Clase 5

Regulacin de la expresin gnica

Expresin gnica
Proceso por el cual un gen ejerce sus efectos sobre una clula u organismo
al dirigir la sntesis de de una protena con una actividad caracterstica

Expresin gnica
Recordatorio

Tamao del ADN [2 metros]

Cada 3 bases: CODN => AA
Miles de genes en una hebra de ADN

todas las clulas tienen la misma informacin?

Expresin gnica

cmo sabe la clula que gen tiene que expresar y cuando?

Todos los tipos celulares (250) que conforman todos los

tejidos tienen el mismo genoma

de que depende que una clula exprese un gen u otro?

Seales externas: cambia la expresin de los genes

Enzimas que degradan o

sintetizan glucgeno

Expresin gnica
La regulacin puede ser en muchas etapas en la va ADN protenas

Expresin gnica
Control de la transcripcin

Regulacin pre-transcripcin
Relacin entre la estructura cromatnica y la transcripcin

Regulacin pre-transcripcin
Relacin entre la estructura cromatnica y la transcripcin
ACETILACIN de las histonas: reduce la carga neta positiva y debilita la unin al ADN
es dirigida directamente por activadores y represores

Regulacin pre-transcripcin
Relacin entre la estructura cromatnica y la transcripcin
FOSFORILACIN de residuos de Serina
METILACIN de residuos de lisina y Arginina
UBICUITINACIN de residuos de lisina

Regulacin pre-transcripcin
Relacin entre la estructura cromatnica y la transcripcin
cdigo de histonas afectan la estructura de la cromatina y proporcionan sitios
de unin a otras protenas reguladoras transcripcionales

Regulacin pre-transcripcin
Relacin entre la estructura cromatnica y la transcripcin
FACTORES REMODELADORES DEL NUCLEOSOMA
Alteran la organizacin o estructura de los nucleosomas SIN retirar ni modificar
covalentemente las histonas

Regulacin pre-transcripcin
Relacin entre la estructura cromatnica y la transcripcin
METILACIN DEL ADN (ADN metil transferasas)
Se adiciona un grupo metilo a residuos de Citocina
Inhibe la transcripcin de los genes metilados
Estabiliza y mantiene la inactivacin gnica durante el desarrollo

Control de la transcripcin

Interruptor = Secuencia de ADN regulador + reguladores de la transcripcin

Controlador

10 (procariontes)
10.000 (eucariontes)

Protenas especializadas

Regulacin transcripcional

Control de la transcripcin: MODELO CIS

Procariontes
Modelo del Opern

OPERADOR: controla el acceso de la ARN polimerasa al promotor

PROMOTOR: donde la ARN polimerasa reconoce el inicio de la
transcripcin
GEN REGULADOR: controla el tiempo y la velocidad de transcripcin
de otros genes
GENES ESTRUCTURALES: codifican las enzimas o protenas
estructurales

Control de la transcripcin - Procariontes

Modelo del Opern

Control de la transcripcin: MODELO CIS

Procariontes
ACTIVADORES
Estimulan la expresin

Control de la transcripcin: MODELO CIS

Procariontes
REPRESORES
Inhiben la expresin

Control de la transcripcin: MODELO CIS

Procariontes
Respuesta a cambios ambientales

Control de la transcripcin: MODELO CIS

Procariontes
Respuesta a cambios ambientales

Control de la transcripcin: MODELO CIS

Procariontes
Generalidades del operon lac
Genes que participan en la ruta metablica para degradar lactosa

Control de la transcripcin: MODELO CIS

Procariontes

Control de la transcripcin: MODELO TRANS

Eucariontes

Control de la transcripcin - Eucariontes

v control de la expresin a distancia: ACTIVADORES / AMPLIFICADORES
Modelo de bucles

Control de la transcripcin - Eucariontes

vReguladores de la transcripcin: REPRESORES

Control de la transcripcin Eucariontes

Control combinatorio:
varias protenas actan en conjunto para determinar la expresin de un gen

Control de la transcripcin Eucariontes

Control combinatorio:
Una nica protena puede controlar la expresin de diferentes genes

Expresin gnica
Control postranscripcin

Control postranscripcin - Eucariontes

Ocurren luego de que la ARN Polimerasa se ha unido al promotor
1.- Corte y empalme alternativo

Control postranscripcin - Eucariontes

Ocurren luego de que la ARN Polimerasa se ha unido al promotor
1.- Corte y empalme alternativo

Control postranscripcin
Ocurren luego de que la ARN Polimerasa se ha unido al promotor
2.- Ribointerruptores
Secuencias cortas de ARNm que se unen a metabolitos y cambia su conformacin
comn en bacterias

Control postranscripcin
Ocurren luego de que la ARN Polimerasa se ha unido al promotor
3.- mecanismos que regulan el inicio de la traduccin

Control postranscripcin
Ejemplos controlados por hierro

Control postranscripcin
Regulacin de la traduccin
CHAPERONAS: control del plegamiento

Control postranscripcin
Regulacin de la traduccin
ENZIMAS: control del plegamiento

Control postranscripcin
Regulacin de la traduccin
SECUENCIAS SEAL: protelisis

Control postranscripcin
Regulacin de la traduccin
GLICOSILACIN: adicin de oligosacridos en el RER y Golgi

Control postranscripcin
Regulacin de la traduccin
ANCLAJE DE LIPIDOS: retencin de protenas a la membrana plasmtica

Control postranscripcin
Regulacin de la funcin de las protenas
ALOSTRICA: unin de AA / nucletidos que inducen cambios en la
conformacin y actividad de las protenas

CMO SE CONTROLAN LAS PROTENAS

Regulacin por fosforilacin

CMO SE CONTROLAN LAS PROTENAS

Regulacin por GTP

Ejemplo
ARN transferencia

Control de la expresin gnica

Clase 5
Anlisis de genes y genoma

Manipulacin y anlisis del ADN

cmo se puede aislar y purificar un gen?

E. coli (bacteria): 4,6 millones de nucletidos

Manipulacin y anlisis del ADN

Tecnologa de ADN recombinante
1.
2.
3.
4.
5.

Rotura especfica del ADN [nucleasas de restriccin]

Secuenciacin de un fragmento purificado de ADN
Hibridacin de cidos nucleicos
Clonaje del ADN
Ingeniera gentica

Tecnologa de ADN recombinante

1.- Rotura especfica del ADN [nucleasas de restriccin]
2.- Secuenciacin de un fragmento purificado de ADN

Endonucleasas de restriccin

Enzimas aisladas de bacterias

Cortan la molcula de ADN en lugares discretos definidos por la

secuencia de nucletidos: fragmentos de restriccin

Generalmente reconocen secuencias de entre 4 y 8 nucletidos

Generan fragmentos con extremos cohesivos

Tecnologa de ADN recombinante

Endonucleasas de restriccin
Formacin de fragmentos cohesivos
Las secuencias de reconocimiento de las enzimas de restriccin son
palindromicas, es decir se leen de la misma manera en direccin 53,
como en direccin: 35

Tecnologa de ADN recombinante

Endonucleasas de restriccin
Ejemplos

Tecnologa de ADN recombinante

Mapas de restriccin
Conjunto de fragmentos de restriccin de una regin gnica
Muestra la localizacin de los puntos de corte en relacin con los puntos de
restriccin vecinos
Permiten comparar diferentes regiones de ADN sin tener que determinar la
secuencia de nucletidos

Tecnologa de ADN recombinante

Mapas de restriccin
Ejemplo ADN humano y de primates [genes que codifican la hemoglobina]

Tecnologa de ADN recombinante

Separacin de fragmentos: Electroforesis en gel
Permite la separacin de segmentos por migracin hacia el electrodo +
Cada nucletido tiene 1 sola carga negativa neta

Tecnologa de ADN recombinante

Separacin de fragmentos: Electroforesis en gel
Permite la separacin de segmentos por migracin hacia el electrodo +

Tecnologa de ADN recombinante

Separacin de fragmentos: Electroforesis en gel

Gel de Agarosa
ADN doble cadena
300-10.000 nucletidos
Ej. Fragmentos de restriccin de
virus

Gel de Poliacridamida
ADN cadena nica
10-500 nucletidos
Ej. Comparar fragmentos de
restriccin de diferentes individuos

Gel de Agarosa de campo pulsante

ADN doble cadena
220.000-2.500.000nucletidos
Ej. Cromosomas levaduras

Tecnologa de ADN recombinante

Separacin de fragmentos: Electroforesis en gel
Marcacin de los fragmentos de restriccin
Nucletidos marcados con P32 [radioactivo]

Tecnologa de ADN recombinante

Secuenciacin
Mtodo qumico Mtodo enzimtico

Tecnologa de ADN recombinante

Secuenciacin
Mtodo qumico Mtodo enzimtico

Tecnologa de ADN recombinante

Secuenciacin
Mtodo qumico Mtodo enzimtico
Actualmente en minutos se pueden obtener las secuencias exactas

Tecnologa de ADN recombinante

Secuenciacin
Lectura y localizacin de las secuencias

Tecnologa de ADN recombinante

Secuenciacin
cuntas protenas hay?

Tecnologa de ADN recombinante

3.- Hibridacin de cidos nucleicos

La tcnica se fundamenta en la capacidad de desnaturalizar y renaturalizar

el ADN

Permite hibridar ADN:ADN ARN-ADN ADN:ARN

Se utilizan SONDAS de ADN/ARN marcados

Tecnologa de ADN recombinante

3.- Hibridacin de cidos nucleicos
Mtodos de transferencia Northern (ARN) y Southern (ADN)

Tecnologa de ADN recombinante

3.- Hibridacin de cidos nucleicos
Permite localizar secuencias especficas en cromosomas o clulas

Tecnologa de ADN recombinante

4.- Clonacin de ADN
Permite obtener muchas copias de un determinado fragmento de ADN
Los fragmentos pueden unirse in vitro para formar molculas de ADN no
encontrados en la naturaleza
Se pueden insertar en el ADN bacteriano

Clonacin del ADN

Multiplicacin del ADN bacteriano obtencin de copias.

Tecnologa de ADN recombinante

4.- Clonacin de ADN
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
Amplificacin in vitro con una enzima termoestable purificada

Tecnologa de ADN recombinante

4.- Clonacin de ADN
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
Son ciclos de desnaturalizacin y polimerizacion

Tecnologa de ADN recombinante

4.- Clonacin de ADN / ARN

Tecnologa de ADN recombinante

5.- Ingeniera de ADN
Construccin de genotecas

Tecnologa de ADN recombinante

5.- Ingeniera de ADN
Deteccin de infecciones

Tecnologa de ADN recombinante

5.- Ingeniera de ADN
En medicina forense

Expresin de los genes clonados

Se insertan en organismos y se analiza la funcin de los genes

Se elimina el gen de un organismo y se ven las consecuencias

Utilizacin para generar animales y plantas transgnicas

Expresin de los genes clonados

Plantas transgnicas

Expresin de los genes clonados

Animales transgnicos

Dudas Preguntas - Comentarios