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No caso das infeces virais agudas, quando se deseja detectar elementos da partcula viral,
as amostras destinadas ao exame devem ser colhidas precocemente, antes que o vrus deixe
de ser liberado. Alm disso, os anticorpos produzidos em resposta a infeco podem bloquear
a deteco do vrus. De modo geral, os espcimes clnicos de quadros respiratrios devem ser
colhidos nos primeiros dias aps o incio dos sintomas. Nas infeces intestinais, onde a
excreo de vrus pelas fezes em geral mais prolongada, a coleta pode ser feita nas trs
semanas que se seguem ao aparecimento da diarria.
As amostras dos vrus da herpes simples (HHV1) e da varicelazoster (HHV3) devem ser
isoladas, a partir das leses, antes de se completarem cinco dias do incio dos
sintomas.Quanto menor o tempo entre a coleta da amostra e seu envio ao laboratrio, maiores
as chances de isolamento dos vrus. Os vrus podem ser cultivados em cultura celulares, ovos
embrionados e animais experimentais. Na tabela 1 esto listados alguns exemplos de
materiais comumente analisados em laboratrios.
Purificao de Partculas Virais
Depois de concentrados, os vrus podem ser separados do material do hospedeiro por meio de
centrifugao diferencial, centrifugao com gradiente de densidade, cromatografia em coluna
ou eletroforese. Podese tambm utilizar antisoros especficos para remover partculas virais
do material do hospedeiro.
Tabela 1 Materiais analisados em laboratrios
Local de retirada
do material
Trato respiratrio
Trato
gastrintestinal
Reovirus,
Rotavirus,
Norwalk virus e Calcivirus
Exantema
maculopapular
Exantema
vesicular
Adenovirus e HHV5
Liquidos
de
vesiculas,
raspados ou swabs
Sistema nervoso
central (meningite
assptica e
encefalite)
Trato urinrio
Sangue
Arbovirus
Enterovirus (Picornavirus)
Vrus da Raiva
Coxsackievirus, Ecovirus, HHV1
Vrus da Rubola e Vrus do Sarampo
HIV, Vrus da Leucemia de clulas T
humana e Vrus da hepatite B, C e D.
Lquido cefalorraquidiano
Fezes
Tecido, saliva. Bipsia cerebral
Lquido cefaloraquidiano
Urina
Sangue
Havendo partculas virais suficientes, a microscopia eletrnica pode ser usada em laboratrios
clnicos, embora no seja uma tcnica padro. Tem sido utilizada tambm para localizar
antgenos virais em culturas celulares (microscopia imunoeletrnica), empregando anticorpos
marcados por substncias de alta opacidade aos eltrons. A ferritina foi a primeira substncia a
ser utilizada por possuir devidas qualidades de opacidade e no alterar a atividade imunolgica
das globulinas. Sua aplicao virologia humana permite a identificao, em culturas
celulares, de poliovrus, adenovrus, vrus da influenza A e B, herpesvrus, vrus da caxumba e
parainfluenza. Outras substncias tambm podem ser utilizadas, como os metais pesados e
algumas enzimas (peroxidase e fosfatase cida).
2. Testes Sorolgicos
o mtodo mais utilizado no diagnstico virolgico, mas seus resultados apenas so aceitos
quando se baseiam em ttulos de IgG no soro convalescente, os quais devem ser, pelo menos,
quatro vezes superiores aos ttulos dos soros da fase aguda da doena. Podese tambm
recorrer pesquisa de anticorpos de classe IgM, que normalmente esto presentes em
infeces recentes.
2.2. Teste de Fixao do Complemento (FC)
Esse teste pesquisa anticorpos com base no seu reconhecimento e ligao ao vrus. O HAI
usado para identificao de vrus que podem aglutinar seletivamente eritrcitos de diversas
espcies animais. Podese determinar a identidade do vrus ou dos anticorpos no soro de um
paciente por inibio especfica dessa hemaglutinao.
Assim como o HAI, o teste de neutralizao pode ser utilizado na pesquisa de anticorpos com
base em seu reconhecimento e ligao ao vrus. O revestimento do vrus por anticorpos
bloqueia sua ligao as clulas indicadoras. A neutralizao envolve a inibio, pelo anticorpo,
da infeco e dos efeitos citopatolgicos do vrus em clulas de cultura e de tecidos.
Uma resposta de neutralizao por anticorpos especfica para o vrus e a cepa, sendo
frequentemente desenvolvida com o incio dos sintomas e persistindo por longos perodos.
Algumas das desvantagens dessa reao so o tempo prolongado para se obter os resultados,
as reaes cruzadas existentes entre vrus antigenicamente relacionados, e a necessidade de
grande nmero de culturas celulares para proceder titulao dos soros a testar, uma vez que
deve ser feita em duplicata ou triplicata.
2.5. Hemadsoro (HAD)
Tcnicas
Patgenos Usualmente Identificados
Microscopia eletronica e Poliovirus, Parainfluenza, Vrus Respiratrio Sincicial, Vrus do
imunoeletromicroscopia
herpes simples.
Imunofluorescencia
Ensaio imunoenzimtico
Radioimunoensaio
Rotavirus
A tcnica utiliza antgeno imobilizado em uma superfcie plstica, prolas ou filtro para capturar
e separar o anticorpo especfico de outros anticorpos no soro do paciente. Um anticorpo
humano covalentemente ligado a uma enzima (por exemplo, peroxidase, fosfatase alcalina)
detecta anticorpo do paciente que se ligou ao antgeno. Esta reao quantificada no
espectrofotmetro de acordo com a intensidade da cor produzida pela ao da enzima sobre o
substrato apropriado. As diversas variaes do ELISA nos mecanismos de captura ou
deteco do antgeno.
3. Tcnicas Moleculares
3.1. Reao em Cadeia de Polimerase (PCR)
um mtodo que vem sendo bastante utilizado j que permite uma identificao precisa do
organismo em estudo, atravs da elucidao de seu genoma. Entretanto, sua utilizao no
muito difundida, uma vez que os custos da tcnica so altos e so necessrios profissionais
qualificados.
Referncias Bibliogrficas
KONEMAN, Elmer W. Diagnstico microbiolgico: texto e atlas colorido. 6. ed. Rio de Janeiro.
Editora Guanabara Koogan. 2008.
MURRAY, Patrick R ROSENTHAL, Ken S PFALLER, Michael A. Microbiologia mdica. 6. ed.
Rio de Janeiro. Edotira Elsevier. 2008.
TRABULSI, Luiz Rachid ALTERTHUM, Flvio. Microbiologia. 5 ed. So Paulo. Editora:
Atheneu. 2008.