AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE

GRAU
UNIVERSIDAD NACIONAL DE
PIURA
FACULTAD DE INGENIERA
INDUSTRIAL
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA
AGROINDUSTRIAL E INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS
DEPARTAMENTO DE AGROINDUSTRIA E
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
CURSO:
TEMA:

TOXICOLOGA DE ALIMENTOS
CARCINOGNESIS

ALUMNOS:

DIEGO ABRAHAM SANDOVAL TOCTO

DOCENTE:

MSC. NELLY LUZ LEYVA POVIS

FECHA:

11 DE MAYO DEL 2016

PIURA PERU
2016

1
CARCINOGENESIS

CARCINOGNESIS

Es el proceso por el cual una clula normal se convierte en una clula

cancerosa. Se caracteriza por la progresin de varios cambios celulares a nivel
del material gentico que finalmente desemboca en la reprogramacin de la
clula provocando que se reproduzca de manera descontrolada, formando de
esta forma masa maligna.
Proceso por el cual una clula adquiere la capacidad de multiplicarse
incontroladamente, llegando a invadir otros rganos del cuerpo. Este proceso
de transformacin de una clula normal en una clula cancergena puede durar
aos. Se produce una alteracin en los genes de la clula, en su ADN.
Las clulas tienen mecanismos para reparar el dao provocado en su ADN.
Cuando estos mecanismos fallan por una mutacin o por la presencia de
agentes cancergenos, puede producirse el cncer.
Se llama carcingeno al referirse a cualquier factor que favorece la aparicin o
la agravacin de una enfermedad cancerosa. Puede tratarse de un agente
qumico o radiolgico (rayos X), un factor de riesgo (de carcter familiar), una
exposicin a ciertos agentes como parte de una prctica profesional... Hay una
amplia variedad de factores carcingenos. Sin embargo, es importante
distinguir los factores externos (como los productos qumicos) de los factores
internos como los fenmenos hereditarios, las alteraciones y los desarreglos en
el seno del organismo.
La capacidad de un agente de producir una neoplasia se denomina
carcinognesis. En el proceso de transformacin progresiva de las clulas
normales en clulas malignas, se produce la adquisicin de autonoma por las
mismas, lo que es un reflejo de una regulacin y expresin anormal de su
carga gnica. Como consecuencia final se induce una neoplasia (crecimiento
autnomo de un tejido o de una parte de las clulas del mismo).
Este proceso puede ser resultado de eventos endgenos como errores en la
replicacin del ADN, la inestabilidad intrnseca de ciertas bases del ADN o el
ataque de radicales libres generados durante el metabolismo celular. Tambin
puede ser resultado de procesos exgenos como radiaciones ionizantes,
radiaciones ultravioletas (UV) y carcingenos qumicos. Aunque las clulas
tienen mecanismos para reparar las alteraciones producidas, a veces hay
errores en dichos mecanismos y los cambios introducidos en el genoma
permanecen. Durante esta transformacin hay una serie de procesos en los
que se alteran los genes implicados en el funcionamiento normal de la clula,
responsables de mantener el equilibrio entre la proliferacin y la muerte celular.
2
CARCINOGENESIS

El resultado consiste en la activacin de estos genes, estimulando la

proliferacin o la proteccin contra la muerte celular (oncogenes) y en la
inactivacin de genes que normalmente actuaran inhibiendo la proliferacin
(genes supresores de tumor). Finalmente, una vez superados los controles de
nacimiento y muerte celular el proceso de malignidad de la clula se "fija"
cuando sta es capaz de inmortalizarse y de obtener suficiente cantidad de
oxgeno y nutrientes para mantener su elevado rango de proliferacin. La clula
maligna formar una nueva poblacin de clulas genticamente diferentes a la
original, constituyendo el tumor.
Mientras que el trmino neoplasia implica crecimiento celular descontrolado, ya
sea clnicamente benigno o maligno, el trmino tumor describe lesiones
ocupantes de espacio ya sean o no neoplasias. Por contra el trmino cncer se
utiliza, generalmente, para definir neoplasias malignas. En este tema vamos a
considerar especialmente la carcinogenicidad inducida por sustancias
qumicas, haciendo especial mencin a la carcinognesis hormonal, ya que los
principios generales de la carcinognesis qumica son aplicables a cualquier
proceso carcinognico, sea cual sea su etiologa, siendo la etiologa hormonal
la ms vinculada a la patologa oncolgica del aparato reproductor femenino.

La divisin celular es un proceso fisiolgico que ocurre en casi todos los tejidos
y bajo diversas circunstancias. Bajo circunstancias normales, el balance entre
la proliferacin y la muerte celular programada, usualmente por medio del
mecanismo de apoptosis se mantiene estrechamente regulado asegurando de
esta forma la integridad de rganos y tejidos. Las mutaciones en el ADN que
pueden conducir a una transformacin cancerosa interfieren con este proceso
de control interfiriendo con el programa que lo controla.

El proceso de carcinognesis es causado por estas mutaciones en el material

gentico de las clulas normales, que alteran el balance normal entre
proliferacin y muerte celular. Como resultado se produce una divisin celular
descontrolada y un proceso evolutivo de estas clulas por medio de seleccin
natural dentro del organismo. La reproduccin rpida y descontrolada de
clulas pueden producir tumores benignos y algunos tipos de estos tumores
pueden convertirse en malignos que es lo que se conoce como cncer. Los
tumores benignos no se esparcen a lugares lejanos del organismo ni invaden
otros tejidos, y por lo general no representan una amenaza para la vida a
menos que compriman estructuras vitales o tengan alguna actividad fisiolgica
(por ejemplo, que sean capaces de producir alguna hormona). Los tumores
malignos son capaces de invadir otros rganos, esparcirse a lugares distantes
3
CARCINOGENESIS

(proceso conocido como metstasis) y convertirse en una amenaza para la

vida.

Para que una clula normal cambie su fenotipo y se convierta en una clula
neoplsica, se requieren varias mutaciones en varios genes y eso ocurre a
travs de mucho tiempo, a veces de aos, de estar expuesto a un agente
carcinogentico.

El cncer comienza en una clula, es decir que es de origen monoclonal. Esa

clula alterada, escapa a los controles que anteriormente habamos
mencionado y se vuelve anrquica, iniciando una generacin de ms clulas
anrquicas, que a su vez pueden inducir a cambios similares, en las clulas
vecinas. Pero no slo afectan a la clula las mutaciones inducidas por los
carcingenos, sino que a lo largo de cada divisin celular (recordemos que
pueden llegar a 50 divisiones) se producen errores espontneos en cada
duplicacin y los mismos se van acumulando constituyendo un factor intrnseco
de riesgo; aqu vale la pena sealar, que los radicales libres, son productos
normales del metabolismo celular pero un exceso de los mismos, pueden
acarrear efectos genotxicos por lo que toma vigencia el valor de los
suplementos dietarios con antioxidantes.

La mutacin gentica conduce a la modificacin de los productos que

codificara el gen normal y en la va de la carcinognesis darn origen
a:

A) Los cnceres heredables por mutaciones en uno o ambos alelos de

las clulas germinales
El anlisis citogentico ha permitido individualizar algunos genes cuyas
mutaciones han demostrado ser de predisposicin familiar.
B) Los cnceres espordicos, donde las alteraciones genticas
dependen de los mutgenos ambientales (virus, radiaciones o
substancias qumicas)
En la predisposicin no heredable, la mutacin de algunos genes,
conduce a consecuencias metablicas que podra significar una ruta
hacia la carcinognesis. El 80% de los cnceres espordicos, se deben
a exposicin ambiental, esto sustentado por la gran cantidad de
carcingenos qumicos existentes y los distintos tipos de cnceres que
promueven. Por ejemplo: el cigarrillo predispone al cncer de pulmn y
4
CARCINOGENESIS

de vejiga; las aminas aromticas al cncer de vejiga; la aflatoxina al

cncer de hgado; el benceno a las leucemias. Los carcingenos
qumicos pueden actuar como inhibidores o activadores de enzimas que
a su vez podran facilitar la accin de esos carcingenos en el dao
genmico y activar algunos oncogenes. En la dieta diaria se ingieren
diferentes txicos y mutgenos y los organismos han desarrollado un
sistema de adaptacin relacionado a su capacidad individual de
detoxificacin.

Cabe sealar que existen dos mecanismos por los cuales los genes
pueden alterarse:
A) GENTICO: Donde se producen alteraciones estructurales del
genoma por cambios en la disposicin de los propios genes o de sus
bases, como ser las mutaciones, translocaciones o deleciones,
B) EPIGENTICO: En acciones moleculares por alteraciones de las
enzimas o de los sustratos de las mismas, tal el caso de la metilacin de
las
bases.
Este
mecanismo
generalmente
compromete
simultneamente los dos alelos y la hipometilacin conduce a la mayor
expresin de los genes, por lo tanto, una mayor cantidad de la enzima
metiltransferasa que inhibe la metilacin, puede conducir a la mayor
expresin de oncogenes. Esta enzima se encuentra elevada en los
tejidos tumorales. Para una mejor comprensin de los mecanismos
epigenticos deben tenerse en cuenta tres enzimas que juegan un rol
importante en la susceptibilidad al cncer: Citocromo p 450 monooxigenasa; Glutatin- transferasa y Acetil-transferasa. No nos
referiremos a sus acciones moleculares, considerando que ese aspecto
escapa a la intencin genrica de este trabajo.

MECANISMOS MOLECULARES DE DEFENSA

La clula expuesta a tantos factores que pueden daar el genoma,
cuenta sin embargo con mecanismos de defensa, de los cuales
dependen la normal replicacin celular.
Las protenas anticiclinas que enlentecen el ciclo celular y dan tiempo a
actuar a los mecanismos reparadores del genoma.
Las protenas del complejo NER (nucleotide-excisin-repair) tambin
denominadas MMR (mismatch repair genes) que localizan los sectores
daados, devanan la hlice, excluyen el segmento de ADN afectado e
incorporan las secuencias correctas.

5
CARCINOGENESIS

El acortamiento fisiolgico de los telmeros. Los telmeros, son

secuencias del genoma que se encuentran en los extremos de los
cromosomas y no se ha constatado hasta ahora, que codifiquen seales
de proliferacin. Impiden la prdida y alteracin espontnea de las
secuencias de ADN y al mismo tiempo son marcadores del
envejecimiento celular, puesto que se van acortando con cada divisin y
llega un punto que ellos mismos inducen el suicidio de la clula.
Cuando los telmeros son repuestos por accin de una telomerasa , no
llega ese final conveniente para el porvenir del clon, de ah, que la
presencia de telomerasas, constituya un signo desfavorable. Las
telomerasas se sobreexpresan en los tejidos neoplsicos.
Sin embargo, esta enzima puede estar aumentada tambin en clulas
normales que requieren reproduccin activa til, como son las
germinales y algunas hematopoyticas.

EVOLUCIN DEL CANCER

Galeno consideraba que el cncer apareca a consecuencia de un
desequilibrio entre los humores, acumulacin de bilis negra, tumor,
estado de melancolia.
Theodor boveri en (1914): reconoci que el defecto fundamental del
cncer resida en el material gentico de la clula cromosomas.
En la actualidad se considera al cncer como una enfermedad gentica
que se produce por alteracin de los genes celulares.
El desarrollo de un tumor requiere interacciones entre: Factores
exgenos y factores endgenosSnabick 1974 demostr que la carcinognesis poda dividirse en 2
etapas: iniciacin y promocin.
Actualmente se acepta una tercera etapa: Progresin tumoral.

LA CARCINOGNESIS CONSTA DE TRES ETAPAS:

La carcinognesis consta de tres etapas: iniciacin, promocin y progresin. La
ltima de estas etapas, progresin, es exclusiva de la transformacin maligna e
implica la capacidad de invadir tejidos vecinos o a distancia. Para que se lleve
a cabo el proceso metastsico, se requiere de una serie de mecanismos:
angiognesis, degradacin de matrices, migracin celular, evasin de la
respuesta inmune del hospedero y colonizacin metastsica.
6
CARCINOGENESIS

1. INICIACIN
Ocurre a nivel del genoma y las alteraciones pueden darse en los
tumores benignos y malignos al igual que la segunda etapa, pero la
tercera, o sea la de progresin, es exclusiva de la transformacin
maligna.
Los agentes que actan en la primera etapa pueden ser: Fsicos
Qumicos o Virales.

Los carcingenos fsicos

Estn constituidos por las radiaciones que daan, ionizando las
bases, deprimen el gen de la protena p53, pueden estimular
citoquinas como la IL 1 y 6, que actan como verdaderos factores de
crecimiento, facilitan la formacin de radicales libres y pueden
lesionar el gen que codifica para el Complejo Mayor de
Histocompatibilidad (CMH) el cual se encuentra en el Cr 6. Las
fuentes radiantes pueden surgir de la metodologa diagnstica o
teraputica como as tambin por exposicin a los rayos solares en
forma persistente o por emanaciones de radn de los suelos.

Los carcingenos qumicos

Tienen como blanco preferencial al nitrgeno de la guanina
(alquilantes,
aminas
aromticas,
nitrosaminas
y
grasas
poliinsaturadas) produciendo mutaciones irreversibles. La aflatoxina
(aislada de alimentos contaminados con un tipo de hongo) se
considera oncognica para la clula heptica. Se atribuyen afectos
genotxicos a los compuestos policlorados contenidos en insecticidas
y plaguicidas, as como tambin productos de la manufactura de
materiales elctricos y plsticos formando parte de los contaminantes
ambientales, que llegan a los seres vivos a travs del aire, del agua y
de los alimentos.

Los carcingenos virales

Actan introduciendo sus propias oncoproteinas al genoma de la
clula afectada con lo que la misma cambiar su cdigo normal, por
el que le imponen los oncogenes virales. Tal es el caso del papiloma
virus humano, del Epstein Bar y de las hepatitis B y C. Los
oncogenes virales se ubican generalmente en las proximidades de
proto-oncogenes o de oncogenes supresores, activando a los
primeros y desactivando a los segundos.
7

CARCINOGENESIS

Representacin esquemtica de la evolucin espontnea de

un cncer estndar

2. LA PROMOCIN
Representa la etapa de crecimiento tisular con la formacin del tumor.
Participan: los factores de crecimiento y los receptores a los factores de
crecimiento, como as tambin la angiognesis y degradacin de las
matrices extracelulares.
Los factores de crecimiento (FC)
Son pptidos producidos por las mismas clulas o por las vecinas y
actan como facilitadores de la mitosis incorporando en fase S, a
algunas clulas que se encuentran en fase G0 o G1 prolongada.
Los FC se sintetizan en una clula y luego migran al espacio
intercelular, ejerciendo sus acciones sobre las clulas vecinas. Los
primeros FC descubiertos fueron el de crecimiento neuronal ( NGF) y
el epidrmico (EGF), a los que se sumaron muchos ms, entre ellos
el derivado de plaquetas( PDGF) ,el de hepatocitos (HGF), el de
crecimiento de fibroblastos (FGF) el estimulante de crecimiento de
colonias, el simil insulina IGF-1).
Algunas hormonas ejercen acciones similares a stos factres
peptdicos una vez que fueron captadas por los receptores de
membrana o intracitoplasmticos. Es reconocido el efecto
proliferativo de los estrgenos sobre los epitelios mamarios y del
tracto
genital;
las
gonadotrofinas
hipofisarias,
estimulan
8
CARCINOGENESIS

especialmente al epitelio ovrico; la prolactina ejerce su accin en el

mbito de la mama y tambin del ovario; la insulina de origen
pancretico y el factor smil insulina, de origen heptico, son
verdaderos factores de crecimiento.
Merece un comentario aparte la accin de los estrgenos, tan
vinculados a cnceres hormono dependientes y su uso como terapia
hormonal de reemplazo, a originadas controversias al respecto.
a) estimulan algunos proto-oncogenes como el FOS
b) estimulan la accin de otros factores de crecimiento (FC) y los
receptores para FC.
c) Facilitan la sntesis y liberacin de prolactina
d) Estimulan la sntesis de receptores de PG
e) Aumentan el AMP cclico que participa en la transduccin de
seales activando la replicacin celular.
f) Eleva los niveles de ciclinas (especialmente la E) posiblemente por
mecanismos indirectos.(va estimulacin de proto-oncogenes por el
AMPc responsive elements)

Los receptores de membrana

Son compuestos gluco-proteicos, que se unen a los factores de
crecimiento y transmiten los mensajes proliferativos por intermedio de
sus conexiones transmembrana. Algunas veces, la sobreexpresin
de stos receptores los hace autoinducibles es decir, que se
encuentran en accin permanente an en ausencia del factor de
crecimiento.
Algunas citocinas, que son productos de distintos tipos de clulas,
pueden ejercer efectos modulatorios o inhibitorios de la proliferacin;
tal es el caso del factor TGF beta, del interfern y del TNF o factor de
necrosis tumoral que antagonizan a los factores de crecimiento.

3. LA PROGRESIN
9
CARCINOGENESIS

Implica la capacidad de invadir tejidos vecinos o a distancia, por parte de

la clula tumoral maligna. Esa capacidad est codificada tambin en los
genes de la misma con modificaciones estructurales y funcionales.(29)
Las clulas normales, se encuentran ancladas en un habitat que le es
propio. El contacto con las clulas vecinas controla su propia divisin
celular y existen molculas de adhesin que las mantienen prximas y
permiten la transmisin de seales de una a otra; las clulas normales
son incapaces de atravesar la membrana basal que las separa del tejido
conjuntivo sub-basal de donde obtiene los materiales que la nutren;
tampoco tienen capacidad de introducirse a los capilares sanguneos o
linfticos, aunque los linfocitos, hacen excepcin a esta particularidad.

En algunas ocasiones tras estas primeras etapas en el proceso

carcinognico es posible objetivar lesiones tisulares (evidenciables
microscpicamente)
denominadas
precancerosas
(situaciones
patolgicas que, de manera estadsticamente significativa, preceden o
favorecen la aparicin de procesos tumorales).

TIPOS DE CARCINGENOS

10
CARCINOGENESIS

Los agentes con capacidad carcinogentica se clasifican atendiendo a que

acten o no a afectando al ADN celular, diferencindose entre agentes
genotxicos y no genotxicos o epigenticos.
1. Carcingenos genotxico
Algunos agentes carcingenos, en especial los agentes iniciadores y
progresores se caracterizan por su capacidad de alterar la estructura
del ADN y/o de los cromosomas. Estos efectos genotxicos inducen
directamente la aparicin de clulas neoplsicas (transformadas o
malignas). Tales efectos genotxicos podramos sumarizarlos en
mutaciones, formacin de aductos y aberraciones cromosmicas. Sin
embargo, en la mayor parte de los casos, la accin carcingena de
estos agentes consiste en un aumento del potencial oxidativo de las
clulas lo cual resulta en modificaciones en el ADN (oxidacin del
ADN) o formacin de uniones covalentes de los agentes o sus
metabolitos a las cadenas de ADN (aductos). En la accin de este
tipo de sustancias juega un papel fundamental el metabolismo
celular, a travs del cual se produce la biotransformacin de
sustancias en principio inocuas a compuestos (generalmente
reactivos) que presentan capacidad genotxica y que son llamados
(carcingenos finales). En todo caso, la accin de un agente
carcinognico debe acompaarse, para que sta sea efectiva, de un
disbalance en los mecanismos de reparacin de ADN.
1.1 Carcingenos endgenos
Los mecanismos implicados en la carcinognesis endgena son:
oxidacin por especies reactivas del oxgeno, reduccin con
antioxidantes, reaccin con radicales libres e inhibicin en la
reparacin de la oxidacin del ADN. Los carcingenos
endgenos son especies reactivas del oxgeno. Las ms
importantes son los radicales hidroxilo (OH) y el oxgeno singlete
(O2), destacando tambin el anin superxido (O2), perxido de
hidrgeno (H2O2), especies peroxiladas (RO2) y especies
alkoxiladas (RO). Las especies reactivas del oxgeno se
producen a partir de las reacciones celulares como la respiracin
celular (transporte electrnico mitocondrial), procesos de sntesis
y degradacin del metabolismo (metabolismo del cido
araquidnico, $-oxidacin de los cidos grasos de alto peso
molecular, oxidacin de aminocidos, sntesis del cido
ascrbico, oxidacin de poliaminas, esteroidognesis, oxidacin
de purinas), biotransformacin de xenobiticos (transporte
electrnico microsomal, oxidacin peroxidativa, funciones de las
oxidasas) y activacin de clulas fagocticas (leucocitos
perifricos, macrfagos, clulas de Kupffer del hgado y clulas
Clara del pulmn).
11
CARCINOGENESIS

1.2 Carcingenos exgenos

Los carcingenos exgenos son aquellos que incrementan la
oxidacin del ADN como, por ejemplo, agentes de proliferacin
de peroxisomas, benceno, arsnico, estradiol, nitrosaminas,
bromuro de potasio, radiaciones ultravioletas (UVA y UVB) e
ionizantes (rayos X). Muchas sustancias inorgnicas,
particularmente hierro, cromo, cobalto (II) y sales de nquel en
presencia de H2O2 producen la oxidacin de las bases del ADN.
Por otro lado, la exposicin a la polucin de los ambientes
urbanos produce tambin altos niveles de ADN oxidado. La
exposicin a altos niveles de agentes contaminantes como el
ozono, materia particulada, aldehdos, metales y xidos de
nitrgeno incrementa tambin los niveles de 8-oxo-dG. La luz
UVB (290-320 nm) produce mutaciones en el ADN y como
consecuencia tumores de piel. La luz UVA (320-400 nm) es
menos carcingena y produce mayormente oxidacin del ADN
mediante la activacin fotodinmica de especies reactivas del
oxgeno. Hay compuestos qumicos que pueden ser afectados
por la radiacin UV y producir la oxidacin del ADN,
principalmente mediante la generacin de especies reactivas del
oxgeno. Por ejemplo, el azul de metileno produce oxgeno
singlete en presencia de UV. El oxgeno singlete formado
reacciona con residuos de guanina producindose 8-oxo-dG.
Otro
ejemplo
son
ciertos
antibiticos
(tetraciclina,
fluoroquinolonas) con capacidad fototxica.

2. Carcingenos no genotxicos o epigenticos

Son aquellos compuestos qumicos que actan por mecanismos que
no incluyen la modificacin directa del ADN, dando lugar finalmente a
clulas genticamente inestables (tumor). Estos agentes parece ser
que modulan el crecimiento y la muerte celular. En general, estos
compuestos actan modificando la fisiologa normal de rganos y
sistemas especficos producindose una sobreestimulacin persistente
cuyo resultado es una replicacin celular intensificada (alteracin del
ciclo celular con efecto mitognico). Esto puede dar lugar a un
incremento de mutaciones espontneas y de las probabilidades de
alterar el ADN tanto por factores endgenos como exgenos antes de
que haya posibilidad de reparacin. Normalmente se trata de
compuestos exgenos, aunque en determinadas circunstancias
compuestos endgenos (hormonas) podran considerarse como
carcingenos epigenticos. La accin carcingena de los compuestos
puede tener diferentes mecanismos pero todos ellos comparten las
siguientes caractersticas principales:
12
CARCINOGENESIS

Especificidad
Los compuestos epigenticos, al contrario que los genotxicos,
pueden ser ms especficos en su capacidad de inducir
carcinognesis ya que frecuentemente inducen la formacin de
tumores en una especie animal, un sexo determinado y en la mayor
parte de los casos en uno o varios rganos determinados dentro de
una especie. Esta especificidad puede ser explicada por diferencias
fisiolgicas, metablicas y de sensibilidad inter especies.

Existencia de un umbral en el desarrollo del tumor

En la mayora de los casos el efecto carcingeno se produce
solamente cuando se administran altas dosis de los compuestos por
lo que la carcinognesis no aparecer hasta que se alcance un
determinado umbral. Segn estos datos, se pueden construir curvas
de dosis-respuesta para correlacionar qu dosis son perjudiciales. El
anlisis de esta curvas dosis- respuestas son de especial utilidad
para determinar a qu niveles de un compuesto determinado no se
produce efecto adverso y cuales constituyen factores de riesgo para
el desarrollo del tumor en humanos.

Reversibilidad
Los carcingenos epigenticos actan generalmente como
promotores del tumor cuando son administrados continua y
prolongadamente. Los efectos producidos pueden revertir
parcialmente cuando se interrumpe la administracin del compuesto.

Citotoxicidad
Los agentes epigenticos son citotxicos, produciendo un perjuicio
crnico en las clulas que resulta en un aumento en la proliferacin
celular. Este incremento en la proliferacin celular puede ser
responsable del desarrollo neoplsico, ya que el ADN es cada vez
ms sensible a mutaciones a lo largo de sucesivas divisiones
celulares. Por otro lado, la modificacin producida en el ADN ya sea
de forma endgena o exgena tiene posibilidades muy altas de
convertirse en mutaciones heredables puesto que las posibilidades
de reparacin disminuyen.

En general, los agentes epigenticos se pueden considerar como

promotores en la expansin de clulas espontneamente iniciadas. Algunos
de estos agentes qumicos son el benceno, cloroformo, tricloroetileno,
furfural, metapirileno, lindano y bifenilos policlorinados. Un ejemplo clsico
de carcinognesis epigentica es la aparicin de hepatomas o
hepatocarcinomas inducidos en modelos animales y en humanos tras la
exposicin prolongada a estrgenos (hepatocarcinognesis).

CLASIFICACIN DE LOS CARCINGENOS

13
CARCINOGENESIS

Desde hace ya muchos aos, los estudios de toxicidad de cualquier

sustancia qumica incluyen la evaluacin del riesgo de carcinogenicidad. La
necesidad de este tipo de pruebas descansa tanto en razones cientficas
como en razones legales y reglamentarias. La lista de sustancias qumicas
(derivados industriales, plaguicidas, herbicidas, insecticidas, aditivos
alimentarios, drogas cosmticas, sustancias originadas en la naturaleza)
que por exposicin accidental, mdica, ocupacional o industrial suponen un
riesgo de carcinognesis es muy numerosa.
La evidencia ms relevante para asegurar que cualquier sustancia qumica
supone un riesgo de carcinogenicidad para el hombre deriva de los estudios
epidemiolgicos realizados en la especie humana, pero la asuncin de
riesgos que supondra el uso indiscriminado de nuevas sustancias qumicas
sin unos previos estudios del potencial carcinognico de esas sustancias no
podra ser socialmente aceptable. A pesar de los importantes avances en el
desarrollo de pruebas para detectar precozmente la actividad carcinognica
sin necesidad de tener que recurrir al concurso de seres vivos complejos,
que, exigen estudios largos, pesados y muy costosos, una parte importante
de los estudios debe realizarse todava en animales porque, tal como
seala la Organizacin Mundial de la Salud, la nica prueba definitiva de
actividad carcinognica contina siendo el desarrollo de un tumor
histolgicamente evidenciable en un animal. De todos modos, no se puede
afirmar con precisin absoluta que una sustancia que ha sido comprobada
como carcinognica en animales lo vaya a ser tambin en los humanos; sin
embargo, en la mayora de los casos, los carcingenos comprobados en los
humanos tambin lo son al menos en una especie animal y, a menudo, en
varias. En este sentido, se puede asegurar que existe una clara correlacin
positiva entre las observaciones realizadas en el hombre y los ndices de
carcinogenicidad en los animales, que, adems, a menudo han precedido a
las observaciones humanas. Por ello, la observacin de carcinogenicidad de
una determinada sustancia en una especie animal debera, al menos, ser
interpretada como una seal de atencin para estudiar la adopcin de
medidas preventivas.
La utilizacin de los animales en la evaluacin de la carcinogenicidad de las
sustancias qumicas resulta obligatoria ya que la misma clasificacin de las
sustancias carcinognicas, se basa, entre otros criterios, en la existencia o
no de suficiente evidencia de carcinogenicidad en animales. A este respecto
no citaremos aqu ms que la que probablemente es la de mayor prestigio
internacional actualmente, la de la Agencia Internacional para la
Investigacin sobre el Cncer (International Agency for Research on
Cancer, IARC) (En la siguiente tabla), en la que (aunque domina el criterio
de las pruebas en humana) la existencia de pruebas en los animales
permite ubicar (con carcter habitual, ocasional o excepcional) a las
sustancias en los distintos grupos de riesgo carcinognico.

Clasificacin de las sustancias qumicas cancergenas (IARC)

14
CARCINOGENESIS

INVESTIGACIONES CIENTFICAS
15
CARCINOGENESIS

 MONOGRAFAS DE LA IARC EVALAN EL CONSUMO DE LA CARNE

ROJA Y DE LA CARNE PROCESADA
Carne roja
Despus de una revisin exhaustiva de la literatura cientfica acumulada, un
Grupo de Trabajo de 22 expertos de 10 pases, convocados por el
Programa de Monografas de la IARC, clasific el consumo de carne roja
como probablemente carcingeno para los humanos (Grupo 2A), basado en
evidencia limitada de que el consumo de carne roja causa cncer en los
humanos y fuerte evidencia mecanicista apoyando un efecto carcingeno.
Esta asociacin se observ principalmente con el cncer colorrectal, pero
tambin se han visto asociaciones con el cncer de pncreas y el cncer de
prstata.
Carne procesada
La carne procesada se clasific como carcingena para los humanos
(Grupo1), basada en evidencia suficiente en humanos de que el consumo
de carne procesada causa cncer colorrectal.
Consumo de la carne y sus efectos
El consumo de la carne vara mucho entre los pases, desde un pequeo
porcentaje hasta un 100% de las personas que comen carne roja,
dependiendo del pas, y proporciones algo ms bajas en el consumo de
carnes procesadas.
Los expertos concluyeron que cada porcin de 50 gramos de carne
procesada consumida diariamente aumenta el riesgo de cncer colorrectal
en un 18%.
Para un individuo, el riesgo de desarrollar cncer colorrectal por su
consumo de carne procesada sigue siendo pequeo, pero este riesgo
aumenta con la cantidad de carne consumida, dijo el doctor Kurt Straif, Jefe
del Programa de Monografas de la IARC. En vista del gran nmero de
personas que consumen carne procesada, el impacto global sobre la
incidencia del cncer es de importancia para la salud pblica, aadi.
El Grupo de Trabajo de la IARC consider ms de 800 estudios que
investigaron asociaciones para ms de una docena de tipos de cncer con
el consumo de carne roja y de carne procesada en muchos pases y
poblaciones con dietas diversas. La evidencia ms influyente provino de
grandes estudios de cohorte prospectivos realizados en los ltimos 20 aos.
16
CARCINOGENESIS

Salud Pblica
Estos hallazgos apoyan an ms las actuales recomendaciones de salud
pblica acerca de limitar el consumo de carne, dijo el doctor Christopher
Wild, director de la IARC. "Al mismo tiempo, la carne roja tiene un valor
nutricional. Por lo tanto, estos resultados son importantes para permitir a los
gobiernos y a las agencias reguladoras internacionales realizar
evaluaciones de riesgo, a fin de balancear los riesgos y beneficios de
consumir carne roja y carne procesada, y poder brindar las mejores
recomendaciones dietticas posibles, indic.

PAPEL PROTECTOR DE P53 EN EL CNCER DE PIEL: LOS ESTUDIOS

DE CARCINOGNESIS EN RATONES QUE CARECEN DE P53
EPIDRMICA
p53 es una protena que causa la detencin del ciclo celular, apoptosis o
senescencia, siendo crucial en el proceso de supresin de tumores en
varios tipos de clulas. Diferente in vitro modelos animales y han sido
diseados para el estudio de la funcin de p53 en el cncer de piel. Estos
modelos han revelado resultados opuestos, ya que en algunos parmetros
experimentales, parece que p53 protege contra el cncer de piel, pero en
otros, surge la conclusin opuesta. Hemos generado cohortes de ratones
con delecin p53 eficiente restringidas a epitelios estratificados y de control
de los compaeros de camada que expresan p53 de tipo salvaje y
estudiado su sensibilidad tanto a la transformacin tumoral qumicamente
inducida y espontnea, as como el tumor tipos originaron en cada grupo
experimental. Nuestros resultados indican que la ausencia de p53 en el
epitelio estratificado conduce a la aparicin, en dos etapas experimentos de
carcinognesis de la piel, de un mayor nmero de tumores que crecen ms
rpido y se vuelven malignas ms frecuentes que los tumores surgido en
ratones con genotipo de tipo salvaje p53.Adems, la diversidad histolgico
del tipo de tumor es mayor en ratones con prdida epidrmica p53, lo que
indica el papel de supresin tumoral de p53 en diferentes tipos de clulas
de la epidermis. Los ratones con envejecimiento inactivacin de p53 en el
epitelio estratificado desarrollaron carcinomas espontneos en la piel y otros
epitelios. En general, estos resultados ponen de manifiesto la naturaleza
verdaderamente protectora de las funciones p53 en el desarrollo del cncer
en la piel y en otros epitelios estratificados.

INTRODUCCIN

El gen que codifica la protena p53 tumor celular, TP53 , es el gen ms

frecuentemente mutado en los cnceres humanos, siendo alterado en
17
CARCINOGENESIS

aproximadamente el 50% de los tumores malignos. p53 es un factor de

transcripcin capaz de interactuar tanto con el ADN, la regulacin de la
expresin de un gran nmero de genes diana, y con numerosas protenas,
mutuamente la modificacin de su actividad. p53 se encuentra
generalmente en niveles muy bajos en las clulas, pero se acumula en caso
de dao gentico. p53 promueve mltiples funciones de las clulas
asociadas a la supresin de tumores, como la detencin del ciclo celular, la
apoptosis y senescencia celular, siendo fundamental en la prevencin de la
divisin de las clulas que han sufrido daos en el ADN; para todas estas
funciones, p53 ha sido apodado como "guardin del genoma". p53 tambin
se opone a la formacin de tumores mediante la regulacin de mecanismos
adicionales, como ratones modificados genticamente que expresa una
forma mutante de p53 incapaz de detencin del ciclo celular directa, la
apoptosis y la senescencia no sufren de formacin temprana tumor
inicio. Entre estos mecanismos adicionales de la prevencin del cncer
mediados por p53 son la regulacin de la estabilidad del ADN, el
metabolismo celular, la autofagia, el vstago de mantenimiento celular y la
metstasis . La actividad preventiva del cncer de p53 tambin podra estar
mediada por otras vas; por ejemplo, se ha demostrado que la rapamicina,
un conocido inhibidor de la va de mTOR, disminuye el nmero de tumores
se origin en p53 - / - o p53 +/- ratones , lo que sugiere un papel causal de
la inhibicin de mTOR en la prevencin del tumor. Como p53 induce la
expresin de varios reguladores negativos de la va de mTOR, parte del
efecto antitumoral de p53 podra estar mediada por mTOR regulacin a la
baja.
A pesar de los intensos estudios realizados en los ltimos 35 aos, estamos
muy lejos de tener un conocimiento preciso de las funciones de p53. La
comprensin completa de las funciones de p53 se ve obstaculizada por la
multiplicidad y complejidad de los procesos biolgicos que regula. As,
adems de su papel en el cncer, p53 est implicado en el aclaramiento de
las clulas apoptticas y la prevencin de las enfermedades autoinmunes,
as como en el desarrollo embrionario, lo que resulta tanto su inactivacin y
su hiperactivacin en defectos de desarrollo. Otra fuente de complejidad
viene del hecho de que algunas funciones de tipo salvaje (wt) o mutantes de
p53 no son igualmente reguladas en diferentes tejidos o tipos de clulas.
Adems, hay ms de diez isoformas de transcritos de la TP53 gen, con
diferencias importantes en la localizacin subcelular y la actividad biolgica
entre ellos, y apenas conocidos relaciones de regulacin de cruz. Son
ilustrativos de esta complejidad es el reciente descubrimiento de una
isoforma de p53 con un papel sorprendente en la promocin de
metstasis. As se requieren nuevos estudios y modelos experimentales
para profundizar en la comprensin de las funciones p53 en la fisiologa
celular y la transformacin tumoral.
18
CARCINOGENESIS

La mutacin de p53 puede resultar en cncer de los efectos asociados a la

prdida de sus funciones normales o por la adquisicin de nuevas
capacidades de transformacin, en calidad de un mutante dominante
negativo de la p53 de tipo salvaje o como de buena fe oncogn con
potencial de transformacin. La presencia y el tipo de mutaciones de p53 en
tumores son clnicamente importantes, como versiones mutadas de p53
puede modificar en gran medida la respuesta a terapias.
Muchos modelos animales han sido desarrollados para el estudio de la
p53. Ratones knockout que carecen de p53 mueren a una edad temprana y
se desarrollan una serie de tumores espontneos, principalmente linfomas y
sarcomas, con distinta frecuencia en funcin de los antecedentes genticos.
Ms recientemente, despus de la generacin de p53 floxed (fl) ratones,
una gran cantidad de estudios se han realizado mediante el uso de modelos
animales con la inactivacin de p53 restringido a tipos celulares
especficos. Transgnicos (Tg) modelos de ratn que llevan diferentes
formas mutantes de p53, solo o en asociacin con mutaciones en otros
genes, tambin han hecho que la informacin pertinente sobre el papel de
p53 en la transformacin tumoral en diferentes tipos de cncer.
El cncer de piel es la lesin oncognica humano ms abundante,
y TP53 es a menudo mutado en pacientes con cncer de piel. Diferentes
espectros de TP53 mutaciones se han encontrado en diferentes tipos de
tumores de la piel (es decir, carcinoma de clulas basales (BCC), carcinoma
de clulas escamosas (SCC), y melanoma).
Los datos de la literatura indican que p53 coopera con una gran cantidad de
insultos oncognicas, tales como la activacin de Ras, la inactivacin Rb, la
prdida de alpha v integrina o Snail sobreexpresin, en el desarrollo de
carcinomas de piel. De hecho, un nmero de experimentos llevados a cabo
en diferentes modelos experimentales indican un papel supresor de tumor
de p53 en cncer de piel. As p53 ratones nulos son propensos al desarrollo
de los CE de la piel despus de la radiacin de luz UV , y un requisito para
la prdida de p53 para la conversin maligna de tumores de la piel se ha
descrito, incluso en el contexto de diversos otros insultos oncognicos
genticos. Adems, los ratones que carecen de p53 en la epidermis
desarrollan tumores espontneos en la piel; Curiosamente, la piel y los
tumores que carecen de p53 mostraron mayor inestabilidad cromosmica
que aquellos con p53 en peso de fondo. En un modelo de cncer diferente
(es decir, los queratinocitos de ratn injertadas en ratones desnudos), con el
objetivo de estudiar la cooperacin de la prdida de p53 y v-ras Ha de
iniciacin mediada, el tumor se originaron indicaron un aumento en el
crecimiento y la malignidad en la ausencia de uno o dos alelos de p53. En
19
CARCINOGENESIS

conjunto, estos resultados parecen demostrar un papel protector de p53 en

la carcinognesis de la piel y malignizacin.
Pero tambin hay informes que indican un papel protumoral parecer
discrepante de p53 en la carcinognesis de piel. As experimentos de dos
etapas de la piel de carcinognesis muestran que los ratones nulos p53
desarrollan menos y de la piel ms pequea tumores de p53 ratones de tipo
salvaje, lo que indica que la presencia de p53 en clulas de la piel provoca
la aparicin de ms tumores, a diferencia con los resultados encontrado en
las clulas epiteliales del intestino y otros tipos de clulas. Otros parmetros
experimentales tambin han dado lugar a la idea de un papel oncognico de
p53 en el cncer de piel; lo que la prdida de p53 se opone a la formacin
de tumores en ratones transgnicos que sobreexpresan oncogenes
activados o factores de crecimiento, como v-ras Ha , v-fos o TGFa humano
en epidermis. En resumen, existen algunas discrepancias sobre el papel
especfico de p53 en el cncer de piel, lo que podra estar relacionado con
la estimacin inexacta de la inactivacin de p53 en los experimentos con
cre-mediada por el tejido especfico de p53 a cabo ronda, a las diferencias
entre los experimentos sobre la influencia gentica fondo de los modelos
animales o a diferencias en el estado de p53 en las clulas drmicas y la
posible existencia de clulas efectos no autnomas de p53.
Teniendo en cuenta el papel protector generalmente aceptada de p53 en la
carcinognesis, nuestra hiptesis es que p53 en los queratinocitos ausencia
causar tanto espontnea y la carcinognesis inducida qumicamente. En
este trabajo, hemos generado ratones que carecen de p53 especficamente
en los queratinocitos (p53 EKO ratones) y hemos evaluado la eficacia de
esta supresin.Entonces, tratamos de dilucidar el papel de p53 en el cncer
de piel epidrmica mediante el estudio de carcinognesis de piel de dos
etapas, tanto espontnea e inducida qumicamente en ratones de
antecedentes genticos homognea. Se concluye que la p53 en los
queratinocitos epidrmicos verdaderamente protege contra la promocin
tumoral, la progresin y malignidad en la piel, tanto en qumicamente
inducida y en la carcinognesis espontnea, actuando as como una buena
fe gen supresor de tumor, de acuerdo con el papel generalmente admitida
de p53 en otra tipos de clulas

RESULTADOS Y DISCUSIN
La inactivacin de p53 eficaz en la piel de p53

fl / fl

; Ratn K14-Cre

Todas las clulas de la epidermis se derivan de las clulas epidrmicas

basales expresan la queratina K14. Por lo tanto, se espera que la
20
CARCINOGENESIS

expresin de la recombinasa Cre de un transgn K14-Cre dar lugar a la

recombinacin de alelos floxed en las clulas del epitelio estratificado,
incluyendo epidermis, aunque muchas de estas clulas realmente dejan
de expresar K14 a medida que avanzan a travs del proceso de
diferenciacin. Hemos generado cohortes de p53 fl / fl ratones / K14-Cre
para estudiar la importancia de p53 en el cncer de piel. No observamos
desviaciones significativas entre la frecuencia obtenida para cada
genotipo y las proporciones esperadas (no mostrado). Se evalu la
eficiencia de Trp53 recombinacin en epidermis de p53 fl / fl ratones / K14Cre por anlisis de PCR usando combinaciones de cebadores capaces
de distinguir entre la floxed y las formas eliminados del Trp53gen
( Figura 1A y 1B ). Simultnea anlisis de PCR para el transgen Cre
como para la forma floxed de Trp53 en el ADN de la epidermis y la cola
drmica de la piel mostr la caracterstica banda del alelo FL (584 pb) en
ambos dermis y la epidermis en ratones que carecan del transgn K14Cre ( Figura 1B , panel superior); Esta banda tambin es claramente
detectable en el ADN drmica, pero no en el ADN de epidermis de p53 fl /
fl
ratones / K14-Cre ( Figura 1B , panel superior). En consecuencia, el
anlisis de PCR con cebadores especficos para el alelo suprimido
revel una banda predominante 612 pb en la epidermis de p53 fl /
fl
ratones / K14-Cre.Tambin se detect esta banda, aunque con menor
intensidad, en la dermis de estos ratones, probablemente debido a la
presencia de los folculos pilosos que expresan el transgn K14-Cre en
la dermis ( Figura 1B , panel inferior). Como era de esperar, la banda
612 pb supresin especfica no se detect en los ratones que carecen
del transgn K4-Cre ( Figura 1B , panel inferior).

21
CARCINOGENESIS

Figura 1: la
recombinacin mediada por Cre de floxed Trp53 alelos afecta a
la mayora de las clulas epidrmicas. A. estructura esquemtica
de floxed Trp53 locus y del locus eliminado exones que carecen de 2
a 10 (del 2-10) una vez que la recombinacin mediada por Cre ha
tenido lugar . Tringulos representan sitios loxP, y las flechas
representan los cebadores utilizados para la deteccin especfica de
alelo. Los nmeros entre parntesis indican la longitud del fragmento
amplificado en pares de bases (pb). B. Ejemplo representativo de
anlisis especfico de alelo de p53 en muestras de ADN obtenidas a
partir de epidermis (E) y la dermis (D) de un ratn transgnico con
alelos p53 floxed (carriles marcados p53 fl / fl ) y de ratones
transgnicos dobles que llevan tambin el transgn K14Cre. Tambin se incluyeron los cebadores especficos de K14-Cre
transgn en la reaccin de amplificacin del panel superior. MWM:.
ADN marcador de peso molecular C. La competencia por PCR de
las mezclas indicadas de forma de ADN dermis de un p53 no
recombinado fl / fl del ratn y de la epidermis de doble p53 fl / fl / K14Cre ratones transgnicos (que presumiblemente han recombinado
completamente los alelos floxed). ns: bandas no especficas.

PCR de competicin usando ADN mixtas de epidermis de una p53 fl / fl /

K14-Cre
ratn
(presumiblemente
contiene
principalmente
fl / fl
recombinados Trp53 alelos) y la dermis de un p53
ratn (que contiene
slo floxed Trp53 alelos) confirm adems que la recombinacin afecta a
la gran mayora de las clulas de la epidermis en ratones de la p53 fl / fl /
22
CARCINOGENESIS

K14-Cre genotipo, como la adicin de slo el 2% o 5% de drmicos no

recombinado resultados de ADN en un aumento detectable en la banda
indicativa del alelo floxed y una reduccin en la intensidad de las bandas
no especficas ( Figura 1C ). Razon que si la adicin de estas pequeas
cantidades de ADN que contienen alelos p53 floxed es detectable, la
cantidad inicial de alelos floxed en la epidermis de p53 fl / flratones / K14Cre debe ser muy baja y la eficacia de recombinacin en la epidermis
que estar muy alto.
A partir de estos resultados, se concluye que la supresin de p53 es
eficiente, que afecta a la mayora de las clulas epidrmicas de p53 fl /
fl
ratones / K14-Cre (en adelante, p53 EKO ratones), y que la supresin de
la epidermis p53 no da lugar a efectos nocivos brutos ms embrionaria el
desarrollo o en la vida postnatal antes de la edad de genotipado y el
destete (3 semanas de edad).
p53 EKO ratones son ms susceptibles a la carcinognesis de la piel
de dos etapas de p53 WT ratones
Como primera aproximacin para estudiar el efecto de p53 epidrmico
sobre el cncer, se estudi la susceptibilidad de p53 EKOratones de
desarrollar cncer de piel en un protocolo de la carcinognesis qumica
de dos etapas; los tumores murinos as generados presente un paisaje
mutacional muy similar a la encontrada en los CE humanos. Se realiz el
tratamiento tpico de la piel de la espalda con el carcingeno DMBA y el
agente hiperplsico TPA como se indica en la figura 2A , registradas
semanalmente tanto el nmero y tamao de los tumores de piel. El
experimento termin en la semana 18, debido al alto nmero y el gran
tamao de algunos de los tumores que surgieron en p53 EKO ratones
( Figura 2B ). Aunque los tumores comenzaron a surgir en semana 6 en
ambos genotipos, y por semana 9 todos los animales haban
desarrollado al menos un tumor de la piel, tumores surgieron ms rpido
en p53 EKO ratones que en p53 en peso de los ratones, como se indica por el
mayor porcentaje de ratones con tumores en p53 EKO comparacin con
p53 en peso de los ratones en este periodo de tiempo ( Figura 2C ). Los
ejemplos representativos de desarrollo de tumores en p53 en peso y
p53 EKO ratones en la semana 14 se muestran en la Figura 2B . p53 en peso
de
los ratones de control desarrollaron tumores pequeos de coliflor
pedunculados exofticos tpicos con apariencia papilomatosa bruto, duro
(hiperqueratosis) en la consistencia, con una superficie seca y un
suministro de sangre pobre (puntas de flecha en la fotografa izquierda
de la Figura 2B ). Por el contrario, los tumores desarrollados en
p53 EKO ratones eran generalmente ms grandes, ssiles y firmemente
infiltrados en la dermis (por ejemplo, vase puntas de flecha en la
23
CARCINOGENESIS

fotografa derecha de la Figura 2B ), algunos de ellos que muestra la

discontinuidad de la barrera epidrmica, con una superficie sangrante
ulcerada que no curarse con el tiempo; macroscpicamente, estos
tumores tenan un aspecto ms maligno, se asemeja a la piel
carcinomas ms de papilomas (ver flechas en la Figura 2B ). Adems,
aunque los tumores se hicieron visibles en ambos genotipos al mismo
tiempo, p53EKO ratones desarrollaron ms tumores en promedio que los
ratones de control de semana 6; estas diferencias fueron
estadsticamente significativas entre las semanas 8 y 11 ( Figura
2D ). Medicin del tamao del tumor confirm que las lesiones de
p53 EKO ratones eran ms grandes que los de p53 en peso de los ratones
( Figura 2E ). Tanto la cantidad total y el porcentaje de tumores ms
grandes que 2 mm de dimetro fueron mayores en p53 EKO que en
p53 WT ratones. Tambin notable es la ausencia de tumores de ms de 5
mm de dimetro en p53 en peso de los ratones incluso a semana 14; Por el
contrario, algunos de los tumores en la poblacin de p53 EKO ratones
alcanzaron este tamao en la semana 10, y por semana 14, el 17% de
p53 EKO tumores (33 de los 196 tumores) haban alcanzado este
tamao. En resumen, se observ en los animales tratados con DMBA y
TPA que carecen de p53 en las clulas epidrmicas conduce a una
mayor tasa de transformacin tumoral de la piel. Estos resultados
contrastan con el rendimiento reducido publicada de papilomas en
ratones nulos p53 en comparacin con p53 WT ratones [ 31 , 32 ], y
podran ser explicados por las diferencias en el fondo gentico o tal vez
por otras diferencias entre los diferentes modelos animales, tales como
la diferente momento de p53 eliminacin [de la concepcin en ratones
nulos p53, y alrededor de da embrionario 12,5 en nuestro modelo
experimental o la presencia de p53 en las clulas drmicas en p53 EKO ,
que no se producen en ratones nulos p53. De hecho, un efecto no
celular autnoma de p53 drmica sobre el crecimiento tumoral en
xenoinjertos de lneas de la glndula de la prstata o de mama
tumorales humanos de clulas se ha descrito, aunque p53 en las clulas
del estroma por lo general impide el crecimiento del tumor de clulas. En
resumen, nuestros datos indican que, a diferencia del efecto descrito de
la ausencia de p53 en ratones generales knock-out, p53 en las clulas
epidrmicas en realidad protege en las primeras fases del desarrollo de
tumores de piel, como p53 EKO mostraron aumento de ratones tasas de
aparicin de tumores y el crecimiento tumoral de ratones portadores de
alelos no recombinado de p53 en sus clulas epidrmicas. Por lo tanto,
la conclusin de que p53 es relevante en el proceso de iniciacin de la
carcinognesis de la piel, al menos en el contexto de insultos qumicos
que activa la sealizacin de Ras

24
CARCINOGENESIS

Figura 2: La ausencia de p53 en epidermis predisponen al

desarrollo de tumores en un protocolo de la carcinognesis
qumica de dos etapas.
A. Lnea de tiempo del experimento carcinognesis de piel. 8 a 9
semanas de edad, los ratones fueron afeitados, y tres das ms
tarde trataron tpicamente con el carcingeno DMBA. TPA se
administr dos veces por semana durante 12 semanas. Toma de
muestras de tumor se extenda hasta la semana 18 en
p53 EKO ratones. B. Ejemplo
representativo
de
un
p53 en
peso
(izquierda) o p53 EKO(derecha) del ratn en la semana 14. Nota
los pequeos tumores de la piel con aspecto pediculados
papilomatosa en el p53 en peso del ratn y el ms grande tumores de
piel en p53 EKO ratones (puntas de flecha); Adems, algunos de los
tumores en p53 EKO ratones son ssiles y ulcerada, se asemeja a
carcinomas
malignos
(flechas). C. Los
tumores
surgen
EKO
en peso de
anteriormente en p53
ratones que en p53
los ratones
25
CARCINOGENESIS

cuando se someten a un protocolo de la carcinognesis qumica

DMBA / TPA. D. tiempo de evolucin de nmero medio de tumores
por fenotipos. p53 EKO ratones desarrollaron ms tumores que
p53 wt ratones. Los asteriscos indican el valor de p <0,05 en el test
de la t de Student. E. Distribucin de tamao de los tumores de piel
en p53 EKO y p53 wt ratones. Tenga en cuenta la aparicin anterior y
el mayor nmero de medio (dimetro> 2 mm) y grandes (dimetro>
5 mm), los tumores en p53 EKO ratones en comparacin con p53 en
peso de
los ratones.

Diferentes tipos de tumores de la piel emergen en p53

EKO

ratones

Como se indica, p53 EKO tumores eran con frecuencia mayor que los
obtenidos en p53 en peso de los ratones, lo que indica un crecimiento ms
rpido. Macroscpicamente, los tumores que surgen en ratones de tipo
salvaje eran tpicamente exoftico y papilomatosa. Por el contrario, varios
p53 EKO tumores de la piel tenan un aspecto externo sugerente de un
estado ms maligno: eran ssiles, con una tendencia a infiltrarse
profundamente en el tejido subcutneo, mostrando frecuentemente
ulceracin persistente de la superficie. Se evaluaron histolgicamente
los 18 y los 51 tumores de p53 WT y p53 EKO ratones, respectivamente,
recogidas en las semanas 14-18 del experimento. Microscpicamente,
los tumores de p53 WT ratones fueron homogneos, con alto nivel de
diferenciacin y queratinizacin del epitelio estratificado que cubre un
estroma tejido conjuntivo ramificado, mal vascularizada, que ofrece el
aspecto histolgico clsico de papilomas escamosas ( Figura 3A ). Slo
dos de los papilomas mostraron los primeros signos de malignidad, en
forma de pequeos focos de microcarcinoma, compuesta por nidos de
clulas de la epidermis con la falta de diferenciacin de una capa basal
de invadir el estroma ( Figura 3B y Tabla 1 ). Sin embargo,
p53 EKO ratones produce histotypes tumorales sean ms variadas:
encontramos papilomas escamosas ( Figura 3C ) y papilomas que
mostraron mayor atipia basal de p53 wt papilomas con mltiples focos de
microcarcinoma ( Figura 3D , flechas). Algunos tumores p53 se
encuentran en EKO ratones eran tricoepitheliomas, lesiones benignas de
los folculos pilosos compuestas de quistes cornified, incapaces de
formar cabello normal (flecha en la Figura 3E ); otros se clasificaron
como tumores basosquamous ( Figura 3F ), lesiones derivadas de
folculos pilosos que se asemeja carcinomas basosquamous, pero
benigna debido a la integridad y continuidad de la membrana basal. Por
ltimo, tambin encontramos lesiones ulcerosas, que corresponden a
tumores de la piel altamente malignos: la infiltracin de los SCC
pobremente diferenciados (18 de los 51 tumores de p53 EKO ratones,
ninguno de p53 en peso de los ratones), que mostr reas slidas de
26
CARCINOGENESIS

aumento de celularidad se infiltran desde la epidermis a la dermis y el

tejido subcutneo, compuestas por los queratinocitos con marcado
pleomorfismo celular, la mayora de ellos con fibroblastoide (husillo)
forma de la clula, siendo comn la presencia de clulas multinucleadas,
clulas con ncleos gigantes aberrantes (por ejemplo, la flecha en la
Figura 3H ) y figuras mitticas (puntas de flecha en la Figura 3H ); estas
caractersticas se parecen a los encontrados en los queratinocitos
humanos con prdida de p53 por medio de shRNAs contra p53
[ 38 ]. Estos SCC diferenciadas mal mostraron un patrn slido muy
homognea con poca evidencia de diferenciacin escamosa y / o
deposicin de queratina ( Figura 3G y3H ). Sorprendentemente, todo el
p53 EKO ratones incluidos en este estudio desarrollado al menos un SCC
pobremente diferenciado, lo que impide la prolongacin del estudio para
el anlisis de la evolucin de los otros tipos de tumores. La incidencia de
cada tipo de tumor se indica en la Tabla 1 . A partir de los datos incluidos
en la Figura 3 y la Tabla 1 , se concluye que p53 ausencia en las clulas
epidrmicas conduce a una marcada aceleracin del proceso de
transformacin maligna de los tumores surgido despus del tratamiento
con DMBA y TPA. Adems, los tipos de tumores ms variadas
observadas en p53 EKO ratones sugiere que p53 acta como un gen
supresor de tumores en diferentes tipos de clulas de la epidermis; as
que la falta de p53 dara lugar a diferentes tipos de tumores en funcin
del grado de compromiso o la diferenciacin del tipo de clula
transformada.

27
CARCINOGENESIS

Figura 3:. Aspecto

histolgico de los tumores de piel inducidos qumicamente tumores
desarrollados en p53 wt ratones eran tpicas papilomas bien diferenciado A. que
a veces mostr focos de microcarcinoma como grupos de clulas epidrmicas
ms profundas de la dermis ( B. , flecha). CH. Los tumores desarrollados en
p53 EKO ratones eran histolgicamente ms diversa. Se extendieron de
papilomas clsicos (C) y papilomas con abundantes focos de microcarcinoma
(D), a tricoepithelioma (E), tumores basosquamous (F) y carcinomas
pobremente diferenciados (G y H). Las barras de escala son iguales a 200
micras de AG y 50 micras de H.

MATERIALES Y MTODOS

Los ratones y tratamientos

El trabajo con animales se llev a cabo siguiendo los protocolos aprobados por
nuestro Comit Institucional de tica de Experimentacin Animal y segn las
regulaciones europeas, espaolas y locales; los experimentos incluidos en esta
publicacin estn bajo el nmero de permiso de BME 02/10 del Comit tico de
Experimentacin Animal del CIEMAT. Se hicieron todos los esfuerzos para
28
CARCINOGENESIS

minimizar el sufrimiento de los animales empleados. Los ratones se

mantuvieron en autoclave con comida para roedores y agua estndar ad
libitum y se mantuvieron bajo una luz -12 h oscuridad ciclo de 12
h. Floxed Trp53 ratones y ratones K14-Cre se han descrito anteriormente
[ 17 , 47 ]. Para la obtencin de ratones que carecen de p53 en la epidermis,
cruzamos p53en peso / fl ; Ratones hembra K14-Cre con p53 fl peso / varones. En
ratones heredar tanto el transgn K14-Cre y alelos floxed de Trp53, la actividad
Cre sera eliminar los exones 2 a 10 de Trp53 en la epidermis y otros tipos de
clulas que expresan el transgn K14-Cre ( Figura 1A ). Este alelo
recombinado es incapaz de producir una protena funcional, ya que carece de
parte del dominio de activacin transcripcional, el dominio de unin a ADN y el
dominio de tetramerizacin de p53. Se seleccionaron para el estudio de
carcinognesis p53 fl / fl ; Ratn K14-Cre (denominado en este trabajo como
p53 EKO ) y p53 p / p de camada como los ratones de control (denominado en este
trabajo como p53 en peso ). Todos los ratones utilizados en los estudios de
carcinognesis eran del mismo fondo gentico mixto (50% C57BL6JxDBA2J
hbrido y 50% FVB). Cohortes de siete ratones de cada genotipo fueron
sometidos a un protocolo de la carcinognesis qumica de dos etapas
cutnea. En este protocolo, los ratones se afeitaron usando una cortadora de
cabello y se trataron tres das despus con una nica aplicacin tpica de 100
g de 7,12-dimetilbenz [a] antraceno (DMBA, Sigma-Aldrich, referencia D3254)
disuelto en 200 l de acetona ( semana 0). Siete das despus de la aplicacin
DMBA, 5 g de se aplic 12-O-tetradecanoilforbol 13-acetato (TPA, SigmaAldrich, P1585 referencia) en 200 l de acetona tpicamente dos veces por
semana durante 12 semanas. El nmero y tamao de los tumores por ratn se
registr semanalmente.p53 EKO los ratones fueron sacrificados cuando los
tumores tenan un dimetro mayor de 1 cm o en la semana 18, por razones
humanitarias. Cuatro p53 wt ratones fueron sacrificados tiempo apareadas entre
las semanas 13 y 18, y el resto fueron sacrificados entre las semanas 35 y 40,
con el fin de obtener las lesiones de tamao suficiente para permitir el anlisis
por Western blot. Las muestras fueron procesadas para histolgico y anlisis
de Western blot, y los genotipos ratones fueron confirmados por volver a
analizar nuevas muestras de ADN tomadas despus de la muerte.

Para la carcinognesis espontnea, se monitorizaron los ratones para el

desarrollo del tumor durante 14 meses. Los ratones que muestran tumores o
con signos evidentes de enfermedad fueron sacrificados para la necropsia y el
anlisis histolgico.
Para el estudio de la piel hiperplsico no tumoral, tres p53 EKO ratones y el
mismo nmero de p53 en peso de los ratones se afeitaron y se trat por va tpica
dos veces con 5 g de TPA o vehculo en los das 3 y 5 despus del afeitado.
29
CARCINOGENESIS

 Genotipificacin y anlisis de PCR

El ADN se obtiene a partir de biopsias de la cola de 2 semanas de edad, los
ratones oa partir de muestras tomadas despus de la muerte. Los ratones
fueron genotipados por PCR. Los cebadores usados para la determinacin de
la Trp53 de estado (es decir: floxed, eliminado o de tipo salvaje) y para detectar
la presencia del transgn K14-Cre se indican en [ 47 ].
Histologa e inmunohistoqumica
Tumores de ratn se diseccionaron e inmediatamente se fijaron en 10% de
formalina tamponada o 70% de etanol y embebidos en parafina. 5 secciones
micras de espesor se utilizaron para H & E tincin inmunohistoqumica o
preparaciones. La mayora de los tumores se fijaron y se clasificaron segn su
morfologa despus de la seccin y tincin con H & E. Los anticuerpos
utilizados en el anlisis inmunohistoqumico estaban en contra de p53 (NCLp53-CM5p, Novocastra, Leica Biosystems, Newcastle, Reino Unido); queratina
K5 (PRB-160P), K10 (PRB-159P) (Covance, San Diego, CA); queratina K13
(ab6112), p19 ARF (AB80) (Abcam, Cambridge, Reino Unido); actina de msculo
liso (C6198, Sigma-Aldrich, St Louis, MO); Ciclina D1 (RM-9104-CR, Thermo
Fisher Scientific, MA, EE.UU.); Fosfo-Akt1 (Ser 473) (9277), Stat3 (4904) (Cell
Signaling Technology, Danvers, MA, EE.UU.) y BrdU (11170376001, Roche,
Mannheim, Alemania). La inmunorreactividad se revel utilizando un sistema
ABC avidina-biotina-peroxidasa y sustrato ABC (Vector Laboratories), y las
secciones counterstained ligeramente con hematoxilina. Los experimentos de
control omitiendo el anticuerpo primario no dieron seales.

Western blot
En aquellos tumores que eran lo suficientemente grande, que congelaba una
parte del tumor en nitrgeno lquido en el momento del sacrificio para el anlisis
de transferencia Western. Extractos de protenas de clulas enteras se
sometieron a SDS / PAGE utilizando tcnicas estndar. El contenido de
protena se determin por el ensayo de protena colorimtrico de Bradford
(BioRad Laboratories; Hercules, CA; EE.UU.). Los anticuerpos utilizados en
transferencias Western fueron contra p53 (NCL-p53-CM5p, Novocastra, Leica
Biosystems, Newcastle, Reino Unido); Stat3 (tyr705 fosfo; 9131), Stat3
(4904); Akt (fosfo Ser473; 4058) (Cell Signaling Technology, Danvers, MA,
EE.UU.); p19 ARF (AB80) (Abcam, Cambridge, Reino Unido); Akt1 / 2 (SC-1619),

30
CARCINOGENESIS

p16 INK4a(sc-1207), ciclina D1 (sc-753), y la actina (sc-1616) como control de

carga (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, EE.UU.).

ANLISIS ESTADSTICO

Los datos se expresan como media SEM. Los valores de p se determinaron

mediante el uso de la, prueba t de Student para datos independientes de dos
colas. Los valores de p <0,05 se consideraron significativos.

31
CARCINOGENESIS

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

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CARCINOGENESIS