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MARCADORES MOLECULARES PARA EL DIAGNSTICO TEMPRANO DE LA

DIABETES MELLITUS

Jess Morlett Chvez , Teresa Esquivel , Ivonne Flores Pedraja , Alejandro Zugasti Cruz ,
Guadalupe de la Cruz Galicia2, Ana Cecilia Cepeda Nieto3*
1

Laboratorio Anlisis clnicos y Diagnstico Molecular y 2Laboratorio de Inmunologa, Facultad De


Ciencias Qumicas; 3Facultad de Medicina, Universidad Autnoma de Coahuila Unidad Saltillo Av.
Venustiano Carranza esquina con Jos Crdenas. Repblica Oriente. CP 25280. Saltillo Coahuila. Tel: (844)
4169213 Fax: 4390511*anacecilia@gmail.com.

1.

RESUMEN

La diabetes es un trastorno crnico de base gentica caracterizado por diferentes manifestaciones. El incremento de
personas con diabetes en aos recientes se debe a factores genticos y al incremento de personas obesas. El
conocimiento de mecanismos genticos es importante porque permite la identificacin de las variantes gnicas que
influencian la enfermedad. Herramientas moleculares como la Reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR) ha permitido
discernir los genes y sus variantes relacionados a la diabetes. Las personas con ciertos polimorfismos en mltiples
genes puedes ser susceptible a la diabetes; sin embargo, estudios previos has demostrado que los genes CAPN10 y
PPR juegan un papel importante para el desarrollo de la diabetes y en consecuencia pudieran ser genes candidatos
para utilizarlos como diagnstico molecular y proveer as la deteccin oportuna de esta enfermedad para evitar
complicaciones de la Diabetes como retinopatas, dao renal, daos en el SNC, entre otros.

2.

DEFINICIN Y CLASIFICACIN DE DIABETES

La palabra diabetes deriva del griego diabeinen pasar a travs o salir con fuerza; mientras que mellitus deriva del latn
y significa dulce como la miel (Greespan, 1998). La diabetes mellitus se presenta como un trastorno primario del
metabolismo de carbohidratos, de etiologa multifactorial, aunque destaca la influencia gentica sobre la susceptibilidad
para la deficiencia absoluta o relativa de insulina, resistencia a esta ltima o ambas, llevando finalmente a hiperglucemia
con las consecuencias a largo plazo de esta alteracin (De Anda-Turati y cols., 2000). Este trastorno crnico se
caracteriza por tres tipos de manifestaciones: a) sndrome metablico alterado a consecuencia de un dficit absoluto o
relativo de la secrecin de insulina, reduccin de la actividad biolgica de sta o ambas; que consiste en hiperglucemia,
glucosuria, polifagia, polidipsia y poliuria, adems de alteraciones en el metabolismo de lpidos y protenas, b) sndrome
vascular, macroangioptico o microangioptico, afecta todos los rganos pero especialmente el corazn, la circulacin
cerebral y perifrica, riones y retina, y c) sndrome neuroptico, autnomo o perifrico (Permutt y cols., 2005 y Kumar
Das y Elbien, 2006). Adems, la diabetes se considera como una causa fundamental en diferentes problemas de salud,
especficamente en enfermedades cardiovasculares (Dedoussis y cols., 2007). Por su parte, la diabetes se clasifica en:
1) diabetes mellitus tipo 1 (DT1), resulta de la destruccin autoinmune de las clulas (productoras de insulina)
provocando la insuficiencia de insulina, 2) diabetes mellitus tipo 2 (DT2), causada por la disminucin en la secrecin de
insulina y por la resistencia a la insulina en los tejidos blanco (hgado y msculos) (Ding y Triggle, 2005; Lyssenko y
cols., 2005), 3) diabetes gestacional (DG) se define como un estado de intolerancia a la glucosa durante el embarazo y
4) Diabetes juvenil (DJ), se deriva a partir de ciertas cirugas u otras enfermedades (Figura 1) (Permutt y cols., 2005).

Figura 1. Clasificacin de la diabetes y caractersticas principales de cada uno de los tipos de diabetes.

3.

COMPLICACIONES DE LA DIABETES

Los estadios tempranos de la DT2 se mantienen inciertos y en controversia; sin embargo, se sabe que el estadio tardo
de sta, est gobernado por el incremento en la produccin de glucosa heptica, disminucin en la secrecin de insulina
y la accin de sta sobre su tejido blanco est disminuida (Figura 2) (Kumar Das y Elbein, 2006). Como enfermedad
crnica se presenta con graves desenlaces, entre los que sobresalen: insuficiencia renal crnica, dao cardiovascular,

ceguera resultante de la retinopata diabtica, nefropata, invalidez y en el peor de los casos, muerte
prematura (Garcia
Pea y cols., 1995). Cabe destacar que las complicaciones vasculares asociadas a diabetes son los problemas ms
frecuentes que enfrentan los pacientes diabticos y la principal causa de ms de 3 millones de las muertes
cardiovasculares en el mundo (Danael G y cols., 2006).

Figura 2. El incremento de glucosa en plasma est determinado por efectos genticos, en la dieta y el estilo de vida.

4.

ETIOLOGA DE LA DIABETES

Actualmente, se tiene mayor claridad acerca de la predisposicin y el desarrollo de la DM2.Para lograr entender las
bases moleculares de este padecimiento no es suficiente conocer solo las alteraciones estructurales o funcionales a nivel
molecular, sino tambin las interacciones del individuo con el medio ambiente ya que ello conduce a la alteracin o al
aumento de la expresin de uno o de varios genes (Panduro y cols., 2001). Como ya se describi previamente, en la
diabetes participan diversos genes y sus productos por lo cual se considera poli-gentica (Honeyman y cols., 1995).
Dedoussis y cols. (2007) sugirieron que los genes/protenas que se expresan y regulan el funcionamiento de las clulas
pancreticas pueden ser genes candidatos para desarrollar la diabetes; sin embargo, estos genes pueden ser utilizados
como marcadores para el diagnstico temprano de sta. Sin embargo, se crea que los principales generadores de
riesgo gentico para desarrollar diabetes se encuentran los genes HLA; los cuales se localizan en el cromosoma 6 y
presentan varios polimorfismos (HLA-A2, Cw1, B56, DR4, DQw8) (Honeyman y cols., 1995; Permutt y cols., 2005). Al
respecto, Florez y cols. (2008) buscaron polimorfismos de un simple nucletido (SNP por sus siglas en ingls) en el gen
WFS1, ste se localiza en el cromosoma 4p16, codifica para una protena transmembrana de 100 kilodaltones (KDa) y
se expresa en neuronas y clulas pancreticas. Los resultados indicaron que ste gen puede estar asociado a la
diabetes inspida, mellitus y atrofia ptica (sndrome de Wolfram). Los genes ABCC8 y KCNJ11 (Kir6.2) se localizan en el
cromosoma 11p15.1, presentan SNPs como 74(3p+215), 76(A190) y 77(E23K), estos se asocian a desordenes en la

secrecin de insulina. El gen CAPN10, conocido como el gen comn de la diabetes, se localiza en el cromosoma 2 y
codifica para la calpaina-10, una cistena-proteasa. Ciertos polimorfismos en ste gen estn relacionados con la diabetes
(Cuadro 1). Otro gen relacionado con la diabetes es el gen PPAR, ste presenta varios subtipos conocidos como
PPAR, PPAR/ y PPAR . Este ltimo es codificado por 3 genes diferentes; PPAR1, PPAR2 y PPAR3. Existe una
variante de este gen conocido como PPAR2 que se expresa slo en tejido adiposo, donde regula la diferenciacin
adipognica. En ratones knockout se demostr que mutaciones en PPAR2 provocan variacin en la sensibilidad a la
insulina (Lyssenko y cols., 2005; Permutt y cols., 2005; Dedoussis y cols., 2007; Florez y col., 2007). Otros productos de
los genes que pudieran estar relacionados con la diabetes son los derivados de las citocinas del tejido adiposo, Factor de
necrosis tumoral (TNF) e interleucina 6 (IL6). En la mayora de los casos de diabetes ms de un gen est
desregulado; sin embargo, tambin existe la diabetes considerada como monogentica, en donde existen una o ms de
una mutacin en slo un gen, causa la diabetes juvenil (Slingerland, 2006).
El incremento de personas con diabetes en aos recientes no slo se debe a los factores genticos si no al incremento
de personas obesas (Dedoussis y cols., 2007). Previas investigaciones sugieren que la resistencia a la insulina se debe
al incremento de los cidos grasos en la clula provocando la inhibicin de las vas implicadas en el catabolismo de la
glucosa, adems de la deficiencia en el metabolismo de los cidos grasos en los adipocitos y deficiencia en la oxidacin
de estos en las mitocondrias. Sin embargo, la relacin molecular y fisiolgica entre la diabetes y la obesidad no sta bien
documentada. En frica se observ que el incremento de la mancha urbana provoc el aumento de personas con
diabetes, adems, ste hecho tambin se observ en personas que migraron de frica a los Estados Unidos de Amrica
(Permutt y cols., 2005; Dedoussis y cols., 2007).
Cuadro 1. Polmorfismos en genes relacionado con el desarrollo de la diabetes.
Diabetes Gen
Funcin
SNP, alelo, locus o marcador
DJ1

HNF4A

Factor de transcripcin

Mutacin en 13 familias

DJ2

GCK

Metabolismo de la glucosa

130 diferentes mutaciones descritas

DJ3

TCF1

Factor de transcripcin

120 diferentes mutaciones descritas

DJ4

IPF1

Factor de transcripcin

Mutaciones raras y 1 familia descrita

DJ5

TCF2

Factor de transcripcin

Mutaciones raras

DJ6

NEUROD1

Factor de transcripcin

Mutaciones descritas en dos familas

DT1

HLA

Regulacin del sistema inmune

Variantes en mltiples genes

DT1

INS

Relacionado con el metabolismo

VNTR

DT1

CTLA4

Regulacin del sistema inmune

T17A

DT1

PTPN22

Regulacin del sistema inmune

SNP C1858T

DT2

ABCC8

Regulador de canales de potasio e insulina

SNPs en varios exones

DT2

CAPN10

Proteasa

SNPs en varios intrones

DT2

GCGR

Control heptico de produccin de glucosa y


regulacin de insulina

G40S

DT2

GCK

Metabolismo de la glucosa

Microsatelite en la regin 3

DT2

KCNJ11

Regulacin de la secrecin de insulina

E23K

DT2

PPARG

Factor de transcripcin

P12A

DT2

HNF4A

Factor de transcripcin

SNPs en promotor P2

DT2

SLC2A1

Transportador de glucosa

Sitio de restriccin Xba1

5.

EPIDEMIOLOGA DE LA DIABETES

La Diabetes Mellitus (DM) tipo 2 es un problema de salud a nivel mundial, algunos investigadores la consideran como el
principal problema de salud publica en lo que se refiere a las enfermedades crnico degenerativas ((Panduro y cols.,
2001). Adems, se le considera como una pandemia de enormes proporciones, de alto costo social y econmico y de
magnitudes ascendente (Garca Pea y cols., 1995). De acuerdo a la Organizacin Mundial de Salud (WHO, por sus
siglas en ingles) hay ms de 170 millones de personas diagnosticadas con DT2 en el mundo y se estima un incremento
cercano a los 324 millones de diabticos para el 2025, adems, se cree que ste incremento se acentuar en los pases
en vas en desarrollo como Asia, frica y Latinoamrica. Sin embargo, se sospecha que hay ms de 1.2 millones de
millones personas que presentan DT2 y que no han sido diagnosticadas. En el promedio de personas con diabetes en
Estados Unidos se calcul en 18.2 millones, de estos el 33 % son varones y el 39% son mujeres. Sobre la epidemiologia
de la diabetes en Mxico, se observan alarmantes cifras actuales de su prevalencia en nuestra poblacin siendo la
principal causa de muerte, los datos revelan un total de 272, 326 defunciones en hombres y 221, 575 defunciones en
mujeres. Mientras que en el Estado de Coahuila, segn cifras de la Subdireccin de Salud Pblica (2005), esta
enfermedad ocasion 2,789 muertes, siendo la principal causa de muerte para hombres (940 defunciones) y mujeres
(1,238 defunciones); sin embargo, lo ms alarmante es que la estimacin de ms de 16, 420 casos de diabetes
diagnosticados.

6.

DIAGNSTICO DE LA DIABETES

6.1. DIAGNSTICO SEROLGICO


Los sntomas como poliuria, polidipsia, polifagia, astenia o cetoacidosis conllevan a la sospecha clnica de la diabetes.
Sin embargo, el diagnstico de diabetes se confirma mediante determinacin de glucosa en sangre, que se realizan ante
situaciones de sospecha clnica o bien en estudios de deteccin sistemtica (diagnstico de diabetes gestacional y
estudios epidemiolgicos); otro mtodo confirmatorio para la diabetes es el diagnstico la hemoglobina glicosilada
(Hba1c), la cual es una heteroprotena de la sangre que resulta de la unin de la Hb con carbohidratos libres.
Asimismo, los diagnsticos que se han tratado de utilizar como diagnstico alternativo para la diabetes, es la
determinacin de anticuerpos por mtodos de ELISA. Los anticuerpos ms frecuentes presentes en diabticos son los:
anticuerpos anti-clulas de islote (ICA), anticuerpos anti-descarboxilasa del cido-glutmico (GAD), anticuerpos antiinsulina (IAA), y anticuerpos anti-protena similar a tirosina fosfatasa (IA-2). Adems, se han reportado molculas
asociadas al dao pancretico, las cuales pudieran servir como marcadores tempranos de desarrollo de la diabetes y
como mtodos diagnsticos ms oportunos. Sin embargo, estos diagnsticos se pueden realizar tan slo despus que la
enfermedad se present, por tal motivo, en las ltimas dcadas se ha propuesto el empleo de la Biologa Molecular para
determinar la relacin gen/enfermedad y posteriormente emplear a estos genes y sus variantes polimrficas para el
desarrollo del diagnstico molecular.
6.2. DIAGNSTICO MOLECULAR DE LA DIABETES
El trabajo realizado por los investigadores alrededor del orbe ha permitido entender mejor a la DM en lo que respecta a la
etiologa, mecanismos fisiopatolgicos y la aproximacin diagnostica y teraputica. Con el impresionante desarrollo de la
biologa molecular en las ltimas dcadas, el panorama del conocimiento cambio radicalmente. El diagnstico molecular
se lleva a cabo por medio de la PCR, empleando ADN extrado del paciente, posteriormente, se amplifica el gen
candidato empleando iniciadores (primers) especficos de ste gen, el cual se le considera un marcador molecular. Un

marcador molecular se define como un gen o una protena que presenta ciertas caractersticas como: a) participa slo en
una va de sealizacin, b) presenta polimorfismos o c) variantes gnicas se expresan en cierta condicin o enfermedad,
slo por mencionar algunas caractersticas. Por ejemplo, se logr identificar genes/protenas que participan tanto en la
secrecin de insulina en respuesta a una concentracin de glucosa plasmtica, como en la va de sealizacin
intracelular para la accin de esta hormona, por lo que cada uno de esos genes pudiera ser un gen candidato para
considerarlo como un marcador molecular (Chiqueta y cols., 2001). Por ello es de suma importancia el conocimiento de
los mecanismos genticos ya que permiten la identificacin, desde el nacimiento de un ser, de las variantes gnicas y
que influyen en el desarrollo de la enfermedad durante toda su vida. As pues, los estudios que demuestran claramente
que un gen presenta una variante con un efecto significativo sobre el fenotipo relacionado con la enfermedad, indican la
susceptibilidad de un gen. Adems, las variantes de genes candidatos que pudieran desarrollar diabetes tambin han
sido estudiadas, algunos de esos genes se mencionan en el Cuadro 1. Hanis y cols. (1996), analizaron la regin
telomrica del cromosoma 2q (2q33-2q37) en 330 Mxico-Americanos, destacando la presencia del gen CAPN10.
Interesantemente, Horikawa y cols. (2000) indicaron que en la misma poblacin Mxico-Americana, el gen que codifica
para la calpaina-10 registr diferentes polimorfismos (SNP-43, SNP-19 y SNP-63) y estos se relacionaron con riesgo a
desarrollar DT2. Por su parte, Lyssenko y cols. (2005) analizaron los SNP-43 y SNP-44 del gen CAPN10 como posible
candidato para predecir el desarrollo de la diabetes. Los resultados demostraron que a partir de estos SNPs en CAPN10
y en otro gen conocido como PPAR se puede predecir la presencia de DT2 en personas aparentemente sanas.
Anteriormente, Parikh y Croop (2004) y Memisoglu y cols. (2003) indicaron que la sustitucin aminoacdica de la
Pro12Ala en la protena PPAR sta relacionada con mayor riesgo de desarrollar DT2, mientras que la Ala12Pro tiene
mayor sensibilidad hacia la insulina, es decir, disminuye el riesgo de desarrollar DT2.

7.

CONCLUSIN

La susceptibilidad gentica parece jugar un rol importante en la incidencia a desarrollar DT2 en ciertas poblaciones. Sin
embargo, los cambios en el estilo de vida, como la actividad fsica disminuida o nula y el consumo de energa, se han
combinado para desarrollar obesidad, el cual es un factor de riesgo importante para la diabetes, adems de la influencia
gnica. Por otro lado, la importancia del uso de herramientas genmicas radica principalmente en la prevencin y en la
oportunidad de identificar a individuos aparentemente sanos candidatos a desarrollar diabetes. Asimismo, nos permitira
determinar la etiologa de la enfermedad, elegir la terapia basada en diagnostico ms exacto, a precisar los factores
ambientales que contribuyen al inicio y a la progresin de la enfermedad y sus complicaciones y, por ltimo, a supervisar
la respuesta a la terapia en pacientes diabticos. En ese contexto, los genes CAPN10 y PPAR son los candidatos ms
prometedores para diagnosticar y prevenir de manera oportuna el desarrollo de la diabetes. As pues, la investigacin y
propuesta de marcadores moleculares tempranos puedan ser de utilidad para el desarrollo de nuevas tecnologas que
puedan emplearse en el diagnstico de la diabetes o de otras enfermedades para la prevencin en pacientes
aparentemente sanos.

8.

Bibliografa

1.

Francis S. Greenspan. Hormonas pancreticas y diabetes sacarina. Endocrinologa bsica, Manual Moderno
Ed, Mxico DF 1998, 231-389pp.
Permutt, M.A., J. Wasson y Nancy Cox. 2005. Genetic epidemiology of diabetes. The Journal of Clinical
Investigation; 115(6): 1431-1439.
Kumar Das, S. y S. C. Elbein. 2006. The Genetic Basis of Type 2 Diabetes. Cellscience; 2(4): 100131.
Dedoussis, G.V.Z., A. C. Kaliora y D. B. Panagiotakos. 2007. Genes, Diet and Type 2 Diabetes Mellitus: A
Review. Rev Diabet Stud; 3(4): 13-24.
Ding, H. y C.R. Triggle. 2006. Endothelial cell dysfunction and the vascular complications associated with type 2
diabetes: assessing the health of the endothelium. Vascular Health and Risk Management 2005:1(1) 5571.
Lyssenko, V., P. Almgren, D. Anevski, M. Orho-Melander, M.Sjogren, C. Saloranta, T. Tuomi, Leif Groop, the
Botnia Study Group. 2005. Genetic Prediction of Future Type 2 Diabetes; PLoS Med 2(12): e345.

2.
3.
4.
5.
6.

7.

8.

9.

10.
11.
12.
13.

14.

15.
16.

17.
18.
19.
20.

21.

Honeyman, M. C., L. C. Harrison, B. Drummondt, P. G. Colmant y B. D. Taitt. 1995. Analysis of Families at Risk
for Insulin-Dependent Diabetes Mellitus Reveals that HLA Antigens Influence Progression to Clinical Disease.
Molecular Medicine; 1(5):576-582.
Florez, J.C., K. A. Jablonski, J. McAteer, M. S. Sandhu, N. J. Wareham, I. Barroso, P. W. Franks, D. Altshuler y
W. C. Knowler. 2008. Testing of diabetes-associated WFS1 polymorphisms in the Diabetes Prevention
Program. Diabetologia; 51(3): 451457.
Florez J.C., K.A. Jablonski, S.E. Kahn, P.W. Franks, D. Dabelea, R.F. Hamman, W.C. Knowler, D. M. Nathan, y
D. Altshuler. 2007. Type 2 DiabetesAssociated Missense Polymorphisms KCNJ11 E23K and ABCC8 A1369S
Influence Progression to Diabetes and Response to Interventions in the Diabetes Prevention Program.
Diabetes; 56(2): 531536.
Slingerland, A.S. 2006. Monogenic diabetes in children and young adults: Challenges for researcher, clinician
and patient. Rev Endocr Metab Disord; 7:171185
WHO. Diabetes program. http://www.who.int/diabetes/en.
Secretara de Salud, www.ssa.gob.mx.
Hanis, C.L., Boerwinkle E., Chakraborty R., Ellsworth D.L., Concannon P., Stirling B., Morrison V.A.,
Wapelhorst B., Spielman R.S., Gogolin-Ewens K.J., Shephard J.M., Williams S.R., Risch N., Hinds D., Iwasaki
N., Ogata M., Ommoi Y., Petzold C., Rietzsch H., Schroeder H-E., Schulze J., Cox N.J., Menz S,. Boriraj V.V.,
Chen X., Lim L.R., Linder T., Mereu L.E., Wang Y-Q., Xiang K., Yamagata K., Yang Y. y Bell G.I. 1996. A
genome-wide search for human non-insulin-dependent (type 2) diabetes genes reveals a major susceptibility
locus on chromosome 2. NatGenet 1996;13:161166.
Horikawa Y, Oda N, Cox NJ, Li X, Orho-Melander M, Hara M, Hinokio Y, Lindner TH, Mashima H, Schwarz PE.
2000. Genetic variation in the gene encoding calpain-10 is associated with type 2 diabetes mellitus. Nat Genet;
26:163-175.
Parikh, H. y Groop L. 2004. Candidate genes for type 2 diabetes. Rev Endocr Metab Disord; 5:151-176.
Memisoglu, A., F.B. Hu, S.E. Hankinson, J.E. Manson, I. De VivoI, W.C. Willett, D.J. Hunter. 2003. Prospective
study of the association between the proline to alanine codon 12 polymorphism in the PPARgamma gene and
type 2 diabetes. Diabetes Care 2003. 26:2915-2917.
Cerda A y Villaseor Byardo S. La diabetes mellitus tipo 2: Una aproximacin inter y multidisciplinaria.
Investigacin en Salud, marzo, ao/vol.III pp.3-4.
Chiqueta E, Nuo Gonzales P y Cerda A. Perspectiva histrica de la diabetes mellitus comprendiendo la
enfermedad. Investigacin en salud, marzo, ao/vol.III pp.5-10.
Garcia Pea M, Reyes Morales H, Garduo Espinosa J, Fajardo Gutierrez A y Martinez Garcia C. La calidad de
vida en el paciente diabeico tipo II y factores relacionados Revista Medica del IMSS 1995; 33:293-8.
Danael G, Lawes CM, Vander Hoorn S, Murray CJ, Ezzatl M. Global and regional mortality form Ischaemic
heart disease and stroke attributable to higer-than-optimum blood glucose concentration comparative risk
assessment. Lancet 2006;368(9548):1651-1659.
De Anda-Turati M,Granados Arriola J y Quiroz Mercado H. Marcadores genticos en retinopata diabtica
proliferativa en mexicanos portadores de diabetes mellitus no insulinodependiente. An Med Asoc Hosp ABC
2000; 45(2):61-64.