CONSULTA

Fundamento de la absorcin molecular de la radiacin electromagntica

por qu las sustancias presentan coloracin?
El color que percibimos por la luz es inmaterial, proveniente de los rayos del sol
o proyectores artificiales. Como referencia de luz se toma los rayos que
provienen del sol al medioda. Los colores que obtenemos por la
descomposicin de la luz solar o artificialmente, utilizando focos emisores de
luz de una determinada longitud de onda, se denominan colores aditivos.
En la retina del ojo humano existen tres clases diferentes de frecuencias
fotolumnicas que perciben las sensaciones del color. Los colores se perciben
porque los objetos tienen la propiedad de absorber determinada cantidad de
luz y rechazar otra.
El color que percibimos de un objeto es el rayo de luz que refleja. As, un objeto
es rojo porque absorbe los rayos azules y amarillos y rechaza los rojos y por
tanto, el procesamiento que hace nuestro cerebro para este tipo de rayos, es lo
que denominamos color rojo. Si los rayos absorbidos fueran rojos y rechazara
los azules y amarillos, el color que percibiramos sera el verde. Las superficies
que las vemos de color negras es porque absorben todos los rayos y, por lo
tanto no reflejan ninguno por lo que hay una ausencia de color. Los objetos
blancos reflejan todos los colores, o sea, los rechazan. Manteniendo las
premisas anteriores, si a un color-luz aadimos otro color-luz, la mezcla
resultante ha de darnos, forzosamente, un color-luz ms luminoso, ms claro.
(Ciclo Superior de Laboratorio de Diagnstico Clnico. Fundamentos y tcnicas
de anlisis bioqumico, 2012)

Definicin de Absorbancia y Transmitancia

Transmitancia.- es la relacin entre el poder de radiacin transmitido por una

muestra (P) y el poder de radiacin que incide sobre el blanco (Po), ambos
medidos en la misma posicin del espectro y en la misma rendija. Se supone
que el haz es de radiacin paralela y que incide sobre las superficies planas y
paralelas de la muestra, formando ngulos rectos. (Brunatti, 2013)

T=

P
Po

Absorbancia.- es el logaritmo en base 10 del recproco de la transmitancia T,

en el que el disolvente puro es el material de referencia. La absorbancia de un
medio aumenta cuando la atenuacin del haz se hace mayor. (Brunatti, 2013)

A=log

1
=logT
T

Diseo y funcionamiento del colormetro de Duboscq, fotmetro de filtro.

Colormetro de Duboscq.- La luz procedente de una fuente adecuada tal

como luz solar difusa o de una lmpara de tungsteno, se refleja en los cilindros
colorimtricos que contiene las disoluciones mediante un espejo. Los cilindros
estn montados de tal forma que se puedan mover verticalmente por medio de
un tornillo de cremallera. Los cilindros se elevan hasta que los mbolos se
sumerjan bien en la solucin. Uno de los cilindros se fija en una posicin
conveniente y el otro se sube o baja hasta que los colores en las dos mitades
del ocular sean equiparables. El espesor de cada solucin bajo el mbolo se lee
en la escala impresa en los acoplamientos del cilindro. Normalmente se halla
un promedio de varias medidas para hacer los clculos.

Fotmetro de filtro.- Los fotmetros constituyen una herramienta sencilla y

relativamente barata para realizar anlisis por absorcin. Los fotmetros de
filtros son, a menudo, ms convenientes, robustos y fciles de mantener y
utilizar que los espectrofotmetros ms sofisticados.
Adems, es caracterstico de los fotmetros su elevado rendimiento energtico,
y por ello, la buena relacin seal/ruido, incluso con detectores y circuitos
relativamente sencillos y baratos. Cuando el mtodo no requiere una alta
pureza espectral (como sucede con frecuencia) los anlisis cuantitativos se
pueden realizar con la misma exactitud.
Instrumento de haz sencillo.- formado por una lmpara de filamento de
wolframio, una lente para proporcionar un haz de luz paralelo, un filtro y una
clula fotovoltaica. La corriente producida se indica con un microampermetro
en cuya superficie lleva una escala lineal de 0 a 100. La medida del porcentaje
T supone un ajuste mecnico o elctrico de la aguja medidora mientras que el
obturador interrumpe el haz incidente. En algunos instrumentos, el ajuste para
obtener la respuesta correspondiente a la escala completa (100 por 100T)
cuando se sita al disolvente en la trayectoria de la luz, necesita cambiar el
potencial aplicado a la lmpara. En otros, se modifica el tamao de apertura de
un diafragma situado en la trayectoria de la luz. Como la seal de la clula
fotovoltaica es lineal respecto a la potencia de la radiacin que recibe, la
lectura de la escala, cuando es la muestra la que se encuentra en la trayectoria
de la luz, ser el porcentaje de transmitancia, es decir, el porcentaje de la
escala total.
Para obtener directamente el valor de la absorbancia de la disolucin se
sustituye esta escala por otra logartmica.
Instrumento de doble haz.- Aqu, el haz de luz se divide mediante un espejo
semiplateado que transmite aproximadamente el 50 por 100 de la radiacin
que incide sobre l y refleja el otro 50 por 100. Un haz pasa a travs de la
muestra y de all se dirige a la clula fotovoltaica; el otro pasa a travs del
disolvente y se dirige a un detector similar. Las seales de salida elctrica de
las clulas fotovoltaicas pasan a travs de resistencias variables, una de ellas
est calibrada como una escala de transmitancia en unidades lineales de 0 a

100. Entre las dos resistencias se conecta un medidor de corriente sensible que
sirve como detector nulo. Cuando la diferencia de potencial entre AB es igual a
aqulla entre CD, no pasa corriente a travs del detector nulo; bajo cualquier
otra circunstancia se indica una corriente. Al principio, el contacto izquierdo se
ajusta a 0 por 100 T, el obturador se cierra y el indicador del detector nulo se
lleva a cero mecnicamente. En estas condiciones la marca central
corresponde a cero de corriente. A continuacin se coloca el disolvente en las
dos cubetas, y el contacto A se ajusta a 100 (ajuste del 100 por 100 T); con el
obturador abierto, se ajusta el contacto C hasta que se obtenga corriente cero.
Al reemplazar el disolvente de una de las cubetas por la muestra se observa un
descenso en la potencia radiante que llega a la fotoclula de trabajo y el
correspondiente descenso en el potencial de salida; el galvanmetro seala
una corriente. La prdida del equilibrio se compensa moviendo A hacia un valor
inferior. Alcanzado de nuevo el equilibrio, el porcentaje de transmitancia se lee
directamente en la escala. (Martnez, 2014)

Mtodos de medicin de la absorcin de la radiacin:

Los mtodos de operar es colorimetra y espectrofotometra se basan en la
comparacin de una muestra desconocida con sustancias patrones.
a) Mtodo de las series patrn.- Se prepara una serie de disoluciones
patrn del constituyente que se analiza; la concentracin de las
soluciones difiere en una cantidad adecuada. Se desarrolla el color de la
muestra desconocida del mismo modo que en las disoluciones patrn y
la desconocida se compara con los patrones. Esta comparacin puede
ser por:
- Comparacin Directa.- la muestra y las soluciones patrn se colocan en
tubos de iguales caractersticas y el analizador es el ojo humano.
-

Comparacin indirecta.- el color se mide como absorbancia o

transmitancia usando algn tipo de fototransformador, se elabora una
curva de calibracin, y mediante regresin lineal encontramos la
concentracin de la muestra. (Martnez, 2014)

b) Mtodo de compensacin.- El mtodo de compensacin es utilizado

en el colormetro de Duboscq, la exactitud es del orden del 2 al 5%
aunque depende de muchos factores. La muestra desconocida, que debe
contener el reactivo necesario para el desarrollo del color, se coloca en
un tubo o cilindro que posee la base transparente. Una disolucin patrn
de la misma sustancia y con el color desarrollado de igual modo, se
coloca en un segundo tubo o cilindro, idntico al anterior. La profundidad
(espesor, camino ptico) de la disolucin patrn se fija en un valor
conveniente y la profundidad de la disolucin desconocida se vara hasta
que la luz situada bajo los tubos se observe, mirando desde arriba con
idntica intensidad (transmisin). Al ser la misma sustancia la que est

presente en los tubos que contienen la disolucin patrn y la

desconocida, la absortividad molar es la misma para ambas. Las
transmitancias observadas son idnticas, porque hay el mismo nmero
de partculas absorbentes en el camino ptico. Conociendo la
concentracin de la solucin patrn, y se mide la distancia del camino
ptico para la muestra y calculamos la concentracin de la misma:
(Martnez, 2014)

c 1=c 2 b2 /b1

Bibliografa
-

Ciclo Superior de Laboratorio de Diagnstico Clnico. Fundamentos y

tcnicas de anlisis bioqumico. (2012). Recuperado el 2 de Mayo de
2016, de Tcnicas espectromtricas:
https://docs.google.com/document/d/1IStRYXgU2LMyemg7GI0enZuSYGqecjBfocWL_LfYeI/edit

Brunatti, I. C. (2013). Introduccin a la Espectroscopa de Absorcin.

Recuperado el 2 de Junio de 2015, de
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf

Martnez, J. (Junio de 2014). Recuperado el 2 de 6 de 2015, de Practica 5

Fotocolorimetria: https://www.scribd.com/doc/248420593/Practica-5Fotocolorimetria#download