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RESUMEN

La presente revisin resume el conocimiento actual sobre los canales de agua


de acuaporina centrndose en la estructura establecida, la selectividad y la
conduccin, y en el revelado recientemente mecanismos de gating de algunos
isoformas de acuaporina. Ensayos de transporte acuaporina de agua se
utilizan para evaluar acuaporina funcin en las clulas de diferentes
organismos. Los mtodos comnmente utilizados para evaluar la funcin
acuaporina as como tambin se describen las estrategias experimentales
requeridas para volver a gating ternera. acuaporina regulacin parece ser
esencial para la homeostasis del agua en el organismo y crtico para la salud.
INTRODUCCIN
El agua es el componente principal de las clulas y tejidos a travs de todas las
formas de vida. los existencia de canales de agua que facil penetracin de
agua a travs del tate las membranas celulares fue la primera se describe en
las clulas rojas de la sangre de mamferos [1] y ms tarde Thelia epi- renal 12
principalmente a travs de medidas de alta permeabilidad al agua osmtica
(inhibidas por los mercuriales) 13. 4]. en la activacin de baja energa para el
transporte [5] y de la relacin de osmtica para permeabilidades al agua de
difusin 16]. los protena de canal de agua primero reconocido fue identificado
en las clulas rojas de la sangre por Agre y compaeros de trabajo 17) y fue
nombrado acuaporina 1 (AQP1]. Las acuaporinas pertenecen a un grupo
altamente conservada de la membrana protenas llamadas las principales
protenas intrnsecas (MIP) que forman una gran familia que comprende ms de
800 protenas integrales de membrana 18. 9 de todo tipo de organismos. Sobre
la base de la secuencia de protenas similitud y el sustrato seleccin tividad, las
acuaporinas se agrupan en tres subfamilias principales: las acuaporinas
clsicos u ortodoxos, considerado como canales especficos moje con agua
[10], aquaglyceroporins ii, permeados por pequeos solutos. principalmente
glicerol, adems de agua [11, 12) y iii. subcelulares-acuaporinas. result ser
local-zado dentro de la clula revisado por [13]). Hoy en da, muchos otros
acuaporinas han sido reconocidos en casi todos los orga- nismos que viven
(revisado por [14, 1500, Los organismos unicelulares como las bacterias o
levaduras poseen aliado no baja de uno o dos genes que codifican los canales
de agua de acuaporina (16, 17), pero unos pocos ms genes de acuaporina se
encuentran en el genoma de los organismos multicelulares, tales como plantas,
que pueden contiene 38 genes putativos de acuaporina [18 n 13 mamferos
isoformas de acuaporina han sido identificados hasta el momento (AQP0-12].
Se expresan en muchos epitelios y endotelios que participan en el transporte
de fluidos, pero tambin en otros tejidos transporte no fluidos, tales como piel,
grasa y astroglias.

Anlisis de fenotipo de los ratones knockout de acuaporina ha revelado una


variedad de importantes funciones fisiolgicas de AQPs en el mecanismo de
concentracin urinaria. la secrecin de fluido glandular, hinchazn del cerebro.
excitabilidad neural, metabolismo de las grasas, hidratacin de la piel y, ms
recientemente, migracin celular cin (para una revisin ver [19]], la
caracterstica ms notable de los canales uaporin AQ es su alto la selectividad
y eficiencia en el agua o glicerol permeacin. Las acuaporinas permiten que el
agua / glicerol para mover libremente y de manera bidireccional a travs de la
membrana celular, aadiendo los complementos incluidos el hidrxido, iones
hidronio y protones 120), siendo esencial para preservar el potencial las
electroqumico a travs de la membrana. Aparte de agua y glicerol, un nmero
de otros permeantes, tales como urea, nitrato, CO2, NO, H202. y NH3 I11, 2125] Tambin se han demostrado permear las acuaporinas especficos.
Recientemente, apertura de puerta de las acuaporinas ha sido descrita por
varios sistemas celulaler. Factores como la fosforilacin, pH, presin, soluto
gradientes y la temperatura, entre otros. se inform a afectar el
comportamiento compuerta de levadura y vegetales canales de agua 126-29).
Adicionnalmente, el transporte de agua en el rin de conejo vesculas borde
en cepillo fue mostrado para ser inhibida por un aumento de tensin de la
membrana 130, 31], una mecanismo de compuerta que parece ser comn con
acuaporinas de la levadura 132. Esta revisin describe el conocimiento actual
sobre las caractersticas estructurales, funcionales y de regulacin de
aquaporines clsicos y resume los estudios funcionales utilizados actualmente
para evaluar funcin acuaporina.

ESTRUCTURA ACUAPORINA Y GATING


divulgacin de los mecanismos de funcin y la selectividad aquaporina eran
posibles debido al desarrollo de tcnicas de rayos X de alta resolucin,
mutagnesis dirigida al sitio [Revisados por 133] y simulaciones de dinmica
molecular (revisados por (34).
Estructura Acuaporina
En la actualidad, hay al menos once estructuras de acuaporina reportadas de
alta resolucin en el protena base de datos: uno del arquea 1351, dos de las
bacterias 136, 37. seis de mamferos 138-421 uno a partir de plantas (43), uno
de I44 protozoos y uno de levadura 128]
Las estructuras reportadas revelaron un tetramerico ensamblaje de cuatro
monmeros idnticos cada uno se comportaba como un canal de agua. La
figura 1 muestra diferentes puntos de vista de esta estructura tetramerica aqu
ejemplificados para el bAQP1 bovina. Los monmeros interactuar con dos de
sus vecinos y formar el tetrmero con un poro central que excluye el agua
molculas [20]. Ha sido el que sugiere que este poro est implicado en de la

conduccin de gas (45. 46] y podra funcionar como un canal catinico cerrado
[47,48]. La Figura 2 muestra la topologa tpica de aq uaporin monmeros para
la bAQP1 bovino donde la regin de poros se indica mediante la malla de color
rojo. Son protenas de pequeo tamao con menos de 300 aminocidos, con
seis transmembrana altamente hidrofbica que abarca las hlices (1 a 6),
organizadas en dos distintas mitades 12, 1, 3 y 5. 4. 6) que se unen para
formar un canal. Las hlices estn conectados por cinco bucles (A a El con las
secuencias terminales N- y C- en el lado citoslico de la membrana. Tres de los
bucles de ING Connect- estn situados en el lado exoplasmic (A, C. El y los dos
restantes en el lado citoslico IB y DI. Bucles B y E contienen los motivos NPA
[Asn-Pro-Ala] que forman parte de la firma de la sper familia MIP [49]. Estos
bucles forman hlices alfa que se pliegan cortos de nuevo en la membrana. con
el bucle B que entra desde el lado y el bucle citoslica E de la exoplasmic lado
136, 50, 51]. Juntos, estos dos ces helipuertos cortos forman la sptima
transmembrana he- Lix con los motivos de firma NPA orientadas 180 grados
entre s y formando parte de la superficie de la va acuosa 120, 28). Las dos
mitades de la protena son altamente homlogas sugiriendo ancestral
intragenic duplicacin de genes [521. Esta conservacin ob junto con la idea de
que los bucles NPA superponerse en el medio del poro estrechando as la va,
ha llevado a la propuesta de reloj de arena estructural modelo IS3) confirmada
por los mapas tridimensionales obtiene por cryoelectron microscopa [54]
La selectividad y el mecanismo de la conductancia
Aunque acuaporinas clsicos siguen siendo considerados mayormente
especfica para el agua, AQP1 la permeabilidad de los pequeos solutos polares
se propuso recientemente en una se encontr relacin entre la permeabilidad
cor inversa y la hidrofobicidad soluto (55]. En el poro regin, la especificidad de
agua se consigue mediante La presencia de residuos particulares confiriendo
de tamao concentraciones y / o caractersticas de carga que permiten a las
molculas de agua para pasar a travs, mientras que la prevencin de
permeabilidad a los protones orany solutos por encima de 2,8 A. La entrada
citoplasmtica y periplasmtico del poro en las acuaporinas monomeras
ofrecen varias interacciones de residuos-pared de agua, principalmente con
grupos carbonilo despus de pasar estos primeros interacciones, zonas de
pared con diferentes caractersticas drophilic hidrfobo / hy determinan la
selectividad, velocidad de conduccin y el estado abierto / cerrado del poro. La
Figura 3 muestra un esquema la representacin de la regin del poro de bAQP1
(rea de malla que indica la ubicacin de las cuotas resi que recubre la pared
del poro relevante para la selectividad y las dos hlices medio que tienen como
dipolos por- [B y El con la carga positiva orientada hacia el centro del poro. En
rojo estn representados residuos hidroflicos que pueden establecer enlaces
con molculas de agua, mientras que en amarillo son los residuos hidrofbicos.
Desde el lado del micrfono exoplas- y en funcionamiento a lo largo del poro.
despus de pasar la primeras interacciones con los grupos carbonilo [no

shownl, la regin estrecha del poro es encontrado que el aromtico / R sitio de


constriccin ar / R) que contiene muy conservadas aromtico y arginina
residuos. En esta regin los estados contiguos cadenas de agua con enlaces de
hidrgeno son interrumpida alrededor del residuo de arginina. En bAQP1 se
forma la ar / R constriccin por fenilalanina / arginina con Arg197 y His182 la
creacin de la superficie hidrfila donde las interacciones polares de protenas
en agua ocurren, mientras que empuja Phe58 de distancia de la molcula de
agua. Adems, el sitio de la inhibicin de mercurio se encontr que era Cys191
en bucle E, justo antes de la regin ar / R donde los proyectos de grupo
sulfhidrilo dentro del poro [56, 57]. Ms abajo, en el medio del poro, las
molculas de agua se encuentran el segundo selectiva filtrado a medida que
pasan por alto los motivos duales NPA. En esta regin, la repulsin del agua por
el hidrfobo residuo Val178 que se entromete en el poro, fuerza a las molculas
de agua a interactuar fuertemente con Asn194 y Asn78 de los bucles de NPA.
Se ha sugerido que estos sirven como anclajes estructurales rgidos las
molculas de agua de peso para adquirir una orientacin especfica [20, 38].
En la regin NPA los dipolos de agua giran 180 debido al campo elctrico local
dominado por la macrodipoles de hlices B y E [51, 58]. Adems de los dos
filtros selectivos, la paredes de los poros presentes dos hidrfobo regiones justo
antes (Ile 193, Phe 24) y despus (Gly 74, Ala 75, Val81) el NPA, proveyendo
del poro con las superficies hidrfobas que previenen cualquier interaccin de
protena de agua. La figura 3B muestra una representacin superficial de la
regin de poro con sus caractersticas hidrfobas (amarillas) e hidrfilas (rojas).
La dinmica y energetics de infiltracin de agua por el poro fueron obtenidos
por simulaciones moleculares dinmicas [58] que mostr que la permeabilidad
de pleamar (3x109 las molculas del agua por seg. por monomer) es alcanzada
por el intercambio de Obligaciones de h entre molculas de agua de agua con
interaccin de poro de dique. Mientras en las molculas de agua de regiones
hidrfobas actan recprocamente el uno con el otro, en el ar/R y regiones NPA
estas interacciones son substituidas segn Obligaciones de h entre el agua y
los residuos de protena de la pared de poro. El coste enrgico de la ruptura de
Obligaciones de h de agua de agua totalmente es compensado por la
interaccin de residuo de agua. Por lo tanto, el ajuste fino de garantas de
interacciones de Obligaciones de h la permeabilidad de pleamar observada.