Los compuestos de amonio cuaternario denominados de segunda generacin
(cloruro de etilbencilo) y los de tercera generacin (mezcla de primera y
segunda generacin i.e. Cloruro de Benzalconio y el Cloruro de Alquil Dimetil Etil Bencil Amonio ) son compuestos que permanecen ms activos en presencia de agua dura. Su accin bactericida es atribuida a la inactivacin de enzimas, desnaturalizacin de protenas esenciales y la rotura de la membrana celular. Habitualmente son considerados como desinfectantes a concentraciones de 0.25% a 1.6% para la desinfeccin de superficies como suelos y paredes. Los cuaternarios de tercera generacin, tienen un incremento en la actividad biocida, mayor detergencia y un incremento en la resistencia bacteriana al uso constante de una sola molcula. Los cuaternarios de cuarta generacin d enominados "Twin or Dual Chain Quats" o cuaternarios de "cadena gemela", son productos cuaternarios con cadenas dialqulicas lineales y sin anillo bencnico, como: Cloruro de Didecil Dimetil Amonio o Cloruro de Dioctil Dimetil Amonio o Cloruro de Octil Decil Amonio, cada uno aislado. Estos cuaternarios son superiores en cuanto actividad germicida, son de baja espuma y tienen una alta tolerancia a las cargas de protena y al agua dura. Se recomiendan para desinfeccin en industria alimenticia y de bebidas, ya que se pueden aplicar por su baja toxicidad. La valoracin del poder antibacteriano de un desinfectante qumico puede efectuarse determinando su poder bacteriosttico o bactericida. El primero se obtiene mediante el coeficiente de inhibicin (CMI), es decir, determinando la concentracin mnima de dicha sustancia capaz de inhibir el crecimiento y reproduccin de una determinada bacteria. El poder bactericida o concentracin mnima bactericida (CMB) se determina calculando la cantidad mnima de dicha sustancia capaz de producir la muerte de una suspensin patrn en un tiempo determinado; si se trata de formas vegetativas, obtenemos el coeficiente letal mnimo y, si son bacterias esporuladas, el coeficiente letal mximo. El mtodo de difusin en agar, similar al disco-placa utilizado para los antibiogramas, es bueno si se estandarizan todos los parmetros; permite deducir la actividad bactericida a partir de los dimetros de inhibicin (desinfectograma). Existen tests cuantitativos especiales para la determinacin de la actividad fungicida, esporicida y viricida de los antispticos y desinfectantes.
Los tests de suspensiones se basan en aadir a la solucin del
desinfectante una determinada cantidad de bacterias y, despus de cierto tiempo preestablecido, sembrarlo en un medio para comprobar si hay o no crecimiento (mtodos cualitativos) o determinar el efecto bactericida mediante la expresin logartmica de la relacin entre el nmero inicial de bacterias y el de supervivientes (mtodos cuantitativos). Entre los primeros se encuentra el test de la Deutsche Gesellschaft fr Hygiene und Mikrobiologie (DGHM), en el que se aade al desinfectante un cultivo de bacterias estndar, determinando, despus de 2.5, 5, 15 y 30 minutos de contacto a temperatura ambiente, el crecimiento producido.