Liceo N1 Javiera Carrera

Depto. de Biologa
C.G.B.T./c.g.b.t.

DOCUMENTO DE APOYO 4 MEDIO COMN

Despus que Watson y Crick propusieron el modelo de doble hlice del ADN, tres
modelos de replicacin del ADN se han propuesto: conservativo, semiconservativo
y dispersivo.
Modelos de Mecanismos de Replicacin:

Modelo
Conservativo

En este modelo las dos cadenas de ADN paternales se vuelven a

juntar despus de que ocurre la replicacin. Esto es, una
molcula hija contiene a ambas cadenas paternales, y la otra
molcula hija contiene al nuevo material sintetizado.

Modelo
En este modelo la doble hlice paternal es rota en segmentos de
Dispersivo doble cadena de ADN. Al igual que en el modelo conservativo, actan
como moldes para la sntesis de nuevas molculas de doble hlice.
Los segmentos se recomponen en dobles hlices de ADN completas,
cada una con segmentos intercalados de padres e hijos.

Modelo
Semiconservativo

En este modelo las dos cadenas paternales del ADN se

separan y sirven de molde para la sntesis de una nueva
cadena de ADN. El resultado son dos dobles hlices de
ADN, donde ambas estn constituidas de una cadena
paternal y una cadena nueva.
La divisin celular origina dos clulas hijas a partir de una sola clula
madre. Para que estas clulas hijas sean normales, la divisin celular debe
garantizar que cada clula reciba una copia de toda la informacin gentica de la
clula progenitora. Por lo que, antes de la divisin celular, la clula madre debe
sintetizar dos copias exactas de su ADN, proceso que se conoce como
replicacin del ADN, hecho que ocurre en la etapa S de la interfase celular,
estudiado en segundo medio.
En la mayora de las clulas que se dividen, el inicio de la replicacin obliga a la
clula a dividirse, de otra manara podra morir. Por eso, el momento de la
replicacin est regulado de modo que no se inicie a menos que la clula est
preparada para dividir. Estos controles tambin garantizan que el ADN de la
clula se replique exactamente una vez, no ms, antes de cada divisin celular.e
ADN
La replicacin del ADN produce dos dobles hlices idnticas cada una de las
cuales ser transmitida, en un cromosoma, a una clula hija.
Antes de la divisin celular, se debe replicar el ADN que est en la cromatina
organizada en estructuras individuales llamadas cromosomas, los que contienen
una sola doble hlice de ADN.
La replicacin del ADN se inicia cuando enzimas topoisomerasas desenrollan y
separan la doble hlice parental, de tal forma que las bases de las dos cadenas de
ADN no estn apareadas. Otras enzimas avanzan a lo largo de cada cadena de
ADN parental, seleccionando y uniendo nucletidos libres complementarios a
los de la cadena parental que sirve de molde. Las enzimas unen estos nucletidos
libres para formar dos nuevas.
Cuando la replicacin ha concluido, cada nueva hebra de ADN se organiza en
una doble hlice que contiene una cadena antigua y una cadena nueva, por lello el
proceso se denomina replicacin semiconservativa. Esto se ha observado
gracias al experimento de Meselson y Sthal.
Experimento de Meselson y Sthal:
Meselson y Stahl (1957) disearon un experimento para tratar de averiguar la
forma en la que se realiza la replicacin del ADN en E. coli, es decir, la pregunta que se
plantearon fue: Qu modelo de replicacin del ADN sigue E. coli, semiconservativo,
conservativo o dispersivo?. Para contestar a esta pregunta, disearon un experimento en
el que marcaban el ADN de la bacteria E. coli con Nitrgeno pesado N15, para ello hicieron
crecer las bacterias durante 14 generaciones sucesivas en un medio que contena como
nica fuente de Nitrgeno N15. Durante estas 14 generaciones el ADN de las bacterias las

bacterias se haba sintetizado con bases nitrogenadas con Nitrgeno pesado (N 15).
Posteriormente, comprobaron que podan distinguir el ADN del las bacterias que crecan
en un medio normal (con N14) del ADN de las bacterias que haban crecido durante 14
generaciones en N15. Para ello extrajeron el ADN de ambos tipos de bacterias y lo
centrifugaron en un gradiente de densidad de CsCl. El resultado fue que la densidad del
ADN de las bacterias que haban crecido en presencia de N15 era mayor que el ADN de
las bacterias que haban crecido con N14. Una vez comprobado que eran capaces de
distinguir el ADN de ambos tipos de bacterias, continuaron el experimento de la siguiente
forma: Las bacterias que haban estado creciendo en Nitrgeno pesado (N 15) las pasaron
a un medio de cultivo que contena N14 (Nitrgeno normal) y a distintos tiempos, media
generacin, una generacin, dos generaciones, tres generaciones de replicacin,
tomaban una muestra del cultivo bacteriano, extraan el ADN y centrifugaban en gradiente
de densidad de CsCl.

Las dos nuevas dobles hlices se mantienen unidas mientras la clula se prepara
para dividirse. El cromosoma recibe ahora el nombre de cromososma
duplicado. Cada cromosoma duplicado contiene dos cromtidas (cromtidas
hermanas) idnticas entre s, como producto de la replicacin del ADN. Cuando

las cromtidas hermanas se separan durante la divisin celular, cada clula hija
recibe una cromtida ( un cromosoma simple); as se conserva la intergridad de la
informacin gentica de una divisin celular a la siguiente.

Caractersticas Generales del Mecanismo de Replicacin:

Entre las muchas enzimas que participan en la replicacin, destaca la ADN
helicasa, una enzima que separa la hlice utilizando ATP para romper los
puentes de hidrgeno entre pares de bases complementarias. Esta actividad
desenrrolla y separa la doble hlice y forma una burbuja de replicacin. En el
interior de esta burbuja de replicacin, las bases nucletidicas no apareadas
sirven de molde para la polimerizacin de las cadenas complementarias. Cada
burbuja de replicacin contiene dos horquillas de replicacin donde las dos
cadenas de ADN parentales no se han desarrollado aun, se parecen a una
bifurcacin de caminos.
BURBUJA DE REPLICACIN: La replicacin se inicia en el momento en que la
ADN helicasa y otras enzimas que analizaremos ms adelante, desenrollan partes
de la doble hlice de ADN parental y crean una burbuja de replicacin. En las
clulas complejas, la replicacin del ADN ocurre simultneamente en muchos
puntos de la doble hlice del ADN parental, lo que se traduce en la formacin de
numerosas burbujas de replicacin. La replicacin del ADN termina cuando todas
las burbujas de replicacin adyacentes se encuentran para formar dos dobles

hlices de ADN completas e individuales. Esto se observa en el siguiente

esquema:

La duplicacin de la molcula de ADN se produce segn las

siguientes normas:

1.

Es SEMICONSERVATIVA: cada molcula de ADN est formada por una hebra de

ADN original y otra recin sintetizada.

2.

Es BIDIRECCIONAL: a partir de un punto dado del cromosoma, la replicacin

progresa en dos direcciones.

3.

En virus y bacterias hay un nico PUNTO DE INICIO de la replicacin. Mientras

que en eucariotas hay varios

4.

La replicacin AVANZA por adicin de mononucletidos en sentido 5,--3,

5.

Es SEMIDISCONTINUA: en una de sus hebras (llamada hebra conductora) se

sintetizan fragmentos bastantes grandes de forma continua, mientras que en la
otra (llamada retardada) la sntesis es discontinua, es decir, se van incorporando
nucletidos que se disponen de forma separada.

6.

La INICIACIN de la sntesis de cada fragmento requiere un extremo hidroxilo

libre que es proporcionado por un ARN cebador que analizaremos ms adelante.
La reaccin fundamental de la sntesis de ADN es la adicin de un
desoxirribonucletido al extremo 3, de una cadena de ADN.

Las Enzimas De La Replicacin

En el proceso de duplicacin del ADN intervienen numerosas protenas que son las que
se mencionan en la siguiente tabla:
Protenas

Actividades
Escinde el ARN cebador.
Correctora de pruebas

ADN Polimerasas

ADN pol I

(repara los errores de la

sntesis del ADN).
Rellena con dNTP el
espacio
resultante
al
eliminarse el ARN cebador.

Otras Protenas

ADN pol II

Repara pequeas roturas

en una hebra de ADN

ADN pol III

Polimerizacin del ADN, ya

que presenta una alta
procesividad( grado en que
sigue aadiendo dNTP una
vez que ha comenzado

TOPOISOMERASAS

Desenrollan el ADN

HELICASAS

Separan las hebras del

ADN, para que cada una
acte de molde

Protenas SSB

Se unen a las cadenas

sencillas, estabilizndolas
mientras dura la replicacin

PRIMASAS(ARN
Sintetizan el ARN cebador
polimerasas dependientes (primer) usando
como
de ADN)
molde una hebra de ADN
NUCLEASAS

Rompen una de las hlices,

dando lugar a un origen de
replicacin( creando un
ADN primer)

LIGASAS

Unen fragmentos de ADN

adyacentes,
mediante
enlaces fosfodister

Las ADN polimerasas, que catalizan la formacin de los enlaces fosfodister entre
nucletidos y van aadiendo nucletidos complementarios al de la hebra molde.Se utiliza
desoxirribonucletidos trifosfato(dNTP) que, adems, aportan la energa necesaria para la
reaccin y desprenden pirofosfato inorgnico.
Las Primasas van a originar los ARN cebadores que son complementarios del ADN
correspondiente. Son ARN polimerasas ADN dependientes, ya que pueden sintetizar
una cadena de ARN usando una hebra de ADN molde.
Las Topoisomerasas acta desenrollando el ADN. Entre ellas destaca la ADN Girasa
porque desespiraliza el ADN.
Las Helicasas separan las dos hebras de la doble hlice.
Las protenas SSB mantienen separadas las dos hebras monocatenarias. Estas actan
conjuntamente con las helicasas.
Las Nucleasas rompen los enlaces fosfodister entre nucletidos. Pueden atacarlos
empezando por un extremo hidroxilo 3, libre o por el extremo 5,
Las Ligasas que unen los fragmentos de polinucletidos adyacentes mediante enlaces
fosfodister.

MECANISMO MOLECULAR DE LA REPLICACIN

El ADN es una doble hlice trenzada muy estable y debe abrirse para replicarse (de
ADN siempre presenta una hebra original y otra recin sintetizada) y lo hace en puntos
llamados de inicio o de origen. En estos puntos es separada en una pequea porcin
mediante una enzima llamada helicasa.Esta enzima ubica el punto de inicio u origen de la
replicacin. La enzima Helicasa se desplaza separando la doble hlice formando un
pequea horquilla de replicacin, simultneamente, actan enzimas topoisomerasas,
de tipo Girasa que desenrollan las hebras o hlices y protenas SSB se adosan a las
hebras en separacin para estabilizarlas y as evitar que ambas hebras vuelvan a unirse y
enrollarse. En este proceso la hlice rota en 100 revoluciones por segundo, esto
generara un sobre enrollamiento de la doble hlice en otros puntos, lo que es evitado por
otras enzimas topoisomerasas, de corte de las hebras y, otra que luego las sellan.
El nuevo ADN no puede volver a fabricarse mientras no sea cebado, es decir, hasta
que se haya formado un partidor, llamado primer. El primer corresponde a un pequeo
trozo fragmento de ARN que es complementario al ADN correspondiente. Esto lo realiza
una enzima llamada ARN polimeraza dependiente del ADN, que se denomina Primasa,
en el mismo punto de la replicacin. Este partidor de ARN luego ser removido. Este
partidor es importante porque el ltimo nucletido del ARN que posee, proporciona un OH3` libre para el primer desoxirribonucletido trifosfato (dNTP) de la hebra del ADN que est
copiando. La enzima ADN polimerasa III (ADNpol III), se encarga de aadir dNTP
complementarios a la hebra molde del ADN en el extremo OH- 3` libre del ARN cebador. A
esto se debe que la enzima ADN pol III no puede comenzar la sntesis de nuevas cadenas
por si sola por ello es imprescindible la participacin de la enzima primasa que se
desplaza o que recorre la hebra molde del ADN en sentido 3 ` 5 sintetizando el fragmento
ARN complementario y antiparalelo en sentido 53` aadiendo rNTP (ribonucletido
trifosfato) en los OH- 3` libre de cada nucletido del ARN.
La enzima ADNpol III adems es capaz de continuar la polimerizacin del ADN
siempre que posea OH- 3` libre donde seguir aadiendo nuevos dNTP, estos son
proporcionados por los mismos dNTP que se van aadiendo. La ADN pol III al igual que el
ARN polimerasa tambin se desplaza o recorre la hebra molde del ADN en sentido 3 ` 5
ubicando nucletidos (dNTP) para la nueva hebra complementaria en sentido 53`. La
ADN pol III reconoce los nucletidos de la hebra molde y los empareja con los dNTP libres
que han llegado al ncleo desde el citoplasma donde son sintetizados o proporcionados
por la dieta, enfrentando los nucletidos de acuerdo a su complementariedad de sus
bases, A = T y C=G. Para ambas hebras se desplaza una enzima ADNpol III debido a
que son antiparalelas, una en un sentido y la otra en el sentido contrario. En una de las
hebras llamada continua o conductora la sntesis de la nueva hebra es sin interrupcin,
mientras que la otra hebra, llamada retardada, la sntesis es discontinua. Esto ltimo se
debe a que la enzima ADNpol III al desplazarse en sentido 3 ` 5 de la hebra del ADN
llega a un punto en que no puede continuar la sntesis y vuelve a empezar en una zona
ms atrs donde no se ha producido replicacin. Para continuar con la replicacin la
enzima primasa debe armar otro partidor quedando a lo largo de la hebra retardada del
ADN una complementaria formada por fragmentos llamados de OKASAKI. De acuerdo a

esto cada fragmento de Okasaki, esta formado por un segmento de ARN (primer), seguido
por otro mucho mayor de ADN.
Luego la enzima ADNpol I elimina el cebador mediante su actividad exonucleasa
(extrae) 53` rompiendo los enlaces fosfodister que existen entre los nucletidos.
Adems la enzima ADNpol I tiene una accin polimerasa 5 3` rellenando el espacio
dejado por el fragmento de ARN partidor que ha sido removido con un fragmento de
cadena de ADN. Por ltimo los ADN libres derivados del fragmento de Okasaki ms el de
relleno son unidos por enzimas topoisomerasa de tipo ligasa.
En ambos casos, tanto la enzima ARN polimerasa (primasa), como la ADN pol III
aaden nuevos nucletidos que se van uniendo en cadena mediante puentes covalentes
fosfodister con energa proporcionada por los mismos nucletidos, ya que estos son
trifosfatos, liberndose un pirofosfato inorgnico(PPi). Tambin puede participar la enzima
ADN pol II que en su accin exonucleasa 3` 5 y polimerasa 53` repara en la hlice
sencilla pequeas roturas que ocurren en una hebra del ADN.
En eucariontes existe mucha mayor cantidad de ADN que en procariontes por lo tanto
la replicacin en eucariontes debera ser mucho ms lenta, pero no es as, porque en los
eucariontes existen muchos puntos de origen o inicio de replicacin, mientras que en
procariontes existe solo uno. Esto significa que los organismos eucariontes poseen
muchas unidades de replicacin, las que se denominan replicaciones, cada uno con un
punto de origen y dos puntos de trmino.
El ADN de eucariontes est asociado a protenas histonas formando los nucleosomas,
esto dificulta el progreso de la ADN pol III, por ello el ADN debe desaparearse de la
histona y se requiere una sntesis de histona coordinada con la replicacin. Para ello,
mientras en una zona del ADN est formndose replicaciones en otra se est
transcribiendo
ARN
para
la
sntesis
de
nuevas
protenas
histonas

Los esquemas precedentes tienen el objeto que observes esquemticamente el

mecanismo de la replicacin del ADN.

El ADN conserva absolutamente la informacin gentica a travs de innumerables

divisiones celulares. Esto se debe a la existencia de tres procesos enzimticos. Dos de
ellos se encargan de prevenir errores y el tercero se encarga de la correccin de errores.
Cada uno de los mecanismos que aseguran una correcta replicacin son los
siguientes:
1.- Seleccin de nucletidos (dNTP) es realizada por la enzima ADN polimerasa III y se
basa en que la estabilidad del complejo formado por ADN pol III. El ADN molde y el dNTP
es mxima si el dNTP es complementario.
2.- Correccin de pruebas: es realizada por la enzima polimerasa I mediante su accin
exonucleasa, que tiende a eliminar cada nucletido recin aadido. La existencia de un
nucletido desemparejado detiene la adicin del siguiente y la exonucleasa, ADNpol I,
tiene tiempo par retirar el nucletido. La ADN pol III busca de nuevo la pareja adecuada.
La correccin de errores es ms compleja que la correccin de pruebas. Las
enzimas deben reconocer, eliminar y sustituir por otro el nucletido mal emparejado. El
problema est en distinguir la cadena molde (original) de la recin sintetizada. En
procariontes el nucletido se metila despus de la sntesis del ADN. Pero hay un breve
tiempo en que permanece sin metilar y en ese intervalo la cadena nueva y vieja se
diferencia por el grado de metilacin. En eucariontes no se produce metilacin, y no se
sabe cmo se distinguen ambas hebras.
La formacin de puentes de hidrgeno entre pares de bases complementarias
proporciona gran exactitud a la replicacin. Sin embargo, ningn proceso celular es
perfecto, ni siquiera la replicacin de ADN. En parte, dado que la replicacin es tran veloz
( hasta 800 nucletidos por segundo), la ADN polimerasa enlaza bases incorrectas una
vez por cada 10 mil pares de bases, pero las cadenas de ADN terminadas contienen solo
aproximadamente un error en cada 1000 millones de pares de bases. Esta gran
exactitudse consigue por la accin de las ADN polimerasas reparadoras, descritas
anteriormente, que corrigen las cadenas hijas durante y despus de su sntesis. A pesar
de todo, algunos errores no son reparados. Una clula con errores en su ADN puede
funcionar normalmente si este error se produce en segmentos no crticos del ADN, o
puede morir si el error afecta segmentos genticos fundamentales de la clula.
Los errores (mutaciones) que escapan a los mecanismos de control constituyen una
fuente importante de variacin gentica necesaria para que ocurra evolucin. Los efectos
de estos errores dependen del organismo y de las condiciones ambientales que lo rodean.
Cuando estas son favorables, los cambios (mutaciones) no suelen ser beneficiosos; pero
si las condiciones ambientales son desfavorables, un cambio (mutacin) si puede resultar
ventajoso.