Membranas:estructura,

.,2

qurmlca y tunclon

branasy los orgnulosrodeadospor membranaen el Cafundamentalde todaslasclulasesla

Unu caracterstica
ptulo 4; ahoraestamospreparadospara tratar en mayor
presenciade membranasque definenlos lmites de Ia cdetallela estructuray funcinde la membrana.En estecainternos.Esprobalula y de susdiversoscompartimentos
la estructuramolecularde lasmemble que incluso el observadorocasionalde micrografas ptulo,examinaremos
los mltiplespapelesquelasmembranasy exploraremos
electrnicasse quedeimpactadopor la prominenciade
en la vida dela clula.En el Captulo8
membranasrodeandolas clulasy dentro ellas,especial- branasdesempean
trataremosel transportede solutosa travsde la membramentelas de los organismoseucariticos(Figura7.1)' De
implicados.
na poniendoms nfasisen los mecanismos
maneraintroductoria,noshemosencontradocon lasmem-

FI
n'
Chloroplast

Plasma
membranes

Plasma
membrane
Vacuole

Nuclear
Nuclear
envelope
Nucleus

Nucleus

Rnr rnh trR

Mitochondria
Mitochondria

(a) Rat pancreascells F

------l
5;m

(b) Plantleafcell

c /m

FigwaT.L La importanciade las membranasque rodeany estn en el intedor de las clulas eucariotas, Las estructurasde las clulas
eucariotasque estnrelacionadascon membranas son ademsde la membrana plasmtica,el ncleo, los cloroplastos,lasmitocondrias, el
retculo endoplasmtico (RE), los grnulos secretoresy las vacuolas.Estasestructurasse muestran aqu en (a) porciones de tres clulasdel
pncreasde rata y (b) una clula de una hoja de una planta (MET).

qumica
y funcin 169
Membranas:
estructura,

Las funciones de las membranas

Comenzamosnuestra discusinfijndonos en que las
membranasbiolgicas,como se ilustra en Ia Figura7.2,
desempeancinco papelesrelacionadosentre s, pero
distintos. e definen los lmites de la clulay limitan sus
compartimentos.@ sirve como sitio concreto donde se
realizanfunciones especficasy @ poseenprotenasde
transporte que facilitan y regulanel movimiento de sustanciashaciael interior y haciael exteriorde la clulay de
suscompartimentos.
Adems,las membranas@ contienen los receptoresnecesarios
paradetectarsealesexternas
y @ proporcionanlos mecanismos
parala comunicacin
intercelular.
Cadauna de estasfuncionessedescribebrevementeen lassiguientes
cincosecciones.
e Lasmembranas
definenlmitesy srvencomo
barerasde permeabilidad
Una de lasfuncionesmsobviasde lasmembranasesdefinir los lmitesde la clulay suscompartimentosy servir
como barrerasde permeabilidad.El interior de la clula
debeestarseparado
fsicamente
del medioambientequele
rodeano sloparamantenerlassustancias
deseadas
en la
clulasino paramantenerfuerade ellaa las sustancias
no
deseadas.
Lasmembranassirvenbien para estepropsito
porqueel interior hidrofbicode la membranaesuna barrera de permeabilidadefectivaparalasmolculashidrofflicase iones.La barrerade permeabilidad
de una clulaen
su conjuntoesla membranaplasmtica(o celular),una

membranaque rodeaa la clulay regulael pasode materialeshacia dentro y haciafuera de las clulas.Ademsde
la membranaplasmtica,variasmembranasintracelulares sirven para compartimentalizarfunciones dentro de
las clulaseucariticas.
@ fn las membranasse stanprotenasespecficas
y portanto son los lugaresdondese realzanfunciones
especfcas
Las membranastienen funciones especficasasociadasa
ellasya que las molculasy estructurasresponsables
de estas funciones-protenas en la mayorparte de los casosestnincluidaso localizadas
en lasmembranas.
De hecho,
una de lasmanerasmstilesparacaracterizar
una membranaespecfica,
esdescribirlasenzimasconcretas,
Iasprotenasde transporte,los receptores
y otrasmolculasasociadasa ellas.
Por ejemplo,muchasenzimascaractersticas
estnpresentesen las membranas,
o sobreellas,de orgnulostales
como la mitocondria,el cloroplasto,el retculoendoplasmtico (RE),el complejode Golgi,los lisosomasy los peroxisomas,como aprenderemos
en los Captulos10, ll y
12.A menudo,talesenzimas,resultantilescomo marcadoresduranteel aislamientode orgnulosa partir de suspensiones
de clulasdesorganizadas.
Por ejemplo,la gJucosafosfatasaes una enzimaligadaa Ia membranaque se
encuentraen el retculo endoplasmtico.Cuando las
membranasdelREseaslany sepurifican(comopequeas
vesculas
denominadas
microsomas),
la glucosafosfatasa
se
Figwa 7 .2 Funcinde las membranas,
Las membranasO definen los lmites de la
clula y de sus orgnulos,@ sirven como
sitio donde selocalizan protelnas
especfi
cas,especialmente
enzimasy
receptores,@ proporcionan y regulan
procesosde transporte, @ contienen los
receptoresnecesariospara detectar seales
externasy @ proporcionan mecanismos
de contacto, comunicacin y adhesin
intercelular.

Barrera
de
permeabilidad

y limite

Organizacin
y localizacin
de lafuncin

Na+

{o

"'7'K
!Pro".ro,

t'

de transporte

Nutrientes

or
170

Comunicacin
intercelular

Deteccin
de seales

Captulo
7 l\4embranas:
qumica
y funcin
estructura,

puedeutilizar como enzimamarcadora,que le permite al

investigadordeterminarla distribucin de los microsomas
entrelas diferentesfracciones.Lasenzimasmarcadorasde
otros orgnulosseutilizan paraevaluarIaputezadela preparacinfinal de microsomas,esdecir,el grado al que est
libre de contaminacinpor estosotros marcadores.
@ Lasprotenasde membranaregulaneltransporte
de solutos

en el retculoendoplasmticoo en el citosolsepuedenimrodeadospor membrana

portar por orgnulosespecficos
Trataremos
mitocondrias.
peroxisomas
o
como lisosomas,
posteriores.
procesos
en
captulos
cadauno de estos
@ Las plotenasde membranadetectany tlansmiten
sealeselctricasy qumicas

Normalmente,las clulasreciben informacin de su entorno en forma de sealeselctricaso qumicasque afecOtra funcin de las protenasde membranaes realizary
tan a la superficieexternade la clula.Los impulsosnerregular el transporte de sustanciashacia dentro y hacia viososenviadosdesdesusojos a su cerebroa medidaque
fuerade la clulay de susorgnulos.Nutrientes'iones,gaIeeestaspalabrasson ejemplosde talesseales'como lo
secaptanen diversoscompartises,aguay otrassustancias
en su sistemacircuhormonaspresentes
sonlasdiferentes
mentosy variosproductosy desechosseretiran.
latorio.El trmino utilizadopara describirtanto la detecComo veremosen el Capltulo 8, las modalidadesde
en la superficieexternade las
cin de sealesespecficas
difieren' Muchassustransportede las distintassustancias
clulascomo los mecanismosespecficosusadospara
tanciassemuevena travsde la membranaen la direccin transmitir talessealesal interior celular es la transducotro lado, el
dictadapor su gradientede concentracin.Por
cin de seales.
por
strpotencial
determinado
movimiento de un ion est
En el casode la transduccinde sealesqumicas,alguque esla suma de su gradientede concen- nas molculassealentran directamenteen las clulasy
electroqumico,
traciny el gradientedecargaa travsdela membrana'Este actanen su interior.Los estrgenos
son un ejemplo.los
proceso,queno requiereenerglaporqueel movimientoesa
(tase
Figura
3,30a),no sonposon
esteroides
estrgenos
favor del gradiente,ocurre de dos formasdiferentes'Algufcilmente.
membrana
la
pueden
atravesar
laresy adems
nasmolculascomo agua,ogenoy etanolpuedenatrave- El resultadoesquelos estrgenos
entranen susclulasdiasar las membranaspor difusinsimple.Lasmolculasms
del interior de
na e interactancon protenasreguladoras
grandestalescomo azicaresy aminocidosse mueYena
lasmolde
los
casos,
la
mayora
en
la clula.Sinembargo,
travsde la membranaardadas por protenasde transpor- culassealizadoras,
que afectana una membrana,no enun procesodenominadodifusinfacilitada. tran en la clula,enyezde esoseunena protenasespecfife especficas,
De manera alternativa,una sustanciase puede transcas de la superficieexternade la membranaplasmtica,
si no est denominadasreceptores.La unin de estassustanciasdeportar encontradesugradientedeconcentracin
cargadao en contra de su potencialelectroqumico,en el
continaen la superficieinternade
nominadasligandos,se
casode un ion. steesun procesodenominadotransporte la membrana,con acontecimientosqulmicos especficos
activo querequiereenerga.Solutostalescomo azcatesy
seinternasdenominadas
generandode esemodo seales
en bajasconcen- gundosmensajeros.
aminocidosestna menudopresentes
Por eso,los receptoresde membrana
tracionesfuera de la clulay setransportanhacia el intetransmitiry respondera
permitena las clulasreconocer,
rior en contra de susrespectivosgradientesde concentra- una granvariedadde seales
un tema
qumicasespecficas,
paraguiareste queexploraremos
La energanecesaria
cin y electroqumico.
en el Captulo14.
transporte en contra de gradienteviene proporcionada
por la hidrlisis de ATP o de un compuestosimilar de alta
@ Lasplotenasde membtanamedianen la adhesin
energla,yel procesosedenomina transporteactittodirecto. celulary la comuncacin
clula+lula
la energapuedeserproporcionada
De maneraalternativa,
Lasprotenasde membranatambinmedianen la adheacoplandoel transporteen contra de gradientedel soluto
Aunque
o
de
de
sodio
sin y la comunicacinentre clulasadyacentes.
iones
de
los
gradiente
favor
de
a
transporte
al
con frecuencia,los libros de texto representana las clulas
protonesa travsde la misma membrana,un procesodela mayorade las clucomo entidadesaisladas,separadas,
nominado transporteactivo indirecto.La fuerzaimpulsora
las de los organismosmulticelularesestnen contactocon
de los ionesde sodio o de
para el movimiento <favorable>
los protoneses su potencialelectroqumico,que depende otrasclulas,a travsde conexionescitoplasmticasdirectas,quepermiten,al menos,el intercambiode algncomdel gradientede cargaydel gradientede concentracindel
ponente celular. Esta comunicacin intercelular viene
la
membrana.
ion a travsde
proporcionadapor las unionesgapen lasclulasanimalesy
de
membranas
travs
a
pueden
transportar
Incluso se
de lasclulasvegetales.
capor los plasmodesmos
En
algunos
protenas'
las
grandes
como
molculastan
que acabamos de considerar
de
tales
funciones
las
el
movimiento
Todas
facilitan
sos,vesculasintracelulares
-compartimentalizacin,
la
localizacinde funcin' trans(endocitosis)
de
hacia
fuera
o
molculashacia la chsla
y comunicacinintercelularseales
protenas
sintetizadas
de
porte,
deteccin
(exocifosis).
las
En otros casos,
chia
delasmembranas 171
Lasfunciones

dependende la composicinqumicay de lascaractersti_

casestructuralesde las membranas.Volveremosa estoste_
mascuandoconsideremos
cmo seha elaboradoel cono_
cimientoactualde la estructurade la membrana.

(a) Naturaleza
ti^;^^ ^
tPturua ug

^
td

membrana

Modelos de la estructura
de la membrana: una perspectiva
experimental
Hastaque no seaplicla microscopaelectrnicapara el
estudiodela estructuracelular,a principiosdeIa deda de
1950,nadiehabavisto nunca una membrana.Hastaese
momento,lasevidencias
indirectashabanconducidoa los
bilogosa postularla existencia
de membranasmuchoan_
tes de que sehubieranpodido ver en realidad.De hecho,
losinvestigadores
habantratadode entender,
durantems
de un siglo,la organizacinmolecularde las membranas.
Las clulascontienenmuchostipos de membranasdife_
rentes,por estarazn,ha supuestoun gran esfuerzoen_
contrar las caractersticas
estructurales
comunesa todas
ellas.Sin embargo,vali Ia penael intensoesfuerzorealiza_
do en investigacin
ya quecondujoal modelodela estruc_
tura de membranadelmosaico
del que
fluido.Estemodelo,
ahorasepiensaque sirvepara describira todaslas mem_
branasbiolgicas,
imaginaa la membranacomodoscapas
de lpidosbastantefluidas,con protenaslocalizadas
den_
tro y sobrelascapaslipdicasy orientadasde forma espec_
fica con respectoa las dos superficies
de membranu.pro_
bablementeen el futuro, el modelo del mosaicofluido se
redefinirya que las capasde lpidos seestnconvirtiendo
en algo mucho ms complejode lo que inicialmentese
pens.Sin embargo,el modelobsicotal y comoseimagi_
na hoy en da es,casicon cerfeza,correcto.
Antesde mirar el modeloen detalle,describiremos
al_
guno de los experimentos
principalesque han conducido
hastaestavisin de la funcin y de li estructurade la
membrana.A medidaque lo hacemos,puedeprofu ndizar
sobre cmo se han realizadoesosdeicubrimientos,as
comoconocertodoslos aspectos
de la diversidadde enfo_
quesy tcnicasque son necesarios
para el avancedel en_
tendimiento de un fenmenobiolgico.La Figura 7.3
muestrala cronologadblosestudiossobrela estructurade
la membrana,que comenzaproximadamente
haceun si_
glo con el entendimientode que las capasde lpidosfor_
man parte de la estructurade la membranay finalmente
nos llevanal conocimientoactualen el que seconsideraa
lasmembranascomomosaicosfluidos.Consultela Figura
7.3cuandoleala siguienteseccin.
Overtony Langmur:
los lpidosson componentes
importantes
de la membrana
Un buen punto de partidaparaestarevisinexperimental
esel trabajopionerode CharlesOvertonhacia1g90.Tia_
172

Captulo
7 Membranas:
qumica
estructura,
y funcin

Overton

(b) Monocapa
Iipdica

Langmuir

(c) Bicapa
lin;^^

Gnrior

Grendel
(d) Bicapalpida
cpn lmrnas
protercas

Davsony
Danielli

(e) Unidadde
memDrana

Robertson
(f) Modelode
mosatco
fludo
Singery
Nicolson
Unwiny
Henderson 1980

(s)Estructura
de las
protenas
de
membrana
Hlice
^t+^

2000
Figura7.3 Cronograma
del desanollodel modelode mosaicofluido,
El modelo de mosaico fluido de estructura de membrana propuesto
por Singery Nicholson en 1972fue la culminacin de unos
estudiosque seremontan a 1890y que habansido redefinidos
de
manera muy significativa por estudiosposteriores.
bajando con clulas de races areas de plantas, observ

que las sustanciassolublesen lpidos perritrun fcilmente

enlasclulas,
rnientrasquelassolubleJenagua,no.En rea_
lidad l encontruna buenacorrelacinenire la naturale_
za lipoflica de una sustancia(<amantede lpidos>) y la

facilidadcon la quepuedeentrar en lasclulas.De estosestudios Overtonconcluyquelos lpidospresentesen la superficie celular son una especiede <cubiertu (Figura
7.3a).Elinclusosugiriquelascubiertascelulares
sonprobablementeuna mezclade colesteroly lecitina,lo que se
comprob que era claramenteprevisibleen basea lo que
ahoraconocemossobrela importanciade los esteroles
y
fosfolpidoscomocomponentes
de la membrana.
Un segundoe importante avancevino una dcadadespusmedianteel trabajo de Irving Langmuir,que estudi
el comportamiento de fosfolpidospurificados disueltos
en bencenoy produjo capasde esasolucinde bencenoy
lpidossobreuna superficieacuosa.Cuandoel bencenose
evapora,las molculaspermanecencomo una lmina de
lpidos de una molcula de ancho -que se denomina
(monocapa)-. Langmuir sabaque los fosfolpidosson
molculasanfipticasque poseentanto regioneshidroftlicascomo hidrofbicas(vaseFigara2.IIparailustrarlos
gruposdelascabezas
polaresy las<colas>
no polaresdelas
molculasde fosfolpidos).El razon6,que los fosfolpidos
seorientansobreel aguade forma que suscabezas
hidrofflicasestnen contactocon el aguay que suscolashidrofobicassobresalen
del agua(Figura7.3b).Lamonocapalipdica de Langmuir fue la baseque permiti nuevosestudios
sobrela estructurade la membranaen los primerosaos
del sigloxx.
Gortery Grendel:
la basede la estructura
de la membrana
es unabcapalipidica
El siguienteavanceimportanteseprodujo en7925cuando
dosfisilogosholandeses
E. Gortery F.Grendelleyeronlos
trabajosde Langmuiry pensaronque esteenfoquepodrla
ardar a contestaruna cuestinreferentea la membrana
de los glbulosrojos,o eritrocitos,con los que ellostrabajaban.Los trabajosinicialesde Overtonhabanmostrado
la presenciade una cubiertalipdica en Ia membranacelular. Perocuntascapaslipdicasestnpresentesen la cubierta?Paracontestara estapreguntaGorter y F. Grendel
extrajeronlos lpidos de un nmero conocidode eritrocitos y usaronel mtodode Langmuir paraexpandirlos llpidosen una superficieacuosa.Encontraronque el reade la
superficiede los llpidos sobreel aguaeraaproximadamente dosveceselreadelasmembranasde los eritrocitos,por
lo que concluyeronquela membranaplasmticadelos eritrocitos no consisteen una, sino en dos capasde lpidos.
(Comosedescubridespus,
Grendely Gortercometieron
dos errores,subestimaronun tercio del reasuperficialde
los glbulosrojos y un tercio de la cantidadde lpidos presentesen su membranaplasmtica.
Ms an,no tuvieron
en cuentala porcin significativaque ocupanlasprotenas
en la membranade los glbulosrojos. Sin embargo,afortunadamenteesoserroresse abolieronuno con otro, por
ello la conclusinde Gorter y Grendelfue correctaaunque
sus datos no. Paratener una oportunidad de repetir sus

clculosy descubrirla fuentede suserrores,vaseProblema7.3 al final del captulo.

Hipotetizandola existenciade una estructurade bicapa, Gorter y Grendelrazonaronque serafavorabletermodinmicamenteque las cadenashidrocarbonadasno polaresestuvieranhaciael interior, fueradel medio acuosoque
aparecea ambosladosde la membrana.Losgrupospolares
hidroflicos de cadacapaestarandirigidos hacia el exterior, hacia el entorno acuosoque existea cadalado de la
membrana(Figura7.3c).Susexperimentos
y conclusiones
fueron temporalesya que estetrabajorepresentel primer
intento para entenderlas membranasdesdeel punto de
vista molecular.Ms an,Ia bicapalipdica que ellosimaginaron lleg a serla basede cadaajustesucesivoen el entendimientode la estructurade la membrana.
Davsony Danielli:las membranas
tambincontienen
proteinas
Pocodespusde que Gorter y Grendelpropusieranel modelo de bicapa en1925,quedclaro que una caracterstica
importantede la estructurade la membranaeraquesetratabade una bicapalipdica simple,sin embargoestehecho,
no poda explicartodaslaspropiedadesde la estructurade
la membrana,particularmente
todasaqullasrelacionadas
conla tensinsuperficial,permeabilidada lossolutosyresistenciaelctrica.Por ejemplo,la tensin superficialde una
pelculalipdica fue significativamentemayor que la de las
membranascelularespero stase podla bajar aadiendo
protenasa la pelculalipdica.Ms an, azucares,
ionesy
otros solutoshidrofilicos se movan hacia dentro y hacia
fuera de lasclulasmucho msfcilmentede lo que sepoda explicarpor la permeabilidada las sustanciassolubles
en aguade lasbicapaslipdicaspuras.
Para explicar estasdiferencias,Hugh Davsony |ames
Danielliimaginaronla presencia
de protenasen lasmembranasproponiendoen 1935que lasmembranasbiolgicasconsistenen una bicapalipdica que estnrecubiertas
en ambos lados con finas lminas de protenas (Figura
7.3d).De maneraqueel modelooriginalde Davsony Danielli eraen esenciael <modelosndwich>de protena-lpido-protena.Su modelo fue la primera representacin
detalladade la organizacinde la membrana,que imper
en el pensamientode los bilogoscelularesen las dcadas
siguientes.
El modelo original fue modificado posteriormente
para acomodarlos descubrimientosposteriores.Particularmentenotablefue la sugerencia,
hechaen 1954,de que
las protenashidroflicaspodan atravesarla membranay
formaran porospolaresen lo que anteriormenteera una
bicapahidrofbica.Esasprotenaspodan cambiarla permeabilidady las propiedadesde resistividadde la membrana, que no podan ser explicadasfcilmenteen trminos de la existenciade una bicapa lipdica solamente.
Especficamente,
el interior lipdico responsable
de laspro-

Modelos
delaestructura
dela membrana:
unapersoectva
experimental 173

piedadeshidrofbicasde la membranay los componentes

proteicosexplicansuspropiedadeshidroflicas.
La importanciarealdel modelode Davson-Danielli,sin
embargo,fue el reconocimientode la importancia de la
presenciade protenasen la estructurade la membrana.
Estacaracterstica,
msque cualquierotra, hizo que el modelo de sndwichde Davson-Daniellifuerala baseparala
mayoradela investigacinposteriorsobrela estructurade
la membrana.
Robertson:todaslas membranas
compattenuna
estructurasubyacentecomn
Todoslos modelosde membranatratadoshastael momento sedesarrollaronmucho antesde que nadiehubiera
visto una membranabiolgicay cadauno de ellossepens especficamente
como un modelo de membranaplasmtica.Con la llegadade la microscopaelectrnicaen la
dcadade 1950,Iosbilogoscelulares
pudieronfinalmente verificarla presenciade una membranaplasmticaalrededor de cadaclula.Adems,observaronque la mayora
de los orgnulossubcelulares
estabanlimitados por membranas similares.Adems,cuando las membranasse tieron con osmio,un metalpesado,y se examinaroncon
detallea gran aumento,seobservque habaregionesextensascon aspectode <vafrreo que aparecancomo dos
por una zona centralteida telneasoscurasseparadas
nuemente,con un espesortotal de 6-8 nm. Estepatrn se
observaen Ia membranaplasmticade dos clulasadyacentesseparadas
una de otra por un espaciointercelular
fino (Figura7.4).EI hechode que estemismo patrn de
Fe.^i^

intercelular
C l u l a1

C l u l a2

Figwa 7.4 Aspectotdlaminar de las membranascelulares. sta es

una micrografa electrnicade una seccinfina entre dos clulas
adyacentesque muestra sus membranas plasmticasseparadaspor
un espaciointercelular pequeo.Cada membrana aparececomo
dos lneas oscurasseparadaspor una zona central teida
ligeramente,un patrn de tincin que le da a la membrana un
aspectotrilaminar o de <va de ferrocarril> (MET).

174

qumica
y funcin
Captulo
7 Membranas:
estructura,

tincin trilaminar,o de trescapas,seobservase

en distintas
clasesde membranascondujo a |. David Robertsona sugerir que todaslas membranascelularescompartanuna estructura subyacentecomn, que denomin la unidad de
(Figura7.3e).
membrana
Cuandosepropusopor primeravez,la estructurade la
unidad de membrana pareciacoincidir extraordinariamentebien con el modelo de Davsony Danielli.Robertson sugiri que el espacioligeramenteteido (entrelas
dos lneasoscurasdel patrn trilaminar) contenala regin hidrofbicade las molculaslipdicas,que no setean con facilidad.Por el contrario,se pensque las dos
lneasoscuras,representaban
los gruposde lascabezas
de
los fosfolpidosy quelasfinascapasde protenasunidasa
la superficiede la membrana,aparecianoscurasdebido a
su afinidadpor la tincin con metalespesados.
Estainterpretacinpareciaproporcionarun apoyoslidoal modelo de Davsony Danielliqueproponaque una membrana
consisteen una bicapalipdica recubiertapor ambassuperficiescon finaslminasde protenas.
Unainvestigacin
msdetalladarevellos princpales
defectosdel modelode Davsony Danielli
EI modelode Davson-Danielli,
a pesarde su aparenteconfirmacin por microscopa
y su extensina toelectrnica
por Robertson,
daslasmembranas
seempeza cuestionar,
a medidaqueen la dcadade 1960ibansurgiendomsdatos queno cuadrabancon el modelo.Considere,
por ejemplo,el problemadelasdimensiones
dela membrana:si nos
basamosen la microscopaelectrnica,
seha descritoque
la mayorade las membranastendran entre 6 y 8 nm de
y de stos,4-5nm corresponderan
espesor
a la bicapalipdica.Quedanalrededorde l-2 nm de espacioen cadasuperficiede la bicapapara las protenasde membrana,un
espacioque podraacomodarse
en el mejor de los casosa
una fina monocapade protenasformadaprincipalmente
por regionesextensas
con estructuraen lminaB.A medida que lasprotenasde membranasefueron aislandoy estudiando,sehizo evidentequela mayorade ellaseranprotenasglobularescon extensasregionescon estructuraen
a-hlice.Talesprotenastienentamaosy formasinconsistentescon el conceptode naslminasproteicassobrelas
dossuperficies
de la membrana,sugiriendoquedebensobresalirhaciael interior de la membrana.
Una complicacinadicionalesque el modelo de Davson-Danielli no se ajusta fcilmentea las caractersticas
distintivasde las diferentesclasesde membranas.Dependiendo de su origen,las membranasvaran considerablemente en su composicinqumica y especialmenteen la
proporcinde protenasy lpidos (Tabla7.I). La relacin
protena/lpidopuedesertan elevadacomo 3 o ms en algunasclulasbacterianas
y tan bajo como0,23parala vaina de mielina que sirve de aislanteelctricomembranoso
para los axonesnerviosos.Inclusolas dos membranasde

Tabla7.7- Gontenidoen lpidos,protenasy carbohidratosde las membranasbiolgicas

Porcentaje aproximadoen peso

Protena

Lpido

Garbohidratos

ndice protena/ lipido

Eritrocito humano

49

43

11L

Clula heptica de mamfero

54

36

10

1,50

Ameba

54

42

l)q

Vaina de mielina del axn nervioso

18

79

Envoltua nuclea

oo

JZ

Retculo endoplasmtico

63

27

10

Aparato de Golgi

o4

LO

10

Tilacoides del cloroplasto

70

30

Membrana mitocondrial externa

55

45

Membrana mitocondrial interna

78

22

Bacterias Gram-positivas

75

25

Membrana
Membrana plasmtica

las mitocondrias difieren de manera significativa: la proporcin protena/lpido es de alrededor de 1,2 para Ia
membrana externay de cercade 3,5 para la membrana interna, que contiene todas las enzimas y protenas relacionadas con el transporte de electronesy la sntesisde ATP.
Sin embargo, todas estas membranas parecen Ia misma
cuando sevisualizan al microscopio electrnico con la tcnica de tincin con osmio de Robertsony colaboradores.A
medida que se estudiaban ms membranas se haca cada
vez ms difcil conciliar la enorme yariacin existenteen el
contenido de protena con el modelo de unidad de membrana, ya que la anchura y apariencia de los urales, simplemente no variaba en la misma proporcin.
EI modelo de Davson-Danielli tambin se puso en
cuestin por estudios en los que las membranas se exponan a fosfolipasas,enzimas que degradan los fosfolpidos
retirando los grupos de las cabezas.De acuerdo con este
modelo,los grupos hidrofilicos de las cabezasde los lpidos
de las membranasdeberanestarcubiertospor una capade
protenasy por tanto protegidos de Ia digestin por las fosfolipasas.Incluso una proporcin significativa (por encima del 75o/odependiendo del tipo celular) de los fosfolpidos de Ia membrana de las clulas se degrada cuando la
membrana se expone a las fosfolipasas.Esta susceptibilidad a la digestin enzimtca sugiri que muchos de los
grupos de las cabezasde los fosfolpidos estaranexpuestos
en la membrana, en vez de estarcubiertos por una capa de
protena. Adems,la localizacin superficial de las protenas de membrana especificadapor el modelo de DavsonDanielli no estababasadaen los experimentosde los cientficos que intentaron aislar esasprotenas. La mayora de
las protenas de membrana resultaron ser bastanteinsolubles en aguay slo podan extraersecon el uso de solventes
orgnicos o detergentes.Estas observaciones indicaban
que muchas protenas de membrana son hidrofobicas (o
por lo menos anfipticas) y sugeraque se localizaban,al

2,06
2,46
1))

3,00

menos en parte, en el interior hidrofbico de la membrana

ms que en cualquiera de sus superficies.
El modelo de Davson-Danielli fue posteriormente desacreditado por la evidencia experimental, se tratar ms
tarde, indicando que las membranas son estructuras fluidas en las que la mayora de los lpidos y muchas de las
protenasse mueven libremente en el plano de la membrana. La movilidad de lpidos y protenas no se ajusta fcilmente a un modelo que imagina lminas de protenas superficiales unidas por puentes inicos a la bicapa lipdica
subyacente.

Singely Nicholson:
unamembrana
consisteenun
mosaco
de protenas
dentrode unabicapalipidicafluida
previosque surgieroncon el modelode
Losproblemas
Davson-Danielli
estimularon
el intersparadesarrollar
nuevasideasrespectoa la organizacin de las membranas,
culminando en 1972 con el modelo de mosaico fluido
propuesto por S. Jonathan Singer y Garth Nicolson. Este
modelo, que ahora domina nuestra visin de \a organizacin de Ia membrana, tiene dos caractersticasprincipales,
las dos aparecenen el nombre. Dicho simplemente,el modelo imagina una membrana como un mosaicode protenas incluidas,o por Io menos unidas,de forma discontinua
a una bicapa lipdica fluida (Fgura 7.3f). En otras palabras, el modelo de Singer-Nicholsonmantuvo la estructura de bicapa lipdica bsicade modelos previos,pero vea a
las protenasde la membrana de una forma completamente diferente, no como capasfinas de protenas sobre la superficie de la membrana, sino como entidadesglobulares
discretasque se asocian a la membrana basndoseen su
afinidad relativa por el interior hidrofbico de la bicapa lip d i c a( F i g u r a 7 . 5 a ) .
Singer y Nicholson fueron unos revolucionarios cuando propusieron por primera vez esta forma de pensar en

Modelos
delaestructura
dela membrana:
unaperspectiva
experlmental 175

Cadenasde
carbohidratos
Rinc

na

fosfolipdica
Glicoprotenas

Protenade
membrana
ancladaa lpidos
Regin
hidrofbica

Membrana
plsmica

Regin
hidroflica
Cadenasde
carbohidratos

Protena Protena
integral
de perifrjca
de
*^*L-^-^

il rvil rurdrd

Bicapade
fosfolpidos
(7-8 nm)

SUPERFICIE
INTERNA
DELA
MEMBRANA

memDrana

(a) Modelode mosaicofluido

^
uE

l^
td

^^+,,,^+,.,^
EJil uuLut d

^
uE

l^
ta

membrana

\
-otc

Fosforeido

ll
Polipptido
(cadenade
N H aminocidos)

transmembrana
en o,-hlice

^^i^^^

(b) Protenaintegralde membrana

(c) Un segmentotransmembrana
(20-30aminocidos)
en a-hlice,
ampliado

carbohidratos
(dela
glicoprotena)

Figura7.5 El modelode mosaicofluido de estructurade la membrana. (a) Singery Nicolson imaginaron la membrana como una bicapa de
lpidos fluida con un mosaico de protenas asociadaso bien integraleso bien perifricas.Las protenas integralesde membrana estn
ancladasal interior hidrofbico de la membrana por uno o ms segmentoshidrofbicos transmembrana que normalmente tienen
conformacin en a-hlice (prpura claro). Los segmentoshidroflicos (prlrpura oscuro) se extienden hacia el exterior, hacia uno o ambos
lados de la membrana. Las protenas perifricas de membrana se asociancon la superficie de la membrana por fuerzaselectrostticasdbiles
que las unen a regioneshidroflicas de otras protenas integralesde membrana adyacenteso a grupos polaresde las cabezasde los
fosfolpidos. (b) Una protena integral de membrana con multiples segmentostransmembrana en a-hlice como se revel en los trabajos
posterioresde Unwin y Henderson.Muchas protenas integral de la membrana plasmticatienen orientadashacia la superficie externa de
la membrana, cadenaslateralesde carbohidratos unidas a sus segmentoshidroflicos. (c) Un segmentotransmembrana en a-hlice con
aminocidos representadospor crculos dentro de la hlice.

las protenas de la membrana, pero result que todos los

datos cuadraban bastantebien. Basndoseen el diferente
anclajea la bicapa,se reconocentres clasesde protenasde
membrana. Lasprotenas integralesde rnembranaestn embebidasen la bicapa lipdica y se mantienen en su sitio por
la afinidad de los segmentos hidrofbicos de la protena

176

qumica
y funcin
7 Membranas:
Capitulo
estructura,

por el interior hidrofbicode la bicapalipdica.Por otro

lado,protenasperifericas,que son mucho mshidrofilicas
y por tanto estnlocalizadasen la superficiede la membrana. donde estnancladasde forma no covalentea los
grupos polaresde las cabezasde los fosfolpidosy/o a las
parteshidroflicas de otras protenasde membrana.Pro-

tenasancladasa lpidos,aunqueno son parte del modelo

de mosaicofluido original, ahora se reconoce,como una
terceraclasede protenasde membrana.Estasprotenas
son esencialmente
hidrofflicasy por estoresidenen la superficiede Ia membrana,pero estnunidascovalentemente a molculasde lpido que estnincluidas en la bicapa.
La naturalezafluida de Ia membranaesla segundacaractersticacrticadel modelode Singer-Nicholson.
La mayora de los componenteslipdicos de una membranaestn en constante movimiento, son capacesde tener
moviiidadlateral(esdecir,movimiento paraleloa la superficie de la membrana)msque de estarbloqueadosrigidamente en su sitio. Muchasprotenasde la membranason
tambin capacesde moverselateralmentedentro de la
membrana,aunquealgunasestnancladasa elementosestructuralesde uno u otro lado de la membranay por esto
tienen una movilidad restringida.
La fierza del modelo de mosaicofluido est en que
proporciona una explicacinfcil para la mayora de las
crticasrealizadas
al modelode Davson-Danielli.Por ejemplo, el conceptode protenasparcialmenteembebidasen la
bicapalipdica concuerdacon la naturalezahidrofobicay
la estructuraglobular de la mayorade las protenasde la
membranay eliminala necesidad
de acomodarlasprotenas de membranaen finas capassuperficiales
de espesor
invariable.Adems,la variabilidad de la proporcin de
protenas/lpidosde membranasdiferentes,simplemente
significaque algunasmembranastienen relativamentepocasprotenasembebidas
en la bicapalipldica,mientrasque
otrasmembranastienenmsprotenasde estetipo. La exposicinde lascabezas
de los lpidosen la superficiede la
membranaesobviamentecompatiblecon su susceptibilidad a la digestinpor lasfosfolipasas,
mientrasqela fluidezde lascapaslipdicasylamezclade lpidosy protenas
dentrode la membranahacemsfcilimaginarla movilidadtanto de lpidoscomode protenas.

mente de la luz del sol. Para captar estaenergasolar,la

bacteriorodopsina
tiene,comopartede su estructura,una
molculade retinal,lamismamolculacon capacidad
para
absorberluz, queutiliza el ojo humano paradetectarla luz.
Ademsde absorberla energaluminosa,el retinal provocaun cambioconformacionalen la bacteriorodopsinaque
causaque la protenabombeeprotonesfuera de la clula.
El gradientede protonesresultantea travsde la membrana puedeserutilizadocomofuentede energa.
Nigel Unwin y Richard Hendersonutilizaron la microscopaelectrnicapara determinarla estructuratridimensionalde la bacteriorodopsina
y su orientacinen la
membrana.Su extraordinariodescubrimiento,
publicado
en 1975,fue que la bacteriorodopsinaconstabade una
nicacadenapeptdicaquesepliegaunay otravez atravs
de la bicapalipdicahastaun total de sieteveces.Cadauno
de los sietesegmentostransmembranade la protenaes
una r-hlice empaquetadaestrechamente
y compuesta
principalmentepor aminocidoshidrofbicos.Los segmentos transmembranasucesivos
estnancladosuno a
otro por pequeosbuclesde aminocidos
hidroflicosque
seextiendeny sobresalendesdelassuperficiespolaresde Ia
membrana.(Paraver en detallela estructuratridimensional de la bacteriorodopsina,
consultela Figura8.14del captulo siguiente.)Basndose
en los trabajosposteriores
realizadospor muchos laboratorios,los bilogosde la
membranaahoracreenquetodaslasprotenastransmembrana estnancladasa la bicapalipdicapor uno o ms
segmentostransmembrana,un tema al que volveremos
mstarde en estecaptulo.
Descubrimientos
lecientesmejorannuesttos
conocmentos
sobrela estructurade la memblana

Casidesdeel momentoen queSingery Nicolsonlo propusieron,el modelodel mosaicofluido revolucionla manera en la que los cientficospensabanacercadela estructura
de las membranas.El modelo lanzabauna nuevaera en la
Unwiny Hendersonl
la mayoa de las protenas
investigacin
de la membranaque no sloha confirmado
de membrana
contienensegmentostlansmemblana
el modelobsico,sino que Io ha aumentadoy extendido.
La ilustracinfinal en el cronograma(Figura7.3g)repre- Adems,nuestrosconocimientossobrela estructurade Ia
sentaunapropiedadimportantedelasprotenasintegrales membranacontinan expandindosea medida que nuede membranaque los bilogoscelularesempezarona envos descubrimientos
cientficosmejoran y modifican el
tenderenla dcadade 1970:la mayoradelasprotenastiemodelobsico.
nen en su estructuraprimariauna o mssecuencias
hidroDescubrimientosrecientesenfatizanel conceptode que
fbicasque abarcanla bicapalipdica (Figura7.5b y c).
las membranasno son estructurashomogneasen las que
Estossegmentos
transmembranaanclanlas protenasa la
suscomponentessemezclande forma libre, sino quetanto
membranay las sostienenalineadascorrectamentedentro
los lpidoscomolasprotenastiendena ordenarse,
estando
de la bicapalipdica.
susmovimientos con frecuenciarestringidospor mecanisEl ejemplode la Figura7.3ges dela bacteriorodopsina, mos difcilesde evidenciara partir de la estructurabsica
primeraprotenade membranaque sedemostrque pomostradaen la Figura7.5.Dehecho,la mayorade losproseaestacaracterstica
estructural.La bacteriorodopsina
es
cesoscelularesqueimplican a lasmembranas,dependende
una protena de la membranaplasmticaencontradaen
los complejosestructuralesespecficos
de lpidos y proteuna arqueobacteria
del gneroHalobacterium,
donde su
nas La sealizacincelulat un tema del que trataremosen
presenciale permitea las clulasobtenerenergadirecta- el Captulo 14,esun ejemplode estetipo de procesos.
Modelos
delaestructura
dela membrana:
unaperspectiva
experimental L 7 7

Hastaahora,para entenderlos procesosasociadosa las

membranas,hemos necesitadoalgo ms que el modelo
original de mosaicofluido, con lpidos y protenasflotando alrededorsimplementeal azar.No obstante,el modelo
de mosaicofluido esbsicopara entenderla estructurade
la membrana,de maneraqueesimportanteparanosotros
Estascaexaminaren detallesuscaractersticas
esenciales.
ractersticasincluyen,la qumica,la distribucin asimtrirelaciones
de
cay la fluidezdeloslpidosde membrana,las
lasprotenasde membranacon la bicapay la movilidad de
lasprotenasen la bicapa.Comentaremos
cadauna de espor orden, centrndonosen las evidentas caractersticas
ciasque lo apoyany en las implicacionesde cadacaractersticaen la funcin de la membrana.

Los lpidos de membrana: la parte

"fluida" del modelo
Empezaremosel estudiodetalladode lasmembranasconsiderandolos lpidos,que son componentesimportantes
de la parte<fluida>del modelode mosaicofluido.
Lasmemblanascontienenvariasde las plincipalesclases
de lpidos
Una propiedadevidentedel modelo de Singery Nicholson
es que mantienela bicapalipdica propuestainicialmente
por Gorter y Grendel,aunquecon una mayor diversidady
fluidez de los componenteslipdicos de la que los investigadoresanterioresreconocieron.
Lasprincipalesclasesde
glicollpidos de membranasonlassiguientes:
/osfolpidos,
pidosyesteroles.
La Figura7.6haceun listadodelosprncipaleslpidosde cadauna de estascategoras
y representa
la
estructurade algunosde ellos.
Fosfolipidos.
Comoya sabemos
desdeel Captulo3,los Ipidos que se encuentranen mayor abundanciaen las
membranasson los fosfollpidos(Figura7.6a).Lasmembranascontienenmuchasclasesde fosfolpidosdistintos,
incluyendo tanto a fosfoglicridos basadosen glicerol
como a los esfingolpidosbasadosen esfingosina.Los fosfoglicridosmscomunes sonfosfatidilcolina,
fosfatidiletanolamina,fosfatidilserinay fosfatidilinositol.El esfingolpido ms comn es la esfingomielina,su estructura se
muestraen la Figura7.6a.Lasclases,
orlgenesy proporciones relativasde los fosfolpidospresentesen las membra-

nas varan significativamentedependiendodel origen de

esuno de
stas(Figura7.7).Porejemplo,la esfingomielina
los principalesfosfolpidosde las membranasplasmticas
animales,pero estausenteen las membranasplasmticas
de plantasybacteriasy tambindelasmembranasinternas
de mitocondriasy cloroplastos.
Glicolipidos.Como su nombre indica,los glicolpidosse
forman al aadira los lpidosgruposcarbohidrato.Algonos glicolpidostienen como baseglicerol,pero la mayora
derivan de la esfingosina por tanto, sellaman glicoesfingolpidos.Los ejemplosmscomunesson los cerebrsidos
y los ganglisidos.Los cerebrsidossedenominanglicolpidosneutrosya que cadamolculatiene ,n azicar no cargado como grupo principal -galactosa-, en el casodel
galactocerebrsido
que se muestraen la Figura 7.6b.Por
otro lado,un ganglisido,
siempretieneun grupo principal oligosacridoque contieneuno o ms residuosde cique le proporcionana
do siilico cargadosnegativamente,
y los ganla molculacarganetanegativa.Loscerebrsidos
glisidospredominanespecialmente
en lasmembranascerebralesy en lasclulasnerviosas.Losganglisidosexpuestos en la superficiede la membranaplasmticatambin
funcionan como antgenosque son reconocidospor anticuerposen lasreaccionesinmunes,incluyendolasreaccioentregrupossangunesresponsables
de lasinteracciones
grupos
humanosABO,
neos.Por ejemplo,los
sanguneos
glicoesfingolpidos
que
sirvencomomarcaimplicana los
doresde la superficiecelularde los glbulosrojos.
Algunas de las enfermedadeshumanasms gravesse
producencomoconsecuencia
de daosen el metabolismo
de los glicoesfingolpidos.
El ejemplomejor conocidoesla
que seorigina por la ausenciade
de Tay-Sachs,
enfermedad
una enzimalisosomal,la B-N-acetilhexosaminidasa
A, responsablede uno delos pasosde la degradacin
de los ganglisidos.Como resultadodel defectogentico,los ganglisidosse acumulanen el cerebroy en otros tejidos
nerviosos,
daandolosnerviosy afectandoa la funcincerebral,provocandofinalmenteparlisis,deterioro mental
severoy muerre.
Esteroles.Ademsdefosfolpidosy glicolpidos,las
membranasde la mayorade lasclulaseucariotastambincontienen cantidadessignificativasde esteroles(Figura7.6c).
El principal esterolde lasmembranascelularesanimaleses
el colesterol,mientras que las membranasde las clulas
vegetalescontienen pequeascantidadesde colesteroly

Figura7.6 (Pginaopuesta)Tres clases pncipales de lipidosde membrana. Cada clasede lpido es ilustrado mediante un diagrama
esquemtico(en la izquierda), su estructura qumica (en el medio) y mediante modelos de ocupacin espacial(en la derecha).
(a) Los fosfolpidos consistenen una cabezacon un grupo polar pequeo (del tipo colina, etanolamina, serina o inositol) unido a un
esqueletolipdico, formando fosfoglicridos (basadosen glicerol) o esfingolpidos (basadosen esfingosina).Para conocer la estructura de
colina, etanolamina, serina e inositol, aseFigura 3.29 en la p. 69). (b) Los glicolpidos estntambin basadosen glicerol o en esfingosina,
estosltimos son los ms habituales.Un cerebrsidotiene un azcar neutro, como grupo principal, mientras que un ganglisido tiene una
cadenade oligosacridoque contiene uno o ms residuosde cido silico y ademstiene carganegativa.(c) Los esterolesms comunes de la
membrana son el colesterolen animalesy varios fitoesterolesen las plantas.

178

qumica
y funcin
Captulo
7 Membranas:
estructura,

Diagramaesquemtico
(A) FOSFOLPIDOS
(en la imagen)
Fosfatidilcolina
Fosfatidiletanolamina
Fosfatidilserina
Fosfatidiltreonina
Fosfatidilinosito!
Fosfatidilglicerol
glicerol(cardiolipina)
Difosfatidil

---t--,
---t---

'fcdrr---]

Estructuraqulmica
H.C

,/N\,/CH,
\^

H"C

H.C

Fosfato I

Y
I
O:P-oI

HH
I
H-C-C-H

-rr-

__l_
I Glicerol I

'-c:o
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H3c Hp
o-?--

(unesfingolpido)
Esfingomielina

I Fosfato I
---T--*

o
I
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l

Esfingosina I
I--f-*-l
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(b)cLrcoLPrDos
Cerebrsidos
(galactocerebrsido,
en la imagen)
Ganglisidos

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Reconstruccin
espacial

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:":il:
(c) ESTEROLES
Colesterol(en la imagen)
CampesterolI
Sitosterol
i Fitoesteroles
Estigmasterol
J

| \^/\^/ :..

cH3 F, E-"'3

Loslpidos
demembranas:
la parteufluida,
delmodelo

179

Membrana
plasmtica
(E. coli)
o^^
obu

:
o
a

6
o
c
(

c)
'd'

2n

c)
O
L

I
ffi
T

Fosfatad
iletanolami
na
Fosfatid
ilcolina
Fosfatidrlserina
Esfingomielina

I Fosfatidilinositol
t Fosfatidilglicero
(cardiolipina)
1,ffiDifosfatidilglicerol

y su composicin
Figura7 .7 Variasclasesde membranas
de fosfolpidos. La abundanciarelativade distintasclasesde fosfolpidosde ias
membranasbiolgicasvaraenormementedependiendode la membranade origen.

grandescantidadesde fitoesteroles, entre los que se incluyen el campesterol,sitosteroly estigmasterol.Hasta donde

sesabe,las membranas de hongos y protistas tambin contienen esterolessimilaresen su estructura al colesterol.
No se han encontrado esterolesen las membranas de
las clulas procariotas y tambin estn ausentes de las
membranas internas de mitocondrias y cloroplastos,que
secreeque derivan evolutivamentede membranasplasmticas de clulas procariotas. Sin embargo, la membrana
plasmticade por lo menos algunos procariotas,incluyendo tanto bacteriascomo cianobacteriascontienen molculas similaresa los esteroles,denominadashopanoides, que
sustituyen a los esterolesen la estructura de la membrana.
La molcula de hopanoide esrgida y fuertementehidrofbica, con una cadenalateral corta e hidroflica que se extiende desdeuno de los lados (Figura 7.8). Los hopanoides
son abundantes en los depsitos de petrleo, sugiriendo
que podran haber sido componentesde las membranas de
los antiguos procariotas que contribuyeron, presumiblemente, a la formacin de los combustiblesfsiles.

una placa de vidrio o placa metlica, mientras que Ia fase

mr'il es una mezcla de solventesapropiados.
En el experimento, lo primero es extraer los lpidos de
la preparacin de membrana usando una mezcla de soll,entesorgnicos.Despus,se aplica una gota de la mezcla
del extracto en un extremo de la placa tratada con cido silcico, concretamenteen un rea pequea denominada el
origen (Figura7.9a).Unavez el solventese ha evaporado,
se mete el extremo de la placa en un sistemasolventeque
normalmente consiste en cloroformo, metanol y ugr.tu.A
medida que el solventese mueve, pasa por el origen y asciende por la placa por capilaridad, los lpidos se separan

at-.t

^t-.1

(a) Un hopanoide

Lacromatografa
encapafinaes unatcnicaimportante
parael anlisis
deloslpidos
Cmo sabemostanto acercade los componenteslipdicos
de las membranas?La respuesta,por supuesto,es que los
bilogos y bioqumicos han aislado,separadoy estudiado
los lpidos de las membranas durante ms de un siglo.Una
tcnica importante para el anlisisde los lpidos es la cromatograffa en capa fina (TLC) (del ingls, thin layer chromatography),representadaesquemticamenteen la Figura
7.9.Esta tcnica separadiferentesclasesde lpidos basndose en sus afiniddesrelativaspor una fasi estacionaria
hidroflica y una fase mvil hidrofbica. Normalmente la
fase estacionariaes una capa fina de cido silcico sobre

r80

qumica
y funcin
Capitulo
7 Membranas:
estructura,

HO
(b) Colesterol
Figura7.8 Estructutade los hopanoides. (a) Un hopanoide,un
tipo de molcula similar al colesterolque parecefuncionar en las
membranas plasmticasde algunos procariotas,como lo hacen los
esterolesen ias membranasde las clu1as
eucariotas.(b) La
estructura del colesterol.Una cadenalateral dbilmente hidrofflica
(-CHTOH o -OH) sobresalede cadamolcula.

Frente
del solvente

I o Colesterol

I vrt

componentes
estnpresentes
en menorescantidades
y es
menosprobablequesedetectenpor TLC.No obstante,estos ltimos lpidos son componentesimportantesde la
membrana,que abundanen otros tipos de membranas.
por ejemplo,son especialmente
Los esfingolpidos,
frecuentesen el tejido nervioso,comoya seha comentado.

lec

OPS
6 Origen

lo

Loscidosgrasosson esencales
en la estructura
y funcinde la membrana

Loscidosgrasossoncomponentes
de todosloslpidosde
la membranaexceptode los esteroles.
Sonesenciales
para
la
estructura
de
la
membrana
que
debido
a
sus
largas
colas
para
Figura7.9 Usode la clomatografiaen capafina
el anlisisde
hidrocarbonadas
forman una barrerahidrofbicaefectiva
fos fipidosde membrana. La cromatografiaen capafina (TLC') es
para la difusinde los solutospolares.La mayorade los
una tcnica til para ana\zar los lpidos de membrana. Los lpidos
seextraena partir de una preparacinde membranascon una
cidosgrasosde las membranastienenentre 12 y 20 tomezcla de solventesorgnicosy (a) se aplica una gota de la muestra
mos de carbono de longitud, siendoespecialmente
freen un reapequea de la placa de vidrio o de la placa de metal
grasos
y
cuentes
los
cidos
de
16
18
tomos
de
carbono.
tratada con una capafina de cido silcico.Cuando la mezcla seha
Esterangode tamaospareceserel ptimo paraIa formasecadoen el punto de origen,la placasesumergeen un sistema
soiventeque normalmente estcompuesto por una mezcla de
cin de la bicapa,debidoa que lascadenascon menosde
cloroformo, metanol y agua.A medida que el solventeasciendepor
12 o con ms de 20 tomosde carbonoson incapaces
de
la placapor capilaridad,Ios ipidos seseparanen funcin de su
formar una bicapaestable.
De estaforma,el espesorde las
polaridad:los lpidos no polarescomo el colesterolno seadhieren
membranas(alrededorde 6-8 nm, dependiendo
de su oricon fuerza al cido silcico y asciendenpor la placa,mientras que la
vendra
principalmente
gen)
dictado
por
la
longitud
de la
(b)
mayora de lpidos polaresse mantienen cercadel origen
paraquela bicapaseaescuando el frente del solventese acercaalazona superior de la placa,
cadenadecidosgrasosnecesaria
se retira la placa del sistemasolvente y cadauno de los lpidos
table.
separadosserecuperay seidentifica.El patrn que semuestra
Los cidosgrasosencontradosen los lpidosde memcorrespondea Ia membrana plasmticadel eritrocito. Los
brana
no slopresentandiferencias
en longitud,sino que
componentesprincipales son el colesterol,la fosfatidiletanolamina
tambinvaranconsiderablemente
y nmeenla presencia
(PE),la fosfatidilcolina(PC) v la fosfatidilserina(PS).
ro de doblesenlaces.
La Tbla7.2 muestralas estructuras
de diferentes
cidosgrasosespecialmente
frecuentes
en los
basndose
en su polaridad-es decir,por susafinidades
Ipidosde membrana.Elcidopalmticoyel cidoesterico
relativaspor las fasesestacionaria
y mvil-. Los lpidos
son cidosgrasossaturadoscon 16y 18 tomosde carbono polares,como el colesterol,
tienenpocaafinidadpor el
no respectivamente.
El cidooleicoy el cidolinoleicoson
y por tanto ascienden
cido silcico(la faseestacionaria)
cidosgrasosinsaturadoscon uno o dos doblesenlaces
por la placacon el sistemasolvente(la fasemvil). Loslrespectivamente.
Otroscidosgrasosinsaturados
habituapidosmspolares,comolos fosfolpidos,
interactanfuerlesen lasmembranassonel cidolinolnicocon 18carbotementecon el cidosilcico,queralentizasu movimiento.
y el cidoaraquidnico
nosy tresdoblesenlaces
con20 carDe estaforma, lpidos diferentesse separanprogresivabonosy cuatrodoblesenlaces(vaseTabla
3.6).Todoslos
mente a medida que el frente de avancede la fasemvil
cidosgrasosinsaturadosde las membranasestnen la
por la placa.Cuandoel frente de
contina ascendiendo
configuracinclsprovocandouna torsinbrusca,un rizo,
avanceo frentedelsolvente
se acercaa la superficie,la placa
dela cadenahidrocarbonada
en cadadobleenlace.Debido
seretira del sistemasolventey seseca,y entonceslos lpilateralesno sonlineales,los cidosgraa que suscadenas
dos separados
serecuperande la placa(disolviendocada
soscon doblesenlacesno seempaquetan
bien en la memgota individualizadao cadabandaen un solventecomo el
brana,caracterstica
stacon considerables
implicaciones
cloroformo)parasu posterioridentificaciny estudio.
paralafluidezde la misma,comoveremosen breve.
La Figura 7.9 muestrael patrn de TLC visto en la
membranaplasmticadel eritrocito.El componenteprincipalde estamembranaesel colesterol(25o/o)
ylos fosfol- Asimeta de membrana:la mayoriade los lpidosse
(PE),fosfatidilco- distribuyende manetadesigualentrelas dos monocapas
pidos (55%),con fosfatidiletanolamina
(PS)comolos fosfolpidosms
lina (PC)y fosfatidilserina
Puestoque lasmembranascontienenmuchasclasesde limportantes.La membranaplasmticadel eritrocitotampidos diferentes,
la preguntaque surgeessi los diferentes
bin contienefosfatidilinositol
pero estos
y esfingolpidos,
lpidossedistribuyeno no, al azar,entrelas dosmonocapas de lpidos que constituyenuna bicapalipdica. Estu'
N. del T.: TLC de Thin Layer Cromatography
dios qumicosque incluyenmembranasderivadasde una
(a)

(b)

Loslpidos
demembranas:
la parteufluida,
delmodelo

181

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qumica
Gaptulo
7 Membranas:
y funcin
estructura,

5-o'.-

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NI

ampliavariedadde tipos celularesdiferentesrevelaronque

la mayoade los lpidos sedistribuyende forma desigual
entre las dos monocapas.Estaasimetra de la membrana
incluye diferenciastanto en las clasesde lpidos presentes
como en el grado de instauracinde los cidosgrasosde
las molculasde fosfolpidos.Por ejemplo,lamayorade
los glicolpidospresentesen la membranaplasmticade
una clulaanimal -y tambinla mayorade las glicoprotenas- serestringea la ms externade las dos monocapas.El resultadoes,que susgruposcarbohidratosobresalen de la superficiede la membrana externa,en donde
estnimplicadosen una granvariedadde acontecimientos
relacionadoscon la sealizacny el reconocimiento.Por
otro lado,la fosfatidiletanolamina,el fosfatidilinositoly la
fosfatidilserinason ms importantesen la monocapainterna,donde estnimplicadosen la transmisinde varios
tipos de senalesdesdela membranaplasmticahaciael interior de la clula.Nos esperanmsdetallessobrela detecy la transduccinen el Captulo14.
cin de seales
La asimetrade la membranase establecedurante su
por la insercinde diferenteslpidos o por la
biognesis
existenciade proporcionesdiferentesde varios lpidos en
la asiUnavezestablecida,
cadauna delasdosmonocapas.
metrla tiendea mantenersedebidoa que el movimiento de
los lpidosde una monocapaa la otra requierequelos grupasena travsdel interior
pos hidroflicosde suscabezas
acontecimientoque es
la
membrana,
un
hidrofbicode
Aunqueocurrede matermodinmicamente.
desfavorable
nflip-flopr,
transversade
o
difusin
nera ocasional,este
raro.
De hecho,
los lpidosde membrana,esrelativamente
el
una molculade fosfolpidotpica experimenta flip-flop
menosde una vez ala semanaen una bicapafosfolipdica
pura. Estocontrastanotablementecon la rotacin de las
molculasde fosfolpidoalrededorde su ejey con la difusin lateral delos fosfolpidosen el plano de la membrana,
movimientosque ocurrenlibremente,de forma rpiday al
azar.LaFigura7.10ilustraestostrestiposde movimientos
lipdicos.
Difusinlateral

Mientras que el flip-flop fosfolipdicoesrelativamente

raro, su frecuenciaes mayor en las membranasnaturales
que en las bicapas lipdicas artificiales ya que algunas
membranas-la del retculo endoplasmticoliso (ER),en
particular- tienen protenasdenominadastranslocadores lipdicos, o flipasas,que catalizanel flip-flop de los 1pidosde membranade una monocapaa la otra.Estasprode lpidos. Por
tenasactanslo sobreclasesespecficas
ejemplo,una de estasprotenasen la membranadel retculo endoplasmticoliso, catalizala translocacinde fosfatidilcolina de un lado de la membranaal otro pero no reconoce a otros fosfolpidos. Esta capacidadpara mover
de un lado de la bicapa
molculaslipdicasselectivamente
al otro esuna contribucin msa la distribucin asimtrica de los fosfolpidosa travsde la membrana.El papeldel
retculo endoplasmticoliso en la sntesisy flip-flop selectivo de los fosfolpidosde la membranaesun tema al que
volveremosen el Captulo 12.
La bicapalipdicaes fluida
Una de las propiedadesms llamativasde los lpidos de
membranaes que ms que tener un sitio fijo en la membrana, forman una bicapa fluida que permite la difusin
lateral tanto de los lpidos como de Ias protenasen la
membrana.Las molculaslipdicas se mueven especialmenterpido debido a que son mucho ms pequeasque
lasprotenas.Por ejemplo,una molculafosfolipdicatlpica,tiene un pesomolecularde alrededorde 800 y puede
viajarla longitud de una clulabacteriana(en la mayorla
de los casos,unaspocasmicras)en un segundoo menos.
Lasprotenassemuevenmucho mslentamentequelos lcon
pidos,en parteporquesonmolculasmuchomayores,
pesosmolecularesvariasvecessuperioresa los de los fosfolpidos,pero principalmentedebido a sus interacciones
con lasprotenasdel citoesqueletodel interior de la clula.
La difusin lateral de los lpidos de membranasepuepor una tcnicadenomide demostrarexperimentalmente
defosfolipido
enlas
delasmolculas
Figura
7.10 Movimientos
memblanas, Una molcula de fosfofpido es capazde realizar tres
clasesde movimientos en la membrana; rotacin alrededor de su
eje mayor; difusin lateral al azar itercambiando sitios con
molculasvecinasde la misma monocapa; difusin transversalo
<flip-flop>, de una monocapa ala otra. A37 oC en una monocapa
de fosfolpidos pura, una molcula lipdica tpica intercambia su
sitio con molculasvecinas,unos diez millones de vecespor
segundoy semueve lateralmente a una velocidad de varias micras
por segundo.Por el contrario, la frecuencia con la que una
molcula de fosfolpido individual difunde por flip-flop de una
capa ala otra, oscila,entre menos de una vez a la semanaen una
bicapa fosfopdica pura, aunavez cadapocashoras en algunas
membranas naturales.Esta ultima diferencia,se debe,a la presencia
en algunasmembranas,de enzimasdenominadastranslocadores
fosfolipdicos, o flipasas,que catalizanla difusin transversalde
molculasde fosfolpido de una monocapa a la otra.

transversal
Difusin
("flipJlop"
la parte.fluidao
delmodelo
Loslpidos
demembranas:

r83

nada recuperacinde la fluorescenciadespusde fotoblanqueamiento(Figura7.11).El investigador

etiqueta,o
marca,las
molculaslipdicasdela membranade una clula viva unindolascovalentemente
a molculasde un marcadorfluorescente.Seutiliza entoncesun rayolserde alta
intensidadqueblanqueael coloranteen un punto pequeo (unaspocasmicrascuadradas)
de la superficiecelular.
Si seexaminala superficiecelularinmediatamentedespus
con un microscopiode fluorescencia,
se observaren la
membrana,un punto oscuro,no fluorescente.
Sin embargo,unossegundos
despus
los extremosdel punto semelven fluorescentes,
ya que molculaslipdicasblanqueadas
difunden fuera del reatratadacon el lsery molculaslipdicasfluorescentes,
procedentes
de regionesadyacentes
de la membrana,penetranen ella.Finalmente,el punto es
indistinguibledel restodela superficiecelular.Estatcnica
no slo demuestraque los lpidosde membranaestnen
un estadofluido ms que en un estadoesttico,sino que
proporcionauna maneradirectade medir el movimiento
Iateralde molculasespecficas.
Lasmemblanas
funcionan
correctamente
sloen estado
fluido
Como puedesuponet la fluidezde la membranacambia
con Ia temperatura,
disminuyendoa medidaquela temperatura decaey aumentandoa medidaque Ia temperatura
crece.De hecho,a partir de estudiosrealizados
conbicapas
Iipdicasartificiales,sesabeque cadabicapalipdicatiene
(T-) parala
una temperaturade transicincaracterstica
cual se gelifica(<secongelar)cuandose enfray se hace
otrayez fluida (nsefunde>)cuandosecalienta.Estecambio en el estadode la membranasedenominatransicin
de fasey esen ciertamedidasimilaral cambioque experi-

mentan la mantequilla o la margarina al calentarlas o enfriarlas. Para que una membrana funcione correctamente
debe mantenerse en el estado fluido -es decir, a una temperatura por encima de su valor d. 7.-.A
una temperatura por debajo del valor de 7-, todas las funciones que dependen de la movilidad o del cambio conformacional de
las protenas de membranas se vern daadas o interrumpidas, incluyendo procesosvitales tales como el transporte
de solutos a travsde la membrana, la detecciny la transmisin de seales,y la comunicacin intercelular (consulte la Figura 7.2).
La tcnica de calorimetra diferencial de barrido permite determinar la temperatura de transicin de una
membrana dada. Esteprocedimiento monitoriza la absorcin de calor que se produce durante la transicin desde
un estado ffsico a otro -la transicin del estado de gel al
estadofluido- en el casode las membranas.La membrana de inters se sita en una cmarasellada,el calormetro,
y la absorcin de calor se mide a medida que se va aumentando lentamentela temperatura. El punto de mxima absorcin de calor corresponde a Ia temperatura de transicin (Figura 7 .I2a).
Losefectosde la composicinde cidosgrasosen la fluidezde
la membtana. La fluidez de la membrana dependeprincipalmente de las clasesde lpidos que contiene. Hay dos
propiedades del componente lipdico de una membrana
que resultan especialmenteimportantes para determinar
su fluidez: la longitud de las cadenaslateralesde los cidos
grasosy su grado de instauracin (es decir, el nmero de
dobles enlaces presentes).Los cidos grasos de cadena
larga tienen temperaturas de transicin ms elevadasque
los cidos grasos de cadenascortas, lo que indica que las
membranas ricas en cidos qrasosde cadenalarea tienden

.(
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c)
O
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c)
(d

a
c
c)

Tiempo
Superficiecelular
no marcaoa

Molculasde la
superficiecelular
marcadascon un
colorantefluorescente

Un rayolser
blanqueaun reade
la superficiecelular

Molculasmarcadas
con el compuesto
fluorescente
difunden
haciael rea
blanqueada

Medidade la velocidadde
difusinde la fluorescencia
haciael rea blanqueada
con respectoal tiempo

Figura7.11 Medidade la movilidadlipdicaen la membranapor recuperacin

de la fluorescencia
despusde fotoblanqueamiento.Los lpidos
de membrana semarcan con un compuesto fluorescente,y en una zonalocalizada de la membrana esafluorescenciaseblanquea irradiando
Ia clula con un rayo lser.La fluidez de la membrana semide determinando la velocidad a la que difunden molculasfluorescentesdesde
zonascercanasal reablanqueada,provocando asla reaparicin de la fluorescenciaen el punto blanqueado por el lser.Sehan realizado
experimentos similarescon protenas de membrana; yaseIaFigtra 7.28.

184

qumica
y funcin
Captulo
7 Membranas:
estructura,

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70
60

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Temperatura

(a) Membrana
normal

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Enriquecida

(
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10 12 14 16 18 20

Nmerode tomos
oe carDono

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O
a

0123
Nmerode tomos
de carbono

(a) Efectode la longitudde la

(b) Efectode la instauracin
en el puntode fusin
cadenaen el puntode fusin

-o

020406080
("C)
Temperatura
(b) lVembranaenriquecidacon cidooleicoo con cido esterico
Figwa 7.12 Determinacin
de la tempenturc de transicinde la
membranapol calorimetradiferencialde barrido. (a) Cuando la
temperaturade una preparacinde membranaseaumenta
lentamenteen una cmarade calorimetra,la temperaturade
transicin ( T.) del estadogel al estadofluido viene marcadapor un
pico de absorcinde calor.(b) Lasmembranascelularesque crecen
en un medio enriquecidocon cido oleico,un cido graso
insaturado,son ms fluidasque las membranasnormalesy por
tanto tienen una menor temDeraturade transicin.Lasmembranas
de las clulasque crecenen mediosenriquecidoscon cido
esterico,un cido grasosaturado,son menosfluidasque las
membranasnormalesy por tanto tienen una temperaturade
transicin ms alta.
a ser menos fluidas. Por ejemplo, a medida que la longitud
de la cadena de los cidos grasos saturados aumenta de 10

a 20 tomos de carbono, los puntos de fusin aumentan de

32"C a76"Cy por tanto, de manera progresiva,la membrana se vuelve menos fluida (Figura7.l3a). La presencia
de instauracionesafectaconsiderablementeal punto de fusin. Para cidos grasoscon 18 tomos de -arbono, los
puntos de fusin son 70, 16,5y -11 "C para cero,uno, dos
y tres dobles enlaces,respectivamente(Figura 7.13b). En
consecuencia,las membranas que contienen muchos cidos grasos insaturados tienden a tener temperaturas de
transicin ms bajas y adems son ms fluidas que las
membranas con muchos cidos qrasossaturados.La Fieu-

Figura7.13 Efectode la longitudde la cadenay el nmerode dobles

enlacesen la temperatufade fusinde los cidosgrasos. El punto
de fusin de los cidosgrasos(a) aumentacon la longitud de la
cadenapara los cidosgrasossaturadosy (b) disminuye
dramticamentecon el nmero de doblesenlacespara cidos
grasoscon una longitud de cadenafija. La parte (b) muestra
datospara los cidosgrasosde 18 carbonos,cidosesterico,
oleico,linoleicoy linolnico con 0, 1, 2 y 3 doblesenlaces,
respectlvamente.

ra 7.l2b ilustra esteaumento de fluidez en membranas ricas en cido oleico (18 carbonos y un doble enlace)frente
a membranas enriquecidascon cido esterico(18 carbonos saturados).
El efecto de la instauracin en la fluidez de la membrana es tan drstico debido a que los giros que los dobles
enlacesintroducen en los cidos grasosevitan que las cadenas hidrocarbonadas encajen.Los lpidos de membrana con cidos grasos saturados estn bien empaquetados
(Figura 7.I4a), mientras que los lpidos con cidos grasos
insaturados, no (Figura 7 .l4b). Los lpidos de la mayora
de las membranas plasmticas contienen cidos grasos
que varan tanto en la longitud de la cadena como en el
grado de instauracin. De hecho, la variabilidad es a menudo intramolecular, ya que los lpidos de membrana
contienen normalmente un cido graso saturado y un
cido graso insaturado. Esta propiedad ayuda a asegurar
que las membranas estn en estado fluido a temperaturas
fisiolgicas.

Loslpidos
demembranas:
la parteufluida,
delmodelo

18s

tipos celulares.Una clula animal tpica, por ejemplo,

contiene grandescantidadesde colesterol-por encima
del total de los lpidosde membranaen basemodel50%o
lar-. Normalmente las molculas de colesterolse encuentran en las dos capasde la membrana plasmtica,
pero una molculadadaselocalizaen una de lasdos capas
(Figura7.15a).La molculase orienta en la capacon su

(a) Lpidosconcidosgrasossaturados
encajanbien
en la memorana

$grg&t[grgggrg
Colesterol

plasmtica
(a) Colesterol
en la membrana

CH^-CH-CH^
ltl'

Pu,entede hidrgeno

to
Fosfolpido

>
(b) Lpidoscon una mezcla de cidos grasossaturados
e insaturadosno encaianbien en la membrana
Figura7,14 El efecto de los cidosgasosinsaturadosen el
empaquetamientode los lpidosde membrana. (a) Los fosfolpidos
de membrana con cidos grasossaturadosencajanestrechamente
debido a que las cadenasde cidos grasosdiscurren paralelasunas a
otras. (b) Los lpidos de membrana con uno o ms cidos grasos
insaturadosno encajantan estrechamentedebido a que los dobles
enlacesen clsprovocan torsiones en las cadenas,que intereren con
el empaquetamiento.Cada una de las estructurasmostradas esuna
molcula de fosfatidilcolina, con dos cidos grasosde 18 carbonos
saturados(cido esterico)(parte a) o dos cidosgrasosde 18
carbonos,uno de ellos saturado (cido esterico)yel otro con un
doble enlace(cido oleico) (parte b).

Losefectosde los esterolessobrela fluidezde la membmna.

-princiEn lasclulaseucariotas,la presenciade esteroles
palmentecolesterolen las membranasde clulasanimales
y fitoesterolesen las membranasde clulasvegetalesafectaa la fluidez de la membrana.Los esterolesson los
componentesprincipales de las membranasde muchos
186

qumica
y funcin
7 Membranas:
estructura,
Gaptulo

I,

Colesterol

\,,)(b) Bondingof cholesterol

to phospholipid
Figura7,15 Odentacinde las molculasde colesterolen una
bicapalipidica. (a) Las molculas de colesterolestnpresentesen
ambascapasde las membrana plasmticade la mayora de las
clulasanimales,pero una molcula dada selocaliza en una de las
dos capas.(b) Cada molcula se orienta en la capa lipdica de tal
forma que su un nico grupo hidroxilo se sita cercadel grupo
polar de Ia cabezade una molcula de fosfolpido vecina,para que
forme un puente de hidrgeno con el oxgeno de un enlacester
entre el esqueletode glicerol y el cido graso.El anillo esteroidey la
cadenalateral hidrocarbonada de la molcula de colesterol
interactan con cadenashidrocarbonadasadyacentesde los
fosfolpidos de la membrana.

nico grupo hidroxilo -la nica parte polar de una molculahidrofbica- cercadel grupo polar de la cabezade
una molculade fosfolpidovecino,donde puedeformar
un puentede hidrgenocon el oigeno de un enlacester
del esqueletode gliceroly un cidograsode la molculade
fosfolpido(Figura7.Isb). Los anillosde esteroideshidrofbicos rgidos y la cadenalateral hidrocarbonadade la
molculade colesterolinteractancon porcionesde lascaque estnmscercade
denashidrocarbonadasadyacentes
lascabezasde los fosfolpidos.
Intercalarmolculasrgidas de colesterolen la membrana de una clulaanimal haceque a temperaturasms
elevadasla membranaseamenosfluida de lo que debera
ser.Sin embargo,el colesteroltambinevitade maneraeficaz que las cadenashidrocarbonadasde los fosfolpidos
encajena medidaquela temperaturava disminuyendo,reduciendode estemodo, la tendenciade las membranasa
gelificarseal enfriarse.Adems,el colesteroltiene el efecto
paradjicode disminuirla fluidezde la membranaa temperaturaspor encimade la 7- y a aumentarlaa temperaturaspor debajode la 7-. Losesteroles
de lasmembranas
presumiblemente
de otroseucariotas
funcionande la misma manera.
Ademsde susefectossobrela fluidez de la membrana,
Ios esterolestambin disminuyenla permeabilidadde una
bicapalipldicaa los ionesy a pequeas
molculaspolares.
Probablemente
lo hacen,rellenandolos espacios
entrelas
cadenashidrocarbonadas
de los fosfolpidosde las membranas,tapandodeestaformapequeoscanales
a travsde
los cualespodranpasarionesy pequeasmolculas.En
general,una bicapalipdicaque contieneesteroles
esmeque una
nospermeablea los ionesy a molculaspequeas
bicapaque carecede esteroles.
La mayoa de los organismospuedenregularla fluidez
de la membmna
Lamayoriade los organismos,
tantoprocariotascomoeucariotas,soncapaces
de regularla fluidezde la membrana,
principalmentecambiandola composicinlipdica de las
mismas.Estahabilidadesespecialmente
importanteen los
poiquilotermos-organismos como bacterias,hongos,
protistas,plantasy animalesndesangrefro que no pueden regularsu propia temperatura-. Ya que la fluidez lipdica disminuyea medida que la temperaturadesciende,
las membranasde estosorganismosse gelificarancon el
enfriamientosi el organismono tuviera manerade compensarlos descensos
de la temperaturaambiente.(Usted
puedehaberexperimentadoesteefectoaunqueseaun homeotermo,u organismo <de sangrecaliente>:en los das
fros,susdedosde lasmanosy de los piespuedenestartan
fros que las membranasde las terminacionesnerviosas
sensitivasdejan de funcionar quedando temporalmente
entumecidos.)Por otro lado, a elevadastemperaturas,las
bicapaslipdicasde los poiquilotermossehacentan fluidas

que ya no funcionan como una barrerade permeabilidad

eftcaz.Por ejemplo,la mayorade los animalesde sangre
fra separalizana temperaturassuperioresa 45 'C, debido
probablementea que las membranasde lasclulasnerviosasselrrelventan permeablesa los ionesquelos gradientes
inicos no se mantieneny de forma global se impide la
funcinnerviosa.
Afortunadamente la mayora de los poiquilotermos
puedencompensarlos cambiosde temperaturaalterando
la composicinlipdica de susmembranas,regulandode
esemodo la fluidezde la misma.Estacapacidadsedenomina adaptacin homeoviscosadebido a que el efecto
principal de esaregulacinesmantenerla viscosidadde la
membranaaproximadamenteigual a pesarde lasvariaciones de temperatura.Considere,por ejemplo,qu pasa
cuando las clulasbacterianassetransfierende un medio
ambienteciIidoa otro msfro. En algunasespecies
del gnero Micrococcus,unpequeoaumentoen la temperatura
desencadena
un aumento en una proporcin de cidos
grasosde 16 carbonosfrentea cidosgrasosde 18 carbonos en la membranaplasmtica,que arda a la clula a
mantenerla fluidezde la membrana(recuerdeque la presenciade cadenasde cidosgrasosms cortasaumentala
fluidez de la membranaporque disminuyela temperatura
de fusin).
En estecasoparticular,el aumentode fluidez de memsealcanzaactivandouna enzimaqueretira
branadeseado,
dos carbonosterminalesde las colashidrocarbonadas
de
18 tomosde carbono.En otras especies
bacterianas,
la
adaptacina la temperaturaambienteimplica una alteracin en el gradode instauracinde los cidosgrasos,ms
que en su longitud.Por ejemplo,en la bacteriaintestinal
comnEscherichia
coli,undescenso
enla temperaturaamla sntesisde una enzimadesaturasa
biental desencadena
queintroducedoblesenlaces
en lascadenas
hidrocarbonadasde los cidosgrasos.Como estoscidosgrasosinsaturadosseincorporanen los fosfolpidosde membrana,disminuyen la temperatura de transicin de la misma,
asegurandode estaforma que la membranase mantenga
fluida a una temperaturamsbaja.
Laadaptacinhomeoviscosa
tambinseproduceen levadurasy en plantas.En estosorganismoslos cambiosde
fluidez de la membranarelacionadoscon la temperatura
parecendependerdel aumentode solubilidaddel oxgeno
en el citoplasmaa temperaturasms bajas.El ogeno es
un sustratopara el sistemade la enzimadesaturasa
implicado en la generacinde cidosgrasosinsaturados.
Con
msogeno disponiblea temperaturas
msbajas,los cidos grasosse sintetizanen mayor proporcin y la fluidez
de la membranaaumentacompensandoademsel efecto
de la temperatura.Estacapacidadtieneun efectosignificativo en la agricultura ya que las plantas que se pueden
adaptarde estaforma, son resistentesal fro (resistentes
al
enfriamiento)y puedencreceren ambientesmsfros.Los
animalespoiquilotermoscomo los anfibiosy reptilestamLoslpidos
demembranas:
la parteufluidao
delmodelo

t87

bin se adaptan a temperaturasms bajas aumentando la

proporcin de cidos grasosinsaturados en sus membranas. Adems, estos organismos pueden aumentar la proporcin de colesterol en la membrana, disminuyendo las
interacciones entre las cadenashidrocarbonadas y reduciendo la tendencia de la membrana a gelificarse.
En general,aunque la adaptacin homeoviscosaes de
mucha ms relevancia para los organismos poiquilotermos, tambin es importante en los mamferos que hibernan ya que, a menudo, la temperatura corporal decae
sustancialmentea medida que un animal entra en hibernacin -un descensode ms de 30 "C para algunos roedores-. Un animal que entra en hibernacin se adapta a este
cambio incorporando una mayor proporcin de cidos
grasos insaturados en los fosfolpidos de la membrana a
medida que su temperatura corporal decae.

Lasbalsaslipdicas
sonregones
concretas
de lpidosde
queestnimplicadas
membrana
enla sealizacin
celular
Hastahacepoco,el componentelipdicode una membraqueerauniformementefluido y relativana seconsideraba
mentehomogneodentrode una monocapadada,y sesuponaque lasprotenasproporcionaban
lascaractersticas
principalesde la membrana.Sin embargo,en
estructurales
pocosaos,un descubrimiento
ha generadomuchaexpectacin,la existenciade regionesde lpidos de membrana
que secuestran
protenasimplicadasen Ia sealizacin
celular. Estasregionesse denominanmicrodominios,
o ms
popularmentebalsas lipdicas, trmino generalmente
que estudianel transacuadopor los bilogoscelulares,
portelipdicointracelular.
Lasbalsaslipdicasseidentificaron por primeravezen la monocapaexternade la membranaplasmticade lasclulaseucariotas
pero tambinse
han detectadoen lasmonocapas
internas.
Las balsaslipdicasde las monocapasexternasde las
membranasse caracterizan
por tener niveleselevadosde
colesteroly glicoesfingolpidos.
Los esfingolpidos
tienen
colasde cidosgrasosms largasy ms saturadasque la
mayorade los lpidosde membrana.Adems,losfosfolpidospresentes
en Iasbalsaslipdicasestnmuchomssaturadosquelos queestnsituadosen la membranaquelas
rodea.Estaspropiedades,
ademsdela rigidezy dela naturalezahidrofbicadel colesterol,
permitenel buen empaquetamientodel colesteroly de las colashidrocarbonadas
y fosfolpidos.El resultadoes que,
de glicoesfingolpidos
lasbalsaslipdicasson msespesas
y menosfluidasque el
resto de la membrana,permitiendoas su identificacin
como microdominioslipdicos diferenciados. Las caveolas
estnestrechamente
relacionadas
con las balsaslipdicas
tanto en estructuracomo quizsen funcin. Las caveolas
son pequeasinvaginaciones
de la membranaplasmtica
con forma defrascoqueestncubiertaspor caveolina,protena de unin al colesterol,y que se consideracomo un
qumica
y funcin
Capitulo
7 Membranas:
estructura,

subgrupo de balsa lipdica. Mucha de la expectacin que se

ha generadoalrededor de las balsasde lpidos y de las caveolas est relacionada con su papel en la deteccin y respuesta a sealesqumicas que afectan a las clulas desde el
exterior, un tema que consideraremos en detalle cuando
lleguemos al Captulo 14. Por el momento, simplemente
prestaremosatencin a las diferentesprotenas receptoras
implicadas en la deteccin de sealesqumicas que estn
localizadasen la monocapa lipdica externa de la membrana plasmtica (revisin en la Figura 7.2,\a funcin 4).
Cuando se unen a susligandos especficos,ciertos receptores se mueven hacia balsaslipdicas concretasque tambin
estn localizadasen la monocapa externa. Se cree que las
balsaslipdicas que en la monocapa externa contienen receptoresestn acopladasfuncionalmente a balsaslipdicas
de la monocapa interna. Estas baisas lipdicas contienen
quinasasespecficas,enzimas que generan segundosmensajerosdentro de la clula, catalizando la fosforilacin de
sustanciasespecficas.De esta forma, sealesdetectadas
por las protenas receptoras en la monocapa externa se
transmiten al interior de la clula por ios nexos funcionales existentesentre las balsaslipdicas de las dos monocapas de membrana.

Protenas de membrana: la parte

<mosaico" del modelo
Despusde observar en detalle el aspecto<fluido> del modelo del mosaico fluido, vamos ahora a la parte del <mosaicor.Esto puede incluir a lasbalsaslipdicasy a otros dominios lipdicos, pero los principales componentes del
mosaico de membrana son las protenas de membrana,
como inicialmente imaginaron Singery Nicolson. Primero
veremoslas evidenciascon las que los microscopistasestipularon que la membrana era un mosaico de protenas y
despusconsideraremoslas clasesprincipales de protenas
de membrana.

Lamembrana
consiste
en unmosaico
de protenas:
evidencas
demicroscopia
concriofractura
Losindiciosmsslidossobreel modelodemosaico
fluido procedan de estudiosrealizadoscon bicapasartificiales
y con membranas naturales preparadaspara microscopa
electrnica con criofractura. En esta tcnica, una bicapa
lipdica o una membrana (o una clula que contuviera
membranas) se congela rpidamente y despusse golpea
bruscamentecon una cuchilla de diamante. A menudo, la
fractura resultantesigue el plano entre las dos capasde Ipidos de membrana, debido a que el interior no polar de la
bicapa es la va de menor resistenciade la muestra congeIada.Como resultado,la bicapa se escindeen sus monocapas interna y externa, revelando la superficie interna de
cada una de ellas (Figura 7.16a).

Glicoprotena

Monocapaexterna

uara E -

Monocapaextera

Protena
integralde
membrana

Cadenas
de carbohidratos

Cara P

Cara P

I
Membrana
plasmtica

Protenas
de membrana
ancraoas
a lnidne

Protena
perifrica
de membrana

(b)

(a)

Figuta 7.16 Anlisisde una membranapor criorac'tura. (a) Dibujo de una membrana criofracturada en donde el plano de fractura pasaa
travs del interior hidrofbico de la membrana, revelandolas superficiesinternas de las dos monocapas.Los segmentoshidrofbicos de las
protenas semuestran en prpura claro, los segmentoshidrofflicos en prirpura oscuro. Las protenas integralesde membrana que quedan en
la monocapa externa seven en la cara E (exoplsmica),mientras que los que quedan en la monocapa interna seven en la cara.P
(protoplsmica). (b) Dibujo de una membrana criofracturada con micrograffas electrnicasde las carasE y P de la membrana plasmticade
una clula tubular renal de ratn sobrepuestassobre el dibujo.

Lasmicrograffaselectrnicasde lasmembranaspreparadasde estaforma proporcionanclarasevidenciasde que

las protenasestn realmentesuspendidasdentro de las
membranas.Cuandoel plano de fracturaescindela membrana en susdos capas,seobservanpartculascon tamao
y forma de protenasglobularesen las dos superficiesin-

(a) Membranaplasmticadel eritrocito

'

0,5rm

ternasde las membranas,denominadascarasE (por exoplsmica)y P (por protoplsmica)(Figura7.16b).Adems,

la abundanciade partculassecorrelacionacon el contenido proteico de la membranaen estudio.Las micrograflas
electrnicasde la Figura 7.I7 ilastran bien estepunto. La
membrana plasmticade los eritrocitos tiene un ndice

(b) Membranadel cloroplasto

'o,2p.m

y criofiactula. Lasprotelnasdemembranaaparecen
Figwa7,L7a Protenas
de memblana
vistasconmcroscopa
electtnica
como
partculasdiscretas
incluidasen la bicapalipca.Labajadensidaddelaspartculasen la membranadeleritrocito(a) comparadas
conla
(METs).
membranadelcloroplasto(b) seajustaconel ndiceprotena/lpidodelasdosmembranas(I,l4y 2,33,respectivamente)
Protenas
de membranas:
la parteumosaicoD
delmodelo

189

protena/lpido bastantebajo (1,14; vaseTabla 7.1) y

cuandosesometea criofracturapresentaun ndicede densidad de partculasbastantebajo (Figura 7.17a),mientras
que la membrana del cloroplasto tiene un ndice protena/lpido ms alto (2,33) y en comparacin,una mayor
densidadde partculasintramembra.nosas,
especialmente
en la capalipdica interna (Figura7.17b).
La confirmacin de que laspartculasobservadaseran
protenas vino del trabajo de David Deamer y Daniel
Branton, quienesutilizaron la tcnica de la criofractura
para examinarlas bicapasartificialescon y sin protenas
aadidas.Las bicapasformadas a partir de fosfolpidos
puros no mostrabanevidenciasde partculasen sus superficiesinternas (Figura 7.I8a). Sin embargo,cuando se
aadieronprotelnasa lasbicapasartificialessevieron partculassimilaresa las observadasen las membranasnaturales(Figura7.18b).
Las membranascontenenprotenasintegrales,ptotenas
perfdcasy protenasancladasa lpidos
Lasprotenasde membranadifieren en su afinidad por el
interior hidrofbieode la membranay por tanto en la manera en la que interactancon la bicapalipdica. Esto determina, en cambio, cmo de fcil o de diffcil es extraer
una protenaconcretade la membrana.Si nos basamosen
las condicionesque serequierenpara extraerlasy por extensin,en la naturalezade su relacincon la bicapapfdica, las protenasde membranaentraran en una de estas
tres categoras:integrales,perifricaso ancladasa lpidos.
Consideraremoscadauna de ellaspor separado,refirindonos en cadacasoa los esquemasque semuestranen la
Figura7.19.

La membranaplasmticadel eritrocito humano,que se

muestraen la Figura 7.20,proporcionael contextocelular
para nuestradiscusin.staesuna de las membranasms
estudiadasdesdelos tiempos de Gorter y Grendeldebido,
principalmentea la facilidadcon la que sedisponede clulassanguneas
ylo sencilloque resultaobtenerpreparacionesde membranaplasmticapura,a partir de ellas.Nos referiremosa la membranaplasmticade los eritrocitos en
variospuntos de la discusinpara apuntar ejemplosde tipos de protenasdiferentesy su papelen la membrana.
Protenasinteglalesde membrana.La mayorade las protenasde membranason molculasanfipticasque poseen
una o msregioneshidrofbicasque exhibenafinidadpor
el interior tambin hidrofbico de la bicapalipdica.Estas
protenassedenominanprotenasintegralesde membrana ya que sus regioneshidrofobicasestnincluidas en el
interior de la membrana,de tal forma que estasmolculas
no sepuedenextraercon facilidad.Sin embargo,estasprotenastambin presentanuna o ms regioneshidrofllicas
que extiendenhacia el exterior de la membrana,hacia la
faseacuosade uno o de los dosladosde la membrana.Debido a su afinidadpor la bicapalipdica,lasprotenasintegralesde membranason dificilesde aislary de estudiarpor
lastcnicasestndarde purificacin de protenas,ya quela
mayoraestndiseadaspara protenassolublesen agua.
Parasolubilizary ertraerlas protenasintegralesde membrana suelesernecesarioel tratamientocon un detergente
que rompa la bicapalipldica.
Slo se conocen unas pocas protenas integralesde
membranaque estnincluidasen ellay que ademssobresalganpor uno slo de los ladosde la bicapa;stassedenominan protenas integralesmonotpicas (Figura 7.I9a).

Figura7.18a Gdofiacturacompalando
bicapaslipdicascon y sin protenas
aadidas. Esta figura compara el
aspectode (a) bicapaslipdicas
artificiales sin protelnas y (b) bicapas
artificiales a las que se han aadido
protenas mediante microscopla
electrnica con criofractura. Las lneas
blancas de las membranas artificiales
de la parte a representan bicapas
lipdicas inviduales en una muestra
con mtiplescapas,y las regiones
grises muestran donde se han
escindido las bicapas sencillas para
revelar superficies lisas. Por el
contrario,la membrana artificial de la
parte b muestra un gran nmero de
partculas globulares en la superficie
de fractura. stasson las protenas que
se aadieron a la preparacin de
membrana (METs).
(a) Bicapas artificialessin protenas

190

(b) Bicapasartificialescon protenas ' 0 , 1

pm'

qumica
y funcin
Gaptulo
7 Membranas:
estructura,

SUPERFICIE
EXTERNA

(g) Anclaje
a GPI

SUPERFICIE
INTERNA
(b) Protenasde
(a) Protelnas
integrales
Paso nico
monotPicas

(c) Protenas
multipaso

(d) Protena (e) Protena

multisub- perifrica
de membrana
unidad

(0 Anclaje
a cidosgrasos
o a prenil

Protenasde membrana
ancladasa lpidos

Protenasintegralesde membrana

Figula 7.19 Clases pdncipalesde protenm de membrana. las protenas de membrana se clasifican de acuerdo a su forma de anclaje a la
membrana. Las protenas integrales de la membrana (a-d) contienen una o ms regiones hidrofbicas incluidas dentro de Ia membrana
lipdica. (a) Unas pocas protenas integrales de membrana puecenestar incluidas en la membrana Por un solo lado de la membrana
(protenas integrales monotpicas). Sin embargo, la mayoa de las protenas integrales son protelnas transmembrana que cruzan
Ia bicapa lipldica o (b) una vez (protenas de paso nico) o (c) muchas veces(protelnas de paso mltiple). Las protelnas de paso mltiple
consistenen un nico polipptido, como en la parte c, o (d) varios polipptidos asociados(protenas multisubunidades). (e) Las protelnas
perifricas de membrana son demasiadohidrofllicas como para penetrar en la membrana pero estn ancladasa Ia membrana por uniones
electrostticasy puentes de hidrgeno que las fijan a protenas de membrana adyacenteso a gruPos dela cabezade fosfollpidos.
Las protenas ancladasa lpidos (f-g) son hidrofllicas y no penetran en Ia membrana, estnligadas covalentementea molculas lipldicas
queistn incluidas en la bicapa lipdica. (f) Normalmente las protelnas de la superficie interna de la membrana estnancladaso bien a
cidos grasoso bien a grupos prenil. (g) En la superficie externa de la membrana, el lpido de anclaje ms habitual es el
glicosilfosfatidilinositol (GPI).

externa
Superficie
de la membrana
Protena
banda4.1

Glicoforinas

Anouirina

Espectrina(tetrmero)

Bicapa
lipdica
(a)

5m

(b)

Superficieinternade la membrana

Figura7.20 Caractesticas estructutalesde la membranaplasmticadel edtrocito. (a) Un eritrocito esuna clula pequeacon forma de
disco con un dimetro de alrededor de 7 pm. Un eritrocito de mamlfero no tiene nricleo ni otros orgnulos,hecho que permite obtener coit
facilidad preparacionesde membrana plasmticamuy puras sin contaminacin por membranas de orgnulos, como sucedea menudo con
las preparacionesde membrana plasmticade otros tipos celulares.(b) La membrana plasmticadel eritrocito vista desdeel interior de la
clula,La membrana tiene una composicin proteica relativamentesimple. Las dos protenas integralesms importantes de la membrana
son la glicoforina y una protena intercambiadora de aniones conocida por su movilidad electroforticacomo banda 3, La membrana est
ancladaal citoesqueletosubyacentepor filamentos largos y finos de espectrinatetramrica (uf)2, qte a su vez, estnligadasa las molculas
de glicoforina por la protena b anda4,1y a la protelna banda 3 por anquirina, otra protena Perifrica de membrana. Los extremoslibres de
los tetrmeros adyacentesde espectrinase mantienen unidos por cadenascortas de actina y de banda 4,1. No semuestra otra protena,
banda 4,2, que arda a Ia anquirina a anclar a la espectrinaa la protelna banda 3. Paraver el fraccionamiento electrofortico de estas
protelnas, vase Figrxa 7.22.

la parteumosaico,
delmodelo
de membranas:
Protenas

191

Sin embargo, la mayora de las protenas integrales de

membrana son protenas transmembrana, lo que significa que cruzan la membrana y que tienen regiones hidroflicas que sobresalende la membrana por los dos lados. Thles protenas atraviesan la membranavnavez (protenas de
paso nico; Figura 7.L9b) o varias veces(protenas de paso
mltiple, Figura 7.19c).Algunas protenasde paso multiple
consistenen un nico polipptido (Figura 7.19c),mientras
que otras tienen dos o ms polipptidos (protenas multisubunidades;Figura 7.19d).
La mayoria de las protenas transmembrana estn ancladas a la bicapa lipdica por uno o ms segmentos transmembrana hidrofbicos, uno por cadavez que la protena
atraviesala bicapa. En la mayora de los casos,la cadena
polipeptdica pareceque cruza la membrana con una conformacin en hlice a formada por unos 20-30 residuosde
aminocidos,lamayoriade los cuales-a veces,incluso todos- tienen grupos R hidrofbicos. Sin embargo,en algunas protenas de paso mltiple varios segmentos transmembrana se colocan como lmina B, del tipo lmina B
cerrada-la denominada barril B-. Esta estructura es especialmente relevante en un grupo de protenas transmembrana formadoras de poros denominadas porinas,
que se encuentran en la membrana externa de muchas
bacterias,cloroplastosy tambin mitocondrias. Independientemente de su conformacin, normalmente los segmentos transmembrana estn separados en la estructura
primaria de la protena por secuenciashidroflicas que sobresaleno forman bucles hacia el exterior de los dos lados
de la membrana.
Las protenas de membrana de paso nico tienen un
nico segmentotransmembrana,con un extremo carboxilo (C-) hidrofflico extendindosehacia el exterior de la
membrana en un lado y un extremo amino (N.-) hidroftlico sobresaliendopor el otro lado. Dependiendo de cada
protena en particular, el extremo C- puede sobresalir en
cualquier lado de la membrana. Un ejemplo de una protena de paso nico esla glicoforina,:unaprotena importante de la membrana plasmtica del eritrocito (Figura
7.20b).La glicoforina seorienta en la membrana de tal manera que su extremo C- est en la superficie interna de la
membrana y su extremo N- est en la superficie externa
(Figura 7.21a).
Las protenas de membrana de paso multiple tienen varios segmentostransmembrana, en un rango de 2 3 a 20
o ms segmentos.Un ejemplo de una protena de paso
mltiple en la membrana plasmtica del eritrocito es una
protena de transporte dimrica denominada protena
banda 3 (tambin conocida como la protena de intercambio de aniones).Cada uno de estos dos polipptidos atraviesala bicapa lipdica por Io menos seisveces,con ambos
extremos el C- terminal y el N- terminal en el mismo lado
de Ia membrana. Los modelos actualesde estaprotena dimrica aceptan la existencia de un total de doce segmentos
transmembrana.

192

qumica
Captulo
7 lVembranas:
y funcin
estructura,

Cadena lateral
de carbohidratos

SUPERFICIE
EXTERNA

SUPERFICIE
INTERNA

ll

-U-U'

(a) Glicoforina

Segmento
transmembrana

Canal
de protones

(b) Bacteriorrodopsina

Figura7.21 Estructurade dos protenasintegralesde membrana,

(a) La glicoforina esuna protena integral de la membrana de paso
nico. Su segmentotransmembrana en a-hlice consta enteramente
de aminocidoshidrofbicos.El extremoN-terminal sobresalepor
la superficie externa,el extremo C-terminal por la superficie
citoplasmtica.La gcoforinaesuna glicoprotena,con l6 cadenas
de carbohidratounidasa su superficieexterna.(b) La
bacteriorrodopsinaesuna protenaintegralde membranade paso
mltiple situada en la membrana piasmticade Halobacterium. Sus
sietesegmentostansmembrana, que cuentan con el 70olode sus
248 aminocidos,seorganizanen un canalde protones.Los
extremosC-terminal y N-terminal de la protenatienen segmentos
hidroflicoscortos,que sobresalenpor las superficiesinterna y
externa de la membrana plasmtica,respectivamente.Los
segmentoshidroflicos cortos seligan a cada uno de los segmentos
transmembrana.

Uno de los ejemplosmejor estudiadosde una protena de pasomltiple esla bacteriorrodopsina,

la protena
de la membranaplasmticaque funcionaen lashalobacteriascomo una bombade protones(Figura7.3g).
En I975 Unwin y Hendersonpresentaron
su estructura
tridimensional,basndose
en la microscopaelectrnica.
Resultquela bacteriorrodopsina
tenasietesegmentos
en
hlicea que atravesaban
la membrana,cadauno de ellos
correspondaa una secuenciade aproximadamente
20
aminocidoshidrofbicosde Ia estructuraprimaria de la
protena(Figura7.21b).Los sietesegmentostransmembrana se colocanen la membranapara formar un canal,
activadopor luz, quefaciliteel bombeoo el transporteactivo de los protonesa travsde la membrana,un temasobre el quevolveremos
en el Captulo8.
perifricas
Protenas
demembrana.En comparacinconlas
protenasintegralesde membrana,algunasprotenasasociadasa la membranacarecende secuencias
hidrofbicas
y por tanto no penetranen la bicapalipdica.
diferenciadas
Envezde esto,estasprotenasperifricasde membranase
unen,mediantefuerzaselectrostticas
dbilesy puentesde

hidrgeno,a la superficiede la membranaa travsde las

porcioneshidroflicasde lasprotenasintegralesy qtizs a
travsde los grupospolaresde lascabezasde los lpidos de
la membrana(Figura7.I9e). Las protenasperifricasse
extraenms fcilmentede la membranaque las protenas
integralesy normalmenteseextraencambiandoel pH o la
fuerzainica.
Las principalesprotenasperifricasde la membrana
ankirinay vna
plasmtica
del eritrocitosonlaespectrina,la
7.20b).Estas
protenadenominadabanda4.1(vaseFigara
protenasseunen a la superficieinternade la membrana
plasmtica,donde forman un entramadoesquelticoque
y arda a mansirvede soportea la membranaplasmtica
tenerla forma del eritrocito(vaseFigura7.20a).
ancladasa lpidos, Inicialmente
Protenasde membrana
cuandoSingery Nicolsonpropusieronsu modelode mocomoprosaicofluido, todaslasprotenassecatalogaban
tenasperifricaso comoprotenasintegralesde membrana. Ahora, sin embargo,se reconoceuna terceraclasede
perifricani inteprotenasque no esni especficamente
de lasdos.
gral,peroquetienealgunasdelascaractersticas
protenas
membrade
polipeptdicas
de
estas
Lascadenas
las
superficies
en
una
de
se
localizan
na ancladasa lpidos
de la bicapa lipdica pero estnunidas covalentementea
molculaslipdicasincluidasdentro de la bicapa(Figura
7.Iefy g).
Lasprotenasancladasa los lpidossefijan a lasmemLasprotenasunidas
branasmediantevariosmecanismos.
a la superficieinterna de la membranaplasmticase ancon
clanpor medio de la formacinde enlacescovalentes
un cidograsoo con un derivadoisoprenodenominado
grupoprenil (Figura7.I9f). En el casode lasprotenasde
membranaancladasa cidosgrasos,la protenasesintea un
tiza en el citosol y despusse une covalentemente
cido grasosaturadoincluido dentro de la bicapade la
membrana,quenormalmenteesel cidomirstico(I4 carbonos)o el cidopalmtico(16 carbonos).Por otro lado,
lasprotenas de membrana preniladas sesintetizanen el
semodificanaacitosolcomoprotenassolublesdespus
dindolesun grupo prenil,normalmentew grupofarnede 20 carbosilde 15 carbonoso un grupo geranilgeranil
nos.Despusde la unin, tanto el grupo farnesilcomo el
grupo geranilgeranil
seinsertanen la bicapalipdicade la
membrana.
Muchasprotenasancladasa lpidos y que se fiian ala
superficie externa de la membrana plasmticase unen
nte a glicosilfosfatidilinositol (GPI), un glicoli
covalenteme
pido unido a la monocapaexternade Ia membranaplasmtica (Figura 7.I9g). Estasprotenas de membrana ancladasa GPI se sintetizanen el retculo endoplasmtico
de pasonico,quepostecomoprotenastransmembrana
y los
transmembrana
riormenteeliminarnsussegmentos
lasprotesustituiranpor anclajesa GPI.Posteriormente
nassetransportandesdeel REhastael exteriorde la mem-

en el Capor unava quecomentaremos

branaplasmtica
que
la
celular,
lasprollegan
a
superficie
ptulo l2.Unavez
por
la
membrana
la enliberan
de
tenasancladasa GPI se
para
que
los
enlaces
es especfica
zima fosfolipasaC,
fosfatidilinositol.
Lasprotenasse puedensepatarpor electrofofess
conSDS
en gelesde poliacdlamida
Antesde continuar con nuestradiscusinsobrelas protenas de membrana,nos sertil considerarbrevemente
cmo se aslany se estudianlas protenasde membrana.
Primeroveremosel problemageneraldela solubilizacny
extraccinde protenasde membranay despusaprenderemos una tcnica electroforticade gran utilidad en el
de protenas.
fraccionamientoy caracterzacin
de membrana.El mayor desafode
de protenas
Aislamiento
los qumicosde protenasha sido la dificultad para aislary
estudiarlas protenasde membrana,ya que muchasde
stasson hidrofbicas.Lasprotenasperifricasde mema lastcnicasembranason,en general,bastantesensibles
pleadasparasu aislamiento.Como seapuntpreviamente,
electrosttiestnunidasa Ia membranapor interacciones
casdbilesy puentesde hidrgeno,por las porcioneshidroflicasde las protenasintegralesde membranao por
de los lpidosde la memlos grupospolaresde lascabezas
brana.Adems,Iasprotenasperifricassepuedenextraer
de la membranamediantecambiosen el pH o en la fuerza
inica.De hechoa lasprotenasperifricasde membrana,
protenasquepoinicialmenteselasdefinicomoaquellas
dan serextradasde la membranacon una solucinalcalina de carbonatosa un determinadopH y con una determinada fierza inica.Lasprotenasperifricastambin se
pueden solubilizar mediante el uso de agentesquelantes
(queseunen a cationes)que extraenel calcioo aadiendo
urea,que rompe los puentesde hidrgeno.Lasprotenas
al aislaancladasa llpidos son igualmentesusceptibles
previa
la
ruptura
de
la
unin
miento,aunqueserequiere
de
la
membrana,
la
covalenteal lpido. Una vez extradas
membrana
y
las
mayora de las protenasperifricasde
hiprotenasancladasa los lpidossonlo suficientemente
droflicascomo para ser purificadasy estudiadascon las
tcnicasutilizadashabitualmentepor los qumicosde protenas.
Por otro lado, las protenasintegralesde membrana,
de forma que
son difcilesde aislarde sta,especialmente
sepreservesu actividadbiolgica.En la mayorade los casossepuedensolubilizarsolamentemedianteel uso de dehidrofbicas
las interacciones
tergentesque desorganizan
y disuelvenla bicapalipdica.Como veremosahora,el uso
fuertementeinicoscomo el dodecilsulfato
de detergentes
sdico(SDS)permiteno sloaislarlasprotenasintegrales
de membranasino fraccionarlasy analizarlasmediantela
tcnicade la electroforesis.
delmodelo
la parte(mosaicou
demembranas:
Protenas

193

Electroforesiscon gel de poliacrilamiday SDS. Las clulas

contienen miles de macromolculas diferentes que deben
ser separadasunas de otras antes de investigar las propiedades de cada componente de manera individual. Uno de los
enfoques utilizados habitualmente para separar molculas
es la electroforesis, conjunto de tcnicas relacionadas que
utilizan un campo elctrico para separar molculas cargadas elctricamente. La velocidad a la cual una molcula
dada semueve durante la electroforesisdepende tanto de su
carga como de su tamao. La electroforesii puede llevarsea
cabo utilizando una gran variedad de medios de soporte,
talescomo el papel, acetatode celulosa,almidn, poliacrilamida o agarosa (un polisacrido obtenido de las algasmarinas). De todos estosmedios, los gelesrealizadoscon poliacrilamida o con agarosa son los que proporcionan la

mejor resoluciny son los que seempleanhabitualmente

en laselectroforesis
de cidosnucleicosy protenas.
Cuandose utiliza la electroforesis
para estudiarprotenasde membrana,primero hay que solubilizarlos fragmentosde membranacon el detergenteSDSque desorganiza Ia mayora de las uniones protena-proteina y
protena-lpido.Las protenasse desnaturalizan,
desplegndosecomo varillas polipeptdicasrgidasque no se
puedenreplegardebidoa quesussuperficies
estncubiertas con molculasde detergentecargadasnegativamente.
Los polipptidossolubilizadosy cubiertoscon SDS,se
carganentoncesen la zonasuperiordel gel de poliacrilamida, seaplicaun potencialelctricoque atraviesael gel,
de tal forma que la basedel gel seconvertiren el nodo
cargadopositivamente
(Figura7.22).Debidoa quelospo-

+SDS
Fragmentos
de membrana

Gel
Placas
de vidrio

Nmero
de banda
Fuentede alimentacin

r-..:._:_.

Gel migrado
234

_l=_

Anquira-t-\;,
Polipptidos

t
:

tamao

Se retirael gel y se
tieparaver las
protenas

.......--..*

polipptdos
de pequeo
tamao

H;;".*.l-; ,
uE

dl llvl lEs

Actrna
GPD

lO-

+,

4,9
5
6
7

Figwa 7,22 Electrofotesisde ptotenasde membranaen gel de poliacrilamidacon SDS. Los fragmentos de membrana sesuspenden
en un
tampn y O se tratan con dodecilsulfatosdico(SDS).@ Una pequea muestra de los polippiidos solubilizados seaplica ei uno
de los
pocillos.de la parte superior de un gel de poliacrilamida que se ha polirnerizado entre do, piaias de vidrio (slo se utiiiza
en el eiemplo uno
'le los cinco pocillos numerados,
Pero en la prctica secolocaran iruestras en los otros po.illo, tambin). S. aplicu r" p"r."'.l"ii,il"i."
al gel @ que provoca la migracin de las mo-lculaspolipeptdicas hacia el extremo ms alejado del gel
iaaa pUpeptido desciendeen el
gel a unavelocidad que estinversamenterelacionaa..r su tamao. @ Cuando los pohpptido,,is p"quenos estn
cercade la base,el gel
se retira de las placasy setie con un colorante que seune,a los polipptidos y los haceviiibles. (ras bandscoloreadasque
se muestran en
los pasos4 y 5 no son visibles hastaque e1gel seseparade las placasy setie): @ El perfil polipeptdico que se muestra aqu,
es el de las
principales protenas de la membrana del eritrocito. Las bandsde protena separadisinicialmente seidntificaron
utilizndo nmeros
secuenciales,por ejemplo <banda 1>,<banda2> etc.Ahora sabemoi la identidid de algunasde estasprotenas separadas;por
ejemplo Ia
banda 3 es una protena de intercambio de aniones y la banda 6 esla gliceraldehdo3 fosfato deshidiogenasa(Cpl).

194

qumica
Captulo
7 lVlembranas:
estructura,
v funcjn

lipptidosestncubiertoscon molculasde SDScargadas

por el gel,haciael
migrarn,descendiendo
negativamente,
nodo.Sepuedepensaren el gel de poliacrilamidacomo
en una red fina que dificulta msel movimiento de lasmolculasgrandesque el de las molculaspequeas.El resulpor el gela unavetadoesquelospolipptidosdescienden
locidad que estrelacionadainversamentecon su tamao.
Cuandolos polipptidosms pequeosseacercana la
basedel gel,el procesoterminay el gel setie con un colorantequeseune a lospolipptidosy leshacevisibles.(El colorantequeseutiliza habitualmentecon estepropsito,esel
El perfil polipeptdicoparticuazulbrillantedeCoomassie.)
lar que semuestraen la Figura7.22esel de lasprotenasde
membranade los eritrocitoshumanos,a la mayorade las
cualesya nos hemosreferido(recordarFigura7.20b).

identificarhlicestransmembrana.Sin embargo,desdeentonces,ha habidouna verdaderaexplosinde datosde cristalografrade rayosX paraprotenasintegralesde membrana.De acuerdocon los datosreunidospor StephenWhite y
colaboradoresen la Universidadde California,Irvine, en
1997solamentesehabandeterminadolasestructurastridimensionalesde 18 protenas,pero desdeentonces,se han
aadidoa la lista msde 60 protenas.Inicialmente,la mayora de las protenaseran de origenbacteriano,reflejando
asla relativafacilidadconla queseaislabanlasprotenasde
Sin embargo,cadavez
membranade los microorganismos.
msprotenasde membranade origeneucariotaestnsienpor cristalografra
de rayosX.
do analizadas

Anlisishidroptico.Parala mayorade lasprotenasintegralesde membranaque todavano sehan analizadopor

cristalograffade rayosX, sepuedeinferir el nmero y locala
esttuctula
lizacin ms probablede sussegmentostransmembrana,
Resultacadavezmsviabledeterminal
y seprotenas
de membtana
de las
siempreque,la protenapuedapor 1omenos,aislarse
tdimensional
la
de
aminoque
conoce
secuencia
se
Unavez
cuenciarse.
Determinar la estructuratridimensional de las protenas
cidosde una protena,sepuedeinferir el nmeroy posiintegralesde la membranaha estadolleno de dificultades
cin de los segmentostransmembranaa partir de una
durante muchos aos. Primero) porque estasprotenas
representacinde hidropata (o hidrofobicidad), como
eran difcilesde aislary de purificar. Sin embargo,resultaseconstrusemuestraen la FiguraT.23.Talrepresentacin
al estudio pot cristalografa
ron cadavez ms susceptibles
que
identifica
ye utilizando un programa de ordenador
derayosX, que determinala estructurade lasprotenasque
de amihidrofbicos.La secuencia
gruposde aminocidos
sepuedenaislaren forma cristalina.
a travsde una seriede
nocidosde la protenaseescanea
Paralasprotenasque no puedenestudiarpor cristalo(ventanas>de aproximadamente10aminocidoscadavez;
graflaseutiliza un abordajealternativodenominadoanlia medida que sesucedenlasventanas,seva avanzandoun
sishidropticosiemprequela protenasepueda,al menos, aminocidomsen la secuencia.
aislary secuenciar.Examinaremosbrevementecadauna
en los valoresde hidrofobicidadconocidos
Basndose
de estastcnicas.
oara los diferentesaminocidos,secalculaun ndice de hicalculandola media
dropataparacadaventanaconsecutiva,
de tayosX. La cristalografia de rayos X se
Cristalografia
de los valoresde hidrofobicidadde los aminocidosde la
utiliza generalmentepara determinar la estructuratridiventana.Por convencin,los aminocidoshidrofbicostiemensionalde lasprotenas.Seincluyeuna descripcinde
nenvaloresdehidropatapositivosy losresiduoshidrofflicos
estatcnicaen el Apndce(vasepp. A1-A30).Durante tienenvaloresnegativos(comosedescribeenla leyendadela
muchosaos,la dificultad para aislarprotenasintegrales Figura7.23).Elndicedehidropataserepresenta
frentea las
de membranaen forma cristalina,prcticamenteexcluya
de la protena.La
posicionesde lasventanasen la secuencia
estasprotenasdel anlisiscristalogrfico.El primer xito
en
hidropticaresultante,predice,basndose
representacin
fue presentadopor Hartmut Michel,JohannDeisenhofery
el nmerodepicospositivos,cuntasdelasregionespresenRobert Huber, quienescristalizaronel centro de reaccin tesen la protenacruzarnla membrana.La representacin
fotosintticode la bacteriaprpura, Rhodopseudomonashidropticaquesemuestraen la Figura7.23aesde una proviridis,y determinaronsu estructuramolecularpor cristatenade la membranaplasmticadenominadaconexina.La
basndoseen la
lografia de rayosX. Estosinvestigadores,
muestracuatropicospositivosy ademsprerepresentacin
estructuratridimensional detalladade la protena, tamdicequela conexinatienecuatrotramosde aminocidoshibin proporcionaronlasprimeraspistasde cmo seordetransmembrana,
drofbicosy por lo tanto cuatrosegmentos
nan las molculasde pigmentospara captarla energalucomosemuestraen Ia Figura7.23b.
minosa,un tema sobreel quevolveremosen el Captulo 11
a estetrabajoMi(vaseFigura
11.11).En reconocimiento
La biolo$a molecularha contribuidoenormemente
el Premio Nobel
y
Huber
compartieron
chel,Deisenhofer
sobrelas ptotenasde memblana
a nuestroconocmento
de Qumicaen 1988.
A pesarde estegran avance,la aplicacinde la cristalo- Lasprotenasde membranano han cedidoantelastcnicas
graffade rayosX paralasprotenasintegralesde membrana bioqumicastan fcilmentecomo otras protenas,debido
progreslentamentehastafinalesdelos 90,particularmente principalmentea los problemaspara aislary purificar las
protenashidrofbicas activasfisiolgicamente.Procedien lo querespectaal nivel de resolucinqueserequierepara
delmodelo
la parteumosaicoo
demembranas:
Protenas

195

+4
6
O- n,o

],,0.

toolco

L :

(u

",= o
EY

c
^

]*"
50

100

150

200

otra forma no se habran apreciado. Thmbin se pueden

utilizar fragmentos de DNA como sondas para aislar e
identificar secuencias que codifican protenas relacionadas. Adems, se pueden alterar nucletidos especficos de
la secuenciade DNA de una protena concreta, para determinar los efectos de esos cambios selectivos de la secuencia, sobre la actividad de la protena mutante para la que
codifica. El Anexo 7A describe estos excitantes descubrimientos en ms detalle.

Nmero
de aminocidos

Lasprotenasde membrana
tenenvatasfunciones

(a)

Qufuncionesrealizanlas protenasde membrana?La

mayorade lasfuncionesdela membranaquehemosresumido al inicio del captulosonrelevantesen estepunto debido a que stasson justamentelas de suscomponentes
qumicos,especialmente
lasde susprotenas.
Algunasde lasprotenasde la membranasonenzimas,
localizandofuncionesespecficas
en membranasconcretas.De hecho,como veremosen los siguientescaptulos,
cadauno de los orgnulosde una clulaeucariota,se caracterizapor su propio y distintivo conjunto de enzimas
o
unidasa membrana.Encontrarun ejemplode estehecho
--o=
(b)
cuandocomentemosla asociacinde la glucosafosfatasa
con
el RE.Otro ejemplo,esel de la gliceraldehdo-3-fosfaFituta7,23 Anlisis
dehidropata
deprotenas
integrales
de
(GPD),una enzimaimplicadaen el cato deshidrogenasa
membrana. Una representacinde hidropata es una forma de
representarlas regioneshidrofbicas(valrespositivos)y las
tabolismode la glucosaplasmtica.
La GPD esuna proteregioneshidroflicas (valoresnegativos)a lo largo de Ia longitud de
na perifericade la membranaplasmticade los eritrocitos
la secuenciade una protena -la protena de membrana plasmtica
y de otros tipos celulares(vaseFigura7.22,paso7). Las
conexina,en estecaso-. (a) El ndice de hidropata sobre el eje
protenas
transportadoras
de electronescomo los citocrovertical es una medida numrica de la hidrofobicidad relativa de
mos
y
protenas
las
ferrosulfuradas,
segmentossucesivosde Ia cadenadel polipptido, basadaen su
implicadasen los prosecuenciade aminocidos.(b) La conexinatiene cuatro regiones
cesosoxidativosen lasmembranasde lasmitocondrias,de
hidrofbicas distintas, que correspondena cuatro segmentosen acloroplastos
y en membranasplasmticas
de clulaseucahlice que cruzan la membrana plasmtica.(El valor de
riotas,
por
estn
su
funcin,
estrechamente
relacionadas
hidrofobicidad para un aminocido dado esla variacin de Ia
con lasenzimas.
energalibre estndar,Ad', por la transferenciade un mol de ese
Otrasprotenasde membranafuncionantransportanaminocido desdeun medio hidofbico hacia un medio acuoso.
expresadoen kilojulios/mol. Para un aminocido hidroflico, el
do solutosa travsde ellas.Entre stasseincluyenlasproprocesoesexergnicoy por tanto tiene un Ad', negativo;para un
tenastransportadoras,
que facilitan el movimiento de nuaminocido hidrofbico, el procesoes endergnicoy el valor de
trientes
como
azicares
y aminocidos a travs de las
A',
espositivo.(Params detalles,vaseProblemaT.l0).
membranas,y protenascanal que proporcionanvas de
pasohidroflicasa travsde membranashidrofbicas.En
mientos como la electroforesis con geles de poliacrilamida
estacategoratambinseencuentranlasATPasas
transpory SDSy los anlisisde hidropata han sido tiles, como
tadoras,queutilizan Ia energiadelAIP parabombeariones
tambinlo han sido las tcnicasde marcajecon istopos a travsde las membranas,como veremosen ms detalle
radiactivosy anticuerposfluorescentes
de las que hablare- en el Captulo8.
mosmsadelanteen estecaptulo.Sinembargo,en lastres
Otras protenasde membrana son receptores
implicaltimas dcadasel estudiode las protenasde membrana dosen el reconocimiento
y mediacinde los efectosde seha sufrido una revolucindebidoa lastcnicasde biologa
alesqumicasespecficas
que seunen a la superficiede la
molecular,especialmente
por la secuenciacin
clula.Lashormonas,neurotransmisores
de DNA y
y sustanciasque
por las tecnologas
de DNA recombinante.
La secuencia- promuevenel crecimientoson ejemplosde sealesqumicin de DNA permitededucirla secuencia
de aminocidos casque interactancon receptoresproteicosespecficos
side una protena,un prerrequisitopara el anlisishidroptuadosen la membranaplasmticade susclulasdiana.En
tico que identificarlos segmentostransmembrana.AdeIamayoriade los casos,
la unin de una hormonao de otra
ms,la comparacind secuencias
entreprotenasrevela, molculasealal receptorapropiadode la superficiede la
con frecuencia,relacionesevolutivasy funcionalesque de
membranadesencadena
un tipo de respuestaintracelular,
L96

Captulo
7 Membranas:
qumica
y funcin
estructura,

para obtenerel efectodeseado;consideraremos

estosmecanismosde transduccinde la sealen el Captulo 14.
Lasprotenasde membranatambin estnimplicadas
en la comunicacinintercelular.Los ejemplosincluyen a
las protenasque forman los conexones
de las unionesgap
entre clulasanimales,y aquellasque ensamblanlosdesmotbulosde los plasmodesmos
entre clulasvegetales.
Estas estructurassetratarn en el Captulo 17,como protenas de membrana que median el reconocimiento y
adhesinintercelular.
Las protenas de membrana desempeanun papel
principal,en la captaciny secrecin
de sustancias
por endocitosisy exocitosis;en el marcaje,clasificaciny modificacin de protenasen el retculo endoplsmicoy en el
complejode Golgi;y en la captacinde la luz, bien por el
ojo humano o por la planta de la semillasegnemergedel
suelo.En resumen,lasprotenasdemembranasoncomponentes vitales de varias estructuras,incluyendo las conexionesentrela membranaplasmticay la matriz extracelular situada en el exterior de la clula, los poros de
membranasexternastanto de mitocondriascomo de cloroplastos,y los poros de la envolturanuclear.Todosestos
temassevernen captulosposteriores.
Un grupo final de protenasasociadasa la membrana
son aqullascon papel estructural,que estabilizany dan
forma a la membranacelular.Los ejemplosincluyena las
protenasespectrina,
anquirinay banda4.I, protenasperifricasde la membranadel eritrocito de lasqueya hemos
habladoanteriormente(vaseFigura7.20b).Existentetrmerosde espectrinad y P, @B)rlargosy finos,unidos a
molculasde glicoforinapor la protenabanda4.1y por filamentoscortosde actinay a protenasbanda3 a travsde
anquirinay por otra protelnadenominadabanda4.2.(De
manerabastanteapropiadaanquirinaderivade la palabra
griegapara <anclar>.)De estaforma, la espectrinay sus
protenasasociadasforman una red de citoesqueletoque
subyacea la membranaplasmticay la sujeta.Estared basadaen la espectrinale da al glbulorojo de la sangresu
forma bicncavacaracterstica
(vaseFigura 7.20a)y le
permite a la clularesistir el estrsque se ejercesobresu
membranaal atravesarlos capilaresestrechosdel sistema
circulatorio.Lasprotenasquesonhomlogasestructuralmentea la espectrina
y lasprotenasasociadas
a espectrina
seencuentranjusto por debajode Ia membranaplasmticatambinen otros muchostipos celulares,indicandoque
una red de citoesqueletode protenasperifricasde membranasubyacea la membranaplasmticade muchasclases
de clulasdiferentes.
La funcin de una protenade membrananormalmente sereflejaen el modo en el que la protenaseasociaa la
bicapa lipdica. Por ejemplo, una protena que funciona
solamenteen un lado de la membranaes probablemente
una protenaperifricao una protena ancladaa lpidos.
Las enzimasunidas a membranaque catalizanreacciones
slo en un lado de una membrana,tal como hacela enzi-

ma glucosafosfatasadel RE,estnen estacategora.Por el

contrario,lastareasde transportarsolutoso de transmitir
sealesa travsde la membranarequierenclaramenteprotenastransmembrana.En el Captulo 8, examinaremosel
papelde lasprotenastransmembrana
en el transportede
membrana,y en el Captulo 14,veremoscmo la transduccindeseales
estmediadapor receptores
transmembrana que en el exterior de la membrana plasmticase
unen a molculassealizadotas,
como las hormonasoue
generansealesen el interior de celular.
Lasprotenasde membfanaestnotentadas
asmtricamente
a travsde la bicapalipidica
Previamente
en estecaptulo,hemosapuntadoquela mayorade los lpidosde membranasedistribuyenasimtricamenteentrelasdos monocapasde la bicapalipdica.La
mayora de las protenasde membranaexhibentambin
una orientacinasimtricacon respectoa la bicapa.por
ejemplo,lasprotenasperifricas,
lasprotenasancladasa
lpidos,y las protenasintegralesmonotpicasestn,por
definicin,asociadas
con una u otra delassuperficies
de la
membrana(vaseFiglra 7.I9); unavezen su sitio, lasprotenasno sepuedenmovera travsde Ia membranade una
superficiea la otra.Lasprotenasintegralesde membrana
que cruzanla membranaestnincluidasen ambasmono-es decir, lasrecapas,pero orientadasasimtricamente
gionesde la molculaproteicaque estnexpuestasen un
lado de la membranason estructuraly qumicamentediferentesde lasregionesde Ia protelnaexpuestas
al otro lado
de la membrana-. Adems,todas las molculasde una
protenadadaestnorientadassiempredela mismaforma
en la membrana.
Paradeterminarcmo se orientanlas protenasen Ia
membrana,se han ideado experimentosque mediante
marcajeradiactivopermiten distinguir entreprotenasexpuestasen Ia superficieinterna y externade vesculasde
membrana.Un enfoquede estetipo utiliza laenzimalactoperoxidasa(LP), que catalizaIa unin covalentedel yodo a
p-rotenas.
Cuandola reaccinse realizaen presenciade
t"I, un istoporadiactivo
del yodo,la LP marcalasprotenas.Debidoa quela LP esdemasiadograndeparapasara
travsde lasmembranas,
slolasprotenasexpuestas
en la
superficieexternade lasvesculasde membranaintactasse
marcan(Figura7.24a).Paramarcarsloaquellasprotenas
que estnexpuestas
en la superficiede la membranainterna,lasvesculas
primero seexponena una solucinhipotnica (debaja fuerzainica) que lashagamspermeables
a molculasgrandes.
En estascondiciones,
la LP puedeentrar en las vesculas.Cuando las vesculasse transfieren
posteriormente
a una solucinisotnicaque contiene12sI
pero no LP externa,la enzimamarcalasprotenasexpuestassobrela superficieinterna de la membranade la vescula (Figura7.24byc). De estaforma,esposibledeterminar
si una protenade membranaconcretaestexpuestaslo
Protenas
demembranas:
la partenmosaicor
delmodelo

L97

Anexo
REvOTUCIONANDO EL ESTUDIO DE LAS PROTENAS DE MEMBRANA:
EL IMPACTO DE LA BTOTOCA MOLECULAR
Lasprotenasde membranamedianuna extraordinaria
variedadde funcionescelularesy ademsson de gran inters
paralos bilogoscelulares.Sin embargo,slo en los ultimos
aos,el estudiode estasprotenasha empezadoa dar respuestas
procedende
y resultadosdefinitivos.Algunasde estasrespuestas
la aplicacinde lastcnicasbioqumicasa lasprotenasde
membrana.Algunasde estasaplicacionessedescribenen este
en gel de poliacrilamida
captulo,incluyendola electroforesis
con SDS,el anlisishidropticoy los mtodospara marcar
protenasde membranacon radiactividado con anticuerpos
(vaseFiguras7.22,7.23,7.24y 7.28
fluorescentes
Paraestudiarprotenasde membrana,se
respectivamente).
utilizan otros dos abordajesbioqulmicos,que son,el marcajede
afinidady la reconstitucinde membranas.
El marcajede afinidadutiliza molculasradiactivasque se
debido a las
unen a protenasde membranaespecficas
funcionesde esasprotenas.Por ejemplo,de un compuesto
denominadocitocalasinaB, sesabeque esun potenteinhibidor
del transportede glucosa.Adems,esprobableque las
membranasexpuestasa citocalasinaB radiactivacontengan
a la(s) protena(s)
radiactividadunida especficamente
implicadasen el transportede glucosa.
implica la formacin de
de membranas
La reconstitucn
membranasartificialesa partir de componentesespecficos
purificados.En esteexperimentolasprotenasseextraende las
y seseparanen sus
membranascon solucionesdetergentes
componentesproteicosindividuales.En condicionesconocidas
lasprotenaspurificadassemezclan,con fosfolpidos,para
promoverla formacin de vesculasde membrana,
denominadasliposomal Estasvesculasreconstituidasse
puedenevaluarpara comprobarsu capacidadpara realizar
funciones,que,sesabeo sesupone,estnmediadaspor
protenasde membrana.
A pesarde los xitoscon stosy otros abordajessimilares,
los bilogosde membrana,a vecessebloqueanen susintentos
de aislar,purificar y estudiarlasprotenasde membrana.A
menudo,lastcnicasbioqumicasque funcionanmuy bien para
protenassolubles,no son tilesparaprotenashidrofbicas.Sin
embargo,en lastres ltimas dcadas,el estudiode lasprotenas
de membranaha sufrido una revolucingraciasa lastcnicasde
graciasaIa secuenciacin
del
biologamolecular,especialmente
Consideraremos
DNA y alas tcnicasde DNA recombinante.

estastcnicasen detalleen los Captulos18y 20,pero no

necesitamos
esperarhastaentoncespara apreciarel enorme
impacto que la biologamolecularha tenido en el estudiode las
membranasy de lasprotenasde membrana.En la Figura7A.1,
seresumenvariasaproximacionesal problemaque han
tiles.
demostradoserespecialmente
Paratodos estosabordajes,ha sido vital el aislamientode un
gen o al menosde un fragmento,que codifiqueparauna
protenade membranaespecfica(Figura7A.1,parte superior).
Con una molculade DNA en la mano,la primera prioridad del
bilogo moleculares,casisiempre,determinarsu secuenciade
del DNA esuno de los
nucletidosO. De hecho,Ia secuenciacin
triunfos de la biologamolecular;ahoraesmucho mssencillo
determinarla secuenciade nucletidosde una molculade
DNA que la secuenciade aminocidosde la protenaa la que
codifica.Adems,Ia mayor parte del procedimientode
sellevaa acabode manerarpiday automtica
secuenciacin
de DNA. Unavez que seha
por lasmquinasde secuenciacin
secuenciadoel DNA para una protenaen particular,sedebe
deducir,usandoel cdigogenticoque comparacadaposible
secuenciade tres nucletidoscon un aminocidoen particular
predecible
(vaseFigura
deaminocidos
o
21.8),la secuencia
probablede esaprotena@. La secuenciade aminocidosse
(vaseFigwa7.23)
parc
puedesometeral anIisishidroptico
identificar en la protena,los segmentostransmembranams
probables@.
Conocerla secuenciade aminocidos,tambinle permite al
investigadorprepararpptidossintticosque correspondana
de la protena@. Los anticuerpos
segmentosespecficos
producidoscontra estospptidossepuedenmarcar
radiactivamentey usarsepara determiaarqu segmentosestn
expuestosa cadalado de la membrana.La informacin
conseguidapor estava, combinadacon los datosde la
hidropata,a menudo proporcionanpruebasconvincentessobre
la estructuramsprobablede una protenay su orientacinen
la membranay tambinposiblementesobresu mecanismode
accin.Por ejemplo,Ia estructurade la protenareguladorade
la conductanciatransmembranade la fibrosisqustica(CFTR)
que estdaadaen laspersonascon fibrosisqulstica,se
8B).
determinde estamanera(vaseAnexo
Otra tcnicamolecularpotente,denominadamutagnesis
seutiliza para examinarel efectode cambios
sitio-especfica,

de lastcnicasde biolo$amolecularparael estudiode lasploteinasde membrana.La mayorade

Figura7A-1 (Pglnaopuesta)Aplicacin
los abordajesmolecularescomienzancon un fragmentoaisladode DNA que correspondeal gen o a una parte del gende una
protenay que seobtienepor los mtodosque setratarnen el Captulo 20.O La secuenciade nucletidosdel DNA sedetermina
normalmentemedianteun secuenciadorautomticorpido.@ La secuenciade aminocidosde la protelnasededucefcilmente
utilizando el cdigogentico.La secuenciadeducidaseutiliza en @ el anlisisde hidropatlapara determinarla frecuenciay
seutiliza parahacercambiosespecficos
en
localizacinde posibles@ segmentostransmembrana.La mutagnesis
@ sitio-especfica
la secuenciade DNA y por tanto, en Ia secuenciade aminocidosde la protena;laspropiedadesde la protenamutanteresultantese
estudiarnpara identificar aminocidoso segmentosde la protenaimportantesfuncionalmente.@ El DNA aisladosepuedeutilizar
tales
de DNA relacionadasen el mismo o con otros genomas.Presumiblemente,
tambin como sondapara identificar secuencias
DNAs correspondena genesde protenasque estnrelacionadasestructuralmenteo quizstambin funcionaly evolutivamente.

198

qumica
y funcin
7 Membranas:
estructura,
Captulo

Fragmento
de DNAI
o delgenaislado
I

Deduccin
de la secuencia
de aminocidos
de la
prolerna

Ala
Ile

Glr

!
Tyr

Usooel
DNA como
sonoa

3ln

Thr

Ala

Val

\sr

Separacin
de los hbridos
y recuperacin
de las hebras
de DNA
relaconadas

50 100 150 20a 250

Nmerode aminocido

'k?,
Antcuerpos
Protenainsertadaen la
membranacelularin vivo

!
Determinacin
de la secuencia
de nucletidos
del DNA

Informacin
sobre
la secuencia
Repeticin
del proceso
para varios
aminocidos
de la protena

ldentificacin
y de la
de la posibleestructura
orientacinde las protenasen la membrana

ldentificacin
de los aminocidos
importantes
f uncionalmente

I
I compa,acion
desecuencias
I

Identificacin
de familias
de protenashomlogas

Protenas
de membranas:
la paftenmosaico,
delmodelo

t99

especficos
realizadosen la secuenciade aminocidosde una
protena@. La secuenciade DNA que codificaparaun
segmentoespecficode una protena,sepuedealterar
Cambiandonucletidosconcretos.El mRNA que setranscribea
partir de un DNA mutado seinyectaen clulasvivas (en clulas
de mamferoen cultivo o en ovocitosde anfibios).Lasclulas
utilizan el mRNA para dirigir la sntesisde una protena
mutada,de estaforma, sedeterminarcon facilidadsus
propiedadesfuncionales.Asimismo,seidentificarnlos
aminocidoscon importanciafuncional.
Otra forma de utilizar genesaisladoso segmentosde genes
escomo sondasde DNA, utilizadaspara aislarotrassecuencias
de DNA similaresa esasonda@. El DNA que seidentificade
estaforma, probablementecodificaprotenasque son
estructuralmentesimilaresa la protenaparala que codificala
sondade DNA. Esprobableque talesprotenasestn
relacionadasentres,tanto por su origen evolutivocomo,
posiblemente,por su mecanismode accin.
Con Ia llegadade tcnicaspara secuenciargenomas
completos,de lasque trataremosen el Captulo 18,los
puedenbuscargenomascompletospara
investigadores
nucleotdicassimilaresa otras,ya conocidas,que
secuencias
De estaforma, sepueden
codificanparaprotelnasespecficas.
El uso de
identificar gruposo familias de protenasrelacionadas.

(a)
Lactoperoxdasa

----.---..-----12sI

Bicapa
li^i^
ilprua

(b)
Lactoperoxidasa

lsotnico
125I

(c)

Figuta7.24 Un mtodopara marcar protenasexpuestasen una o en

ambassuperfciesde la membranade unavescula, (a) Cuandola
12sI
estnpresentesen solucin en el
lactoperoxidasa(LP) y el
exterior de la membrana de la vescula,laLP catalizael marcaje de
las protenas de la superficie externa de la membrana (es decir,
protenasA y B). Si lasvesculasde membrana(b) seincuban
primero en un medio hipotnico para hacerlaspermeablesa 1aLP y
(c) setransfierena una solucinisotnicaque contiene"'I pero no
LP externa,las protenas expuestasen la superficie interna de Ia
membrana (es decir, protenas B y C) semarcan.

200

qumica
y funcin
7 Membranas:
Capitulo
estructura,

ha sido extraordinariamente
basesde datoscomputerizadas
lasprotenas,
valiosopara sugerirel papelque desempean
gnicas.
basndoseen sussecuencias
A partir de estudiosque sebasanen estastcnicasy en otras,
ahorasabemosque lasclulasdel cuerpohumano necesitan
msde 30 familiasde protenasde membranaparafacilitar el
transportede una granvariedadde solutosque semuevena
travsde lasmembranas.Adems,lasfamilias,a menudo,
contienenmuchasprotenasdiferentes,aunquerelacionadas.
Incluso,un nico miembro de una de estasfamiliaspuedeestar
presenteen variedadde formasque difieren en propiedades
como,tiempo de expresinduranteel desarrollo,distribucin
tisular o localizacinen la clula.Luego,quizs,no debamos
sorprendernos,al saberque los genesque conocemosque
codificanpara protenasde transporterepresentan
del genomahumano!
aproximadamenteel 10o/o
La mayoriade estosabordajesmolecularesson indirectos,
en el sehtidode que permiten a los cientficosdeducir
propiedadesy funcionesde lasprotenasms que probarlas
directamente.Sin embargo,estastcnicasson armaspotentes
que ya han tenido un gran impacto sobrenuestro
conocimientode lasprotenasde membrana,Casicon certeza,
continuarnrevolucionandoel estudiode las membranasy de
susprotenas.

sobre Ia superficie interna de la membrana, slo sobre la

superficie externa o en ambas superficies.
En un abordaje similar, la enzima galactosa oxidasa
(GO) se utiliza para marcar cadenas laterales de carbohidratos que estn ancladasa protenas o lpidos de membrana. Las vesculasse tratan primero con GO que oxida
los residuosde galactosade las cadenaslateralesde los carbohidratos. Las vesculasse exponen, entonces,a borohidrido tritiado (3H-BH4) que reduce los grupos de la galactosa, introduciendo en el proceso, tomos de hidrgeno
marcados.Para explorar estastcnicasen profundidad, intente resolverlos Problemas 7.11 y 7.12 que estn al final
del captulo.
Se puede determinar Ia orientacin de una protena
dentro de una membrana utilizando anticuerpos diseados para reconocer partes especficasde una protena. Las
clulasintactas (u orgnulos) se exponen a estosanticuerpos y posteriormente se determina si los anticuerpos se
han unido a la membrana. Si lo han hecho, se puede concluir que el sitio de unin del anticuerp o, o epitopo,est en
la superficieexternade la membrana. La orientacin de las
protenas de membrana se crea cuando la protena se inserta en sta durante la biognesisde la membrana, y se
mantiene debido a las restriccionestermodinmicas que
impiden la difusin transversal.El resultado es una membrana en donde las molculas de lpidos y protenas presentesen cada lado de la membrana son diferentesde los
del otro lado. Como resultado de todo esto,las membranas

son asimtricas funcionalmente, en el sentido de que las

reaccionesy los procesos que ocurren en un lado de la
membrana son, en general, bastante diferentes de las actividades que se producen en el otro lado.

oH

H-

fr-.r,-8-l-6_o@o@
- n
-/u

t,

^ ^ ^ ^ , ^ovil
^ ; ^ro
^rPor

Grupocarbohidrato

K
Muchas protenas de membranaestn glicosiladas
Adems de lpidos y protenas, la mayora de las membranas contienen cantidades, pequeas pero significativas de
carbohidratos. La membrana plasmtica del eritrocito humano, por ejemplo, contiene alrededor de| 52o/ode protenas,40o/ode lpidos y un 8olode carbohidratos en peso.Los
glicolpidos que hemos comentado previamente representan una pequea porcin de los carbohidratos de membranaya que la mayora estn en forma de glicoprotenas,
protenasde membrana con cadenasde carbohidratosunidas covalentementea cadenaslateralesde aminocidos.
La adicin de una cadenalateral hidrocarbonada a una
protena se denomina glicosilacin. Como muestra la Figura7.25,la glicosilacinimplica el enlacedel carbohidrato al tomo de nitrgeno de un grupo amino (N-glicosilacin) o al tomo de oxgeno de un grupo hidroxilo
(O-glicosilacin).Loscarbohidratos ligados a N estn ancladosal grupo amino de la cadenalateral de una asparagina (Figura 7.25a) mientras que los carbohidratos ligados a
O estn normalmente unidos a los grupos hidroxilo de
serina o de treonina (Figura 7.25b). En algunos casoslos
carbohidratos ligados a O estn unidos a un grupo hidroxilo de hidroxilisina o de hidroxiprolina, que son derivados
de los aminocidoslisina y prolina, respectivamente(Figura7.25c).
Las cadenasde carbohidratos unidas a las glicoprotenas pueden ser linealeso ramificadasy varan enlongitud
de 2 a 60 residuos de azucar. Los azcaresms utilizados
habitualmente para construir estascadenasson galactosa,
mznosA,N - acetilgluco
samina y cido silico(Figura 7.26a).
La Figura 7.26b muestra la cadena de carbohidratos presente en la protena glicoforina, localizada en la membrana
plasmtica de los eritrocitos. Esta protena integral de
membrana tiene 16 cadenas de carbohidratos unidas al
(extremo N-terminal) de la molcula que se orienta hacia
el exterior de la membrana del eritrocitol de estas16 cadenas, 1 estligada a un grupo N y 15 estn ligadasa grupos
O. Fljeseque ambas ramas de Ia cadenade carbohidratos
terminan en un cido silico cargado negativamente.Debido a estosgrupos aninicos en su superficie,los eritrocitos se repelen,reduciendo de estaforma la viscosidadde la
sangre.
Las glicoprotenaspredominan en las membranas plasmticas,donde desempeanun papel importante en el reconocimiento intercelular. Consecuentescon este papel,
las glicoprotenas estn siempre situadas de tal forma que
los grupos carbohidrato sobresalende la superficieexterna
de la membrana celular. Esta disposicin que contribuye a
la asimetra de la membrana, se ha demostrado exoeri-

(a) Unidoen N (al grupo aminode la asparagina)

X
1..

a,/

9
H-N

\/-

H-+r,-o-O"-@-o@
O: C

Serina

,l

9
CH.

H-N

l"

CH-CH

o7J_*".):+"G"@

q
6
\

l oe s e r i n a
o treonina)
, o r U n i d oe n o ( a lg r u p oh i d r o x i d

CH,

H-N

\
^u-^u
O:C

i"

12

-^u

l-

-cH

'o@o@o@

Hidroxilisina

N-cf,

J,)H-o_@"-@o@

"

/ -c'tr^
-7"

Hidroxiprolina
(c) Unidoen O (al grupo hidroxilode hidroxilisina
o hidroxiprolina)

Figura7.25 Glicosilacinen N y en 0 de las proteinasde membrana.

Los grupos carbohidrato estnunidos a las protenas de membrana
de dos formas distintas. En cada casoel aminocido que se muestra
esparte de la estructura primaria de una protena de membrana.
(a) Los carbohidratos unidos en N estnancladosal grupo amino
de Ia cadenalateral de la asparaginamediante enlacesamida.
(b) Los carbohidratos unidos en O estnunidos al grupo hidrorilo
de las cadenaslateralesde serina o de treonina mediante enlaces
ster.(c) en algunos casos,los carbohidratos unidos en O estn
ligados al grupo hidroxilo de los aminocidos modificados
hidroxilisina e hidroxiprolina.

la oarte(mosaico,
Protenas
demembranas:
delmodelo

20r

C H3
I

HO
I

HN

il

c
I

R= H-C-OH
H-C-OH

cH20H

NH

p-D-galactosa
(Gal)

p-o-manosa
(Man)

I
II

Acido silico

(siA)

cH^
N-acetil-P-o-glucosamina
/ l l l l \ l Av \ r v /
\vrvr

(a) Azcaresencontradoshabitualmenteen las glicoprotenas

G.

\-

h.

H_N

G.

G.

-.',-of"]"-

?)
OGrupocarbohidrato

(b) El grupocarbohidrato
de la glicoforina

mentalmenteutilizando lectinas,protenasde plantasque

seunen especfica
y fuertementea azlcares.Por ejemplo,la
aglutinina del germende trigo, una lectina encontradaen
los embrionesdel trigo seune muy especficamente
a oligosacridos
que terminanen N-acetilglucosamina,
mientras que la concanavalina
A, una lectina de las habichuelas
Canavalia ensiformis,reconocelos grupos de manosade
posicionesinternas.Los investigadores
visualizanestaslectinasunindolasaferritina, una protenaque contienehierro y que al microscopioelectrnicoseobservacomo una
mancha electrn-densa.Cuando tales lectinas unidas a
ferritina se utilizan como sondaspara localizar cadenas
oligosacridas
de glicoprotenasde membrana,la unin se
realizasiempre,y de forma especfica,
por la superficieexterna de la membranaplasmtica.
En muchasclulasanimales,los gruposcarbohidratode
lasglicoprotenas
y de los glicolpidosde membranasobresalende la superficiecelulary forman una cubiertade superficiedenominadaglicoclix (que significa<cubiertade
azttcar>>).
La Figura7.27muestraelglicoclixprominentede
202

qumica
Gapitulo
7 Membranas:
y funcin
estructura,

Hgura 7.26 Eemplosde caohldratospresentesen las

glicopfotenas. (a) Los cuatro carbohidratos ms comunes
de las glicoprotenasson galactosa(Gal), manosa(Man),
N-acetilglucosamina(GlcNAc) y cido silico (SiA). (b) Por
ejemplo, 15 de las 16 cadenasde carbohidratos de las
glicoforinas estnunidas al aminocido serina en la porcin
hidroflica de la protena de la superficie de la membrana
plasmticadel eritrocito. Cada una de estascadenas
carbohidratadasconsta de tes unidades de Gal y dos unidades
de GlcNAc, dos de Man y otras dos de SiA. Los dos grupos
terminales de cido silico estncargadosnegativamente.

una clulaepitelialintestinal.Losgruposcarbohidratode la
superficiecelularconstituyenzonasde reconocimientotanto paralos receptores
de membranaimplicadosen la unin
de molculasde sealizgln
extracelular,
como en reacciones antgeno-anticuerpo
o como en procesosde adhesin
intercelularparala formacinde tejidos.
Lasplotenasde memblanavatanen cuantoa su movldad
Preamenteen el captulohemoscomentadoquelasmolculas de lpidos pueden difundir lateralmentedentro del
planode la membrana(vaseEigara
7.11).Ahorapodemos
hacernosla mismapreguntacon respectoa lasprotenasde
membrana:Semuevenlibrementeenla membrana?De hecho,lasprotenasdela membrana,sonmuchomsvariables
que los lpidosen cuantoa su movilidad.Algunasprotenas
pareceque semuevenlibrementedentrode la bicapalipdica,mientrasqueotrasestnconstreidas,
a menudoporque
estnancladasa complejosproteicosadyacentes
localizados
a un lado u otro de la membrana.

Glicoclix

Mlcrovellosidades

Figwa7.27 Glicoclix
de unaclulaepitellalintestinpl-;--Esta
de una clulaepitelialintestinalmuestralas
micrografiaelectrnica
(proyecciones
conforma de dedoimplicadasen
microvellosidades
procesos
de absorcin)y el glicocrlixsobrela superficiecelular.EI
glicoclixen estaclulatieneun espesor
de I 50 nm y consiste
principalmente
de entre1,2-1,5nm de
en cadenas
oligosacridas
dimetro(MET).
Tratamento
con
el virusSendai

Exposicin
a antcuerpos
fluorescentes

l/.\(fi)*

@"@"@
^@@

l,

ptoteica. Los expeexperimentales

dela movilidad
Evidencias
que
los
se
resumenen la Fide
celular
como
rimentos fusin
particularmente
g'sra 7.28 aportan evidencias
convincentes con respectoa la movilidad, de por lo menos,algunas
protenasde membrana.En estosestudiosDavid Frye y
Michael Edidin aprovecharondos tcnicaspotentes,una
que lespermita fusionarclulasde dos especies
diferentes
y otra quelespermitamarcaro etiquetar,lassuperficiesde
Su abordajeconlas clulascon marcadoresfluorescentes.
sistaen fusionarclulashumanasy de ratn para identifide cadaespecieen la superficie
car lasprotenasespecficas
de las clulasfusionadas.Paraello. semarcaroncon anticuerposfluorescentes-anticuerpos que sehabanunido
con dos clasesdiferentesde marcadoresflu6ss6sfs5-.
Posteriormente.las clulasfusionadasse observaroncon
paraver lo quelespasaba
un microscopiode fluorescencia,
a lasprotenasde la membranaplasmticaque habanservido como marcadoresde los dos tipos diferentesde clulasparentales.
Los anticuerposnecesariospara estetipo de experimento se prepararoninyectandopequeascantidadesde
protenasde membranapurificadas,humanaso de ratn, a
diferentesanimalesde experimentacin.(Losconejosy las
cabrassonlos queseusannormalmenteparaestepropsiinmunolgicamente
a la proto.) Losanimalesrespondan
tena extraaproduciendoanticuerposque reaccionanespeclficamentecon lasprotenasde membranautilizadasen
Despusde aislarel anticuerpode la sangre
lasinyecciones.
a colorantesfluorescendel animal,seune covalentemente
tes de forma que los complejosprotelna/anticuerpo/colorante puedanservisualizadoscon un microscopio.

Poco tiempo
(5 minutos)

Tiempoprolongado
(40 minutos)

l'

Clulahumana

y oe
humanas
Ceruras
I
ratonconantrcuerpos
para
especficos
ratn(m)y
anticuerpos
para
especficos
(h)
humano

hrorrda
Cerura
prooucroa
por !
unafusin
porun
inducida
vlrus

Prolernas
oe
O
memorana
marcadas
con
anticuerpos
fluorescentes

Lasprotenas
se
a tos
mezctan
pocosmnutos

Protenas
completamente
mezcladas
a los 40 mnutos

Figwa 7.28 Demostracinde la movilidadde las proteinasde membtanapot fusin celular. La movilidad de las protenas de membrana se
puede demostrar de manera experimental por la mezcla de protenas de membrana que seproduce cuando clulasde dos especiesdiferentes
(ratn y humano) sefusionan y las protenas de membrana semarcan con dos juegos de anticuerpos fluorescentes,uno especficopara las
protenas de la membrana de ratn y ligado a un colorante verde y el otro especficopara las protelnas de la membrana humana y ligadasa
un colorante rojo. Las protenas empiezan a mezclarseen pocos minutos y se mezclancasicompletamente a los 40 minutos.

la parte(mosaicor
delmodelo
Protenas
demembranas:

203

Frye y Edidin marcaron las protenasde membrana

plasmticahumanay de ratn con anticuerposque tenan
unidos marcadoresde dos coloresdiferentes,de tal forma
quelos dostiposde protenassedistinguiranpor el color
de su fluorescencia.
Lasclulasde ratn reaccionaroncon
anticuerposespecficos
para ratn unidos a un colorante
fluorescenteverdedenominadofluorescena,mientrasque
las clulashumanasreaccionaron
con anticuerposespecficos para humanos unidos a un colorante fluorescente
r ojo, rodamina(Figura 7.28).
Parafusionarlas clulashumanasy de ratn, las trataron con el virus Sendai,un agenteconocidopor su capacidad parafusionarlasclulaseucariotas,inclusoaqullasde
especiesdiferentes.Las clulasfusionadasse expusieron
entoncesa los anticuerposfluorescentes
rojosyverdesy se
observaronal microscopio de fluorescencia.Cuando las
clulasfusionadas
seexpusieronpor primeraveza los anticuerpos,las protenasde la membranadel ratn con el
colorantefluorescenteverde se localizaronen una de las
dos mitadesde Ia superficiede la clulahbrida,mientras
que las protenasde membranacon el colorantefluorescenterojo derivadasde las clulashumanassemantuvieron restringidasa la otra mitad de la superficiecelular
(vaseFigura
7.28).Sin embargo,a los pocosminutos,las
protenasde lasdos clulasparentales
empezarona entremezclarse,
y a los 40 minutos,las regionesseparadas
con
verdey roja estabancompletament?hbrefluorescencia
mezcladas.
Si sereducala fluidezde la membrana.dismi-

(a)

'

ozt'^

---'

nuyendola temperaturapor debajode la temperaturade

transicinde la bicapalipdica,seimpedala mezcla.Por
eso,Fryey Edidin concluyeronque la mezclade protenas
fluorescentes
habasido causadapor la difusin lateral de
lasprotenashumanasy de ratn a travsde la bicapalipdicafluida de la membranaplasmtica.Sin embargo,comparadascon la mayora de los lpidos de membrana,las
protenasde membranadifunden mucho mslentamente
a travsde la bicapalipdica.
Si las protenasfueran completamentelibres para difundir dentro del plano de la membrana,entoncesdeberan estardistribuidasal azar.La microscopaelectrnica
aplicadaa la criofractura, que directamentevisualizalas
protenasincluidas en la bicapa,apoyala idea de que al
menosalgunasprotenasde membrana,secomportande
estaforma. Cuandoseexaminanmicrografasde criofracturas de membranasplasmticas,las partculasproteicas
incluidas en ella suelen estar,a menudo, distribuidas al
azar.Tlesevidenciascon respectoa la movilidad de las
protenasno se restringena la membranaplasmtica.
Tmbinseha descubiertoque las partculasproteicasde
la membranamitocondrialinternaestnordenadasa\ azar
(Figura7.29a).Siseexponenvesculas
de membranamitocondrial aisladasa un potencialelctrico,las partculas
proteicasquetengancarganetanegativa,
semovernhacia
uno de los extremosde la vescula.
Si el potencialelctrico
seelimina,laspartculassedistribuyenotra vezal azar,indicandoquetodasestasprotenassonlibresde moverseen

(b)

0,2 ptm

Figwa 7.29 Evidenciade la movilidadde las ptoteinasde membrana. (a) Micrograffa de criofractura que muestra la distribucin aI azarde
partculas protecasen vesculaspreparadasa partir de la membrana mitocondrial interna. (b) La exposicin de las vesculasa un campo
elctrico causaque las partculas de membrana migren a un extremo de la vescula(extremo superior derechade la micrografa). Si las
protenas de membrana no fueran mviles, estemovimiento de las protelnas hacia un lado de la vesculano sucedera).

204

qumica
y funcin
Capitulo
7 Membranas:
estructura,

la bicapalipdica.Volveremosa estaevidenciaen el Capquela transferencia

tulo 10,dondeaprenderemos
de electronesen la membranamitocondrialinternadependede
lascolisiones
al azarqueseproducenentrecomplejosmvilesde protenasde membrana.
Evidencia
expermental
de movilidad
restrngida,Aunquese
ha demostradoque muchostipos de protenasde membranadifundena travsde la bicapalipdica,susvelocidadesde movimientovaran.Un abordajeutilizadoampliamenteparacuantificarlasvelocidada lasquedifundenlas
protenasde membranaesla recuperacinde fluorescencia despusde un foto-blanqueamiento,
tcnicaque ya
hemos tratado en el contexto de la movilidad lipdica
(vase
Figtra 7.II) . Paracalcularla velocidadde difusin
de distintostipos de molculasfluorescentes
lipdicasy
protecas,
sepuedeutilizarla velocidada la quesemueven
haciael reablanqueada,
molculasde membranano decoloradasprocedentes
de partesadyacentes
alazonafratada.
Lasprotenasde Ia membranason mucho msvariables en su velocidadde difusin que los lpidos. Existen
unaspocasprotenasde membranaque difundencasitan
rpidamentecomo los lpidos,pero la mayoradifunden
mslentamentede lo que cabraesperarsi fuesencompletamentelibresparamoverseen la bicapalipdica.Adems,
la difusin de muchasprotenasde membrandEsfirestringidaa un realimitada,indicandoque,por lo menos,algunasmembranasconstande una seriede dominiosdememquedifierenen sucomposicinproteicay
branaseparados,
por lo tanto en susfunciones.Por ejemplo,lasclulasque

Lasclulasnecesitanmembranasparadefinir y compartimentalizar
los espacios,
parafacilitary regularel flujo de materiales,para detectarsealesexternasy para
mediar lasinteraccionesentre las clulas.
Nuestro conocimiento actual de la estructura de la membranarepresentala
culminacin de ms de un siglo de estudios,que empezcon el reconocimiento
de que los lpidos son un componente
importante de la membrana y que fue
avanzandoprogresivamente
desdela idea
de una monocapalipdica a una bicapa
fosfolipdica.Una vez que se reconoci
que las protenaseran otro componente
importante, Davsony Danielli propusieron su modelode <sndwich>
en dondeIa
bicapalipdicaestabarodeadaen los dos
ladospor capasde protenas.
Estemodelo
estimul las investigaciones
y se aplic a

limitan su intestino delgadotienen protenasde membrana que transportansolutostalescomo azicaresy aminocidos,que sacandel intestinoy los introducenen el cuerpo. Estasprotenasde transporteestnrestringidasen el
ladodela clulaen dondeserequierecadauno delostipos
(vase
de transportecorrespondiente
Figura7.22).Lasclulas en lasque lasprotenasde membranaestnrestringidasa una parteespecfica
de la membranacelularsedenominan clulaspolarizadas.
para restringirla movilidadde las proteinas.
Mecanismos
Existenvarios mecanismosdiferentesresponsablesde la
restriccinde la movilidadde lasprotenasy por tanto de
la polarizacincelular.En algunoscasos,las protenasde
membranaseagregandentro de la membranaformando
complejosgrandesquesemuevenperezosamente,
si esque
lo hacen.En otros casos,las protenasde membranaforquesetransformanen barrerasqueimpiman estructuras
den la difusinde otrasprotenasde membrana,creando
de este modo, dominios de membranaespecficos;
las
que secomentarnen el Captulo17son
unionesestrechas
un ejemplo.Sinembargo,el impedimentomshabitualen
la movilidadde lasprotenasde membrana,vieneimpuesto por la unin o anclajede esasprotenasa estructuras
adyacentes
localizadas
a un lado u otro de Ia membrana.Por
ejemplo,muchasprotelnasde Ia membranaplasmticaestn ancladaso bien a elementosdel citoesqueleto
de la superficieinternadela membranao bien a estructuras
extracelularestales como la matriz extracelularde las clulas
animales.Comentaremosambosmecanismosde anclaje
en el Captulo17.

Ia variedadde membranasreveladapor la
microscopaelectrnica.Sin embargo,a
medidaque las membranasy las protenasdemembranaseexaminaronconmavor detalle.el modelo del <sandwich>fue
cadavez ms cuestionadoy finalmente
fue desacreditado.
En su lugarsurgiel modelodel mosaicofluido de Singery Nicholsonque en
la actualidades la descripcinaceptada
universalmentesobre la estructurade ia
membrana.De acuerdocon estemodelo,
protenascon diferenteafinidadpor el interior hidrofbico de la membranaflotan
en y sobreuna bicapalipdica fluida. La
mayoriade lasmembranasincluyenentre
susprincipaleslpidos fosfolpidos(tanto
fosfoglicridoscomo fosfoesfingolpidos)
y glicolpidos tanto cerebrsidoscomo
ganglisidos.
En lasclulaseucariotas,los

esterolesson tambin componentes importantes de la membrana; entre stosse

incluye el colesterol en las clulas animales y varios fitoesteroles relacionados con
l en las clulas vegetales.Los esterolesno
se encuentran en las membranas de los
procariotas, pero al menos algunas clulas bacterianas contienen algunos compuestos parecidos denominados hopanoides.
En trminos de su asociacin con Ia
bicapa lipdica, las protenas de membrana se clasifican en integrales, perifricas o
ancladasa lpidos. Las protenas integrales de membrana tienen uno o ms segmentos cortos con predominio de aminocidos hidrofbicos que anclan las
protenas a la membrana. En la mayora
de los casos,stos son segmentostransmembrana, de tal manera que porciones

Perspectiva 205

de Ia protenaestarnexpuestasa ambos
lados. La mayora de estos segmentos
transmembranason secuencias
en a-hlicede entre20y 30 aminocidos
predominantementehidrofobicos. Las orotenas
perifricasde membranason hidrofilicas
y se mantienen en la superficie de la
membrana.Lasprotenasancladasa lpidos son tambinde naturalezahidroflica
pero estn unidas covalentementea la
membranapor cualquierade los diferentes anclajeslipdicos que estnincluidos
en la bicapalipdica.
La mayoriade los fosfolpidosy protenas de la membrana son libres para
moverseen el plano de la membranasi no
estnespecficamente
ancladosa estructuras de la superficieinterna o externade

la membrana.De manerageneral,la difusin transversalo <flip-flop>entremonocapas,no esposiblepara los fosfolpidos

excepto cuando est catalizadapor enzimas denominadastranslocadoresfosfolipdicos o flipasas.El resultadoes que la
mayoria de las membranasse caracterizan por presentaruna distribucin asimtricade lpidosentrelasdos monocapas y una orientacinasimtricade las
protenasen las membranas,de manera
que los dos lados de la membranason
distintosestructuraly funcionalmente.
Las protenasde membranafuncionan como enzimas,transportadoresde
electrones,
molculasde transportey receptoresde sealesqumicascomo neurotransmisores
y hormonas.Las prote-

nas de membrana tambin estabilizany

dan forma a la membranay median en la
comunicacinintercelulary la adhesin
intercelular. Muchas protenas de Ia
membrana plasmtica son glicoprotenas,con cadenaslateralesde carbohidratosquesobresalen
de la membranapor el
lado externo,en donde desempeanun
papel importante como marcadoresde
reconocimientoen la superficiecelular.
Con el conocimientode Ia estructura
y funcin de Ia membranaque hemosadquirido en estecaptulo,ya estamospreparadospara explorar los mecanismos
por los cualessolutosy seales
semueven
a travsde lasmembranas,
Paraestadiscusinrecogemos
nuestrasmembranasy
pasamosal Captulo8.

Problemas
Losproblemas
demayor
dificultad
estn
marcados
conun ..
7,1, Funcin de las membranas.Especifiquea cui de las
cincofuncionesgenerales
de la membrana(barrerade
permeabilidad,localizaciny funcin, regulacindel
transporte,deteccinde seales,o comunicacincelular)hace
alusincadauna de lassiguientesaseveraciones.
/-(a) Cuandolasclulassedesorganizan
y sefraccionan'en
sus
componentessubcelulares,
Ia enzimacitocromo P-450se
recuperacon Ia fraccindel retculoendoplasmtico.
(b) Lasclulasde un organismomulticelularportan en su
superficieexternaglicoprotenasespecficas
de tejido que
sonresponsables
de la adhesinintercelular.
(c) El interior de una membranaestintegrado
principalmente
por lasporcioneshidrofbicasde los
fosfolpidosy de lasprotenasanfipticas.
(d) Losfotosistemas
I y II estnincluidosen la membranadel
tilacoidedel cloroplasto.
(e) Todala fosfatasacidade una clulade mamferose
encuentraen loslisosomas.
(0 La membranade una clulade la nz de una plantatiene
una bomba de ionesque intercambiafosfatohaciael
interior celularpor bicarbonatoque saleal exterior.
(g) La membranamitocondrial interna contieneuna protena
transportadorade AIP y ADP que acoplael movimiento
del AIP haciael exteriorcon el movimiento del ADP hacia
el interior.
(h) La insulinano entraen la cluladiana,en vezde eso,seune a
un receptorde membranaespecfico
situadoen Ia superficie
externade sta,activandoasa la enzimaadenilatociclasa
que estsituadaen la superficieinternade la membrana.
(i) Lasclulasadyacentes
de plantasintercambiancon
frecuenciacomponentescitoplasmticos
a travsde canales,
denominadosplasmodesmos,
quesurcanlasmembranas.
7.2 Explicacinde la estructura de la membrana. Cadauna
de lassiguientesobservaciones
desempeaun papelimportante

206

Captulo
qumica
7 Membranas:
y funcin
estructura,

paramejorarnuestroconocimientosobrela estructurade la
membrana.Expliqueel significadode cadauna de ellas,e
indiqueen qudcadadel cronogramaquesemuestraen la
Figura7.3esmsprobableque serealizase
esaobservacin.
(a) Cuandoseobservauna membranaal microscooio
electrnicolasdoslneasfinasy electrodensas
tlenenun
espesor
de aproximadamente
2 nm, pero con frecuencia
tienenun aspectoclaramente
distinto.
(b) La eti-lureapenetramucho msfcilmenteen una
membranaque la urea,y la dietilureapenetratodavacon
mayor facilidad.
(c) La adiccinde fosfolipasaa una clulaviva causauna
rpida digestinde lasbicapaslipdicasde lasmembranas,
lo quesugierequela enzimatieneacceso
a los fosfolpidos
de la membrana.
(d) Cuandosesometenbicapaslipdicasartificialesa un
anlisiscon criofractura,no seobservanpartculasen
ningunacara.
(e) La resistividad
elctricade lasbicapaslipdicasartificiales
esvariosrdenesde magnitudmayorquela de las
membranasreales.
(0 Algunasprotenasde membranaseextraencon facilidad
con NaCl lM, mientrasqueotrasrequierenel usode un
solventeorgnicoo de un detergente.
(g) Cuandolashaiobacteriascrecenen ausenciade oxgeno
producenun pigmentoprpura que seincluyeen su
membranaplasmticay que tienela capacidadde bombear
protoneshaciael exteriorcelularcuandoseilumina. Si las
membranasprpura seaslan,serealizauna criofracturay
seobservanal microscopioelectrnicoseencuentran
manchasde partculascristalinas.
7,3 Volver a Gorter y Grendel.Lasconclusionesclsicasde
Gorter y Grendelde que la membranaplasmticadel eritrocito
humano consistaen una bicapalipdica sebasaronen las
(i) los lpidos que extrajeroncon
siguientesobservaciones:
acetonaa partir de 4,74 X 10' eritrocitos,formabanuna

monocapacon un reade 0,89m'que seexpandaen una

superficieacuosa;y (ii) el reasuperficialde un eritrocito era de
100pm'segn susmedidas.
aproximadamente
(a) Demuestrea partir de estosdatoscmo llegarona la
conclusinde que la membranadel eritrocito esuna bicapa.
(b) Ahora sabemosque el reasuperficialdel-eritrocito
humano esde aproximadamente145pm". Expliquecmo
Gorter y Grentelpudieronllegara la conclusincorrecta
cuandouna de susmedidasera solamentedos terciosdel
valor correcto.
7.4 Lpidos,protenasybicapasen los eritrocitos. La
membranade un eritrocito humano tiene un reasuperficialde
8
145pm'y unespesorde aproximadamente
aproximadamente
nm. Contieneunos0,52picogramosde lpidosy unos0,60
picogramosde protena.(1 picogramoequivalea 1 x l0-12g.)
de colesteroly
Supongaque existencantidadesequimoleculares
de fosfolpidoscon un pesomolecularde 386y de
En una monocapa,
aproximadamente800,respectivamente.
cadamolculade fosfolpidoocupaun reasuperficialde
ocupa
0,55nm2por molculay cadamolculade colesterol
0,38nm'por molcula.
(a) Asumiendoque lasprotenasde membranatienen un peso
molecularaproximadode 50.000,cuntasmolculasde
protenahay en una nica membranade eritrocito?
(b) Culesla proporcinde molculasde lpido frentea
molculasde protenaen la membranadel eritrocito?
(c) Quproporcin del readela superficiedrteritrocito est
ocupadapor loslpidosde la bicapa?
7.5 Acercadel tamao. Por la qumica,sabemosque cada
lineal
grupometilo (-CH2-) de una cadenahidrocarbonada
0,13nm. A
alargala longitudde la cadenaaproximadamente
sabemos
partir de estudiossobreestructurade protenas,
ademsqueuna vueltade una a-hliceincluye3,6residuosde
aminocidosy extiendeel ejemayor de la hlice
aproximadamente0,56nm. Utilice estainformacin para
contestara lo siguiente:
(a) Cuntomide una nicamolculade cidopaimtico(16
tomosde carbono)en su forma completamente
extendida?
Yuna molculade cidolarico(12C)y otra
de cidoaraquidnico(20)?
(b) Cuntoesel espesordel interior hidrofbico de una
membranatpica comparadocon la longitud de dos
molculasde cidopalmtico puestasextremocon
extremo?Ycon respectoa dos molculasde cidolarico
o cidoaraquidnico?
(c) Cuntosaminocidosdebeteneraproximadamenteun
segmentotransmembranacon forma de hlicede una
protenaintegralde membrana,si el segmentotieneque
cruzarlabicapalipdica definidapor dos molculasde
cidopalmtico puestasextremocon extremo?
(d) La protenabacteriorodopsina
y
tiene248aminocidos
sietesegmentostransmembrana.Aproximadamente,qu
porcinde los aminocidos
formanpartedel segmento
transmembrana?
Asumiendoque la mayorade los
aminocidosrestantesestnpresentesen los bucles
hidroftlicosque mantienenunidos los segmentos
transmembrana,cuntosaminocidos,en promedio,estn
Dresentes
en cadauno de esosbucles?

7.6 Temperaturay composicinde la membrana. Culde

probablementero seobservarcuando
lassiguientesrespuestas
un cultivo bacterianoque crecea37 oCsetransfieraa una sala
de cultivo que semantienea 25 'C? Expliquesu respuesta.
(a) Un descensoinicial de Ia fluidez de la membrana.
(b) Una sustitucingradualde los cidosgrasosde cadena
corta por cidosgrasosmslargosen los fosfolpidosde la
membrana.
(c) Una sustitucingradualde cido estericopor cido oleico
en los fosfolpidosde Ia membrana.
(d) Una mejora de la velocidadde sntesisde los cidosgrasos
insaturados.
(e) La incorporacinde mscolesterolen la membrana.
7,7 Fluidez de membranaytemperatura. A menudo se
estudianlos efectosde la temperaturay de la composicin
lipdica sobrela fluidez de la membrana,utilizando membranas
artificialesque contienensolamenteuna o unaspocasclasesde
lpidos y ninguna protena.Suponiendoque ustedy su
compaerode laboratoriohan fabricadolassiguientes
membranasartificiales:
Membrana.l:Fabricadapor enteroa partir de
fosfatidilcolina
con cidosgrasossaturadosde 16carbonos.
Membrana2: La mismaquela membrana1,exceptoque
cadauno de los cidosgrasosde 16carbonostieneun
nicodobleenlacecis.
Membrana3; La mismaquela membranal, exceptoque
tieneslo 14
cadauno de los cidosgrasossaturados
tomosde carbono.
Despusde determiar lastemperaturasde transicinde las
muestrasque representana cadauna de lasmembranas,
descubreque su compaerode laboratorioseequivocal
apuntar a qu tipo de membranascorrespondanlasmuestras.
Lostresvaloresquedeterminfueron - 36 "C,23 "C y 41 "C.
Asignecadauna de estastemperaturasde transicina la
membranaartificial correctay expliquesu respuesta.
7,8 Popurr de membrana. Expliquecadauna de las
tan brevementecomo seaposible
siguientesobservaciones
(a) Tantola protenaA como la B tienen un pesomolecularde
33.000y constande una nicacadenapolipeptdicacon
240 aminocidoshidrofilicosy 60 aminocidos
hidrofbicos;la protenaA esuna protenaintegralde
membranay la protenaB esuna protenasoluble.
(b) Cuandoserealizaun experimentode fotoblanqueamiento,
utilizando membranasplasmticasde mioblastos
(precursoresde clulasmusculares),similar al descritoen
la Figura7.11,con glicoprotenasde superficiemarcadas
setarda mucho msen conseguirque la
con fluorescencia,
manchaoscurano fluorescente,adquierafluorescenciaotra
vez,que cuandosemarcanfosfolpidoscon un colorante
fluorescente.
Adems,slo un 55% de Ia fluorescenciade
lasprotenasvuelvefinalmentealazona de la mancha
blanqueadapor el lser.
(c) En laspatasde un reno,lasmembranasde lasclulasque
estnmscercade laspezuastienen una mayor
proporcin de cidosgrasosinsaturadosque las
membranasde lasclulasdel restode la pata.
Problemas 207

(d) La mayorade los agentesutilizadosen medicinacomo

anestsicos
son apolaresy acluanaumentandola fluidez de
lasbicapaslipdicasde lasmembranascelulareshastael
punto de que la transmisindel impulso nerviosose
interrumpey lassensaciones
de dolor seeliminan,
7.9 Lasbacteriaspequeasno pueden.Acholeplasma
laidlawii esuna bacteriapequeaque no puedesintetizarsus
propioscidosgrasosy por tanto debeconstruirsu membrana
plasmticaa partir de los cidosgrasosdisponiblesen su
entorno.El resultadoesque Ia membranade Acholeplasma
adquierelas caractersticas
ffsicasde los cidosgrasosque estn
disponiblesen esemomento.
(a) Si a lasclulasde Acholeplasmaselesda accesoa una
mezclade cidosgrasossaturadose insaturadoscrecerna
temperaturaambiente.Puedeexplicarpor qu?
(b) Si transfiereuna parte de lasbacteriasa un medio que
contieneslo cidosgrasossaturadosy no realizaningn
otro cambioen lascondicionesde cultivo,dejarnde
crecerinmediatamente
despus
de habercambiadoel
medio.Expliquepor qu.
(c) Culserala nica forma de que lasbacteriasdel apartado
b creciesen
otravezsin cambiarles
el medio?Expliquesu
respuesta
(d) Si Ud. tuviera que mantenerel cultivo de Acholeplasmadel
apartadob en lascondiciones
queall sedescriben,
durante
un periodode tiempoprolongado,qusepuedepredecir
sobrelo quelesocurriraa lasbacterias?
Expliquesr(
respuesta.
(e) Quresultados
esperara
si transfiriese
una partede las
bacteriasa un medioqueslocontuvieracidosgrasos
insaturados,sin realizarningn otro cambioen las
condiciones
del cultivo?Expliquesu respuesta.
.7.L0 Hidropata: estosepone interesante.Una
representacin
de hidropataseutiliza para predecirla
estructurade lasprotenasde membranabasndose
en su
secuenciade aminocidosy en los valoresde hidrofobicidadde
stos.La hidrofobicidadsemide como un cambio en la energa
libre estndarAGo',en kilojulios/mol(kl/mol), debidoa la
transferenciade un residuode aminocido,desdeun solvente
hidrofbico haciael agua.El ndicede hidropata,secalcula
promediandolos valoresde hidrofobicidadde una seriede
segmentoscortosdel polipptido,estandocadasegmento
desplazado,
un aminocidoa partir del extremoN-terminal. El
ndicede hidropatade cadasegmentosucesivo,serepresentaen
funcin de la localizacinde esesegmentoen la secuenciade
aminocidos.
La representacin
seexaminabuscandoregiones
de alto ndicede hidropata.
(a) Porqu los cientficosintentan predecirIa estructurade
una protenade membranapor estosmediosindirectos
cuandola tcnicade cristalografade rayosX revelarala
estructuradirectamente.
(b) Sabiendocmo sedefine,cmoesperaraque fuera el
ndicede hidrofobicidadde un residuohidrofbico como
valina o isoleucina,positivo o negativo?Yde un residuo
hidroflico como cido asprticoy arginina?
(c) Debajohay una lista de cuatro aminocidosy cuatro
valoresde hidrofobicidad.Relacionelos ndicesde

208

Captulo
7 Membranas:
qumca
y funcin
estructura,

hidrofobicidad con los aminocidos correctos y explique su

respuesta.
Aminocidos: alanina; arginina; isoleucina; serina
Hidrofobicidad (en kJ/mol): *3,1; * 1,0; -t,t; *7,5
(d) En la Figura 7.30 se muestra una representacinde
hidropata para una protena integral de una membrana
concreta.Dibuje una barra horizontal sobre cada segmento
transmembrana identificado por la representacin. Qu
longitud tiene, aproximadamente, el segmento
transmembrana? Comparado con el nmero que Ud.
calcul en el ProblemaT.5c Elvalor se ajusta?Cuntos
segmentos transmembrana, piensa Ud., que tiene la
protena?Puedesuponer de qu protena se trata?
a

'o + , u
* t.' ^u
!

F
cg0

q)
D

-2'0

c)

.: -4,u
z

20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240

lndiceaproximado
de hidropata

Figura7.30 Representacin
paraunaprotena
de hidropata
integral
dememblana.VaseProblemaT.l}d.
.7,L1, Dentro o fuera.Por la Figura7.24sabemos
quelas
regionesexpu_estas
de lasprotenasde membranasepueden
marcarcon t"I mediantela reaccinde la lactoperoxidasa
(Lp).
De manerasimilar,lascadenas
laterales
de carbohidratos
de las
glicoprotenas
de membranasepuedenmarcarcon'H
mediantela oxidacinde lasgalactosas
con la galactosaoxidasa
(GO),seguidode una reduccinconborohidridotritiado
('H-BH4).Sabiendoquetanto la LP comola GO sondemasiado
grandescomo parapenetraren el interior de una clulaintacta,
expliquecadauna de lassiguientesobservaciones
realizadascon
eritrocitosintactos.
(a) Seincubanclulasintactascon LP en presencia
de r2sl,se
extraenlasprotenasde membranay seanalizanen gelesde
poliacrilamidacon SDS,Sedetectaquevariasde lasbandas
del gel son radiactivas.
(b) Seincubanclulasintactascon GO yluego sereducencon
'H-BHr.
Sedetectaquevariasde lasbandasdelgelson
radiactivas.
(c) Todaslasprotenasde la membranaplasmticaque
contienencarbohidratossemarcancon el mtodo
co/3H-BH4
(d) Ninguna de lasprotenasde la membranaplasmticadel
eritrocito desprovistade carbohidratossemarcacon el
mtodo LPlr2sr
(e) Si serompe el eritrocito antesdel procedimientode
marcaje,el mtodo de la LP marcaprcticamentetodaslas
protenasde la membrana.
.7.L2 El interior de la membrana en el exterior.
Tcnicamenteesposibleprepaftf vesculasselladasa partir de

membranasde eritrocitosen las que la orientacinoriginal de la

membranaestinvertida.Talesvesculastienen,lo que
originalmenteera el lado citoplsmicode la membrana,
mirandohaciael exterior
(a) Quresultadosesperarade estasvesculas,que contienen
la parte interna de la membranahaciael exterior,si
fuesensometidas
al mtodoGO/rH-BH4descritoen el
Problema
7.11?
(b) Quresultadosesperarade estasvesculas,
que contienen
la parte interna de la membranahaciael exterior,si fuesen
sometidas
al mtodoLPlr2sIdel Problema7.11?

(c) Qu conclusiones se extraeran si algunas de las protenas

que se marcan con el mtodo LPI125Idel Apartado b
estuviesen entre las que se haban marcado cuando se
trataron clulas intactas con el mismo mtodo, en el
Problema 7. 11a?
(d) Sabiendo que a partir de la membrana plasmtica de
los eritrocitos es posible preparar vesculas,que contienen
la parte interna de la membrana hacia el exterior, piense
en una manera de marcar una protena transmembrana
con'H en un lado de la membiana y con 12sIen el otro
Iado.

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