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UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA

MICROBIOLOGA
NOMBRE: Pamela Logroo

FECHA: 13/05/15

CURSO: Tercero B Ing. Biotecnologa de RRNN


TEMA: Tcnicas de Tincin en Microbiologa
Tincin es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a
una superficie. (Santambrosio, 2009)
Desde hace ms de un siglo las tinciones han ayudado a resolver problemas
de etiologa microbiana. Existe una gran variedad de tinciones, que se han ido
desarrollando como herramientas indispensables dentro del laboratorio de
microbiologa, para potencializar la eficacia de los microscopios en la deteccin
de las caractersticas morfolgicas de los microorganismos como: bacterias,
parsitos y hongos.
Dentro del proceso de las tinciones se utilizan una serie de colorantes los
cuales se caracterizan por ser sustancias capaces de dar color a una clula,
tejido, fibra, etc.
De acuerdo con su origen podemos clasificarlos como colorantes naturales,
aquellos colorantes extrados de un origen vegetal y colorantes artificiales,
aquellos de origen qumico generados dentro de un laboratorio.
As pues, los colorantes tienen las siguientes funciones dentro del proceso de
tincin: permiten hacer visibles a los microorganismos microscpicos y
transparentes, revelan la forma y tamao de los microorganismos, muestran la
presencia de estructuras internas y externas y producen reacciones qumicas
especficas.
Existen diversos tipos de tinciones que nos permiten observar microorganismos
los cuales son:
1. TINCIN SIMPLE:
Una tincin simple es una sola solucin acuosa o alcohlica de un colorante
bsico nico.
Aunque los diferentes colorantes se unen de forma especfica a las
diferentes partes de la clula, el propsito principal de una tincin simple es
destacar el microrganismo completo para que se vean las formas y las
estructuras celulares bsicas. (Totora, Fuke & Case, 2007).

a. PASOS DE LA TINCIN SIMPLE

i. Se aplica colorante al extendido fijado durante un tiempo determinado


y luego se lava.
ii. Posteriormente se seca y se observa el portaobjetos.
iii. En ocasiones se agrega una sustancia qumica a la solucin para
intensificar la coloracin, este aditivo se denomina mordiente.
Una de las funciones de un mordiente es aumentar la afinidad de una
muestra biolgica por un colorante. (Totora, Fuke & Case, 2007).
Algunas tinciones simples utilizadas en el laboratorio son: azul de metileno,
el carbolfucsina, el violeta de genciana (cristal violeta) y la safranina.
2. TINCIN DIFERENCIAL:
Las tinciones diferenciales reaccionan de modo diferente con las distintas
clases de bacterias y por lo tanto pueden ser empleadas para establecer
una distincin entre ellas (Totora, Fuke & Case, 2007).
Existen diversos tipos de tincin diferencial, ente los ms importantes
podemos destacar a los siguientes:
a. Tincin Gram:
La tincin Gram fue desarrollada por el bacterilogo Christian Gram en
1884 y es uno de los procedimientos ms tiles porque permiten
clasificar bacterias en dos grandes grupos: grampositivas y
gramnegativas. (Totora, Fuke & Case, 2007).
a. PASOS DE LA TINCIN GRAM
1. A un portaobjetos (contiene la muestra para analizar) fijado con
calor se lo cubre con un colorante violeta bsico, generalmente
cristal violeta. Como el color violeta pinta a todas las clulas se lo
denomina colorante primario.
2. Despus de un lapso de tiempo, se lava al portaobjetos, y se lo
cubre con yodo, un mordiente. Cuando se lava el extendido tanto
las bacterias grampositivas como negativas poseen un color
oscuro o purpureo.
3. Se lava una vez ms al portaobjetos, utilizando alcohol o con una
solucin alcohol-cetona. Esta solucin es un agente decolorante
que elimina el color violeta de las clulas de algunas especies
pero de otras no.
4. Se elimina el alcohol con agua y se tie al portaobjetos con
safranina, un colorante bsico. Luego se lo lava por ltima vez,
se lo seca con papel absorbente y se lo examina al microscopio.
El colorante violeta y el yodo se combinan en el citoplasma de la
bacteria y lo colorean de violeta oscuro o purpura. (Santambrosio,
2009).

Las bacteria que mantienes el color oscuro despus de haberse


agregado el alcohol para decolorarse se clasifican como grampositivas;
las bacterias que pierden el color oscuro despus de la decoloracin se
clasifican como gramnegativas. (Totora, Fuke & Case, 2007).
Como las bacterias gramnegativas son incoloras despus del lavado
con alcohol, dejan de ser visibles; por este motivo se les aplica es
colorante bsico safranina, que las convierte en rosadas. (Totora, Fuke
& Case, 2007).

Figura 1. Procedimiento de la Tincin Gram (Totora, Fuke & Case, 2007).

b. Tincin cido-Alcohol Resistencia (ZIEHL-NEELSEN):


La tincin cido-alcohol resistencia, se fija de modo firme solo a las
bacteria que poseen ceras en la paredes de sus clulas. (Totora, Fuke
& Case, 2007).
Esta tincin se realiza para identificar bacterias del gnero
Mycobacterium y cepas patgenas del gnero Nocardia. (Olivas,
2001).
Mycobacterium y Nocardia usualmente presentan un alto contenido
de lpidos, lo que hace difcil la tincin, debido a los iones del colorante
no penetra rpido a travs de las capas de lpidos, para facilitar la
entrada del colorante se calienta; una vez teidas, es difcil su
decoloracin. (Olivas, 2001).
a. PASOS DE LA TINCIN CIDO-ALCOHOL RESISTENCIA
(ZIEHL-NEELSEN)
i. Aplicar colorante rojo carbolfucsia aun extendido y calentarlo
suavemente durante varios minutos.
ii. Se enfra al portaobjetos y se lo lava.

iii. A la muestra se le aplica un cido-alcohol, un decolorante que


elimina el color rojo de las bacterias que no son cidoresistentes.
iv. Luego se tie a la muestra con azul de metileno que acta como
un colorante de contraste.
v. Las bacterias que no son acido resistentes se tornan azules
despus de la aplicacin del colorante de contraste.

Figura 2. Tincin Bacterias acido-alcohol resistentes. (Totora, Fuke & Case, 2007).

3. TINCIN ESPECIAL:
a. Tincin Negativa para Capsulas:
La cpsula es una capa gruesa de polisacrido (ocasionalmente de
pptidos), ms externa a la pared celular que rodea a la bacteria y est
adherida a ella. (Olivas, 2001).
La presencia de una cpsula es un medio para determinar la virulencia
del microorganismo, es decir el grado de hasta el cual un patgeno
puede causar una enfermedad. (Totora, Fuke & Case, 2007).
La capsula es difcil de teir con los colorantes, por lo que se recurre a
las tinciones negativas. El campo de alrededor se tie con un colorante
cido, mientras que la clula se tie con un colorante bsico de otro
color; en estas condiciones se observa como un rea brillante
traslucida alrededor de la clula. (Olivas, 2001).

Fuke &

Figura 3. Tincin
Negativa. (Totora,
Case, 2007).

b. Tincin
Selectiva
de Endosporas:
Una endospora es una estructura especial, resistente y latente que se
forma dentro de una clula y que protege una bacteria de las
condiciones ambientales adversas. (Totora, Fuke & Case, 2007).

Ciertos gneros de bacterias como Bacilus, Clostridium,


Desulfotomaculum y Sporosarcina, producen endosporas. (Olivas,
2001).
Las endosporas no se tien con mtodos comunes, debido a que estos
colorantes no pueden atravesar sus paredes.
i.

PASOS PARA TINCIN SELECTIVA DE ENDOSPORAS


a. Aplicar colorante primario verde de malaquita a una muestra,
fijado con calor, y se lo calienta hasta alcanzar una emisin
de vapores durante un lapso de tiempo de cinco minutos.
i. El calor ayuda a que el colorante atraviese las
paredes de la endospora.
b. Lavar con agua alrededor de treinta minutos, hasta eliminar
el verde de malaquita de todas las partes de la clula salvo
las endosporas.
c. Aplicar sobre la muestra safranina, para teir las partes de la
clulas distintas de las endospora.
d. En una muestra preparada de manera adecuada, las
endosporas aparecen teidas de verde dentro de las clulas
rojas o rosadas.

Figura 4. Tincin de Endosporas. (Totora, Fuke & Case, 2007).

c. Tincin de Flagelos (Tcnica de Kodaka):


Los flagelos bacterianos son estructuras de locomocin demasiado
pequeas para ser vistas con un microscopio ptico sin tincin. (Totora,
Fuke & Case, 2007).
La tincin de flagelos es muy difcil ya que son organelos demasiado
pequeos que estn por debajo del lmite de visin, de tal manera que
para teirlos y observarlos es necesario usar productos llamados
mordientes, cuya funcin es fijar y favorecer el depsito de colorante
aumentando el tamao de los flagelos. (Echandi, 1997).
Se usa un mordiente para aumentar los dimetros de los flagelos hasta
que puedan visualizarse por microscopia cuando se tia con
carbolfucsina. (Totora, Fuke & Case, 2007).

Figura 5. Tincin de Flagelos. (Totora, Fuke & Case, 2007).


4.

TINCIN DE AZUL ALGODN DE LACTOFENOL


Para la correcta identificacin de hongos, es necesario observar las
estructuras fngicas con alta calidad y contraste; para ello se utilizan
diversos compuestos qumicos que permitan la tincin entre la pared y el
citoplasma de las clulas fngicas. (Olivas, 2001).
La tincin de azul algodn de lactofenol posee caractersticas de tincin que
permiten observar cada uno de los componentes fngicos y apreciar
fcilmente las estructuras para una adecuada identificacin. (Lpez,
Hernndez & Coln2014).
El azul de algodn es un colorante cido, que tie el citoplasma y la quitina
presente en las clulas fngicas, mientras que el glicerol mantiene hmeda
la preparacin. (Olivas, 2001).

Figura 6. Tincin de Azul Algodn de Lactofenol. (Lpez, Hernndez & Coln2014).

CONCLUSIN.
Las tinciones son herramientas fundamentales, actuales y de uso universal que
facilitan la identificacin de las caractersticas morfolgicas propias de los
diversos grupos de microrganismos.
Al existir una amplia gama de tinciones, permite al investigador elegir el mtodo
ms adecuado segn este orientada su investigacin, y de esta manera
obtener resultados ms precisos y seguros.
Dentro de las tinciones ms utilizadas, podemos destacar que la tincin Gram
es la que posee mayor aceptacin por parte de los investigadores ya que es
ms til porque permite clasificar a las bacterias en dos grandes grupos:

grampositivas y gramnegativas, lo que facilita la identificacin de estructuras


determinadas.
BIBLIOGRAFIA:
1) Echandi, Eddie. (1967).Manual de Laboratorio para Fitopatologa
General. Lima-Per: Editorial IICA.
2) Lpez, Luis; Hernndez, Melisa; Coln, Claudia(2014).Las Tinciones
Bsicas en el Laboratorio de Microbiologa. Mxico: Editorial
Investigacin en Discapacidad.
3) Olivas, Evangelina. (2001). Manual de Laboratorio de Microbiologa
Bsica. Mxico: Editorial Universidad Autnoma Ciudad de Jurez.
4) Santambrosio, Eduardo. (2009). Tincin y Observacin de
Microorganismos. Argentina: Editorial Universidad Tcnica NacionalFacultad Regional Rosario.
5) Totora, J; Fuke, R; Case, C. (2007). Introduccin a la Microbiologa.
Buenos Aires: Editorial Panamericana.