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BACTERIANO
Fundamentos del control de los microorganismos
Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir
la transmisin de enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y
evitar la contaminacin tanto en procesos industriales que requieran
cultivos puros, como en laboratorios de diagnstico o investigacin.
Trminos importantes al hablar del control de microorganismos
Esterilizacin es el efecto de destruir toda forma de vida (un objeto
esterilizado es aquel que no posee ninguna forma de vida, ni siquiera
esporas)
Agente antimicrobial es un compuesto por lo general qumico que
mata o interfiere con el crecimiento y actividad de los microoganismos.
Se clasifica de acuerdo a su aplicacin y a como acta.
1. El germicida es un agente qumico que mata los microorganismos
pero no necesariamente las esporas (ejemplo el bactericida, mata
bacterias, el fungicida, mata hongos y el viricida mata los virus).
2. El agente microbiosttico es uno que inhibe el crecimiento de los
microoganismos, pero no los mata (ejemplo los agentes
bacteriostticos, inhiben crecimiento bacterial).
3. El desinfectante es un compuesto que mata microorganismos, pero
no necesariamente las esporas. Se aplica sobre objetos inanimados.
4. El antisptico es parecido al desinfectante, pero ste se puede aplicar
sobre tejido biolgico (cuerpo).
Condiciones que influyen en la accin microbiana
Hay ciertos factores que tienen que ser considerados a la hora de aplicar
agentes qumicos o fsicos para el control de microorganismos.
Concentracin del agente qumico Mientras ms concentrado est el
agente qumico, ms rpido se destruirn los organismos.
Intensidad del agente fsico Cuanto ms intenso es el agente fsico
(calor o radiacin ) ms rpidamente mata a los micoorganismos.
Tiempo de exposicin A mayor tiempo de exposicin, mayor es el
nmero de organismos destruidos.
Temperatura A mayor temperatura se acelera la destruccin de los
organismos.
Nmero de organismos Mientras mayor sea el nmero de
microorganismos, ms tiempo se requiere para destruirlos.
Clase de organismo Las clulas vegetativas (las que estn
metabolicamente activas) son ms suceptibles que la esporas
bacteriales.
Estado fisiolgico de las clulas Mientras ms viejas sean las
clulas, ms rpido se destruyen.
2. Incineracin La
incineracin
de
materiales
destruye
los
microoganismos. Se usa para esterilizar las agujas de inocular y otros
materiales, adems es una forma de destruir cadveres.
Contrario al calor, las temperaturas bajas o el fro no desnaturalizan las
protenas. Las bajas temperaturas hacen que la reproduccin de los
microoganismos se detenga, pero no las mata. Se dice que las
temperaturas bajas son microbiostticas, mientras que las temperaturas
altas son microbicidas.
Desecacin
La falta de agua detiene los procesos vitales en los microorganimos, por
lo cual el crecimeinto se detiene. La desecacin se logra evaporando el
agua presente para lo cual se usa aire caliente. La preservacin de
alimentos por secado an se utiliza. Esta tcnica tiene un efecto
microbiosttico, pues detiene el crecimiento bacterial, pero no mata los
organismos. De hecho los microoganismos pueden preservase por
secado. Cuando se seca junto con congelacin el proceso se llama
liofilizacin.
Presin osmtica
La pared celular de las bacterias las protege de cambios en la presin
osmtica del medio, pero si la presin osmtica externa es mucha, el
organismo puede morir; esto sucede si las concentraciones de solutos en
el medio en que crece el organismo son extremos. Altas concentraciones
de sal interrumpen los procesos de transporte a travs de la membrana
y desnaturalizan las protenas.
Radiacin
Ciertas formas de radiacin pueden matar los microorganismos.
1. Radiacin ionizante Los rayos X y gamma tienen un gran poder de
penetracin y matan los microorganismos formando iones txicos. Estos
iones afectan toda la bioqumica de la clula. Las esporas bacteriales
son ms resistentes a los diferentes tipos de radiacin.
2. Luz ultravioleta (UV) La luz UV no tiene poder de penetracin, por lo
que es til para matar microorganismos en las superficies. Las
radiaciones de luz UV ms germicidas son las de largo de onda de 260
nm. El principal modo de accin de la luz UV es la formacin de dmeros
de timina en la molcula de DNA. La luz UV se utiliza para: esterilizar
salas de hospitales, para el mantenimiento de cuartos aspticos para el
envasado de medicinas en la industria farmacutica y para el
Acidos
Hay una serie de cidos orgnicos que se usan como conservantes en
muchos alimentos como el cido actico, cido benzoico, cido lctico,
cido propinico y cido srbico. El cido baja el pH y esto desnaturaliza
las protenas. No matan las esporas.
Control de Microorganismos
JUEVES, 24 DE MAYO DE 2007
animales. Es por esto que el ser humano ha buscado los procedimientos necesarios
para destruir o controlar el crecimiento de los microorganismos perjudiciales.
DEFINICIONES IMPORTANTES:
- Muerte microbiana: Prdida irreversible de la capacidad de reproducirse.
- Esterilizacin: Proveniente del latn sterilis incapaz de reproducirse. Proceso por el
cual las clulas vivas, esporas viables, virus y viroides destruidos o eliminados de un
objeto o hbitat.
- Desinfeccin: Destruccin, eliminacin o inhibicin de los microorganismos que
pueden producir enfermedad de una superficie u objeto. Se mantienen viables las
esporas.
- Germicida: Terminacin _cida del latn que significa destruir. Es un agente que
puede destruir microorganismos patgenos y muchos no patgenos pero no
necesariamente esporas. (Bactericida, fungicida, viricida)
- Terminacin _statico: proveniente del griego statikos que causa detencin, agente
con capacidad de inhibir el crecimiento microbiano, pero sin matarlos. (Bacteriosttico,
fungisttico)
Condiciones que influyen en la eficacia de un antimicrobiano:
La destruccin de los microorganismos y la inhibicin del crecimiento no es un proceso
simple, debido a que la eficacia de un agente antimicrobiano es afectada por 6
factores:
1. Tamao de la poblacin: Debido a que la muerte es exponencial, una poblacin
muy grande requiere de mayor tiempo.
2. Composicin de la poblacin: la eficiencia del antimicrobiano vara
considerablemente con respecto a la naturaleza de los organismos que son tratados
porque su susceptibilidad es distinta. Por ejemplo: las endosporas bacterianas son ms
resistentes que las clulas vegetativas, las clulas jvenes mueren con mayor facilidad
y algunas especies soportan mejor condiciones adversas.
3. Concentracin o intensidad del agente antimicrobiano: A menudo, pero no
siempre, entre mayor sea la concentracin del agente qumico o ms intenso agente
fsico, ms rpidamente se destruyen los microorganismos. Pero generalmente la
eficiencia no est relacionada con la concentracin o intensidad. (alcohol)
4. Tiempo de exposicin: cuanto ms tiempo se exponga una poblacin a un
determinado agente, ms organismos se destruirn.
5. Temperatura: A menudo, un aumento en la temperatura aumenta la actividad de
un agente qumico.
6. Entorno: la poblacin que se quiere destruir no se encuentra aislada, est rodeada
de diversos factores ambientales que pueden protegerla o facilitar su destruccin. Por
ejemplo: el calor es ms efectivo en un medio cido, la materia orgnica les da
proteccin contra el calor y los desinfectantes qumicos.
El indicador biolgico consiste en una ampolla estril con un medio y un papel cubierto
con esporas de Bacillus stearothermophilus o Clostridium. Luego de la esterilizacin se
rompe la ampolla y se incuba por unos das. El indicador qumico consiste en una cinta
especial con letras o lneas que cambian de color despus del tratamiento suficiente
con calor.
b. Pasteurizacin: Se utiliza para sustancias o medios que no pueden ser calentadas
a ms de su temperatura de ebullicin.
Un calentamiento breve a 55 o 60C destruir los microorganismos patgenos y
disminuye los causantes de la descomposicin de la sustancia. NO esteriliza.
Existen variaciones que son utilizadas en la industria de la leche: la pasteurizacin
rpida (HTST high temperature short-term) que consiste en calentar a 72C por 15
segundos. Y la pasteurizacin a temperatura ultra elevada (UTH ultrahigh temperature)
que calienta a 140-150C por 1 a 3 segundos.
e. Incineracin: Destruye por completo los microorganismos. (calentar las asas en los
mecheros).
f. Temperaturas bajas: Refrigeracin y congelacin, son nicamente bacteriostticos.
En general, el metabolismo de las bacterias est inhibido a temperaturas por debajo de
0 C. Sin embargo estas temperaturas no matan a los microorganismos sino que
pueden conservarlos durante largos perodos de tiempo.
Esta circunstancia es aprovechada tambin por los microbilogos para conservar los
microorganismos indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan
congelados a -70 C o incluso mejor en tanques de nitrgeno lquido a -196 C.
g. Desecacin: Es de efecto bacteriosttico y las esporas permanecen viables.
FILTRACIN: es utilizada para materiales termosensibles.
a. Filtros de profundidad: Se utilizan materiales fibrosos o granulados que forman
una capa gruesa con canales de dimetro muy pequeo. La solucin es aspirada al
vaco y los microorganismos quedan retenidos o son adsorbidos por el material. Se
utilizan diatomeas, porcelana no vidriada, asbestos.
b. Filtros de membrana: Son circulares con un grosor de 0.1 mm y con poros muy
pequeos, de unos 2 m por lo que los microorganismos no pueden atravesarlo. Se
fabrican de acetato de celulosa, policarbonato, fluoruro de polivinilo u otros materiales
sintticos.
RADIACIN:
a. Ultravioleta: Es letal para todas las clases de microorganismos por su longitud de
onda corta y su alta energa. Es letal a 260 nm ya que es la longitud de onda que es
ms efectivamente absorbida por el ADN.
El mecanismo primario del dao al ADN es la formacin de dmeros de timina lo que
inhibe su funcin y replicacin. Son escasamente penetrantes y se utilizan para
superficies.
b. Ionizante: Niveles bajos pueden producir mutaciones e indirectamente resultar en
la muerte, niveles altos son letales. Especficamente causan una serie de cambios en
las clulas: ruptura de puentes de hidrgeno, oxidacin de dobles enlaces, destruccin
de anillos, polimerizacin de algunas molculas, generacin de radicales libres.
La mayor causa de muerte es la destruccin del ADN. Es excelente esterilizante y con
penetracin profunda en distintos materiales, por lo que se utilizan para esterilizar
materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas desechables, sondas, etc.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen
alteraciones de los componentes.
MTODOS QUMICOS:
Condiciones ideales para un agente antimicrobiano qumico:
- No txico para el ser humano, animales ni medio ambiente
- Actividad antimicrobiana
- No debe de reaccionar con la materia orgnica o corroer
- Estable y homogneo
Modo de accin:
- Los antibiticos ms selectivos son aquellos que interfieren con la sntesis de la pared
bacteriana. (penicilinas, vancomicina, bacitracina, cefalosporinas).
- Pueden inhibir la sntesis proteica al unirse al ribosoma procaritico. (estreptomicina,
gentamicina, cloranfenicol, eritromicina)
- Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos, inhibiendo la ADN girasa, interfiriendo
con la replicacin, transcripcin o traduccin, bloqueando la sntesis de ARN, etc.
(ciprofloxacina, quinolonas, rifampicina)
- Dao en la membrana plasmtica unindose a ella para daar su estructura y alterar
su permeabilidad. (polimixina B)
- Algunas drogas antimicrobianas pueden actuar como antimetabolitos: bloquean las
vas metablicas por competicin inhibitoria. Compiten por los metabolitos.
Determinacin del nivel de actividad antimicrobiana:
Existen diversos mtodos para determinar la actividad de los agentes antimicrobianos,
entre ellos tenemos:
Test de susceptibilidad por dilucin:
Se utiliza para determinar la CMI y la CLM. Es un mtodo de dilucin en caldo, en donde
se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente
diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que sostendr el desarrollo del
microorganismo. El caldo ms comnmente usado para estas pruebas es el de MuellerHinton suplementado con los cationes magnesio y calcio.
Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como control negativo de crecimiento. Luego
de la incubacin adecuada (usualmente de un da para el otro) se observa la turbidez
de los tubos que indicar desarrollo bacteriano. El microorganismo crecer en el tubo
control y en todos los otros que no contengan suficiente agente antirnicrobiano como
para inhibir su desarrollo. La concentracin de antibitico que presente ausencia de
crecimiento, detectada por falta de turbidez (igualando al control negativo), se designa
como la CMI. Para medir la CLM se debe realizar la prueba de actividad bactericida, que
emplea el mismo sistema de dilucin en caldo que para medir la sensibilidad.
Una vez determinada la CMI, se siembra una cantidad conocida de inculo de cada uno
de los tubos de caldo que no presentaban turbidez en placas de agar (la pequea
cantidad del agente antimicrobiano que es llevada junto con el inculo se elimina por
dilucin en el agar), y el nmero de colonias que crece en estos subcultivos, despus
de incubar durante la noche, se compara con el nmero de UFC/ml del cultivo original.
Dado que incluso las drogas bactericidas no siempre esterilizan totalmente una
Mtodo de E-test:
Se trata de una tcnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura directa
de CMI en g/ml, ya que se emplean tiras plsticas impregnadas en concentraciones
crecientes de antibitico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.
El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira
del antibitico (o antibiticos) a ensayar. Tras la incubacin de 16-24 horas a 35C se
observan las placas y se valora la zona de inbicin, de forma elptica, alrededor de
cada tira. La CMI se lee directamente observando el punto ms bajo de la elipse que
presente crecimiento.
Pruebas automatizadas:
La mayora de estos novedosos mtodos utilizan sistemas de microdilucin en medio
Control De Microorganismos
Control de Microorganismos
Aunque muchos microorganismos son benficos y necesarios para el bienestar
humano, las actividades microbianas pueden tener consecuencias indeseables como la
putrefaccin de alimentos y el desarrollo de enfermedades, en consecuencia es
fundamental poder destruir o inhibir los microorganismos para minimizar sus efectos
dainos.
Trminos Utilizados en el control de Microorganismo:
Esterilizacin:
Proceso mediante el cual son destruidas o eliminadas todas las formas de vida
microscpicas de un objeto o hbitat.
Desinfeccin:
Saneamiento:
Antisepsia:
Control IN vivo: