancias

Su eficacia es menor, ya que no

propias de la materia prima.

elimina

con

patgenos y no patgenos en su

organolpticas como su fsica y

esterilizacin

en tres etapas, una etapa diaria.

microorganismos

no en su totalidad.
No

de

mayor tiempo de duracin y divida

patgenos o no patgenos, pero

Proceso

todos

los

Su eficacia es mayor, ya que

microorganismos, y por ende su

elimina los microorganismos en su

corto tiempo de vida til.

totalidad y posee un largo tiempo

No es muy usado en la Industria

de vida til.

comercial debido al corto tiempo

Usado mayormente en la Industria

de vida til y proliferacin de

comercial por tener mayor tiempo

bacterias.

de vida til y su aplicabilidad en

distintos

productos

para

su

conservacin, y posterior venta sin

fronteras.

MTODOS QUMICOS
Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.
Con xido de etileno:
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles
como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria
farmacutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus. Sirve para
esterilizar material termo sensibles como el descartable (goma, plstico,
papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc.
Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems
cancergeno.
Formaldehdo:

30

Se utilizan las pastillas de para formaldehido, las cuales pueden disponerse

en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden
ser expuestos al calor para una rpida esterilizacin (accin del gas
formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son
cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta
los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc.
Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.
Esterilizacin
por
gas-plasma
de
Perxido
de
Hidrgeno
Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la
transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma (estado entre lquido
y gas), que ejerce la accin biosida.
Posee como ventajas:

No deja ningn residuo txico.

Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso.

El material no precisa aireacin.

El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y 75 minutos.

Desventajas:

No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa, algodn,

lquidos, humedad, madera o instrumental con lmenes largos y
estrechos.

Es el mtodo de esterilizacin ms caro de entre los descritos.

MTODO FSICO
Calor: La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores:
el
tiempo
de
exposicin
y
la
temperatura.
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin
del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y
desorganizacin de las membranas y/o proceso oxidantes irreversibles en
los microorganismos.

31

Calor Hmedo: El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin

de protenas. Estos efectos se debe principalmente a dos razones:
*El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras
biolgicas son producidas por reacciones que eliminan agua.
*El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho
ms elevado que el aire.

2.

Qu mtodo de esterilizacin es el ms apropiado y por qu

para tubos y frascos vacos y para pipetas?
El mtodo de esterilizacin ms apropiado es el METODO FISICO.
Incineracin por llama: Este mtodo se usa para esterilizar la boca de los
frascos y tubos, ansas, tijeras, pinzas, etc. Las pinzas y tijeras deben
sumergirse previamente en alcohol 96% sostenindolas hacia abajo para
evitar que el alcohol impregne los dedos y se incendie al flamear.
Este tipo de rutina se utiliza cuando se trabaja cerca del mechero en
microbiologa, evitando cualquier contaminacin accidental.

3.

Qu tipos de microorganismos pueden encontrarse en el

agua estancada?
PARAMECIO
Los paramecios (gnero Paramecium) son protozoos ciliados con forma
ovalada, habituales en aguas dulces estancadas con abundante materia
orgnica, como charcos y estanques. Son probablemente los seres
unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados ms estudiados por la
Ciencia. El tamao ordinario de todas las especies de paramecios es de
apenas 0.5 milmetros.

Se trata de un protozoo muy comn que se encuentra en estanques de agua

dulce, acequias, arroyos, ros, lagos y embalses. En general su presencia es
abundante en aguas estancadas que contienen materia orgnica en
descomposicin y que, por tanto, son ricas en sustancias nutritivas.

32

AMEBA
Ameba (o Amiba) es un protista unicelular del gnero Amoeba. Es un protozoo
caracterizado por su forma cambiante, puesto que carece de pared celular, y
por su movimiento ameboide a base de pseudpodos, que tambin usa para
capturar alimentos a travs del proceso llamado fagocitosis. Las especies de
este gnero viven libres en agua o tierra, mientras que las de otros gneros
relacionados parasitan el intestino del hombre o de los animales.
La ameba se encuentra tpicamente en vegetacin en descomposicin. Sin
embargo, debido a la facilidad con la que se obtienen, pueden guardarse en
laboratorios, ya que son objeto comn de estudio.

NEMATODOS
Casi todos los nematodos son gusanos de cuerpo muy pequeo afilado y
alargado, pero a pesar de su aparente delicadeza son muy resistentes pues,

33

aunque no lo parezca, estn vestidos con una coraza flexible, transparente y

casi siempre lisa.
Los nematodos de vida libre se encuentran tanto en agua dulce como salada y
pueden vivir prcticamente a cualquier profundidad, tambin son frecuentes en
los musgos o entre sustancias en descomposicin. Cuando las condiciones se
vuelven desfavorables, fundamentalmente en tiempo de sequa, los nematodos
se pueden enquistar y sobrevivir durante largas temporadas hasta que lleguen
mejores tiempos.

EUGLENA
Los euglnidos (Euglenoidea o Euglenophyta) son uno de los ms conocidos
grupos de flagelados, comnmente presentes en agua dulce, en especial
cuando sta es rica en materia orgnica. Slo unos pocos miembros habitan
aguas marinas o son endosimbiontes. Muchos euglnidos poseen cloroplastos
y producen energa mediante fotosntesis, mientras que otros se alimentan por
fagocitosis o por pinocitosis. Se los ubica dentro de la fila Euglenozoa, y su
estructura celular es tpica de dicho grupo.

AEOLOSOMA
Son pocas las especies de Aeolosoma y pueden vivir tanto en aguas
estancadas de charcos, lagunas... e incluso acuarios, como en las aguas
corrientes de ros y arroyos. La coloracin de sus lunares, as como el nmero

34

de quetas que presenta cada penacho, constituyen dos de los caracteres que
mejor permiten diferenciar a las distintas especies, as, mientras Aeolosoma
hemprechi presenta estos lunares -que corresponden a gotas de aceite de
color anaranjado o rojizo, en otra especie muy comn, Aelosoma variegatum
suelen ser amarillas o azuladas.

4.

Qu tcnicas se realizan para el control de calidad de una

autoclave?

AUTOCLAVE:
PROCEDIMIENTO POR CORRIDA:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Examine rcord de Temperatura y Presin

Utilice Indicadores de Esterilizacin
Rcord de uso, fecha, temperaturas, presin
Chequeo del nivel de agua
Uso de Indicadores biolgicos de Esterilidad
Chequeo de la vlvula de seguridad
Limpieza del Interior y Exterior
Limpieza de la Pantalla de Temperatura
Limpieza del drenaje y sellos

PARMETROS QUE HAY QUE CONTROLAR EN UN AUTOCLAVE

1. PRESION DE VAPOR.

35

El vapor ser saturado y libre de impurezas utilizando agua tratada.

La pureza del vapor, saturacin y la disponibilidad del vapor son
importantes variables del proceso.

De la calidad del vapor depende que la esterilizacin sea efectiva o

no.

Estas impurezas pueden oxidar el instrumental

2. TIEMPO DE ESTERILIZACIN.

Tiempo de exposicin del producto o de la cmara a la temperatura

de esterilizacin. Es la duracin de la fase de esterilizacin.

3. TEMPERATURA DE ESTERILIZACION

Temperatura a la que se mantiene la cmara durante la fase de

esterilizacin.

VII. CONCLUSION:
Esta prctica nos permiti conocer y aplicar de manera favorable, los procesos
bsicos para el estudio de microorganismos en el laboratorio, tales como
preparaciones

en

fresco,

anlisis

microscpico

identificacin

de

microorganismos, etc. Los cuales son la base para realizar los pasos prcticos
posteriores.
Tambin es necesario destacar que pudimos aprender sobre la seguridad en el
laboratorio y las medidas necesarias para evitar riesgos, los cuales son muy
importantes cuando se trabaja en ste, especialmente con microorganismos
patgenos, ya que una incorrecta manipulacin puede llevar a un contagio del
manipulador o de quienes le rodean.

BIBLIOGRAFA:
36

TORTORA,

Gerald;

FUNKE,

Berdell

CASE,

Cristine.

(2007).

Introduccin a la microbiologa. Buenos Aires: EDITORIAL MEDICA

PANAMERICA S.A.
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OLIVAS, Angelina. (2001). Manual de prcticas microbiologa. Mxico:

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37