QUE ES

La espectroscopia de fluorescencia , tambin llamada espectrofotometra o

fluometra; es un tipo de espectroscopia electromagntica, la cual analiza la
fluorescencia de una muestra.
Esto involucra el uso de un haz de luz comnmente de luz ultravioleta, que
excita a los electrones en las molculas de ciertos compuestos tambin
llamados fluoruros sean capaces de absorber fotones de una cierta longitud de
onda, es decir, de un cierto color.
Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluormetros o
fluormetros, espectrofotmetro.
EN QUE CONSISTE:
Las molculas tienen diferentes estados llamados niveles de energa. La
espectrometra de fluorescencia se refiere principalmente a estados
vibracionales y electrnicos. En general, las especies objeto de examen
tendrn un estado electrnico basal (un estado de baja energa) de inters, y
un estado electrnico excitado de mayor energa. Dentro de cada uno de estos
estados electrnicos hay diferentes estados vibracionales.
La absorcin de luz ultravioleta por parte de los fluoruros, provoca que un
electrn de la molcula que est en su estado fundamental o basal, pase a un
estado excitado o de mayor energa. Las colisiones con otras molculas causan
a la molcula excitada la perdida de energa vibratoria hasta que alcanza el
menor estado vibratorio del estado electrnico excitado. Este proceso es a
menudo visualizado con el diagrama de Jablonski. donde la molcula luego
vuelve a declinar a uno de los varios niveles de vibracin del estado electrnico
fundamental emitiendo un fotn en el proceso, cuando dicho electrn vuelve al
estado fundamental, esa prdida de energa se traduce en la emisin de un
fotn de cierta longitud de onda (color), caracterstico de dicho fluorforo lo
que provoca que emitan luz de una menor energa, generalmente luz visible.
La fluorescencia es un proceso que ocurre en pocos nanosegundos, rango de
tiempo en el que ocurren muchos procesos a nivel molecular, y por ello es
sensible a los mismos. De esta manera, la fluorescencia aporta informacin
muy valiosa sobre estructura y dinmica a escala molecular del sistema que
estemos estudiando
TRIPTOFANO
En el caso de las protenas, estas macromolculas estn formadas por la unin
en cadena de muchos aminocidos, que seran como los eslabones a partir de
las que se construyen. Esta cadena es capaz de plegarse en una estructura
tridimensional o estado nativo, fundamental para poder ejercer su funcin
biolgica. Algunos de estos aminocidos son en si mismos fluorforos, como es
el caso del triptfano, tirosina y fenilalanina. La fluorescencia de las protenas
est generalmente dominada por la del triptfano

Ciertas caractersticas fisicoqumicas del ambiente alrededor del triptfano

condicionan el espectro de emisin del mismo, entendindose por espectro el
rango de longitudes de onda donde la molcula emite fluorescencia. De esta
forma, mediante la toma de este espectro se puede tener una idea de la
localizacin del triptfano y de cualquier cambio en la estructura de la protena
que afecte a la zona donde se encuentra.
A 295 nm, el espectro de emisin del triptfano es dominante sobre la
fluorescencia ms dbil de la tirosina y fenilalanina.
APLICACIONES
La espectrometra de fluorescencia se utiliza en anlisis bioqumicos, mdicos,
qumicos y de investigacin de compuestos orgnicos. Tambin se ha utilizado
para diferenciar los tumores malignos de piel de los benignos.La fluorescencia
tambin puede utilizarse para reorientar los fotones.