Qu es el material hereditario?

Es la informacin que, una vez transmitida a la siguiente generacin, influye en la forma y en las caractersticas
de cada individuo. (Molculas: ADN y ARN)
Propiedades de estas molculas

Almacenamiento de la informacin: estabilidad: que la informacin no cambie arbitrariamente.

Instrucciones para todos los rasgos y funciones.

Replicacin: Las instrucciones deben copiarse con fidelidad. Que los seres vivos sean capaces de
transmitir esa molcula (informacin) a travs de las generaciones. Necesaria para crecer (aumentar n
de clulas, mitosis en fase S. Replicacin rpida porque mientras se da la sntesis no se usa ese material
gentico. Replicacin semiconservativa) y para reproducirse (meiosis, tambin hay perodo S (1 sep de
cromosomas, 2 sep de cromtidas. Recombinacin profase 1)

Expresin de la informacin: transmisin desde esa molcula hasta las caractersticas. Genotipo ->
Fenotipo. El material gentico debe codificar los rasgos (mentiraaa: un mismo genotipo puede dar
distintos fenotipos) (Transcripcin y traduccin. Muy poco genoma se traduce, del resto del ADN,
bastante se transcribe: ARN interferentes, etc)

Variacin por mutacin: capaz de cambiar: evolucin. Necesaria la variacin en el material hereditario
para que haya una seleccin.

Rango de variacin de la cantidad de cido nucleico

Tcnicas de anlisis de los cidos nucleicos

Caractersticas qumicas
Absorcin de luz UV
Comportamiento de sedimentacin
Tamao (electroforesis)
Desnaturalizacin y renaturalizacin
Hibridacin molecular
Cintica de reasociacin
1. Absorcin de luz UV
Las bases nitrogenadas de los cidos nucleicos absorben fuertemente la luz a una longitud de onda de 260
nm. La cantidad de luz que absorbe un nmero de bases dado depende de su proximidad. Cuando estn
altamente ordenadas (muy prximas entre s) como el DNA de doble hebra, la A260 es menor que en un

estado menos ordenado como el DNA de una sola hebra o las bases nitrogenadas libres en disolucin. (La
cantidad de absorcin es mayor o menor en funcin de la organizacin que tenga y de la cantidad que haya)
Podemos estimar la concentracin de una muestra y tambin la pureza.

Concentracin de Oligonucletido en pmol/l

La absorcin es proporcional a la concentracin.
C (pmol/l) = (A260 *100*Factor de dilucin) / (1.54*nA + 0.75*nC + 1.17*nG + 0.92*nT)
Hay una constante para cada nucletido. El denominador consiste en la suma de los coeficientes de
cada base multiplicados por el nmero de veces que aparece en el oligonucletido.
El factor de dilucin es igual al volumen final de la dilucin dividido entre la cantidad alicuotada para la
dilucin.
Para determinar la pureza de muestras de cidos nucleicos: A260/A280. 1.65-1.9 para ADN y 2 para
ARN.

Efecto hipercrmico
El aumento en la A260 a medida que se desnaturaliza el DNA se llama efecto hipercrmico. As, si una
disolucin de DNA de doble hebra tiene una A260=1, la misma concentracin de una disolucin de DNA
de una sola hebra presenta una A260=1.37 y la misma concentracin de bases nitrogenadas libres tiene
una A260 de 1,6.

2. Comportamiento de sedimentacin (densidad)

Existe una relacin lineal entre el contenido en G+C y la densidad de DNA. A mayor contenido en G+C, mayor
densidad.

Basndose en mltiples estudios de la densidad de los DNAs de

diferentes organismos y de su composicin en bases nitrogenadas, se ha
establecido una frmula emprica que relaciona la densidad de flotacin
con el contenido en G+C expresado en %:
= 1,660 + 0,00098(G+C)
Centrifugacin en gradiente de CsCl: el ADN fragmentado se sita en una
zona u otra en funcin de su contenido en G+C. Siempre hay una banda
muy visible en la parte superior del tubo rica en A+T, a esta banda se le
llam satlite y se conoce como ADN satlite. Regiones ricas en A+T:
telmeros y centrmeros.
3. Tamao (electroforesis de cidos nucleicos)
En gel de poliacrilamida, en gel de agarosa, electroforesis capilar.
El ADN est cargado negativamente, por lo que en una electroforesis en gel de agarosa se mueve del polo
negativo al positivo. Se separa en funcin de su tamao: los fragmentos ms grandes corren menos.

A mayor concentracin de agarosa, mayor resistencia opone el gel al ADN, se definen mejor bandas pequeas
pero las grandes no se diferencian (quedan todos juntos)
Con un gel de agarosa a concentracin baja se separan mejor las bandas grandes y menos las pequeas.
Dependiendo de qu se quiera ver, hay que hacer el gel con una concentracin u otra.
4. Desnaturalizacin y renaturalizacin
Para desnaturalizar: subir temperatura. Para renaturalizar: bajar temperatura progresivamente. Si un ADN
desnaturalizado se mete rpidamente en hielo, no damos posibilidad a que se de apareamiento. Con esto se
crean sondas (ADN de cadena sencilla, pierde la capacidad de hibridar mientras est en el hielo).
o Temperatura de fusin
Temperatura a la cual la mitad de las molculas de ADN estn como cadena sencilla. Se ha comprobado
que la Tm aumenta con el contenido de G+C (3 puentes de hidrgeno, se requiere una temperatura ms
alta para desnaturalizarlo). La Tm es importante: a tener en cuenta en el diseo de primers, ya que segn
el primer podemos modificar la temperatura de annealing. Si bajamos la temperatura de annealing, a ms
sitios se unirn los primers. Cuanto ms G+C tenga el primer, mejor.
Renaturalizacin (hibridacin): las sondas ricas en A+T requieren una baja temperatura de annealing, lo
cual hace que se una a sitios no deseados. Importante que las sondas sean ricas en G+C para subir la
temperatura de annealing y que slo se unan a la zona que queremos.
o

Otros parmetros que intervienen en la desnaturalizacin

5. Hibridacin (renaturalizacin)
La desnaturalizacin es un proceso reversible. La renaturalizacin consiste en la reasociacin de las cadenas
de DNA.

Algunos usos experimentales de la hibridacin de cidos nucleicos

o PCR: al echar ms cantidad de cloruro de magnesio es ms fcil que se unan los primers (tanto
a la zona que queremos como a las que no).
o Southern Blot: depende de los lavados y de las temperaturas quitaremos ms o menos sonda
o Curvas Cot: en funcin del tiempo que tarden en aparear dos hebras, podemos saber la
complementariedad.
o Northern blot
o Hibridacin in situ
o Microarrays

6. Cintica de renaturalizacin: curvas CoT

La velocidad de renaturalizacin del ADN de un organismo est relacionada con su complejidad. La
complejidad se define como la suma del nmero de nucletidos que tiene cada tipo de secuencia sin tener en
cuenta el nmero de veces que est repetida.
El ADN de los virus y las bacterias en su mayora slo tiene
secuencias que estn una sola vez en el genoma (secuencias
nicas). Sin embargo, los organismos ms complejos, como los
eucariontes, presentan distintos tipos de secuencias en su
genoma. Los eucariontes, presentan distintos tipos de
secuencias en su genoma. Los eucariontes tienen secuencias
nicas (SU), secuencias de bajo nmero de copias (SBNC, 2-10
copias), secuencias repetidas (SR, alrededor de 10^2 copias) y
altamente repetidas (SAR, 10^3-10^6 copias):

nicas: genes, secuencias espaciadoras

Moderadamente repetidas: ARN ribosmico, genes de histonas
Altamente repetidas: secuencias telmeros y centrmeros (ADN satlite)
Altamente repetidas y no en tndem: elementos mviles (no en tndem, dispersos) en algunos
genomas son ms del 60%. Junto al ADN satlite se denomin "ADN basura".

Si desnaturalizamos un genoma y volvemos a renaturalizar, estas secuencias no se comportan igual. Primero

y ms rpidamente se unen las altamente repetidas, ya que encuentran ms apareamientos homlogos.
Luego las moderadamente repetidas y finalmente las secuencias nicas. Los genomas pequeos
renaturalizan antes que los grandes.
Las curvas CoT permiten estudiar la complejidad de los genomas: cmo renaturalizan los genomas pequeos
vs. Medianos vs. Grandes, etc. Se representa el % de cadena simple de DNA frente al logaritmo de CoT.
Dos factores: tamao del genoma y cantidad de ADN repetido en el genoma.
En el genoma humano se ve una curva CoT con 3 mesetas: la primera es SAR, luego SR y luego SU.
El valor CoT 1/2 es el tiempo en el cual la mitad del genoma ya est desnaturalizado. El CoT 1/2 es
directamente proporcional a la complejidad del ADN del organismo. Este valor depende de la complejidad, del
tamao del genoma y con el tipo de secuencias existentes en el genoma.

CoT bajos (10-4 a 10-1) corresponden a secuencias altamente repetidas

CoT moderados (10 a 102) corresponden a secuencias moderadamente repetidas
CoT altos (mayores de 103) corresponden a secuencias nicas o de bajo nmero de copias