Expresion Genetica de La Metanogenesis

2011 Volumen 3, No.
6
Revista Cientfica de la Universidad Autnoma de Coahuila
EXPRESIN GENTICA EN LA DIGESTIN ANAEROBIA: UN PASO

ADELANTE EN LA COMPRENSIN DE LAS INTERACCIONES TRFICAS
DE ESTA BIOTECNOLOGA
Almeida, A1., Nafarrate-Rivera, E1., Alvarado, A1., Cervantes-Ovalle A1., Luevanos,
M.P.E1., Oropeza R2., Balagurusamy, N1*
1
Laboratorio de Biorremediacin de la Escuela de Ciencias Biolgicas de la Universidad Autnoma de

Coahuila. Carretera Torren-Matamoros km 7.5, Torren, Coahuila.
2
Instituto de Biotecnologa/ UNAM, Cuernavaca, Morelos.
* bnagamani@uadec.edu.mx
RESUMEN
La digestin anaerobia es una estrategia promisoria para la generacin de compuestos de valor agregado a partir de
materiales de desecho, principalmente metano. En este proceso se conoce la participacin e interaccin de al
menos 11 grupos microbianos. Sin embargo, el potencial de estos microorganismos involucrados en la degradacin
anaerobia an no se ha entendido completamente. Aunque existen varios reportes en el potencial de la
biometanizacin de la biomasa y la relacin entre los factores ambientales que afectan a los microorganismos,
detalles de su diversidad, sus capacidades metablicas e interacciones no han sido revelados satisfactoriamente.
Los recientes avances en ecologa molecular an buscan esclarecer estos cruciales detalles. Estudios sobre
expresin gentica de las especies presentes en los reactores anaerobios revelan importantes datos sobre los
mecanismos que detrs de las respuestas de los organismos a las diferentes condiciones de estrs. Este trabajo
trata sobre los grupos de microorganismos anaerobios involucrados en la generacin de metano a partir de
biomasa, su metabolismo, dinmica, interacciones y la relacin con la expresin gentica de los mismos. Un
conocimiento profundo de los principios y funciones que controlan en ltima instancia las respuestas a la inhibicin
ayudarn a entender el proceso y modificarlo a fin de incrementar los rendimientos. Adems, se demuestra que los
estudios de expresin gentica pueden empelarse como indicadores confiables del estado general de los reactores
y procesos anaerobios.
INTRODUCCIN
Las conversiones anaerobias estn entre los ms viejos procesos biolgicos empleados por la humanidad,
inicialmente, para obtener alimentos y bebidas; sin embargo, la necesidad de la sociedad actual de desarrollar
procesos sustentables y ecolgicamente responsables, est incrementando la aplicacin de los procesos
anaerobios basndose en dos caractersticas primordiales de stos: el tratamiento de los residuos orgnicos y la
recuperacin de energa. El tratamiento de los desechos provee un beneficio econmico y ambiental. Adems, el
metano, presente en el biogas producido por los sistemas anaerobios, puede ser recuperado y aprovechado para la
generacin de energa, reduciendo el consumo de combustibles fsiles e impactando de manera positiva sobre la
reduccin de las emisiones de gases de efecto invernadero (Kansal y col., 2004).
Nagamani y Ramasamy (1999) sealan tres puntos bsicos en el proceso de digestin anaerobia:
a) que las bacterias ms importantes involucradas en el proceso de produccin de biogas son anaerobias y tienen
un crecimiento lento;
b) que se observa un alto grado de especializacin metablica en estos microorganismos anaerobios; y
c) que la mayora de la energa libre presente en el sustrato se encuentra en el producto final metano.
Debido a que la digestin anaerobia no es una tecnologa mecnica sino biolgica que involucra una compleja
comunidad microbiana ntimamente relacionada que metaboliza productos generados entre los diversos grupos, es
necesario un constante monitoreo para dar un buen rendimiento del proceso. Las interacciones que se dan entre los
grupos trficos dependen de los genes que los organismos en la comunidad expresan durante el proceso de
digestin. Tecnologa para estudiar la expresin diferencial de genes puede ser utilizada para elucidar redes
metablicas en comunidades microbianas. Una profunda comprensin de la regulacin metablica bajo diferentes
factores puede ayudar a mejorar el rendimiento de metano en digestores anaerobios. En el siguiente artculo de
revisin, se cubre de manera profunda la comunidad microbiana de la digestin anaerobia, compuestos que causan
http://www.postgradoeinvestigacion.uadec.mx/divulgacionAQM.html
14
2011 Volumen 3, No. 6

inhibicin de grupos trficos y los estudios de expresin gentica en los organismos presentes en digestores
anaerobios
1.
Interaccin Microbiana en la Digestin Anaerobia
La digestin anaerobia es una serie de procesos nicos, en los cuales diversos grupos de microorganismos
interactan entre s en una dinmica metablica compleja, siendo parte importante de los ciclos biogeoqumicos del
Carbono, Nitrgeno y Azufre. Adems, ste procesos posee relevantes aplicaciones directas para las sociedades
modernas como lo son el tratamiento de efluentes y la produccin de energa.
El proceso de degradacin anaerobia ha sido bsicamente restringido a tan slo 3 grupos o etapas principales para
su estudio (Pavlostathis y Giraldo-Gmez, 1991; Siegris y col., 1993), 1) hidrlisis y fermentacin, 2) acetognesis y
3) metanognesis; donde la primera etapa del proceso involucra la hidrlisis de slidos insolubles, es decir
partculas orgnicas (como celulosa o hemicelulosa) o coloides orgnicos (como protenas), en compuestos solubles
simples que pueden ser absorbidos a travs de la pared celular, para que posteriormente, dichas molculas
hidrolizadas sean catabolizadas por bacterias fermentativas en alcoholes y cidos grasos, teniendo como resultado
de este proceso, la produccin de hidrgeno y dixido de carbono. Durante la acetognesis, se produce cido
actico a travs de la oxidacin de cidos grasos de cadena corta o alcoholes (Schink, 1997), a travs de la
reduccin del CO2, usando hidrgeno como donador de electrones para la reaccin (Fischer y col., 1932). En el
ltimo paso, la metanognesis, es llevada a cabo por arqueas las cuales obtienen su energa de la conversin de un
nmero restringido de sustratos a metano (Gujer y Zehnder, 1983; Pavlostathis y Giraldo-Gomez, 1991; Hedderich y
Whitman, 2006).
A pesar de ser agrupadas en tan slo 3 etapas, la digestin anaerobia es una serie de procedimientos y reacciones
especficas en las que intervienen o interactan por lo menos 11 grupos microbianos (Figura 1), los cuales sern
descritos a detalle en este trabajo, a travs de las etapas de la digestin anaerobia.
POLMEROS COMPLEJOS
(Polisacridos, protenas, lpidos)
CIDOS GRASOS DE
CADENA LARGA
MONMEROS
(azcares, aminocidos)
(lurico, mirstico, palmtico)
CIDOS GRASOS VOLTILES
ALCOHOLES
(metanol, etanol)
Propionato
Butirato e
Isobutirato
Valeriato e
Isovaleriato
Caproato
HIDRGENO Y DIXIDO
DE CARBONO
Acetato
NITRATOS Y
SULFATOS
NO3
NH3
CO2
SO2
Metano
10
H2
N2
11
H2S
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Bacterias Hidrolticas
Bacterias Fermentativas
Bacterias Sintrf icas Productoras Obligadas
de Hidrgeno
Bacterias Homoacetognicas
Bacterias Sintrf icas Oxidadoras de Acetato
Arqueas Metanognicas Acetoclsticas
7.
8.
9.
10.
11.
Arqueas Metanognicas Hidrogenotrf icas

Bacterias Sulf ato Reductoras
Bacterias Denitrif icantes
Bacterias Disimiladoras Reductoras de
Nitratos
Metantrof os Anaerobios
Fig. 1. Interacciones microbianas en el proceso de degradacin anaerobia.
15

1.1. Primera Etapa: Hidrlisis y Fermentacin

La primera etapa de la digestin anaerobia es algunas veces limitante en el funcionamiento de un digestor
anaerobio, ya que a travs de la hidrlisis las partculas complejas son solubilizadas para primeramente hacerlas
accesibles al interior de la membrana celular de los microorganismos, posteriormente en la etapa de fermentacin,
la materia orgnica disuelta, proveniente de la hidrlisis es degradada a cidos orgnicos de cadena corta y
alcoholes por una poblacin microbiana heterognea (Gavala y col., 2003).
1.1.1.
Hidrlisis, la solubilizacin de los compuestos orgnicos
La hidrlisis se define tanto como la solubilizacin de partculas o coloides insolubles, como la descomposicin
biolgica de polmeros orgnicos a monmeros y dmeros, los cuales son capaces de a travesar la membrana
celular (Gavala y col., 2003). La hidrlisis de biopolmeros es llevada a cabo regularmente por enzimas
extracelulares (hidrolasas) las cuales se encargan de romper enlaces especficos con ayuda de molculas de agua
para obtener molculas de polmero ms pequeas, dicho proceso ha sido descrito por McCarty y Mosey (como una
cintica de primer orden [Ec. (1)].
rs = Kh S
(1)
donde rs es la velocidad de consumo del sustrato, S es la concentracin de sustrato y Kh es la constante de

hidrlisis.
La solubilizacin de sustratos insolubles es un proceso complejo que depende de diferentes parmetros tales como
el tamao de partcula, el pH (Veeken, et al., 2000), la temperatura (Veeken y Hamelers, 1999), produccin de
enzimas, la difusin y adsorcin de las enzimas a las partculas.
Los primeros datos obtenidos sobre la hidrlisis de polmeros orgnicos provienen de estudios de ecologa
microbiana en el rumen. Sin embargo, un amplio nmero de constantes de velocidad de hidrlisis concernientes a la
degradacin de carbohidratos, protenas y lpidos han sido reportadas asumiendo cinticas de primer orden, tal es el
caso del trabajo elaborado por Christ y col. (2000) (Tabla 1).
Tabla 1. Constantes cinticas (d-1) para la hidrlisis anaerbica de
carbohidratos, protenas y lpidos.
Sustrato
Constante hidroltica (d-1)
Carbohidratos
Protenas
Lpidos
0.025-0.200
0.015-0.075
0.005-0.010
Gavala y col., 2003
La importancia de este grupo de bacterias radica en la velocidad con la que estas solubilizan la materia particulada y
se ha comprobado que dicha velocidad de hidrlisis del sustrato depende tanto del tipo, origen y de la previa
adaptacin del inculo anaerobio (Doyle y col., 1983; Gavala y Lyberatos, 2001), y a su vez, la naturaleza del
sustrato determina el tipo y grado de bacterias hidrolticas presentes. Preeti Rao y col., (1993), observaron que
mientras digestores alimentados con estircol de vaca soportan mayor cantidad de microorganismos amilolticos, los
digestores alimentados con desechos de aves de corral mostraron mayores poblaciones proteolticas. Ramasamy y
col. (1991), reportaron la diferencia existente en las especies de bacterias celulolticas presentes en el rumen y en
un biodigestor; mientras que en el rumen, Ruminococcus sp. representan aproximadamente el 60% del total de este
tipo de bacterias, en el biodigestor las especies de los gneros Bacteroides y Clostridium fueron las predominantes.
Se ha comprobado que la mayora de este tipo de bacterias est adherida al sustrato antes de la hidrlisis
extensiva.
Los principales constituyentes de la biomasa tpica alimentada a un digestor anaerobio (estircol de ganado lechero
o engorda, desechos de frutas y verduras, desechos de jardinera), son la celulosa, hemicelulosa y lignina,
polmeros distribuidos en una matriz lignocelulsica, en la cual, la lignina juega un papel importante en su
16

degradacin, ya que por s slo este compuesto recalcitrante no tiende a la degradacin anaerobia, adems que su
contenido afecta la degradacin de los polmeros de celulosa y hemicelulosa. Se conoce como celulasas, al
conjunto de enzimas encargadas de la hidrlisis de la celulosa, los tres principales tipos de celulasas son conocidos
como: endocelulasas (encargadas de romper los enlaces 1,4- glucosdicos internos del polmero de celulosa en
polmeros de menor tamao), exocelulasas (encargadas de romper los enlaces 1,4- glucosdicos de los polmeros
reducidos por las endocelulasas, obteniendo tetrmeros o dmeros de glucosa, como la celobiosa) y la celobiasas o
-glucosidasas (las cuales hidrolizan la celobiosa en dos molculas de glucosa).
La degradacin de protenas (50% de la masa seca celular es protena), no ha sido estudiada a fondo, sin embargo,
se sabe que estas configuraciones tridimensionales de aminocidos, que pueden o no estar conjugadas a grupos
orgnicos o inorgnicos, son degradadas por un conjunto de enzimas proteolticas, conocidas tambin como
proteasas, las cuales han sido estudiadas tanto en rumen, como en digestores, hallando que las bacterias
proteolticas ruminales predominantes en el rumen de ganado fueron unos bacilos Gram-negativos pertenecientes al
gnero Bacteroides (Hazelwood y Nugent, 1978) en contraste con las bacterias proteolticas predominantes en los
digestores anaerobios, donde se hallaron Clostridium spp. (Siebert y Torien, 1969).
1.1.2. Fermentacin o acidogenesis

La fermentacin es definida como una etapa crucial en la digestin anaerobia, ya que el material orgnico soluble,
proveniente de la hidrlisis es convertido principalmente a acetato, cidos grasos de cadena corta, alcoholes,
hidrgeno y dixido de carbono, es por eso que esta etapa es conocida tambin como acidognesis. Una de las
principales caractersticas de esta etapa de la digestin, es la produccin de hidrgeno, debido a que parte de los
electrones generados y que no son transferidos a bases de piridinas, son dispuestos va reduccin de protones,
formando ste hidrgeno molecular. La disminucin del pH en el sistema, es otra caracterstica de la fermentacin, y
esta se debe a la acumulacin de los cidos orgnicos.
Aunque la especie dominante en la digestin anaerobia sean bacterias, se han reportado pequeas poblaciones de
protozoos, hongos y levaduras (Toerien y Hattingh, 1969). Las bacterias anaerobias obligadas y facultativas son las
principales que llevan a cabo la fermentacin de los sustratos hidrolizados.
Las bacterias fermentativas son bacterias anaerobias que utilizan en un inicio las rutas catablicas de polisacridos
(celulosa, hemicelulosa, fructosa, pectina, sacarosa y almidn), aminocidos y el glicerol para producir glucosa,
posteriormente esta glucosa es transformada va gluclisis o va Entner-Doudoroff en piruvato, para seguir alguna
de las rutas de la fermentacin alcohlica, lctica y actica. Como resultado de esta fermentacin, son obtenidos
alcoholes, cidos grasos de cadena corta, adicionalmente, son generados como parte de esta transformacin
hidrgeno y dixido de carbono (Tabla 2).
17

Tabla 2. Productos Metablicos liberados durante la fermentacin anaerobia de diferentes polisacridos por cepas
puras de bacterias anaerobias
Organismo
Bacteroides succinogenes
Fuente
Rumen
Bacteroides fibrisolvens
Rumen
Bacteroides ruminicola
Rumen
Ruminococcus flavefaciens
Neocallimastix frontalis
Rumen spirochetes
Rumen treponemes
Lachnospira multiparus
Acetivibrio cellulolyticus
Clostridium thermocellum
Sustrato
Productos*
Celulosa
F, A, S
Celulosa
Hemicelulosa
Pectina
Hemicelulosa
Pectina
Celulosa
Celulosa
Pectina
Pectina
Pectina
Celulosa
Celulosa
F, L, H2, CO2
F, B, L, H2, CO2
F, A, B, L, M, H2, CO2
F, A, P, S
F, A, P, B, L, S
F, A, S, H2, CO2
F, A, L, E, CO2
F, A, L, S, M
F, A, S, M
F, A, L, M, E, H2, CO2
A, E, H2, CO2
A, E, H2, CO2
Rumen
Rumen
Rumen
Rumen
Rumen
Digestor
Digestor
Sedimentos de
Clostridium papyrosolvens
Pectina
F, A, L, E
estuario
Clostridium butyricum
Sedimentos de lago
Pectina
A, B, M, E, H2, CO2
*F = formato, A = acetato, P = propionato, B = butirato, S = sucinato, L = lactato, M = metanol, E = etanol.
Chynoweth e Isaacson, 1987
Algunos otros microorganismos fermentativos predominantes en el rumen son Clostridium cellobioparum,

Ruminococcus albus (Godbole y col., 1981), y en los digestores de estircol de vaca, Eubacterium cellulosolvens,
Clostridium cellulosolvens, Clostridium cellulovorans y Bacteroides cellulosolvens (Ramasamy, 1997).
A pesar de la gran variedad de productos derivados de la fermentacin bacteriana, los cidos grasos voltiles (AGV)
son uno de los principales productos de la fermentacin de carbohidratos, tanto en digestores como en el rumen. El
metabolismo de los carbohidratos puede verse influenciado por la presin parcial de hidrgeno derivado de esta
misma fermentacin (McInerney y Bryant, 1981), inclusive afectar la posterior oxidacin de los cidos orgnicos
producidos en acetato. Sin embargo, la presin parcial de hidrgeno puede ser mantenida por medio de las arqueas
metangenas hidrogenotrficas, las bacterias homoacetognicas y las bacterias sulfato reductoras. Lin (2003)
demostr que otro factor que influye sobre la acidognesis son los metales pesados. Los efectos txicos relativos
sobre la produccin de acetato y butirato fueron Cu > Zn > Cr > Cd > Pb > Ni y Cu > Zn > Cr > Cd > Ni > Pb,
respectivamente. Siendo el cobre el metal ms txico y el plomo el menos txico para los microorganismos
productores de cidos grasos voltiles.
Los AGV son importantes intermediarios en para la produccin de metano, y sus concentraciones afectan la
eficiencia tanto de la fermentacin, como de la metanognesis. Wang y col., (2009), estudiaron los efectos de
distintos productos de la fermentacin en la produccin y rendimiento del metano. Cuando se usaron las
concentraciones ms altas de etanol, cido actico y cido butrico (2400, 2400 y 1800 mg/l, respectivamente) no
hubo inhibicin significativa sobre la actividad de los metangenos, sin embargo, cuando la concentracin de cido
propinico se increment a 900 mg/l, s se observ una inhibicin ya que la concentracin microbiana disminuy de
6 107 a 0.61 107 ml1. La mxima produccin acumulada de metano se obtuvo a una concentracin de etanol,
cido actico, cido propinico, y cido butrico de 1600, 1600, 300 y 1800 mg/l, respectivamente, teniendo una
concentracin mxima de metangenos de 7.3 108 ml1.
Los cidos grasos se pueden presentar tanto en su forma ionizada, como en la no-ionizada, siendo las formas noionizadas del acetato, propionato y butirato las ms txicas para las arqueas metangenicas (Van Lier y col., 1993).
La acumulacin de AGV conlleva a la disminucin del pH en el sistema, dicha cada de pH afecta la metanognesis.
Van Kessel y Russell (1996) no detectaron la formacin de metano en una vaca fistulada con un fluido ruminal
cuando el pH era menor a 6.
18

1.2. Segunda Etapa: Acetognesis

Durante la segunda etapa de la digestin anaerobia, la acetognesis, el cido actico es producido por cualquiera
de los dos diferentes mecanismos acetognicos, la acetognesis por hidrogenacin y la acetognesis por
deshidrogenacin (Tabla 3). La acetognesis por hidrogenacin es el mecanismo por el cual se produce acetato
como un nico producto final de la reduccin del dixido de carbono ms hidrgeno, debido a su analoga con la
homofermentacin lctica, esta va tambin es conocida como homoacetognesis. En digestin anaerobia la etapa
de acetognesis suele referirse a la acetognesis por deshidrogenacin, y especficamente, a la oxidacin
anaerobia de cidos grasos de cadena larga y corta (voltiles), las bacterias encargadas de esta va son las
conocidas como bacterias reductoras obligadas de protones o productoras obligadas de hidrgeno. Ellas son
inhibidas inclusive por una pequea presin parcial de hidrgeno, por lo cual slo pueden sobrevivir en asociaciones
sintrficas con microorganismos que consumen hidrgeno, como los metangenos acetoclsticos e
hidrogenotrficos, las bacterias homoacetognicas y bacterias sulfato reductoras.
Tabla 3. Cambios en la energa libre de Gibbs bajo condiciones estndar en reacciones de hidrogenacin y
deshidrogenacin y sus potenciales redox correspondientes
Reaccin
REACCIONES DE HIDROGENACIN
Alcoholes primarios
CH3CH2OH + H2O CH3COO + H+ + 2H2
cidos grasos
CH3 CH2CH2COO + 2H2O 2CH3COO 2H+ + 2H2
CH3CH2COO + 2H2O CH3COO + CO2 + 3H2
CH3COO + H+ + 2H2O 2CO2 + 4H2
CH3 CH(CH3)CH2COO + CO2 + 2H2O 3CH3COO +2H+ +H2
REACCIONES DE HIDROGENACIN
4H2 + 2CO2 CH3COO + H+ + 2H2O
H2 + S0 H2S
4H2 + SO4-2 + H+ HS + 4H2O
G'
(kJ por
mol)
No. de
pares de
electrones
E' de las reacciones

redox de liberacin de
electrones (mV)
+9.6
-190, -375
+48.3
+76.0
+94.9
+25.2
2
3
4
1
-125, -250
+30, -176, -470
-200, -300, -430, -520
-94.9
-33.9
-151.0
Schink, 1997
1.2.1. Acetognesis por hidrogenacin: Bacterias sintrficas productoras obligadas de hidrgeno.

La sintrofia es un caso especial de cooperacin simbitica entre dos tipos de microorganismos metablicamente
diferentes, los cuales dependen el uno del otro para le degradacin de un cierto sustrato, la mayora de las veces
por razones de conservacin de energa. El trmino fue acuado para describir la cercana relacin simbitica de las
bacterias fermentadoras oxidadoras de cidos grasos con metangenos oxidadores de hidrgeno (Schink, 1997).
Sin embargo, tambin actualmente es empleado para describir la relacin de bacterias fermentadoras oxidadoras de
alcoholes, como la Thermoanaerobium brockii, la cual oxida etanol (Ben-Bassat et al., 1981) y tambin se pueden
encontrar bacterias oxidadoras de compuestos aromticos, aminocidos; Boone y Bryant (1980) aislaron
Syntrophobacter wolinii, la cual slo beta-oxida propionato a acetato. A pesar de ello, un organismo puede tener una
amplia afinidad por distintos sustratos, tal como la Syntrophomonas wolfei, la cual beta-oxida cidos grasos con un
tamao de cadena de 4 a 7 carbonos.
1.2.2. Acetognesis por deshidrogenacin: Bacterias homoacetognicas.
Las bacterias homoacetognicas son microorganismos estrictamente anaerobios, los cuales catalizan la formacin
de acetato a partir de hidrgeno y dixido de carbono, este tipo de acetognesis fue reportada por primera vez por
Fischer y col., (1932) cuando trabajaba con cultivos enriquecidos de lodos de una planta de tratamiento de agua. Sin
embargo, fue hasta 1936 cuando Wieringa, usando hidrgeno y dixido de carbono como sustratos, purific al
acetgeno anaerobio Clostridium aceticum.
19

En 1942, Fontaine y col. encontraron que cuando se enriqueca un cultivo de Clostridium thermoaceticum con
glucosa a 60 C, ste microorganismo produca por cada unidad de glucosa, 3 unidades de acetato como producto
final, llamndosele a este nuevo tipo de fermentacin homoacetognica en analoga con la fermentacin lctica
homofermentativa, y se sugera que el desdoblamiento de la glucosa formaba 3 unidades de C2, las cuales eran
convertidas a acetato, o que por lo menos, la sntesis de una molcula de acetato provena de dos unidades de C1,
teora comprobada por Wood en 1952, cuando emple molculas de CO2 marcadas con 13C y anlisis de masa para
el cultivo enriquecido, sus descubrimientos indicaron claramente que el carbono de ambos grupos (carboxil y metil)
en una molcula de acetato, pueden ser derivados del CO2. La ruta de formacin de acetato a partir de dixido de
carbono fue descrita en su mayora con el uso de C. thermoaceticum por los grupos de trabajo de Wood (1991) y
Ljungdahl (1986), es por eso que esta ruta de fijacin de CO2 a acetato, donde se utiliza hidrgeno como donador de
electrones, es llamada Wood-Ljungdahl. La ruta Wood-Ljungdahl tambin es llamada ruta del acetil CoA o la ruta
del monxido de carbono deshidrogenasa, y el total de la sntesis se encuentra esquematizado en la Figura 2,
adems el balance general de la reaccin se describe de acuerdo a la reaccin (2).
4 H2 + 2 CO2 acetato + H+ + 2 H2O
(G' = - 95 kJ/mol)
(2)
Algunas de las especies de bacterias homoacetognicas que han sido mayormente estudiadas son:
- Clostridium thermoaceticum
- Acetobacterium woodii
- Clostridium formicoaceticum
- Peptostreptococcus productos
- Eubacterium limosum
- Clostridium thermoautotrophicum
- Acetogenium kivui
Fig. 2. Sntesis del acetato a partir del CO2 en las bacterias homoacetognicas. FH4= tetrahidrofolato, CH3-Co-E=
protena corrinoide metilada/Fe-S protena. (Dieker y Wohlfarth, 1994).
1.3. Tercera Etapa: Metanognesis y sus dos vas principales, acetoclstica e hidrogenotrfica.
La metanognesis es la etapa final de la digestin anaerobia. Esta consiste en la formacin de metano a partir de
dos rutas principales: la acetoclstica y la hidrogenotrfica. Los dos tipos de metangenos, acetoclsticos e
hidrogenotrficos son esenciales para el ltimo paso de la conversin entre materia orgnica y metano, sin
embargo, los roles de estas arqueas durante esta fase del proceso son limitados (Demirel y Scherer, 2008).
20

Los metangenos son un grupo especial de microorganismos, pertenecen al dominio Archaea, y entre sus
coenzimas nicas pueden citarse la F420 y la F430. En reactores anaerobios el 70% del metano es obtenido por va
acetoclstica (Ferguson y Mah, 1983). Unos de los gneros y especies ms conocidas son Methanosarcina barkeri y
Methanosaeta thermophila.
Los metangenos se encuentran en casi todos los ambientes anaerobios concebibles, desde el rumen hasta los
intestinos humanos, pasando por el fondo del ocano, pantanos, digestores, tiraderos y sedimentos marinos. Los
metangenos crecen a temperaturas en rangos de 5 a 110 C y a salinidades correspondientes a las aguas dulces
hasta la de la salmuera, descubrimientos que han redefinido los lmites ambientales de la vida. Estos
microorganismos son parte de del ciclo global del carbono; cada ao aproximadamente 400 toneladas mtricas de
metano son generadas como productos finales en la degradacin materia orgnica en los diversos hbitats
anaerobios. El metano es oxidado a dixido de carbono (CO2) en zonas aerobias, pero una indeterminada cantidad
escapa dentro de la atmsfera superior (Ferry, 1993).
El estudio de los microorganismos de la produccin de metano posee un crecimiento sin precedentes en su relativa
corta historia. Y este inters se origina del amplio impacto que los metangenos poseen en el mundo biolgico,
incluyendo el medio ambiente, la temprana evolucin, la bioqumica y la biologa molecular.
Los primeros estudios en la produccin de metano dieron las pistas para la creacin de uno de los ms grandes
taxones de la vida, los metangenos. Este grupo es el ms y por lo tanto, mejor estudiado del grupo Archaea. ste
dominio es un grupo fenotpicamente diverso de microorganismos que comparten una historia evolutiva comn. Los
cuatro grupos fenotpicos clsicos incluyen adems de a los metangenos a los halfilos extremos, las arqueas
sulfato reductoras y a los termoflicos extremos (DeLong, 1992).
As el estudio de los metangenos ha permitido encontrar la informacin para aproximarse a los tempranos orgenes
de la evolucin de los Archaea. El estudio de los metangenos tambin ha contribuido al entendimiento del mundo
bioqumico. Hay investigaciones que reportan diversos cofactores y metaloenzimas en las rutas de la
metanognesis. As tambin, hay avances en el conocimiento de la bioenerga del proceso. Otros estudios
bioqumicos han reportado los aparatos de transcripcin y traduccin de los metangenos, an ms detalladamente
que en los casos de Eucaria y Bacteria (Ferry, 1993).
Todas las formas morfolgicas de las bacterias (cocos, filamentos, espirilos) se encuentran en los metangenos.
Las propiedades nicas de los metangenos, la formacin de noveles estructuras, componentes y rutas metablicas
en ciertos organismos permitieron hace aos la propuesta del dominio Archaea. Este grupo est claramente
separado de los dems segn las bases de de sus propiedades bioqumicas. Adems de los metangenos, otros
organismos han sido colocados en el dominio. Como algunos halfilos, Thermoacidophiles con Sulfolobus y el
gnero Thermoplasma (Dubach y Bachofen, 1985).
Los metangenos son anaerobios estrictos que crecen principalmente en sustratos tales como hidrgeno y dixido
de carbono (hidrogenotrficos), y acetato (acetoclsticos). Sin embargo, otros sustratos compuestos metilados
(metilotrficos), como las metilaminas son tambin sustratos para estos microorganismos (Figura 3). Algunas de las
propiedades de estos microorganismos son:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
el requerimiento de ambientes con bajos potenciales de reduccin,

la presencia de coenzimas nicas, como la coenzima M, factores F420 y F430, 7-metilpterin, metanopterin,
metil-tetrahidrometanopterin, metanofuran,
su16S rRNA es relativamente distante de los otros procariotes,
hay diferencias en el brazo del tRNA,
su pared celular contiene o D-amino cidos o cido murmico,
sus lpidos consisten de gliceroles fitanil ter (cclicos y acclicos) y escualenos,
ellos slo tienen un genoma pequeo (aproximadamente un tercio del de E. coli),
no se han encontrado quinonas y los citocromos estn presentes en muy pocos casos,
metanofosfagen(ciclo 2,3-difosfoglicerato) est presente como un posible material fosfrico de reserva.
An que la formacin de metano sin hidrgeno es energticamente favorable, slo se genera del 27 al 30% de
producto por esta ruta y 70% por acetato. Se conocen actualmente tres clases de microorganismos acetoclsticos,
21

pero ellos tienen de 2 a 4 veces una tasa de crecimiento menor respecto a los hidrogenotrficos. Estas clases de
utilizadores de acetato son:
a)
b)
c)
Methanosarcina barkeri (morfologa: paquete cuadrado de cuatro clulas)

Methanosaeta (morfologa: baciliar, filamentosa)
Methanosarcina mazei (morfologa: empaquetados o solos)
Durante la etapa de la metanognesis, puede ocurrir un fenmeno de oxidacin anaerobia del metano por algunas
arqueas o bacterias sulfato reductoras (BSR). Alperin y Hoehler (2009) emplearon un modelo de difusin-reaccin
en sedimentos marinos para entender la relacin sintrfica de los agregados de arqueas y BSR, la termodinmica
de la sintrofia, las tasas de reaccin, los efectos del agregado en el tamao y la morfologa de las arqueas y las
BSR, encontrando que la relacin sintrfica para la oxidacin anaerobia del metano era termodinmica y fsicamente
posible debido a una amplia variedad de compuestos intermediarios (incluyendo el hidrgeno, formato y acetato), y
la relacin directa entre arqueas y BSR provea una modesta ventaja energtica comparada con la no asociacin.
Fig. 3. Rutas metablicas de la metanognesis: hidrogenotrficas (flechas de lneas dobles), acetoclsticos (flechas
slidas) y metilotrficos (flechas de lneas quebradas grises). La ruta hidrogenotrfica puede operar de formato o
H2/CO2, obtenindose un potencial reducido de formato o de H2, respectivamente. La ruta acetoclstica obtiene
electrones de la oxidacin de CO producido por la divisin del acetato. La ruta metalotrfica puede operar en dos
vas: (1) los compuestos metilados C-1 son fuente del grupo metil as como de electrones (una molcula oxida a
CO2 y provee de electrones por cada tres molculas que se reducen a metano, flechas verdes punteadas). Y (2), los
compuestos metilados C-1 se reducen a metano usando electrones del H2. Los nombres de las protenas estudiadas
aqu se indican en la ruta. Para la sntesis de cofactores, mptH juega un rol en la biosntesis del tetrahidrofolato de
22

M. jannashii, y mptN est involucrado en la biosntesis de metanoprotena. Ambos, el tetrahidrofolato y la

metaprotena son intermediarios C-1 acarreadores en la metanognesis. La biosntesis de las coenzimas F420 est
en las enzimas cof (cofC, cofD, cofE, cofG, cofH). Las enzimas ask (askA, askD, askE y askF) participan en los
pasos de elongacin del 2-oxicido de la biosntesis de coenzima B9 y de la coenzima M en el paso final de la
metanognesis. Esta ltima coenzima es el cofactor orgnico ms pequeo conocido, pero es un esencial metil
acarreador terminal en la metanognesis y es producido por las enzimas com (comA, comB, comC, comD, comE)
(Graham and White, 2002).
2.
Inhibicin en el proceso de degradacin anaerobia
Una sustancia puede juzgarse inhibitoria cuando la tasa de crecimiento de alguno o algunos de los grupos
microbianos involucrados es disminuido o se detiene totalmente, producindose un cambio adverso en la poblacin
en general (Chen y col., 2008). La inhibicin en los tratamientos de degradacin anaerobia es usualmente indicada
por un decremento en la tasa de produccin de metano y la acumulacin de cidos orgnicos (Kroeker y col., 1979).
Los microorganismos involucrados en los sistemas de degradacin anaerobia trabajan dentro de estrechos niveles
de presin de hidrgeno, temperatura, concentracin de sustrato, contenido de sulfato, entre otros. Debe tomarse en
cuenta que las bacterias formadoras de cido y los microorganismos productores de metano difieren ampliamente
en trminos de fisiologa, necesidades nutrimentales, cintica de crecimiento y por lo tanto la sensibilidad que cada
uno ofrece a las condiciones ambientales es muy variable. De acuerdo a Demirel y Yengin (2002) las fallas
relacionadas al balance entre estos dos grupos de organismos son las principales causas de la inestabilidad de los
digestores anaerobios. En este sentido es de suma importancia tomar en consideracin las causas de inhibicin
ms comunes, los procesos que desencadenan y las alteraciones que producen.
Entre los compuestos inorgnicos que causan inhibicin en la produccin de metano se citan con frecuencia
amoniaco, sulfatos y H2S, y algunos metales ligeros (Na, K, Mg, Ca y Al) y pesados (Cr, Fe, Co, Zn, Cd y Zn) (Grady
y col., 1999; Zayed y Winter, 2000; Livera y col., 2011). En cuanto a compuestos orgnicos, se encuentran
reportados compuestos bencnicos, fenoles y derivados, otros alcoholes, cidos de cadena larga y lignina, entre
otros (Hwu y Lettinga, 1997; Gavala y Ahring, 2002; Chen y col., 2008; Bekmezci y col., 2011).
Sin embargo, la literatura muestra una amplia variacin en los niveles txicos para la mayora de estas sustancias.
La razn principal de esto es la complejidad del proceso de digestin anaerobia, donde mecanismos como
antagonismo, sinergismo, aclimatacin, etc., pueden presentar efectos sobre la inhibicin.
2.1. Inhibicin por amoniaco y sulfuro
De entre los compuestos inorgnicos ms ampliamente reportados se encuentran el amoniaco y sulfuro. Los
desechos que tpicamente contienen altas cargas de protenas y/o urea y de sulfatos (comnmente estircoles),
especficamente estimulan la actividad de bacterias proteolticas y BSR durante la digestin anaerobia de tales
desechos (Asp y col., 2001). Las actividades de estas bacterias decrecen la eficiencia del proceso debido a la
liberacin de NH3 y H2S, respectivamente, y ambos compuestos son ampliamente conocidos como inhibitorios de la
actividad metanognica (Sossa y col., 2004).
Investigaciones previas confirman que NH3 posee un poder inhibitorio mayor al del NH4+ sobre la actividad de los
metangenos (Koster y Koomen, 1988). La toxicidad por amoniaco es controlada por el pH y la temperatura
(Speece, 1996). Se ha reportado que concentraciones entre 80 y 100 mg/l de amoniaco inhiben totalmente cultivos
metanognicos no adaptados creciendo a pH 7.5 y condiciones mesoflicas (Koster y col., 1986; Asp y col., 2001).
Sin embargo, sistemas de alta carga de residuos, inmovilizados, adaptados o granulares pueden lidiar con
concentraciones de amoniaco mayores. Sung y Liu (2003) reportaron la inhibicin por amoniaco sobre consorcios
metanognicos termoflicos acetoclsticos sometidos a diferentes estrategias de adaptacin y pH; ellos reportaron
valores pare el 100% de inhibicin cuando la cantidad de amoniaco fue de 8000 mg/l a pH cercano a la neutralidad.
Zhou y Qiu (2006) reportaron que la actividad metanognica especfica de un inculo granular se inhibe al 50%
cuando la cantidad de amoniaco oscila entre 2350 mg/l. Por su parte, la produccin de metano en las comunidades
de filtros anaerobios se han reportado exitosa cuando las concentraciones de amoniaco son de 6000 mg/l (Parkin y
col., 1986) e incluso de 7800 mg/l (De Baere, 1984), y en reactores UASB se report actividad favorable de los
metangenos a valores de amoniaco oscilantes entre 5000 y 7500 mg/l. En estudios de la inhibicin del amoniaco
sobre consorcios metanognicos inmovilizados se observ una disminucin del 50% de la actividad metanognica
23

cuando la concentracin de amoniaco era de 365.39 mg/l (Sossa y col., 2004). stos resultados son
comparativamente mayores a estudios realizados tambin sobre consorcios metanognicos, pero donde no se
utiliz inmovilizacin, los cuales reportan valores de inhibicin del 50% de la actividad metanognica a 100 mg/l de
amoniaco (Asp y col., 2001).
En la bsqueda por entender los efectos del amoniaco sobre la poblacin microbiana en reactores anaerobios y que
afectan su rendimiento, los reportes sobre los mecanismos fisiolgicos postulan que el amoniaco afecta la
metanognesis en dos maneras;
1)
2)
el amoniaco inhibe directamente la sntesis de enzimas necesarias para la produccin de metano

(Kayhanian, 1999), y
la molcula hidrofbica del amoniaco se difunde pasivamente dentro de la clula, causando un
desequilibrio protnico y/o una deficiencia de potasio (Sprott y Patel, 1986).
De entre los diferentes grupos de metangenos involucrados en el proceso de degradacin anaerobia reportes
previos muestran contradiccin al determinar cules, los metangenos acetoclsticos o los hidrogenotrficos son los
ms sensibles al efecto del amoniaco. Zhou y Qiu (2006) reportaron cepas de metangenos consumidores de
acetato sensibles al amoniaco a concentraciones ms bajas en comparacin con cepas hidrogenotrficas, la misma
observacin fue hecha previamente por Koster y Lettinga (1984) y Angelidaki y Ahring (1993). Por el contrario,
Zeeman y col., (1985) y Wiegant y Zeeman (1986) demostraron que son los metangenos hidrogenotrficos los ms
sensibles.
Otro de los compuestos inorgnicos mayormente reportado como inhibitorio es el H2S, producto de la reduccin de
sulfato, que puede estar presente naturalmente en el sustrato (estircoles, desechos industriales, entre otros). En
ambientes anaerobios las bacterias sulfato-reductoras (BSR) compiten por los electrones disponibles con otros
anaerobios, incluyendo las bacterias fermentativas, las bacterias acetognicas productoras de hidrgeno obligadas y
las arques metanognicas. El rol de los metangenos, de las bacterias degradadoras de celulosa y las BSR es
crtico en la red de la degradacin anaerobia, y los pasos catalizados por estos microorganismos son a menudo
limitantes del proceso de conversin en general (Raskin, y col., 1996). Para los organismos degradadores de
celulosa y para los metangenos utilizadores de acetato el H2S puede controlar su inhibicin. Como no todos los
metangenos exhiben la misma respuesta a la toxicidad al H2S (Kroiss y Webnegg, 1983) la literatura muestra
niveles de toxicidad muy variados en forma de sulfuro. Adems, la toxicidad del sulfuro no siempre puede
describirse en los trminos de este compuesto, ya que en inculos granulares en presencia de sulfatos la toxicidad
es dependiente del pH. En un pH alcalino el efecto del H2S es mayor que a valores de pH cidos y cercanos a la
neutralidad. Pero en caso de tratamientos con inculos dispersos, el efecto inhibitorio del H2S puede determinarse
en relacin a la cantidad de ste (Speece, 1996).
Maillacheruvu y col., (1993) establecieron una inhibicin en el 50% de la actividad especfica de los metangenos en
filtros anaerobios con acetato y propionato en presencia de 200 mg/l de sulfuro y entre 60 y 75 mg/l en reactores de
agitacin continua. Por su parte, Isa y col., (1986), observaron el mismo porcentaje de inhibicin en metangenos
acetoclsticos con 1200 mg/l en reactores con una elevada carga orgnica y de sulfato luego de un prolongado
periodo de adaptacin. Sobre metangenos acetoclsticos tambin, Koster y col., (1986) observaron una inhibicin
al 50% con 250 mg/l de H2S. Por su parte, Zaid y col., (1992) encontraron que los metangenos acetoclsticos e
hidrogenotrficos se inhiban a partir de 1000 mg/l del sulfuro en biofilmes
2.2. Inhibicin por cationes y metales pesados
La biometanizacin de desechos industriales conlleva el desarrollo y adaptacin del proceso de forma que sea
posible lidiar con la variada composicin de estos materiales y las impurezas que presentan. Para estos desechos,
se han reportado numerosos productos qumicos causantes de inhibicin, dependiendo del tipo de desecho. Por
ejemplo, para los desechos de la industria alimenticia, a pesar de que la materia orgnica disponible suele ser
elevada, el tratamiento suele ser obstaculizado por la presencia de cationes y aniones como el Na+ (Feijoo y col.,
1995), dependiendo de la naturaleza de los desechos. En el caso de los residuos de pescados y mariscos, el
contenido de sodio puede alcanzar el mismo que el agua de mar (12 g/l) (Rinzema y col., 1988).
Reportes previos sealan diferentes valores de inhibicin para algunos cationes, mayormente se reportan Ca2+, K+ y
Na+. Los valores inhibitorios reportados son 4600 mg/l, 4800 mg/l y 7400 mg/l, respectivamente (Kulgeman y Chin,
24

1970). Sin embargo, luego de 60 das de aclimatacin, se reportan valores de inhibicin de hasta 20,000 mg/l de
sodio sobre consorcios metanognicos alimentados primariamente con acetato. En el caso del potasio, el mayor
efecto sucede sobre reduccin de la mxima especificidad de utilizacin de sustrato (kmax) (Speece, 1996).Se ha
reportado que el K+ es un compuesto inhibitorio para la degradacin anaerobia de aguas residuales de la industria
del caf, pero que la adicin del Ca2+ puede actuar con un efecto antagnico a este catin (Daoming y Forster,
1993). Incluso se reporta que para el caso de estos elementos (adems de magnesio y aluminio) en cantidades
mnimas favorece el proceso de degradacin anaerobia (Soto y col., 1993). Por ejemplo, el sodio es esencial a bajas
concentraciones, McCarty (1964) report una concentracin favorable de sodio para el desarrollo de la degradacin
anaerobia entre 100 y 200 mg/l, mientras que estudios ms recientes establecieron que el contenido de sodio
necesario para una inhibicin en el 50% de la actividad metanognica es entre 5600 y 8000 mg/l (Vallero y col.,
2003). El sodio se reporta ms txico para los microorganismos metangenos hidrogenotrficos que para los
utilizadores de acetato (Liu y Boone, 1991; Soto y col., 1993).
Por su parte, Jackson-Moss y Duncan (1991) reportaron que el aluminio deja de ser tolerado por los anaerobios
luego de 2500 mg/l sin aclimatacin. Y Yu y col., (2001) reporta valores inhibitorios para el caso del calcio de 8000
mg/l y superiores. Mientras que para el potasio el 50% de inhibicin de la actividad de los metangenos
acetoclsticos se estableci en 28,934 mg/l (McCarty, 1964)
Casos especiales son los desechos de la industria del papel y de la industria textil, las cuales generan aguas
residuales de compleja composicin. En estos casos las sustancias inhibitorias ms comunes son los sulfatos,
tanino, compuestos halogenados, policrilatos o fosfonatos y metales pesados (Ali y Sreekrishnan, 2001; Lee y
Pavlostathis, 2004). Dentro de los metales pesados que se reportan como los de mayor preocupacin al hierro,
cobre, zinc, cadmio y niquel (Jin y col., 1998). La toxicidad de los metales pesados es atribuida mayormente a la
interrupcin de la funcin enzimtica y a la alteracin de la estructura mediante la unin de los metales en los
grupos prostticos (Ulmanu y col., 2003). Las concentraciones de metales pesados que causan el 50% en la
disminucin de la produccin de metano durante la degradacin anaerobia de suero indic que los niveles de
toxicidad decrecen en este orden, Cu> Zn> Ni (Lin, 1993, Nies, 1999). Mientras que en la degradacin anaerobia de
lodos de depuradora se report un decremento en los niveles de toxicidad en este orden, Cr >Ni >Cu >Zn (Wong y
Cheung, 1995).
2.3. Inhibicin por compuestos orgnicos
Una gran variedad de compuestos orgnicos se ha reportado que pueden inhibir los procesos anaerobios. Entre los
compuestos orgnicos que se han reportado txicos a este proceso se incluyen alquilbencenos, nitrobencenos,
bencenos halogenados, alcoholes y fenoles, alcanos, teres, aminas, amidas, y tambin los cidos grasos de
cadena larga han reportado efectos adversos en la degradacin anaerobia.
Ungerfeld y col., (2004) reportan el efecto de dos alquilbencenos en la actividad metanognica durante el
tratamiento de aguas residuales en rangos termoflicos. En este trabajo se determin la disminucin total de la
produccin de metano en una cepa de Methanobrevibacter ruminantium cuando la concentracin del 3bromopropanosulfato ascendi hasta 3.47 mg/l. Entre los hidrocarburos clorados, se reporta un 96% de inhibicin en
metangenos acetoclsticos y 94% en la actividad de hidrogenotrficos a 100 mg/l de cloruro de metileno; con 100
mg/l de cloruro de etileno se observ 30% y 88% de inhibicin en metangenos acetoclsticos y utilizadores de
hidrgeno mientras que con 100 mg/l se observaron valores de inhibicin del 100% y del 72% para los metangenos
utilizadores de acetato y los hidrogenotrficos, respectivamente (Colleran y col., 1992). Generalmente se considera
que los metangenos acetoclsticos son la clase ms sensible. Similares observaciones report Freedman (1991)
en los ensayos de toxicidad de cido bromoetano-sulfnico sobre consorcios metanognicos. Esto es aplicable
tambin para el cido benzico, pues se reporta un 50% de inhibicin en acetoclsticos a 4000 mg/l, mientras que el
umbral de inhibicin para los hidrogenotrficos fue mucho mayor (Golden y col., 1994).
En cuanto al fenol, se reporta el 50% de inhibicin de los metangenos acetoclsticos cuando la concentracin es
de 1500 mg/l, mientras que para los metangenos reductores de H2/CO2, este valor de inhibicin se presenta a los
2000 mg/l. Para el catecol el 50% de inhibicin se obtiene a 1500 mg/l para ambos metangenos, acetato e
hidrgeno utilizadores (Golden y col., 1994).
25

En el caso de los cidos grasos, los de cadena larga se reportan inhibitorios sobre la degradacin anaerobia (Hwu y
Lettinga, 1997). Lalman y Bagley (2001) reportaron efectos inhibitorios del cido olico a concentraciones de 30 mg/l
y de esterico a 100 mg/l en la actividad de metangenos acetoclsticos.
Aunque las comunidades microbiolgicas anaerobias se han estudiado ampliamente, el entendimiento que los
investigadores poseen es an limitado. La cuantificacin e identificacin de todas las poblaciones contribuyentes en
tales sistemas, as como una descripcin profunda de la relacin entre ellas, su estructura, funcin y condiciones
ambientales an no han sido alcanzadas. De acuerdo a Ward y col., (2008), todas las causas de la inhibicin pueden
ser evitadas en primera instancia cuando se consideran los parmetros operacionales y de diseo y su relacin y/o
efecto con la microbiologa del proceso, ya que los factores ambientales internos del reactor se ven fuertemente
influenciados por las caractersticas del mismo. Un control sobre estas variables puede asegurar un proceso
favorable.
3.
Revisin de la expresin gentica en comunidades anaerobias

3.1. Usos de la expresin gentica
La expresin gentica se relaciona con la funcionalidad de organismos o comunidades biolgicas. As pues, la

expresin gentica puede elucidar fenmenos complejos en ecosistemas. Cohlen-Kupiec y col. (1997) fusionaron el
promotor para la enzima fijadora de nitrgeno de M. maripaludis (PnifK) con el gen lacZ para elucidar la regulacin
de la expresin. En el promotor de nifK existen dos grupos de secuencias palindrmicas que sirven como sitios de
unin para represores. Ellos reportaron que una mutacin direccionada solo en la primera secuencia palindrmica
de PnifK resulto en una clara de-represin en cultivos crecidos en NH4Cl. En otro experimento, fusiones de genes
probaron que la prolil t-RNA sintetasa (ProRS) de Methanococcus jannaschii poda sintetizar ambos, prolina t-RNA y
cistena t-RNA (Stathopoulos y col., 2000). Este resultado fue inesperado, y ayudo a resolver la discrepancia sobre
la carencia de homlogos de cysS, genes para enzimas sintetizadoras de cisteina t-RNA en M. jannaschii y
Methanobacterium thermautotrophicus.
Por otra parte, anlisis de expresin de genes usando Northern blot revel que el gen 2pgk de 96 pb es transcrito
junto con otros dos marcos de lectura (ORFs) en un solo RNA mensajero de 1600 nucleotidos (Lehmacher y Hensel,
1994). El gen 2pgk codifica la protena 2-fosfoglicerato quinasa, la cual cataliza el primer paso en la sntesis de 2,3difosfoglicerato cclico (cDPG). Se asume que cDPG juega un papel importante en la termo-adaptacin de
metangenos hipertermofilos (Hensel y Knig, 1988), esto se asume debido a las altas concentraciones de estos
compuestos en clulas de Methanothermus fervidus y Methanopyrus kandleri en sus temperaturas ptimas de
crecimiento.
En otra perspectiva, debido a la cercana relacin entre expresin gentica y funcionalidad del sistema, se han hecho
intentos para usar expresin diferencial de genes como una herramienta para indicar desbalances en procesos o
realizar diagnsticos de procesos. En medicina, Rybaczyk y col. (2008) reportaron que la expresin de monoamino
oxidasa-A (MAO-A) es un buen indicador para distinguir entre clulas cancergenas y clulas normales en humanos,
roedores y peces usando informacin extrada de gene expression mnibus. Ellos encontraron que la expresin de
MAO-A disminuye un 95.4% en pacientes humanos y 94.2% en casos de cncer animal cuando se comparan con
controles no cancerosos de casi todo tipo de cnceres. Sin embargo, en cuanto a digestin anaerobia, Freitag y
Prosser (2009) mostraron dificultades en relacionar la actividad funcional con la actividad transcriptiva en humus.
Ellos concluyeron que la transcripcin gentica de un solo gen, en su caso Methyl Coenzima M reductasa (mcrA),
solo permiti una profundizacin limitada en la dinmica del proceso. Encontraron una correlacin ms significativa
al relacionar la tasa del proceso con la proporcin transcrito/gen en vez de solo la abundancia del transcrito.
De este experimento es posible inferir que ms investigacin se necesita para relacionar directamente el
desempeo de un proceso con la transcripcin de genes. Sin embargo, la expresin diferencial de genes seria ms
apta para evaluar las necesidades de una comunidad anaerobia, evaluar el estrs que los organismos estn
sufriendo y as poder tomar medidas en disminuir el estrs biolgico para llegar a mayores rendimientos de metano.
Como ejemplo, Spanheimer y col. (2007) observaron un incremento en copias de qRT-PCR de los genes otaA, otaB
y otaC debido a estrs osmtico en Methanosarcina mazei G1 crecida con 400mM de NaCl comparado con el
control de 38.5 mM. El cluster ota codifica las tres subunidades de la enzima transportadora de glicina betaine
impulsada por ATP, Ota. La glicina betaine es un soluto acumulado en metangenos para combatir estrs osmtico
(Rossler y Mller, 2001). Toma de solutos ser preferida por metangenos a sntesis de solutos de novo, como el
26

glutamoto y N-acetil--lisina. El anlisis de concentraciones internas en extractos de clulas mostr que el

glutamato y N-acetil--lisina eran los nicos solutos acumulados en clulas crecidas en 400 y 800mM de NaCl. Sin
embargo, cuando los cultivos eran suplementados con 1mM de Glicina betaine, concentraciones de glutamato y Nacetil- disminuan en las clulas acopladas a un incremento en glicina betaine, este fenmeno iba a la par de una
pequea disminucin en la expresin del cluster ota. As pues, este tipo de anlisis sobre expresin gentica puede
ser utilizado para evaluar problemas en reactores anaerobios tratando de aguas residuales de alta salinidad como
aquellas provenientes de industrias procesadoras de comida marina (Soto y col., 1993; Chen y col., 2003). Si
perfiles de expresin gentica en estos reactores muestran una sobre expresin de protenas
sintetizadoras/transportadoras de protenas entonces inhibicin puede ser disminuida adicionando pequeas
cantidades de solutos.
Adems, Hendrickson y col. (2007) y Xia y col. (2009) estudiaron la expresin gentica de Methanococcus
maripalidus bajo diferentes limitaciones de nutrientes. Bajo limitacin de hidrgeno Hendrickson y col. (2007),
reportaron un incremento de 4 a 22 veces en enzimas de la metanognesis; principalmente aquellas involucradas en
la reduccin y oxidacin de F420, F420- reductora hidrogenasa (fru), metilenetetrahidrometanopterina deshidrogenasa
(mtd) y metilenetetrahidrometanopterina reductasa (mer). En contraste, Xia y col. (2009) reportaron solo un
incremento de 1.9 veces en la expresin de mtd usando qRT-PCR, pero decremento e incremento en abundancia
de otras 59 y 82 proteinas, respectivamente. Un hecho importante fue la marcada disminucin en la deshidrogenasa
de metilenetetrahidrometanopterina dependiente de H2, Hmd. En los metangenos hidrogenotrficos
metilenetetrahidrometanopterina puede ser reducida usando metilenetetrahidrometanopterina deshidrogenasa
dependiente de F20 (Mtd) o Hmd. La primera ruta requiere la presencia de la hidrogenasa reductora de F420 (Fru o
Frc) mientras que la ltima ruta reduce metilenetetrahidrometanopterina directamente utilizando H2. A pesar de que
ambas rutas estn presentes simultneamente, Hmd es preferida cuando hay abundancia de H2 en el medio, pero
debido a su baja afinidad por el sustrato los metangenos deben cambiar a la ruta de Fru y Mtd cuando hidrogeno
molecular es escaso. De acuerdo con esto, Kato y col. (2008) usando microarreglos en cultimos de M.
thermoautotrophicus bajo limitacin de H2, encontraron un aumento en la expresin de frh, mtd, mer y fwd genes
que involucran la oxidacin y reduccin de F420. Bonacker y col. (1992) tambin observaron un preferencia en la
expresin enzimas entre Metil coenzima M reductasa (McrI tambin conocida como MCRA) y su isoenzima McrII
bajo limitacin de hidrogeno. MCRII no se expres con tasas de gas pequeas (150ml 80%H2/20%CO2) a 70C,
mientras que MCRI no se expres bajo altas tasas de gas (650ml 80%H2/20%CO2) a 55C.
Algunos metangenos son capaces de utilizar alcoholes secundarios como donadores de electrones usando la secAlcohol deshidrogenasa (sec-ADH). Widdel y Wolfe (1989) mostraron que sec-ADH se expresa bajo limitaciones de
H2 en M. thermophilum mientras que en otras tres especies, esto es M. organophilum, M. hungatei y M. bryantii,
requeran de la presencia de acetona para expresar sec-ADH. Es de inters medir el efecto sobre el perfil gentico
en digestores anaerobios con limitacin de H2 y suplementar con agua residual de Molino de aceite de palma, que
es rica en alcoholes secundarios.
3.2. Interacciones de genes en comunidades anaerbicas
Ecosistemas anaerobios como el rumen pueden ser comprendidos aproximadamente de 1000 unidades taxonimicas
operacionales (Hess y col., 2011). Esto vuelve a los ambientes anaerobios altamente dinmicos con fluctuaciones
en niveles de nutrientes, pH y contenido de agua, lo cual provoca un dinamismo en la dominancia entre grupos
trficos. As pues la regulacin de redes metablicas es altamente compleja. La expresin gentica puede usarse
para relacionar actividades esenciales con factores ambientales y ltimamente con desempeo de proceso. Existen
diferentes mtodos para estudiar la diversidad funcional como Microarreglos, qRT-PCR, FISH y MAR-FISH. Lange y
col. (2000) desarrollaron un protocolo para transcripcin inversa PCR in situ para monitorear la expresin de
Methanosarcina mazei S-6. Concluyeron que tcnicas de PCR in situ acopladas con identificacin de organismos
con FISH es una manera de determinar los organismos que expresan genes especficos bajo ciertas condiciones.
3.2.1. Expresin dependiente de sustratos
Como se mencion en la seccin 2, el primer paso en la digestin anerobia es la hidrolisis. Doerner y col. (1992)
mostraron que al alimentar con celulosa, transcripcin diferencial de cel B y celD era regulada, pero no la
transcripcin de celA y celC (estos ltimos dos genes parecen ser constitutivos) en Ruminococcus flavefaciens FD1. Vercoe y col. (2003) estudiaron despus el mecanismo de fosforilacion-defosforilacion de R. flavefaciens FD-1.
27

Encontraron que en clulas cultivadas con celulosa fosforilaban la treonina en proteinas, mientras que clulas
cultivadass con celubiosa fosforilaban serina. Esta diferencia en aminocidos fosforilados puodra regular la
induccin y coordinacin de expresin de genes celulolticos en R. flavifaciens FD-1.
Despus de la hidrlisis de polmeros compuestos muchos productos de fermentacin son generados. El propionato
es un importante intermediario en la digestin anaerobia. Ariesyadi y col. (2007) estudiaron la diversidad funcional
de lodos granulares bajo diferentes concentraciones de 14C-propionato viz. 0.5, 2.5, 5 y 15 mM. Anlisis con MARFISH revelaron que 52-62% de clulas oxidadoras de propionato eran Smithella sp. SR en todas las
concentraciones de propionato. Smithella sp. LR componen 42% de las clulas MAR-positivas en la concentracin
de 0.5mM, pero este porcentaje disminuyo drsticamente en las dems concentraciones. Mientras que clulas de
Syntrophobacter componan solo el 6% de las clulas MAR-positivas en la concentracin 0.5mM de propionato e
incrementaron entre 16-31% en el resto de los tratamientos. En este mismo estudio, Methanosaeta fue la nica
arquea que mostr positividad MAR y componan solo del 7-10% de las clulas MAR-positivas.
Oxidacin de propionato por bacterias sintrficas lleva a la produccin de H2 y formiato estos compuestos en
concentraciones elevadas pueden inhibir la oxidacin de propionato, lo que llevara a desbalance del proceso. As
pues, bacterias sintrficas necesitan la presencia de organismos hidrogenotrficos cuando se cultivan con
propionato. Sin embargo, an en la presencia de organismos hidrogenotraficos las concentraciones de formiato
pueden elevarse, asi que las bacterias sintrficas expresan deshidrogenasas de formato (FDH), para oxidar
formiato. De Bok y col. (2003) purificaron dos enzimas FDH de Sytrophobacter fumaroxidans que tambin pueden
reducir CO2 en mono y co-cultivos creciendo con fumarato y propionato, respectivamente. Los mismos autores
tambin reportaron mayores niveles de ambas enzimas cuando las bacterias sintrficas eran crecidas en la
presencia de M. hungateii.
Esto puede ser debido a que el formiato es un portador de electrones ms obvio que el H2 difusivo por su solubilidad
en el agua. As pues ambas enzimas son necesarias para que los organismos crezcan con propionato (de Bok y
col., 2002), una de las FDHs reduce equivalentes de formiato y la otra para fijar CO2 por la va reversa de
rompimiento de acetil-coenzima. En efecto, Kato y col. (2009) que probaron con microarreglos registraron una mayor
expresin de FdhII en cultivos de Pelotomaculum thermopropionicum con M. thermautotrophicus creciendo en
alcohol y propionato al contrario de monocultivo P. thermopropionicum crecido en fumarato. Adicionalmente,
observaron una sobre-regulacin en la liasa piruvato:formiato (Pfl) que cataliza la liberacin de formiato por la
conversin de piruvato a Acetil-CoA en co-cultivos sintrficos. Adems, usando cluster jerrquico se mostro una
sobre-regulacin de 2.4% de los genes y una baja-regulacin 1.7% de los clusters de genes en los co-cultivos de
todos los que estaban degradando diferentes sustratos, mientras que los porcentajes de expresin gentica variaron
entre 10.2% y 33.4% en todos los tratamientos. As pues, solamente la asociacin sintrfica falla en explicar la gran
diferencia en perfiles de expresin, sugiriendo que estos cambios en regulacin son altamente dependientes del
sustrato en vez de influencia sintrfica.
Una ruta principal en la degradacin de propionato es la Metil-Malonil-CoA (MMC). Kato y col. (2009) mostraron la
expresin de enzimas pertenecientes a esta ruta (el cluster mmc) en cultivos alimentados con propionato e
inesperadamente en aquellos alimentados con lactato. Usualmente los organismos sintrficos exhiben fases lag
prolongadas, sin embargo se encontr que el lactato estimulaba la expresin de la ruta para la oxidacin de
propionato, disminuyendo la fase lag exhibida en tratamientos de propionato. Muchas veces fallas en el digestor son
debidas a la acumulacin de cidos grasos, ya que estos inhiben a los metangenos; el propionato inhibe a los
metangenos en un mayor nivel. Suplementar lactato podra probarse para remediar problemas como la
acumulacin de propionato.
La metanognesis es considerada el ltimo paso en la digestin anaerobia, llevada a cabo por diferentes grupos de
arqueas, denominadas metangenos. Los metangenos son susceptibles a cambios externos en el medio. Se han
hecho estudios para relacionar la expresin de gen mcrA con la produccin de metano (Freitag y Prosser, 2009).
Guo y col. (2008), observaron una disminucin del 8% en la produccin de metano en la fermentacin de rumen al
adicionar saponinos de t, mientras que la expresin del gen mcrA disminuyo 76%. Ellos atribuyen esta reduccin
drstica de mcrA a una disminucin en la poblacin de protozoarios del 79%, ya que se sabe que los metangenos
realizan endosimbiosis con protozoarios ciliados. A partir de esto podemos concluir que es difcil encontrar una
correlacin directa entre la expresin de un solo gen con la produccin de metano, el cual involucrada mltiples
procesos en una comunidad microbiana compleja. En el estudio de Guo y col. (2008) tambin se observ que una
reduccin en protozoarios llev a un incremento molar en propionato de 2.6%. Acumulacin de propionato en un
28

reactor puede llevar a la inhibicin de metangenos, la cual en cambio, disminuye el consumo de hidrogeno, y esto
llevara a una inhibicin en la oxidacin de propionato lo que disminuira la cantidad de hidrogeno siendo generada,
esto causara tambin un estrs de limitacin de hidrogeno en los metangenos. Kota y col. (2008) reportaron una
sobre-regulacin de transcritos de enzimas reductoras y oxidadoras de F420 durante limitacin de hidrogeno, bajo pH
y condiciones estticas. Por el contrario, en los metangenos acetoclsticos, M. mazei Go1, Hovey y col. (2005)
mostraron una disminucin en la expresin de estas enzimas reductoras y oxidadoras de F420. Sin embargo, ellos
tambin observaron un aumento en la expresin de ferrodoxinas y flavoproteinas no caracterizadas las cuales se
presumen estn involucradas como portadoras de electrones en la ruta acetoclastica. Hovey y col. (2005) tambin
mostraron una expresin elevada de enzimas metiltransferasas viz. mtaA1. mtaB1 y mtaC1 cuando las clulas
fueron cultivadas con metanol. Estas enzimas estn involucradas en la metanognesis a partir de compuestos
metilados. Shih y Lai (2010) estudiaron la respuesta de estrs hipo e hiperosmotico en Methanohalophilus
portucalensis cultivados con trimetilamina. Ellos observaron un aumento en los transcritos relacionados a la
produccin metanognica a partir de productos metilados. Asi pues, M. portucalensis requiere energa para superar
estrs osmtico. Muchos metanogenos tambin podran tener similares respuestas.
CONCLUSIN
La digestin anaerobia es una biotecnologa que ofrece una alternativa prometedora a los problemas energticos y
ambientales actuales. Sin embargo, ms investigacin es requerida para comprender ms detalladamente los
mecanismos de interaccin entre los grupos microbianos, la produccin de metabolitos y los factores ambientales y
su relacin como los agentes inhibitorios en orden de incrementar los rendimientos de metano, de forma que las
necesidades energticas mundiales puedan ser cubiertas satisfactoriamente. El estudio de la expresin gentica
surge como una respuesta a dicha necesidad, pudiendo alcanzar un mejor entendimiento de las interacciones
trficas de los microorganismos, sus respuestas a varios tipos de estrs y elucidar fenmenos complejos de las
comunidades. Adicionalmente, la expresin gentica puede agregar pistas de las necesidades que tienen las
comunidades de un digestor anaerobio y as tomar las mejores decisiones para lidiar con las respuestas al estrs,
mejorando as los rendimientos de metano.
REFERENCIAS
Ali M y Sreekrishnan TR. 2001. Aquatic toxicity from pulp and paper mill effluents: a review. Advances in
Environmental Research. 5: 175-196.
Angelidaki I y Ahring BK. 1993. Thermophilic digestion of livestock waste: the effect of ammonia, Applied
Microbiology and Biotechnology. 38: 560-564.
Ariesyady HD, Ito T, Yoshiguchi K y Okabe S. 2007. Phylogenetic and functional diversity of propionate-oxidizing
bacteria in an anaerobic digester sludge. Applied Microbiology and Biotechnology. 75: 673-683.
Asp E, Mart MC, Jara A y Roeckel M. Ammonia inhibition in the anaerobic treatment of fishery effluents. 2001.
Water Environmental Research. 73: 15464.
Bekmezci OK, Ucar D, Haksonen AH y Sahinkaya E. 2011. Sulfidogenic biotreatment of synthetic acid mine
drainage and sulphide oxidation in anaerobic baffled reactor. Journal of Hazardous Materials. In Press.
doi:10.1016/j.jhazmat.2011.01.087.
Ben-Bassat A, Lamed R y Zeikus JG. 1981. Ethanol production by thermophilic bacteria: metabolic control of end
product formation in Thermoanaerobium brockii. Journal of Bacteriology. 146:192199.
Bonacker LG, Baudner S y Thauer RK. 1992. Differential expression of the two methyl-coenzyme M reductases in
Methanobacterium thermoautotrophicum as determined immunochemically via isoenzyme-specific antisera.
European Journal of Biochemistry. 206: 87-92,
Boone DR y Bryant MP. 1980. Propionate-degrading bacterium, Syntrophobacter wolinii sp. nov. gen. nov., from
methanogenic ecosystems. Applied and Environmental Microbiology. 40: 626632.
29

Chen Y, Cheng JJ y Creamer KS. 2008. Inhibition of anaerobic digestion process: a review. Bioresource Technology.
99: 4044-4064.
Cohen-Kupiec R, Blank C y Leigh JA. 1997. Transcriptional regulation in Archaea: in vivo demonstration of a
repressor binding site in a methanogen. Proceedings of The National Academy Of Sciences. 94: 1316-1320.
Colleran E, Concannon F, Golden T, Geoghegan F, Crumlish B, Killilea E, Henry M y Coates J. 1992. Use of
methanogenic activity tests to characterise anaerobic sludges, screen for anaerobic biodegradability and determine
toxicity thresholds against individual trophic groups and species. Water Science and Technology. 25: 31-40.
Daoming S y Forster CF. 1993. An examination of the start up of a thermophilic upflow sludge blanket reactor
treating a synthetic coffee waste. Environmental Technology. 14: 9656-972
De Baere L, Devocht M, Assche P y Verstraete W. 1984. Influence of high sodium chloride and ammonium chloride
salt levels on methanogenic association. Water Research. 18: 543-548.
De Bok FAM, Hagedoorn PL, Silva PJ, Hagen WR, Schiltz E, Fritsche K y Stams AJM. 2003. Two W-containing
formate dehydrogenases (CO2 reductases) involved in syntrophic propionate oxidation by Syntrophobacter
fumaroxidans. European Journal of Biochemistry. 270: 2476-2485
Demirel B y Scherer P. 2008. The roles of acetotrophic and hydrogenotrophic methanogens during anaerobic
conversion of biomass to methane: a review. Reviews in Environmental Science and Bio/Technology. 7: 173190.
Demirel B y Yenign O. 2002. Two-phase anaerobic digestion processes: a review. Journal of Chemical Technology
and Biotechnology. 77: 743-755.
Doyle O, OMalley J, Clausen E, Gaddy J. 1983. Kinetic improvements in the production of methane from cellulosic
residues. Energy Biomass Wastes. 7: 54561.
Feijoo G, Vidal G, Moreira MT, Mendez R y Lema JM.1995. Degradation of high molecular weight compounds of
kraft pulp mill effluents by a combined treatment with fungi and bacteria. Biotechnology Letters. 17: 1261-1266.
Fischer E, Lieske R y Winzer K. 1932. Biologische Gasreaktiohen, lI. Mitteilung: fiber die Bildung yon Essigsfiure bei
der biologischen Umsetzung von Kohlenoxyd und Kohlensfiure mit Wasserstoff zu Methan. Biochemistry Z. 245: 212
Freedman DL y Gossett JM. 1991. Biodegradation of dichloromethane and its utilization as growth substrate under
methanogenic conditions. Applied and Environmental Microbiology. 57: 2847-2857
Freitag TE y Prosser JI. 2009. Correlation of methane production and functional gene transcriptional activity in a peat
soil. Applied and Environmental Microbiology. 75: 6679-6687
Gavala H, Yenal U, Skiadas I, Westermann P y Ahring B. 2003. Mesophilic and thermophilic anaerobic digestion of
primary and secondary sludge. Effect of pre-treatment at elevated temperature. Water Research. 37: 4561-4572.
Gavala HN y Ahring, BK. 2002. Inhibition of the anaerobic digestion process by linear-alkylbenzene sulfonates.
Biodegradation. 13: 201209.
Gavala, H. N. y Lyberatos, G. 2001. Influence of anaerobic culture acclimation on the degradation kinetics of various
substrates. Biotechnology and Bioengineering. 74(3): 181-195.
Godbole SH, Gore JA, Ranade DR. 1981. Associative Action of the Various Groups of Microorganisms in the
Production of Biogas. Biovignyanam. 7: 107113.
Grady Jr CPL, Daigger GT y Lim HC. 1999. Biological Waste Water Treatment. Marcel Dekker, New York.
30

Guo YQ, Liu JX, Lu Y, Zhu WY, Denman SE y McSweeney CS. 2008. Effect of tea saponin on methanogenesis,
microbial community structure and expression of mcrA gene, in cultures of rumen micro-organisms. Letters in
Applied Microbiology. 47: 421-426
Hazelwood GP y Nugent JHA. 1978. Leaf fraction 1 protein as a nitrogen source for the growth of a proteolytic rumen
bacterium. Journal of General Microbiology. 106:369-371.
Hendrickson EL, Haydock AK, Moore BC, Whitman WB y Leigh JA. 2007. Functionally distinct genes regulated by
hydrogen limitation and growth rate in methanogenic Archaea. Proceedings of the National Academy of Sciences of
the United States of America. 104: 8930-8934
Hess M, Sczyrba A, Egan R, Kim TW, Chokhawala H, Schroth G, Luo S, Clark DS, Chen F, Zhang T, Mackie RI,
Pennacchio LA, Tringe SG, Visel A, Woyke T, Wang Z y Rubin EM. 2011. Metagenomic discovery of biomassdegrading genes and genomes from cow rumen. Science. 331: 463-467.
Hovey R, Lentes S, Ehrenreich A, Salmon K, Saba K, Gottschalk G, Gunsalus RP y Deppenmeier U. 2005. DNA
microarray analysis of Methanosarcina mazei G1 reveals adaptation to different methanogenic substrates.
Molecular Genetics and Genomics. 273: 225-39.
Hwu CS y Lettinga G. 1997. Acute toxicity of oleate to acetate-utilizing methanogens in mesophilic and thermophilic
anaerobic sludges. Enzyme and Microbiology Technology. 21: 297301.
Isa Z, Grusenmeyer S. y Verstraete W. 1986. Sulfate reduction relative to methane production in high-rate anaerobic
digestion: microbiological aspects. Applied and Environmental Microbiology. 51: 580-587.
Jin P, Bhattacharya SK, Williama CJ y Zhang H. 1998. Effects of sulfide addition on copper inhibition in
methanogenic systems. Water Research. 32: 977988.
Kansal A, Rajeshwari KV, Balakrishnan M, Lata K, y Kishore VVN. 2004. Anaerobic digestion technologies for
recovery from industrial waste water- a study in Indian context. TERI Information Monitor on Environmental
Science.3: 67-75.
Kato S, Kosaka T y Watanabe K. 2008. Comparative transcriptome analysis of responses of Methanothermobacter
thermautotrophicus to different environmental stimuli. Environmental Microbiology. 10: 893-905
Kato S, Kosaka T y Watanabe K. 2009. Substrate-dependent transcriptomic shifts in Pelotomaculum
thermopropionicum grown in syntrophic co-culture with Methanothermobacter thermautotrophicus. Microbial
Biotechnology. 2: 575-584
Kayhanian M., 1999. Ammonia inhibition in high-solids biogasification: an overview and practical solutions.
Environmental Technology. 20: 355365.
Koster IW y Koomen E. 1988. Ammonia inhibition of the maximum growth rate (m) of hydrogenotrophic
methanogens at
various pH-levels and temperatures. Applied Microbiology and Biotechnology. 28: 500505.
Koster IW y Lettinga G. 1984.The influence of ammonium-nitrogen on the specific activity of pelletized methanogenic
sludge, Agricultural Wastes. 9: 205-216.
Koster IW, Rinzema A, De Vegt AL y Lettinga G. 1986. Sulfide inhibition of the methanogenic activity of granular
sludge at various pH levels. Water Research. 20: 15611567.
Kroeker, EJ, Schulte DD, Sparling AB y Lapp HM. 1979. Anaerobic treatment process stability. Journal of the Water
Pollution Control Federation. 51: 718-727.
Kroiss H y Plahl-Wabnegg F. 1983. Sulphide toxicity with anaerobic wastewater treatment. Environmental
Symposium on Anaerobic Wastewater treatment, The Netherlands, 72-85.
31

Kugelman IJ y Chin KK. 1971. Toxicity, synergism, and antagonism in anaerobic waste treatment processes. In:
Anaerobic Biological Treatment Processes, American Chemical Society Advances in Chemistry Series 105: 5590.
Lalman J y Bagley DM. 2001. Anaerobic Degradation and Methanogenic Inhibitory Effects of Oleic and Stearic Acids.
Water Research. 35: 2975-2983.
Lange M, Tolker-Nielsen T, Molin S y Ahring BK. 2000. In situ reverse transcription-PCR for monitoring gene
expression in individual Methanosarcina mazei S-6 cells. Applied and Environmental Microbiology. 66: 1796-1800.
Lee YH y Pavlostathis SG. 2004. Decolorization and Toxicity of Reactive Anthraquinone Textile Dyes under
Methanogenic Conditions. Water Research 38:1838-1852.
Lehmacher A y Hensel R. 1994. Cloning, sequencing and expression of the gene encoding 2-phosphoglycerate
kinase from Methanothermus fervidus. Molecular and General Genetics. 242: 163-168.
Lin CY. 1993. Effect of heavy metals on acidogenesis in anaerobic digestion. Water Research. 27: 147152.
Liu Y y Boone DR. 1991. Effects of salinity on methanogenic decomposition. Bioresource Technology. 35: 271273.
Livera, J, McLaughlin MJ, Hettiarachchi Kirby JK y Beak D. Cadmium solubility in paddy soils: effects of soil
oxidation, metal sulfides and competitive ions. Science of the Total Environment. 409: 1489-1497.
Ljungdahl LG. 1986. The autotrophic pathway of acetate synthesis in acetogenic bacteria. Annual Review of
Microbiology. 40: 415-450.
Maillacheruvu, KY, Parkin GF, Peng WC, Kuo WC, Oonge ZI y Lebduschka V. 1993. Sulfide toxicity in anaerobic
systems fed sulfate and various organics. Water Environmental Research. 65: 100109.
McCarty PL. 1964. Anaerobic waste treatment fundamentals III. Public Works. 95: 91-94.
McInerney MJ y Bryant MP. 1981. Anaerobic degradation of lactate by syntrophic associations of Methanosarcina
barkeri and Desulfovibrio and effect of H2 on acetate degradation. Applied and Environmental Microbiology. 41: 346354.
Nagamani B, y Ramasamy K. 1999. Biogas Technology: An Indian Perspective. Current Science. 77: 44-55.
Nies, D.H. 1999. Microbial heavy-metal resistance. Applied Microbiology and Biotechnology. 51: 730750
Parkin GF y Owen WF. 1986. Fundamental of anaerobic-digestion of wastewater sludge. Journal of Environmental
Engineering. 112: 867920.
Pavlostathis, S.G. and Giraldo-Gomez, E. 1991. Kinetics of anaerobic treatment: a critical review. Critical Reviews in
Environmental Control. 21: 411490.
Preeti Rao P, Shivaraj D y Seenayya G. 1993. Succession of microbial population in cow dung and poultry litter
waste digesters during methanogenesis. Indian Journal of Microbiology. 33: 185189.
Ramasamy K, Nagamani B y Kalaichelvan G. 1991. 31st Annual Conference of AMI held at TNAU, Coimbatore, 96
p.
Ramsamy K. 1997. Proceedings of the National Symposium on Community and Institutional Biogas Complexes held
at Punjab Agricultural University, Ludhiana, 45 p.
Raskin L, Rittmann BE y Stahl DA. 1996. Competition and coexistance of sulfate-reducing and methanogenic
populations in anaerobic biofilms. Applied and Environmental Microbiology. 62: 3847-3857.
Rinzema, A, van Lier J y Lettinga G. 1988. Sodium inhibition of aceticlastic methanogens in granular sludge from a
UASB reactor. Enzyme and Microbial Technology. 10: 2432.
32

Schink B. 1997. Energetics of syntrophic cooperation in methanogenic degradation. Microbiology and Molecular
Biology Reviews. 61(2): 262280.
Shih CJ y Lai MC. 2010. Differentially expressed genes after hyper- and hypo-salt stress in the halophilic archaeon
Methanohalophilus portucalensis. Canadian Journal of Microbiology. 56: 295-307
Siebert ML y Torien DF. 1969. The proteolytic bacteria present in the anaerobic digestion of raw sewage sludge,
Water Research. 3: 241-250.
Sossa K, Alarcn M, Asp y Urrutia H. 2004. Effect of ammonia on the methanogenic activity of methylaminotrophic
methane producing archaea enriched biofilm. Anaerobe. 10: 13-18.
Soto M, Mndez R y Lema J. Sodium Inhibition and sulfate reduction in the anaerobic treatment of mussel
processing waste. 1993. Journal of Chemical Technology and Biotechnology. 58:1.
Spanheimer R, Hoffmann M, Kgl S, Schmidt S, Pflger K y Mller V. 2008. Differential regulation of Ota and Otb,
two primary glycine betaine transporters in the methanogenic archaeon Methanosarcina mazei G1. Journal of
Molecular Microbiology and Biotechnology. 15: 255-263.
Speece RE. 1996. Anaerobic biotechnology for industrial wastewaters. Archae Press, Nashville, Tennessee, USA.
Sprott GD y Patel GB. 1986. Ammonia toxicity in pure cultures of methanogenic bacteria. Systematic and Applied
Microbiology. 7: 358363.
Stathopoulos C, Tong L, Longman R, Vothknecht UC, Becker HD, Ibba M y Soll D. 2000. One Polypeptide with Two
Aminoacyl-tRNA Synthetase Activities. Science. 287: 479.
Sung S. y Liu T. 2003. Ammonia inhibition on thermophilic digestion. Chemosphere 53: 4352.
Toeri en DF y Hattingh WHJ. 1969. Anaerobic digestion. 1. The microbiology of anaerobic digestion. Water
Research. 3:385
Ulmanu M, Maranon, E., Fernandez, Y., Castrillon, L., Anger, I., y Dumitriu, D., 2003. Removal of copper and
cadmium ions from diluted aqueous solutions by low cost and waste material adsorbents. Water, Air and Soil
Pollution. 142: 357373.
Ungerfeld, EM, Rust SR, Boone DR y Liu Y. 2004. Effects of several inhibitors on pure cultures of ruminal
methanogens. Journal of Applied Microbiology. 97: 520-526.
Vallero MVG, Lettinga G. y Lens PNL. 2003. Long-term adaptation of methanol-fed thermophilic (55 C) sulfatereducing reactors to NaCl. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology. 30: 375382.
van Kessela JAS y Russell JB. The effect of pH on ruminal methanogenesis. Microbial Ecology. 20: 205-210
Veeken A y Hamelers B. 1999. Effect of temperature on hydrolysis rate of selected biowise components.
BioresourceTechnology. 69: 249254.
Vercoe PE, Kocherginskaya SA y White BA. 2003. Differential protein phosphorylationdephosphorylation in
response to carbon source in Ruminococcus flavefaciens FD-1. Journal of Applied Microbiology. 94: 974-980
Wang Y, Zhang Y, Wanga J y Menga L. 2009. Effects of volatile fatty acid concentrations on methane yield and
methanogenic bacteria. Biomass and Bioenergy. 33: 848-853.
Ward AJ, Hobbs PJ, Holliman PJ y Jones DL. 2008. Optimization of the anaerobic digestion of agricultural resources.
Bioresource Technology. 99: 7928-7940.
33

Widdel F y Wolfe RS. 1989. Expression of secondary alcohol dehydrogenase in methanogenic bacteria and
purification of the F420-specific enzyme from Methanogenium thermophilum strain TCI. Archives of Microbiology.
152: 322-328
Wiegant, WM y Zeeman G. 1986. The mechanisms of ammonia inhibition in the thermophilic digestion of livestock
wastes. Agricultural Wastes. 16: 243-253.
Wieringa, K. T. 1936. Over het verdwijnen van waterstof en koolzuur onder anaerobe voorwarden. Antonie van
Leeuwenhoek Journal of Microbiology and Serology. 3:263-273.
Wong, MH y Cheung YH. 1995. Gas production and digestion efficiency of sewage sludge containing elevated toxic
metals. Bioresource Technology. 54: 261268.
Wood HG. 1991. Life with CO or CO2 and H2 as a source of carbon and energy. Federation of American Societies for
Experimental Biology Journal. 5: 156-163
Xia Q, Wang T, Hendrickson EL, Lie TJ, Hackett M y Leigh JA. 2009. Quantitative proteomics of nutrient limitation in
the hydrogenotrophic methanogen Methanococcus maripaludis. BMC Microbiology. 9: 149
Zayed, G. y Winter, J. 2000. Inhibition of methane production for whey by heavy metals protective effect of sulfide.
Applied Microbiology and Biotechnology, 53: 726731.
Zeeman G, Wiegant WM, Koster-Treffers ME y Lettinga, G., 1985. The influence of the total ammonia concentration
on the thermophilic digestion of cow manure. Agricultural Wastes, 14, 1935.
Zhou HB y Qiu, GZ. 2006. Inhibition effect of ammonia nitrogen on specific methanogenic activity of anaerobic
granular sludge. Journal of Central South University of Technology, 13, 63-67.
34

Expresion Genetica de La Metanogenesis

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Expresion Genetica de La Metanogenesis

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

2011 Volumen 3, No.

EXPRESIN GENTICA EN LA DIGESTIN ANAEROBIA: UN PASO

Laboratorio de Biorremediacin de la Escuela de Ciencias Biolgicas de la Universidad Autnoma de

2011 Volumen 3, No. 6

Interaccin Microbiana en la Digestin Anaerobia

(lurico, mirstico, palmtico)

CIDOS GRASOS VOLTILES

Arqueas Metanognicas Hidrogenotrf icas

Fig. 1. Interacciones microbianas en el proceso de degradacin anaerobia.

2011 Volumen 3, No. 6

1.1. Primera Etapa: Hidrlisis y Fermentacin

Hidrlisis, la solubilizacin de los compuestos orgnicos

donde rs es la velocidad de consumo del sustrato, S es la concentracin de sustrato y Kh es la constante de

Constante hidroltica (d-1)

2011 Volumen 3, No. 6

1.1.2. Fermentacin o acidogenesis

2011 Volumen 3, No. 6

Algunos otros microorganismos fermentativos predominantes en el rumen son Clostridium cellobioparum,

2011 Volumen 3, No. 6

1.2. Segunda Etapa: Acetognesis

E' de las reacciones

1.2.1. Acetognesis por hidrogenacin: Bacterias sintrficas productoras obligadas de hidrgeno.

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

el requerimiento de ambientes con bajos potenciales de reduccin,

2011 Volumen 3, No. 6

Methanosarcina barkeri (morfologa: paquete cuadrado de cuatro clulas)

2011 Volumen 3, No. 6

M. jannashii, y mptN est involucrado en la biosntesis de metanoprotena. Ambos, el tetrahidrofolato y la

Inhibicin en el proceso de degradacin anaerobia

2011 Volumen 3, No. 6

el amoniaco inhibe directamente la sntesis de enzimas necesarias para la produccin de metano

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

Revisin de la expresin gentica en comunidades anaerobias

La expresin gentica se relaciona con la funcionalidad de organismos o comunidades biolgicas. As pues, la

2011 Volumen 3, No. 6

glutamoto y N-acetil--lisina. El anlisis de concentraciones internas en extractos de clulas mostr que el

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

2011 Volumen 3, No. 6

Вам также может понравиться