018 Prpgi Reit

Anais
03 a 06 de novembro de 2014
Anais
9a Edio, Srie 2
So Lus - Maranho
2014
Reitor:
Francisco Roberto Brando Ferreira

Coordenao Geral:
Natilene Mesquita Brito

Ligia Cristina Ferreira Costa
Comisso Cientfica:
Adriana Barbosa Arajo

Aline Silva Andrade Nunes
Ana Patrcia Silva de Freitas Choairy
Ana Silvina Ferreira Fonseca
Cleone das Dores Campos Conceio
Cristovo Colombo de Carvalho Couto Filho
Dea Nunes Fernandes
Delineide Pereira Gomes
Flvia Arruda de Sousa
Janete Rodrigues de Vasconcelos Chaves
Jos Antonio Alves Cutrim Junior
Karla Donato Fook
Kiany Sirley Brandao Cavalcante

Lus Cludio de Melo Brito Rocha
Luzyanne de Jesus Mendona Pereira
Robson Luis e Silva
Samuel Benison da Costa Campos
Tnia Maria da Silva Lima
Tereza Cristina Silva
Terezinha de Jesus Campos Lima
Thayara Fereira Coimbra
Vilma de Ftima Diniz de Souza
Yrla Nivea Oliveira Pereira
Apoio Tcnico:
Comunicao e Cultura:
Andreia de Lima Silva

Cludio Antnio Amaral Moraes
Diego Deleon Mendona Macedo
Emanuel de Jesus Ribeiro
Jorge Arajo Martins Filho
Jos Augusto do Nascimento Filho
Karoline da Silva Oliveira
Mariela Costa Carvalho
Maycon Rangel Abreu Ferreira
Miguel Ahid Jorge Junior
Nayara Klecia Oliveira Leite
Rondson Pereira Vasconcelos
Valdalia Alves de Andrade
Wanderson Ney Lima Rodrigues
Cerimonial e Hospitalidade:
Aline Silva Andrade Nunes

Fernando Ribeiro Barbosa
Janete Rodrigues de Vasconcelos Chaves
Thaiana de Melo Carreiro
Terezinha de Jesus Campos de Lima
Infraestrutura e Finanas:
Ana Ligia Alves de Araujo

Anselmo Alves Neto
Carlos Csar Teixeira Ferreira
Edmilson de Jesus Jardim Filho
Glucia Costa Louseiro
Hildervan Monteiro Nogueira
Juariedson Lobato Belo
Keila da Silva e Silva
Mauro Santos
Priscilla Maria Ferreira Costa
Rildo Silva Gomes
Tecnologia da Informao:
Allan Kassio Beckman Soares da Cruz

Cludio Antnio Costa Fernandes
Francisco de Assis Fialho Henriques
Jos Maria Ramos
Leonardo Brito Rosa
William Corra Mendes
Projeto Grfico e Diagramao:
Realizao:
Patrocnio:
Apoio:
Cincias Biolgicas
Microbiologia
Apresentao
Esta publicao compreende os Anais do IX CONNEPI - Congresso
Norte Nordeste de Pesquisa e Inovao. O material aqui reunido
composto por resumos expandidos de trabalhos apresentados por
pesquisadores de todo o Brasil no evento realizado em So Lus-MA,
entre os dias 3 e 6 de novembro de 2014, sob organizao do Instituto
Federal do Maranho.
Os resumos expandidos desta edio do CONNEPI so produes
cientficas de alta qualidade e apresentam as pesquisas em quaisquer
das fases em desenvolvimento. Os trabalhos publicados nestes Anais
so disponibilizados a fim de promover a circulao da informao
e constituir um objeto de consulta para nortear o desenvolvimento
futuro de novas produes.
com este propsito que trazemos ao pblico uma publicao cientfica
e pluralista que, seguramente, contribuir para que os cientistas de
todo o Brasil reflitam e aprimorem suas prticas de pesquisa.
AVALIAO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE Miconia amacurensis Wurdack

T. C. C. Leite (PQ), R. H. S. Santos (IC), E. F. O. Borba (IC), E. C. O. Chagas (PQ), A. R. Sena (PQ), T. G. Silva (PQ)
Laboratrio de Bioensaios e Pesquisa de Frmacos, Departamento de Antibiticos -Universidade Federal de
Pernambuco, UFPE. toycly@gmail.com, elizabethfernanda_7@hotmail.com, teresinha100@gmail.com;
Laboratrio de Microbiologia, Instituto Federal de Pernambuco (IFPE) - Campus Barreiros. E-mail:
amandareges@barreiros.ifpe.edu.br, rodrigohenri1@hotmail.com. Instituto do Meio Ambiente do Estado de
Alagoas. E-mail: earlchagas@gmail.com
RESUMO
Miconia o maior gnero da famlia
Melastomataceae com cerca de 1000 espcies, sendo
que 274 so encontradas no Brasil e destas 120 so
endmicas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a
atividade antimicrobiana de Miconia amacurensis. O
mtodo escolhido para esta avaliao foi a difuso em
gar com disco de papel segundo o CLSI. Neste trabalho
foram utilizados os extratos em hexano (Hex), acetato
de etila (AcOEt) e metanol (MeOH) de M. amacurensis
frente a nove microrganismos. Os extratos foram
-1
testados na concentrao de 100 e 300 mgmL . O perfil
de atividade demonstrou tendncia na inibio de
bactrias gram-positivas, bactria lcool-cido resistente
e levedura. Os resultados demonstraram que os extratos

metanlicos e acetato de etila apresentaram atividade
antimicrobiana na maioria dos microrganismos
avaliados, sendo que as mdias dos halos de inibio
variaram entre 9,33 e 25,67 mm. No entanto, o extrato
metanlico apresentou atividade frente a um maior
espectro de microrganismos e tambm maior dimetro
nos halos de inibio. Com isso, conclui-se que os
extratos de M. amacurensis apresentam atividade
antimicrobiana e que esta pode estar relacionada
polaridade dos compostos presentes nos extratos.
PALAVRAS-CHAVE: Microrganismos, Miconia, Melastomatacea.
EVALUATION OF ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF Miconia amacurensis Wurdack

ABSTRACT
Miconia is the largest genus of Melastomataceae, with
about 1000 species, of which 274 are found in Brazil and
120 of these are endemic. This study aimed to evaluate
the antimicrobial activity of Miconia amacurensis. The
antimicrobial activity of extracts was carried out using
the agar diffusion method according to the CLSI. In this
work were evaluated the hexane (Hex), ethyl acetate
(AcOET), and methanol (MeOH) extracts of M.
amacurensis against nine microorganisms. The extracts
-1
were tested at a concentration of 100 to 300 mgmL .
The activity profile showed a tendency to inhibit grampositive and acid-alcohol resistant bacteria and yeast.
KEY-WORDS: Microorganisms, Miconia, Melastomatacea.
The results showed that the methanolic and ethyl

acetate extracts showed antimicrobial activity in most of
the tested microorganisms, and the mean inhibition
ranged between 9.33 and 25.67 mm. However, the
methanol extract was more effective against a broader
spectrum of microorganisms and also the larger
diameter zones of inhibition. This indicates that the M.
amacurensis extracts have antimicrobial activity and
that this may be related to the polarity of the
compounds present in the extracts.
AVALIAO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE Miconia amacurensis Wurdack

1 INTRODUO
As plantas medicinais so utilizadas historicamente como uma rica fonte para obteno
novas molculas para estudos teraputicos. Pases do oriente como a ndia e a China
conseguiram modos de legalizar e reconhecer o uso tradicional das plantas. A China tem longo
histrico de utilizao de plantas alm possuir um arsenal teraputico que contempla mais de 5
mil espcies. Outro fator importante na utilizao de plantas medicinais a facilidade no acesso a
esta terapia visto que no Brasil grande parcela da populao no tem acesso aos medicamentos
sintticos, pois estudos epidemiolgicos indicaram que os 20% da populao brasileira consome
63% dos medicamentos alopticos produzidos e o restante, isto 80% encontra nas plantas sua
nica alternativa teraputica (FOGLIO et al., 2006).
Nas ltimas dcadas a relevncia das pesquisas com plantas medicinais para variados fins
vem se acentuando e a utilizao de plantas medicinais como fonte de novos frmacos
antimicrobianos um destes exemplos, j que os casos de disseminao mundial de resistncia
microbiana fez surgir uma demanda cada vez mais alta por novos agentes com este objetivo
teraputico (CRISAN et al., 1995). A utilizao de plantas tambm tem como justificativa a
economia de tempo e recursos, na chance de se obter mais molculas com capacidade
teraputica, o que seria impossvel sem esta abordagem, j que s uma pequena parte dos
compostos propostos e ensaiados vem a se tornar um recurso teraputico (CECHINEL FILHO;
YUNES, 1998; MACIEL et al., 2002).
Vale destacar que o aumento nos casos de resistncia est relacionado utilizao
prolongada e indiscriminada de agentes antimicrobianos e, alm da preocupao da eficincia,
h tambm o aumento do custo para o estado destes tratamentos, pois segundo o Instituto de
Medicina Americano, o aumento do custo do tratamento de infeces causadas por
microrganismos resistentes nos E.U.A gira em torno de 4 a 5 milhes de dlares (MCGOWAN,
2001).
No Brasil, o uso e a busca de frmacos e suplementos dietticos derivados de plantas
utilizados para diversas finalidades tm aumentado recentemente. Acredita-se que atualmente
so encontrados no mercado cerca de 25 % a 50 % de frmacos derivados das plantas. No setor
da pesquisa acadmica, farmacuticos, botnicos, microbiologistas e qumicos estudam cada vez
mais produtos naturais que poderiam ser utilizados no tratamento de doenas infecciosas. Outro
aspecto importante nesta busca o conhecimento de que plantas so ricas em uma grande
variedade de metablitos secundrios, como taninos, terpenoides e flavonoides, que in vitro
demonstram ter propriedades antimicrobianas (COWAN, 1999).
O estudo qumico e biolgico de plantas constitui uma estratgia alternativa altamente
eficaz na procura de novos agentes teraputicos. Neste sentido, Melastomataceae uma famlia
das angiospermas com mais de 4.500 espcies distribudas em 180 gneros e encontrada
principalmente na regio dos trpicos. O gnero Miconia exclusivamente neotropical, nas
Amricas ocorre desde o sul do Mxico at o norte da Argentina, Uruguai e sul do Brasil.
composto por mais de 1.000 espcies e destaca-se por ser o maior em nmero de espcies da
famlia (GOLDENBERG, 2000).
No Brasil este gnero composto por 287 espcies e destas 122 so endmicas. Ocorre
na maioria dos ecossistemas desde o nvel do mar nas restingas at os campos de altitude e nos
mais variados biomas como a Mata Atlntica, o Cerrado, a Caatinga e a Floresta Amaznica
(BAUMGRATZ; CHIAVEGATTO, 2006). A partir do exposto, o objetivo do trabalho foi avaliar a
atividade antimicrobiana in vitro de extratos de diferentes polaridades de Miconia amacurensis.
2 MATERIAIS E MTODOS
2.1 Material vegetal
As partes areas de Miconia amacurensis foram coletadas nos municpios de Macei e
Satuba e posteriormente foram identificadas pelo botnico MSc Earl Celestino de Oliveira Chagas
e depositadas no herbrio do Instituto de Meio Ambiente de Alagoas (IMA-MAC) sob o nmero
da exsicata 52.184.
2.2 Obteno dos extratos
As partes areas da espcie coletada foram secas por 4 dias, em estufa com temperatura
controlada e renovao constante de ar. A mesma foi moda em moinho de facas e extrada por
macerao por um perodo de 7 dias em temperatura ambiente e protegida da luz. Os solventes
utilizados foram hexano, acetato de etila (AcOEt) e metanol (MeOH) e produziram os extratos:
Hexnico (Hex, 2 g), acetato de etila (AcOEt, 3 g) e metanlico (MeOH, 10 g).
2.2 Microrganismos
As linhagens de bactrias e fungos leveduriformes utilizados foram obtidas a partir da
Coleo de Microrganismos do Departamento de Antibiticos da Universidade Federal de
Pernambuco (UFPEDA). Para este ensaio foram utilizadas quatro bactrias gram-positivas:
Staphylococcus aureus (UFPEDA 02), Micrococcus luteus (UFPEDA 100), Bacillus subtilis (UFPEDA
86) e Enterococcus faecalis (UFPEDA 138); trs bactrias gram-negativas: Escherichia coli
(UFPEDA 224), Serratia marcescens (UFPEDA 352) e Pseudomonas aeruginosa (UFPEDA 416);
uma lcool-cido-resistente: Mycobacterium smegmatis (UFPEDA 71) e a levedura Candida
albicans (UFPEDA 1007).
2.3 Atividade antimicrobiana
A atividade antimicrobiana do extrato foi realizada pela metodologia de difuso em gar,
utilizando-se discos de papel de filtro com dimetro de 6 mm, conforme Clinical and Laboratory
Standards Institute (CLSI, 2012). Alquotas de 20 L nas concentraes de 100 mg/mL e 300
mg/mL foram utilizadas para impregnar os discos de papel, os extratos foram esterilizados
anteriormente por filtrao em membrana de 0,22 m (TPP).
Uma suspenso do microrganismo-teste (0,1 mL de 1,5x108 UFCmL-1 para bactrias e 0,1
mL de 1,5x105 clulasmL-1 para leveduras) foi determinada atravs de comparao visual com
um padro na concentrao de 0,5 na escala de Mc Farland e espalhada sobre a superfcie de

meio slido de AMH (gar MellerHinton) em placa de Petri de (15 x 90 mm). Posteriormente
foram adicionados sobre as placas inoculadas com os microrganismos-teste os discos
impregnados com os extratos. As placas foram incubadas a 37 C por 24 h (bactrias) e a 28 C
por 48 h (leveduras). Aps este perodo foi realizada a leitura visual observando-se o halo de
inibio de crescimento microbiano quantificado em mm com o auxlio de um halmetro.
Como controle positivo impregnou-se 20 L dos padres nos discos na concentrao de
10 mgmL-1 de eritromicina para bactrias e 20 mgmL-1 de nistatina para fungos leveduriformes e
como controle negativo utilizou-se os discos impregnados com os solventes utilizados. Todos os
ensaios foram realizados em triplicata e os mesmos repetidos duas vezes.
2.4 Anlise estatstica
Aps obteno dos resultados, os mesmos foram analisados atravs do programa SISVAR
Sistema de Anlise de Varincia (Ferreira, 2000), realizando-se a anlise de comparao de
mdias pelo Teste de Tukey ao nvel de 5 % de probabilidade.
3 RESULTADOS E DISCUSSO
Os extratos testados de Miconia amacurensis tanto na concentrao de 100 mgmL-1
quanto em 300 mgmL-1 apresentaram mesmo perfil de inibio, pois o extrato MeOH foi o que
apresentou maior espectro de atividade nas duas concentraes testadas, enquanto que o
extrato em acetato foi ativo frente aos mesmos microrganismo nas duas concentraes, contudo
com menor espectro de atividade quando comparado ao extrato metanlico. Por ltimo, o
extrato hexnico no foi ativo nas duas concentraes testadas.
O extrato metanlico inibiu (Figura 1) o crescimento de cinco microrganismos nas duas
concentraes e destes, trs so gram-positivos (S. aureus, M. luteus e B. subtilis), um lcoolcido-resistente (M. smegmatis) e um fungo leveduriforme (C. albicans). Por outro lado, o
extratos AcOEt tanto em concentrao de 100 mgmL-1 quanto em 300 mgmL-1 foram ativos
frente a quatro microrganismos, trs gram-positivos (os mesmos citados anteriormente) e a
levedura.
Figura 1 Atividade antimicrobiana de extrato metanlico de Marcetia amacurensis.
Este perfil de inibio dos extratos em metanol e acetato est de acordo com outros
trabalhos da literatura como o de Rodrigues et al. (2008) que testaram os extratos etanlicos das
espcies M. albicans, M. rubiginosa e M. stenostachya na concentrao de 300 mgmL-1 pelo
ensaio de difuso em gar frente a 11 microrganismos, estes extratos se mostraram mais ativos
frente as bactrias gram-positivas. Pode-se atribuir este resultado as caractersticas particulares
da parede celular das bactrias gram-negativas o que confere as mesmas uma resistncia natural
a agentes antimicrobianos quando comparada com a parede celular das bactrias gram-positivas.
O extrato hexnico no foi ativo, contudo pode-se inferir que esta falta de atividade devese s limitaes do mtodo e no propriamente a ausncia de compostos com esta propriedade.
Este fenmeno a maior limitao do ensaio visto que o meio em que a substncia teste deve se
difundir um meio polar e no caso do extrato hexnico (apolar) observou-se experimentalmente
uma m difuso do extrato no meio, logo este no se difunde completamente se restringindo ao
disco, no inibindo o crescimento do microrganismo. Ao contrrio, Moura (2006) estudando a
atividade antimicrobiana de Miconia rubiginosa verificou que o extrato hexnico apresentou
atividade frente maioria dos microrganismos testados. No entanto, no houve diferena
estatisticamente significativa entre as concentraes testadas (100, 200 e 300 mgmL-1).
Entre os extratos MeOH com os maiores dimetros de inibio (Tabela 1) destacam-se
21,3 mm, 25,7 mm e 18,7 mm quando avaliados frente a S. aureus M. luteus e C. albicans, na
concentrao de 100 mg/mL, respectivamente. Na concentrao de 300 mgmL-1 os halos foram
de 19,7 mm, 24,7 mm e 20,7 mm, para os mesmos microrganismos.
O controle negativo no apresentou halo de inibio e os halos encontrados para
controles positivos esto dispostos na tabela 1.
Analisando a tabela 1 no que diz respeito ao solvente utilizado na avaliao
antimicrobiana, pode-se verificar que o extrato metanlico apresentou atividade inibitria para
os microrganismos em todas as concentraes testadas. Todos os controles negativos no
tiveram halo de inibio. Ainda em relao ao tipo de solvente, verificou-se que o extrato MeOH
foi mais ativo em quase todas as concentraes analisadas, uma vez que o mesmo quando
analisado a 300 mgmL-1 no teve diferena significativa das demais concentraes do extrato
acetato de etila frente a B. subtilis. O extrato hexnico no afetou o crescimento microbiano nas
concentraes testadas. Em relao s concentraes testadas para o extrato acetato de etila,
somente houve diferena significativa nos testes realizados com S. aureus. J para o extrato
metanlico no houve diferena significativa nos testes realizados com M. luteus e M.
smegmatis, sendo a concentrao de 100 mgmL-1 a mais ativa para as bactrias. Contudo, isso
no foi verificado com o fungo leveduriforme, uma vez que a concentrao de 300 mgmL-1 foi
mais eficiente na inibio do microrganismo quando comparado a 100 mgmL-1.
Tabela 1 Atividade antimicrobiana de extrato metanlico e acetato de etila de Miconia

amacurensis usando Mtodo de Difuso em Disco d
GRAM-POSITIVAS
GRAM-NEGATIVAS
100 mg/mL
300 mg/mL
AAR*
FUNGO
224
71
1007
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
11,00 c
ND
ND
ND
ND
13,67 a
18,67 b
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
12,67 b
11,33 b
ND
ND
ND
ND
ND
12,00 c
19,67 b
24,67 a
10,00 b
ND
ND
ND
ND
24,67 a
20,67 a
31,00
33,00
38,00
23,00
M.
amacurensis
02
100
86
352
138
416
hexano
ND*
ND
ND
ND
ND
AcOEt
16,00 c
13,67 b
11,67 b
ND
MeOH
21,33 a
25,67 a
12,67 a
hexano
ND
ND
AcOEt
9,33 d
MeOH
Eritromicina
C+
Nistatina
25,00
*Bactria lcool cido Resistente, ND No detectado. d a zona de inibio foi dada em mm. 02: S.
aureus; 100: M. luteus; 86: B. subtilis; 352: S. marcescens; 138: E. faecalis; 416: P. aeruginosa; 224: E. coli;
71: M. smegmatis; 1007: C. albicans. C+: Controle positivo. Mdias seguidas por letras distintas na vertical
diferem entre si ao nvel de 5 % de probabilidade pelo Teste de Tukey.
Vale ressaltar que no foram relatados na literatura trabalhos de atividade antimicrobiana

com a espcie vegetal analisada neste estudo. Ademais, os resultados foram satisfatrios, uma
vez que os resultados apresentados foram superiores aos encontrados na literatura e por se
tratar de extratos e no substncias puras.
4 CONCLUSO
Os extratos metanlicos e acetato de etila de M. amacurensis apresentaram atividade
frente s bactrias gram-positivas e leveduras e esta pode estar associada aos compostos polares
presentes neste extrato j que com a diminuio da polaridade, extrato hexnico, este efeito no
foi observado. No entanto, novos estudos devem ser realizados com a finalidade de encontrar a
Concentrao Inibitria Mnima (CIM), o qual um mtodo quantitativo e mais confivel.
5. AGRADECIMENTOS
A Fundao de Amparo Cincia e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE), pelas
bolsas concedidas.
REFERNCIAS
1. BAUMGRATZ, J.F.A.; CHIAVEGATTO, B. Nova espcie de Miconia Ruiz & Pav.
(Melastomataceae) para Minas Gerais, Brasil. Acta Botnica Brasilis, v. 20, n. 02, p. 485-488,
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2. CECHINEL FILHO, V.; YUNES, R.A. Estratgias para a obteno de compostos
farmacologicamente ativos a partir de plantas medicinais, conceitos sobre modificao
estrutural para a otimizao da atividade. Quimica Nova, v.21, p. 99-105, 1998.
3. CELOTTO, A.C.; NAZARIO, D. Z.; SPESSOTO, M. A.; MARTINS, C. H. G.; CUNHA, R.C.. Evaluation
of the in vitro antimicrobial activity of crude extracts of three miconia species. Brazilian
Journal of Microbiology, v. 34, p. 339-340, 2003.
4. CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE, Performance Standards for Antimicrobial
Disk Susceptibility Tests, M02-A11. 11. ed. Wayne: Clinical and Laboratory Standards Institute,
2012.
5. CRISAN, I. ZAHARIA, C.N.; POPOVICI, F.; JUCU, V.; BELU, O.; DASCALU, C.; MUTIU, A.;
PETRESCU, A Natural propolis extract nivcrisol in the treatment of acute and chronic
rhinopharyngitis in children. Romenia Journal of Virology, v.46, n.3-4, p. 115-33, 1995.
6. COWAN, M.M. Plant products as antimicrobial agents. Clinical Microbiology Review, v. 12, n.
4, p. 564-582, 1999.
7. FOGLIO M.A.; QUEIROGA C.L; SOUZA I.M.O; RODRIGUES R.A.F. Plantas Medicinais como Fonte
de Recursos Teraputicos: Um Modelo Multidisciplinar. Diviso de Fitoqumica,
CPQBA/UNICAMP, 2006.
8. GOLDENBERG, R. O Gnero Miconia Ruiz & Pav. (Melastomataceae): I Listagens Analticas, II
Reviso Taxonmica da Seo Hypoxanthus Hook. f. 2000. 259p. Tese de Doutorado em
Biologia Vegetal-UNICAMP, Campinas, 2000.
9. MACIEL, M.A.M.; PINTO, A.C.; VEIGA, V.E. Plantas medicinais: a necessidade de estudos
multidisciplinares. Qumica Nova, v 23, p. 429-438, 2002.
10. MACGOWAN, J.R. Economic impact of antimicrobial resistance. Emerging Infectious Diseases,
Atlanta, v.7, n. 2, p. 286-292, 2001.
11. MOURA, C.L. Avaliao da atividade antimicrobiaana dos extratos brutos das espcies
vegetais Miconia rubiginosa e Pfaffia glomerata em microrganismos da cavidade bucal.
Franca, 2006. 71f. Dissertao de Mestrado em Programa de Sade, Universidade de Franca,
2006.
12. RODRIGUES, J.; MICHELIN, D.C.; RINALDO, D.; ZOCOLO, G.J.; SANTOS, L.C.; VILEGAS, W.;
SALGADO, H. R. N. Antimicrobial activity of Miconia species (Melastomataceae). Journal of
medicinal foods, v. 11, n. 1, p. 120-126, 2008.
Colletotrichum spp. COMO FONTE DE LIPDEOS PARA PRODUO DE BIOCOMBUSTVEL.

I. A. F. Alonso (IC) e D. P. Morilla (PQ)
Aluna do Projeto IFAL/Petrobrs Instituto Federal de Alagoas, IFAL. E-mail: bella_angeles@hotmail.com;
Professor Orientador IFAL/Petrobrs Coordenao de Qumica Instituto Federal de Alagoas, IFAL. E-mail:
demetrius.morilla@ifal.edu.br.
(IC) Iniciao Cientfica
(PQ) - Pesquisador
RESUMO
Os biocombustveis so fontes de energia
renovveis oriundas de produtos vegetais e animais.
O uso dos biocombustveis reduz significativamente a
emisso de gases poluentes. Alm do que uma fonte de
energia renovvel ao contrrio dos combustveis fsseis.
Atualmente
existem
quatro
geraes
de
biocombustveis, os de terceira gerao so o foco dessa
pesquisa, tendo em vista que tais ainda esto sendo
estudados, ademais, considervel destacar a facilidade
no processo de produo desse tipo de fonte renovvel
de energia, atravs de mtodos de replicao de
microrganismos de interesse. O uso de microrganismos
oleaginosos est sendo apresentado como uma fonte de
leos e gorduras promissora para a produo de
biocombustveis como o biodiesel. Dentre os

microrganismos estudados encontram-se as microalgas e
os fungos filamentosos. O Colletotrichum spp. visto pela
sua capacidade de produo de enzimas, podendo ser
estudado em funo do acmulo intracelular de lipdios,
fazendo, assim, a transesterificao da frao lipdica da
massa seca do microrganismo, para produo de
biodiesel. Objetiva-se com esse trabalho, a elaborao de
novas formas renovveis de biocombustvel, para a
renovao da biotecnologia atual. Entre os objetivos
estima-se a diminuio das emisses de gs carbnico
(CO2) e menor gerao de partculas poluentes. Alm da
obteno de um combustvel de baixo custo e acessvel,
tendo em vista o aumento no preo do petrleo.
PALAVRAS-CHAVE: Biocombustvel, biodiesel, microrganismo, Colletotrichum spp.
Colletotrichum spp. AS LIPID SOURCE FOR BIOFUEL PRODUCTION.

ABSTRACT
Biofuels are renewable sources of energy from
plant and animal products. The use of biofuels
significantly reduces the emission of polluting gases.
Beyond that is a renewable energy source unlike fossil
fuels. Currently there are four generations of biofuels, the
third generation are the focus of this research, as such are
still being studied, moreover, is considerable highlight the
ease in the production process of this type of renewable
energy source, through micro-replication methods of
interest. The use of oleaginous microorganisms is being
touted as a promising source of oils and fats for the
production of biofuels such as biodiesel. Among the
studied microorganisms are filamentous fungi and

microalgae. The Colletotrichum spp. is seen by its ability
to produce enzymes, which may be studied in function of
the intracellular accumulation of lipids, making thus the
transesterification of lipid fraction of the dry mass of the
micro-organism to produce biodiesel. The goal with this
work, the development of new renewable forms of
biofuel, for the renewal of current biotechnology. Among
the goals is estimated to decrease emissions of carbon
dioxide (CO2) and lower generation of particulate
pollutants. In addition to obtaining a low cost and
affordable fuel, in view of the increase in the price of oil.
KEY-WORDS: Biofuel, biodiesel, micro-organism, Colletotrichum spp.
IX Congresso Norte Nordeste de Pesquisa e Inovao, 2014
Colletotrichum spp. COMO FONTE DE LIPDEOS PARA PRODUO DE BIOCOMBUSTVEL.

INTRODUO
A produo de biocombustveis e produtos qumicos a partir de matrias-primas renovveis
necessria para atingir a demanda de energia em um mundo onde os combustveis fsseis esto
ficando cada vez mais escassos e caros (HANSEN et al., 2005). Biodiesel um combustvel
alternativo que reduz a produo dos gases do efeito estufa e o seu uso se tornou obrigatrio em
vrios pases do mundo (OCONNOR, 2011). O biodiesel produzido principalmente pela
transesterificao de gorduras e leos por um lcool (metanol ou etanol), na presena de um
catalisador, para a obteno de steres metlicos ou etlicos de cidos graxos, os quais so
utilizados como biocombustvel (Figura 1). As principais matrias-primas para a obteno do
biodiesel em todo o mundo so girassol, soja, colza (canola) e palmceas, sendo a proporo de
uso de cada substrato so variveis em cada regio. No Brasil, por exemplo, 80% do biodiesel
produzido em 2010 foi obtido a partir de leo de soja (AGNCIA NACIONAL DO PETRLEO, GS
NATURAL E BIOCOMBUSTVEIS, 2011). Apesar das vrias vantagens do biodiesel, o seu processo de
produo pode ser melhorado pela reduo de custos de produo e pelo estabelecimento de
rotas para o aproveitamento de coprodutos.
Figura 1. Reao de transesterificao, onde R1, R2 e R3 qualquer grupo alqulico insaturado ou no, R4 um grupo
alqulico (Normalmente CH3 ou CH3CH2 ).
A produo de biodiesel aumentou consideravelmente nos ltimos anos (Figura 2). A

Europa ainda o maior produtor de biodiesel, enquanto o Brasil foi o pas que mostrou o maior
aumento na taxa de produo nos ltimos anos, de 736 m em 2005 para 3.100.000 m em 2013.
O uso de microrganismos oleaginosos est sendo apresentado como uma fonte de leos e
gorduras promissora para a produo de biocombustveis como o biodiesel. Dentre os
microrganismos estudados encontram-se as microalgas e os fungos filamentosos.
Os microrganismos oleaginosos so definidos como aqueles que apresentam um
contedo lipdico acima de 20%. Existem diversas variedades, tais como microalgas, bacilos, fungos
e leveduras. Os teores de lipdios variam entre 16 a 77% para microalgas, 18 at valores superiores
a 40% para bactrias, entre 50 a 70% para leveduras e 50 a 85% para bolores. Fungos e bolores
tambm so produtores de lipdios, com teores de cidos graxos saturados em torno de 44%, valor
comparvel a diversos leos de origem vegetal (Figura 3).
Biodiesel (milhes m)
12
10
8
6
4
2
0
2005
2006
2007
2008
2009
Brasil
EUA
2010
2012
2013
EU
Figura 2. Produo de biodiesel no Brasil (azul), EUA (laranja) e Unio Europia (cinza) de 2005 a 2013.
Teores Lipdicos
Mximo
Microalgas
Bactrias
Mnimo
17
16
40
18
70
Leveduras
50
Bolores
50
85
Figura 3. Teores Lipdicos Comparativos para diferentes Gneros.
Assim, a busca por microrganismos com altos teores de lipdios, em particular de cidos
graxos saturados, torna-se um caminho promissor para a diminuio dos custos de produo do
biodiesel.
Fungos do gnero Colletotrichum ocorrem como saprfitas em todas as regies do
mundo onde se cultiva o cafeeiro, afetando principalmente as partes externas da casca dos
ramos (Nutman, 1970). Alm desse carter saproftico, o fungo tem sido relatado como agente
causal de antracnose, seca de ramos e manchas em folhas e em frutos maduros de cafeeiro

(Berry & Abrego, 1953 Bianchini, 1960 Bitancourt, 1956, 1958ab Schieber et al., 1970 Viegas,
1957) (Figura 4) .
Colletotrichum spp. visto pela sua capacidade de produo de enzimas, podendo ser
estudado em funo do acmulo intracelular de lipdios, fazendo, assim, a transesterificao da
frao lipdica da massa seca do microrganismo, para produo de biodiesel.
Figura 4. Imagem (A) condios e (B) apressrios de Colletotrichum gloeosporiodes corados com lugol, magnificao de
1000x em microscpio ptico. Imagem (C) condios e (D) apressrios obervados por microscpia eletrnica de
varredura (MEV).
METODOLOGIA
De acordo com Gil (1994), no existem regras fixas para a realizao de pesquisas
bibliogrficas, mas algumas tarefas que a experincia demonstra serem importantes. Dessa forma,
seguiu-se o seguinte roteiro de trabalho:
a. Explorao das fontes bibliogrficas: livros, revistas cientficas, teses, relatrios de
pesquisa entre outros, que contm no s informao sobre determinados temas, mas
indicaes de outras fontes de pesquisa;
b. Leitura do material: conduzida de forma seletiva, retendo as partes essenciais para o
desenvolvimento do estudo;
c. Elaborao de fichas: contm resumos de partes relevantes do material consultado;
d. Ordenao e anlise das fichas: organizadas e ordenadas de acordo com o seu

contedo, conferindo sua confiabilidade;
e. Concluses: obtidas a partir da anlise dos dados. O cuidado aqui observado diz respeito
ao posicionamento neutro em relao ao problema pesquisado.
A parte prtica que ser realizada em laboratrio consta como sendo:
Intensificar o crescimento dos microrganismos j prontos para inoculao em meio de
cultura apropriada e mantida em condies de temperatura e tempo de crescimento
adequado, empregando a tcnica de semeadura, em que so obtidas colnias de
microrganismo. Essas colnias so caracterizadas por suas caractersticas morfolgicas
em microscopia tica, pela observao de lminas a fresco utilizadas para diferenciar as
colnias.
Aps esse processo, essas colnias so cultivadas em meio de cultura lquidos para obter
massa significativa para a extrao da frao lipdica da massa seca do microrganismo
por meio de hexano, seguido de evaporao do solvente em rotaevaporador.
Com a frao lipdica extrada faremos a transesterificao em meio de alcxido de sdio
(lcool + sdio metlico), da mesma para a produo de biodiesel.
O biodiesel assim formado ter seu perfil de cidos graxos metilado quantificados em
CG - MS.
RESULTADOS
No pressente o projeto encontra-se em fases de ajustes e adequaes, porm, como
resultado j temos as caractersticas gerais de desenvolvimento do Colletotrichum gloeosporiodes
que foi isolado como microrganismo endoftico da planta Mirabilis jalapa.
O Colletotrichum gloeosporiodes isolado apresentou uma taxa de crescimento de 7,6 % ao
dia em meio BD (Batata-Dextrose) com acmulo de biomassa at 50 dias, no apresentando
variao em sua massa de forma significativa at 70 dias, como pode ser observado na curva de
crescimento representada pela figura 5.
Tendo como base 30 dias para o desenvolvimento do fungo, obteve-se uma mdia de 0,47
g de matria seca, que corresponde a 81,03 % da mdia de matria seca (0,58 g) obtida para 70
dias de incubao em erlenmeyer, que corresponde ao perodo que deixa de haver um aumento
da biomassa.
Para as culturas com 30 dias, 22 % de sua constituio gua, ou seja, sua massa fresca era
de aprox. 0,60 g, sendo 0,13 g de gua e restando como matria seca 0,47 g (78 %).
Figura 5: Curva de crescimento do microrganismo Colletotrichum gloeosporioides.
Figura 6: a) Plntula coberta por endoftico algodonoso FBS; b) Cultura em meio BDA de endoftico isolado FBS; c)
Camadas do fungo endoftico FBS desenvolvidas em meio lquido BD; d) Vista lateral do fungo desenvolvido em BD.
AGRADECIMENTOS
Agradeo ao IFAL que tem oportunizado a iniciao cientifica em mbito do ensino mdio
Tecnolgico Petrobrs por ter disponibilizado bolsas, para o aprimoramento tcnico dos docentes.
REFERNCIAS
1. MACHADO, M. M. C. Produo de biocombustveis por microrganismos. Disponvel em:
<http://www.grupocultivar.com.br/site/content/artigos/artigos.php?id=881> Acessado
em: 27 de Maio de 2014.
2. MENG, X.; YANG, J.; Xu, X.; ZHANG, L.; Nie, Q.; XIAN, M. Biodiesel production from
oleaginous microorganisms. Renewable Energy, 34, 1-5, 2009.
3. FREDERICO, C. Biodiesel a partir de microrganismos. Disponvel em:
<http://carlosfrederico.wordpress.com/2008/10/22/biodiesel-a-partir-de-microrganismos
/> Acessado em: 27 de Maio de 2014
4. VIGAS, V. C. Extrao e caracterizao dos lipdeos da microalga Chlorella pyrenoidosa
visando
a
produo
de
steres
graxos.
Disponvel
em:
<http://www.argo.furg.br/bdtd/tde_arquivos/17/TDE-2011-08-10T161759Z303/Publico/Dissertacao%20FINAL.pdf> Acessado em: 03 de maio de 2014
5. ALMEIDA, M. R. J. Microrganismos para produo de qumicos a partir da glicerina bruta
gerada
na
produo
de
biodiesel
Disponvel
em:
<http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/917438/1/CITE07.pdf>
Acessado em: 03 de maio de 2014
6. Michele
R.
L.
SILVA,
Luciana
MENEGUIM,
Juliana
S.
GONALVES ,
Juliana
F.
PISTORI e Rui P. LEITE JR.
CARACTERIZAO DE Colletotrichum spp. ASSOCIADO AO CAFEEIRO NO ESTADO DO
PARAN. Disponvel em:
<http://www.sbicafe.ufv.br/bitstream/handle/10820/
1385/166733_Art155f.pdf?sequence=1> Acessado em: 20 de Maio de 2014
7. PELC, K. Produo de lipdios por microrganismos atravs de fermentao em estado slido.
Artigo para Ecossustentabilidade 2012.
8. CAZAROLLI, C. J. Avaliao de fungos filamentosos em biodiesel de linhaa, soja e oliva.
Disponivel
em:
<http://www.lume.ufrgs.br/bitstream/handle/10183/80059/
000903520.pdf?sequence=1> Acessado em 27 de Maio de 2014
9. Brasil: Anurio Estatstico Brasileiro do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis 2010. ANP;
EUA: EIA Annual Energy Review, <http://www.afdc.energy.gov/afdc/data/fuels.html> ; EU:
EU Biodiesel Board, <http://www.ebb-eu.org/stats.php>
USO DE BIOSSURFACTANTES NA BIORREMEDIAO DE SOLO E GUA CONTAMINADOS COM

PETRLEO E SEUS DERIVADOS
2
R. F. C. Leite (IC) ; C.L.L. Santos (IC) ; E.L.B. Sousa (IC) ; M.V. F. Gomes(IC) ; J. Q. Lima (PQ)
1
Instituto Federal do Cear (IFCE) - Campus Juazeiro do Norte, Instituto Federal do Cear (IFCE) - Campus
3
4
Juazeiro do Norte , Instituto Federal do Cear (IFCE) - Campus Juazeiro do Norte , Instituto Federal do Cear
5
(IFCE) - Campus Juazeiro do Norte, Instituto Federal do Cear (IFCE) Departamento de Engenharia AmbientalCampus Juazeiro do Norte e-mail: renata_flavia@rocketmail.com
RESUMO
Acreditando ser possvel fazer a descontaminao do
solo e gua, atravs do consrcio de determinadas
bactrias como agentes biodegradantes do petrleo e
seus derivados, alm da verificao da produo de
biossurfactantes quanto a determinados compostos,
empreendemos um trabalho com o intuito de averiguar
sobre o tratamento quanto ao assunto citado em postos
combustveis. Nesta anlise, conclumos que em
determinados experimentos as bactrias obtiveram

grande xito para o tratamento, j em outros compostos
no houve uma degradao significativa. Assim
esperamos que nossa pesquisa venha a contribuir para o
aperfeioamento das tcnicas utilizadas neste tipo de
tratamento, que oferece uma alternativa sustentvel de
remediao e mitigao de impactos causados pela ao
do homem.
PALAVRAS-CHAVE: Biorremediao, Petrleo e seus derivados, eficincia do processo.
THE USE OF BIOSURFACTANTS IN BIOREMEDIATION OF SOIL AND WATER CONTAMINATED

WITH PETROLEUM AND ITS DERIVATIVES.
ABSTRACT
Believing it possible to decontaminate soil and water,
through the consortium of certain bacteria as agents
biodegradantes oil and its derivatives, besides verifying
the production of biosurfactants for selected
compounds, we undertook a work based on work to find
out about treatment as on the subject cited in fuel
stations. In this analysis, we conclude that in some
experiments the bacteria have achieved great success in

the treatment, since other compounds there was no
significant degradation of the compounds and
petroleum. So we hope that our research will contribute
to the improvement of the techniques used in this type
of treatment that can improve soil and water
contaminated by human action.
KEY-WORDS: Bioremediation, Petroleum and its derivatives, process efficiency
USO DE BIOSSURFACTANTES NA BIORREMEDIAO DE SOLO E GUA CONTAMINADOS COM

PETRLEO E SEUS DERIVADOS
INTRODUO
Devido ao crescente nmero de descobertas de casos de vazamentos em postos de combustveis,
as contaminaes de solos e lenis freticos por hidrocarbonetos derivados de petrleo, bem
como a necessidade de se desenvolver tcnicas sustentveis de biorremediao, tm sido alvo de
inmeras pesquisas e constitui um desafio para os profissionais que atuam no saneamento
ambiental, em funo da complexidade dos fenmenos geoqumicos e bioqumicos que so
catalisados a partir de sua insero no subsolo (MARIANO, 2006).
Quando o combustvel atinge o solo, seus componentes separam-se em trs fases: dissolvida,
lquida e gasosa. Uma pequena frao dos componentes da mistura se dissolve na gua do lenol
fretico, uma segunda poro retida nos espaos porosos do solo na sua forma lquida pura
como saturao residual e outra parte dos contaminantes passveis de evaporao d origem
contaminao atmosfrica (NADIM et al., 1999). Por envolver trs variveis (ar, solo e gua), a
biorremediao se torna ainda mais complicada. Esta complexidade se deve ao fato dos
contaminantes terem uma grande variedade de propriedades que em grande parte se
caracterizam pela baixa solubilidade, por geralmente serem hidrofbicos, e pela pouca
persistncia no solo.
No caso de combustveis como a gasolina e o leo diesel, os hidrocarbonetos monoaromticos
benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos, chamados coletivamente como compostos BTEX, so os
constituintes que tm maior solubilidade em gua e, portanto, so os contaminantes com maior
potencial de poluir o lenol fretico (MARIANO, 2006).
A presente pesquisa pretende reunir dados para avaliar a eficincia da biorremediao por
biossurfactantes, substncia anfiptica que promove a quebra da tenso superficial e possibilita a
decomposio microbiolgica da substncia em meio aquoso. O suprimento tcnico necessrio a
esse estudo partiu da reviso de teses, dissertaes, monografias, artigos e peridicos, bem
como as analises laboratoriais advinda de simulaes de contaminao de solo e gua
subterrnea por compostos derivados do petrleo, tendo como exemplo anlises de consrcios
de bactrias atuando individualmente como agentes biodegradantes.
Pretendemos aqui evidenciar a necessidade de uma reflexo sobre a elaborao de tcnicas
sustentveis e eficientes de tratamento de solo e gua contaminada por derivados de petrleo,
garantindo a conservao da qualidade ambiental, manuteno de equilbrio biodinmico e
qualidade de vida.
MATERIAIS E MTODOS
A metodologia baseou-se na anlise e interpretao de dados cientficos coletados atravs de
reviso de bibliografia disponvel em teses, dissertaes e artigos sobre o tema. De incio, foram
abordadas as ideias centrais sobre a importncia cientfica da tcnica de biorremediao, bem
como suas aplicaes no contexto prtico e terico e os benefcios que foram gerados atravs do
desenvolvimento cientfico e tecnolgico das suas atribuies. Em continuidade, foram
apresentados, analisados e interpretados alguns resultados de anlises laboratoriais que

objetivaram simular o processo de biodegradao de poluentes a ser desenvolvido, com o intuito
de avaliar a viabilidade de desenvolvimento do processo. Os resultados obtidos pelas etapas
anteriores esclareceram concluses cientificamente aceitveis sobre o tema, sendo dessa forma
suficientes para atingir os objetivos previstos.
Os ensaios com benzeno e tolueno foram realizados numa primeira etapa a 200 rpm e 30 C e
numa segunda etapa optou-se por 100 rpm a 25 C, na tentativa de diminuir a evaporao desses
compostos aromticos. Iniciou-se com concentraes mnimas e sequencialmente concentraes
maiores a fim de avaliar possveis efeitos txicos sobre as atividades celulares.
Nos ensaios com querosene foram utilizadas concentraes crescentes de querosene em cada
experimento visando descobrir a tolerncia da cepa bacteriana a este composto e a cintica do
crescimento celular. Realizou-se a contagem de unidades formadoras de colnias onde a
concentrao de querosene no meio de cultivo foi igual a 0.4; 1; 2; e 5% (Figura 1). Nos ensaios
onde se utilizou as concentraes de 10, 20 e 30% de querosene, optou-se por realizar a
dosagem de protena celular em substituio ao mtodo de contagem de colnias pelo fato de
ser uma metodologia rpida e simples de deteco de crescimento celular. (Figura 2). Para o leo
diesel, foram mantidas as mesmas concentraes do experimento anterior.
RESULTADOS E DISCUSSES
1. RESULTADOS COM BENZENO E TOLUENO
As variaes entre 10 e 500 ppm no proporcionaram nenhum tipo de desenvolvimento celular.
No se observou oxidao desses compostos.A ao desses componentes pode ser
bacteriosttica ou bactericida para os microrganismos, dependendo da concentrao. O tolueno,
por exemplo, estimula o crescimento de microrganismos em baixa concentrao. No entanto,
maiores concentraes desse composto provocam ao bacteriosttica.
2. ENSAIOS COM QUEROSENE
Figura 1- Efeito da concentrao de querosene sobre o crescimento celular durante o cultivo a

30C, 200 rpm, pH inicial 6.8, usando a Contagem de Colnias Viveis
Observou-se os seguintes resultados onde a concentrao de querosene no meio de cultivo foi

igual a 0.4; 1; 2; e 5% (Figura 1) e onde se utilizou as concentraes de 10, 20 e 30% de
querosene (Figura 2).
Figura 2- Efeito da concentrao de querosene sobre o crescimento celular durante o cultivo a

30C, 200 rpm, pH inicial 6.8, tendo como referncia a Dosagem de Protena Celular.
Verificou-se que baixas concentraes de querosene proporcionaram um desenvolvimento
celular mximo nas primeiras 24 horas de cultivo, havendo depois desse perodo o estado
estacionrio. (Devido ao grande consumo da fonte de carbono na fase log.). Quando se utilizou
5% da fonte de carbono, observou-se evidentemente uma fase Lag de adaptao nos primeiros
perodos, seguida da fase Log que atingiu seu mximo em 48 horas, posteriormente entrando
em declnio.
O ensaio com 30% de querosene foi o que mais favoreceu o desenvolvimento celular, produzindo
2.283 g/L de protena celular ao final de 168 horas de incubao. O aspecto turvo encontrado nos
caldos de cultivo pode ser ilustrado na Figura 3.
Figura 3: Meios de cultivo com querosene. a: controle; b: meio de cultivo com 5% de querosene
inoculado com Pseudomonas aeruginosa LBI (168 horas de incubao) e c: meio de cultivo com
5% de querosene
Analisou-se tambm a produo de biossurfactantes em termos de ramnose (desoxiacar natural

existente em muitos vegetais e algumas bactrias gram-negativas) nas diferentes concentraes de
querosene. A Figura 4 mostra os resultados obtidos na pesquisa.
Figura 4- Produo de Biossurfactantes em termos de ramnose durante o cultivo a 30C, 200

rpm, pH inicial de 6.8, em diferentes concentraes de querosene.
Observou-se que em condies de baixa concentrao de fonte de carbono, uma quantidade
mnima (entre 2 e 6.4 ppm) de biossurfactante produzida. A agitao a 200 rpm provocou a
formao de pequenas gotas de querosene, o que facilitou o contato entre as clulas e o
biossurfactante mesmo estando em baixas concentraes conseguiu efetuar a degradao.
Visando confirmar a produo de biossurfactantes nos meios de cultivo, foram feitas medidas de
tenso superficial no meio de cultivo sem inoculo e aps 168 horas de incubao com P.
aeruginosa LBI. Os resultados adquiridos pelos autores so evidenciados nas Figuras 5 e 6.
Figura 5- Variao da tenso superficial inicial e final durante os ensaios.
Figura 6- Porcentagem de diminuio de tenso superficial nos experimentos com querosene.

Observa-se que nos meios de cultivo onde houve produo mnima de biossurfactantes, a tenso
superficial tambm apresentou pequena variao, o que confirma os dados obtidos na anlise da
produo de ramnose.
3. ENSAIOS COM LEO DIESEL
As Figuras 7 e 8 mostram o comportamento celular encontrada no ensaio nas diversas
concentraes utilizadas.
Figura 7- Efeito das concentraes de leo diesel sobre o crescimento celular tendo como
referncia a contagem de colnias visvel
Figura 8- Efeito das concentraes de leo diesel sobre o crescimento celular tendo como
referncia a Produo de Protena Celular
Nos ensaios onde se utilizou concentraes de leo diesel a 0.4; 1; 2 e 5%, observou-se que o
ponto mximo de crescimento celular se deu nas primeiras 48 horas, entrando em seguida em
fase estacionrio. O aumento da concentrao dessa fonte de carbono at o valor de 30% no
prejudicou o desenvolvimento celular. A Figura 9 evidencia a produo de biomassa atravs das
mudanas de colorao e turvao observadas nos meios de cultivo.
Figura 9- Meios de cultivo contendo leo diesel. a: controle; b: 2% de leo diesel e inoculo
P.aeruginosa LBI aps 168 horas de incubao e c: meio de cultivo contendo 30% de leo diesel e
mesmo inoculo aps 168 horas de incubao
A quantidade de biossurfactantes produzida foi analisada a partir da quantidade de ramnose
excretada no meio. A Figura 10 mostra o resultado grfico obtido.
Figura 10- Produo de biossurfactantes em termos de ramnose

Observaram-se mudanas significativas na tenso superficial a partir do aumento da
concentrao de leo diesel no meio de cultivo. O valor mais baixo de tenso superficial foi
obtido no experimento com 30%. As Figuras 11 e 12 mostram os resultados obtidos.
Figura 11- Variao da tenso superficial inicial e final durante os ensaios
Figura 12- Porcentagem de diminuio de tenso superficial nos experimentos com leo diesel
4. ENSAIOS COM PETRLEO

Os resultados da avaliao do crescimento celular e a produo de biossurfactantes em petrleo
proveniente da REPLAN PETROBRAS esto expressos nas Figuras 13 e 14.
Figuras 13- Efeito da Concentrao de petrleo sobre as atividades celulares
Figura 14- Produo de biossurfactantes em termos de ramnose

A produo de biossurfactantes no meio de cultivo promoveu a reduo da tenso superficial em
todos os experimentos. As Figuras 15 e 16 mostram os resultados obtidos.
Figura 15- Variao da tenso superficial inicial e final durante o cultivo
Figura 16- Porcentagem de reduo da tenso superficial no ensaio com petrleo

CONCLUSO
A pesquisa mostrou que a bactria P. aeruginosa LBI alcanou alta capacidade de degradao de
hidrocarbonetos. J na produo de biossurfactantes, verificou-se com os testes menor valor
quando usado menor quantidade de olo, e maior quanto maior a porcentagem. A bactria em
estudo tambm incentivou a diminuio da tenso superficial do meio, com indicao que a
borra oleosa substrato de baixo custo e vivel para produo de biossufactantes.
REFERNCIAS
1. MARIANO, A. P. Avaliao do potencial de biorremediao de solos e de guas
subterrneas contaminados com leo diesel, Rio Claro: UNESP, 2006.
2. NADIM, F., HOAG G.E., LIU S. et al. Detection and remediation of soil and aquifer systems
contaminated with petroleum products: an overview. J. of Petrol. Sci. and Eng., v.26, p.
169-178, 1999.
ANLISE COMPARATIVA ENTRE A PRODUO DE METANO A PARTIR DE RESDUOS

ALIMENTARES E ESTERCO DE BOVINOS EM BIODIGESTORES EXPERIMENTAIS
1
A. M. Lisboa (IC); C. K. S. Forte (IC) ; F. R. C. Oliveira (IC) ; M. L. L. Castro (IC) ; S. M. Oliveira (IC) ;
1
K. B. Oliveira (PQ)
1
Instituto Federal do Rio Grande do Norte (IFRN) - Campus Natal-Central e-mail: kelvin.oliveira@ifrn.edu.br
(PQ) Pesquisador
RESUMO
O metano um biocombustvel obtido por meio da
biodigesto anaerbica da biomassa, a qual ocorre em
uma cmara fechada, denominada biodigestor. O
presente trabalho tem por objetivo, atravs do uso de
biodigestores, avaliar de forma quantitativa a produo
do biogs obtido por meio de resduos orgnicos
alimentares frente s matrias-primas tradicionais, o
esterco bovino. Para alcanar tal objetivo, foram
confeccionados dois biodigestores experimentais em
laboratrio (um referente aos resduos alimentares; o
outro referente ao esterco tradicional), procurando
estabelecer as condies mais eficientes para produo

do gs. Atravs de sensores (Controladores Lgicos
Programveis), onde se obteve os dados sobre a
temperatura e a quantidade de metano produzido. Por
fim, verificamos verificou-se a ineficincia do uso de
resduos alimentares para produo de biogs em
comparao com o esterco bovino. O desenvolvimento
desse projeto, em uma perspectiva didtica, visa facilitar o
estudo da produo desse biocombustvel no meio
acadmico.
PALAVRAS-CHAVE: Biogs, Energia Renovvel, Biodigestor Experimental, Resduos Alimentares.
COMPARATIVE ANALYSIS BETWEEN THE PRODUCTION OF METHANE FROM WASTE FOOD AND
CATTLE MANURE IN EXPERIMENTAL DIGESTERS
ABSTRACT
Methane is a biofuel obtained by anaerobic digestion of
biomass , which occurs in a closed chamber , called
digester . This paper aims , through the use of digesters ,
quantitatively evaluate the production of biogas
obtained through dietary organic residues facing the "
traditional raw materials ," the cattle manure . To
achieve this goal , two experimental digesters were
made in the laboratory ( one regarding food waste , the
other referring to the traditional manure ) , seeking to
establish the most efficient conditions for gas

production . Through sensors ( Programmable Logic
Controllers ), which obtained the data on the
temperature and the amount of methane produced .
Finally , we note the inefficiency of using food waste for
biogas production compared with cattle manure . The
development of this project , in a didactic perspective,
facilitating the study of the production of this biofuel in
academia.
KEY-WORDS: Biogas, Renewable Energy, Biodigestor Experimental, Food Waste.
TTULO DO ARTIGO
INTRODUO
A partir do sculo XIX, aps a Segunda Revoluo Industrial, o petrleo tem sido utilizado em
grande escala como fonte de energia e combustvel para os meios de transportes e como
matria-prima para uma infinidade de produtos. No entanto, deve-se ter em mente o quanto
esse recurso finito e que um dia vai acabar. Alm disso, o petrleo um importante definidor
da geopoltica mundial e acarreta significativos impactos ambientais.
Diante desse quadro, vemos nota-se a urgente necessidade de se pesquisar e investir em novas
fontes de energia, em especial, as renovveis, como os biocombustveis, por exemplo, visando
substituir o uso dependente do petrleo. Infelizmente, grande parte das maiores indstrias ainda
trabalham de forma imediatista e no de maneira sustentvel, visando a preveno de uma
futura crise de combustveis.
Dentre esses biocombustveis, destaca-se o biogs, composto principalmente pelo metano (CH 4 )
e gs carbnico (CO 2 ), obtido atravs da digesto anaerbica da biomassa, por intermdio de
bactrias, em um biodigestor, que basicamente uma cmara fechada onde se processa a
fermentao da matria orgnica (ROYA, 2011).
O processo de biodigesto vai depender de fatores como: temperatura, tipo de resduos, pH dos
nutrientes, tempo de reteno, quantidade de gua e presena de elementos txicos. As
matrias primas para produo de biogs podem ser esterco de animais, resduos de produo
agrcola e da indstria, materiais orgnicos como lixo domstico, entre outros.
O biogs pode ser empregado nos mais variados tipos de produtos, como em foges domsticos,
lampies, motores de combusto interna (automveis), geladeiras, chocadeiras, secadores de
gros ou secadores diversos e aquecimento e balano calorfico (ROYA et al, 2011, p. 143).
Os dejetos animais, por j conterem normalmente bactrias anaerbias, so os principais
materiais de alimentao do biodigestor. Qualquer matria orgnica, com exceo da madeira,
pode ser utilizada para produo do biogs. importante ressaltar que esses materiais devem ser
acrescidos de gua, em uma proporo determinada, antes de se iniciar o processo de
biodigesto em si (OLIVEIRA, 2006).
De forma geral, a digesto anaerbica da matria orgnica para produo de biogs se processa
entre 30 e 40 dias, sendo de fundamental importncia para esse processo a varivel
temperatura, que inversamente proporcional ao tempo de biodigesto: quanto maior a
temperatura, mais rpido se processa a biodigesto. A quantidade de biogs produzido mxima
entre 35C e 45C. Outros fatores que tambm interferem na biodigesto so: presso, pH,
concentrao e composio dos materiais a serem utilizados, concentrao de gua, tempo de
reteno, etc. (NEVES, 2010).
A biodigesto anaerbia tem como produto no apenas o biogs, mas tambm o biofertilizante,
substituto vantajoso de adubos e defensivos industriais.
De acordo com Barreira (2011) Sso vrias as vantagens da utilizao do biogs, dentre elas
(BARREIRA, 2011):
Aumento da produtividade agrcola e renda do produtor devido ao uso do
biofertilizante nas lavouras;
Gerao de empregos no campo;

Autossuficincia energtica;
Energia de tecnologia simples e baixo custo;
Reduo do custo do transporte da energia do litoral para o interior;
Saneamento do meio rural;
Segundo Costa et al. (2012) apesar de todas as vantagens existentes ainda h algumas
desvantagens, so elas:
Possvel produo de sulfeto de hidrognio e amonaco, substncias corrosivas,
dificultando o uso de determinados materiais como cobre ou lato, na construo
dos biodigestores;
Alto custo nos investimentos, com um longo perodo de tempo para recuper-los.
Vrios pases, tanto ricos como pobres, fazem uso do biogs como fonte energtica. No entanto,
dois se destacam: O o primeiro, a China, com o desafio permanente de produzir alimento que
atenda a necessidade de mais de 1 um bilho de habitantes; O o segundo, por sua vez, a ndia,
pas carente no s de alimentos, mas tambm de energia (DEGANUTTI, 2002).
O Brasil, por mais que detenha uma das maiores biomassa e rebanhos bovinos do mundo, s vai
despertar para a produo do biogs com as primeiras crises do petrleo, ocorridas na dcada de
70, quando o ento governo militar passou a investir no desenvolvimento de fontes de energias
renovveis, a exemplo do Programa Nacional do lcool (Pro-lcool) de 1979 (BARREIRA, 2011).
Atualmente, a produo de biogs no Brasil concentra-se principalmente nas regies CentroOeste, Sudeste e Sul, em virtude de a estarem presentes os maiores rebanhos do Pas.
importante ressaltar que, por mais que o Brasil apresente as condies necessrias produo
de biogs, como abundante biomassa e temperaturas elevadas, ele ainda detm uma pequena
produo, a qual se deve falta de investimentos governamentais, bem como prpria falta de
conhecimento, em especial do produtor rural, sobre essa fonte energtica, como relata diversos
trabalhos.
O presente trabalho tem por objetivo, atravs do uso de um prottipo de biodigestor, avaliar de
forma quantitativa a produo de biogs obtido por meio de resduos orgnicos alimentares
frente s matrias-primas tradicionais, o esterco.
MATERIAIS E MTODOS
Essa pesquisa descritiva. Para tanto, construmos 2 dois prottipos de biodigestor didtico em
laboratrio, um referente aos resduos alimentares, o outro, ao esterco, procurando estabelecer
as condies que sejam mais eficientes para sua produo.
Os materiais utilizados na construo dos 2 prottipos de biodigestor foram adquiridos em lojas
de material de construo e supermercado. A tabela 1 mostra a listagem dos materiais e as
quantidades.
Tabela 1 Materiais utilizados na construo dos prottipos do biodigestor.

Material
Quantidade
Recipiente de plstico cilndrico
2 unidades
Silicone
1 tubo
Sensor de metano
2 unidades
Cola quente
1 tubo
Controle Lgico Programvel (CLP)
1 unidade
O projeto consistiu em duas etapas:
1 ETAPA: consistiu na pesquisa bibliogrfica, em que reuni-semos informaes prvias acerca
do biogs, procurando identificar suas deficincias, pensando em melhorias e possveis solues
a fim de evitar desperdcios de material e otimizar melhor o tempo.
2 ETAPA: consistiu na pesquisa experimental, com a construo de dois2 prottipos (um
referente aos resduos alimentares; o outro referente ao esterco tradicional), em que
coletamoscoletaram-se, em perodos de tempo preestabelecidos, os dados das oscilaes na
varivel concentrao de metano produzido no recipiente. Na fase de monitoramento,
necessitou-se de um conhecimento mais especfico em linguagem computacional, para tanto,
contamos contou-se com o auxlio de um tcnico de Fsica, exemplificado na figura 1.
Figura 1 Montagem e instalao do sensor de metano nos prottipos.

O abastecimento do prottipo foi feito com esterco e resduos alimentares da cantina do IFRN, os
quais foram misturados at ficar uniforme.
O 1 experimento se utilizou de 210 g de resduos alimentares (cenoura, alface, beterraba, batata
e tomate) para a produo de biogs, durante um perodo de duas semanas, hermeticamente
vedado. Contatou-se que houve, desde o incio do monitoramento, um constante decrscimo da
produo, como mostrado no grfico 1:
Grfico 1- Produo de Metano (ppm) em 210g de Resduos Alimentares
Fonte: Autores
Tal comportamento na produo pode ser explicado pelas seguintes hipteses:
Teor de gua - o material a ser fermentado deve possuir em torno de 90 a 95 % de umidade em
relao ao peso. Tanto muita gua quanto pouca gua so prejudiciais (NEVES, 2010). No caso do
uso de restos alimentares, que j possuem um alto teor de gua, deveria se ter posto no mximo
90% de gua, no entanto, colocou-se 100% em relao ao peso, o que pode ter prejudicado a
atividade das bactrias.
Desequilbrio de nutrientes para as bactrias - os principais nutrientes para as bactrias so o
carbono, nitrognio e sais minerais, devendo-se haver um equilbrio na disposio desses
nutrientes (FERNANDES, 2009). As culturas vegetais so fontes muito ricas em carbono e por sua
quantidade ter sido bem maior que a do nitrognio, pode ter favorecido a no eficincia na
produo de biogs.
Temperatura - a temperatura ideal para produo entre 30 e 45 C, no entanto, o prottipo
esteve em temperatura ambiente em torno de 25 C, o que pode ter afetado o metabolismo das
bactrias.
O 2 experimento se utilizou de 150 g de esterco bovino para a produo de biogs, durante um
perodo de dois dias, em um recipiente hermeticamente vedado. Sua produo se deu de forma
muito rpida devido pequena quantidade utilizada, o que justifica o curto perodo de
monitoramento. Desta vez, contatou-se um rpido crescimento que, aps atingir um pico
mximo de 2 380 ppm, comeou a decair, como mostrado no grfico 2:
Grfico 2- Produo de Metano (ppm) em 150g de Esterco Bovino.
Fonte: Autores
Verificou-se que a produo foi muito mais eficiente em comparao a de resduos alimentares
(j era de se esperar), entretanto, sua queda pode ser explicada pelos seguintes fatores:
Desequilbrio de nutrientes para as bactrias - o esterco um produto muito rico em nitrognio.
Se houver nitrognio em excesso, ele no ser consumido e se acumular geralmente como
amnia. Se tal situao tiver ocorrido, pode ter matado exterminado as bactrias.
pH - o processo de digesto anaerbio varia sua acidez no meio. As bactrias quebram a matria
orgnica e produzem cidos orgnicos vegetais, que reduzem o pH. Depois de algum tempo, as
bactrias formadoras da matria comeam a agir transformando os cidos em metano,
neutralizando o cido e elevando o pH. Quando as populaes de bactrias formadoras de cido
e as formadoras de metano estiverem equilibradas, o pH se estabiliza em torno de 7
(FERNANDES, 2009). Em nosso caso, o contedo dos dejetos pode ter se tornado muito cido e
prejudicado a atividade das bactrias.
CONCLUSO
Diante de tudo o que foi exposto, percebemos percebe-se a necessidade de se investir na
produo dessa fonte renovvel, uma vez que ela traz ganhos econmicos, sociais e ambientais,
que superam as desvantagens decorrente de sua produo e uso. Para alcanar tal objetivo, de
fundamental importncia a atuao conjunta das iniciativas pblica e privada, no sentido de
subsidiar a implantao de biodigestores nas propriedades rurais, por exemplo, alm de
incentivar a divulgao de informaes sobre o biogs comunidade.
AGRADECIMENTOS
Agradecemos primeiramente a Deus, por nos dar fora e motivao na realizao desse trabalho.
s nossas famlias, que nos apoiam e incentivam ao estudo e a pesquisa e compreendem a
necessidade de termos que ficar vrias vezes na instituio em nosso turno inverso.
Ao nosso orientador, professor Kelvin Barbosa, pelas contribuies ao longo desse ano de
pesquisa.
Jailson Luiz, pelo auxlio tcnico prestado na etapa experimental.
Petrobras, em especial, por nos proporcionar essa experincia de iniciao a pesquisa cientfica
e contribuir, atravs da bolsa do Programa de Formao de Recursos Humanos (PFRH), para o
nosso crescimento acadmico.
REFERNCIAS
BARREIRA, Paulo. Biodigestores: Energia, Fertilidade e Saneamento para a Zona Rural. 3. ed. So
Paulo: cone, 2011.
COSTA, Lino da et al. BIOGS: Estudo das formas de obteno de gs e energia a partir de
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DEGANUTTI, R. P. et al. Biodigestores Rurais: Modelo Indiano, Chins e Batelada. Departamento
de Arquitetura, Artes e Representaes Grficas, UNESP: Bauru, 2002.
FERNANDES, Carlos. Disposio de Excretas no Meio Rural, 2009. Disponvel
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NEVES, Vera Lucia Vitorelli. Construo de Biodigestor para Produo de Biogs a Partir da
Fermentao de Esterco Bovino. 2010. 57 f. Dissertao (Graduao em Tecnologia em
Biocombustveis) - Faculdade de Tecnologia de Araatuba, Araatuba, 2010.
ROYA, Bruno et al. Biogs - Uma energia limpa. Revista Eletrnica Novo Enfoque, Rio de Janeiro,
v. 13, n. 13, 2011.
OLIVEIRA, Paulo Armando Victria de. Gerao e Utilizao de Biogs em Unidades de Produo
de Sunos. Concrdia: Embrapa Sunos e Aves, 2006.
PREVALNCIA DE VULVOVAGINITES EM MULHERES ATENDIDAS EM UMA UNIDADE DE SUDE

DO MUNICIPIO DE MACEI/AL
2
R. S. Chicuta (IC); C. T. Pereira (IC) ; A. L. L. Duarte (PQ) ; D. S. T. Pereira (PQ)

2
3
Instituto Federal de Alagoas (IFAL) - EAD/Cincias Biolgicas, Faculdade Maurcio de Nassau; Instituto Federal
de Alagoas (IFAL) - Campus Murici e-mail: dstpereira@gmail.com

(PQ) Pesquisador
RESUMO
A prevalncia de microrganismos na microbiota vaginal

e sua associao com sintomas vulvovaginais tem
destacada importncia mdico-social, pois alm de
causarem sintomas extremamente desconfortveis para
a mulher, podem ascender e comprometer o trato
genital superior. Neste contexto, o objetivo deste
estudo foi determinar a prevalncia de vulvovaginites
em mulheres de diferentes faixas etrias atendidas em
uma unidade de Macei, no perodo de janeiro a agosto
de 2010. Para tanto, foi realizado um levantamento dos
resultados citolgicos realizados nesse perodo no
laboratrio da Unidade de Sade da Famlia Vereador
Srgio Quintella, situada na rua Marqus de Tamandar,
s/n, Santa Lcia. No processo de reviso dos laudos,
foram identificadas as seguintes variveis: idade das
pacientes, diagnstico citolgico e reincidncia das

infeces. A anlise estatstica das variveis categricas
foi determinada pela converso dos dados para
percentual. Os resultados obtidos neste estudo
revelaram que: i. as vaginoses bacteriana apresentaram
maior incidncia entre mulheres com 29 a 50 anos; ii. O
principal agente causal das vaginoses bacterianas
identificadas foi Gardnerella sp; iii. durante o perodo do
estudo no foi registrado casos de reincidncia das
vulvovaginites; e iv. as cervicite e inflamaes
inespecficas apresentam maior prevalncia em
comparao ao nmero total de vulvovaginites
identificadas em mulheres atendidas na unidade de
sade vereador Srgio Quintella, no perodo de janeiro a
agosto de 2010.
PALAVRAS-CHAVE: Vulvovaginite; Gardnerella; Cervicite.
VULVOVAGINITIS PREVALENCE IN WOMEN ATTENDED IN A UNIT OF HEALTH

CITY OF MACEI / AL
ABSTRACT
The prevalence of microorganisms in the vaginal
microbiota and its association with vulvovaginal
symptoms have outstanding medical and social
importance, as well as causing extremely
uncomfortable for women symptoms may arise to
jeopardize the upper genital tract. In this context,
the aim of this study was to determine the
prevalence of vulvovaginitis in women of different
age groups treated in an Macei, in the period
January-August 2010. Therefore, a survey of
cytological results achieved in this period was
conducted in the laboratory Unity Family Health
Alderman Srgio Quintella, located on the street
Marques de Tamandar, s/n, Santa Lucia. Age of
patients, cytologic diagnosis and recurrence of
KEY-WORDS: Vulvovaginitis; Gardnerella; Cervicitis.
infections: In the review process of reports, the

following variables were identified. Statistical
analysis of categorical variables was determined by
converting the data into a percentage. The results
of this study revealed that: i. the bacterial vaginosis
had a higher incidence among women 29-50 years;
ii. The main causal agent of bacterial vaginosis was
identified Gardnerella sp; iii. during the study period
was not recorded cases of repeated vulvovaginitis;
and iv. the nonspecific cervicitis and inflammation
have a higher prevalence compared to the total
number of identified vulvovaginitis in women
attending the health facility Alderman Sergio
Quintella, from January to August 2010.
[D1] Comentrio: A fonte deve ser

Calibri
PREVALNCIA DE VULVOVAGINITES EM MULHERES ATENDIDAS EM UMA UNIDADE DE SUDE

DO MUNICIPIO DE MACEI/AL
INTRODUO
A flora vaginal normal constituda por uma grande variedade de microrganismos, que se
modificam durante o processo fisiolgico normal de amadurecimento da mulher. Quando h um
desequilbrio da microbiota vaginal, pode ocorrer o predomnio de determinada flora em
detrimento de outra, fazendo com que essas mulheres passem a apresentar um quadro de
vaginite infecciosa (OLIVEIRA & SOARES, 2007).
A microbiota vaginal composta por lactobacilos, cocobacilos e enterobactrias capazes
de manter cido o pH vaginal (CARVALHO et al., 2007; GOMPEL & KOSS, 1997). O desequilbrio na
flora vaginal geralmente est associado a processos patognicos as vaginites que se manifestam
por meio de corrimento vaginal, associado a um ou mais dos seguintes sintomas inespecficos:
prurido vulvovaginal, dor ou ardor ao urinar e sensao de desconforto plvico (DONDERS et al.,
2000).
A vaginose bacteriana considerada, atualmente, a infeco vaginal de maior prevalncia
em mulheres em idade reprodutiva e sexualmente ativas. Juntamente com a candidase e a
tricomonase correspondem a 90 % dos casos de infeces vaginais, sendo que a vulvovaginites
bacteriana ocorre em 35 a 50 % dos casos, enquanto a candidase ocorre em 20 a 40 % e a
tricomonase em 10 a 30 % (OLIVEIRA & SOARES, 2007).
As doenas transmitidas pelo contato sexual (DST) esto atualmente entre as cinco
principais causas da demanda por servios de sade e podem provocar, em curto prazo, dor e
sofrimento. Alm disso, sabe-se que as vaginites quando associada a outras doenas
sexualmente transmissveis (DST) aumentando a magnitude da infeco e dificultando o
tratamento.
Atualmente as vaginoses se apresentam como uma das principais queixas relacionadas
aos problemas ginecolgicos descritos na literatura. O relato da prevalncia das infeces
vaginais de grande importncia, uma vez que, exercem consequncias sobre a fertilidade
feminina, alm de estarem relacionadas a diferentes complicaes perinatais (corioamniotites,
partos prematuros e infeces neonatais) (GOMES, 2003). Neste contexto, este estudo visa
contribuir para a compreenso sobre a prevalncia de microorganismos associados aos sintomas
de vulvovaginites.
MATERIAIS E MTODOS
Local de estudo
Este estudo foi realizado na Unidade de Sade da Famlia Vereador Srgio Quintella,
situada na Rua Marqus de Tamandar, s/n, Santa Lcia, municpio de Macei/AL.
Amostragem
Foram utilizados os laudos dos resultados dos exames citopatolgicos de Papanicolau
realizados na Unidade de Sade da Famlia Vereador Srgio Quintella no perodo de janeiro de
2010 a agosto de 2012.
Na avaliao dos resultados dos exames foi utilizado um formulrio prprio para coleta de
informaes sobre a idade da paciente, predomnio da populao microbiana (Lactobacillus sp,
Gardnerella sp, Candida sp, Trichomonas sp e a presena de uma flora bacteriana escassa),
ocorrncia de diagnsticos parciais como a cervicite inespecfica, grau de inflamao (leve,
moderado ou acentuado) e casos de reincidncia de vulvovaginites.
Anlise Estatstica dos Dados
A anlise estatstica das variveis categricas foi determinada pela converso dos dados
para percentual.
RESULTADOS E DISCUSSO
Foram realizados 116 exames citolgicos no perodo de janeiro a agosto de 2010 na
Unidade de Sade Vereador Srgio Quintella, no Municpio de Macei/AL. Desses apenas nove
dos resultados registrados foram inconclusivos, sendo excludos do nosso estudo. A faixa etria
mdia das pacientes atendidas na unidade de sade, no perodo do estudo, variou entre 18 a 72
anos.
Dos 107 registros dos resultados analisados observamos a existncia de alteraes da
homeostase do ecossistema vaginal em 74,77 % dos diagnsticos. Essas alteraes foram
identificadas como cervicite inespecfica - em 36,45 % dos exames, inflamao inespecfica - em
12,15 % e vaginose bacteriana ou mictica - em 26,17 % dos exames analisados.
A anlise dos registros dos exames de Papanicolau revelou uma alta ocorrncia de
cervicites (36, 45 %) e inflamaes inespecficas (12,15 %) que podem se tornar um fator de risco
na transmisso e contaminao de diversas doenas sexualmente transmissveis. A Tabela 1
ilustra a distribuio etria dos casos de cervicite e inflamao que apresentaram maior
incidncia em comparao com os casos de vulvovaginites (26,17 %) identificados durante o
exame citopatolgico.
A anlise dos exames positivos para vaginose bacteriana apresentaram maior incidncia
em comparao as vaginoses por Candida sp. No foram registrados resultados de vaginose por
Trichomonas no perodo analisado. A Gardnerella sp foi identificada em 14,02 % dos casos de
vaginose. As demais vaginoses diagnosticadas no perodo do estudo (8,41 %) foram ocasionadas
por outras bactrias. Estes resultados so de acordo com as observaes realizadas por Dias
(1999) que verificou que dentre as alteraes cervico vaginais analisadas a maior frequncia de
infeces genitais foram de origem bacteriana, sendo baixa a incidncia de infeces por
Trichomonas vaginalis e Candida sp.
Tabela 1 - Distribuio etria dos casos positivos para cervicite e inflamao inespecifica em
comparao com o percentual de resultados positivos registrados na Unidade de Sade Vereador
Srgio Quintella, no perodo de janeiro a agosto de 2010.
Faixa etria
Cervicite Inespecfica
Inflamao Inespecfica
Casos Normais
18 a 28 anos
14,02 %
0,93 %
7,74 %
29 a 39 anos
11,21 %
2,80 %
5,61 %
40 a 50 anos
4,67 %
4,67 %
3,73 %
a 50 anos
6,54 %
3,73 %
8,41 %
O percentual de infeco para vulvovaginite de origem mictica (candidase) foi menor

(3,74 %) em comparao aos registros positivos de vulvovaginite de origem bacteriana (22,43 %).
Ao se estratificar a prevalncia das vulvovaginites nos diferentes grupos etrios, observou-se a
mesma distribuio nas faixas etrias entre 29 a 39 anos e 40 a 50 anos (Tabela 2). Estes
resultados esto de acordo com as observaes de Doria (2003), que ao analisar os agentes
causais das infeces cervico vaginais observou que dos 29,1 % das infeces diagnsticas, a
vaginose bacteriana foi a mais frequente estando presente em 19,7 % dos casos.
Apesar da candidase e das vaginoses bacterianas no terem uma conotao de
transmisso sexual, a prtica sexual, sem dvida, est fortemente correlacionada com o
aparecimento e a manuteno das vulvovaginites (GOMES, 2003). Segundo Fenkci et al. (2002), o
Mycoplasma hominis pode estar presente de forma no patognica em 8 % das mulheres
sexualmente ativas enquanto que a Gardenerella vaginalis apresenta-se frequentemente na flora
vaginal de mulheres virgens podendo torna-se patognica com a maturidade sexual (TABRIZI et
al., 2006).
[D2] Comentrio: So somente trs

autores.
No perodo analisado no foi identificado nenhum caso de reincidncia de vulvovaginites

na Unidade de Sade Vereador Srgio Quintella. Estes dados eram esperados visto que casos de
reincidncia de vulvovaginites so relatados na literatura em sua maioria para vaginites de
origem mictica (candidase).
Tabela 2 - Distribuio etria dos casos positivos para vulvovaginites registrados na Unidade de
Sade Vereador Srgio Quintella, no perodo de janeiro a agosto de 2010.
Faixa etria
Vulvovaginite Bacteriana
Vulvovaginite Mictica
Casos Normais
18 a 28 anos
3,73 %
0,93 %
7,47 %
29 a 39 anos
8,41 %
1,90 %
5,61 %
40 a 50 anos
8,41 %
0,00 %
3,73 %
a 50 anos
1,90 %
0,93 %
8,41 %
[D3] Comentrio: No deve conter

linhas internas. Em tabelas, devem ter
somente trs linhas horizontais.
CONCLUSES
Os resultados obtidos neste estudo revelaram que: i) As vulvovaginites de origem
bacteriana apresentaram igual incidncia entre mulheres das faixas etrias de 29 a 39 e 40 a 50
anos; ii) O principal agente causal das vulvovaginites bacterianas identificadas foi Gardnerella sp;
iii) Durante o perodo do estudo no foi registrado casos de reincidncia das vulvovaginites; e iv)
As cervicite e inflamaes inespecficas apresentam maior prevalncia em comparao ao
nmero total de vulvovaginites identificadas em mulheres atendidas na unidade de sade
vereador Srgio Quintella, no perodo de janeiro a agosto de 2010.
REFERNCIAS
CARVALHO, A. F. N.; CABAU, D. A. L. G.; MIQUELO, A.K.M.B.; HASENACK, B.S.; PINHEIRO, E.H.T.;
MARQUEZ, A.S. Prevalncia de cervicite, vaginites e vaginose bacteriana em mulheres
climatricas e no climatricas. UNOPAR Cient. Cinc. Biol. Sade, Londrina, v. 9, n. 1, p. 41-48,
out. 2007.
DIAS, A. L. Soroprevalncia de Treponema pallidum, hepatite B, HIV e infeces cervicovaginais
em mulheres com alteraes cervicais HPV induzidas. Dissertao de Mestrado apresentada ao
Curso de Ps-Graduao em Medicina, rea de Tocoginecologia da Faculdade de Cincias
Mdicas da Universidade Estadual de Campinas, 1999.
DONDERS, G. G; VEREECKEN, A.; DEKEERSMAECKER, A.; VAN BULCK, B.; SPITZ, B. Wet mount
reflects functional vaginal lactobacillary flora better than Gram stain. J Clin Pathol. 2000.
DORIA, RAQUEL FERREIRA FERRAZ DO LAGO. Seguimento de usurias de dispositivo intrauterino
com e sem vaginose bacteriana. Dissertao de Mestrado apresentada Ps-Graduao da
Faculdade de Cincias Mdicas da Universidade Estadual de Campinas, 2003.
FENKCI V, YILMAZER M, AKTEPE OC. Have Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis
infections any significant effect on women fertility? Infez Med 2002; 10:220-3.
GOMES, FRANCIS DE ASSIS MORAES. Valor do exame clnico especular e da anamnese para o
diagnstico do corrimento vaginal. Tese de Doutorado apresentada Ps-Graduao da
Faculdade de Cincias Mdicas da Universidade Estadual de Campinas,2003.
GOMPEL, C.; KOSS, L. Citologia ginecolgica e suas bases anatomoclnicas. So Paulo, Manole,
1997, 450 p.
OLIVEIRA, E. H.; SOARES, L. F. Prevalncia de Vaginites infecciosas atravs da Citologia Clnica: Um
estudo no Laboratrio Central de Sade Pblica do Piau. RBAC, Rio de Janeiro, v. 39, n. 1, p. 3335, 2007.
TABRIZI SN, FAIRLEY CK, BRADSHAW CS, GARLAND SM. Prevalence of Gardnerella vaginalis and
Atopobium vaginae in Virginal Women. Sex Transm Dis 2006.
PRESENA DE BIOINDICADORES DE QUALIDADE EM CASCAS DE AMEIXA (Ximenia americana L.)

COMERCIALIZADAS NA FEIRA LIVRE DE JUCURUTU/RN
F. A. G. Rocha, E. D. M. de Pontes , P. A. Silva, M. K. M. Gundim, Y. E. de Medeiros , M. F. F. Arajo.
Lder do Ncleo de Pesquisas em Plantas Medicinais e Condimentares NUPLAC e Professor de Biologia e
2
Microbiologia de Alimentos do IFRN, Campus Currais Novos. E-mail: angelo.gurgel@ifrn.edu.br Alunas do Curso
Tcnico em Alimentos, Modalidade Integrado e membros do Ncleo de Pesquisas em Plantas Medicinais e
Condimentares NUPLAC/IFRN, Campus Currais Novos. E-mails: eduarda_dmpontes@hotmail.com;
3
patynascimento96@gmail.com; milenamedeirosg@hotmail.com; miminelvira@hotmail.com Biloga, Doutora
em Cincias. Professora Adjunta III do Departamento de Microbiologia e Parasitologia do Centro de Biocincias
da UFRN. E-mail: mag@cb.ufrn.br
1
RESUMO
O uso de plantas medicinais por todo o mundo
vem se ampliando cada vez mais, especialmente entre a
populao mais carente. Dentre outros fatores, isso
ocorre dado o alto custo dos medicamentos sintticos e
s dificuldades no acesso aos sistemas de sade. Na
regio nordeste do Brasil, as prticas relacionadas ao
uso das plantas medicinais so comuns, tanto em
ambientes rurais como urbanos. As plantas medicinais
normalmente so comercializadas em feiras livres onde

em geral, as condies de higiene no so satisfatrias.
Ficam expostas contaminao por microrganismos
patognicos e/ou deteriorantes capazes de promover
nos usurios infeces, intoxicaes ou toxinfeces de
gravidade varivel. Dentre os microrganismos
potencialmente presentes neste tipo de produto esto
Escherichia coli e fungos toxignicos.
PALAVRAS-CHAVE: Plantas medicinais, contaminao microbiolgica, preparos tradicionais, medicina popular,

feira livre.
PRESENCE OF QUALITY BIOINDICATORS IN BARK OF AMEIXA (Ximenia americana L.) SOLD IN

STREET FAIR OF JUCURUTU/RN
ABSTRACT
The growing use of medicinal plants throughout
the world has been increasing more and more,
especially among the poor population. This is due to the
high cost of synthetic drugs and difficulties in access to
health systems. It is in the northeast where the practices
related to the use of medicinal plants is intense in both
rural and urban locations. Medicinal plants are usually
marketed in free trade where hygiene conditions are not
satisfactory. In this context, medicinal plants are

exposed to contamination by pathogenic and / or
spoilage could promote users in infections, poisonings or
intoxications of varying severity microorganisms. Among
the microorganisms potentially present in this type of
product are Escherichia coli and toxigenic fungi.
KEY-WORDS: Medicinal plants, microbiological contamination, traditional preparations, traditional
medicine, street market.
PRESENA DE BIOINDICADORES DE QUALIDADE EM CASCAS DE AMEIXA (Ximenia americana L.)

COMERCIALIZADAS NA FEIRA LIVRE DE JUCURUTU/RN
INTRODUO
O uso de plantas medicinais para fins teraputicos acompanha a histria das civilizaes.
O homem, para suprir suas necessidades, alimentava-se de espcies da flora e desse modo,
selecionava empiricamente o que poderia ou no ser consumido. Neste processo, percebeu-se
que certas espcies, quando consumidas de determinada maneira apresentavam efeito
teraputico sobre algumas enfermidades. Tal conhecimento foi sendo acumulado e transmitido
de gerao em gerao, sobrevivendo at os dias atuais como parte integrante dos diversos
sistemas de medicina tradicional. Embora grande parte da populao mundial recorra ao uso das
plantas medicinais, o advento das drogas sintticas afetou de forma negativa o seu consumo,
resultando em perda de espao na preferncia dos consumidores (JUNIOR et. al., 2005; LORENZI;
MATOS, 2002; SCHOLZ et al., 2008; SOUZA; RIBEIRO, 2008). Contudo, nos ltimos anos, uma
complexa conjuno de fatores socioeconmicos, culturais e polticos tm influenciado
positivamente o consumo mundial deste tipo de recurso teraputico (NUNES et. al., 2003;
OLIVEIRA et. al., 2006).
Graas sua diversidade cultural e ecolgica nica, o Brasil conta com uma medicina
tradicional rica em recursos. Segundo o Ministrio do Meio Ambiente APUD Silveira, 2003,
estima-se que as populaes indgenas brasileiras dominem a aplicao medicinal de 1300
plantas nativas. Tamanha diversidade encontra eco na ampla aceitao das plantas medicinais
junto populao: estudos apontam que 90% da populao economicamente carente da regio
nordeste recorre a este tipo de recurso teraputico (MATOS, 2002; MOSCA; LOIOLA, 2009).
Nos ambientes urbanos, as plantas medicinais brutas e seus preparos derivados so, de
modo geral, comercializados em feiras livres, sem nenhuma legislao especfica que
regulamente a atividade, impossibilitando aes regulatrias adequadas qualidade dos
produtos e proteo da sade dos seus usurios (ROCHA et al., 2013a).
Ambientes socialmente construdos e aceitos, as feiras livres caracterizam-se pela ampla
diversidade sociocultural e pelo alto fluxo de pessoas de diversas origens que a utilizam como
espao de convivncia e aquisio dos produtos que lhes so necessrios. Adicionalmente, em
geral esto presentes condies inadequadas do ponto de vista higinico e sanitrio,
relacionadas estrutura fsica, logstica e ausncia de boas prticas na exposio,
armazenamento e comercializao dos produtos. Tais condies possibilitam a introduo e a
proliferao de microbiota indesejvel, incluindo espcies patognicas para o homem (ALMEIDA;
PENA, 2011; ROCHA et. al., 2010a; WORLD HEALTH ORGANIZATION, 2007).
A qualidade microbiolgica das plantas medicinais um aspecto importante quando se
considera o fato de que a presena de contaminantes de natureza biolgica pode afetar tanto a
efetividade, quanto a segurana no tratamento (AMARAL et al., 2003; SATOMI et al., 2005) .
Reconhecendo o risco sade coletiva representado pela veiculao de microrganismos
patognicos em produtos da medicina tradicional, a Organizao Mundial da Sade (WORLD,
HEALTH ORGANIZATION, 2007), aponta a presena potencial em plantas medicinais de espcies
de fungos toxignicos dos gneros Aspergillus, Penicillium e Fusarium capazes de produzir
aflatoxinas nas condies presentes nas feiras livres e de Escherichia coli, bacilo gram negativo
bioindicador de contaminao fecal, cujas cepas patognicas para o homem podem provocar
infeces graves (FRANCO; LANDGRAF, 2008).
Independentemente de sua qualidade microbiolgica, as plantas medicinais so
consumidas pela populao sob diversas formas. Dentre as quais se destacam pela sua alta
aplicabilidade, as infuses, decoces e maceraes (MATOS, 1987). As infuses e decoces so
processos extrativos a quente, utilizados no preparo de chs. Contrariamente, as maceraes,
so processos extrativos a frio, no qual as espcies vegetais so submersas em gua potvel
temperatura ambiente, por perodo de at 24 horas, em dependncia de sua estrutura fsica e
caractersticas prprias. O preparo atravs das maceraes indicado no caso de espcies
bioativas que contm em seu fitocomplexo princpios ativos volteis ou termossensveis (BRASIL,
2010b; MATOS, 2002).
Embora seja esperado que no preparo das maceraes, os fitoqumicos bioativos
presentes nas plantas medicinais sejam solubilizados, deve-se considerar o fato de que as
condies presentes durante o processo podem ser favorveis proliferao da microbiota j
presente na planta medicinal utilizada, representando risco potencial sade humana.
Considerando a alta aceitao das plantas medicinais no Rio Grande do Norte/RN, bem
como a ausncia de regulamentao e as inadequaes de cunho higinico e sanitrio presentes
em suas feiras livres (MOSCA; LOIOLA, 2009; ROCHA et al., 2013a; ROCHA et al., 2013b)
objetivou-se quantificar as densidades populacionais de Escherichia coli, bolores e leveduras em
cascas de Ameixa (Ximenia americana L.) comercializadas na feira livre de Jucurutu, Rio Grande
do Norte, classificando-as como adequadas ou no ao consumo humano na forma de
maceraes.
MATERIAIS E MTODOS
Conforme as normas da Associao Brasileira para Norma Tcnicas, o estabelecimento de
planos de amostragem e procedimentos para inspeo por atributos (ASSOCIAO BRASILEIRA
PARA NORMAS TCNICAS, 1985), cinco amostras de Ameixa (Ximenia americana L.) foram
coletadas no ms de fevereiro de 2014, na feira livre do municpio de Jucurutu, situado na Regio
Oeste Potiguar e microrregio Vale do A no estado do Rio Grande do Norte, sob coordenadas
062024,0Sul, 370112,0 Oeste (BRASIL, 2005; INSTITUTO BRASILEIRO DE GEOGRAFIA E
ESTATSTICA, 2011; RIO GRANDE DO NORTE, 2009).
As anlises foram realizadas no Laboratrio de Microbiologia de Alimentos/Biologia
Molecular do IFRN (MicroBio) conforme os protocolos adequados a cada um dos bioindicadores
testados (ABBA et al.,2009; BRASIL, 2003; SILVA et al. 2007; WANNIPA et al., 2007).
Foram realizadas diluies decimais seriadas (10-1 a 10-6), a partir das quais foram
semeadas duplicatas de placas de petri, variando-se o mtodo conforme o bioindicador
pesquisado. Para a quantificao de bolores e leveduras, utilizou-se semeadura em superfcie
(spread plate), com incubao a 251C/5 dias. Para a deteco e quantificao de Escherichia
coli (E. coli), a semeadura foi realizada em profundidade (pour plate), com uso do gar MUG-VRB.
Neste caso, as placas foram incubadas a 352C/24 horas. A confirmao das colnias tpicas de
E. coli foi realizada via fluorescncia sob iluminao ultravioleta de ondas longas (366 nm).
Para efeito de clculo, foram consideradas as placas com intervalo entre 25 e 250
colnias, excetuando-se os casos especiais para os quais foram aplicadas as regras descritas por
Silva et al. (2007), sendo os resultados expressos em UFC/g.
Uma vez que inexistem parmetros legais no Brasil que balizem a qualidade
microbiolgica de plantas medicinais e preparos tradicionais comercializados em feiras livres, foi
adotado os limites recomendados pela RDC 10/2010 para a preparao de macerao que
consiste no contato da droga vegetal com gua, temperatura ambiente, por tempo
determinado para cada droga vegetal.
Os resultados obtidos a partir das cinco amostras analisadas esto expressos na tabela 1.
Tabela 1: Densidades populacionais de E. coli, , bolores e leveduras presentes nas
amostras de plantas medicinais analisadas.
Amostra
Escherichia coli (UFC/g)
Bolores e leveduras (UFC/g)
1
2
3
1,5x10
2
1,0x10
ausente
3,7x10
7
1,3x10
6
1,8x10
4
5
2,5x10
1
8,0x10
2,8x10
5
6,7x10
Em 80% das amostras analisadas detectou-se a presena de E. coli, caracterizando-as

como inadequadas ao consumo humano perante os limites legais adotados no presente trabalho,
equivalente a 10 UFC/g. A presena deste microrganismo em plantas medicinais comercializadas
no Rio Grande do Norte j havia sido relatada por Rocha et al. (2010a) e Medeiros et al. (2012).
Em termos mundiais, estudo realizado em mercados populares de ervas em Riyadh na Arbia
Saudita, Alwakeel (2008), constatou que 31% das amostras testadas continham densidades de
at 7,0x105 UFC/g. Embora no tenham estabelecido as densidades do microrganismo nas
plantas medicinais analisadas, Idu et al. (2010) detectaram a sua presena em 80% das amostras
provenientes de feiras situadas em Benin, Nigria.
A presena de E. coli nas amostras analisadas indica o risco da presena de patgenos
entricos veiculados atravs da rota fecal-oral. preciso tambm considerar a possibilidade da
presena de cepas de E. coli patognicas para humanos: E. coli enteropatognica Clssica (EPEC),
E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enterotoxigenica (ETEC), E. coli enterro-hemorragica (EHEC) e
E. coli enteroagregativa (EggEC) (FRANCO; LANDGRAF, 2008).
Em relao aos bolores e leveduras, 100% das amostras testadas consideradas
inadequadas ao preparo de maceraes perante o limite de 103 UFC/g estabelecido na RDC
10/2010 (BRASIL, 2010b). Comparativamente, Rocha et al. (2010a) relataram em plantas
medicinais comercializadas no Estado do Rio Grande do Norte, densidades de tais
bioindicadores de at 1,9x105 UFC/g. Idu et al., (2010) descrevem altas densidades populacionais
de fungos em 93% das amostras coletadas em feiras livres de Benin, Nigria, onde reportaram
densidades de at 1,1x105 UFC/g.
Os fungos apresentam estruturas denominadas esporos que resistem ao calor, radiaes
ionizantes, compostos qumicos, desidratao e congelamento, cuja reverso em forma
vegetativa pode proporcionar a sua multiplicao e consequente deteriorao dos produtos.
(FRANCO; LANDGRAF, 2008). No caso da contaminao fngica de plantas medicinais, o
desenvolvimento das formas vegetativas (miclio) pode resultar na degradao enzimtica de um
ou mais compostos qumicos bioativos presentes no fitocomplexo da planta medicinal, gerando
alteraes na efetividade e/ou segurana do seu uso (ALWAKEEL, 2008; AMARAL et al., 2003).
Devemos tambm considerar o risco da produo de micotoxinas, uma vez que as altas
densidades de bolores e leveduras observadas nas plantas medicinais testadas podem ser
interpretadas como indicativas do risco da presena de espcies toxignicas de Aspergillus,
Penicillium e Fusarium. As espcies toxignicas destes Gneros representam risco humanos
pelo seu potencial de produzirem micotoxinas nas condies de armazenamento, podendo ser
encontradas em plantas medicinais de baixa qualidade microbiolgica (GRIGORIAN et a., 2011;
WORLD HEALTH ORGANIZATION, 2007).
Os riscos ficam ainda mais evidentes quando a Ameixa, com fins teraputicos, utilizada
no preparo de maceraes. Contrariamente aos processos extrativos a quente utilizados no
preparo dos chs (infuso e decoco), as maceraes no envolvem altas temperaturas, mas sim
o contato da matria vegetal com gua, por um determinado tempo de at 24 horas (BRASIL,
2010b). Tal procedimento no apenas evita a destruio trmica dos microrganismos, como pode
favorecer a sua proliferao no produto final a ser ingerido pelo usurio. Neste contexto, a
presena de microrganismos indesejveis assume especial relevncia diante da constatao de
que entre seus provveis usurios estaro idosos e crianas enfermos, organicamente mais
suscetveis a agresses sua sade.
CONCLUSO
Considerou-se 100% das amostras como inadequadas ao preparo de maceraes. O
resultado compatvel com as inadequaes de cunho higinico e sanitrio presentes na
estrutura fsica e prticas de comercializao observadas no ponto de coleta.
urgente que seja criada legislao especfica para o comrcio de produtos da medicina
tradicional em feiras livres, de modo a estabelecer parmetros mnimos de qualidade e
segurana para os mesmos.
Recomendamos o desenvolvimento de aes educativas voltadas capacitao em boas
prticas dos comerciantes de plantas medicinais atuantes em feiras livres. Tal ao pode
contribuir para a melhoria dos produtos disponveis e para a proteo sade coletiva.
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PREVALNCIA DE MICRORGANISMOS BIOINDICADORES EM GARRAFADAS COMERCIALIZADAS

NA FEIRA LIVRE DA CIDADE DE CURRAIS NOVOS RN
F. A. G. Rocha, P. A. Silva, M. K. M. Gundim, E. D. M. de Pontes , J. O. Anunciao , M. F. F. Arajo.
2
Microbiologia de Alimentos do IFRN, Campus Currais Novos. E-mail: angelo.gurgel@ifrn.edu.br Alunos do Curso
Tcnico em Alimentos, Modalidade Integrado e membros do Ncleo de Pesquisas em Plantas Medicinais e
Condimentares NUPLAC/IFRN, Campus Currais Novos. E-mails: patynascimento96@gmail.com;
3
milenamedeirosg@hotmail.com; eduarda_dmpontes@hotmail.com; jaciaranuplac@gmail.com. Biloga,
Doutora em Cincias. Professora Adjunta III do Departamento de Microbiologia e Parasitologia do Centro de
Biocincias da UFRN. E-mail: mag@cb.ufrn.br
1
RESUMO
As dificuldades de acesso aos sistemas de sade
e custo impeditivo dos medicamentos alopticos vm
impulsionando o crescimento no uso de recursos da
medicina tradicional, principalmente entre a parte da
populao mais pobre. Uma das formas de consumo
mais frequentes so as garrafadas, as quais so
comercializadas comumente em feiras livres onde, em
geral, as condies de higiene e de estrutura fsica so
precrias. Neste contexto, as garrafadas ficam
expostas contaminao por microrganismos
patognicos e/ou deteriorantes capazes de promover

nos usurios infeces, intoxicaes ou toxinfeces de
gravidade varivel. Dentre os microrganismos
potencialmente presentes, destacam-se Escherichia coli,
Staphylococcus aureus, fungos toxignicos e bactrias
aerbias mesfilas. Segundo a OMS, a veiculao destes
patgenos em plantas medicinais ou em seus derivados
configura um relevante problema de Sade Pblica.
PALAVRAS-CHAVE: Medicina tradicional, Plantas medicinais, Remdio caseiro, Contaminao, Feira livre.
PREVALENCE OF MICROORGANISMS BIOINDICATORS IN "GARRAFADAS" TRADED IN FAIR FREE

OF CITY OF CURRAIS NOVOS RN
ABSTRACT
The difficulties of access to the health systems
and impeditive cost of the alopatic medicines are driving
the growth in the resource use of the traditional
medicine, principally between the poorest population.
One of the more frequent forms of consumption is the
garrafadas" in which are dealt generally in open
markets where, in general, the hygiene conditions and
physical structure are poor. In this context, the
garrafadas" are exposed to contamination by
pathogenics microorganisms and/or spoiled products

able to spread to the users, infections, intoxications or
toxinfections of variable intensity. Among the
potentially present microorganisms, stand out
Escherichia coli, Staphylococcus aureus, toxigenic
funguses and mesophilic aerobic bacteria. According to
the WHO, the placement of these pathogens in
medicinal plants or in his derivates shapes a relevant
problem
of
Public
Health
KEY-WORDS: Traditional medicine, Medicinal plant, Homemade medicine , Contamination, Free markets.
PREVALNCIA DE MICRORGANISMOS BIOINDICADORES EM GARRAFADAS COMERCIALIZADAS

NA FEIRA LIVRE DA CIDADE DE CURRAIS NOVOS - RN
INTRODUO
O uso de plantas no tratamento de doenas foi uma prtica iniciada desde os primrdios da
civilizao, tendo sempre como meta a recuperao da sade (SILVA, 2001). Atravs do efeito de
algumas plantas por ele ingeridas, o homem, com o passar do tempo, observou que se
controlasse a dosagem, essas plantas poderiam ser usadas para outros fins alm da alimentao,
como curar e/ou aliviar suas dores e enfermidades. Alm disso, o homem tambm observou os
animais e as plantas que eles utilizavam para cur-los e o efeito que estas causavam neles e em si
prprio (LORENZI; MATOS, 2002; DANTAS, 2007a).
Segundo a Organizao Mundial de Sade (OMS) 65 a 80% da populao mundial,
especialmente em pases em desenvolvimento, utilizam produtos base de plantas medicinais no
tratamento de suas doenas para vrias finalidades e sob diversas combinaes, com base em
evidncias histricas (CALIXTO, 2000; RAHMAN; SINGHAL, 2002; FUNARI; FERRO, 2005). Esse fato
pode ser explicado pelo acesso limitado a medicamentos alopticos, que ocorre em comunidades
carentes, levando a populao a uma busca por alternativas teraputicas. Assim as plantas
medicinais tornam-se o principal ou nico recurso disponvel em muitos casos (RITTER et al
2002).
O comrcio popular de plantas medicinais ocorre predominantemente em feiras livres,
espaos pblicos voltados atividade mercantil cclica. Caracterizadas pela estrutura no
permanente e condies de higiene geralmente precrias, as feiras livres exercem um relevante
papel na integrao entre comunidades distintas. Tais espaos socialmente acordados
contribuem de forma positiva para o intercmbio cultural e para o fluxo de capitais entre as
comunidades da regio na qual se situam. O seu papel integrador se revela em maior proporo
no caso das feiras realizadas nos municpios da regio Norte e Nordeste do Brasil (ALMEIDA;
PENA, 2011; BRASIL, 1998; MINNAERT; FREITAS, 2010; ROCHA, 2007; ROCHA et al., 2010).
A preocupao com as precrias condies de higiene tornam-se maior quando
consideramos que as plantas medicinais em si, isto , o produto no padronizado disponvel in
natura ou no nas feiras livres ao longo do territrio nacional, no so objeto de fiscalizao
adequada, voltada manuteno de parmetros de segurana e qualidade (ROCHA et al., 2010).
Neste contexto esto inseridos os raizeiros, figuras marcantes com espao garantido nas ruas,
em feiras livres e mercados, onde comercializam plantas medicinais e preparos tradicionais,
orientando quais as suas indicaes e formas de uso, apesar de no terem, em geral, um
conhecimento muito profundo acerca da efetividade da ao farmacolgica e segurana no uso
dos vegetais que comercializam, de modo geral, desconsiderando seus efeitos adversos e
interaes medicamentosas (ARAJO et al, 2003).
Entre os medicamentos preparados pelos raizeiros esto as garrafadas, que so definidas
por Camargo (1985) como sendo uma combinao de plantas medicinais, cujo solvente utilizado
geralmente aguardente ou vinho branco e raramente gua, onde podem ser tambm
acrescentados elementos de origem animal ou mineral. Essas formulas caseiras so
comercializadas nas feiras livres, prometendo ao seu consumidor benefcios seguros, j que
segundo o discurso adotado pelos que as comercializam, trata-se de produto obtido a partir de
fonte natural. Entretanto, tais produtos podem representar riscos sade humana, j que na
maioria dos casos no existe um controle de higiene durante a sua cadeia produtiva, desde a
qualidade da matria prima, manipulao, armazenamento e adequao higinico-sanitrio dos
pontos de comercializao, em geral inadequados, o que os torna imprprios para
comercializao. Sob tais condies as garrafadas produzidas e comercializadas podem
apresentar qualidade microbiolgica deficiente, veiculando patgenos capazes de promover nos
usurios infeces, intoxicaes ou toxinfeces de gravidade varivel, com destaque para
Escherichia coli, Staphylococcus aureus e fungos toxignicos.
Como os fungos podem ser careados pelo ar atmosfrico, pode ocorrer contaminao das
plantas, antes e aps sua colheita, como tambm durante o processamento e armazenamento.
Entre os principais gneros detectados no Brasil, destacam- se: Cladosporium, Fusarium,
Aspergillus, Penicillium e Rhizopus. A presena destes fungos em plantas medicinais e derivados
pode ser prejudicial sade humana, uma vez que estes podem causar micotoxicoses, quando
introduzidos por via oral, ou outras doenas, quando inalados (CORRA, 1998; KNEIFEL et al.,
2001; LACAZ et al., 2002).
Staphylococcus aureus uma bactria Gram positiva e anaerbia facultativa, que ocorre de
forma isolada, aos pares e em aglomerados. S. aureus possvel de crescimento em 10% a 20%
de NaCl, sendo a principal espcie patognica para humanos do Gnero Staphylococcus, graas
ao seu potencial toxignico. O microrganismo no componente natural da microbiota presente
em plantas medicinais, sendo, portanto, considerado contaminante. Naturalmente, ocorre nas
fossas nasais de humanos, a partir das quais pode contaminar a pele, utenslios, superfcies de
trabalho e, por consequncia, produtos manipulados sob baixas condies de higiene. Quando
inoculado em alimentos e sob condies adequadas, o S. aureus gera toxinas (A, B, C 1 , C 2 , C 3, D e
E), envolvidas em surtos de intoxicao alimentar (FRANCO; LANDGRAF, 2008; SILVA et al., 2007).
O grupo denominado de bactrias aerbias mesfilas comumente empregado para
indicar de modo geral, a qualidade sanitria dos alimentos. Quando suas populaes superam
certos limites legais, bioindicam sua insalubridade, mesmo que patgenos estejam ausentes e
que no tenham ocorrido alteraes nas condies organolpticas. Altas densidades de aerbios
mesfilos em alimentos no perecveis so indicativas do uso de matria-prima ou
processamento insatisfatrio, sob o ponto de vista sanitrio. Devemos considerar que o grupo
desenvolve-se nas mesmas temperaturas que os patgenos envolvidos nas doenas transmitidas
por alimentos mais frequentes, em torno de 36,5C. Sua presena, portanto, significa que
existiram as condies ambientais necessrias reproduo de tais patgenos no material
analisado (FRANCO; LANDGRAF, 2008).
Outros microrganismos passveis de serem veiculados em plantas medicinais so os
coliformes, grupo pertencente Famlia Enterobacteriaceae. Os coliformes subdividem-se em
dois subgrupos, os coliformes totais e os coliformes termotolerantes, subgrupo do qual pertence
a E. coli. Os coliformes termotolerantes e, em especial, a Escherichia coli por sua vez, so
legalmente aceitos como bioindicadores de contaminao fecal (ROCHA; MEDEIROS; SILVA,
2010).
Faltou a reviso de bolores e leveduras!!!
O consumo de plantas medicinais contaminadas por fezes pode expor o usurio a
infestaes, infeces, intoxicaes ou a toxinfeces. Tais condies podem gerar um amplo
espectro de quadros clnicos de gravidade varivel, indo desde leve desconforto at o bito nos
casos mais graves (ROCHA; MEDEIROS; SILVA, 2010).
Com base nos elementos discutidos, importante alertar aos consumidores os perigos
potenciais dos preparos tradicionais denominados garrafadas, dadas as condies presentes
em sua produo, armazenagem e comercializao, as quais permitem a sua contaminao por
microrganismos deteriorantes e/ou patognicos capazes de gerar danos sade humana.
Este trabalho tem como objetivo determinar em garrafadas artesanais comercializadas na
feira livre do municpio de Currais Novos/RN, as densidades de Escherichia coli, Staphylococcus
aureus, bactrias aerbias mesfilas, bolores e leveduras, classificando as amostras como
adequadas ou no ao consumo humano de acordo com os limites recomendados pela
Organizao Mundial da Sade (OMS) para materiais base de plantas destinados ao uso
interno.
MATERIAL E MTODOS
1- Caracterizao da rea estudada
O presente trabalho foi desenvolvido na A rea estudada corresponde feira livre do
municpio de Currais Novos situada na mesorregio central potiguar e na microrregio serid
oriental, sob as coordenadas 61539,6 sul, 363054 oeste, estado do Rio Grande do Norte
(BRASIL, 2005). As coletas ocorreram no perodo de maro/2013
2- Selees das garrafadas a serem estudadas e definio do nmero de amostras a serem
analisadas.
As amostras so no ponto de comercializao as amostras foram preparadas pelo prprio
raizeiro na hora da coleta sem nenhuma condio de higiene, como mostra a Figura 1. Foram
analisadas as cinco amostras, conforme parmetros adotados pela ABNT para o estabelecimento
de planos de amostragem e procedimentos para inspeo por atributos (BRASIL, 1985). As
amostras consistiam no preparo tradicional, acondicionadas em garrafa pet reutilizada, com
aproximadamente 500 ml de volume. Inexistiam rtulos em todos os casos. Buscando reproduzir
os procedimentos rotineiros da comercializao popular, as amostras foram embaladas pelos
prprios comerciantes, usando os materiais que frequentemente utilizam em seus comrcios. As
amostras foram acondicionadas em recipientes estreis, identificadas e embrulhadas em filme de
PVC, sendo encaminhadas para o Laboratrio de Microbiologia de Alimentos/Biologia Molecular
(MICROBIO) do IFRN Campus Currais Novos, onde ocorreram as anlises.
FIGURA 1 PREPARO DAS GARRAFADAS NO PONTO DE COMERCIALIZAO
3- Anlises microbiolgicas
A alquota de 250,2 mL da amostra foi suspensa por agitao em 225 mL de soluo salina
peptonada estril (0,1 %, pH 7,0), obtendo-se a diluio correspondente a 10-1. A partir desta, 1
mL foi transferido para tubo de ensaio contendo 9 mL de soluo salina peptonada estril (0,1 %,
pH 7,0), homogeneizando-se em agitador tipo vrtex, obtendo-se a 10-2. A operao foi repetida
sucessivamente at obter a diluio correspondente a 10-6, quando se fez necessrio.
a) Deteco e quantificao de E. coli:
Os procedimentos foram realizados em duplicata e a partir de cada diluio, foi transferido
1 mL para duplicatas de placas de Petri estreis, aps o que adicionou-se aproximadamente 10
mL de gar vermelho violeta bile/4-metilumbeliferil--Dglicurondeo (MUG VRB gar),
previamente fundido a 46 48C. Atravs de movimentos circulares suaves, o material foi
homogeneizado e deixado em repouso at total solidificao do meio. Aps a solidificao, as
placas foram incubadas em posio invertida a 352C por 24 a 48 horas.
b) Deteco e quantificao de S. aureus:
As diluies foram semeadas em duplicata pelo mtodo spread plate em placas de petri
contendo 15 mL do gar seletivo e diferencial Manitol Salgado (ABBA et al., 2009; WANNIPA et
al., 2007). As placas foram incubadas na posio invertida a 35-37C/242h. Foram selecionadas
cinco colnias tpicas de cada placa e transferidas para tubos de ensaio contendo 15 mL de caldo
BHI, sendo incubadas a 35-37C/242h. Aps a incubao, os tubos foram submetidos
fervura???? em banho maria por 15 minutos. Aps o resfriamento, alquotas 0,1L foram
individualmente transferidos para poos previamente perfurados em placas de petri, contendo
cerca de 15 mL de gar DNAse com verde de metila. As placas foram incubadas a 50C por duas
horas. O desenvolvimento de reas de clarificao ao redor dos poos foi considerado resultado
positivo para a presena dos microrganismos alvo (BRASIL, 2003; SILVA et al., 2007).
c) Deteco e quantificao de aerbios mesfilos:
Alquotas de 0,1 ml das diluies decimais seriadas foram semeadas (spread plate) em
duplicatas de placas de petri contendo cerca de 16 mL do meio Plate Count Agar (PCA)
352oC/24h. As placas foram incubadas em posio invertida a 352C por 18 a 24 horas.
d) Deteco e quantificao de Bolores e leveduras:
A partir das diluies alquotas de 0,1 mL foram semeadas (spread plate) em duplicatas de
placas de petri contendo cerca de 16 mL de Agar Batata Dextrosado, acidificado com cido
Tartrico a 10%. Aps o processo, as placas foram incubadas em posio normal em estufa BOD a
251C/5 dias.
4- Contagem Direta em Placa.
Aps o perodo de incubao, foram selecionadas para quantificao as placas sequenciais
que continham entre 25 e 250 colnias. A contagem direta em placa foi efetuada com uso de
contador de colnias digital, e quando necessrio, com uso de lupa (4X). Os resultados foram
expressos em UFC/g.??? ou mL???
As amostras coletadas correspondiam a extrato aquoso composto com a adio de vinho
do jatob e das seguintes espcies vegetais: Amburana cearensis (Cumaru), Lamium album
(Urtiga Branca), Hymenaea courbaril (Jatob), Copaifera langsdorfii (Copaba), Hancornia
speciosa Gomes (Mangaba), Cissampelos sympodialis MENISPERMACEAE (Milona) e
Aspidosperma cylindrocarpon (Peroba). O produto encontrava-se armazenado em garrafa pet de
500 ml reutilizada, sem a existncia de rtulo (Figura 2). A fabricao do produto era realizada na
feira-livre, na prpria banca de comercializao das garrafadas, situada no municpio de Currais
Novos/RN.
Figura 2 Amostra de garrafada coletada na feira livre de Currais Novos.

Os resultados obtidos nas analises feitas nas amostras de garrafadas esto expressos na
Tabela 1.
Tabela 01 Resultados das anlises e respectivos nveis de contaminao microbiolgica das amostras
coletadas na feira livre de Currais Novos, RN.
Amostras
1
2
3
4
5
Densidades observadas dos bioindicadores pesquisados

Bolores e leveduras
Aerbios
S. aureus
E. coli
(UFC/g)
Mesfilos (UFC/g)
(UFC/g)
(UFC/g)
7
7
6,9x10
2,9 x 10
2,7x10
0
6
5
2,8x10
5,9 x 10
3x10
0
6
5
5,8x10
1,6x10
1,5x10
0
6
6
2,5 x 10
5x10
7,5x10
1x10
5
1,5x10
7,1x10
2,4x10
0
Atualmente no existe em nosso pas uma legislao voltada ao estabelecimento de

parmetros microbiolgicos de aceitabilidade para produtos da medicina tradicional. Desse
modo, no existe limite legal para a presena de contaminantes microbianos em garrafadas
comercializadas em feiras livres. Entretanto, a ausncia da legislao no extingue o perigo que
pode ser encontrado nesses produtos, contribuindo assim para um agravamento dos riscos
sade do consumidor, uma vez que no existem os pr-requisitos legais necessrios a uma
fiscalizao adequada dos produtos disponveis. Na ausncia de limites estabelecidos por
legislao nacional especifica, confrontamos os dados obtidos nas anlises microbiolgicas com
os limites estabelecidos pela organizao mundial da sade para materiais base de plantas,
destinados ao uso interno, permitindo assim categorizar as amostras como adequadas ou no ao
consumo humano, conforme explicitado na figura 3.
Figura 3 Percentuais de adequao e inadequao das amostras perante os limites

recomendados pela OMS para matrias base de plantas destinadas ao uso interno,
considerando cada bioindicador pesquisado.
De acordo com os resultados encontrados e indicados na Tabela 1, os nveis de
contaminao por bolores superaram em 100% o limite recomendado pela OMS (105), com
densidade mdia de 6,9x106 UFC/g. As altas densidades de fungos observadas so condizentes
com a estrutura fsica e as condies de higiene precria encontradas no local de comercializao
das garrafadas, uma vez que elas so manipuladas e armazenadas em condies de higiene
inapropriadas. Considerando-se que tais microrganismos promovem alteraes qumicas nas
plantas medicinais que utilizam como substrato ao seu crescimento, resultando em impactos
negativos sobre as propriedades teraputicas esperadas, e/ou a formao de compostos txicos.
Gneros como Aspergillus spp. e Penicillium spp. encontrados nas amostras, podem causar
doenas como alergias, alm de representar riscos para quem manipula tais fitoterpicos, tendo
em vista a possvel inalao durante o processo produtivo (MARQUES, 1998; LACAZ et al., 2002).
O risco potencial da presena de fungos toxignicos em plantas medicinais a formao de
micotoxinas, principalmente em pases tropicais e subtropicais, que oferecem condies
ambientais favorveis ao crescimento fngico e a produo de micotoxinas, cuja presena
significa um perigo sade humana (BUGNO et al., 2006). Em condies especficas, em geral
independentes daquelas necessrias ao crescimento fngico, a contaminao se inicia no campo
e continua durante a coleta, secagem e armazenamento do produto (BENNET E KLICH, 2003;
STOLOFF, 1979).
Bactrias aerbias mesfilas foram detectadas em 100% das amostras, e todas
apresentaram densidades superiores aos limites recomendados pela OMS (105), com densidade
mdia de 6,9x106, isso pode ser associado com um processamento insatisfatrio. Embora sejam
considerados microrganismos de origem no fecal, as bactrias aerbias mesfilas so
completamente indesejveis nos alimentos, uma vez que elas se multiplicam na temperatura do
corpo humano, ento se elas esto presentes nos alimentos possivelmente patgenos tambm
estejam presentes, sobretudo nos produtos minimamente processados. Podem provocar a
deteriorao dos mesmos, gerando caractersticas organolpticas indesejveis, e reduzirem sua

vida til. Alm disto, sua presena se configura em um risco sanitrio. A contagem elevada desse
grupo de bactrias em alimentos perecveis pode indicar abuso durante o armazenamento em
relao ao binmio tempo/temperatura e, como todas as bactrias patognicas de origem
alimentar so mesfilas, pode tambm indicar risco sade (FRANCO et al., 1996).
Em relao presena de E. coli, em 20% das amostras analisadas foi excedido o limite
recomendado, equivalente a 10 UFC/g com densidade mdia de 2x10 UFC/g. A presena do
microrganismos legalmente aceita como bioindicador de contaminao fecal (FRANCO;
LANDGRAF, 2008). Portanto, nas amostras contaminadas por E. coli, possvel que tambm
estejam presentes patgenos diversos, responsveis por doenas transmitidas pela rota FecalOral, abrangendo vrus, bactrias, protozorios e helmintos. Dentre as bactrias, podem estar
presentes cepas patognicas da prpria E. coli ou Salmonella sp. Em todos os casos citados, o
risco sade do usurio real.
A presena de Staphylococcus aureus foi confirmada em 100% das amostras, com mdia de
1,2x10 UFC/g. Este microrganismo bioindicador de manipulao sob condies de higiene
inadequadas, apontando falhas em uma ou mais etapas envolvidas no preparo do produto.
Apesar da OMS no explicitar limites legais para a presena deste microrganismo em suas
recomendaes legais, importante que ressaltemos que a espcie frequentemente
relacionada a surtos de doenas de natureza estafiloccica. Os surtos de intoxicao alimentar
provocados pelo consumo de material contaminado pelo S. aureus so resultantes da presena
das enterotoxinas A, B, C 1 , C 2 , C 3, D e E, pr-formadas antes da ingesto do material
contaminado. A gravidade da intoxicao em geral baixa, provocando no consumidor nuseas,
vmitos, diarreia, sudorese e cimbras abdominais. Raramente, em dependncia de condies
orgnicas do indivduo, idade e quantidade de toxina ingerida, podem ser gerados casos de bito
(FRANCO; LANDGRAF, 2008; ROCHA et al., 2010).
CONCLUSES
A deteco dos de altas densidades populacionais dos microrganismos pesquisados
condizente com as condies observadas no tanto no preparo, quanto no ponto de
comercializao do produto.
Todas as amostras foram consideradas inadequadas perante os parmetros recomendados
pela OMS para materiais base de plantas, destinados ao uso interno.
A inexistncia de legislao especfica, voltada ao estabelecimento de parmetros de
qualidade microbiolgica para os produtos da medicina popular comercializados em feiras livres
(plantas medicinais, garrafadas, lambedores, tinturas...) associada falta de estrutura fsica e
treinamento adequado dos raizeiros em relao aplicao de Boas Prticas, ampliam o risco
sade humana.
urgente que tais distores sejam corrigidas, permitindo que o produto disponvel
populao apresente qualidade adequada, reduzindo o impacto negativo potencial sobre a
comunidade.
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AVALIAO DA ATIVIDADE ANTIFNGICA DA PRPOLIS PRODUZIDA NO ESTADO DO

TOCANTINS
1
I. A. Melo (PQ) ; H. L. Batista (PQ) ; C. H. C. Fernandes (PQ) , I. C. M. Fernandes (IC) , Y. B. Diniz (IC) , R. C.
2
Guerra (PQ)
1
2
Instituto Federal do Tocantins (IFTO) - Campus Araguana -, Instituto Tocantinense Presidente Antnio Carlos
(ITPAC); e-mail: iangla.melo@ifto.edu.br
(TC) Tcnico em Qumica
(PQ) Pesquisador
RESUMO
A prpolis uma resina produzida pelas abelhas da
espcie Apis melfera. Dentre as diferentes atividades

atribudas prpolis temos: antibacteriana,
antifngica, antiviral, anti-inflamatria, citosttica e
imunoestimulante. O objetivo do trabalho foi testar a
atividade antifngica de extratos da prpolis em
fungos do gnero Candida, especialmente C. albicans,
cepas ATCC e clnicas. A tcnica utilizada foi difuso

em disco e os resultados foram comparados com
antifngicos de uso comum. Os resultados
demonstraram que as algumas amostras de prpolis
apresentaram halos de inibio significativos, iguais
ou melhores que os antifngicos testados.
PALAVRAS-CHAVE: Candida, Antimicrobiana, Abelhas.
EVALUATION OF THE ACTIVITY ANTIFUNGAL PROPOLIS PRODUCED IN TOCANTINS STATE

ABSTRACT
Propolis is a resin produced by Apis mellifera bee
species. Some of the various activities assigned to
propolis are: antibacterial, antifungal, antiviral, antiinflammatory, cytotoxic and immunostimulatory. The
objective was to test the antifungal activity of prpolis
extracts over fungi of the genus Candida, especially C.
albicans ATCC and clinical strains. The technique used
KEY-WORDS: Candida, Antimicrobial, Bees.
was the disc diffusion and the results were compared

with commonly used antifungal agents. The results
showed that the propolis samples had significant
inhibition halos, equal or better than the antifungal
agents tested.
AVALIAO DA ATIVIDADE ANTIFNGICA DA PRPOLIS PRODUZIDA NO ESTADO DO

TOCANTINS
INTRODUO
A prpolis uma resina produzida pelas abelhas da espcie Apis mellifera, apresenta
propriedades bem distintas e conhecida pelas suas propriedades, desde muitos anos atrs,
chamada de cola das abelhas", o produto final de uma mistura de gomas, resinas e blsamos
de diversas fontes vegetais, utilizada pelas abelhas para realizar a limpeza e proteo da colmeia.
Dentre as diferentes atividades atribudas prpolis temos: antibacteriana, antifngica, antiviral,
anti-inflamatria, citosttica e imunoestimulante (DOS SANTOS et al., 2003; PACKER et al., 2007).
Apresenta composio variada, sendo os flavonides os constituintes que merecem
destaque, pois so apontados como responsveis pelas aes anti-inflamatria, antimicrobiana e,
em especial pela antifngica, porm cerca de 13% de todas as substncias encontradas na
prpolis ainda so desconhecidas (LONGHINI et al., 2007).
Devido grande diversidade da flora brasileira, os diferentes tipos de prpolis do Brasil
puderam ser classificados em 12 grupos distintos, de acordo com a composio qumica e
atividades biolgicas distintas. Acredita-se que em reas tropicais do planeta a amplitude das
atividades biolgicas da prpolis sejam maiores, isso ocorre em funo da diversidade vegetal
encontrada nas reas de clima quente (SAWAYA et al., 2004; CABRAL et al., 2009).
De acordo com Silva et al.(2006) de forma geral, a composio da prpolis inclui 55% de
resinas e blsamos, 30% de cera, 10% de plen e metablitos secundrios, incluindo flavonides,
cidos fenlicos, alm de minerais
A prpolis apresenta uma composio variada, sofre influncia do clima e vegetao e do
local e espcie da abelha produtora. Sua viabilidade farmacolgica tem despertado o interesse de
muitos pesquisadores. Variveis como clima e vegetao influenciam a composio da prpolis,
em funo dessa particularidade, o estudo da prpolis se faz to importante, pois tem como
finalidade avaliar as caractersticas da prpolis coletada na regio, contribuindo com a literatura
sobre a prpolis produzida na zona de transio entre o Cerrado e a Floresta Amaznica tambm
chamada regio ecotonal, regio essa que compreende boa parte do territrio do estado do
Tocantins.
OBJETIVOS
1. Avaliar a atividade antifngica da prpolis produzida no estado do Tocantins (TO),
utilizando a tcnica de disco-difuso (Mtodo de Kirby-Bauer);
2. Comparar a atividade da prpolis com frmacos antifngicos de uso comum.
MATERIAL E MTODOS
As amostras de prpolis foram coletadas em regies produtoras do Tocantins, pelos
apicultores vinculados ao projeto APICULTURA COMO INSTRUMENTO DE TRANSFORMAO DA
AGRICULTURA FAMILIAR DO ESTADO DO TOCANTINS coordenado pelo professor Dr. Claudio
Henrique Clemente Fernandes, aprovado e financiado pelo CNPq. As coletas foram realizadas
respeitando as condies de higiene necessrias para evitar a contaminao do produto e em
seguida encaminhadas para os laboratrios de Botnica e Microbiologia do Instituto
Tocantinense Presidente Antnio Carlos (ITPAC). As amostras de diferentes locais foram pesadas
em balana eletrnica, enumeradas de 1 a 23 e armazenadas sob refrigerao at a preparao
do extrato, as amostras de prpolis de cada regio esto listadas na tabela abaixo, receberam um
nmero de identificao para facilitar o procedimento, nesta etapa 23 amostras de prpolis
foram testadas.
Tabela 1: Descrio dos locais e nmero de amostra correspondente
Local
Entre Rios *
Entre Rios (CPI)
Pov. Caju Manso *
Pov. Caju Manso (CPI)
Miracema *
Miracema (CPI)
PA Ventura *
PA Ventura (CPI)**
Nova Olinda (CPI)
Aragominas (CPI)
Palmas (CPI)
Nova Olinda (CPI)
Nova Olinda*
Palmas*
Santa Tereza *
PA Ventura (CPI)**
Miracema *
Aragominas *
Entre Rios(CPI)
NPA 01
PA Ventura**
Santa Tereza (CPI)
Piraqu
* No Coleta de Prpolis Inteligente (sem CPI)
** PA= Projeto de Assentamento
Fonte: Dados da pesquisa
Amostra
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
Os extratos da prpolis foram obtidos pela tcnica de macerao (etanol 83,8 % na

proporo 1:3 [p/v] durante 20 dias sob agitao frequente). Foram utilizados discos de
antibiograma virgens e esterilizados, embebidos nos extratos e secos por 15 minutos em capela
de fluxo laminar.
As cepas ATCC de Candida albicans (ATCC 10231) foram escolhidas para testar a atividade
antifngica, tambm foram utilizados na anlise da atividade antifngica, fungos da mesma
espcie isolados da mucosa oral de pacientes atendidos pela Clnica Odontolgica do ITPAC, os
fungos isolados fazem parte de um banco de espcies obtidas pelo Projeto de Iniciao Cientfica
intitulado: Avaliao da incidncia de Candida spp. e perfil de sensibilidade de cepas isoladas
associadas ao uso de prtese parcial e total em pacientes atendidos pela Clnica Odontolgica do
ITPAC, projeto que visa determinar o perfil de sensibilidade dos fungos isolados de pacientes
usurios de algum tipo de prtese dentria, aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa (CEP)
sob o nmero: 00516511.9.0000.0014. Em funo da utilizao de prpolis em muitos produtos
industrializados destinados higiene oral, essa demanda se faz necessria para mensurar a
atividade da prpolis sobre os fungos coletados diretamente da mucosa oral de usurios de
prtese.
Os inculos contendo os fungos selecionados foram preparados de acordo com as
recomendaes das normas M2-A8 (NCCLS, 2002).
Para determinar a atividade antifngica foram adicionados 100l, do inculo de fungos
previamente preparados, s placas de Petri de 15 cm de dimetro, contendo meio de cultura
gar Sabouraud pelo espalhamento superficial com swab, em seguida, os discos de antibiograma
embebidos nos extratos de prpolis foram colocados sobre o meio slido e as placas incubadas
em estufa bacteriolgica a 37C 1C, por um perodo de 24 a 48 horas, todos os testes foram
realizados em triplicata. Os resultados foram obtidos pela medio do halo de inibio
apresentado por cada amostra de prpolis e, a seguir, foram comparados com os obtidos pelos
antifngicos Fluconazol, Nistatina, Cetoconazol e Anfotericina B, utilizados como padro.
Atividade antifngica
O fenmeno de resistncia aos medicamentos um fato recorrente, e necessita, sob
aspectos epidemiolgicos e clnicos, de uma discusso ampla. Os relatos de resistncia aos
antibiticos tomam conta dos noticirios e mobilizam as autoridades sanitrias, porm
conveniente destacar que o fenmeno de resistncia tambm compartilhado pelos
antifngicos, frmacos utilizados no tratamento de infeces fngicas superficiais e sistmicas
tem observado um fenmeno crescente de resistncia, diante desse fato, as pesquisas que
buscam novas alternativas aos tratamentos fngicos, se fazem to necessrias.
O resultado dos testes de atividade antifngica da prpolis sobre linhagens do fungo
Candida albicans so apresentados na tabela 2. A tabela indica a mdia das medidas do dimetro
dos halos de inibio para a linhagem ATCC e linhagens clnicas testadas.
Tabela 2: Halos de inibio (mm) obtidos pelas amostras de prpolis frente aos fungos do gnero
Candida
Amostra
prpolis
Halo de inibio
C. albicans 1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
15
16
10
18
16
18
15
20
18
20
22
25
18
18
16
25
15
20
17
16
25
27
30
Halo de inibio
C. albicans 2
12
19
16
16
17
19
12
14
17
18
18
24
15
20
16
24
24
12
23
27
13
13
16
Halo de inibio
C. albicans 3
11
19
13
15
16
15
9
14
0
15
15
18
15
18
16
16
15
12
14
15
14
0
16
Halo de inibio
C. albicans ATCC
16
14
14
16
18
16
15
15
15
18
18
18
16
10
17
16
12
20
19
30
15
20
20
Os dados da tabela 2 indicam que para a linhagem clnica C. albicans 1, as amostras de

prpolis 12, 16, 21, 23 apresentaram resultados muito significativos com halos de inibio de 25,
25, 25 e 30 mm respectivamente, superando os halos produzidos pelos antifngicos
apresentados abaixo (tabela 3).
Tabela 3: Resultados obtidos para os antifngicos utilizados como padro.
Antifngicos
Nistatina
Fluconazol
Anfotericina B
Cetoconazol
Halo de inibio
(mm)
C. albicans 1
Halo de inibio
(mm)
C. albicans 2
Halo de inibio
(mm)
C. albicans 3
Halo de inibio (mm)

C. albicans ATCC
0
0
20
18
0
0
22
16
0
0
16
14
16
13
16
20
Podemos perceber na tabela acima que para as amostras clnicas 1, 2 e 3 os antifngicos

Nistatina e Fluconazol no apresentaram halo de inibio demonstrando uma resistncia
intrnseca aos antifngicos testados, em contrapartida Cetoconazol e Anfotericina B
apresentaram halos significativos.
Trabalho realizado por Silva et al. (2006) com amostras de prpolis proveniente da
microrregio do Brejo Paraibano no Estado da Paraba, utilizando as espcies Staphylococcus
aureus e Candida albicans, no indicou atividade antimicrobiana sobre os microrganismos
citados, esse resultado no condiz com o que foi encontrado para as amostras de prpolis
produzidas no TO.
No entanto, trabalho realizado por Molina et al. (2008) testou extratos de prpolis com 20
linhagens diferentes de Candida albicans, provenientes do laboratrio de Microbiologia e
Imunologia da Faculdade de Odontologia de So Jos dos Campos/UNESP, obtidas a partir de
amostras de saliva coletadas da cavidade bucal humana. Os resultado apontaram que o extrato
testado obteve ao antifngica sobre todas as cepas de Candida albicans, resultado semelhante
ao que pode ser observado na tabela 2, que refere-se a atividade antifngica da prpolis sobre
cepas tambm isoladas da mucosa oral.
Estudo realizado por Longhini et al. (2007) demonstrou que extratos etanlicos de
prpolis apresentam atividade antifngica para Candida albicans, o que est de acordo com os
resultados obtidos em nosso estudo, ressaltando porm, o resultado significativo obtido para
cepas de C. albicans que obtiveram halos de inibio de 30 mm, superiores aos obtidos para
antifngicos como Anfotericina B, utilizado no tratamento de infeces fngicas sistmicas.
CONCLUSO
A atividade antifngica da prpolis apresentou resultado significativo para a linhagem ATCC
de Candida albicans. Foram testadas 3 linhagens clnicas de C. albicans, o resultado envolvendo
amostras clnicas, coletadas da mucosa oral de pacientes acometidos por Candidase, indica uma
informao importante no desenvolvimento tcnico e cientfico de produtos a base de prpolis
que possam vir a ser utilizados no tratamento de infeces da mucosa oral, provocados por
fungos do gnero Candida.
Evidencia-se que a prpolis produzida no estado do Tocantins apresenta caractersticas que
a tornam distinta das produzidas em outras regies do pas, as variaes climticas e de
vegetao, influenciam sobremaneira a composio qumica do produto, essas variaes podem
ser percebidas na atividade biolgica diferenciada.
REFERNCIAS
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submetidos ao tratamento quimioterpico. Rev. Bras. Anlises Clnicas, Rio de Janeiro,
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Wayne, 2003
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prpolis da Paraba, Brasil. Cincia Rural, Santa Maria, vol. 36, n. 6, p. 1842-1848, 2006
PESQUISA DE FUNGOS PATOGNICOS E SAPRFITOS EM LEITE PASTEURIZADO TIPO C NA

CIDADE DE ARAGUANA-TO
1
M. A. B. Cardoso Junior (IC) ; F. L. C. Lima (IC) ; O. V. Costa (PQ)

Instituto Tocantinense Presidente Antnio Carlos/ ITPAC. Faculdade de cincias humanas, econmicas e da
sade de Araguana/TO e-mail: marcosjuniorahs@gmail.com
RESUMO
Os fungos so seres eucariontes, podendo ser,

unicelulares na forma leveduriforme e pluricelulares na
forma de hifas encontrados facilmente na natureza,
estando presentes em todos os ambientes terrestres e
aquticos, no ar, em certos alimentos, no leite por ter
substrato favorvel para seu desenvolvimento. Foram
analisadas duas marcas de leite pasteurizado Tipo C na
cidade de Araguana - TO, totalizando 23 amostras, onde
atravs de anlises microbiolgicas especficas segundo
a legislao vigente foram isolados gneros de fungos
filamentosos, sendo estes, Acremonium spp., Aspergillus
spp., Penicillium spp., Sporotrix spp., Trichophyton spp. e

Trichosporon spp. Verificou-se que o leite pasteurizado
tipo C comercializado em Araguana - TO no est
higienicamente e sanitariamente dentro dos padres
microbiolgicos fngicos mnimos exigidos pela
legislao, podendo ser causador de doenas oportunas
pacientes imunodeprimidos.
PALAVRAS-CHAVE: Fungos, leite pasteurizado tipo C, contaminao.
SEARCH SAPROPHYTIC AND PATHOGENIC FUNGI IN PASTEURIZED TYPE C IN THE CITY OF

ARAGUANA TO
ABSTRACT
The Fungi are eukaryotes beings may be , in
unicellular and multicellular yeast in the shape of
hyphae easily found in nature , being present in all
terrestrial , aquatic , air in foods including milk to have a
favorable substrate for their development and
multiplication. Two brands of milk pasteurized type C
were analyzed in town Araguana - TO , totaling 23
samples , where through specific microbiological testing
in accordance with current legislation genera of fungi
were isolated , went these , Acremonium spp ,
Aspergillus spp , Penicillium spp., Sporotrix spp.,
Trichophyton spp . and Trichosporon spp . It was found
that pasteurized type C milk sold in Araguana - TO is
unhygienic
sanitary
and within
the
fungal
microbiological minimum standards required by law.
May be causing the timely immunocompromised
patients diseases.
KEY-WORDS: Fungi, milk pasteurized type C, contamination.
PESQUISA DE FUNGOS PATOGNICOS E SAPRFITOS EM LEITE PASTEURIZADO TIPO C NA

CIDADE DE ARAGUANA-TO
INTRODUO
O leite compreende trs conceitos: do ponto de vista qumico, biolgico e legislativo.
Segundo a Normativa n 51 (18/09/2002) "Entende-se por leite, sem outra especificao, o
produto oriundo da ordenha completa e ininterrupta, em condies de higiene, de vacas
sadias, bem alimentadas e descansadas. O leite de outros animais deve denominar-se segundo
a espcie de que proceda". Excetuando-se os 30 dias antes do parto denominado leite de
reteno e os 10 dias aps o parto denominado colostro.
O leite possui em sua composio gua, gordura, protenas, sais minerais, vitaminas,
carboidratos (NASCIMENTO et al., 2001) e clcio, essencial para a gnese e manuteno dos
ossos, sendo um formidvel alimento para pessoas de todas as faixas etrias, sendo assim,
um alimento de alto valor nutricional (FERREIRA, 2007). Carecido a sua importncia na
nutrio humana, so analisados parmetros para que seja um produto de qualidade. No
Brasil, esses parmetros so institudos na Instruo Normativa 51, que determina
caractersticas fsico-qumicas e microbiolgicas que o leite deve apresentar, desde sua
ordenha, transporte, at sua vinda indstria, alm de outros elementos sobre os
estabelecimentos onde o leite produzido e comercializado (BRASIL, 2002).
O leite por sua composio avaliado como um dos alimentos mais completos em
aspectos nutricionais e importantes para dieta humana, por portar tais caractersticas,
constitui um excelente meio de cultura para o desenvolvimento de diversos microrganismos,
saprfitos e patognicos. Por isso, a qualidade do leite passa a ser uma constante
preocupao para tcnicos e rgos ligados rea de sade, especialmente pelo risco de
propagao de microrganismos relacionados incidncia de doenas originadas de alimentos
(LEITE JR; TORRANO; GELLI, 2000). As condies higinicas e sanitrias do rebanho um ponto
importante para que o leite apresente caractersticas de qualidade (LAGE, 2010).
Por apresentar-se altamente nutritivo o leite um meio propcio para o crescimento de
fungos e bactrias, exigindo assim cuidado sanitariamente e higienicamente desde etapa de
ordenha at a fabricao de seus derivados. A presena de microrganismos ou de toxinas
produzidas pelos mesmos interfere na qualidade do leite (MELVILLE et al., 1999).
Os fungos so organismos encontrados facilmente na natureza, estando presentes em
todos os ambientes terrestres, aquticos e no ar. Os fungos so organismos eucariontes,
unicelulares (leveduriformes) ou multicelulares (filamentosos), haploides, com parede celular
contendo quitina e a-glucano. No apresentam plastos ou pigmentos fotossintticos. Todos os
fungos conhecidos, com poucas excees tm origem nos esporos (reproduo sexuada) ou
condios (reproduo assexuada), corpsculos que podem ser comparados sementes das
plantas superiores, embora no sejam morfologicamente semelhantes a estas (TORTORA,
2006).
O desenvolver desses microrganismos pode levar a doenas infecciosas ou txicas em

vegetais, animais e no homem. A presena nica do fungo no fator decisivo de doena, a
qual depende da relao hospedeiro/parasita (LACAZ, 2002).
A contaminao do leite por microrganismos, como os fungos, pode causar alteraes
fsico-qumicas no mesmo, limitando sua estabilidade e de seus derivados, alm de determinar
problemas econmicos e de sade pblica (ANDRADE, 2001).
Os reservatrios naturais dos fungos que infectam o homem e o animal podem ser o
prprio homem e o animal, ou um stio na natureza, onde o fungo se desenvolve como
saprfitos. Os fungos saprfitos no se apresentam como patognicos, mas, pode se
comportar como patgenos oportunistas dependendo do estado de sade do hospedeiro,
podendo se multiplicar e alguns casos ser fatal (TRABULSI, 2004).
Os fungos corriqueiramente isolados de infeces oportunistas so Candida albicans e
outras espcies; Cryptococcus neoformans; Aspergillus (predominando o Aspergillus
fumigatus); Fusarium spp., Cephalosporium spp., Zigomicetos (Mucor, Absidia, Rhizopus);
Basidiomicetos (Coprinus delicatus); Geotrichum candidum; Rhodotorula rubra,
Cladophialophora bantiana, Exophiala spp. (LACAZ, 2002).
Diante disso, conduziu-se este trabalho cujo principal objetivo foi isolar e identificar
fungos filamentosos presentes em leites pasteurizados tipo C comercializados na cidade de
Araguana- TO. O outro objetivo constou em avaliar a qualidade fngica dos mesmos diante de
tcnicas microbiolgicas oficiais e especificas constada no Ministrio da Agricultura e na
ANVISA (Agencia de Vigilncia Sanitria).
MATERIAS E MTODOS
As amostras utilizadas na pesquisa foram produtos acabados de duas marcas de leite
pasteurizado tipo C, comercializados em diversos pontos de vendas distribudos em vrios bairros
no mbito da cidade de Araguana TO, Localizada a uma latitude 071128 sul e a uma
longitude 4812'26" oeste.
Foram analisadas 23 amostras de leite pasteurizado tipo C comercializados na cidade de
Araguana TO, onde, compreendeu 11 amostras de uma marca X e 12 amostras de uma marca Y
no perodo de abril a outubro de 2013.
As amostras depois de obtidas foram imediatamente analisadas, sem romper a
embalagem original foi retirado uma alquota de 1 mL da amostra com o auxlio de uma pipeta
estril flambada em bico de Bunsen. Aps a retirada da alquota foi feita diluio seriada 10-1, 102
e 10-3 descrita na Instruo Normativa n 62 do Ministrio da Agricultura.
A inoculao foi feita em gar Sabouraud com cloranfenicol 10ppm atravs do mtodo de
pour plate descrito na (ANVISA, 2013). Logo em seguida foram feitas a incubao em estufa
32C durante 10 dias, para a incluso do tempo de crescimento de fungos filamentosos de

crescimento lento e rpido.
Depois de decorrido os 10 dias de incubao, foi feito uma identificao macroscpica das
colnias fngicas que se de desenvolveram (ver anexo I). Aps a identificao macroscpica foi
feito a tcnica do microcultivo (ANVISA, 2013), ento foi novamente incubado por 10 dias.
Realizado o microcultivo foi feito a leitura microscpicas das colnias utilizando como corante o
azul de lactofenol. A identificao baseou-se nas caractersticas macroscpicas e microscpicas
das colnias de fungos (ANVISA, 2013; KONEMAN, 2001). Foi feito contagem de colnias fngicas
segundo Instruo Normativa n 62. Todo esse processo foi realizado nas amostras de leite
pasteurizado tipo C de lotes distintos.
De um total de 23 amostras de leite pasteurizado tipo C, comercializadas na cidade de Araguana
TO, obteve-se 19 amostras positivas para presena de fungos filamentosos sendo 10 amostras
para marca X e 9 amostra para marca Y. Negativa obteve-se quatro amostras sendo uma negativa
para marca X e trs para marca Y (Tabela 1).
Tabela 1 Distribuio dos resultados de positividade para fungos filamentosos das amostras
de leite pasteurizado tipo C
Numero de amostras
Amostras X positivas para

fungos filamentosos
10
43,5
Amostras Y positivas para

fungos filamentosos
39,1
Amostras negativas para

fungos filamentosos
17,1
Total
23
100
Fonte Laboratrio de Bromatologia ITPAC.
Utilizando metodologia descrita acima, os fungos cultivados eram isolados e identificados

at o gnero, passando por identificao macroscpica e microscpica (ANVISA, 2013;
KONEMAN, 2001). Nas amostras analisadas ocorreu a presena de mais de um gnero de fungo e
esses mesmos gneros ocorreram em vrias amostras, evidenciando uma alta quantidade e
variedade fngica no leite pasteurizado tipo C de Araguana TO. Na tabela 2 pode ser
visualizada a ocorrncia e a variedade de fungos filamentosos presentes nas amostras.
Tabela 1 Variedade e ocorrncia de diferentes gneros de fungos isolados de leites

pasteurizados tipo C em Araguana TO.
Gneros de Fungos
Filamentosos
Aspergillus sp.
Acremonium sp.
Sporothtix sp.
Acremonium sp. e
Aspergillus sp.
Quantidades de
amostras leite X
positivas
5
0
%
50
Quantidades de
amostras leite Y
positivas
4
44,4
11,1
10
11,1
20
Aspergillus sp. e
Trichosporon sp.
11,1
Aspergillus sp. e
Trichosphyton sp.
10
Aspergillus sp. e
Penicillum sp.
11,1
Acremonium sp,
Aspergillus sp e
Penicillum sp.
Total de amostras
positivas
10
10
100
99.9
Fonte Laboratrio de Bromatologia ITPAC.
11,1
A legislao brasileira no dispe de um padro definido para fungos filamentosos

presente em leites pasteurizados, mas, segundo o padro geral, os alimentos devem possuir
at 1000 UFC/ml de fungos saprfitos e ausncia de fungos patognicos.
Dos gneros isolados, alguns so saprfitos e outros oportunistas, porm, chama-se
ateno da grande ocorrncia dos mesmos em leite pasteurizado, pois o leite no um meio
propcio para colonizao de fungos filamentosos, pois se dispe de uma grande quantidade
de gua em sua composio. Evidencia-se que os leites pasteurizados tipo C de Araguana est
com perfil fora dos padres gerais aceitveis pela legislao em relao qualidade
microbiolgica fngica.
Dos fungos isolados, podemos observar a ocorrncia maior de Aspergillus spp. e
Acremonium spp. O Aspergillus um fungo oportunista que se destaca entre os demais
agentes patolgicos proporcionando grande incidncia de casos relatados na literatura
mdica, podendo atuar especialmente em pacientes imunocomprometidos e afetando grande

parte do sistema respiratrio inferior (pulmes) (CHAPEL, 2003).
As infeces fngicas tm sido cada vez mais frequentes, diante de certas condies ou
oportunidades que o hospedeiro lhe oferece. Determinados fungos podem expressar sua
virulncia, podendo se tornar patognicos, particularmente em situaes como: diabetes,
leucemias, linfomas, neoplasias diversas, terapias prolongadas por antibiticos e/ou
cortisonas (LACAZ, 2002).
CONCLUSO
Foram encontradas nas amostras de leite pasteurizado tipo C comercializadas, na cidade
de Araguana/TO a presena de fungos potencialmente patognicos, podendo ser fonte de
toxiinfeco alimentar quando da ingesto do leite contaminado por pacientes imunodeprimidos.
Foi evidenciado que as amostras de leite pasteurizado tipo C comercializadas, na cidade de
Araguana/TO no atende aos padres microbiolgicos exigidos pela legislao vigente.
REFERNCIAS
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CONTAMINAO MICROBIANA DE APARELHOS CELULARES DE ALUNOS DO IFMA-CAMPUS Z

DOCA-MA.
Cmara, R. K. S. (A) ; J. S. Arajo (A)2 ; R. M. Nascimento (A)3 ;Oliveira, I.D.(A)4;Junior, O. C. T(PO)

1 Instituto Federal do Maranho - Campus Z Doca
E-mail: ritacianinha@hotmail.com - jhannsanthos@hotmail.com -munizrhamilla@gmail.com ivynnadanielly@gmail.com-osiel.junior@ifma.edu.br.

(PO) Prof. MSc. Orientador
RESUMO
Desde o principio dos tempos, a comunicao de extrema
importncia tanto para os humanos quanto para os animais.
Sendo uma ferramenta de integrao, e troca mutua de
desenvolvimento. O processo de comunicao consiste na
transmisso de informao entre um emissor e um receptor
que interpreta uma determinada mensagem. Com a
inveno dos telefones e outras ferramentas digitais, o
processo de se comunicar rompeu todas as barreiras,
fazendo da distancia algo pequeno, e da comunicao o
rgo mais Ininterrupto de todos, pois a arte de se
comunicar essencial, para a vida em sociedade. Porm,
existem muitas doenas transmitidas por alimentos ou
objetos contaminados, e associados m higiene o risco
torna-se ainda maior, pois os microorganismos esto
presentes por todas as partes, e na maioria das vezes os

aparelhos celulares no ficam somente nas mos de quem
os possui, mas so emprestados, caem ao cho, so levados
ao banheiro, etc. Com o intuito de analisar e conscientizar
os alunos do IFMA campus Z Doca, sobre a transmisso de
doenas por microorganismos, associada m higiene,
encontrados nos seus celulares, realizamos a pesquisa
fazendo a anlise microbiolgica, para a identificao de
possveis microorganismos causadores de doenas. Faz-se
necessrio uma pesquisa relacionada a esse tipo de
transmisso bacteriana, pois um adversrio que no se
pode ver torna-se ainda mais difcil de combat-lo, e a
conscientizao sobre eles um dos primeiros passos para
a
devida
preveno.
PALAVRAS-CHAVE: Microorganismos, celulares, anlise e preveno.
MICROBIAL CONTAMINATION OF CELLULAR EQUIPMENT-CAMPUS STUDENTS IFMA Z DOCAMA.

ABSTRACT
Since the beginning of time , communication is important,
both for humans and for animals . Being a tool of
integration, exchange and mutual development . The
process of communication is the transmission of
information between a sender and a receiver that
interprets a particular message . With the invention of
telephones and other digital tools , the process of
communicating broke all barriers , making the distance
something small , and the organ most seamless
communication of all , because the art of communication is
essential for life in society . However , there are many
diseases transmitted by contaminated food or objects ,
and associated with poor hygiene risk becomes even
greater , as microorganisms are present everywhere , and

most often the handsets are not only in the hands of those
who Have them, but are borrowed , fall to the ground , are
taken to the bathroom , etc. . In order to analyze and
educate students IFMA campus Z Doca , on the
transmission of disease by microorganisms associated with
poor hygiene , found in his cell , doing research conducted
microbiological analysis to identify possible diseasecausing microorganisms . It is necessary a related to this
type of bacterial transmission research because an
opponent that you cannot see becomes even harder to
combat it , and the awareness of them is one of the first
steps
for
proper
prevention..
KEY-WORDS: Microorganisms, cell phones, analysis and prevention.
INTRODUO
Na natureza, muitas espcies de bactrias e de outros microorganismos so
encontradas juntas em oceanos, lagos, solos e em matria orgnica viva ou morta. Para causar
uma infeco, um microorganismo precisa penetrar nos tecidos do corpo. Os locais pelos quais os
microorganismos podem penetrar no corpo so chamados portas de entrada. As aberturas para o
exterior do corpo, tais como as orelhas, o nariz, a boca, os olhos, o nus, a uretra e vagina
permitem a entrada de micrbios. Os organismos que injetam o sistema respiratrio,
habitualmente penetram pelo ar inalado, nas partculas de poeira ou nas gotculas transportadas
pelo ar.
Segundo Black, Jacquelyn G. *...+ Embora menos de 1%
dos micrbios causem doenas (micrbios patognicos ), o conhecimento de como eles causam
as doenas e como elas so transmitidas ,bem como descobrir essas doenas podem ser tratadas
de grande importncia para o nosso bem estar como espcie .Em 1962 ,o cirurgio geral
William H. Stewart , dos Estados Unidos , afirmou de forma enftica : A guerra contra as doenas
infecciosas foi vencida .Nas dcadas subsequentes , o surgimento de novas doenas e o
aumento da resistncia a antibiticos deixou claro que ,na realidade , no apenas a guerra esta
longe de ser vencida , como seu resultado j no certo .Sero , no entanto, os profissionais da
sade que esto na linha de frente desta guerra previsvel .
Os gregos se anteciparam na microbiologia, tal como fizeram em tantas coisas. O
medico grego Hipcrates que viveu por volta do ano 400 a.C , estabeleceu padres ticos para a
prtica da medicina , que ainda so usados hoje .Hipcrates era um sbio no que diz respeito s
relaes humanas e tambm um observador astuto .Ele associou sinais e sintomas especficos
com certas doenas e percebeu que as doenas podiam ser transmitidas de uma pessoa para a
outra atravs da roupa ou de outros objetos .
OBJETIVOS:
Analisar a presena de microorganismos presentes nos aparelhos celulares de alunos do

IFMA Campus Z Doca-MA.
Listar principais bactrias a fim de identifica-las sobre sua capacidade de danos sade.
Conscientizar os discentes sobre conceitos bsicos de higiene em seus celulares.
DESENVOLVIMENTO
Os microorganismos so, geralmente, causadores de diversas patologias graves em
grande escala de infeces. Porem, alguns deles contribuem para a boa manuteno do
organismo, vivendo em harmonia com o homem, sendo, portanto, constituintes da microbiota
normal dos seres humanos. O gnero Escherichia compreende cinco espcies, sendo E. coli a
mais isolada clinicamente . So bactrias anaerbias facultativas e parte da microbiota normal
do homem e de animais. O homem elimina mais de 100.000.000 clulas de E. coli por grama de
fezes .Tem motilidade , cresce bem em meios de cultivo simples , fermenta a lactose e forma
colnias verdes brilhantes em meio contendo eosina e azul de metileno
Nos ambientes naturais os microrganismos se encontram, quase sempre, sob forma
de populaes mistas. Assim sendo, para que seja possvel estudar as caractersticas das espcies
que compem essas misturas, necessrio fazer o seu isolamento em cultura pura. Para isso,
necessitamos de um meio de cultura e de condies de incubao que facilitam o crescimento do
microrganismo desejado. Aps o seu crescimento, precisamos, ainda, confirmar a sua pureza de
modo a garantir que a cultura obtida contenha apenas o microrganismo de interesse.
Segundo Vermelho, A.B. [et.al.] Os meios seletivos so
utilizados para o isolamento de um grupo particular de microrganismo, ou seja, so meios de
culturas adicionados de substncias qumicas que iro propiciar o desenvolvimento dos
microrganismos acompanhantes (microbiota de acompanhamento). *...+
Alguns meios de cultura podem ter um objetivo combinado, ou seja, ser seletivodiferenciais. Um bom exemplo seria o Agar MacConkey, um meio bastante utilizado para o
isolamento de enterobactrias e outros bastonetes gram-negativos relacionados. Este meio
contm como agentes seletivos sais biliares e cristal violeta, com o objetivo de inibir o
crescimento das bactrias gram-positivas e algumas gram-negativas fastidiosas, e lactose e
vermelho neutro, com o objetivo de diferenciar colnias de bactrias que utilizem estes
carboidratos. : um meio de cultura destinado ao crescimento de bactrias gram-negativas e
indica a fermentao de lactose. Colnias bacterianas que fermentam lactose tornam o meio
rosa choque e as bactrias que no so fermentadoras de lactose tornam o meio amarelo claro.
Caldo BHI: um meio derivado de nutrientes de crebro e corao, peptona e dextrox. meio de
cultivo para estreptococos, pneumococos, meningococos, enterobactrias, no fermentadoras,
leveduras e fungos.
Do ponto de vista taxonmico, as leveduras no so homogneas e sua classificao
no estvel. Definem-se leveduras como fungos cuja forma predominante unicelular. Podem
ser esfricas, ovoides, cilndricas ou triangulares. Algumas so bastante alongadas formando

filamentos semelhantes s hifas dos bolores. Em alguns casos , pode haver formao de um
miclio verdadeiro , quando ,aps diviso celular ,as clulas permanecem unidas .Leveduras
formadoras de pseudomiclios ou de miclios verdadeiros constituem a fase de transio entre
as leveduras unicelulares e fungos filamentosos .
Os Estafilococos foram descritos em pus de humanos por Robert Kock em 1878 e
cultivados em meio liquido em 1880 por Pasteur. Ogston (1881) demonstrou sua patogenicidade
para camundongos, e em 1874, Rosenbach caracterizou o gnero com duas espcies. Atualmente
so conhecidos 32 espcies e , dessas , 16 so encontradas em seres humanos e podem provocar
diferentes sndromes clinicas , incluindo infeces cutneas , infeces oportunistas , infeces
das vias urinarias e infeces sistmicas .A espcie mais implicada em doenas no ser humano
staphylococcus aureus , reconhecidamente o mais virulento dentro do gnero .S.epidermitis
tambm um importante patgeno , S. saprophyticus um patgeno quase que exclusivamente
das vias urinarias .
Os estafilococos esto entre as mais resistentes de todas as bactrias no formadoras
de esporos . Permanecem vivos durante meses em placas de gar seladas mantidas a 4 C e
podem ser cultivadas de amostra de pus dessecadas h varias semanas . Atualmente, a maioria
das cepas de Estafilococos isoladas de pacientes hospitalizados resistente Penicilina e muitos
outros antibiticos. S. aureus o agente mais comum de infeces piognicas no homem ,
causando grande variedade de infeces como furnculos , sndrome da pele queimada ,
pneumonia , osteomelite , meningite ,endocardite , amigdalite , enterocolite , infeces
urogenitais , intoxicaes alimentares , infeces de interesse odontolgico como pulpites e
estomatites .
Os Mecanismos de colorao de gram. Segundo Michael
J. Pelczar Jr.[et. al] A diferena na colorao entre clulas de bactrias gram-positivas e gramnegativas devido a sua relativa resistncia ao descoramento pelo lcool. Durante o processo de
gram. as clulas so tratadas com o cristal violeta (corante primrio) e em seguida com soluo
de iodo (um mordente) isto resulta na formao de um complexo cristal violeta-iodo ( CVI)
dentro das clulas. Quando uma bactria gram-negativa tratada com etanol, o lipdeo na
membrana externa dissolvido e removido, descorando a bactria gram-negativa ( que pode
ento ser tingida com o corante de fundo safranina). Em bactrias , o etanol faz com que os
poros peptideoglicano se contraiam, e o complexo corante CVI permanece no interior da clula.
METODOLOGIA
A pesquisa foi realizada no IFMA- Campus Z Doca, por um grupo de discentes do
curso de Tecnologia em Alimentos sob a orientao do prof. Msc.Osiel Cesar da Trindade Junior
.O estudo consistia na anlise microbiolgica dos aparelhos celulares dos alunos do IFMA Campus
Z Doca , a princpios foram preparados os principais meios de cultura com os quais trabalhar-seiam , o Caldo BHI, o gar Manitol , e o gar Macconkey `a temperatura e concentrao
necessrias para a analise do processo ,os mesmos foram embalados e levados ao autoclave para
a esterilizao de 15 a 20 minutos , aps preparados os meios de cultura, foram separados 60
tubos de ensaio com 15 ml de BHI cada um ,enquanto os demais meios de cultura ficaram em
repouso .A coleta foi realizada com 60 alunos de diferentes turmas sendo que no instituto temos
em mdia 580 a 600 alunos , com um auxlio de swab realizou-se a coleta do material , onde
cada swab foi transferido imediatamente para os respectivos tubos , em seguida foram colocados
na estufa no laboratrio de microbiologia , temperatura ambiente por um perodo de
incubao 24 horas . Logo aps foram preparadas as 60 placas de petri, 30 com gar Manitol, e
30 com gar Macconkey .As mesmas permaneceram em repouso para o enrijecimento do meio
de cultura , para posteriormente serem realizadas as devidas inoculaes .Passado as 24 horas do
caldo BHI essas amostras foram transferidas para as placas de petri por meio da inoculao , as
quais ficaram em repouso por aproximadamente 48 horas , para o crescimento e
desenvolvimento de possveis microorganismos .Em seguida , completado o perodo de repouso
foi realizada a anlise microscpica das amostras , sendo que mesmo a olho nu , foi possvel
observao bruscamente a presena de algumas colnias de bactrias , o teste de gram foi
realizado para a identificao de microorganismos gram positivos e gram negativos .Apos a
identificao de bactrias , foram distribudos folhetos educativos pelo instituto , abordando os
resultados da pesquisa e a importncia da higiene dos aparelhos , afinal por meio dos mesmos
pode-se obter a proliferao de diversos microorganismo vetoriais.
RESULTADOS
Das 30 amostras do meio MacConkey 15 delas apresentaram crescimento de microorganismos e
15 delas no demonstraram crescimento. No meio Agar Manitol 6 amostras apresentaram
crescimento de leveduras (fungos ) e 30 delas constataram crescimento de bactrias .No caldo
BHI 100% dos tubos apresentaram formaes de cogulos , turbidez , mostrando dessa forma a
fermentao de bactrias. Quanto ao crescimento em meio Agar manitol 100% das amostras
,pode-se observar a presena de bactrias da famlia Micrococaceae ( inclui gneros bacterianos
de gram-positivos cocus que habitam o ar e a pele.)
Ocorreu a fermentao do manitol , com formao de colnias com bordas amarelas indicando a
presena de bactrias Staphylococcus aureus . Em meio de Agar MacConkey constatou-se que
50% das placas ocorreu a formao de colnias bacterianas. Destas 49 apresentaram colnias
rosas , lactose positiva , sugerindo a presena de coliformes A45 .O crescimento bacteriano em
Agar MacConkey , sugere a presena de bactrias da famlia Enterobacteriaceae , um exemplo
disso a Salmonella
[apario dos sintomas (diarreia, vmito, nuseas intensas) ocorre
em menos de um dia aps o contato com o patgeno.] que possui integrantes capazes ou no de
fermentar a lactose do meio uma famlia de bactrias gram- negativas muito abundante
incluindo uma grande e variedade de bactrias patognicas. Na pesquisa realizada observou-se
que 100% dos celulares estudados apresentaram algum tipo de microorganismo, em que
algumas amostras apresentaram mais de um tipo de microorganismo (gram. positivo e gram.
negativo ).O que nos faz deduzir que no h o habito de higienizao dos mesmos .Entre os que
estavam contaminados com bactrias gram positivas , identificamos , ao microscpio a presena
de cocos gram positivo e Staphylococcus aureus .Foram encontrados presena de fungos .
Segundo Black, Jacquelyn G. Os fungos obtm seu
alimento somente atravs da absoro da matria orgnica oriunda de organismos mortos.
Mesmo quando invadem tecidos vivos, os fungos tipicamente, matam as clulas, e ento
absorvem delas seus nutrientes. Embora os fungos tenham caractersticas em comum com as
plantas, suas estruturas so muito mais simples em organizao do que as folhas ou caules
verdadeiros. Os fungos formam esporos, mais no formam sementes. Muitos fungos no
representam ameaa a outros seres vivos, mais alguns atacam plantas e animais e at seres
humanos.
CONCLUSO:
As fases de crescimento so exibidas de diferentes maneiras nas colnias que
crescem em meios solido , normalmente uma clula se divide exponencialmente , formando uma
pequena colnia __ todos os descendentes da clula original .A colnia cresce rapidamente em
suas extremidades; as clulas que esto perto do centro crescem mais lentamente ,ou comeam
a morrer , por terem menos quantidades de nutrientes disponveis e por estarem expostos a mais
produtos txicos residuais .Em uma colnia todas as fases da curva de crescimento ocorrem
simultaneamente .
A higiene do corpo e do ambiente fundamental na preveno de muitas doenas,
como as do intestino, da pele, dos olhos, dos pulmes e de outras. As regras de higiene so
primarias, sendo desnecessria mencion-las completamente. Entretanto uma simples limpeza
no celular com lcool poder evitar o desenvolvimento de muitas dessas bactrias, e no utilizar
o aparelho durante as refeies evita doenas provenientes dessas bactrias.
CONSIDERACES FINAIS
Comparadas com as eubactrias gram-negativas, as eubactrias gram-positivas
normalmente tem uma quantidade maior de pepticleoglicano em sua parede celular, o que torna
a parede muito espessa. O polmero representa 50% ou mais do peso seco da parede de algumas
espcies gram-positivas, mas somente em torno de 10% da parede de espcies gram-negativas.
Muitas eubactrias gram-positivas tambm contem polissacardeos denominados cidos
teicicos na sua parede. Os cidos teicicos, que so polmeros de glicerol e ribitol fosfatos, esto
ligados ao pepticleoglicano ou membrana citoplasmtica. Carregados negativamente eles
podem ajudar no transporte de ons positivos para dentro e para fora da clula e no
armazenamento de fsforo.
Mais complexas que as paredes celulares de gram-positivas as paredes de eubactrias
de gram-negativas possuem uma membrana externa cobrindo uma camada fina de
peptideoglicano das gram-negativas representa somente 5 a 10% do peso seco da parede celular.
Esta camada encostada no espao periplasmtico entre a membrana citoplasmtica e a
membrana externa. As bactrias gram-positivas no possuem este espao assim como no tem
uma membrana externa como parte da sua parede celular.
REFERNCIAS.
1. BLACK ,JACQUELYN G.-Microbiology Copyrights 1999,1996,1993,1990 by prentice Hall ,

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Maria Carolina Minardi Guimaraes e Cristina Leonahardt.-Porto Alegre: Artmed , 2002.
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AVALIAO MICROBIOLGICA DE GUA MINERAL COMERCIALIZADA NOS MUNICPIOS DE

RUSSAS E LIMOEIRO DO NORTE, CEAR
1
M. G. S. Silva (PQ); N. F. Silva (PQ) ; F. R. Silva (PQ); C. L. Arruda Neto (PQ); N. P. Nascimento (PQ) ; G. C.
3
Souza (PQ)
1
2
Instituto Federal do Cear (IFCE) Campus Limoeiro do Norte -, Universidade da Integrao Internacional da
3
Lusofonia Afro-Brasileira (UNILAB), Instituto Federal do Cear (IFCE) Campus Limoeiro do Norte. E-mail:
mggracynha@hotmail.com.
(PQ) Pesquisador
RESUMO
A gua um recurso natural intensamente
explorado pelo homem e nas ltimas dcadas a sua
disponibilidade para o consumo humano tem se tornado
limitada. O objetivo deste trabalho foi avaliar a
qualidade
microbiolgica
de
gua
mineral
comercializada nos municpios de Russas e Limoeiro do
Norte, CE. Foram analisadas doze diferentes marcas, no
perodo de maio a junho de 2013, pelo mtodo de tubos
mltiplos, para a determinao do Nmero Mais
Provvel (NMP/100 mL) de coliformes totais,

termotolerantes e Escherichia coli. As anlises foram
realizadas no Laboratrio de Microbiologia do Instituto
Federal de Educao, Cincia e Tecnologia, Campus
Limoeiro do Norte. No foi observado nenhum
parmetro fora das especificaes nas amostras
analisadas, mostrando que as doze marcas de gua
mineral comercializadas esto em excelente qualidade
microbiolgica.
PALAVRAS-CHAVE: Coliformes. E. coli. RDC 275/05. gua. Microbiologia.
MICROBIOLOGICAL EVALUATION OF MINERAL WATER THE OF COMERCIALIZED IN RUSSAS AND

LIMOEIRO DO NORTE CITY, CEAR
ABSTRACT
Water is a natural resource intensively
exploited by man in recent decades and its availability
for human consumption has become limited. The aim of
this study was to evaluate the microbiological quality of
bottled water sold in the Russas of Limoeiro Norte, city
CE. We analyzed twelve different brands, in the period
May-June 2013, the multi-tube method for the
determination of Most Probable Number (NMP/100 mL)
of total coliforms, coliforms and Escherichia coli. The

analyzes were performed at the Laboratory of
Microbiology at the Federal Institute of Education,
Science and Technology, Campus Limoeiro do Norte.
There were no off-spec parameter in the samples
analyzed, showing that the twelve brands of mineral
water.
KEY-WORDS: Coliforms. E. coli. RDC 275/05. Water. Microbiology.
AVALIAO MICROBIOLGICA DE GUA MINERAL COMERCIALIZADA NOS MUNICPIOS DE

RUSSAS E LIMOEIRO DO NORTE, CEAR
INTRODUO
A gua constitui um dos compostos de maior distribuio e importncia na crosta
terrestre. Sua importncia para a vida est no fato de que nenhum processo metablico ocorre
sem sua ao direta ou indireta (ESTEVES, 1998). A gua segura para o consumo est livre de
microrganismos patognicos e substncias qumicas prejudiciais sade e denominada gua
potvel (PELCZAR, 1997).
Desta forma, segundo Dias (2008) a gua em seu estado natural um dos componentes
de maior pureza que se conhece e atualmente torna-se difcil encontrar uma fonte de gua doce
que no tenha suas caractersticas alteradas.
No Brasil, o consumo de gua mineral vem crescendo continuamente, principalmente nas
regies Sudeste e Nordeste. O crescimento no consumo de guas minerais est relacionado
principalmente poluio dos rios que abastecem as grandes cidades e aos efeitos medicinais
benficos para a sade que os consumidores acreditam que as guas minerais possam ter
(MORGANO et al., 2002).
De acordo com Silva (2008) guas minerais so aquelas que por sua composio qumica
ou caractersticas fsico-qumicas so consideradas benficas sade. So obtidas diretamente
de fontes naturais ou artificialmente captadas, de origem subterrnea, caracterizadas pelo
contedo definido e constante de sais minerais e pela presena de oligoelementos e outros
constituintes. A rigor, toda gua natural, por mais pura que seja, tem certo contedo de sais. As
guas subterrneas so especialmente enriquecidas em sais retirados das rochas e sedimentos
por onde percolaram muito vagarosamente.
A gua mineral tem substitudo gua tratada das redes de abastecimento no gosto dos
consumidores. Sob alegaes diversas, preferem gua mineral por ser livre de sabores e odores
residuais (principalmente do cloro, usado no tratamento da gua), tambm por ser mais pura e
limpa, ou seja, mais saudvel na viso dos consumidores (LIMA, 2007).
Segundo a RDC n 275/2005, as bactrias utilizadas como indicadores de contaminao
externa e padres de potabilidade de gua mineral so as pertencentes aos grupos coliformes
totais, coliformes termotolerantes e clostrdios sulfito-redutores, alm dos enterococos e
Pseudomonas aeruginosa.
O grupo dos coliformes totais um indicador das condies higinicas do processo e sua
enumerao muito utilizada em indstrias alimentcias, indicando contaminao pssanitizao ou ps-processo, evidenciando prticas de higiene e sanificao aqum dos padres
requeridos para o processamento de alimentos (SILVA, 2008).
Os coliformes termotolerantes ou fecais so capazes de fermentar a lactose a 44 - 45C
(0,2) em 24 horas. Nessas condies, cerca de 90% das bactrias so Escherichia coli, o restante
pertence ao gnero Enterobacter e Klebsiella. Essa definio objetivou selecionar os coliformes
originrios do trato gastrintestinal. Portanto, a presena de coliformes fecais muito mais

significativa do que a presena de coliformes totais, dada a alta incidncia de E. coli dentro do
grupo fecal (SILVA, 2008).
A qualidade microbiolgica da gua mineral engarrafada de grande interesse, j que
muitos consumidores a usam como uma alternativa para a gua de abastecimento pblico. A
gua engarrafada deve ser de boa qualidade microbiolgica, especialmente se o uso for
destinado populao vulnervel, tais como doentes, idosos ou crianas (DIAS, 2008).
Logo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a qualidade da gua mineral de garrafas
de 500 e 510 mL de 12 marcas comercializadas nos municpios de Russas e Limoeiro do Norte, CE,
utilizando como parmetros coliformes totais, coliformes termotolerantes e Escherichia coli de
acordo com a Resoluo RDC n 275/05, da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA).
MATERIAIS E MTODOS
Trata-se de um estudo transversal, com caractersticas descritivas e analticas. Foram
utilizadas 12 marcas de gua mineral natural, no carbonatada, embaladas em garrafas de 500 e
510 mL cada, comercializadas em supermercados nos municpios de Russas e Limoeiro do Norte,
Cear. As amostras foram adquiridas aleatoriamente, na embalagem original e assim mantidas
em temperatura ambiente at o momento da anlise.
As anlises foram realizadas no Laboratrio de Microbiologia do Instituto Federal de
Educao, Cincia e Tecnologia, Campus Limoeiro do Norte, sendo avaliados os seguintes
parmetros: coliformes totais; coliformes termotolerantes e Escherichia coli.
Utilizou-se o mtodo de tubos mltiplos, para determinao do Nmero Mais Provvel
(NMP/100mL) de bactrias do grupo coliformes totais e termotolerantes. Esta tcnica foi
utilizada em srie de trs tubos de ensaio contendo meio de cultura e tubos de Durham
invertidos. Para a determinao de coliformes totais e termotolerantes das amostras foram
utilizadas duas etapas:
a) Teste Presuntivo, que consistiu na inoculao de volumes de 10.0; 1.0 e 0.1 mL de cada
amostra da gua a ser analisada em triplicata, em tubos de ensaio contendo tubos de Durham e
meio de cultura (caldo lactosado Lactose Broth Himedia), os quais foram incubados a uma
temperatura de 37 C por 24/48 h.
b) Teste Confirmativo, que consistiu na inoculao de uma alquota de todos os tubos
positivos, com bolhas, no teste presuntivo em meio de cultura (Verde Brilhante Bile Himedia),
para deteco de bactrias do grupo coliformes totais, os quais foram incubados durante 24/48 h
a uma temperatura de 37 C e em meio seletivos para Escherichia coli (caldo E.C. Himedia).
Estes foram incubados em banho-maria durante 24 h a 45 C com agitao e temperatura
constante.
Segundo a resoluo da ANVISA qualidade de gua mineral, a RDC N 275/2005, para
que a mesma no represente risco sade do consumidor, nas anlises microbiolgicas os
coliformes termotolerantes devem estar ausentes, enquanto que os coliformes totais podem ser
observados em uma nica amostra (em contagem < 2 NMP/100mL).
Das 12 amostras avaliadas todas atenderam aos valores estabelecidos pela legislao
vigente. Os resultados das anlises esto representados na tabela 1.
Tabela 1 Resultados das anlises microbiolgicas das diferentes marcas de gua mineral
comercializada nas cidades de Russas e Limoeiro do Norte, Cear.
Anlises microbiolgicas
Coliformes
Coliformes totais
Escherichia coli
termotolerantes
(NMP/100mL)
(Presena/Ausncia)
(NMP/100mL)
A
Ausncia
Ausncia
Ausncia
B
Ausncia
Ausncia
Ausncia
C
Ausncia
Ausncia
Ausncia
D
Ausncia
Ausncia
Ausncia
E
Ausncia
Ausncia
Ausncia
F
Ausncia
Ausncia
Ausncia
G
Ausncia
Ausncia
Ausncia
H
Ausncia
Ausncia
Ausncia
I
Ausncia
Ausncia
Ausncia
J
Ausncia
Ausncia
Ausncia
L
Ausncia
Ausncia
Ausncia
M
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Fonte Laboratrio de Microbiologia - IFCE-Campus Limoeiro do Norte.
Amostras
(marcas)
Em pesquisa realizada por Nascimento e colaboradores (2000) na cidade de So Luis/MA

no encontraram contaminao por coliformes totais e coliformes termotolerantes/E. coli nas
amostras de gua minerais analisadas.
Resultados contrrios foram verificados por Alves, Odorizzi e Goulart (2002), em seu
estudo constataram que de 18 amostras de diferentes marcas de gua mineral comercializadas
em Marlia/SP, apenas 5,5% estavam contaminadas por coliformes totais, sendo que 94,5%
estavam aptas para consumo. O fato de ser encontrada uma amostra de gua mineral
contaminada, permite afirmar que sua contaminao pode ter sido durante a fase de captao e
processamento do produto.
Fato semelhante foi verificado por SantAna e colaboradores (2003), em exames de
quarenta e quatro amostras de gua mineral envasadas, constataram que a contaminao por
coliformes totais e Escherichia coli, detectada em 25% e 20,4% das amostras, respectivamente,
sugere falhas higinicas ao longo do processo e contaminao fecal recente.
A preservao da qualidade das guas uma necessidade universal, que exige ateno
por parte dos governos, atravs de rgos de saneamento, particularmente em relao aos
mananciais e guas de consumo humano, visto que sua contaminao por excretas de origem
humana ou animal pode torn-las um veculo na transmisso de agentes de doenas infecciosas e
parasitrias. Por isso impe-se a necessidade de exames rotineiros das mesmas, para a avaliao
de sua qualidade do ponto de vista bacteriolgico (CETESB, 1998).
A implantao de sistemas de controle como Boas Prticas de Fabricao (BPFs) e Anlises
de Perigos e Pontos Crticos de Controle (APPCC) podem garantir que as propriedades da gua
mineral sejam mantidas, pois esses sistemas estabelecem pontos de monitoramento em toda a
produo (TAROMARU et al., 2008).
CONCLUSO
Diante dos resultados microbiolgicos, concluiu-se que as 12 (doze) amostras analisadas
encontravam-se de acordo com as especificaes exigidas pela legislao vigente, padro fixado
pela Resoluo RDC n 275 de 22 de setembro de 2005 ANVISA.
As amostras de gua mineral natural apresentaram condies sanitrias satisfatrias,
portanto, prprias para o consumo humano, com isso podemos afirmar que as boas prticas e
manipulao foram satisfatrias, sem risco a sade humana.
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ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE FUNGOS ISOLADOS DO SISTEMA DE

ABASTECIMENTO DE GUA ALTO DO CU, RECIFE-PE FRENTE A BACTRIAS
DE INTERESSE CLNICO
T. R. Feitosa (PQ) ; A. M. Marinho (IC); J. S. Silva (IC) ; R. R. Jardim (IC) ; M. B. Costa (IC) ; J. B. Rolim (IC)
1
Instituto Federal do Tocantins (IFTO) Campus de Araguana e (UFPE) Universidade Federal de Pernambuco e 2,3,4,5,6
Instituto Federal do Tocantins (IFTO) - Campus de Araguana e-mail: talyce.feitosa@ifto.edu.br
RESUMO
As guas de abastecimento passaram a ser vistas com
grande importncia uma vez que podem servir de
veculo para microrganismos como vrus, bactrias,
fungos, podendo inclusive exibir patogenicidade. A
presena de fungos alm de causar deteriorao da
qualidade da gua, est relacionada a produo de
metablitos secundrios. Um dos interesses por testes
com estes organismos verificar se apresenta atividade
antimicrobiana.
A partir disto, cinco espcies de fungos isolados do
Sistema de abastecimento de gua Alto do Cu,
Pestalopsis palestris, Cladosporium cladosporioides,

Trichoderma pseudokoningii,, Curvularia lunata e
Penicillium sp, foram testados frente s bactrias de
interesse clnico, Staphylococcus aureus (UFPEDA 01),
Pseudomonas aeruginosa (UFPEDA 39) e Mycobacterium
tuberculosis (UFPEDA 71). O extrato de Penicillium sp foi
o nico que apresentou atividade antimicrobiana frente
ao Staphylococcus aureus.
PALAVRAS-CHAVE: Teste de atividade, fungos filamentosos, Staphylococus aureus.
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF FUNGI ISOLATED FROM WATER SUPPLY ALTO DO CU, RECIFE-PE
FRONT OF BACTERIA OF CLINICAL INTEREST
ABSTRACT
The water supply came to be viewed with great

importance since it can serve as a vehicle for
microrganisms such as virus, bacteria, fungi, that can
exhibit pathogenicity. Futhermore, fungi can cause
water quality deterioration and is regarded to secondary
metabolits production. Interesting in testing with fungi
is the access if they present antimicrobial activity. From
this, five strains of fungi isolated from the water suply
sistem Alto do Cu, Pestalopsis palestris, Cladosporium

cladosporioides, Trichoderma pseudokoningii, Curvularia
lunata and Penicillium sp were tested front bacteria of
clinical interesting, Staphylococcus aureus (UFPEDA 01),
Pseudomonas
aeruginosa
(UFPEDA
39)
and
Mycobacterium tuberculosis (UFPEDA 71). The extracts
of strain Penicillium sp was the only that presented
activity for Staphylococcus aureus.
KEY-WORDS: Test activity, filamentous fungi, Staphylococcus aureus.
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE FUNGOS ISOLADOS DO SISTEMA DE

ABASTECIMENTO DE GUA ALTO DO CU, RECIFE-PE FRENTE A BACTRIAS
DE INTERESSE CLNICO
INTRODUO
A qualidade microbiolgica da gua expressa pela quantidade de bactrias presentes em
um determinado volume de gua, porm nos ltimos anos, vrus e parasitas tambm sido aceito
como parmetros de qualidade. Alguns estudos, tem relatado a ocorrncia de fungos
filamentosos na gua potvel, porm a proporo pequena diante da quantificao bacteriana2
Os fungos constituem um grande grupo de seres vivos, e at muito recentemente os
fungos filamentosos eram apenas apontados como sendo, causadoras de acidificao,
fermentao ou mesmo degradao dos alimento. Contudo, esta situao alterou-se quando se
comeou a relacionar a ocorrncia desses organismos com o aparecimento de algumas doenas.
No entanto, s mais tarde se descobriu que a ao txica dos fungos se devia a determinados
metablitos sintetizados por estes18. A descoberta destes metablitos txicos ocorreu por volta
de 1960, com a aflotoxina sintetizado pelo fungo Aspergillus flavus. Os fungos esto presentes
no solo e no ar onde os esporos podem se alojar nas superfcies da tubagem ou nos sedimentos,
e ento cresam e produzam esporos atingindo todo o sistema de distribuio3.
Os fungos so menos susceptveis ao cloro que as bactrias. Existem evidncias que
sugerem que os fungos sobrevivem e se multiplicam nos sistemas de distribuio em filmes nas
superfcies4.
Os biofilmes so conhecidos por serem compostos por comunidades complexas de
microrganismos, incluindo as bactrias aerbicas e anaerbicas, as amebas, os protozorios, os
nemtados, e os fungos. Os microrganismos que se alojam nas proximidades e no prprio
biofilme vivem de uma forma sinergtica, sugerindo que os fungos servem de suporte ou de
fonte de nutrientes para as bactrias, contribuindo assim para a formao de biofilmes5.
So vrias as maneiras de o homem colocar a sade em risco, como por exemplo, atravs
da ingesto direta da gua19, da preparao de alimentos, da higiene pessoal, da agricultura, da
higiene do ambiente, causado por contaminao atravs de agentes biolgicos como bactrias
entre outros6.
A bactria Staphylococcus aureus um importante patgeno devido a sua virulncia,
resistncia aos antimicrobianos e associao a vrias doenas7. Embora integrante da microbiota
humana normal, podem sofrer mudanas, por exemplo, fsicas, qumicas ou imunolgicas, que
favorecem a multiplicao deste microrganismo levando ao desencadeamento de infeces
oportunistas importantes8.
Bactrias
N de Coleo (DAUFPE)
Staphylococcus aureus (G+)
01
Pseudomonas aeruginosa (G-)
39
Mycobacterium tuberculosis (AAR)
71
O Staphylococcus aureus oxacilina resistente (ORSA) faz parte de um grupo de bactrias

predominante nas infeces hospitalares. Porm, j existem relatos indicando que esses
microorganismos esto causando infeces na comunidade, em indivduos saudveis. A
resistncia dessas bactrias se deve principalmente ao uso abusivo de antibiticos9, 20. Este fato
devido, ao surgimento de microrganismos multiresistentes aos antibiticos10 e est geralmente
relacionado ao uso abusivo desses agentes antimicrobianos11 estes so drogas que tem a
capacidade de inibir o crescimento ou matar os microrganismos patognicos, sem causar
toxicidade ao hospedeiro12.
Apesar da disponibilidade de um grande nmero de antibiticos de ltima gerao,
fundamental buscar compostos que possam atuar como novas drogas a serem utilizadas no
combate a doenas causadas por bactrias13.
MATERIAS E MTODOS
1. MICRORGANISMOS
1.1Fungos
Foram utilizados seis fungos isolados da rede de abastecimento do Alto do cu.
Fungos
N de Identificao
Pestalopsis palestris
04
Cladosporium cladosporioides
06
Trichoderma pseudokonigil
35
Curvularia lunata
50
Penicillium sp.
45
1.2 Bactrias
A fim de testar os metablitos produzidos pelos fungos, foram utilizadas bactrias Gram
positivas (G+), Gram negativas (G-) e lcool cido Resistente (AAR) de interesse clnico adquiridas
na Coleo de Culturas do Departamento de Antibiticos (UFPEDA), visualizadas abaixo.
2. MEIOS DE CULTIVOS LQUIDOS
2.1 Meio BDA (Meio Batata-Dextrose-gar)
Batata
Glicose
gua destilada
Ph
200,0g
15,0g
p/ 1000 ml
6,8 7,0
2.2 Meio SAB (Meio Sabouraud)

Peptona
Glicose
gua destilada
Ph
50g
40g
p/ 1000 ml
5,6
SELEO DE MICRORGANISMOS
A fim de testar os fungos que melhor produzem metablitos frente s bactrias clnicas,
discos de gelose de aproximadamente seis milmetros foram inoculados em dois meios de cultivo
lquidos Batata Dextrose (BDA) e Sabouraud (SAB) e incubados em condies estticas por cinco
dias. Aps este perodo, foi obtido o lquido metablico por filtrao e testada atividade
antimicrobiana pelo mtodo de Kib Bauer14 (1966) onde discos de papel foram embebidos em
10L do lquido metablico filtrado do fungo e depositados em placas de Petri previamente
semeadas com as bactrias a serem testadas. As mesmas foram incubadas a 37C por 24 horas,
aps este perodo foram medidos os halos de inibio.
INFLUENCIA DA AGITAO NA PRODUO DE METABLITOS.
Com o objetivo de observar a influncia da agitao na produo de metablitos, foram
inoculados discos de gelose de aproximadamente seis milmetros do fungo previamente
selecionado na etapa anterior no meio BDA, que apresentou as melhores condies de produo
de metablito. A influncia da agitao foi analisada atravs da observao da formao de halos

de inibio pela metodologia descrita anteriormente.
OTIMIZAO DAS CONDIES DA PRODUO DE METABLITOS
A fim de otimizar as condies de produo dos metablitos foi utilizada a metodologia
de planejamento experimental. Com a linhagem que apresentou melhor resultado no ensaio
anterior foi realizado um planejamento experimental a fim de obter as melhores condies
operacionais. Para isto foi aplicado um Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR),
atravs de um planejamento fatorial completo (22) com os nveis -1 e +1, quatro pontos axiais (-2
e +2) e trs pontos centrais (nvel zero) em que as variveis estudadas foram: pH e agitao como
varveis independentes e atividade antimicrobiana como varivel dependente . O planejamento
constou de 11 experimentos.
Tabela 1- Otimizaes dos experimentos
Penicillium sp
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Glicose (g/L)
0,3
17
0,3
17
0,1
0,1
0
2
0,1
0,1
0,1
Inculo
1,5
1,5
2,5
2,5
1
3
2
2
2
2
2
TESTES EM CONDIES ESTVEIS
As linhagens dos fungos Pestalopsis palestris, Cladosporium cladosporioides, Trichoderma
pseudokonigii, Curvularia lunata , Penicillium sp foram fermentados em dois meios lquidos em
condies esttica por um perodo de cinco dias, apresentando um pH na faixa de 6,05 a 7,54 no
meio BDA demonstrando que est em torno da neutralidade enquanto que quando a
fermentao foi realizada, em meio SAB apresentou um pH de 6,76 a 8,76 variando de neutro a
alcalino.
Ao longo do crescimento observou-se um maior rendimento de biomassa dos fungos no
meio BDA com valores variando de 0,80g a 4,24g, demonstrando uma boa afinidade nesse meio,
enquanto em meio SAB o rendimento foi mais baixo tendo um crescimento variando de 0,10g a
1,4g (figura 2). Este comportamento pode ser justificado devido ao pH alcalino, que no
representa uma boa condio para o crescimento dos fungos.
TESTES EM MEIO POR AGITAO
O gnero Penicillium sp. mostrou uma produo de metabolitos com atividade
antimicrobiana apresentando um halo de inibio de 6,5 mm aps 24h, frente Staphylococus
aureus, mostrando sensibilidade, enquanto os outros extratos fngicos no apresentaram
atividade significativa com os microrganismos testados. Portanto este fungo foi selecionado para
ser utilizado nas etapas posteriores.
Penicillium sp produz uma diversificada variedade de metablitos secundrios ativos,
incluindo antibacteriano, imunossupressores, agentes de reduo de colesterol15.
Os fungos do gnero Penicillium sp constituem um grupo de microrganismos que
sintetizam elevada quantidade de metablitos secundrios, atingindo em certos casos, uma
produo 73% superior a de outras classes de microrganismos15, 23.
Devido a isto foi realizada a fermentao sobre condies de agitao para observar a
influncia desse parmetro no meio. Constatou-se que houve um favorecimento do crescimento
do fungo, que pode ser justificado devido agitao promover a homogeneizao dos nutrientes
do meio.
Ao final do processo de agitao, tivemos o crescimento do fungo de 3,96 a 5,03g, tendo
em vista o melhor crescimento com o tempo de 72h e pH de 8,5.
Na tabela 4 observa-se a atividade do fungo Penicillium sp. frente as bactrias S. Aureus
(UFPEDA 709, UFPEDA 730 e UFPEDA 733) testados. O Penicllium sp. demonstrou atividade
frente ao S. aureus UFPEDA 730 j nas primeiras vinte e quatro horas de cultivo mantendo um
aumento desta atividade ao longo de 148h com halos de inibio variando de 19,73mm a 22mm.
Embora o Penicillium no tenha se mostrado ativo nas primeiras horas frente aos S. aureus 709 e
733, observou-se uma atividade significativa com halos de 20,25 frente a S. aureus 709 enquanto
que para o S.aureus 733 o halo foi de 16 mm aps 148horas.
Tabela 2 Halos de inibio formados pelo metablito produzido pelo fungo Penicillium sp.em
meio BDA frente ao S. Aureus 709, 730 e 733.
Penicillium sp (Tempo)
Mdia dos halos de Inibio (mm)

S. aureus
709
24h
730
19,731
733
48h
20,211
72h
21,801
96h
220,8
124h
220,8
148h
20,250,05
210,7
160,87
(-) Ausncia de Atividade
O metabolismo secundrio de microrganismos extremamente diversificado,

proporcionando a descoberta de novos compostos qumicos bem como novas classes de
compostos22. Todavia, a produo de metablitos secundrios por parte de fungos depende
intrinsecamente das condies utilizadas para seu crescimento e desenvolvimento (tempo de
incubao, composio do meio de cultura, temperatura e ph16.
Portanto observou-se que sob a influncia da varivel agitao o fungo Penicillium sp.
Apresentou maior potencial na produo de metablitos secundrios.
Com o objetivo de otimizar as condies de produo, utilizou-se a metodologia do
planejamento experimental variando a glicose e o inoculo a fim de verificar a influncia na
produo de metablitos secundrios.
Dos 11 experimentos realizados foi observados halos de inibio apenas nas condies
preconizados pelos experimentos 9, 10 e 11 equivalentes ao ponto central (figura 1).
Figura 1 - Halos de inibio formados pelo metablito produzido pelo fungo Penicillium sp.em
meio BDA,frente aos S.Aureus 709,730,733.
As condies preconizadas pelos experimentos 9, 10 e 11 demonstram um pH de 7,5 ou

seja prximo a neutralidade o que pode ter favorecido a produo de metablitos secundrios
inibindo o crescimento dos Staphylococus aureus Orsa.
Segundo Griffin et al17 (1993) uma vez que a glicose presente no meio, normalmente, tem
um efeito repressor e inibitrio, ocasionando o retardo do crescimento fngico. No entanto, o
meio BDA se mostrou um bom meio de cultura quando se deseja a formao de biomassa.
De acordo com os resultados, pode-se sugerir que o meio BDA com uma quantidade mnima de
glicose (< 0,1) e variao de inoculo (< 2), quando o objetivo do trabalho for obteno de
crescimento metabolito dentro de um espao de tempo. No entanto, quando o objetivo for
anlise de estruturas reprodutivas, sugere-se que o meio BDA seja empregado, pois o mesmo
permite uma rpida esporulao.
Nesse caso as variveis glicoses e inoculos influenciaram de forma negativa no processo o
que significa que quanto menos a quantidade delas melhor para a produo do antibitico pelo
fungo.
O grfico superfcie resposta demonstra a tendncia em que o processo deve ser
conduzido. (figura 2).
Figura 2 - Grfico superfcie resposta

Nesse caso o grfico est demonstrando que quanto menor a quantidade de glicose e de
inoculo melhor ser a produo do seu metablito. Pode observar que no caso do grfico
superfcie resposta da varivel 733 (seta) o halo (vermelho de cima) maior est presente quando
a glicose est entre 0,5 e 0 da mesma forma que o inoculo.
CONCLUSO
Os fungos filamentosos apresentaram preferncia de crescimento em meio BDA tendo
um bom rendimento em biomassa.
O Penicillium sp possui metablitos secundrios de inibio, tendo se apresentando ativo
frente ao Staphylococcus aureus.
A glicose em quantidade de 0,1 teve um efeito inibidor no crescimento e produo de

metabolito do fungo.
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PESQUISA DE Escherichia coli NAS MAANETAS DAS PORTAS DO IFPE CAMPUS GARANHUNS
1
J.A.S.Araujo (Es) ; A.N.Clarindo (Es); S.A.Souza (MO) ; C.Tessmann (PO)

Curso Tcnico em Meio Ambiente Instituto Federal de Pernambuco (IFPE) - Campus Garanhuns. E-mail:
cristiane.tessmann@garanhuns.ifpe.edu.br
(Es) Estudante
(MO) Monitor
(PO) Professor Orientador
RESUMO
Com o crescimento populacional vem a preocupao
com a qualidade de vida e a contaminao por
microrganismos patgenos em locais pblicos, inclusive
escolas. O objetivo do presente trabalho foi verificar a
ocorrncia de coliformes totais e Escherichia coli nas
maanetas do IFPE Campus Garanhuns. As amostras
foram coletadas com swab estril embebido em gua
ultrapura
estril.
Aps,
os
swabs
foram
homogeneizados com o meio Colitag em 100mL de
gua ultrapura estril e incubados a 35C/24h. Apenas
12% das maanetas analisadas apresentaram

contaminao por coliformes totais e Escherichia coli, o
que indica que existe uma boa assepsia nas mos dos
indivduos que manipulam as maanetas e tima
condio de higienizao das mesmas.
PALAVRAS-CHAVE: maaneta, contaminao, Escherichia coli.
SEARCH OF Escherichia coli IN DOOR HANDLES OF ROOMS FROM IFPE CAMPUS GARANHUNS
ABSTRACT
With population growth comes the concern for quality
of life and contamination by pathogenic microorganisms
in public places, including schools. The objective of this
study was to verify the occurrence of total coliforms and
Escherichia coli in the door handle IFPE Campus
Garanhuns. The samples were collected with sterile
swab soaked in sterile ultrapure water. After the swab's
were homogenized with medium Colitag in 100mL of
KEY-WORDS: door handle, contamination, Escherichia coli.
sterile ultrapure water and incubated at 35 C/24h. Only

12% of doorknobs were contaminated by total coliforms
and Escherichia coli, indicating that there is a good
asepsis in the hands of individuals who manipulate the
door handles and optimal hygiene condition.
PESQUISA DE Escherichia coli NAS MAANETAS DAS PORTAS DO IFPE CAMPUS GARANHUNS
INTRODUO
Com o crescimento populacional, h uma grande preocupao com sade e qualidade de
vida. O convvio social em locais de espaos pblicos mostra que a cada dia se faz necessrio o
exerccio de prticas educativas das aes de higiene e bem-estar nas reas comuns (ALVES et al.,
2010). Existem bactrias patognicas para o homem, que geram as mais variadas doenas. Isso
favorecido pelo fato de ambientes pblicos nem sempre possurem uma adequada higienizao.
Alm disso, devido incorreta limpeza das mos por parte dos alunos e funcionrios e a demora
na limpeza das maanetas, ocorre a contaminao nesses ambientes, e posteriormente, elas
podem contaminar o indivduo no momento da alimentao (via oral), ou no contato da mo
com a boca por outros motivos, bem como no contato com o nariz e os olhos (CAMPOS, 2012).
Algumas dessas bactrias patognicas, como por exemplo Escherichia coli, tem a
capacidade de formar biofilmes, que representam um crescente problema para a sade pblica,
uma vez que so responsveis por cerca de 70% das infeces nosocomiais. Alm disso, clulas
ssseis so mais resistentes fagocitose e maioria dos antimicrobianos, o que dificulta o
tratamento das infeces e contribui para o aumento da morbimortalidade dos pacientes
(SALDANHA & GOMES, 2013).
A Escherichia coli uma bactria pertencente famlia Enterobacteriaceae caracterizada
pela atividade da enzima -glicuronidase; produz indol a partir do aminocido triptofano e a
nica espcie do grupo dos coliformes termotolerantes cujo habitat exclusivo o intestino
humano e de animais homeotrmicos, onde ocorre em densidades elevadas (BRASIL, 2005).
Apesar de fazer parte da flor normal do trato intestinal, a E. coli a principal causa de infeces
do trato urinrio em humanos e tem sido relacionada com sepse, pneumonia, meningite e
diarreia do viajante (ACTOR, 2007).
Apesar disso, o hbito de lavar as mos ou higieniz-las com lcool gel j ajudam muito a
evitar a contaminao. Alm disso, a sanitizao adequada e peridica das maanetas tambm
garantem a inocuidade das mesmas. Um teste de sanitizao realizado em maaneta de
banheiro pblico, mostrou que, aps a limpeza com bactericida, a quantidade de bactrias
reduziu bastante, encontrando-se 5 UFCs. No entanto, 15 minutos aps a limpeza, em que 35
pessoas encostaram na maaneta ou na porta, esse nmero subiu para 50 UFCs, ou seja, dez
vezes mais do que antes (G1, 2014). Cabe lembrar que para garantirmos a maneira adequada de
sanitizar uma maaneta deve-se lav-la com o uso de esponja e pano embebido com soluo
detergente, enxagu-la com gua limpa e sec-la. Aps, desinfetar as maanetas das portas,
friccionando suas superfcies com lcool a 70% (COVISA, 2006).
Frente ao avano da Gripe A que ocorreu no ano de 2010, houve uma grande divulgao
das formas corretas de se higienizar e evitar a contaminao com o vrus nos mais variados
ambientes. Entretanto, passado o surto, no foi desenvolvido nenhum outro tipo de trabalho de
conscientizao (CAMPOS, 2012)
Assim, o objetivo do presente trabalho foi verificar a ocorrncia de coliformes totais e
Escherichia coli nas maanetas do IFPE Campus Garanhuns.
MATERIAIS E MTODOS
Foram analisadas 25 maanetas distribudas da seguinte maneira: 8 salas de aulas, 2
banheiros de alunos, 2 banheiros de servidores, 11 laboratrios 1 sala de professores e 1
biblioteca.
A coleta das amostras foi realizada durante o ms de abril de 2014, utilizando swabs
estreis umedecidos em gua ultrapura estril e friccionados sobre as superfcies das maanetas,
no sentido vai-e-vem, em ambos os lados da porta (dentro e fora). Aps, os swabs foram
imediatamente conduzidos ao Laboratrio de Microbiologia Ambiental do IFPE Campus
Garanhuns para as anlises microbiolgicas.
Uma vez no laboratrio, os swabs foram transferidos para 100mL de gua ultra pura
estril acrescida do meio de cultura Colitag, e incubados a 35C por 24 horas. Transcorrido o
tempo de incubao, os frascos foram analisados visualmente para verificar a mudana da
colorao (amarelo forte) e levados para cmera de ultravioleta 365nm para observar a emisso
de fluorescncia. Os frascos que apresentaram colorao amarelo escuro estavam contaminados
por coliformes totais e os que emitiram fluorescncia havia presena de Escherichia coli.
Das 25 maanetas analisadas, apenas trs (12%) foram positivas para coliformes totais
(figura 1) e Escherichia coli.
As maanetas positivas foram de uma sala de aula, um laboratrio e do banheiro
masculino dos servidores. Todas as demais maanetas, incluindo as dos demais banheiros
analisados, apresentaram resultado negativo. Os resultados encontrados na pesquisa encontramse representados na tabela 1.
Figura 1 Frascos contendo amostra com o meio de cultura (esquerda) e, aps

incubao, resultado positivo para coliformes totais (direita).
Tabela 1 Resultados das anlises das maanetas do IFPE Campus Garanhuns quanto presena
de coliformes totais e Escherichia coli.
Resultado
Maanetas
Positivo
Negativo
(n) de amostras
1
7
(%) Percentual
4%
28%
Sala dos
(n) de amostras
1
professores
(%) Percentual
4%
(n) de amostras
1
3
Sanitrios
(%) Percentual
4%
12%
(n) de amostras
1
Biblioteca
(%) Percentual
4%
(n) de amostras
1
10
Laboratrios
(%) Percentual
4%
40%
Fonte Laboratrio de Microbiologia Ambiental do IFPE Campus Garanhuns.
Sala de aula
Total
8
1
4
1
11
Os resultados demonstram que a higienizao/sanitizao das maanetas das portas,

principalmente dos banheiros, est sendo realizada de maneira satisfatria; alm disso, os
frequentadores do IFPE Campus Garanhuns tambm adotam medidas de higiene das mos
adequadas, visto que nem mesmo as coliformes totais foram encontradas na maioria (88%) das
maanetas. claro que a maaneta da porta, sendo tocada por uma mo contaminada, vai
carregar as bactrias. No entanto, mantendo a maaneta sempre limpa, sem gordura ou outra
impureza, os micro-organismos tendem a morrer, pois no resistem falta de gua.
Em trabalho realizado por Campos (2012), foram encontradas bactrias em maanetas

dos banheiros de uma escola municipal do municpio de Formosa/GO pertencentes a microbiota
residente e a transitria, tais como Staphylococcus, Pseudomonas luteola e Tatumella ptyseos. J
Lancellotti (2006) encontrou Staphylococcus aureus em 78% das maanetas analisadas em
consultrio odontolgico na cidade de Barretos/SP, mas no encontrou nenhuma ocorrncia de
S. epidermidis. Dias et al. (2005) demonstraram a presena do fungo Fusarium sp. nas maanetas
de salas de procedimentos de postos de atendimento bsico da cidade de Pelotas/RS. Estes
trabalhos demonstram que a ocorrncia de espcies de micro-organismos varia de acordo com o
ambiente, levando-se em considerao a sua utilizao.
CONCLUSO
Atualmente, ainda existem poucos trabalhos visando analisar a contaminao das
maanetas das portas; este um objeto de pesquisa mais estudado como controle de infeces
hospitalares (incluindo-se tambm a rea odontolgica). No entanto, em instituies que
circulam um grande nmero de pessoas das mais variadas condies de sade, tais como
escolas, este deveria ser um tema muito importante.
Sendo assim, fica evidente que novas pesquisas buscando identificar contaminantes de
maanetas devem ser estimuladas, para que os resultados possam levar a mudanas de hbitos
higinicos por parte da populao e metodologias de limpeza/higienizao das superfcies.
REFERNCIAS
ACTOR, J.K. Imunologia e Microbiologia. Rio de Janeiro: Elsevier, 2007.
ALVES, A.P.; SOUZA, D.; BORGES, J.G.; ROCHA, M.A.; JESUS, R.P. Anlise assptica em ambientes
de uso comum no campus da Universidade Castelo Branco, Realengo. Revista Eletrnica Novo
Enfoque, v. 11, n. 11, p. 21-26, 2010.
BRASIL. Ministrio do Meio Ambiente. Conselho Nacional do Meio Ambiente - CONAMA.
Resoluo n 357, 17 de maro de 2005. Dispe sobre a classificao dos corpos de gua e
diretrizes ambientais para o seu enquadramento, bem como estabelece as condies e padres
de lanamento de efluentes, e d outras providncias. 2005.
CAMPOS, R.F. Identificao das colnias bacterianas encontradas em bebedouros escolares.
2012. 38f. Monografia (Licenciatura em Biologia) Universidade de Brasilia, Brasilia, DF, 2012.
COVISA. Manual dos servios de higienizao dos estabelecimentos assistenciais de sade.
Coordenao de Vigilncia Sanitria da Secretaria Municipal de Sade/Aracaj, 2006.
DIAS, A.; ZILLMER, J.; DIAS, R.; FAGUNDES, R.; MEINERZ, A.R.; MARTINS, A.; MEIRELES, M.C.A.; NOBRE, M.
Identificao da presena de Fusarium sp em superfcies ambulatoriais. Anais do Congresso de

Iniciao Cientfica, Universidade Federal de Pelotas, 2005.
G1, So Paulo. Dinheiro, maanetas e carrinhos de mercado tm bactrias; veja anlise. 2014.
Disponvel em http://g1.globo.com/bemestar/noticia/2014/03/dinheiro-macanetas-e-carrinhosde-mercado-tem-bacterias-veja-analise.html . Acesso em: 02 Mai. 2014.
SALDANHA, J.T.; GOMES, D.L.R. Emprego de nanopartculas em estratgias de preveno e
tratamento de infeces relacionadas formao de biofilmes bacterianos. Saber & Conscincia,
ed. 1, p. 1-51, 2013.
CONTAMINAO BACTERIANA EM TECLADOS DE COMPUTADORES UTILIZADOS PELOS

ESTUDANTES DO IFPE CAMPUS GARANHUNS
1
A.N.Clarindo (Es); J.A.S.Araujo (Es) ; S.A.Souza (MO) ; C.Tessmann (PO)

Curso Tcnico em Meio Ambiente Instituto Federal de Pernambuco (IFPE) - Campus Garanhuns. E-mail:
cristiane.tessmann@garanhuns.ifpe.edu.br
(Es) Estudante
(MO) Monitor
(PO) Professor Orientador
RESUMO
Os computadores assumiram importante relevncia

para a vida moderna, facilitando inmeras atividades.
Sendo assim, nada mais natural que essa ferramenta
tomasse espao nos mais variados ambientes, dentre
eles o campo educacional. O trabalho realizado teve
como objetivo avaliar a concentrao de bactrias
presentes nos teclados dos computadores utilizados
pelos estudantes do Instituto Federal de Pernambuco
Campus Garanhuns. As 58 amostras foram coletadas
com swabs umedecidos em gua ultra pura estril e
semeados em gar padro para contagem (PCA). Aps
incubao a 35C por 48 horas, as colnias foram
contadas e os dados analisados. Em todos os teclados
foram encontrados contaminao, confirmando 100%

positivo para presena de bactrias. Entre os locais
analisados, houve um predomnio de contaminao no
laboratrio de informtica 3 (94 UFC/computador),
seguido pelos laboratrios de informtica 2 (89
UFC/computador), 4 (48 UFC/computador), e biblioteca
(14 UFC/computador). Com este resultado, considera-se
que so necessrias medidas de higienizao dos
equipamentos eletrnicos para uma possvel diminuio
da contaminao dos teclados dos computadores, alm
de campanhas de higienizao das mos antes da
utilizao dos equipamentos.
PALAVRAS-CHAVE: contaminao bacteriana, teclado de computador, higiene.
BACTERIAL CONTAMINATION IN COMPUTER KEYBOARDS USED BY STUDENTS OF IFPE CAMPUS

GARANHUNS.
ABSTRACT
Computers have assumed great relevance for modern

life, facilitating numerous activities. Thus, it was natural
that this tool take space in diverse environments,
including the educational field. The work aimed to
evaluate the concentration of bacteria present in the
computer keyboards used by students of Federal
Institute of Pernambuco Campus Garanhuns. The 58
samples were collected using swabs soaked in sterile
water ultra-pure and plated on Plate Count Agar (PCA).
After incubation at 35 C for 48 h, colonies were
counted and analyzed. In all keyboards contamination
were found, confirming 100% positive for the presence

of bacteria. Among the sites analyzed, there was a
predominance of contamination in the computer lab 3
(94 CFU / computer), followed by computer labs 2 (89
CFU / computer), 4 (48 CFU / computer), and library (14
CFU / computer ).With this result, it is considered that
measures sanitization of electronic equipment for a
possible reduction of the contamination of computer
keyboards is required, in addition to hand hygiene
campaigns
before
using
the
equipment.
KEY-WORDS: bacterial contamination, computer keyboard, hygiene.
CONTAMINAO BACTERIANA EM TECLADOS DE COMPUTADORES UTILIZADOS PELOS

ESTUDANTES DO IFPE CAMPUS GARANHUNS
INTRODUO
O avano tecnolgico permitiu que o computador tornasse uma ferramenta importante
ao homem. Mas o que os usurios desta ferramenta no atentam para o desenvolvimento de
vida invisvel aos nossos olhos: a vida microbiana. A presena de altos nveis de bactrias ou a
presena de um tipo incomum de micro-organismos em um ambiente interno indica a ocorrncia
de fontes de proliferao de micro-organismo no interior do ambiente ou a deficincia de
mtodos que possam determinar a destruio dos mesmos (ALVES et al., 2010).
O teclado do computador pode tornar-se habitar perfeito para o desenvolvimento de
bactrias provenientes da falta de higienizao das mos, principalmente se o fluxo de usurios
constantemente variado por determinados grupos de pessoas. Possuem germes e bactrias
capazes de causar infeces alimentares, sendo assim, vetores de vrias doenas. Alm disso, o
acmulo de restos alimentares e sujeira nos teclados os tornam mais contaminados do que um
vaso sanitrio (BERNARDI, 2008).
Essa exposio a certos nveis de fungos, bactrias e seus subprodutos pode resultar em
sintomas generalizados de dificuldades respiratrias, irritao e coceiras nos olhos e nariz e
indisposies generalizadas. Em condies mais severas incluem a asma, pneumonias sensitivas,
alergias e infeces sistmicas. Em resumo conclui-se que, e que na quantidade encontrada esses
micro-organismos podem desencadear processos patognicos (ALVES et al., 2010). A presena de
bactrias patognicas para o homem, que geram as mais variadas doenas, favorecida pelo fato
de ambientes pblicos nem sempre possurem uma adequada higienizao (CAMPOS, 2012).
Alm disso, quanto mais compartilhado o objeto, mais micro-organismos ele carrega.
De acordo com o exposto acima, este trabalho objetivou verificar a contaminao dos
teclados dos computadores utilizados pelos estudantes do IFPE Campus Garanhuns, uma vez que,
recebe uma quantidade significativa de alunos e de hbitos higinicos variados que interagem
uns com os outros, podendo transmitir diversos micro-organismos.
MATERIAIS E MTODOS
Os teclados dos computadores analisados do IFPE Campus Garanhuns foram aqueles onde
ocorre contato direto e rotineiro com os estudantes, ou seja, aqueles localizados nos laboratrios
de informtica 2, 3 e 4 e na biblioteca. Cada um dos laboratrios de informtica contem 19
computadores de utilizao dos alunos, perfazendo um total de 57 teclados amostrados;
enquanto que a biblioteca possui apenas um computador para uso dos estudantes, o que
correspondeu a um teclado analisado.
A coleta das amostras foi realizada durante o ms de abril de 2014, utilizando swabs
estreis umedecidos em gua ultrapura estril e friccionados sobre a superfcie e laterais das
teclas localizadas nos teclados dos computadores. Aps, os swabs foram imediatamente
conduzidos ao Laboratrio de Microbiologia Ambiental do IFPE Campus Garanhuns para as

anlises microbiolgicas.
Uma vez no laboratrio, os swabs foram semeados em gar padro para contagem (PCA)
Kasvi e incubados a 35C por 48 horas. Transcorrido o tempo de incubao, as colnias foram
contadas para verificar o nvel de contaminao dos teclados.
RESULTADOS E DISCURSO
UFC
Os 58 teclados analisados apresentaram contaminao por bactrias mesfilas aerbias,

conforme observado nas figuras 1, 2 e 3.
Computadores
UFC
Figura 1 Nmero de UFC por teclado dos computadores do laboratrio de informtica 2.
Computadores
UFC
Computadores

Os resultados demonstraram que existe uma variao muito grande entre os teclados dos
computadores de cada laboratrio, no havendo uma regularidade na contaminao destes
objetos. Apesar disso, o computador 13 do laboratrio de informtica 3 foi o que apresentou
maior contaminao (331 UFC/teclado).
Entre os ambientes de coleta, o que apresentou maior nmero de colnias foi o
laboratrio de informtica 3 (figura 4). Isso talvez possa ser explicado devido ao fato deste
laboratrio, alm de ser usado para aulas prticas, tambm utilizado pelos estudantes para
realizarem trabalhos, pesquisas, e como ambiente virtual de estudo. Os laboratrios 2 e 4 so
utilizados preferencialmente para aula prtica. Um resultado que chamou a ateno foi a baixa
contaminao do teclado da biblioteca (figura 4); este resultado talvez seja explicado pelo fato de
que a maioria dos alunos utilizam seus prprios computadores.
Figura 4 Contaminao mdia bacteriana nos diferentes ambientes de coleta do IFPE Campus
Garanhuns.
Apesar desses resultados, no laboratrio de informtica 2 foi encontrado a maior

diversidade bacteriana (quatro espcies), seguido pelo laboratrio de informtica 3 (trs
espcies) e pelo laboratrio de informtica 4 e biblioteca (duas espcies cada um). A
determinao das espcies foi realizada por anlise visual das colnias.
As verificaes oriundas dos materiais evidenciaram a presena de bactrias nos locais
pesquisados; assim, estes locais devem passar por constante higienizao por haver uma grande
rotatividade de pessoas e, devido a isso, maior contaminao e proliferao dos microorganismos (ALVES et al., 2010). Assim, os estudantes ficam vulnerveis no apenas a
contaminao por bactrias como tambm por vrus e por outros micro-organismos como fungos
e protozorios, que podem resistir por instantes fora do corpo humano ou mesmo por horas e
at por um perodo maior que um dia (CAMPOS, 2012).
A sobrevivncia das bactrias na superfcie dos teclados, onde existem ranhuras contendo
resduos de matria orgnica nutritiva proveniente da mo do usurio, de minutos a poucos
dias, dependendo do grau e frequncia da assepsia (RODRIGUES et al., 2012). Assim, a presena e
proliferao desses micro-organismos seria eliminado se fosse feita uma correta higiene dos
ambientes com a utilizao de detergentes, alcois e antisspticos, assim como com a correta
higiene das mos dos usurios (CAMPOS, 2012).
CONCLUSO
A contaminao dos teclados dos computadores se d principalmente por microorganismos presentes nas mos, combinado com a quantidade de pessoas que transitam entre
os laboratrios e a m higienizao dos teclados.
Sendo assim, uma das maneiras de reduzir as contaminaes pelos seus usurios a
efetivao do hbito de higienizar mos e a desinfeco do teclado com solues germicidas
como o lcool 70%, afim de que sejam reduzidas as chances de transferncia de microorganismos patognicos pelos usurios dos teclados de computadores.
Novas anlises devero ser realizadas com o intuito de identificar os principais agentes
presentes nestes teclados, bem como dever ser desenvolvido projetos de conscientizao a
respeito da importncia de uma correta higiene no mbito escolar e da desinfeco eficiente dos
equipamentos.
REFERENCIAS
ALVES, A.P.; SOUZA, D.; BORGES, J.G.; ROCHA, M.A.; JESUS, R.P. Anlise assptica em ambientes
de uso comum no campus da Universidade Castelo Branco, Realengo. Revista Eletrnica Novo
Enfoque, v. 11, n. 11, p. 21-26, 2010.
BERNARDI, A.C.A. Caador de bactrias da Uniara fala sobre a contaminao nos teclados de
computador,
2008.
Disponvel
em:
<
http://www.uniara.com.br/noticias/?n=31691&t=Cacador_de_bacterias_da_Uniara_fala_sobre_
a_contaminacao_nos_teclados_de_computador_-_05-05-2008>. Acesso em: 29 mai. 2014.
CAMPOS, R.F. Identificao das colnias bacterianas encontradas em bebedouros escolares.

2012. 38f. Monografia (Licenciatura em Biologia) Universidade de Brasilia, Brasilia, DF, 2012.
RODRIGUES, A.G.; VIVEIROS, M.A.W.B.; BARROSO, I.M.O.; CAVALCANTE, A.P. Contaminao
bacteriana em teclados de computadores utilizados em hospital universitrio do nordeste do
Brasil. Medicina (Ribeiro Preto), v. 45, n. 1, p. 39-48, 2012.
IDENTIFICAO DE GNEROS FNGICOS COLONIZADORES DE PLANTAS DE OCORRNCIA

REGIONAL NUMA PERSPECTIVA DE COLEO DIDTICA
2
H. K. Pinheiro (IC) ; L. S. Paes (IC) ; I. N. Lopes (IC) ; A. C. Soares (IC)

2
Instituto Federal de Educao e Tecnologia do Amazonas (IFAM) - Campus Manaus Centro -, Instituto Federal
3
de Educao e Tecnologia do Amazonas (IFAM) - Campus Manaus Centro; Instituto Federal de Educao e
Tecnologia do Amazonas (IFAM) Campus Manaus Centro e-mail: www.ifam.com/br

(PQ) Pesquisador
RESUMO
A diversidade de fungos presentes em plantas
amaznicas desperta o interesse pela produo de
vrios produtos como enzimas, cosmticos e
antibiticos encontrado a partir de processamentos
como micro-organismos. Devido esta riqueza em
diversidade, tornam-se cada vez mais viveis trabalhos
que promovam a classificao taxonmica e
sustentabilidade dos espcimes em potencial. Diante do
exposto, como forma de contribuio para a
caracterizao taxonmica de fungos microscpicos que
habitam tecidos vegetais, pretendem-se trabalhar o

isolamento, identificao, catalogao e insero destes
na coleo micolgica do IFAM proporcionando, a partir
destes estudos uma perspectiva da importncia da
coleo didtica, subsdios pesquisa de carter
fisiolgico, qumico e agronmico.
PALAVRAS-CHAVE: fungos, Amaznia, catalogao, microbiologia.
IDENTIFICATION OF GENERA OF FUNGI SETTLERS OF PLANTS OF OCCURRENCE REGIONAL IN A

PERSPECTIVE OF COLLECTION DIDACTICALLY
ABSTRACT
The diversity of fungi found in Amazonian
plants awakens interest in the production of various
products such as enzymes, antibiotics and cosmetics
found by processing and micro-organisms. Because of
this richness in diversity, become increasingly viable jobs
that promote sustainability and taxonomic classification
of specimens potential. Given the above, as a
contribution to the taxonomic characterization of
KEY-WORDS: fungi, Amaznia, cataloguing, microbiology.
microscopic fungi that live plant tissue, it is intended to

work the isolation, identification, cataloging and
integration into the mycological collection of the IFAM
providing, from the perspective of these studies the
importance of the collection teaching, research
subsidies physiological, chemical and agronomic
character.
IDENTIFICAO DE GNEROS FNGICOS COLONIZADORES DE PLANTAS DE OCORRNCIA

REGIONAL NUMA PERSPECTIVA DE COLEO DIDTICA
INTRODUO
Durante a evoluo das plantas, associaes mutualsticas com fungos endofticos
ocorreram e promoveram adaptaes relacionadas capacidade de defesa da planta contra
predadores e patgenos, aumentando a taxa de crescimento vegetal, enraizamento e resistncia
a estresses biticos e abiticos (RODRIGUES, 2010).
A regio amaznica possui uma ampla diversidade em espcies da fauna e flora, dentre
esta diversidade destacam-se os fungos que so micro-organismos importantes para o
ecossistema devido sua capacidade de decomposio. Alm de desempenharem esta funo
estes organismos possuem um grande potencial na produo de metablitos secundrios
provenientes das interaes com seus hospedeiros, em contrapartida, podem tambm produzir
toxinas prejudiciais tanto para o homem quanto para os animais.
As interaes endfito/planta,
ainda no so muito bem compreendidas, mas podem
ser simbiticas, neutras ou antagnicas (neste caso, estudadas pela fitopatologia). Nas interaes
simbiticas os microrganismos produzem ou induzem a produo de metablitos primrios e
secundrios que podem conferir diversas vantagens planta tais como: a diminuio da
herbivoria e do ataque de insetos, o aumento da tolerncia a estresses abiticos e o controle de
outros microrganismos (Arajo, 1996; Rodrigues & Dias Filho, 1996; Pereira, 1993).
Investigaes detalhadas da microbiota interna e externa de plantas frequentemente
levam descoberta de novos txons e tambm revelam novas distribuies de espcies
conhecidas. Sendo assim, estudos voltados para a rea de isolamento, identificao e
catalogao de fungos colonizadores de plantas amaznicas constitui uma alternativa para
desvendar e potencializar essa diversidade micolgica presente em nossa regio, gerando maior
conhecimento da sua importncia para as reas da sade e meio ambiente.
Com o desenvolvimento de trabalhos cientficos, tornou-se imprescindvel a criao de
colees de culturas com a finalidade de pesquisa e estudos de tais organismos quanto
taxonomia, patologia e, ainda, para fins industriais, no que se refere ao conhecimento da biologia
e fisiologia (APARECIDO, 2011).
As colees fngicas denominadas micotecas podem garantir a perpetuao de
determinados espcimes de cunho comercial, ecolgico e cientfico. Deste modo o uso das
micotecas garante alternativas viveis para aumentar os estudos voltados biodiversidade
micolgica em plantas amaznicas e consequentemente a conservao destes indivduos.
Segundo Abreu e Tutunji (2004) a preservao e manuteno das culturas devem ser
feitas de forma a garantir sua sobrevivncia, estabilidade e pureza durante perodos prolongados
de tempo, conservando caractersticas genticas e propriedades morfolgicas/fisiolgicas. Para
tanto, faz-se necessrio o uso de agentes conservantes que sejam eficientes para esse tipo de
preservao.
Atualmente existem diversos mtodos pelos quais se podem conservar os fungos, dentre
eles destacamos: repique contnuo, preservao em leo mineral, congelamento, preservao
por secagem, imerso em gua destilada e liofilizao. As micotecas, de maneira geral, utilizam
pelo menos um desses mtodos para manterem conservados e viveis os fungos isolados. A
escolha do mtodo mais adequado foi feita de acordo com as especificidades dos fungos e da
disponibilidade de material e equipamentos para a manuteno da micoteca.
Sendo assim, props de incio o isolamento de fungos endofticos de plantas medicinais da
Amaznia e em seguida sua caracterizao e registro destinado s disciplinas de microbiologia no
IFAM.
MATERIAIS E MTODOS
As plantas utilizadas fazem parte de estudos desenvolvidos pelo grupo de pesquisa do
IFAM responsvel pela identificao desses gneros fngicos colonizadores de plantas de
ocorrncia regional. As plantas foram selecionas e coletadas no Herbrio do IFAM Zona Leste.
Manaus/ Am.
O material passou por uma desinfeco superficial. Para o isolamento dos fungos
endofticos o material vegetal passou por uma assepsia visando retirar da superfcie externa das
plantas microrganismos epifticos. Para o processo de assepsia, o material vegetal foi cortado em
fragmentos de 5cm e posteriormente parafinados nas extremidades a fim de evitar que os
agentes de desinfeco penetrassem nas aberturas das estruturas do vegetal, alterando-os. A
esterilizao superficial foi feita atravs de lavagens por imerso. Primeiramente, duas vezes em
gua destilada esterilizada durante 30 segundos, seguida de soluo de lcool etlico a 70 % em
um minuto, de soluo de hipoclorito de sdio a 3% por quatro minutos, novamente em soluo
de lcool etlico a 70% durante 30 segundos e, posteriormente enxaguadas trs vezes em gua
destilada esterilizada por um minuto (PIMENTEL, 2001).
Como controle negativo foi coletado 50L da ltima gua utilizada na assepsia das
amostras, sendo essa tambm plaqueada; as que apresentaram crescimento de colnias foram
descartadas, por evidenciarem falhas no processo de assepsia superficial das amostras
(MAGALHES, et al., 2008).
Os fragmentos (5) contendo partes vegetativas de toda a planta foram desinfetados
novamente seccionados em pedaos de 1 cm e inoculados fragmentos por tcnica de spread
plate em placas de Petri contendo meio de cultivo BDA (infuso de 200 g de batata; dextrose 20 g;
gar 15 g; amoxilina; gua destilada q.s.p., 1000 mL) e incubados temperatura de 282 C,
durante 7 dias. Passados os 7 dias os fungos foram isolados pela transferncia dos miclios ou
condios para tubos de ensaio com meio BDA inclinado (PIMENTEL, 2001).
Para a identificao dos fungos foi utilizada a tcnica de micro cultivo, que consiste em
semear pequenas pores de colnias fngicas num pequeno bloco de meio BDA dentro das
placas de Petri contendo duas lminas em forma de V, lamnula e algodo estril. Em seguida, as
placas foram incubadas temperatura ambiente at a observao do crescimento da cultura
(SILVA e OLIVEIRA, 2004). A identificao dos fungos foi feita a partir da chave proposta por
Barnett e Hunter (1972).
Feita a identificao dos fungos foram tiradas fotos em cmera digital das macro e micro
colnias. As imagens foram adicionadas em um software que funcionar como um banco de
dados contendo informaes acerca de cada gnero fngico isolado. Aps a identificao e a
confeco das fotos, os fungos isolados foram armazenados em eppendorfs contendo meios
diferentes: cepas do fungo foram adicionadas em gua destilada estril em dois recipientes
diferentes: 10 mL em frascos de vidro e 1mL em eppendorf. Alm da conservao em gua
destilada conforme o mtodo Castellani (APARECIDO et al., 2007) armazenamos a cepa em
eppendorf contendo 1mL de leo mineral (CEFAR, 2008). Aps a adio dos fungos aos meios
conservantes, os frascos e eppendorfs foram acondicionados em refrigerador.
Os isolados foram identificados e a eles foi adicionada uma numerao que corresponde
aos dados inseridos no sistema, que ao inserir esses nmeros no sistema dado imagem e os
demais dados referentes ao fungo de interesse.
Este trabalho permite a ampliao quanto s riquezas em espcies fngicas e evidencia
como as colees e acervos ilustrativos podem enriquecer processos voltados pesquisa e
ensino em um estabelecimento de comunidade cientfica e estudantil. Os fungos foram
quantificados, no qual correspondem em um total de 96 respectivamente, 36 endfitos
presentes na Pothomorphe peltata, 33 na Cyperus rotundus e por fim, 27 na Piper aduncun.
A identificao dos fungos aps a assepsia foi utilizada a tcnica de microcultivo. Foram
identificados nas trs plantas, a presena dos fungos: Aspergillius, Penicillium, Aureobasidium,
Alternaria, Colletotrichium e Fusarium. A seguir a confeco das fotos da macro e micro colnias
de todos os identificados.
Figura 1 Macro colnias representantes da Pothomorphe peltata, Cyperus rotundus,

Piper aduncun.
Figura 2 Micro colnias identificadas. Em A, B, C correspondem respectivamente aos fungos

Alternaria, Colletotrichium e Fusarium. Em D o fungo Aspergillus, em E miclios e F ao
Aureobasidium.
Os fungos isolados foram armazenados em eppendorfs contendo meios diferentes e a
eles foram adicionadas uma numerao.
Segundo Abreu e Tutunji (2004) a preservao e manuteno das culturas devem ser
feitas de forma a garantir sua sobrevivncia, estabilidade e pureza durante perodos prolongados
de tempo, conservando caractersticas genticas e propriedades morfolgicas/fisiolgicas.
As colees fngicas denominadas micotecas podem garantir a perpetuao de
determinados espcimes de cunho comercial, ecolgico e cientfico. Deste modo o uso das
micotecas garante alternativas viveis para aumentar os estudos voltados biodiversidade
micolgica em plantas amaznicas e consequentemente a conservao destes indivduos.
CONCLUSO
Com a formao de colees de microrganismos, pode-se avaliar mudanas nos perfis
fenotpico e genotpico dos microrganismos, caracterizando a biodiversidade microbiana de uma
regio, podendo garantir a perpetuao de determinados espcimes de cunho comercial,
ecolgico e cientfico. Deste modo o uso das micotecas garante alternativas viveis para
aumentar os estudos voltados biodiversidade micolgica em plantas amaznicas e
consequentemente a conservao destes indivduos.
Diante do exposto, os resultados adquiridos na pesquisa tornaram-se viveis quanto
caracterizao dos gneros fngicos por ilustraes macroscpicas e microscpicas como forma
de contribuio a partir de divulgaes para a comunidade cientfica e estudantil do IFAM.
REFERNCIAS
1-ABREU, M.M.V.; TUTUNJI, V.L. Implantao e manuteno da coleo de culturas de
microorganismos do UniCEUB. Universitas Cincias da Sade, vol.2, num.2, pag.236-251, 2004.
2- BLACK, Jacquelyn G. Microbiologia Fundamentos e perspectivas. 4 ed. Rio de Janeiro:
Editora Guanabara Koogan, 2002.
3- DRIEMEIER, D.; FINGER, G.P.; ROCHA, A.L.A.; GARBADE, P.; RODRIGUEZ, R.J.D.; MATTOS, R.C.
Aborto e placentite mictica por Aspergillusfurmigatusem uma gua. Cincia Rural, Santa
Maria, vol.28, n.2, pag.321-324, 1998.
4- MAGALHES, W.C.S.; MISSAGIA, R,V.; COSTA, F.A.F.; COSTA, M.C.M.; Diversidade de fungos
endofticos em candeia Eremanthuserythropappus(DC.) MacLeish. Cerne, Lavras, v. 14, n. 3, p.
267-273, jul./set. 2008.
5- PAES, L.S.; BELEZA, S.R.A.; SILVA, V.A. O uso da informtica como ferramenta para divulgao,
manuteno e catalogao das colees botnicas do IFAM. Revista Igap, 2010.
6- PIMENTEL, I.C. Fungos endofticos do milho (ZeamaysL. ) e da soja (Glycinemax(L.) Merrril e
seu potencial valor biotecnolgico no controle de pragas agrcolas. Tese, (Doutorado)
Universidade Federal do Paran, 2001.
7- RODRIGUES, R.L. Fungos endofticos associados Vellozia compacta Mart. ExSchult. F.
(Velloziaceae) presente em afloramentos rochosos nos estados de Minas Gerais e Tocantins.
Dissertao (Programa de Ps-graduao em Ecologia de Biomas Tropicais) Universidade Federal
do Rio Preto, 2010, 70p.
8- SILVA, M.E. Comunidades fngicasendoftica, epiftica e rizosfrica em diferentes
ecossistemas. Tese (Doutorado em Botnica), Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Instituto de Biocincias, 2006.
9- SOUZA, T.C.; ALECRIM, M.M.; KIRSCH, L.S.; SILVA, T.A.; TEIXEIRA, M.F.S. Coleo de culturas
DPUA: autenticao, preservao e incorporao de espcies. In: Anais do VI Congresso
Brasileiro de Micologia, Braslia, 2010.
10- TAKAHASHI, J.A.; LUCAS, E.M.F. Ocorrncia e diversidade estrutural de metablitos fngicos
com atividade antibitica. Qumica Nova, vol. 31, n. 7, 1807-1813, 2008.
ANLISE MICROBIOLGICA E FSICO QUMICA DA GUA DE COCO INDUSTRIALIZADA

COMERCIALIZADA EM JOO PESSOA- PB.
2
I.M.S. CSAR (IC) ; A.M.F. COSME (IC) ; P.R. S. FELIPE (IC) ; Y.B.B. FARIAS(IC) ; T.L.P. ANDRADE(IC) ;
6
G.S.ALVES (PQ)
1
2
Instituto Federal da Paraba (IFPB) - Campus Joo Pessoa-, Instituto Federal da Paraba (IFPB) - Campus Joo
3
4
Pessoa; Instituto Federal da Paraba (IFPB) - Campus Joo Pessoa; Instituto Federal da Paraba (IFPB) - Campus
5
6
Joo Pessoa; Instituto Federal da Paraba (IFPB) Campus Joo Pessoa; Instituto Federal da Paraba (IFPB)
Campus Joo Pessoa; Departamento de Microbiologia- Campus Joo Pessoa e-mail: gilcean.alves@ifpb.edu.br
(PQ) Pesquisador
RESUMO
O coco verde apresenta-se no mercado de
forma sortida. Sua gua pode ser vendida
inteiramente do fruto, a uma condio de
temperatura ambiente, ou refrigerada, como o
caso das embalagens industrializadas. A inteno
da industrializao da gua de coco a aquisio
de um produto que conserve ao extremo as suas
propriedades naturais, ampliando sua vida til e
favorecendo o seu consumo fora das regies de
plantio. O objetivo dessa pesquisa foi definido para
avaliar a qualidade da gua de coco industrializada
por meio de parmetros microbiolgicos e fsicoqumicos, e os provveis motivos de contaminao

das amostras. Por fim, recomenda-se um exerccio
de boas prticas aos fabricantes dos alimentos
explanados no atual estudo, por profissionais
capacitados, como forma de diminuir as elevadas
cargas de salmonela e matria orgnica dissolvida
ou em suspenso nas amostras, originrias da
manipulao desapropriada das guas de coco
industrializadas.
PALAVRAS-CHAVE: Microbiologia, Salmonela, Anlise, gua de coco, Fsico-Qumica.
MICROBIOLOGICAL ANALYSIS AND PHYSICAL - CHEMICAL WATER COCONUT INDUSTRIALIZED

SOLD AT JOHN PERSON-PB.
ABSTRACT
The coconut is presented in the form of
assorted market. Its water may be sold full of fruit, a
condition of room temperature or refrigerated, as is the
case for industrial packaging. The intent of the
industrialization of coconut water is the purchase of a
product that retains the extreme their natural
properties, extending its life and promoting their
consumption outside the growing regions. The objective
of this research was defined to evaluate the quality of
coconut industrialized by microbiological and physicochemical parameters water, and the probable reasons of
contamination of samples. Finally, we recommend an

exercise of good practice for manufacturers of food
enmeshed in the current study, by trained professionals,
in order to reduce the high loads of salmonella and
dissolved or suspended organic matter in the samples
originating from the manipulation of the expropriated
waters industrialized coconut.
KEY-WORDS: Microbiology, Salmonella, Analysis, Coconut water, Physical Chemistry.
[M. Jr.1] Comentrio: Colocar at 4

palavras chaves.
ANLISE MICROBIOLGICA E FSICO QUMICA DA GUA DE COCO INDUSTRIALIZADA

COMERCIALIZADA EM JOO PESSOA- PB.
INTRODUO
Atualmente observa-se que a demanda da gua de coco verde vem se desenvolvendo de
forma significativa, tanto no comrcio informal quanto em empreendimentos estabilizados,
como os hiper e supermercados. Tal episdio pode ser imposto larga divulgao nos meios de
comunicao social sobre os benefcios da gua de coco para a sade.
No entanto, importante destacar que o manejo do fruto, bem como de algum alimento,
deve estabelecer um conhecimento apropriado de prticas higinico-sanitrias, para que se evite
a contaminao e risco sade.
O coco verde apresenta-se no mercado de forma sortida. Sua gua pode ser vendida
inteiramente do fruto, a uma condio de temperatura ambiente, ou refrigerada, como o caso
das embalagens industrializadas. Outras formas de comrcio destas bebidas so em mquinas
prprias utilizadas em veculos ambulantes.
As principais produes e plantaes de coqueiros encontram-se em regies do litoral
brasileiro e produzem cerca de 70% dos cocos. Estima-se que, no Brasil, cerca de 2,8 Km2 so
utilizados para a produo de dois bilhes de frutos do coqueiro, os quais tem por distribuio
todo o mbito nacional.
No ranking regional, o Estado da Paraba encontra-se em stimo lugar na produo de
coco (Cocos nucifera L.). As reas de plantao encontram-se, sobretudo no Litoral Norte, Sul,
Joo Pessoa (coco seco) e, especialmente no Serto, o coco ano verde. Alm disso, a gua
encontrada dentro da prpria fruta corresponde a 25% do peso total do fruto, tendo sua
quantidade variando entre 300 e 600 mL de coco. bastante consumida em todas as estaes do
ano, e, tambm muito benfica para a sade humana, servindo muitas vezes como forma de
hidratao.
Os baixos teores de gorduras e carboidratos destacam-se como fundamentais na
contribuio de um valor calrico reduzido, o qual se torna como uma opo benfica comparada
a outros produtos menos saudveis e mais calricos. imprescindvel ilustrar que a gua de coco
no deve ser aproveitada para repor sdio, porque no uma fonte deste mineral.
Hoje em dia, muitas empresas adotaram a gua de coco industrializada como um produto
saudvel e, tambm, benfico sade. As tcnicas de processamento e conservao cultivadas
gua de coco comportam tanto o aproveitamento da fruta e a reduo da participao de
mediadores que vinculam o custo do produto, quanto a criao de empregos em um novo
produto industrial. Sua industrializao de fundamental importncia, pois permite o seu
consumo em locais fora das regies produtoras, visando diminuir o volume e o peso
transportados e, consequentemente, reduzir os custos de transporte, bem como aumentar a sua
vida de prateleira (ABREU, 2008).
A inteno da industrializao da gua de coco a aquisio de um produto que conserve
ao extremo as suas propriedades naturais, ampliando sua vida til e favorecendo o seu consumo
fora das regies de plantio. Sabe-se que este lquido rico em sais minerais, acares, vitaminas
e protenas.
[M. Jr.2] Comentrio: Uso de crase.
[M. Jr.3] Comentrio: Tem Abreu,

2014, mas no tem Abreu 2008
Com isso, o objetivo dessa pesquisa foi definido para avaliar a qualidade da gua de coco
industrializada por meio de parmetros microbiolgicos e fsico-qumicos, constatando os ndices
de contaminao, de forma que seja possvel comparar os resultados das amostras do fabricante
e do comercirio; e os provveis motivos de contaminao das amostras.
Sua importncia est em apresentar Microbiologia e as tcnicas Fsico-Qumicas aos
parmetros sobre a garantia alimentar da gua de coco industrializada. Contudo, o estudo
aprofundado dos microrganismos eucariontes celular e procariontes, como por exemplo, a
bactria de suma acuidade quando o assunto abordado a sade humana.
Visto que em diversos alimentos, hoje ingeridos, possuem uma parcela de
microrganismos patognicos dissolvidos, a Microbiologia vem como parte de um todo para
analisar os bacilos que habitam e contaminam os alimentos, ocasionando a sua deteriorao. Um
bom exemplo disso a Salmonela que se trata de um gnero de bactrias, pertencentes famlia
Enterobacteriaceae.
Sendo conhecida a mais de um sculo, essa bactria causada pela m conservao de
alimentos, ingesto de alimentos crus ou mal cozidos, falta de higiene, pragas urbanas, dentre
outros fatores. Muitos casos de Salmonela nos seres humanos so, principalmente, pela ingesto
de gua contaminada. Sua presena no corpo pode ser percebida atravs de alguns sintomas,
como fortes dores de barriga, vmitos frequentes, diarreia e dores de cabea. A gastroenterite e
septicemia, tambm so sintomas de salmonelose.
MATERIAIS E MTODOS
Em qualquer ambiente, existem inmeros microrganismos de diversos tipos e atividades

fisiolgicas. Para estudar um micrbio em particular necessrio separ-lo da populao em que
se encontra. Para isso, aplica-se a tcnicas de isolamento que favorecer o cultivo de uma
determinada patogenicidade que se pretende estudar. O xito de uma anlise depende da fonte
utilizada para obteno dos microrganismos e do mtodo escolhido para detectar a atividade
desejada.
Para esta anlise, foram coletadas e avaliadas 6 amostras em duplicata, de diferentes
marcas de gua de coco industrializadas, comercializadas nos diversos mercados e
hipermercados da cidade de Joo Pessoa- PB. Os diagnsticos foram realizados no perodo de 29
de Abril a 01 de Maio do respectivo ano. Todo o material coletado foi analisado no Laboratrio
de Microbiologia do Instituto Federal de Educao Cincia e Tecnologia da Paraba.
A coleta das amostras foi feita em caixa isotrmica contendo gelo para manter as
unidades preservadas at a chegada ao laboratrio. Para as anlises microbiolgicas foram
aferidos 25 ml de gua de coco de cada amostra, e, as mesmas foram misturadas com 225 ml de
gua peptonada. Em seguida foi realizado diluies em sries de 10-1 a 10-3.
O mtodo utilizado para a contagem de salmonelas foi o de Estriamento em placas ou
tambm conhecido como Tcnica de Semeadura em meios slidos. Este tipo de analise feito
com o uso de alguns equipamentos e vidrarias, como: Placas de Petri, ala de platina, Bico de
Bunsen, Becker e Agitador.
[M. Jr.4] Comentrio: Levar o objetivo

para o final da introduo
Prosseguindo com o estudo, o gar Salmonela foi posto em todas as placas de petri e
esperando alguns segundos at o mesmo obter uma textura slida, podendo assim, dar incio ao
procedimento de inoculao. Finalizada a incubao levamos s placas e a estufa com a
temperatura mdia de 35 numa durao de tempo de 24 horas, para que seja verificada
presena da bactria salmonela, que um indicador de contaminao de alimentos.
Partindo de outro ponto, alm da anlise microbiolgica da gua de coco, tambm foi
feita avaliao fsico qumica da bebida para que fosse analisados alguns parmetros como: a
Cor , o pH e a turbidez. Esses mtodos servem para verificar alteraes em suas caractersticas
originais, assim como impurezas existentes na amostra que, por sua vez, so identificadas
durante a anlise.
O procedimento de conjectura para determinar a cor, foi feito atravs do colormetro,
contido de discos de diferentes cores variando de 0 a 100. Quanto menor o nmero, mais clara a
amostra.
O pH, por sua vez, foi determinado no pHMetro variando de 0 a 14. pH = 7.0 indica
neutralidade. pH > 7.0 denota aumento da alcalinidade, guas bsicas. pH 5< 7.0 indica aumento
da acidez, guas cidas. Quando o pH baixa, a corrosividade da gua geralmente aumenta,
trazendo para a soluo ferro e mangansio, por exemplo, que lhe do um gosto desagradvel.
Por fim, usamos o turbidmetro como indicador de turbidez da gua, ou seja, mtodo de
observao da dificuldade de um feixe de luz cruzar uma determinada quantidade, atribuindo um
aspecto escurecido mesma.
Tendo conhecimento sobre as possveis vias de contaminao dos alimentos e dos
consequentes danos que podem causar ao ser humano, pretendeu-se neste estudo detectar
tanto a presena da bactria salmonela, como, a cor, o pH e a turbidez das amostras coletas,
afim de identificar possveis riscos sade e as possveis causas de contaminao da gua de
coco.
Para isso, a partir da anlise microbiolgica e fsico - qumica, foi feito um comparativo,
procurando identificar se as guas coletados diretamente do produtor possuem presena de
bactrias e materiais dissolvidos ou em suspenso.
Alm disso, para entender as categorias do assunto envolvido no comrcio do produto,
foram verificados os hbitos, costumes de higiene e garantia no armazenamento e na
manipulao dos produtos antes do seu consumo. Os resultados encontrados sero mostrados
nas tabelas logo abaixo.
[M. Jr.5] Comentrio: No tem

discusso, apenas resultados. Tem que
comparar seus resultados com de outros
autores.
Tabela 1 Determinao de Salmonela em amostras de gua de coco industrializada,

incubados durante 3 dias.
Bactria
Diluies
-1
Salmonela
10
-2
10
-3
10
Amostra
01
Amostra
02
Amostra
03
Amostra
04
Amostra
05
Amostra
06
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
Presente
Presente
Ausente
Presente
Presente
Presente
Presente
Presente
Presente
Fonte Laboratrio de Microbiologia IFPB-Campus Joo Pessoa.
Tabela 2 Determinao de Parmetros Fsico Qumicos em amostras de gua de coco

industrializada.
Parmetros
Amostra
01
Amostra
02
Amostra
03
Amostra
04
Amostra
05
Amostra
06
Cor
pH
Turbidez (NTU)
80
5.04
17.90
80
5.51
72.0
40
5.06
21.27
40
4.71
15.81
20
5.08
14.33
80
5.18
62.4
Fonte Laboratrio de guas IFPB- Campus Joo Pessoa.
CONCLUSO
Segundo o exposto no decorrer deste trabalho, pode-se descrever que os objetivos
apresentados foram atingidos, pois se obteve a avaliao da condio da gua de coco
industrializada. Os parmetros fsico - qumicos, puderam ser apontados e assim explanados,
comparando-os entre os resultados das amostras do fabricante e do comercirio.
Aps a anlise fsico - qumica, foi possvel observar na avaliao microbiolgica das seis
amostras de gua de coco que trs das seis amostras encontraram-se contaminadas pela
bactria Salmonela. Esta, causadora de diversas doenas, como o caso da diarria, febre
tifoide, entre outras.
Fortalece-se, ento, a seriedade no mtodo de higienizao em todas as fases do
manejo do produto no que diz respeito a precauo de contaminaes.
Por fim, recomenda-se um exerccio de boas prticas aos fabricantes dos alimentos
explanados no atual estudo, por profissionais capacitados, como forma de diminuir as
elevadas cargas de salmonela e matria orgnica dissolvida ou em suspenso nas amostras
originrias da manipulao desapropriada das guas de coco industrializadas.
[M. Jr.6] Comentrio: Na concluso

no se deve repetir resultados,. Deve-se
colocar a concluso de maneira mais
direta.
REFERNCIAS
[M. Jr.7] Comentrio: O trabalho est

carente de artigos cientficos, sugiro pelo
menos adicionar 10 artigos cientficos
sobre o assunto.
1. ABREU,
Fernando.
COMRCIO
EXTERIOR.
Disponvel
em:
<http://www.sfiec.org.br/noticias/export-aguacoco090505.htm>. Acesso em 10 Abr.
2014.
2. FERNANDES, I.L. et al .COMPARAO DAS CARACTERSTICAS FSICO-QUMICAS DA GUA
DE COCO VERDE NATURAL E INDUSTRIALIZADA. So Luiz /MA. In: 51Congresso
Brasileiro de Qumica: Meio Ambiente e Energia, 09 a 13 de out. de 2011. Artigo, So Lus,
2011.
3. GONALVES, P. E. O livro dos alimentos. So Paulo. MG editora, 2002.
4. GONALVES, P. E. O que bom saber: sobre alimentos, exerccios e medicamentos
naturais e terapias alternativas que previnem e curam doenas. So Paulo. MG editora,
2008.
5. LANARA Laboratrio Nacional de Referncia Animal Mtodos analticos oficiais para
controle de produtos de origem animal e seus ingredientes, L Mtodos Microbiolgicos,
Braslia, 1981.
6. O
QUE
MICROBIOLOGIA.
Disponvel
em
<http://www.microbiologia.vet.br/Oqueemicrobiologia.htm >Acessado em 15 de Abril de
2014.
7. RIOS, A. S. & ROSIONE, S. S. COMERCIALIZAO E SEGURANA ALIMENTAR DA GUA DE
COCO VERDE: ESTUDO COMPARATIVO DO PRODUTOR E VENDEDOR. In: 4 Congresso
internacional de cooperao Universidade-Industria. 12. Anil. So Lus (MA) UNINDU,
2012.
8. BAGLIANO
R.
V.
O
QUE
MICROBIOLOGIA.
Disponvel
em
http://www.portaleducacao.com.br/biologia/artigos/21224/o-que-e-microbiologia>
Acessado em 16 de Abril de 2014.
<
AVALIAO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DO EXTRATO BRUTO DE Opuntia fcus indica Mill

(CACTACEAE)
1
J. Arajo (IC) ; J. L. Oliveira (IC) ; S. B. Silva (IC) ; J. F. Silva (IC) ; A. C. G. M. Andr (PQ) ; B. R. Junior (TC)
2
Instituto Federal da Paraba (IFPB) - Campus Picu-, Faculdade Integrada Tiradentes (FITS) -Campus Macei;
3
Instituto Federal da Paraba (IFPB) Campus- Picu e-mail: anakk_andre@hotmail.com
RESUMO
Opuntia ficus indica L.Mill., pertence famlia Cactacea e
conhecida popularmente como Palma gigante sendo
tambm chamada de grada, azeda ou santa. O objetivo
do trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de
extratos de Opuntia fcus indica. Os frutos da espcie
foram coletados no municpio de Picu, PB, secos em
estufa e posteriormente pulverizados. O p passou por
um processo de macerao em etanol para obteno do
extrato bruto. Os ensaios biolgicos foram realizados in
vitro frente aos microrganismos gram negativos
Enterobacter aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella
pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa e Gram
positivos, Staphylococcus Coagulase negativa e
Streptococcus pyogenes. As anlises foram realizadas de
acordo com a metodologia dos testes de sensibilidade

no meio gar Muller Hinton atravs do gotejamento de
10uL de soluo em regies distintas da placa. Para o
procedimento foram preparadas solues em
concentraes padronizadas para 1%, 2%, 5% e 10%. A
atividade antibacteriana dos extratos da palma foi
aferida observando-se a formao ou no de halos. As
solues que apresentaram inibio de crescimento dos
microorganismos testados foram as de 2%, 5% e 10%.
Os resultados mostram que Opuntia ficus indica
apresenta atividade antimicrobiana tanto para bactrias
gram positivas quanto para gram negativas.
PALAVRAS-CHAVE: Opuntia ficus indica, microorganismos, antimicrobianos
EVALUATION OF THE ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF CRUDE EXTRACT OF Opuntia ficus indica

Mill L. (Cactaceae)
ABSTRACT
Opuntia ficus indica L. Mill, belongs to the Cactacea
family and is popularly known as Giant Palm being also
called "grada", sour or holy. The objective of this work
was to evaluate the antimicrobial activity of extracts of
Opuntia fincus indica. The fruits of the species were
collected in Picu, PB, dried in an oven and then sprayed.
The dust passed through a process of maceration in
ethanol in order to obtain the crude extract. The
biological tests were carried out "in vitro" against gramnegative micro-organisms Enterobacter aeruginosa,
Escherichia
coli,
Klebsiella
pneumoniae
and
Pseudomonas aeruginosa and Gram-positive, Coagulase
negative Staphylococcus and Streptococcus pyogenes.
The analyzes were performed according to the sensitive

tests methodology in the medium agar Muller Hinton
through dripping 10uL of solution in different regions of
the plate. For the procedure solutions were prepared in
standard concentrations for 1%, 2%, 5% and 10%.The
antibacterial activity from the extracts of palma was
measured by observing the formation or not of halos.
The solutions that showed inhibition of growth in the
microorganisms tested were 2 %, 5% and 10 %. The
results shows that Opuntia fcus indica displays
antimicrobial activity for both gram-positive and gramnegative bacteria.
KEY-WORDS: Opuntia ficus-indica, antimicrobial activity, microorganisms
INTRODUO
Desde a antiguidade o homem se utiliza da natureza a fim de obter resultados que
promovam o seu bem-estar e melhorem sua qualidade de vida. Em decorrncia desta atividade,
as plantas integraram-se as culturas de vrias civilizaes servindo-lhes, dentre inmeros fins,
como fontes alimentcias, ornamentos e agentes de restaurao da sade. O conhecimento
popular sobre esses vegetais foi adquirido e transmitido por milhares de anos atravs de muitas
geraes. Entretanto, estudos para o desenvolvimento de produtos naturais e fitoterpicos
validados, seguros, eficazes e que apresentem qualidade aliada ao uso sustentvel, so cada vez
mais necessrios (YUNES, 2001; SIMES et al., 2004).
Considerando o Brasil, pas onde a diversidade botnica grandiosa, o uso de plantas e
ervas na medicina popular existe desde tempos remotos. Muitas vezes, a falta de informao
cientfica e de bases slidas para a caracterizao da eficcia dessas plantas frente a vrios
tratamentos mdicos, impede seu uso em larga escala. Em geral, as pessoas tm uma tendncia
a supervalorizar as plantas com base na crena popular de que tudo que natural no faz mal.
No entanto, tal afirmao no reflete a verdade, pois o conhecimento inadequado da dose, da
parte empregada e das propriedades teraputicas das plantas, pode acarretar srios problemas
ao indivduo. Alm disso, existem plantas que so altamente txicas mesmo em pequenas doses.
Este fato explica a necessidade do estudo das plantas conhecidas popularmente como
medicinais. Para tanto, preciso distinguir e selecionar aquelas que se apresentam ativas e
dotadas de razovel grau de segurana, para que possam ser utilizadas como alternativa no
cuidado primrio sade do homem, aumentando o arsenal teraputico disponvel com
remdios de baixo custo, bem como ampliando a capacidade de atendimento mdicofarmacutico em sade pblica (MACIEL et al., 2002; ARNASON et al., 1994).
Opuntia fcus indica L. Mill. , pertence famlia Cactaceae e ao gnero Opuntia. Esta
espcie conhecida como palma gigante, chamada tambm de grada, azeda ou santa. Estimase que existam cerca de 500 mil hectares de palma forrageira no Nordeste, estando boa parte
deste montante concentrado nos estados de Pernambuco, Paraba, Alagoas, Rio Grande do Norte
e Bahia. So plantas de porte desenvolvido e caule menos ramificado, o que lhes transmite um
aspecto mais ereto e crescimento vertical pouco frondoso. Sua raquete pesa cerca de 1 kg,
apresentando at 50 cm de comprimento, forma oval-elptica ou sub-ovalada e colorao verdefosco. A FAO, Organizao para Alimentao e Agricultura, das Naes Unidas, reconhece o
potencial da palma e sua importncia para contribuir com o desenvolvimento das regies ridas
e semi ridas (SCHEINVAR,2001). Talvez, devido a presena de plos e pequenos espinhos, essa
fruta ainda no conseguiu ganhar espao no mercado consumidor brasileiro.
Cada espcie do gnero Opuntia produz frutos de diferentes formas, cores e sabor
delicado. Esse fruto desperdiado com o corte da palma forrageira que uma planta
abundante no Nordeste do Brasil, e enfrenta dificuldades socioeconmicas. O fruto da palma
conhecido como figo-da-ndia e produz praticamente durante o ano todo. A fruta doce,
suculenta, comestvel, com 5-10 cm de comprimento e 8-10 cm de largura, piriforme,
ligeiramente curvada para o umbigo, amarelo-esverdeada, laranja, vermelha ou prpura com
muita polpa e uma casca fina (LEUENBERGER, 1991). Rico em vitaminas (principalmente C e A), o
figo-da-ndia muito valorizado na medicina natural, sendo recomendado na preveno de
asma, tosse, verme, problemas na prstata e dores reumticas, entre outros (BRAVO,1991).
Esse trabalho apresenta a avaliao da atividade antimicrobiana de extratos de Opuntia

fcus-indica.
MATERIAIS E MTODOS
Os frutos de Opuntia fcus indica Mill, ainda em estado de maturao, foram coletados
manualmente no sitio Lageado localizado no municpio de Picu-PB. Os frutos apresentaram uma
consistncia carnosa intensa e passaram por um processo de secagem em estufa 40C por um
perodo de 24 horas fracionado em trs dias. Depois de secos o material obtido foi pesado e
triturado obtendo-se um p de fina granulao. O p foi submetido extrao (macerao) por
72 horas em etanol 99,5%. O macerado foi filtrado e o solvente evaporado sob presso reduzida
em rotaevaporador, obtendo-se assim o extrato bruto dos frutos de Opuntia fcus-indica Mill.
Os ensaios biolgicos foram realizados in vitro frente aos microrganismos gram
negativos Enterobacter aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas
aeruginosa e Gram positivos, Staphylococcus Coagulase negativo e Streptococcus pyogenes. As
amostras bacterianas utilizadas foram cedidas pelo setor de microbiologia do Centro de Patologia
e Medicina Laboratorial (CPML- Macei/AL).
Todos os repiques bacterianos passaram por identificao prvia, uma vez que se trata de
isolados de amostras clnicas para controle interno dos reagentes, meios de cultura e provas
bioqumicas utilizadas na rotina microbiolgica da instituio supracitada. A seleo dos microorganismos se justifica devido s altas taxas de isolamento provenientes de amostras clnicas
humanas, o que confere maior participao dos mesmos nos processos infecciosos relacionados
aos mbitos comunitrio e nosocomial.
Para os experimentos o meio de cultura utilizado foi Muller Hinton. O preparo desse meio
foi realizado segundo as especificaes do fabricante, trinta e oito gramas do p dissolvidos em
quinhentos mililitros de gua destilada homogeneizados sob aquecimento. Em seguida o meio
obtido foi levado para autoclave 120oC por quinze minutos, retirado e distribudo em placas de
Petri. As placas com meio de cultura passaram por prova de esterilizao em estufa por 24 horas
a temperatura de 37C +/- 2C, sendo posteriormente armazenadas em geladeira a temperatura
de 2 a 8C. A viabilidade da utilizao do meio gar Mueller Hinton para os ensaios explicada
pelas caractersticas de sua composio, visto que as substncias presentes no interferem no
processo de difuso nem na funo biolgica das solues preparadas para fins bacteriolgicos,
especialmente em se tratando dos testes de sensibilidade (APPLENTON, 2004).
O inculo bacteriano foi preparado a partir da suspenso de clulas de crescimento
recente (24 horas) em soluo salina 0,9%, sendo a densidade tica acertada at turbidez
correspondente a soluo de McFarland 0,5 (625 nm, Abs entre 0,08 e 0,1). O nmero de clulas
de uma suspenso bacteriana pode ser determinado em aproximao, por comparao com os
padres de tal escala (APPLENTON, 2004).
Para as anlises os testes de sensibilidade a agentes antimicrobianos foram feitos por
meio de gotejamento dos extratos em suas diferentes concentraes no meio gar Muller Hinton
previamente semeado (Mtodo de difuso Kirby-Bauer modificado). O volume de cada gota foi
equivalente a 10 L para todas as concentraes e o semeio realizado de forma homognea e
uniforme com o auxlio de swab estril sobre a superfcie de todo o gar distribudo na placa,
formando uma espcie de tapete bacteriano aps o crescimento dos micro-organismos. As

concentraes do extrato bruto utilizadas para os testes foram a 1%, 2%, 5% e 10%.
As leituras dos inculos foram realizadas aps tempo de incubao de 24 a 48 horas a
temperatura de 37C +/- 2C. A sensibilidade bacteriana foi aferida observando-se a formao ou
no de halos, sendo descrita como Inibio Presente (IP) e Inibio Ausente (IA). O etanol
absoluto foi utilizado como controle para todas as amostras bacterianas.
O extrato bruto obtido do fruto de Opuntia fcus indica Mill teve um rendimento prximo a
45%. A identificao prvia dos microrganismos confirmou as espcies empregadas. A prova de
esterilizao das placas permitiu a avaliao da qualidade dos meios de cultura, assim como a
verificao da presena de crescimento de bactrias contaminantes, que podem sugerir
resultados falso-positivos e inviabilizar todo processo. Todas as placas aps incubao de 24
horas em estufa a 37C +/- 2C se apresentaram livres de contaminantes.
A padronizao do inculo de acordo com a escala McFarland a 0,5% mostrou melhor
reprodutibilidade e validao dos testes de sensibilidade, pois suspenses bacterianas abaixo ou
acima das propores estabelecidas pela escala citada podem produzir leituras errneas a
respeito do poder inibitrio, reportando um resultado no condizente com o esperado.
O perfil de Efetividade Antimicrobiana do Extrato Bruto Etanlico do Fruto da Palma est
descrito na tabela abaixo:
Tabela 1: Efetividade antimicrobiana do Extrato Bruto Etanlico do Fruto da Palma
CONCENTRAES
DOEXTRATO BRUTO
CONTROLE
MICRO-ORGANISMOS
ETANLICO
Gram negativos
1%
2%
5%
10%
Etanol 99,5%
Enterobacter aeruginosa
IA
IP
IP
IP
IA
Escherichia coli
IA
IA
IP
IP
IA
Klebsiella pneumoniae
IA
IA
IP
IP
IA
Pseudomonas aeruginosa
IA
IP
IP
IP
IA
Gram positivos
1%
2%
5%
10%
Etanol 99,5%
Staphylococcus Coagulase negativo
IA
IA
IP
IP
IA
Streptococcus pyogenes
Fonte Laboratrio de Microbiologia Fits

IA: Inibio Ausente; IP: Inibio Presente; *: No houve crescimento bacteriano. Impossibilidade de
avaliar a formao de halos.
Analisando os dados da tabela 1, observa-se que o extrato bruto etanlico obtido do fruto
da palma inibiu o crescimento de Enterobacter aeruginosa e Pseudomonas aeruginosa nas
concentraes a 2%, 5% e 10%, enquanto que para Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e
Staphylococcus Coagulase negativo a inibio ocorreu apenas a 5% e 10%. Para a concentrao
de extrato a 1% no houve inibio de crescimento para nenhuma das bactrias testadas. A
bactria Streptococcus pyogenes no cresceu no meio utilizado, impedindo assim a formao de
halos e a anlise antimicrobiana. O etanol absoluto foi utilizado como controle devido a sua alta
taxa de volatilidade. Diante disso, fica evidenciado que a inibio do crescimento bacteriano foi
causada pelas propriedades qumicas da palma, pois para todas as bactrias o controle se
mostrou negativo, ou seja, ausncia da formao de halos.
CONCLUSO
A avaliao da atividade antimicrobiana de Opuntia fcus indica Mill (CACTACEAE) mostra
que para este estudo o extrato bruto etanlico da palma foi efetivo tanto para bactrias Gram
positivas quanto bactrias Gram negativas. Os trabalhos publicados sobre os frutos da palma
relatam suas caractersticas fsico qumicas e o seu valor nutricional, sendo ainda escasso estudos
dos efeitos antimicrobianos. Portanto, o presente trabalho agrega informaes adicionais ao
conhecimento desse fruto, colaborando para o desenvolvimento de um possvel fitoterpico
utilizando essa espcie vegetal.
REFERNCIAS
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PREVALNCIA DE BIOINDICADORES DA QUALIDADE MICROBIOLGICA EM PREPARO

TRADICIONAL BASE DE PLANTAS MEDICINAIS COMERCIALIZADO EM FEIRA LIVRE DA
MICRORREGIO SERID/RN.
F. A. G. Rocha, M. K. M. Gundim, P. A. Silva, J. O. Anunciao, E. D. M. Pontes, M. F. F. Arajo.
2
Microbiologia de Alimentos do IFRN, Campus Currais Novos. E-mail: angelo.gurgel@ifrn.edu.br; Alunos do
Curso Tcnico em Alimentos, Modalidade Integrado e membros do Ncleo de Pesquisas em Plantas Medicinais e
Condimentares NUPLAC/IFRN, Campus Currais Novos. E-mails: milenamedeirosg@hotmail.com;
3
pathynascimento96@gmail.com; jaciaranuplac@gmail.com; eduarda_dmpontes@hotmail.com; Biloga,
Doutora em Cincias. Professora Adjunta III do Departamento de Microbiologia e Parasitologia do Centro de
Biocincias da UFRN. E-mail: mag@cb.ufrn.br
1
Artigo submetido em maio/2014
RESUMO
As plantas medicinais so utilizadas pela humanidade
desde os seus primrdios para fins fitoterpicos. O
acesso limitado aos medicamentos alopticos pela
parcela carente da populao intensifica a utilizao de
produtos base de plantas, os quais podem representar
a nica forma de tratamento disponvel. Um dos
preparos tradicionais mais frequentes na medicina
tradicional a garrafada, extrato alcolico formulado
artesanalmente com combinao de plantas medicinais
e eventualmente, elementos de origem animal ou
mineral. No entanto, se o processamento do produto
no for adequado, do ponto de vista higinicosanitrio,

as garrafadas podem possuir qualidade microbiolgica
deficiente podendo veicular patgenos capazes de
promover nos usurios intoxicaes, infeces, ou
toxinfeces de gravidade varivel. Entre os patgenos
mais comuns, destacam-se as bactrias aerbias
mesfilas, S. aureus, E. coli, e fungos toxignicos. A
presena de tais microrganismos em plantas medicinais
considerada pela Organizao Mundial da Sade como
um risco sade pblica, podendo em casos extremos,
resultar em bito.
PALAVRAS-CHAVE: Garrafada, Staphylococcus aureus, Escherichiacoli, fungos, feiras livres.
PREVALENCE OF BIOMARKERS IN QUALITY PREPARATION OF MICROBIOLOGICAL TRADITIONAL

HERBAL MEDICINES TRADED AT PUBLIC MARKETS IN SERID MICRO-REGION/RN.
ABSTRACT
Medicinal plants are used by mankind since its
inception for herbal purposes. Limited access to
allopathic medicines by the needy portion of the
population intensifies the use of herbal products, they
represent the only available treatment. One of the most
common traditional preparations in traditional medicine
is garrafada, alcoholic extract formulated with
handmade herbal combination and any evidence of
animal or mineral. However, if the processing of the
product is not suitable, in terms of hygiene and sanitary

conditions, the potions may carry microbiological
pathogens being a vehicle capable of promoting the
infections or poisoning of varying severity. Among the
most common pathogens, highlight aerobic mesophilic
bacteria, S. aureus, E. coli and toxigenic fungi. The
presence of these microorganisms in medicinal plants is
considered by the World Health Organization as a public
health risk, and may in extreme cases result in death.
KEY-WORDS: Garrafada, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, yeast, open markets.
PREVALNCIA DE BIOINDICADORES DA QUALIDADE MICROBIOLGICA EM PREPARO

TRADICIONAL BASE DE PLANTAS MEDICINAIS COMERCIALIZADO EM FEIRA LIVRE DA
MICRORREGIO SERID/RN.
INTRODUO
Ao longo da histria, as comunidades humanas, - autctones ou no - tm utilizado com
sucesso espcies vegetais bioativas no tratamento de seus males. Segundo Dantas (2002)
cientistas, mdicos e estudiosos afirmam, durante sculos, que nas plantas medicinais reside
possibilidade de cura para as doenas que afligem a humanidade. Contudo, conforme o autor
necessrio que sejam prospectados os usos, propriedades e aplicaes das espcies medicinais,
levando-se em conta a enfermidade a ser tratada.
fato conhecido que, segundo a Organizao Mundial da Sade(OMS), aproximadamente
80% da populao mundial recorre ao uso direto ou indireto de plantas medicinais, sejam estas in
natura ou sob diversas combinaes em dependncia de sua aplicao teraputica (CALIXTO,
2000; RAHMAN; SINGHAL, 2002; FUNARI; FERRO, 2005). Tal aceitao global das plantas
medicinais relaciona-se diretamente ao acesso limitado das comunidades carentes aos
medicamentos alopticos, o que as leva a uma busca por alternativas teraputicas acessveis e de
baixo custo (RITTER et al., 2002).
Entre os indivduos envolvidos na prtica da Medicina Tradicional, destacam-se os
raizeiros, que detm conhecimento emprico e especializado no uso de espcies vegetais
bioativas (NOGUEIRA, 2005). Tradicionalmente, os raizeiros produzem diversos preparos
artesanais, dentre os quais se destacam pela sua aceitao popular as garrafadas, definidas por
Camargo (1985) como sendo uma combinao de plantas medicinais em solvente de base
alcolica, geralmente aguardente ou vinho branco ou mais raramente, gua. Adicionalmente
podem ser tambm acrescentados elementos de origem animal ou mineral.
As garrafadas so comercializadas em feiras livres e anunciadas pelos raizeiros como
produtos naturais, que podem ser consumidos sem problemas por qualquer pessoa.
Contudo, o consumo de tais produtos, pode representar riscos sade humana principalmente
advinda de sua baixa qualidade microbiolgica, resultante da ausncia de prticas de higiene
adequadas durante o preparo e/ou da inadequao da matria prima. Adicionalmente, as
condies inadequadas no armazenamento, manipulao, exposio e comercializao do
produto contribuem para a amplificao do problema. Sob tais condies possvel que sejam
veiculados nas garrafadas microrganismos como bactrias aerbias mesfilas, Escherichia coli,
Staphylococcus aureus e fungos toxignicos. O consumo do produto contaminado por altas
densidades populacionais de tais espcies pode resultar em risco sade do usurio, com o
desenvolvimento de infeces, intoxicaes ou toxinfeces de gravidade varivel, podendo
resultar em casos extremos em bito (FRANCO; LANDGRAF, 2008; WORLD HEALTH
ORGANIZATION, 2007).
Este trabalho tem como objetivo determinar em amostras de garrafadas comercializadas
na feira livre de Currais Novos/RN, as densidades de Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
bactrias aerbias mesfilas, bolores e leveduras, classificando-as como adequadas ou no ao
consumo humano de acordo com os limites recomendados pela OMS para materiais base de
plantas, destinados ao uso interno.
MATERIAL E MTODOS
Local da coleta e nmero de amostras.
A rea estudada correspondente feira livre do municpio de Currais Novos, situado na
mesorregio Central Potiguar e na microrregio Serid Oriental, sob as coordenadas 61539,6
Sul, 363054 Oeste, Estado do Rio Grande do Norte (BRASIL, 2005). As coletas ocorreram no
ms de abril de 2013.
Foram coletadas cinco amostras de garrafadas, sendo as amostras selecionadas
aletoriamente pelo prprio comerciante. Posteriormente, o material foi encaminhado ao
Laboratrio de Microbiologia/Biologia Molecular (MICROBIO) do IFRN/Campus Currais Novos
onde foi analisado.
Preparo das Amostras e Diluies Seriadas
Parcelas de 25 mL de cada amostra foram individualmente adicionadas a 225 mL de Soluo
Salina Peptonada estril, sendo homogeneizadas por agitao, obtendo-se a diluio
correspondente a 10-1. A partir desta, 1 mL foi transferido para tubo de ensaio contendo 9 mL de
soluo salina peptonada estril, sendo tambm homogeneizada, obtendo-se a 10-2. A operao
se repetiu sucessivamente at conseguir a diluio correspondente at 10-6.
Deteco e quantificao de S. aureus: Contagem Direta em Placa
As diluies foram semeadas em duplicata, objetivando alcanar a confiabilidade exigida nos
resultados obtidos. A partir de cada uma das diluies, 0,1 mL foi transferido e semeado em
superfcie (spread plate) individualmente, para placas de petri contendo gar seletivo e
diferencial Manitol Salgado (ABBA et al.,2009; WANNIPA et al., 2007). Posteriormente, as placas
foram incubadas na posio invertida a 35-37C/242h. Cumprido o perodo de incubao, as
colnias foram selecionadas com base em sua morfologia, sendo consideradas tpicas as que
apresentaram as seguintes caractersticas: tamanho pequeno, circulares, convexas e de cor
amarelo brilhante. Quatro colnias tpicas de cada placa foram selecionadas e transferidas para
tubos de ensaio contendo 15 mL de caldo BHI, sendo incubadas a 35-37C/242h. Depois de
incubados, os tubos foram submetidos fervura em banho maria por 15 minutos e aps o
resfriamento, alquotas 0,1L foram individualmente transferidos para poos previamente
perfurados em placas de petri, contendo cerca de 15 mL de gar DNAse com verde de metila. As
placas foram incubadas a 50C por duas horas. O desenvolvimento de zonas de clarificao ao
redor dos poos foi considerado resultado positivo para a presena da espcie, tendo em vista
a existncia de correlao precisa entre as atividades coagulase + e DNAse +. O teste da
termonuclease recomendado como prova adicional e confirmatria, realizada posteriormente
ao teste coagulase, para confirmao bioqumica de S. aureus (BRASIL, 2003; SILVA et al., 2007).
Deteco e quantificao de E. coli: Contagem Direta em Placa.
Os procedimentos foram realizados em duplicata e a partir de cada diluio, foi transferido 1
mL para duplicatas de placas de Petri estreis, aps o que adicionou-se aproximadamente 14 mL
de gar vermelho violeta bile/4-metilumbeliferil--Dglicurondeo (MUG VRB gar), previamente

fundido a 46 48C. Atravs de movimentos circulares suaves, o material foi homogeneizado e
deixado em repouso at total solidificao do meio. Aps a solidificao, as placas foram
incubadas em posio invertida a 352C por 24 a 48 horas.
Deteco e quantificao de aerbios mesofilos: Contagem Direta em Placa
As diluies foram semeadas em duplicata e a partir destas 0,1 mL foi transferido e semeado
em superfcie (spread plate) individualmente, para placas de petri contendo aproximadamente
16 mL de Agar Contagem de Placas (PCA) aps o que as placas foram incubadas na posio
invertida a 35-37C/24h.
Deteco e quantificao de Bolores e leveduras: Contagem Direta em Placa
Realizadas diluies decimais seriadas foi semeado (spread plate) 0,1 mL em duplicatas de
placas de petri contendo Agar Batata Dextrosado (PDA), acidificado com cido Tartrico a 10%.
Posteriormente, as placas foram incubadas em posio normal em estufa BOD a 251C/5 dias.
Contagem de colnias
Aps o perodo de incubao, foram selecionadas para quantificao as placas sequenciais
que continham entre 25 e 250, em casos com menos de 25 colnias apresentada a contagem
estimada conforme instrues contidas em SILVA (2007). A contagem direta em placa foi
efetuada com uso de contador de colnias digital, e quando necessrio, com uso de lupa (4X). Os
resultados foram expressos em UFC/g.
As amostras coletadas correspondiam a extrato alcolico (vinho) composto com a adio
das seguintes espcies vegetais: Amburana cearensis (Cumaru) Anacardium occidental (Caj),
Ximenia americana (Ameixa), Lamium album (urtiga branca), Schinus sp. (aroeira), Caesalpinia
Ferrea (Juc), Phyllanthus niruri (quebra pedra), Anadenanthera Colubrina sp. (angico). O produto
encontrava-se envasado em garrafa pet de 500 ml reutilizada, com rtulo de papel impresso
(Figura 1). A fabricao do produto no era realizada na feira livre, mas sim em fbrica caseira
situada no municpio de Currais Novos/RN.
Figura 1 Amostra de garrafada coletada na feira livre de Currais Novos.

Os resultados obtidos com as anlises microbiolgicas esto descritos na tabela 1.
Tabela 1 Resultados das anlises microbiolgicas das amostras de garrafada comercializadas
na feira livre de Currais Novos, RN.
Densidades populacionais observadas dos bioindicadores pesquisados.
Amostras
Bolores e leveduras
Aerbios
S. aureus
E. coli
(UFC/g)
Mesfilos
(UFC/g)
UFC/g)
(UFC/g)
1
2,5 x 106
4
5
3
2
4 x 10 (est.)
5 x 10 (est.)
10 (est.)
4
5
3
10 (est.)
6,5 x 10 (est.)
4
1,5 x 104(est.)
2,5 x 106
102(est.)
5
2,3 x 105
est. = contagem estimada.
Atualmente, inexiste em nosso pas legislao voltada ao estabelecimento de parmetros
microbiolgicos de aceitabilidade para produtos da medicina tradicional. Desse modo, no existe
limite legal para a presena de contaminantes microbianos em garrafadas comercializadas em
feiras livres. Contudo, a ausncia da legislao no extingue o perigo e contribui para o
agravamento dos riscos sade do consumidor, uma vez que no esto disponveis os prrequisitos legais necessrios a uma fiscalizao adequada dos produtos. Neste contexto, optamos
pela adoo dos nveis recomendados pela OMS para materiais base de plantas destinados ao
uso interno.
Figura 2 - ndices de adequao e inadequao geral das amostras analisadas (%).

As bactrias aerbias mesfilas estavam presentes em 100% das amostras, com
densidade mdia observada correspondente 1,3 x 106 UFG/g (Tabela 1). Em todos os casos, o
limite de tolerncia recomendado pela OMS, equivalente a 105 UFG/g foi superado, o que
classifica as amostras como inadequadas ao uso interno perante este grupo de microrganismos.
O grupo das bactrias aerbias mesfilas comumente utilizado como bioindicador da
qualidade sanitria de alimentos, apontando as condies gerais de contaminao ambiental ou
da matria prima. Altas densidades em alimentos no perecveis apontam para falhas de higiene
em sua cadeia produtiva. Adicionalmente, devemos considerar o fato de que tais espcies
reproduzem-se adequadamente a 36,5C, temperatura corporal humana mdia. A presena de
populaes elevadas de aerbios mesfilos indica que existiram as condies bsicas para a
proliferao de espcies patognicas para homem, que idealmente reproduzem-se na mesma
faixa de temperatura (FRANCO; LANDGRAF, 2008).
A presena de bolores e leveduras em alimentos indica contaminao advinda do meio
ambiente ou resultante de manipulao em condies higinico-sanitrias insatisfatrias.
Encontramos em 60% do material examinado bolores e leveduras com densidade mdia de 1,3 x
104 UFC/g, superando o limite mximo de 103 UFC/g em 100% dos casos analisados (figura 2). O
resultado observado pode resultar tanto do uso de matria prima de baixa qualidade, quanto da
inadequao higinico-sanitria presente em uma ou mais fases da cadeia produtiva. Altas
densidades de bolores encontradas em plantas medicinais devem ser consideradas um indicativo
em potencial para a contaminao por micotoxinas, que podem causar efeitos agudos e crnicos
em humanos e animais, afetando a integridade e funcionamento de diversos rgos e sistemas
(NUNES, 2003). Entre os principais gneros de fungos toxignicos presentes em plantas
medicinais, destacam- se: Fusarium, Aspergillus, Penicillium (WORLD HEALTH ORGANIZATION,
2007).
As densidades observadas de bolores e leveduras nas amostras testadas so condizentes
com os resultados e observaes realizados por Rocha, Medeiros e Silva (2010), que relataram a
baixa qualidade microbiolgica de amostras de matria prima provenientes da mesma feira livre.
Adicionalmente, os autores tambm descrevem marcantes inadequaes de cunho higinicosanitrio capazes de afetar de forma negativa a qualidade microbiolgica do material analisado.
S. aureus foi detectado em 20% das amostras analisadas, com densidade mdia observada
equivalente a 2 x 102 UFC/g. A sua deteco indica deficincias na higiene ocorridas ao longo de
uma ou mais fases da cadeia produtiva. O microrganismo reconhecido como bioindicador de
baixa higiene, quando presente em alimentos, superfcies e utenslios de trabalho (FRANCO;
LANDGRAF, 2008). Embora a Organizao Mundial da Sade no estabelea limites para a
presena em plantas medicinais e derivados, importante ressaltar que S. aureus apontado
dentre todas as espcies pertencentes ao Gnero Staphylococcus como a mais patognica para
humanos. Desse modo, o microrganismo mundialmente implicado em surtos de doenas de
natureza estafiloccica (FRANCO; LANDGRAF, 2008; SILVA et al., 2007).
Dado o seu alto potencial toxignico, a presena de S. aureus em preparo tradicional deve
ser encarado como um risco sade dos usurios. Em temperatura ambiente possvel que o
microrganismo produza toxinas de natureza proteica (A, B, C 1 , C 2 , C 3 , D e E), algumas das quais
termorresistentes e quimiorresistentes. Capazes de gerar sintomatologia em humanos em
concentraes baixas, da ordem de 0,015 a 0,375 g/Kg de peso corporal, possuem dentre outras
ao emtica e diarreica, podendo causar nuseas, vmitos, cimbras abdominais, diarreia, dores
de cabea, queda de presso arterial e sudorese. Se consumida em grande quantidade o
indivduo pode apresentar febre. Quando se trata de indivduos debilitados, a intoxicao pode
resultar em bito (FRANCO; LANDGRAF, 2008).
Detectou-se E. coli em 20% das amostras, com densidade mdia de 2 x 10 UFG/g
superando o limite legal adotado, equivalente a 10 UFG/g. A presena da espcie no material
testado bioindicadora de contaminao fecal e levanta a possvel presena de patgenos
veiculados pela rota fecal-oral, tais como certos vrus, bactrias, cistos de protozorios e ovos de
helmintos. Adicionalmente necessrio considerarmos que no se pode eliminar a probabilidade
da presena de cepas patognicas de E. coli, EPEC, EIEC, EHEC, EAggEC e ETEC, esta ltima
produtora de enteroxina termoestvel (FRANCO; LANDGRAF, 2008; ROCHA; MEDEIROS; SILVA,
2010; SILVA et al., 2007).
CONCLUSO
Perante os resultados obtidos, consideramos 100% das amostras analisadas inadequadas
ao consumo humano, representando risco sade do usurio. Os dados refletem as condies
higinicas inadequadas durante uma ou mais fases da sua cadeia produtiva, incluindo as fases de
armazenamento e exposio ocorridas na feira livre de Currais Novos, RN.
A ausncia de legislao nacional especfica, voltada ao estabelecimento de parmetros
de qualidade e segurana microbiolgica para plantas medicinais e preparos tradicionais
comercializados em feiras livres, inviabiliza as atividades de fiscalizao da qualidade do produto,
expondo a sade dos consumidores a riscos de gravidade varivel. necessrio que o vcuo legal
seja contornado, com a elaborao e aplicao urgentes da legislao necessria.
Recomendamos que sejam desenvolvidas atividades educativas junto aos comerciantes,

objetivando a implantao de rotinas de Boas Prticas na manipulao dos produtos e insumos
da medicina tradicional.
Administrao municipal, cabe efetuar melhorias na infraestrutura de apoio da feira
livre, viabilizando o seu bom funcionamento. Desse modo, em conjunto, espera-se que seja
alcanada uma melhor qualidade nos produtos da medicina tradicional, protegendo a sade dos
usurios de insumos da medicina tradicional.
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WORLD HEALTH ORGANIZATION. WHO guidelines for assessing quality of herbal medicines
with reference to contaminants and residues. Geneva: WHO Press, 2007.
PESQUISA DE Salmonella sp. EM POLPAS DE AA COMERCIALIZADAS NOS SUPERMERCADOS

DO MUNICPIO DE JOO PESSOA- PB
1
F. S. Sousa (IC) ; E. A. Couto (PQ) ; A. S. Alves (PQ) ; R. F. Nbrega (PQ)

1
Instituto Federal da Paraba (IFPB) - Campus Joo Pessoa Curso Superior de Tecnologia em Gesto Ambiental e-mail:
felipesousa94@hotmail.com
(PQ) Pesquisador
RESUMO
O presente trabalho objetivou analisar a qualidade
fitossanitria das polpas de aa vendidos em
supermercados na cidade de Joo Pessoa PB. Para isto
foram realizadas anlises microbiolgicas para a
identificao da existncia de Salmonella nas polpas. Foi
estabelecido um universo amostral, contendo 10
exemplares advindos de supermercados da referida
cidade. Tais amostras foram incubadas em laboratrio
utilizando-se meios de cultura adequados ao
crescimento microbiolgico, em conformidade com os
parmetros estabelecidos pela American Public Health
Association APHA (1992) e Brasil (1999) que definem a
leitura de Salmonella spp. Os resultados obtidos
evidenciaram que somente 20% do corpo amostral no

demonstrou a presena de Salmonella spp, enquanto
que 80% da amostras configuraram a presena da
bactria infringindo assim aos critrios legais
previamente estabelecidos na Resoluo RDC n 12, de
2 de janeiro de 2001, da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria e evidenciando assim a baixa qualidade
sanitria do alimento em estudo.
PALAVRAS-CHAVE: Polpa de aa, Salmonella spp., Qualidade sanitria.
SEARCH Salmonella sp. IN PULP ACAI COMMERCIALLY SUPERMARKET IN THE MUNICIPALITY OF JOO
PESSOA - PB
ABSTRACT
This study aimed to analyze the health status of acai
pulp sold in supermarkets in the city of Joo Pessoa - PB.
For this microbiological analysis to identify the presence
of Salmonella in the pulps were performed. A sampling
universe was established, containing 10 copies of
supermarkets coming to that city. These samples were
incubated in the laboratory using suitable to microbial
growth in accordance with the parameters established
by the American Public Health Association , APHA (1992)
and Brazil (1999) that defines the reading of Salmonella
culture media. The results showed that only 20 % of the
KEY-WORDS: Acai pulp, Salmonella sp., Sanitary quality
sample body has not demonstrated the presence of

Salmonella spp., while 80 % of the samples have shaped
the presence of bacteria breaking thus the legal criteria
previously established in Resolution RDC No. 12, dated
January 2, 2001 , National Agency for sanitary
Surveillance and thus evidencing the low sanitary quality
of food in the study.
PESQUISA DE Salmonella sp. EM POLPAS DE AA COMERCIALIZADAS NOS SUPERMERCADOS

DO MUNICPIO DE JOO PESSOA- PB
INTRODUO
Com as mudanas nas ltimas dcadas nos costumes e hbitos das populaes o modo como se
alimentam mudou bruscamente. Antigamente predominava o consumo de alimentos naturais e
no industrializados. Em decorrncia a indstria alimentcia tem buscado meio de proporcionar
aos consumidores meios prticos e rpidos de preparar seus alimentos.
As polpas de frutas industrializadas atendem a essa exigncia do mercado. Com sabor e
aparncia muito prxima dos sucos naturais, elas so bem aceitas e em decorrncia disso seus
consumo alto. Segundo a legislao brasileira do Ministrio da Agricultura, polpa o produto
no fermentado, no concentrado ou diludo, obtido pelo esmagamento de frutos polposos
(BRASIL, 2000).
O aaizeiro (Euterpe oleracea Mart.) uma Arecaceae tpicado Norte do Brasil, cujos frutos so
pequenos, arredondados e de colorao roxo-escuro em funo da presena de pigmentos
naturais denominados de antocianinas (TATENO, 2001). A partir do seu fruto pode ser produzidos
sorvetes, sucos, cremes, iogurtes e licores. Seu suco consumido principalmente por
desportistas visto que considerada uma bebida energtica.
O suco de polpa do aa pode sofrer contaminao desde o processo de fabricao em que o
fruto manipulado diversas vezes, o que propicia o contgio e crescimento de micro-organismos
associados ao fruto (ALEXANDRE, CUNHA e HUBINGER, 2004).
Apesar de o consumo de suco de polpa de fruto no ser to perigoso no que diz respeito a
existncia de micro-organismos patgenos. H que se dizer que na literatura se encontra
problemas recentes com alimentos contaminados com Salmonella e outras bactrias
patognicas. No ano 2000 segundo Nadvorny et. al, ocorreram no Rio Grande do Sul, 99 surtos de
doenas transmitidas por alimentos, sendo 74 destes provocados por Salmonella sp, o que
tambm acontece em outros estados brasileiros. O que demonstra a necessidade de evitar as
contaminaes por essa bactria. No Brasil a legislao, RDC n 12, de 02 de janeiro de 2001
estabelece os padres microbiolgicos para alimentos, estabelece ausncia de Salmonella em
25g.
O presente trabalhou objetivou avaliar a qualidade das polpas de aa vendidas nos diversos
supermercados da cidade de Joo Pessoa- PB, atravs da pesquisa de Salmonella no alimento em
estudo.
MATERIAIS E MTODOS.
Foram analisadas 10 amostras de polpas de aa vendidas em supermercados em Joo Pessoa PB,
durante o ms de agosto de 2013. As amostras foram acondicionadas em freezers no Laboratrio de
Microbiologia do Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia da Paraba do cmpus Joo Pessoa.
Posteriormente, em um perodo mximo de 24 horas foram retiradas e degeladas a temperatura
ambiente para as anlises laboratoriais.
A anlise foi feita com 25 gramas da polpa de aa, processado em um liquidificador com 225 mL de gua
peptonada estril (diluio 101). A partir dessa diluio, foram feitas as diluies seriadas at 10 3 com o
mesmo diluente. Posteriormente foram inoculadas em placas de petri com gar propcio para o
crescimento da Salmonella a temperatura de 35C por 24 horas. Os procedimentos adotados esto em
conformidade com a metodologia adotada pela APHA (American Public Health Association).
Com os resultados obtidos atravs das anlises (Tabela 1) pudemos constatar que somente 20%
(vinte por cento) das amostras indicaram ausncia da bactria, acatando as exigncias da
legislao que preconiza ser imperiosa a inexistncia de Salmonella sp. em alimentos para que
estes estejam prprios ao consumo humano, enquanto que 80% (oitenta e sete por cento)
apresentaram contaminao por Salmonella sp. confrontando diretamente o disposto na
Resoluo RDC n 12, de 2 de janeiro de 2001 (BRASIL, 2001).
Os resultados obtidos podem tambm ser demonstrados individualmente e em conformidade
com os nveis de diluio a que foram submetidos, demonstrando assim o perigo a que as
pessoas diariamente se expem, segundo Tabela 1, onde apresenta apenas 2 (duas) amostras
com resultado negativo a presena de Salmonella spp. em todas as diluies.
Observou-se no momento da coleta das amostras, que estas so comercializadas nos

supermercados de Joo Pessoa em embalagens plsticas individuais que no protegem o
alimento contra a incidncia direta de luz e ainda de outros fatores externos que possam intervir
diretamente na qualidade fitossanitria do alimento em questo, saliente-se que as polpas de
aa vendidos separadamente so diretamente manipulados pelos consumidores sem qualquer
outro tipo de proteo e que podem disseminar agentes patgenos pelo contato direto e ainda
ocorre a quebra de resfriamento que possibilita o crescimento da bactria em estudo.
Tabela 1 Resultado individual das amostras de polpa de aa

AMOSTRA
DILUIO 10-1
DILUIO 10-2
DILUIO 10-3
AMOSTRA 1
Presente
Presente
Presente
AMOSTRA 2
Presente
Presente
Presente
AMOSTRA 3
Presente
Presente
Presente
AMOSTRA 4
Presente
Presente
Presente
AMOSTRA 5
Presente
Presente
Ausente
AMOSTRA 6
Ausente
Ausente
Ausente
AMOSTRA 7
Ausente
Ausente
Ausente
AMOSTRA 8
Presente
Presente
Ausente
AMOSTRA 9
Presente
Presente
Presente
AMOSTRA 10
Presente
Presente
Ausente
Fonte Laboratrio de anlises microbiolgica de gua do IFPB
Figura 1 Resultados das anlises feitas.

De acordo com a pesquisa de Cayres et. al, os resultados das anlises de polpa de aa vendidas
no Rio de Janeiro deram negativos para a presena de Salmonella, as 48 amostras analisadas no
demonstraram contaminao pela referida bactria. Essa discrepncia nos resultados das
diferentes localidades pode ser explicada pelos cuidados com o resfriamento da polpa de aa e
as diferenas climticas, como pelos cuidados na manipulao do fruto no seu processo
produtivo.
Torna-se imperativo a prtica de medidas higinicas e sanitrias que sejam capazes de evitar que
esses alimentos contaminados sejam expostos para o consumo da populao.
CONCLUSO
Com resultados obtidos podemos perceber que apenas 2 (duas) amostras, o que corresponde a
20% (vinte por cento), se encontravam aptas ao consumo humano por inexistir a contaminao
com a bactria Salmonella spp., e que 14 (quatorze), equivalente a 80% (oitenta por cento) das
amostras se encontravam contaminadas e mesmo assim estavam disponveis compra e
consumo de qualquer pessoa.
Durante a coleta das amostras foram notados, em alguns supermercados, ms condies na
exposio dos produtos o que os torna susceptveis multiplicao dos micro-organismos
causando uma deficincia nos padres higinicos e aumentando o risco de doenas para
populao.
REFERNCIAS
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Microbiological Examination of Foods. Vanderzant C, Splittoesser, DF eds. 3 rd ed. APHA,
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2. BRASIL. MINISTRIO DA AGRICULTURA DO ABASTECIMENTO. Instruo Normativa no
01/00, de 07/01/00. Regulamento tcnico geral para fixao dos padres de identidade e
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10 jan. 2000, Seo I, p.54-58.
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02/01/2001. Regulamento Tcnico sobre padres microbiolgicos para alimentos. Dirio
Oficial da Repblica Federativa do Brasil, Braslia, DF, 10 jan. 2001, Seo I,p. 45-53.
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(Curso de Habilitao em Comercio Exterior). Belm-PA. 32Pp
MEIO DE CULTURA SUPLEMENTADO COM FARINHA DA CASCA DE TUCUM (Astrocaryum

aculeatum Meyer) PARA PRODUO DE BIOSSURFACTANTES POR FUNGOS AMAZNICOS
,3
J. B. B. Nogueira Jnior (IC) ; J. P. F. Tavares (IC) ; V. L. S. Marinho (PQC) ; N. F. Castro (PQO) ; E. P. Soares
3
(PQCO)
1
2
Instituto Federal do Amazonas (IFAM) - Campus Parintins, Instituto Federal do Amazonas (IFAM)
3
Departamento de Pesquisa - Campus Parintins; Universidade do Estado do Amazonas (UEA) Centro de
Estudos Superiores de Parintins e-mail: bosco_batista@hotmail.com
(PQC) Pesquisadora Colaboradora
(PQO) Pesquisadora Orientadora
(PQCO) Pesquisadora Co-Orientadora
RESUMO
Estudo tem sido realizado na seleo de
microorganismos produtores de biossurfactantes para
as indstrias alimentcias e petroqumicas, com
vantagens em relao aos surfactantes sintticos sobre
o uso em biorremediao. Os biossurfactantes
necessitam de uma produo cuidadosa e planejada,
com a utilizao de substratos de baixo custo. Assim
cresce o estmulo no uso de substratos alternativos da
agroindstria como a farinha da casca de tucum
(Astrocarium aculeatum Meyer) e utilizao de fungos
amaznicos no tratamento de resduos poluidores
ligados a qualidade ambiental. Nos testes em

fermentao submersa e semi-slida, foram realizados
bioensaios individuais com os fungos Pycnoporus
sanguineus, FBL e FV-12 e em consrcios C1
(Pyc+FBL+FV-12), C2 (Pyc+FBL) e C3 (Pyc+FV-12). De
modo geral, nos bioensaios em fermentao submersa e
semi-slida utilizando os fungos individuais e os
consrcios de fungos C1, C2 e C3 mostraram-se capazes
de produzir biossurfactantes em meio de cultura
suplementado com farinha da casca de tucum.
PALAVRAS-CHAVE: Biossurfactantes, Biorremediao, Fungos Amaznicos.
MIDDLE OF CULTURA SUPLEMENTADO WITH FLOUR OF THE PEEL OF TUCUM (Astrocaryum

aculeatum Meyer) FOR BIOSURFACTANTS PRODUCTION BY FUNGI AMAZON
ABSTRACT
Studies has been conducted in the selection of
biosurfactant producing microorganisms for food and
petrochemical industries , with advantages over the use
of synthetic surfactants in bioremediation . The
biosurfactants require careful production and planned
with the use of low cost substrates . So grows the
stimulus in the use of alternative substrates such as
agribusiness peel flour tucuma ( Astrocarium aculeatum
Meyer ) and use of Amazonian fungi in the treatment of
polluted waste linked to environmental quality . In tests
on semi-solid and submerged fermentation individual

bioassays were performed with fungi Pycnoporus
sanguineus , FBL and FV -12 and C1 consortia ( FBL Pyc +
+ VF -12 ) , C2 ( FBL + Pyc ) and C3 ( + Pyc VF -12). In
general , the bioassays in submerged fermentation and
semi - solid using individual molds and fungi consortia
C1 , C2 and C3 were capable of producing biosurfactants
in culture medium supplemented with peel flour
tucum.
KEY-WORDS: Biossurfactantes, Biorremediao, Fungi Amazon.
MEIO DE CULTURA SUPLEMENTADO COM FARINHA DA CASCA DE TUCUM ( Astrocaryum

aculeatum Meyer) PARA PRODUO DE BIOSSURFACTANTES POR FUNGOS AMAZNICOS
INTRODUO
Pesquisas que buscam alternativas nos tratamentos aos impactos ambientais causados pelo ser
humano esto sendo realizadas como alternativas de reduzirem os problemas ambientais gerados. O
interesse industrial por tecnologias alternativas aos processos qumicos convencionais vem aumentando
gradativamente em diversas reas, com vistas obteno de alternativas limpas para o desenvolvimento
de produtos e processos (CORTEZ & ROBERTO, 2008). A grande variedade e quantidade de resduos
orgnicos so geradas anualmente pela atividade agroindustrial humana.
Os resduos agroindustriais surgem como substratos de baixo custo bastante promissores
(MUKHERJEE et al., 2006). Desde 1986, existe uma srie de pesquisas sendo desenvolvidas no pas a fim
de agregar valor aos produtos e subprodutos da agricultura, principalmente pelo aumento da gerao de
resduos agroindustriais. A utilizao de resduos da agroindstria brasileira, alm de fornecer diferentes
alternativas de substratos para a fermentao, tambm ajuda nos problemas de poluio (PANDEY et al.,
1999). Segundo Abarca (1999), o setor agroindustrial no reconhecido pela sociedade como um setor
que afeta o meio ambiente. Assim surge a espcie pertencente famlia da Arecaceae (Palmeiras),
conhecida popularmente pelo nome de tucumanzeiro (CAVALCANTE, 1991). Os frutos servem para a
alimentao humana e animais domsticos (CLEMENT et al., 2005), dos quais o mesocarpo (polpa)
considerado uma fonte alimentcia altamente calrica (MORAIS e DIAS, 2001), devido ao elevado
contedo de lipdios, apresenta ainda quantidade expressiva do precursor da vitamina A (YUYAMA, 2008;
YUYAMA, 2005; CHAVES e PECHNIK, 1947), teores satisfatrios de fibra (SILVA et al., 1998) e vitamina E
(LUBRANO et. al, 1994; BROCHIER, 2000). O leo considerado comestvel, de cor amarela extrado do
mesocarpo (CAVALCANTE, 1991) possui caractersticas organolpticas e nutritivas de alto valor para a
indstria de alimentos e cosmtica (ELOY, 2001). uma rvore tpica da regio amaznica e seu fruto
bastante consumido.
O interesse em se utilizar biossurfactantes crescente, devido s vantagens que estes compostos
apresentam em relao aos seus similares quimicamente sintetizados, e tambm pelo fato de sua
aceitabilidade para aplicao em vrias indstrias, tais como a indstria farmacutica, de cosmticos, de
petrleo e indstrias alimentcias (GIRO et al., 2008). As aplicaes mais promissoras so as de limpeza de
leo em tanques de navios e biorremediao em derramamento de leos e petrleo (SULLIVAN, 1998). De
acordo com Gruber et al. (1993), o pr-requisito para a produo de biossurfactantes a obteno de
produtos com grande atividade, produzidos a partir de substratos baratos atravs de processos
economicamente viveis e com alto rendimento.
Atualmente, muitos estudos tm sido realizados na seleo de microorganismos produtores de
biossurfactantes para as indstrias alimentcias e petroqumicas, em especial, na recuperao de leos, de
hidrocarbonetos derivados do petrleo, com vantagens em relao aos surfactantes sintticos sobre o uso
em Biorremediao, na extrao, na emulsificao de leos e no transporte do leo bruto (KIM et al.,
2000). Com isso, cresce o estmulo aos estudos de aplicao de microrganismos no tratamento de
resduos poluidores de forma que no altere a qualidade de vida da populao, que est intrinsecamente
ligada qualidade ambiental (TAMBOURGI et al., 2008). A maioria dos surfactantes disponveis derivada
do petrleo. Entretanto, a nova legislao de proteo ao meio ambiente bem como a proteo ambiental
tem levado os consumidores a buscar os surfactantes naturais como alternativa aos produtos existentes
(RUFINO et al., 2007). Desta forma, os biossurfactantes podem ser utilizados para aumentar a interao
gua/leo, acelerar a degradao de vrios leos por microorganismos, aumentar a capacidade de
emulsificao e disperso de hidrocarbonetos em gua, alm de serem empregados na limpeza de

reservatrios de leos e na recuperao melhorada de petrleo (RYCHESCK et al., 2004). Estudos esto
sendo direcionados para o desenvolvimento de tecnologias buscando melhorar as linhagens e processos
de produo, devido vasta aplicabilidade dos biossurfactantes (NITSCHIKE e PASTORE, 2002).
Nesse contexto a regio do baixo amazonas em uma biodiversidade fngica em sua magnitude
ainda inexplorada apresenta possibilidades de aplicao nos mais diversos setores industriais, inclusive na
produo de biossurfactantes utilizando substrato como a farinha da casca de tucum (Astrocarium
aculeatum Meyer).
METERIAIS E MTODOS
OBTENO DO FUNGO: Foram utilizados os fungos Pycnoporus sanguineus, FBL e FV-12 da classe
dos Basidiomicetos armazenados na coleo de do laboratrio de Biologia do Centro de Estudos
Superiores de Parintins CESP, sendo cultivados durante 5 dias em placa de Petri ou at total
preenchimento da placa contendo meio BDA (Batata, Dextrose e Agar) para serem utilizados nos testes
como mostra a figura 01 (a), (b) e (c).
(a)
(b)
(c)
Figura 01: (a) Pycnoporus sanguineus, (b) FBL, (c) FV-12.

MEIO DE CULTURA E INOCULO: Foram utilizados como substratos de crescimento fngico matria
prima regional da farinha da casca de tucum, sendo os frutos adquiridos na feira do Municpio de
Parintins, onde foram lavadas, retiradas suas cascas e posteriormente secados em estufa, realizado o
processo de secagem, as cascas secas foram trituras em moinho de faca para obteno da farinha e
utilizada para o crescimento fngico nas Fermentaes. Como controle utilizou-se gua para fermentao
submersa e meio BDA (Batata, Dextrose e Agar) para fermentao semi-slida.
TESTES EM FERMENTAO SUBMERSA - FS: O meio de cultivo foi constitudo por 40g de resduos
slidos da farinha de tucum (FT) em 1.000 ml de gua destilada, posteriormente esterilizado em
autoclave a 1 atm por 20 minutos. Erlenmeyer de 125 ml receberam 50 ml de meio de cultivo e 01
amostra dos microorganismos em estudo, onde foram incubados 30 C em condio estacionria
durante 30 e 60 dias. Aps os perodos determinados de fermentao, as amostras foram filtradas e uma
alquota do caldo obtido foi utilizada para verificao de produo de biossurfactante, todos os testes
foram realizados em triplicata.
TESTES EM FERMENTAO SEMI-SLIDA- FSS: O meio foi constitudo por 40g do resduo slido
da farinha da casca de tucum (FT) em 1.000 ml de gua destilada e 30g de Agar e autoclavados em
autoclave a 1 atm durante 20 minutos. Os testes foram realizados em placas de Petri contendo 15 ml de
meio alternativo e 01 amostra fngica. As placas de Petri foram previamente esterilizadas a 121 C por 20
minutos em autoclave. O cultivo foi conduzido em condies estticas por 30 e 60 dias. Aps os perodos
determinados, as amostras foram filtradas com gua destilada, centrifugadas em tubos Falcon a 4.000
rpm por 10 minutos e uma alquota do caldo obtido foi utilizada para verificao de produo de
biossurfactante, todos os testes foram realizados em triplicata.
TRATAMENTO COM CONSRCIO DE FUNGOS: Tratamento consistiu em realizar crescimento dos
fungos concomitantemente obedecendo aos seguintes esquemas: Na Fermentao submersa e semislida a inoculao do segundo fungo ocorria aps 72 horas da inoculao inicial. Aps o perodo de
encubao de 30 dias e 60 dias foram retiradas alquotas para determinao da produo de
biossurfactantes.
COTROLE BITICO E ABITICO: Foram inoculados os microorganismos sem o substrato contendo
a farinha da casca de tucum, na qual em fermentao submersa utilizou-se gua e na fermentao semislida o constituinte Agar, dessa forma pode-se verificar a influncia do resduo da farinha da casca de
tucum nos tratamentos para produo de biossurfactantes.
DETERMINAO DA PRODUO DE BIOSURFACTANTES: As atividades de emulsificao foram
determinadas conforme os passos mostrados na figura 02, atravs de agitao vigorosa em agitador
magntico contendo 3,5 ml de caldo de cultura previamente filtrado em l de vidro e 2,0 ml de
hidrocarboneto de tolueno. Aps uma hora, a densidade ptica da emulso leo em gua foi medida em
espectrofotmetro a 610 nm e relatada como atividade de emulsificao (absorbncia). Aps 24 horas, as
emulses gua em leo foram expressas em centmetros relativos altura do halo e compactao mxima
das bolhas formadas e relatada como ndice de emulsificao (CARVALHO et. al., 1997).
01
02
03
04
Figura 02: Etapas de Produo de biossurfactantes.
RESULTADO E DISCUSSO
O teste em Fermentao Submersa (FS) apresentou resultados satisfatrios nos perodos de 30 e
60 dias para os fungos individuais e tambm para os consrcios, no que diz respeito formao do halo e
absorbncia, destacando os resultados obtidos com os fungos Pycnoporus sanguineus e FV-12 em cultivo,
uma vez que de acordo com Couto & Sanromn (2006) a tcnica de fermentao submersa possui relativa
facilidade de cultivo em grande escala, j que garante a homogeneidade do meio e facilidade no controle
dos parmetros do processo.
A Fermentao Submersa (FS) em meio suplementado com farinha da casca de tucum com os
fungos individuais no perodo de 30 dias de incubao o maior ndice de emulsificao que o
crescimento do halo formado, ocorreu para o fungo FV12, seguindo do fungo P. sanguineus e FBL. Para o
perodo de 60 dias o maior halo formado se repetiu para o fungo FV12, posteriormente o fungo FBL,
seguindo do P. sanguineus. O controle foi realizado em gua o P. sanguineus apresentou o melhor
resultado no crescimento do halo, seguido do fungo FBL e FV-12.
Para os testes em Fermentao Semi-Slida (FSS) em 30 dias o maior crescimento do halo foi
obtido com o fungo P. sanguineus e FV-12 com respectivamente, seguindo do fungo FBL. Para o perodo
de 60 dias o melhor resultado foi confirmado tambm com o fungo P. sanguineus, seguido do fungo FV-12
e o FBL. Com os resultados obtidos percebemos que nos testes individuais o melhor resultado na
fermentao semi-slida foi com os fungos P. sanguineus e FV-12.
Com os resultados obtidos nos testes individuais as cepas dos fungos em fermentao submersa
para os perodos de 30 e 60 dias o fungo que melhor se destacou foi o FV-12 foi e na fermentao semislida para 30 e 60 dias com o fungo P. sanguneos.
A comparao e destaques dos resultados obtidos no ndice de emulsificao so analisados
conforme mostra a figura 03.
Figura 03: ndice de emulsificao (cm) da produo de biossurfactantes por de fungos

individuais Pycnoporus sanguineus, FBL e FV-12.
A absorbncia realizada em espectrofotmetro permitiu avaliar o melhor ndice de emulsificao.

Em fermentao submersa nos perodos de 30 e 60 dias ocorreu para o fungo FV-12. No controle o fungo
FV-12 demonstrou melhor resultado com 0.86 abs. Na fermentao semi-slida o fungo P. sanguineus
teve o melhor destaque com 0, 53 abs. e FV-12 com 0,44 abs. Para o perodo de 60 dias o fungo P.
sanguineus obteve 0,17 abs., seguido do fungo FV-12 com 0.17 abs. A atividade de emulsificao confirma
os resultados apresentado no ndice de emulsificao, onde os fungos FV-12 e P.sanguineus obtiveram os
melhores resultados.
Figura 04: Atividade de Emulsificao Abs. (U.A.E: Unidade de Atividade de Emulsificao)

expressa em espectrofotmetro a 610 nm.
Para os testes realizados em Fermentao Submersa (FS) utilizando as cepas entre consrcios de
fungos, a maior atividade de emulsificao, no perodo de 30 dias ocorreu no consorcio C1
(Pyc+FBL+FV12) e no perodo de 60 dias no consorcio C3 (Pyc+FV12). Os consrcios com resultados
significativos nos testes em 30 dias ocorreram para as linhagens do consorcio C1 (Pyc+FBL+FV12) com
3,52 cm de halo e 1,07 de abs., seguido do consorcio C3 (Pyc+FV-12) apresentando 3,38 cm de halo e 0,88
de abs. No perodo de 60 dias os melhores resultados foram para os consrcios C3 (Pyc+FV-12) com 3,75
cm de halo formado e 1,19 de absorbncia, sendo o maior ndice, seguindo respectivamente do C2
(Pyc+FBL) com 3,73 cm de halo e 1,07 de abs. e o consorcio C1 (Pyc+FBL+FV1) (3,46 cm) de halo formado e
1,08 de abs. Na comparao com o controle, os testes com os consrcios C2 e C3 foram os que mais
apresentaram resultados significativos.
A fermentao semi-slida se obteve um resultado inferior quando comparado fermentao
submersa, no entanto todos os fungos foram capazes de produzir biossurfactantes. O ndice e atividade de
emulsificao no perodo de 30 dias os que mais se destacaram foram, respectivamente, o consrcio C1
(Pyc+FBL+FV-12) com halo de 2,97 cm e 0,48 de abs., seguindo do C2 (Pyc+FBL) com 2,84 cm de halo e
0,50 de abs. e o C3 (Pyc+FV-12) com 2,80 cm de halo e 0,55 de abs. No perodo de 60 dias o consrcio C2
(Pyc+FBL) e C3 (Pyc+FV-12) apresentaram os melhores ndices de emulsificao, ambos com 2,80 de halo
formado e abs. de 0.15 e 0.16, respectivamente, seguindo do C1 (Pyc+FBL+FV-12) com 2,76 de halo e 0,15
de abs. O controle foi realizado em meio de cultivo BDA onde todos os consrcios estiveram equivalentes
com os resultados obtidos.
A comparao dos resultados obtidos no ndice e atividade de emulsificao com os consrcios
obtida na analise das figuras 05 e 06.
Figura 05: ndice de Emulsificao (cm) na produo de biossurfactantes por consrcios

de fungos C1 (Pyc+FBL+FV-12), C2 (Pyc+FBL), C3 (Pyc+FV-12).
Figura 06: Atividade de Emulsificao Abs. (U.A.E: Unidade de Atividade de Emulsificao)

em espectrofotmetro a 610 nm na produo de biossurfactantes por consrcios.
Tratamentos biolgicos utilizando consrcios de microorganismos vm sendo apresentado como

uma poderosa alternativa biotecnolgica, sendo vivel no processo de biorremediao (KUNZ et. al.;
2002), servindo como alternativa para produo de biossurfactantes. As amostras fungicas submetidas ao
consrcio em fermentao submersa estacionria incubada durante 60 dias com o consrcio C3 foram os
que apresentaram os melhores resultados no que tange a produo de biossurfactantes conforme mostra
o ndice e atividade de emulsificao.
Todos os fungos amaznicos testados apresentaram potencial para produo de biossurfactantes
nos perodos de 30 e 60 dias, sendo que os testes em fermentao submersa entre os consrcios foram
o que mais se destacaram na formao no ndice de emulsificao com a formao do halo e atividade de
emulsificao medida com a absorbncia.
Nos testes utilizando a farinha da casca de tucum como substrato foram satisfatrios, uma vez
que o meio de cultura surge como alternativa de cultivo se considera que a funo biolgica do
biossurfactante proporcionar a assimilao do leo vegetal disperso no meio, pois segundo Bognolo et
al. (1999), os biossurfactantes apresentam como caracterstica a detergncia, que permite quebrar as
molculas dos leos, tornando-os assimilveis pelos microrganismos e assim influenciando na produo
de biomassa e consequentemente numa expressiva produo de biomolculas, havendo a liberao
extracelular do mesmo.
CONCLUSO
De uma maneira geral, as linhagens fngicas utilizadas neste trabalho foram capazes de produzir
biossurfactantes em meio de cultura suplementado com farinha da casca de tucum (Astrocarium
aculeatum Meyer). O meio influenciou o processo de produo de biossurfactantes, visto que apresenta
requisitos nutricionais para o crescimento fngico, surgindo como alternativa em substrato para cultivo de
fungos na produo de biossurfactantes.
Conforme os dados obtidos na fermentao submersa e semi-slida as linhagens fungicas FV-12 e
Pycnoporus sanguineus promoveram os melhores ndices e atividades de emulsificao nos perodos de
30 e 60 dias na produo de biossurfactantes.
A utilizao de consrcio de microorganismos fngicos apresenta-se como uma poderosa
alternativa biotecnolgica, demonstra-se tcnica e economicamente vivel no processo de produo de
biossurfactantes em meio de cultura suplementado com farinha da casca de tucum, destacando o
fungo Pycnoporus sanguineus e o fungo FV-12 na produo de biossurfactantes quanto

formao do halo e absorbncia durantes os perodos de 30 e 60 dias.
Todos os fungos amaznicos testados apresentaram potencial para produo de biossurfactantes

nos perodos de 30 e 60 dias, sendo que os testes em fermentao submersa entre os consrcios foram
o que mais se destacaram na formao halo e absorbncia.
AGRADECIMENTOS
Primeiramente a Deus pela vida e sade concedida, aos meus pais Joo Bosco Nogueira e Oneide Simas
Nogueira por sempre me apoiarem, a todo grupo de pesquisa do Centro de Estudos Superiores de
Parintins/UEA em especial a minha querida co-orientadora MSc. Elaine Pires Soares por toda a ajuda em
desenvolver o trabalho, ao Dr. Ademir Castro e Silva e a colaboradora Prof. MSc. Vera Lcia da Silva
Marinho do Instituto Federal do Amazonas - IFAM Campus Parintins, e a FAPEAM pelo apoio financeiro
recebido para execuo do trabalho. A todos que contriburam direta e indiretamente os meus sinceros
agradecimentos.
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SUSCEPTIBILDIADE DE BACTRIAS PATOGNICAS A ANTIBITICOS COMERCIAIS

1
F. L.S.Araujo ; R. S. Araujo ; T.S Silva ; V. G. V. B. Sena ; R.L. Castro ; J.L.Serra

1
Campus Z Doca Instituto Federal do Maranho, IFMA;

luanaaraujo_1991@hotmail.com
(PQ) Pesquisador
RESUMO
Os contaminantes biolgicos tornam-se um agravante
para sade pblica no Brasil, eles esto presentes na
gua e/ou nos alimentos, causando inmeras doenas
a populao. As indstrias farmacuticas tm
produzido novos antibiticos em alta escala, porm
nas ltimas dcadas a resistncia de micro-organismos
para essas drogas aumentou consideravelmente. Com
isso o presente estudo teve como objetivo medir o
halo de inibio dos antibiticos comerciais (Penicilina
e Vancomicina) sobre o crescimento das bactrias
Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Salmonella
choleraesuis. A atividade antimicrobiana da penicilina
(10 g) em cepas testes de E. coli e da vancomicina (30
g) sobre S. aureus e S. Choleraesuis foi realizada pelo
mtodo de difuso de discos. As cepas de Escherichia

coli testadas Penicilina mostraram-se resistentes, no
apresentando halo de inibio. Enquanto que a S.
Choleraesuis apresentou um halo de inibio de 13
mm, sendo classificado como intermedirio. O
contrrio foi observado para a cepa de S. Aureus que
apresentou sensibilidade vancomicina com halo de
inibio de 16 mm. Dessa forma, conclui-se que a
penicilina no apresenta-se to eficiente frente as
bactrias
Gram-negativas,
enquanto
que
a
vancomicina demonstrou um excelente potencial de
inibio sobre o micro-organismo Gram-positivo
testado.
PALAVRAS-CHAVE: contaminantes biolgicos, halo de inibio, organo.
SUSCEPTIBILITY OF ANTIBIOTICS THE PATHOGENIC BACTERIA COMMERCIAL

ABSTRACT
Biological contaminants become aggravating to public
health in Brazil , they are present in the water and / or
food , causing numerous diseases the population . The
pharmaceutical companies have produced new
antibiotics for high scale , but in recent decades the
resistance of microorganisms to these drugs has
increased considerably . Thus the present study aimed
to measure the inhibition zone of commercial
antibiotics ( penicillin and vancomycin ) on the growth
of the bacteria Escherichia coli , Staphylococcus aureus
and Salmonella choleraesuis . The antimicrobial
activity of penicillin ( 10 mg) in strains of E. coli tests
and vancomycin ( 30 mg ) of S. aureus and S.

Choleraesuis was performed by disc diffusion method .
Strains of Escherichia coli Penicillin tested were
resistant , showing no inhibition zone . While S.
Choleraesuis showed a halo of inhibition of 13 mm and
is classified as intermediate . The opposite was
observed for the strain of S. aureus that showed
sensitivity to vancomycin with inhibition zone of 16
mm . Thus , it is concluded that penicillin has not
become as efficient against Gram-negative bacteria ,
while vancomycin showed excellent potential for the
inhibition of Gram- positive micro- organism tested .
KEY WORDS: biological contaminants, inhibition halo, oregano.
SUSCEPTIBILDIADE DE BACTRIAS PATOGENICAS A ANTIBITICOS COMERCIAIS

INTRODUO
Os contaminantes biolgicos tornam-se um agravante para sade pblica no Brasil, eles
esto presentes na gua e/ou nos alimentos, causando inmeras doenas a populao. A
transmisso pode ocorrer de forma direta (com a ingesto de gua ou alimentos) ou indireta (no
preparo de alimentos, na higiene pessoal ou na agricultura). So inmeros os micro-organismos
(m.o) presentes nos alimentos e na gua contaminadas responsveis por diversas doenas, dentre
eles destacam-se as bactrias Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Salmonella choleraesuis
(SOUSA, 2006).
A Escherichia coli uma bactria Gram-negativa e pertence ao grupo dos Coliformes, os
quais so membros da microbiota intestinal normal do homem e de amimais, alm de serem
causadores de diarreias. A contaminao por E. coli em um alimento se d pela avaliao de dois
aspectos. Um deles que este possui uma enterobactria, uma vez detectada no alimento, indica
que este possui uma contaminao microbiana de origem fecal, por tanto, est em condies
higinico-sanitrias inadequadas, e o outro, que cepas de E. coli so consideravelmente
patognicas para o homem (FRANCO, 2002).
O gnero Staphylococcus, geralmente formado por bactrias Gram-positivas e de forma
esfrica. So bactrias capsuladas, no esporuladas, anaerbios facultativos e imveis (ARAUJO,
2013). So geralmente encontrados na pele e nas fossas nasais de pessoas saudveis, no entanto,
podem provocar doenas (SANTOS, 2007). O tipo Staphylococcus aureus est entre os principais
patgenos encontrados, sendo ainda considerado um dos mais resistentes aos antibiticos
comerciais disponveis (FARIA et al., 2012).
A Salmonella uma bactria pertencente famlia Enterobacteriaceae, sendo componente
da subclasse das Proteobactrias. Baseado em sua morfologia e sua composio bioqumica, este
gnero pertence a um grupo homogneo de bacilos de reao Gram-negativa, anaerbios
facultativos, no formadores de esporos, normalmente mveis e com flagelos pertricos
(ARAUJO, 2013).
As indstrias farmacuticas tm produzido novos antibiticos em alta escala, porm nas
ltimas trs dcadas a resistncia de m.o para essas drogas aumentou consideravelmente. Em
geral, as bactrias possuem habilidade gentica para transmitir e adquirir resistncia para essas
drogas, que so utilizadas como agentes teraputicos. O problema da resistncia microbiana e a
perspectiva para o uso de drogas antimicrobianas no futuro ainda indecisa. Portanto, aes
devem ser tomadas para reduzir o uso indiscriminado de antibiticos, e pesquisas realizadas para a
melhor compreenso do mecanismo gentico de resistncia.
Deste modo o presente estudo teve como objetivo medir o halo d
e inibio dos antibiticos comerciais (Penicilina e Vancomicina) sobre o crescimento das

bactrias Escherichia coli (ATCC 25922), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Salmonella
choleraesuis (ATCC 12011).
MATERIAL E MTODOS
A atividade antimicrobiana dos antibiticos comerciais foi avaliada utilizando-se o mtodo
de difuso de discos (BAUER et al, 1966). As cepas teste de Escherichia coli (ATCC 25922),
Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Salmonella choleraesuis (ATCC 12011) foram ativadas em
caldo Brain Heart Infusion (BHI) e aps 24 horas de incubao foi realizado a padronizao do
inculo com a escala 0,5 de Mac Farland (10-8 micro-organismos/ mL).
A avaliao da susceptibilidade das cepas testes de E. coli e S. choleraesuis ao antibitico
comercial Penicilina (10 g) e do S. aureus Vancomicina (30 g), foi realizada pelo mtodo de
difuso de discos conforme descrito abaixo.
Com auxlio de um swab, o inculo (0,1mL) de cada bactria teste, foi semeado sobre a
superfcie das placas de gar Mueller-Hinton. Em seguida, sobre este, foram aderidos pequenos
discos de papel filtro impregnados com 10 L do antibitico, com o auxlio de uma pina
previamente flambada. Os discos foram pressionados levemente contra a superfcie do meio. As
placas foram incubadas a 35C por 24 horas e posteriormente foi realizado a leitura do halo de
inibio com uma rgua milimetrada.
A Tabela 1 apresenta dados referentes ao antibacteriana dos antibiticos penicilina e
vancomicina avaliadas pelo mtodo de difuso de discos.
TABELA 1 - Halos de inibio dos antibiticos (Penicilina e Vancomicina) frente Escherichia coli
(ATCC 25922), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Salmonella choleraesuis (ATCC 12011).
Antimicrobianos
E. coli
Halos de inibio (mm)

S. Aureus
S. choleraesuis
Penicilina (10 g)
13
Vancomicina (30 g)
16
Nota: Anlises realizadas em duplicata.

Fonte Pavilho tecnolgico UFMA-Campus So Lus
Pode-se observar que as cepas de Escherichia coli testadas penicilina mostraram-se

resistentes, apresentando halo de inibio de 0 mm (Figura 1).
FIGURA 1 Halo de inibio da Penicilina sobre E. coli (ATCC 25922)

Serra e Dias (2009) tambm observaram resistncia de cepas de Escherichia coli

antibiticos comerciais, como a cefalotina (30 g) e gentamicina (30 ).
Os halos de inibio dos antibiticos comerciais sobre o S. aureus (Figura 2), apresentaram
resultados mais expressivos, apresentando halos de inibio de 16 mm.
FIGURA 2 - Halo de inibio da Vancomicina sobre S. Aureus (ATCC 25923)

Atualmente, S. aureus resistente vancomicina o maior patgeno nosocomial em

infeces hospitalares e responsvel por inativar a ao de vrios antibiticos, tornando
multirresistncia, um grande problema de sade (SILVA et al., 2007).
A penicilina, por sua vez, apresentou relativo efeito inibitrio sobre a Salmonella
choleraesuis conforme evidencia figura 3, apresentando halo de inibio de 13 mm.
FIGURA 3 - Halo de inibio da penicilina sobre Salmonella choleraesuis (ATCC12011)
Segundo Depizzol (2006) a maioria das bactrias Gram-negativas so resistente penicilina

G por ser impermevel droga, ou por apresentar alterao em protenas de ligao penicilina.
No caso das sulfonamidas, os micro-organismos podem tambm apresentar uma menor
permeabilidade droga.
TABELA 2 - Zona de inibio em mm dos antibiticos
Resistente
Classificao
Intermedirio
Sensvel
Penicilina
<11
12 - 21
>22
Vancomicina
<9
10 - 11
>12
Antibacteriano
* Adaptado do NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards)

Fonte- Depizzol (2006)
Mediante dados expostos na tabela 1 e 2, a E. coli pode ser classificada como resistente por
no apresentar halo de inibio, a Samonella apresentou halos de inibio de 13 mm sendo
classificada como intermedirio e o S. aureus como sensvel por apresentar halo de inibio de
16mm, suas classificaes como m.o Gram- negativos e Gram- positivos podem ser levados em
considerao para justificar tal resultado.
Em geral, as bactrias Gram-negativas (como o caso da E. coli e da S. choleraesuis) tm a

habilidade gentica de adquirir e de transmitir resistncia s drogas utilizadas como agentes
teraputicos diferente dos m.o Gram-positivos, como observado no resultado do S. aureus.
Medidas para enfrentar o problema so necessrias, entre elas, o controle no uso de
antibiticos, o desenvolvimento de pesquisas para uma melhor compreenso dos mecanismos
genticos de resistncia microbiana e estudos acerca de novas substncias antimicrobianas,
sintticas, semissintticas ou naturais para reverter tal problemtica (VICTORIA, 2010).
importante destacar as desvantagens dos antibiticos comerciais, pelo fato de serem
utilizados de forma indiscriminada, fazendo com que os micro-organismos acabem sintetizando
seus componentes e criando resistncia ao mesmo.
CONCLUSO
Conclui-se que a penicilina no apresenta-se to eficiente frente as bactrias Gramnegativas, enquanto que a vancomicina demonstrou um excelente potencial de inibio frente o
micro-organismo Gram-positivo testado.
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APLICAO DE PLACKETT-BURMAN DESIGN PARA SELECIONAR VARIVEIS SIGNIFICATIVAS NA

PRODUO DE TANASE POR Aspergillus carbonarius EM FERMENTAO SUBMERSA
1
M. J. Gouveia (IC) ; M. R. F. Mello (PQ) ; T. G. Bernardes (PQ) ; A. R. Sena (PQ)

Instituto Federal de Pernambuco (IFPE) - Campus Barreiros e-mail: amandareges@barreiros.ifpe.edu.br

(PQ) Pesquisador
RESUMO
Tanase uma enzima que catalisa a hidrlise de taninos

hidrolisveis e pode ser utilizada em diversas reas
industriais, como alimentcia e farmacutica. A
otimizao da produo de tanase muito importante
no que diz respeito s suas aplicaes. Neste sentido, o
presente trabalho teve como objetivo investigar
variveis que afetam de forma significativa a produo
de tanase por meio do planejamento experimental
Plackett-Burman. Aps produo enzimtica, verificouse que a temperatura de incubao e concentrao de
cido tnico afetaram significativamente a atividade

enzimtica, ambos com efeitos positivos. Durante a
fermentao houve uma variao de atividade
enzimtica entre 52,254 e 151,143 U/mL. O
planejamento possibilitou estudar simultaneamente
vrias variveis com economia de tempo, eficcia e
produziu informaes sobre cada componente.
PALAVRAS-CHAVE: Aspergillus carbonarius, fermentao submersa, Plackett-Burman Design, tanino acil

hidrolase.
APPLICATION OF PLACKETT-BURMAN DESIGN FOR SELECTION OF SIGNIFICANT VARIABLE IN

TANNASE PRODUCTION BY Aspergillus carbonarius UNDER SUBMERGED FERMENTATION
ABSTRACT
Tanase is an enzyme that catalyzes the hydrolysis of hydrolysable tannins and can be used in various industrial fields
such as food and pharmaceutical industries. The Optimization of tannase production is very important with regard to
their applications. In this sense, the present study aimed to investigate variables that significantly affect the
production of tannase through Plackett-Burman experimental design. After enzyme production, it was found that
the temperature of incubation and concentration of tannic acid significantly affect enzymatic activity, both with
positive effects. During fermentation there was a variation in enzyme activity between 52.254 and 151.143 U/mL.
The planning enabled simultaneously consider several variables with time, efficiency and economy produced
information about each component.
KEY-WORDS: Aspergillus carbonarius, Plackett-Burman Design, submersed fermentation, tannin acyl hydrolase.
APLICAO DE PLACKETT-BURMAN DESIGN PARA SELECIONAR VARIVEIS SIGNIFICATIVAS NA

PRODUO DE TANASE POR Aspergillus carbonarius EM FERMENTAO SUBMERSA
INTRODUO
Tanino acil hidrolase (E.C. 3.1.1.20), conhecida como tanase, uma enzima extracelular,
induzvel, produzida na presena de cido tnico por bactrias, fungos e leveduras (AGUILAR et
al., 1999). Essa enzima hidrolisa os steres e ligaes laterais de taninos hidrolisveis (BANERJEE
et al., 2001). O cido tnico um tpico tanino hidrolisvel, que pode ser hidrolisado pela tanase
em cido glico e glicose (HELBIG, 2000). Essa enzima amplamente utilizada na indstria de
alimentos, sucos, cervejarias, farmacutica e qumica. Ela principalmente aplicada para
produo de cido glico, chs instantneos, na estabilizao da cor do vinho, refrigerantes a
base de caf, processo de tratamento de couro, remoo de adstringncia em produtos vegetais
e para tratamento de efluentes na indstria de couros (LEKHA; LONSANE, 1997).
Existem vrios fatores que afetam a produo enzimtica, por isso, faz-se necessrio um
planejamento experimental para verificar as condies timas, pois as mesmas podem variar
entre diferentes micro-organismos, bem como as diferentes enzimas (BRAVO et al., 2000). O
planejamento experimental do tipo Plackett-Burman muito til e frequentemente utilizado nas
indstrias, pois possvel observar os principais efeitos, com a mesma preciso (ANTONY, 2008).
A seleo dos fatores mais importantes e que so significativos na produo de um determinado
produto sempre confrontados com grande nmero de processos, ou variveis de um projeto
fatorial. Sendo assim, importante ter a vantagem de minimizar o que afeta a qualidade do
produto final, para o desempenho experimental de grande nmero de variveis onde o PlackettBurman torna-se apropriado para identificar os fatores mais significativos (EL-REFAI; FANG,
2010).
O planejamento experimental do tipo Plackett-Burman (PLACKETT; BURMAN, 1946)
muito til na seleo dos fatores mais importantes e que so significativos na produo de um
determinado produto (KIRAN et al., 2010). Este modelo adequado para situaes exploratrias
e pesquisas economicamente enxutas (reduo de perdas e desperdcio), pois com n
experimentos permite-se investigar n-1 fatores. Ademais, o modelo pode utilizar fatores
fantasmas, os quais fazem o papel de variveis inertes e servem para fazer a estimativa do erro
experimental associado aos contrastes (BARROS NETO et al., 2003).
Visando a obteno de condies timas para a mxima excreo da tanase, o
desenvolvimento de alguns ensaios obrigatrio. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho
foi Identificar fatores que influenciam a produo de tanase atravs de planejamento
experimental do tipo Plackett-Burman.
METODOLOGIA
Micro-organismos e manuteno
O fungo Aspergillus carbonarius foi previamente isolado do jamelo (Syzygium cumini (L.)
Skeels) e encontra-se preservado em frascos de penicilina contendo gua destilada esterilizada
sob refrigerao.
Preparo do inculo
Para ativ-lo foi feito o repique em meio BDA, pH 6,8 e incubados em B.O.D a 28 C
durante 11 dias, sem agitao. Aps este perodo, discos com miclio foram utilizados para a
fermentao.
Produo enzimtica sob Fermentao Submersa
A produo enzimtica ocorreu em frascos erlenmeyers de 125 mL contendo 50 mL de
meio de fermentao baseado no caldo Czapeck-Dox (g/L): NaNO 3 (3); KCl (0,5); MgSO 4 .7H 2 0
(0,5); FeSO 4 .7H 2 O (0,01); K 2 HPO 4 3H 2 0 (1,301). Para verificar fatores, ou variveis
independentes, que influenciam a produo enzimtica, na fermentao submersa, foram
estudadas as variveis: pH inicial, temperatura, concentrao de cido tnico, tempo de
fermentao e extrato de levedura. A varivel resposta foi a produo de tanase extracelular.
Todas as variveis seguiram o planejamento experimental. Foi proposto um Planejamento
Plackett-Burman composto por 12 ensaios para selecionar as variveis no que diz respeito aos
seus efeitos principais e no os efeitos de interao. Os nveis foram codificados como -1 e +1
(Tabela 1). Os valores reais so dados na tabela 2. Todos os experimentos foram realizados
aleatoriamente. A resposta avaliada foi a atividade enzimtica e os resultados obtidos foram
tratados no software Statistica 7.0 (StatSoft Inc, USA). Aps a formulao dos meios estes foram
autoclavados a 121 C por 15 min. Aps o arrefecimento dos frascos temperatura ambiente, o
cido tnico foi adicionado aps ser esterilizado em membrana de 0,2 m, o contedo inoculado
com 2 discos de miclio com 1,3 cm de dimetro e ento incubados a 28 C. O pH inicial do meio
foi ajustado com NaOH ou H 3 PO 4 a 1 M.
Tabela 1 - Fatores e seus valores reais e codificados
Fatores
pH inicial
Temperatura de incubao (C)
cido tnico (%, p/v)
Tempo de fermentao (h)
Extrato de levedura (%, p/v)
Menor nvel (-1)

4
28
1
48
0,1
Maior nvel (+1)

6
32
5
96
0,6
Tabela 2 Valores reais das variveis utilizadas no planejamento estatstico de Plackett-Burman.

ENSAIO
pH inicial
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
6
6
4
6
6
6
4
4
4
6
4
4
Temperatura de
incubao (C)
28
32
32
28
32
32
32
28
28
28
32
28
cido tnico
(%, p/v)
5
1
5
5
1
5
5
5
1
1
1
1
Tempo de
fermentao (h)
48
96
48
96
96
48
96
96
96
48
48
48
Extrato de levedura
(%, p/v)
0,1
0,1
0,6
0,1
0,6
0,6
0,1
0,6
0,6
0,6
0,1
0,1
Extrao enzimtica
Para obteno da enzima extracelular, as clulas fngicas foram removidas por
centrifugao a 4000 rpm por 15 minutos, aps o perodo de fermentao, e o sobrenadante
obtido denominado como extrato enzimtico bruto foi congelado e utilizado para ensaios de
atividade.
Atividade enzimtica
A atividade da tanase foi estimada pelo mtodo de Sharma et al. (2000) modificado por
Pinto (2003), utilizando rodanina etanlica e cido tnico como substrato. A atividade foi feita em
triplicata, com tubos designados de testes e controles. Foram adicionados em todos os tubos de
ensaio 250 L de substrato e 250 L de extrato enzimticos apenas nos tubos testes, em seguida
foram levados a banho-maria 30 C por 5 min. Aps 5 minutos, adicionou-se 300 L de rodanina
etanlica. Os tubos foram novamente levados ao banho-maria e ao passar 5 minutos foram
adicionados 200 L de hidrxido de potssio. Estes foram mantidos 30 C por 5 min. Passado o
tempo estimado, foram adicionados 250 L de extrato enzimtico nos tubos controles e 4 ml de
gua destilada em todos. Posteriormente foram levados a 30 C por 10 min e feita a leitura em
espectrofotmetro a 520 nm.
Anlise estatstica
Aps obteno dos resultados, os mesmos passaram por uma Anlise de Varincia
(ANOVA) atravs do programa Statistica 7.0, para indicar as variveis com efeitos
estatisticamente significativos (p<0,05) e o ajuste do modelo aos dados experimentais. Todos os
ensaios foram realizados aleatoriamente.
Um conjunto de 12 ensaios, em diferentes condies, foi conduzido para identificar os
fatores que afetam significativamente a produo de tanase por Aspergillus carbonarius
fermentao submersa. Os experimentos forneceram informaes importantes relacionadas
atividade enzimtica. As mdias dos resultados obtidos no planejamento estatstico de PlackettBurman so mostrados na tabela 3.
A produo de tanase com o planejamento de Plackett-Burman mostrou uma variao de
atividade enzimtica (52,254 a 151,143 U/mL), o que indica a importncia da otimizao da
produo para atingir rendimentos mais elevados. Foi verificado que um meio com a composio
prxima do ensaio 6 dever estar perto do ponto timo.
A significncia da equao do modelo (Equao 1), avaliada pela anlise de varincia
(ANOVA) (Tabela 4) revelou que a regresso foi significativa e a temperatura de incubao e a
concentrao do cido tnico afetaram significativamente a produo da tanase por Aspergillus
carbonarius. Sendo os outros fatores no significativos, os mesmos foram removidos da equao.
Ademais, o ajuste do modelo foi medido pelo coeficiente de determinao (R2), o qual teve um
valor de 0,81 indicando que 81 % da variao total na atividade residual foi explicada pelo
modelo ajustado.
Tabela 3 Resultados para a produo de tanase por Aspergillus carbonarius obtidos no

planejamento estatstico de Plackett-Burman.
ENSAIO
pH
inicial
Temperatura
de incubao
(C)
cido
tnico
(%, p/v)
Tempo de
fermentao
(h)
Extrato de
levedura
(%, p/v)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
1
1
-1
1
1
1
-1
-1
-1
1
-1
-1
-1
1
1
-1
1
1
1
-1
-1
-1
1
-1
1
-1
1
1
-1
1
1
1
-1
-1
-1
-1
-1
1
-1
1
1
-1
1
1
1
-1
-1
-1
-1
-1
1
-1
1
1
-1
1
1
1
-1
-1
Atividade
enzimtica
Desvio-padro
(U/mL)
89,013
94,664
134,559
65,000
86,537
151,143
98,666
52,254
55,967
57,947
57,452
62,403
Atividade enzimtica (U/mL) = 83,80 ( 5,55) 20,03 TI (5,55) + 14,64 AT (5,55)

equao (1)
Onde, TI a temperatura de incubao e AT a concentrao de cido tnico.
Tabela 4 Anlise de Varincia para o delineamento estatstico de Plackett-Burman.
Fonte de variao
Soma dos
Graus de
Quadrados
Liberdade
Regresso
9209,57
5
Resduo
2218,83
6
Total
11428,40
2
*: Estatisticamente significativo. R = 0,81. Nvel de confiana 95 %.
Mdia dos
quadrados
1841,91
369,81
F-Value
p-Value
4,98
0,04
Os resultados apresentados em forma de grfico de Pareto (Figura 1) para o efeito de

parmetros individuais comprovam que a temperatura de incubao, o pH inicial e concentrao
de cido tnico tiveram efeitos positivos na produo enzimtica, se seus valores aumentarem,
haver um aumento no valor da resposta desejada. Ao contrrio, as variveis tempo de
fermentao e concentrao de extrato de levedura tiveram seus efeitos negativos e deve ter
seus valores diminudos para aumentar a produo enzimtica. No entanto, somente a
temperatura de incubao e cido tnico foram estatisticamente significativos.
(2)T emperatura de incubao (C)
3,6089
(3)cido tnico (%)
(4)T empo de fermentao (h)
(1)pH inicial
(5)Extrato de levedura (%)
2,637307
-1,49283
1,245718
1,069228
p=,05
Standardized Effect Estimate (Absolute Value)
Figura 1 - Efeitos dos fatores na produo enzimtica de acordo com planejamento estatstico de
Plackett-Burman.
Atualmente o planejamento experimental do tipo Plackett-Burman j vem sendo utilizado
por outros pesquisadores para verificar fatores importantes na produo de tanase. Vallejo et al.
(2012) utilizaram o Plackett-Burman para a seleo de componentes relevantes do meio e
condies de cultura para produo de celulase, xilanase, poligalacturonase e tanase produzidas
por Aspergillus awamori, fermentando-se bagao de uva tinta. Os autores verificaram que o
aumento no pH inicial foi favorvel, no entanto, o aumento na temperatura, tempo de
fermentao e a concentrao de fosfato de sdio foram desfavorveis. O aumento do teor de
umidade inicial foi relevante e teve efeito positivo, e o aumento em frutose exerceu um efeito
relevante e negativo.
Rodriguez-Duran et al. (2011) investigou a produo da tanase, em fermentao em
estado slido, utilizando Aspergillus niger por meio do delineamento estatstico de PlackettBurman. Foram avaliadas 10 variveis: pH inicial, temperatura de incubao, concentrao de
cido tnico, idade do inculo, taxa de aerao e sais (5 tipos diferentes). Dentre as variveis
investigadas foram encontradas 3 que influenciaram significativamente a produo da tanase: a
concentrao de cido tnico, o pH inicial e a temperatura de incubao).
Mohan et al. (2013) estudaram o efeito dos componentes do meio para a produo de
tanase utilizando Aspergillus foetidus (MTCC 3557). Verificou-se que a concentraes de cido
tnico, fosfato de potssio, sulfato de magnsio e sulfato ferroso foram considerados os mais
significativos para a produo enzimtica. Na pesquisa, os autores encontraram valores que
variaram de 36,76 a 120,40 U/mL.
Ademais, Mohan et al. (2013) verificaram, em outro trabalho, atravs do planejamento de
Plackett-Burman, nutrientes importantes que influenciaram a produo de tanase por Aspergillus
flavus (MTCC 3783) usando p de semente de tamarindo como substrato em fermentao
submersa. A partir dos resultados, que variaram entre 30,20 e 90,76 U/mL, foram identificados
como relevantes o cido tnico, sulfato de magnsio, sulfato ferroso e sulfato de amnio.
Pode-se verificar que o Planejamento de Plackett-Burman possibilita um estudo
simultneo de vrias variveis com economia de tempo, eficcia e produz informaes sobre
cada componente.
CONCLUSO
O planejamento de Plackett-Burman foi aplicado para selecionar fatores significativos
para futura otimizao da produo de tanase por Aspergillus carbonarius em fermentao
submersa. A partir dos dados analisados verificou-se que as variveis relevantes para a produo
enzimtica foram a temperatura de incubao e a concentrao de cido tnico, ambos com
efeitos positivos. importante ressaltar que o aumento na produo de tanase (52,254 a 151,143
U/mL) por A. carbonarius foi obtido pela manipulao das condies de cultivo.
Verificou-se que o planejamento utilizado neste trabalho foi uma ferramenta importante
para se chegar s condies necessrias para aumentar a produo enzimtica em um processo
fermentativo em desenvovimento.
AGRADECIMENTOS
Ao IFPE Campus Barreiros pela bolsa concedida.
REFERNCIAS
1. AGUILAR, C. N.; AUGUR, C.; VINIEGRA-GONZLEZ, G.; FAVELA, E. A comparison of
methods to determine Tannin Acyl Hydrolase Activity. Brazilian Archives of Biology and
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U.K., 2008. p: 44-53.
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and intracellular tannase from newly isolated Aspergillus aculeatus DBF 9. Journal of Basic
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Determinao de condies ideais para a produo de poligalacturonase por Kluyveromyces
marxianus. Cincia Agrotecnolgica, v. 24, p. 137-152, 2000.
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Multifactorial Experimental Design for Optimization of Biotin Production by a Rhizopus
Nigricans Strain. Journal of American Science, v. 6, p. 179-187, 2010.
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Dissertao (Mestrado). Universidade Estadual de Campinas, Campinas, 2000.
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11. MOHAN. S. K. et. al. Application of Plackett-Burman Design for Screening the Media
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12. PINTO, G. A. S.; BRITO, E. S.; ANDRADE, A. M. R.; FRAGA, S. L. P.; TEIXEIRA, R. B.
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Biometrika, v. 33, p. 305-325, 1946.
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solid-state packed-bed bioreactor. Journal of Microbiology and Biotechnology, v. 21, p. 960967, 2011.
15. SHARMA, S.; BHAT, T. K.; DAWRA, R. K. A spectrophotometric method for assay of tannase
using rhodanine. Analytical Biochemistry, v. 279, p. 85-89, 2000.
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Grape Pomace by Solid-State Fermentation. Journal of Life Sciences, v. 6, p. 608-614, 2012.
PRODUO DE TANASE POR Aspergillus tamarii EM DIFERENTES MTODOS DE FERMENTAO

1
L. M. M. Lopes (IC); M. J. Gouveia (IC) ; M. J. Gouveia (TQ) ; T. G. Bernardes (PQ) ; M. R. F. Mello (PQ) ; A. R.
1
Sena (PQ)
1
Instituto Federal de Pernambuco (IFPE) - Campus Barreiros e-mail: amandareges@barreiros.ifpe.edu.br
(PQ) Pesquisador
RESUMO
As enzimas tem sido um dos principais alvos das

pesquisas biotecnolgicas, pois esto presentes em
todos os sistemas biolgicos, so produzidas por todos
os organismos vivos e atuam no aumento da velocidade
das reaes qumicas de forma verstil e equivalente
para cada tipo de reao orgnica, e tambm por
possuir um potencial de aplicao na substituio de
processos qumicos convencionais. Neste estudo a
produo de tanase foi investigada em diferentes
protocolos de fermentao (submersa, pastosa e slida).
Nas fermentaes foram utilizados tanto o cido tnico
quanto as sementes de rom como fonte de carbono.
Aps produo enzimtica e anlise observou-se que o

melhor mtodo de fermentao nas condies
efetuadas foi por meio submerso, onde esta apresentou
uma produo de 7,87 vezes maior quando comparada
ao mtodo de fermentao slida. Entretanto, novos
estudos so necessrios para um melhor entendimento
de parmetros que esto relacionados produo.
PALAVRAS-CHAVE: Aspergillus tamarii, tanino acil hidrolase, fermentao submersa.
PRODUCTION OF TANNASE BY Aspergillus tamarii ADOPTING DIFFERENT FERMENTATION

METHODS
ABSTRACT
Enzymes has been a major target of biotechnological
research, since they are present in all biological systems,
are produced by all living organisms and act to increase
the rate of chemical reactions and equivalent for each
type of organic reaction, and also for having a potential
application in replacing conventional chemical
processes. In this study, production of tannase was
investigated in various fermentation protocols
(submerged fermentation, slurry state fermentation and
solid state fermentation). Tannic acid and pomegranate
seeds were used in both fermentations as a source of

carbon. After analysis and enzyme production was
observed that the best method of fermentation was
carried out under the conditions by submerged
fermentaiton, where it showed a production of 7.87
times higher compared to the solid fermentation
method. However, further studies are needed to better
understand the parameters that are related to
production.
KEY-WORDS: Aspergillus tamarii, tannin acyl hydrolase, submersed fermentation.
PRODUO DE TANASE POR Aspergillus tamarii EM DIFERENTES MTODOS DE FERMENTAO

INTRODUO
Tanino acil hidrolase (TAH, E.C. 3.1.1.20), conhecida por tanase, uma enzima
responsvel pela quebra das ligaes de taninos hidrolisveis, como o cido tnico,
transformando-o em glicose e cido glico, o que induz a utilizao de resduos agroindustriais
que possuem um alto teor de taninos a serem utilizados na sua produo enzimtica. Com a
grande utilizao de tanases e seus compostos como o cido glico, na produo de diversos
bioprocessos em indstrias farmacuticas, alimentcias, de bebidas e qumicas, sua produo
torna-se cada vez mais atraente no mercado. A aplicao da tanase, por exemplo, na produo
de alimentos e bebidas contribui para a remoo dos taninos como adstringncia resultante da
reao destes com protenas (BHAT et al., 1998; BANERJEE et al., 2001; PINTO et al., 2001). No
entanto, sabe-se que sua produo ainda possui um alto custo, o que impulsiona pesquisas e
estudos a serem ainda mais frequentes e longnquos.
Segundo estudos, h na natureza vrias espcies vegetais que possuem taninos, e a
escolha dos resduos a serem utilizados no presente trabalho foi feita a partir de pesquisas que
comprovaram a existncia dos mesmos nos vegetais, e seu teor. O cultivo da Rom realizado
em mais de 100 pases do mundo. Dos pases do Mediterrneo, atravessou o Atlntico e acabou
aportando no Brasil, onde encontrou todas as condies favorveis para um crescimento
vegetativo, florescimento, frutificao e produo de frutos de primeira qualidade. O maior
interesse no mundo est no seu cultivo para o consumo como fruta fresca e tambm tem a sua
aplicao em clnicas especializadas no campo da medicina moderna e para receitas
especializadas.
A utilizao de resduos, provenientes de indstrias processadoras de frutas e gros, em
bioprocessos pode consistir em uma alternativa para promover a reduo dos custos de
produo da enzima e evitar problemas de poluio que possam causar ao meio ambiente
(MACEDO et al., 2005; PINTO et al., 2005). Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi
produzir tanases a partir de diferentes mtodos de fermentao, utilizando resduo
agroindustrial.
METODOLOGIA
Material Vegetal
As frutas da Rom foram adquiridas no mercado local e levadas ao Laboratrio de
Qumica no Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Pernambuco, Campus
Barreiros. As mesmas foram higienizadas e separadas (cascas e sementes). Em seguida, foram
triturados e mantidos em estufa para secagem 60 C durante 24 h.
Micro-organismo e manuteno
O micro-organismo Aspergillus tamarii, anteriormente isolado do jamelo (Syzygium
cumini (L.) Skeels) pelo grupo de pesquisa, encontra-se armazenado sob refrigerao em frascos
de penicilina contendo gua destilada esterilizada.
Preparo do Inculo
Para ativ-lo foram feitos repiques em meio BDA, pH 6,8 e mantiveram-se incubados em
B.O.D a 28 C durante 10 dias.
Produo Enzimtica Sob Fermentao Em Estado Slido, Submerso e Pastoso
Foi realizada utilizando semente de rom (Punica granatum L.) como uma das fontes de
carbono.
Produo enzimtica sob Fermentao em Estado Slido
Para a Fermentao slida foram utilizados 30 g de resduo, 0,6 g de cido tnico, 30 mL
de meio Czapeck-Dox (g/L: NaNO 3 , 3; KCl, 0,5; MgSO 4 7H 2 O, 0,5; FeSO 4 7H 2 O, 0,01, K 2 HPO 4 3H 2 O,
1,301), pH 5,0, e mantido a 30 C durante 48 h.
Produo enzimtica sob Fermentao em Estado Submerso
Foram adicionados 9 g de resduo, 6 g de cido tnico, 300 mL de meio Czapeck-Dox e 270
mL de gua destilada, pH 5,0, mantidos por 48 h a 30 C.
Produo enzimtica sob Fermentao Pastosa
J para a fermentao pastosa, foram utilizados 30 g de resduo, 6 g de cido tnico, 30
mL de meio Czapeck-Dox e 270 mL de gua destilada, pH 5,0, mantido por 48 h a 30 C.
Extrao Enzimtica
Para a extrao da enzima da fermentao slida e pastosa, foram adicionados aos meios
300 mL de tampo citrato 0,05 M, no pH 5,0, mantidos sob agitao a 180 rpm por 1 h e ento
levados centrfuga, onde foram mantidos a 4000 rpm durante 15 minutos. Para a extrao
enzimtica da fermentao submersa, o extrato bruto foi filtrado, centrifugado e congelado.
Atividade enzimtica
A atividade da tanase foi estimada pelo mtodo de Sharma et al. (2000) modificado por
Pinto (2003), utilizando rodanina etanlica e cido tnico como substrato. A atividade foi feita em
triplicata, com tubos designados de testes e controles. Foram adicionados em todos os tubos de
ensaio 250 L de substrato e 250 L de extrato enzimticos apenas nos tubos testes, em seguida
foram levados a banho-maria 30 C por 5 min. Aps 5 minutos, adicionou-se 300 L de rodanina
etanlica. Os tubos foram novamente levados ao banho-maria e ao passar 5 minutos foram
adicionados 200 L de hidrxido de potssio. Estes foram mantidos 30 C por 5 min. Passado o
tempo estimado, foram adicionados 250 L de extrato enzimtico nos tubos controles e 4 ml de
gua destilada em todos. Posteriormente foram levados 30 C por 10 min e feita a leitura em
espectrofotmetro a 520 nm.
Anlise estatstica
Os resultados foram analisados atravs do programa SISVAR Sistema de Anlise de
Varincia (FERREIRA, 2000), realizando-se a anlise de varincia e a comparao de mdias pelo
teste de Scott-Knott ao nvel de 5 % de probabilidade.
A influncia do mtodo de fermentao na produo de tanase foi investigada usando a
fermentao submersa, slida e pastosa. A atividade da tanase foi verificada em todos os
protocolos de fermentao. O maior rendimento da enzima foi registrada na fermentao
submersa, 124,83 U/mL, seguida pela pastosa e slida, 65,82 e 15,86, respectivamente (Tabela
1). Isto representou uma produo e produtividade 7,87 vezes maior na fermentao submersa
quando comparada slida. Essas disparidades podem estar relacionadas com a aerao durante
o processo fermentativo e a forma do inculo.
Tabela 1 Produo de tanase por diferentes protocolos de fermentao.
Micro-organismos
Aspergillus tamarii
Mtodo de Fermentao
Submersa
Slida
Pastosa
Atividade enzimtica (U/mL)

124,83 0,63 a
15,86 0,00 c
65,82 0,18 b
Hamdy e Fawzy (2012) encontraram a atividade da tanase produzida por A. niger na

fermentao em estado slido (9,14 U/mL), pastosa (6,49 U/mL) e submersa (9,02 U/mL). A
maior produtividade da tanase foi obtida em fermentao slida que na submersa em pesquisa
desenvolvida por Renovato et al. (2011). J no trabalho reportado por Srivastava e Kar (2009), o
qual corrobora com os resultados obtidos neste estudo, afirmam que a tanase extracelular de A.
niger foi otimamente produzida em culturas submersas (28,72 U/mL) utilizando o mesmo
resduo. Ademais, as atividades obtidas foram melhores quando comparados aos trabalhos
encontrados na literatura podendo a enzima ser aplicada em processos biotecnolgicos.
CONCLUSO
Este o primeiro trabalho que reporta a produo de tanase por Aspergillus tamarii,
adotando resduo de rom, em trs protocolos de fermentao. A fermentao submersa foi a
que melhor proporcionou a produo enzimtica. Isso pode ter sido devido forma de inculo e
a aerao. No entanto, novos estudos so necessrios para investigar a produo de tanase e sua
aplicao em processos industriais.
AGRADECIMENTOS
Ao IFPE, Campus Barreiros, e CNPq pelas bolsas concedidas.
REFERNCIAS
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intracellular tannase from newly isolated Aspergillus aculeatus DBF 9. Journal of Basic
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Niger ITCC 6514.07 On Pomegranate Rind. Brazilian Journal of Microbiology, v. 40, p. 782-789,
2009.
BIODEGRADAO DE LEO LUBRIFICANTE POR FUNGOS AMAZNICOS EM FERMENTAO

SEMISSLIDA
2
J. P. F. Tavares (IC); I. F. C. Melo (IC) ; J. B. B. Nogueira. Jnior (TC) ; T. F. Tavares (TC) V. L. S. Marinho (PQC) ;
6
I. P. Romano (PO)
1234
4
Instituto Federal do Amazonas (IFAM) - Campus Parintins -, Instituto Federal do Amazonas (IFAM)5
Departamento de Pesquisa- Campus- Parintins e-mail: vera_lucia@ifan.edu.br-, Instituto Federal do Amazonas
(IFAM) - Campus Parintins e-mail: israel.romano@yahoo.com.br
(IC) Aluno de Iniciao Cientfica
(TC) Tcnico em Meio Ambiente e Agropecuria
(PQC) Pesquisador Co-orientador
(PO) Pesquisador Orientador
RESUMO
Os problemas ambientais causados pela
insero do leo no meio ambiente precisam ser
encarados de forma que sejam encontradas alternativas
que visem a mitigao dos impactos que causam srios
danos ao meio ambiente e sade pblica. Devido a
forma de armazenamento e a destinao inadequada do
leo lubrificante nas oficinas que realizam as trocas em
Parintins-AM, surgiu a proposta em trabalhar os
ambientes contaminados por esse resduo atravs da
biorremediao, usando o potencial dos fungos
amaznicos. Utilizou-se nos testes, fungos de podrido
branca, em meio constitudo de Agar e gua destilada,
contendo diferentes concentraes do substrato. Os
fragmentos fngico da cultura pura ficaram incubados
em BOD a 30 C por um perodo de 30 dias. Aps cinco

dias, estimou-se o crescimento micelial dos
microrganismos nas placas. A produo da biomassa foi
estimada no final desse perodo e, em seguida realizou a
filtragem para obteno do caldo que foi utilizado no
teste de toxicidade. O teste se d frente s razes de
cebola (Allium cepa) utilizando-se o caldo de cultura
filtrado aps tratamento fngico como substrato para
seu desenvolvimento. Tanto o crescimento da cebola
quanto o crescimento micelial foram medidos utilizando
rgua milimtrica.
PALAVRAS-CHAVE: Fungos Amaznicos, Biorremediao, leos lubrificantes.
BIODEGRADATION OF LUBRICATING OIL BY AMAZONIAN FUNGI IN SEMISOLID

FERMENTATIONABSTRACT
The environmental problems caused by oil
entering the environment must be faced so that
alternatives aimed at mitigating the impacts that cause
serious damage to the environment and public health
are found. Because the form of improper storage and
disposal of lubricating oil in the workshops that carry
out trade-in Parintins AM, the proposed work in
environments contaminated with this waste through
bioremediation, using the potential of Amazonian fungi
arose. It was used in the tests, white rot fungi in a
medium consisting of agar and distilled water containing
different concentrations of the substrate. The pure
culture of fungal fragments were incubated in a

chamber at 30 C for a period of 30 days. After five
days, we estimated the mycelial growth of
microorganisms on the plates. The production of
biomass was estimated at the end of this period, then
the filtering performed to obtain the juice that was used
in toxicity testing. The test takes place across the roots
of onion (Allium cepa) using the culture broth filtrate
after antifungal treatment as substrate for their
development. Both the growth of onion as mycelial
growth were measured using a millimetric ruler.
KEY-WORDS: Amazon fungi; Bioremediation, Lubricating oils.
BIODEGRADAO DE LEO LUBRIFICANTE POR FUNGOS AMAZNICOS EM FERMENTAO

SEMISSLIDA
1. INTRODUO
Os problemas ambientais causados pela insero do leo no meio ambiente precisam ser
encarados de forma que sejam encontradas alternativas que visam mitigao dos impactos que
causam srios danos ao meio ambiente e a sade pblica. Como problemtica ambiental utilizouse o leo lubrificante produzido nas oficinas automotivas do municpio de Parintins, regio do
Baixo Amazonas, pois no dispem de uma destinao final adequada e dessa forma em
determinados casos so despejados no ambiente, causando srios problemas aos ecossistemas
aquticos e terrestres, uma vez que a insero inadequada destes hidrocarbonetos levada pelas
guas da chuva, contaminando os lagos, rios e principalmente o solo, tornando os mesmos um
fator de risco, pois a poluio do solo pode alcanar e poluir o lenol fretico. Atualmente, a
contaminao provocada por derivados de petrleo, diante de acidentes ou despejo inadequado,
causa grandes prejuzos ao meio ambiente. Os hidrocarbonetos sofrem uma absoro nas
partculas do material em suspenso, o que provoca forte tendncia de acumularem-se nos
sedimentos (EHRLIGH et al., 1982), prejudicando a biodiversidade presente no ecossistema o que
pode ocasionar um grande desequilbrio ambiental.
A destinao do resduo oleoso produzido pelos estabelecimentos automotivos onde se
realiza a troca de leo deixada livremente exposta no meio ambiente. Entretanto, as novas
legislaes de proteo ao meio ambiente trazem uma preocupao ambiental voltado
principalmente para o descarte final destes leos lubrificantes. O Conselho Nacional de Meio
Ambiente (CONAMA) estabeleceu atravs de sua Resoluo 09/93 que o lubrificante usado ou
contaminado deve obrigatoriamente ser recolhido e ter destinao adequada, de forma a no
afetar negativamente o meio ambiente, e probem quaisquer descartes em solos, guas
subterrneas, no mar e em sistemas de esgoto ou evacuao de guas residuais. Alm disso,
probe a queima e a incinerao sem permisso governamental, pois isto representaria a
destruio de fraes nobres de petrleo que se encontram no lubrificante usado.
A Resoluo CONAMA 09/93 foi revisada por um grupo de trabalho e sofreu profundas
alteraes, tornando-se a vigente Resoluo CONAMA 362/2005, que torna ainda mais severa
punio pelo descumprimento das normas relativas ao gerenciamento, coleta, transporte e
rerrefino dos leos usados, estabelecendo as diretrizes e artigos que destacam os processos na
destinao final adequada a esse resduo oleoso, evitando possveis danos ao meio ambiente
diante a disposio inadequada, no entanto, os vazamentos ficam presentes no local sem a
preocupao em descontaminar o solo. Assim surge a necessidade de buscar novas tcnicas,
como o uso da Biorremediao, para degradao de leos lubrificantes utilizando o potencial
fngico da biodiversidade presente na regio Amaznica. Neste caso, para solucionar essa
problemtica ambiental surge proposta em trabalhar os ambientes contaminados por esse
resduo atravs da biorremediao, usando o potencial dos fungos amaznicos em particular os
do Filo Basidiomicetos causadores da podrido branca.
2. DESENVOLVIMENTO
2.1 FUNGOS BASIDIOMICETOS E SUAS APLICAES NO PROCESSO DE BIORREMEDIAO
Os fungos, em particular os Basidiomicetes so conhecidos, seja pelas suas propriedades
nutricionais e medicinais, seja pela sua toxidez. um grupo de grande importncia econmica
por abranger fungos parasitas, fungos degradadores da madeira e os fungos comestveis que
sustentam a atividade industrial (LACAZ et al., 1970). Os Basidiomicetes so consideradas todas
as espcies de fungos que produzem corpos frutferos facilmente visveis a olho nu. O filamento
dos Basidiomicetes, denominado de hifa tubular e a massa de hifas recebe a denominao de
miclio (PAULA et al., 2007).
Os Basidiomicetos causadores de podrido branca parecem ser os melhores
microrganismos que possuem a capacidade de degradar lignina, celulose e hemicelulose em
molculas menores at CO 2 e gua (MATHEUS & OKINO, 1998). Eles atuam no processo de
degradao, uma vez que apresenta um complexo enzimtico ligninoltico inespecfico
responsvel pela degradao de polmeros aromticos recalcitrantes e com potencial para uso
em vrios processos industriais e biotecnolgicos (ERIKSSON et al., 1990). Baseado em estudos j
realizados que utilizaram fungos deste grupo, foi possvel estudar e compreender a participao
nos processos que buscam a degradao de compostos recalcitrantes.
A Biorremediao o uso de organismos vivos em tratamento de ambiente contaminado
para reduzir a concentrao dos poluentes a nveis no detectveis, no txicos ou aceitveis,
isto , dentro dos limites estabelecidos pelas agncias de controle ambiental. Atualmente,
qualquer transformao ou remoo de contaminantes do ambiente por organismos
considerada como biorremediao (LITCHFIELD, 2005). Diversos estudos presentes demonstram
a participao da biorremediao como alternativa na elaborao de tcnicas que podem
contribuir com o meio ambiente utilizando principalmente microrganismos decompositores tais
como as bactrias e os fungos. A biodegradao um processo natural pelo quais compostos
qumicos orgnicos presentes no ambiente so convertidos a componentes menores,
mineralizados e redistribudos atravs dos ciclos do carbono, nitrognio e enxofre (CHANDRA;
RUSTGI, 1998; MADIGAN et al., 2000).
A regio amaznica diante sua biodiversidade, possui uma magnitude fngica ainda
inexplorada, onde apenas 5% desses microrganismos esto identificados. Surge a necessidade de
realizar estudos para a descoberta de muitos fungos ainda desconhecidos que, possivelmente,
podem surpreender diante alguma utilizao industrial, farmacutica e biotecnolgica.
3. METODOLOGIA
3.1 COLETA DO LEO
As amostras residuais de leo lubrificante foram obtidas em estabelecimentos comerciais
de abastecimento de veculos automotores compreendendo resduo da troca de leo (leo
queimado) dos automveis.
3.2 COLETAS DOS BASIDIOMICETOS

Os carpforos de fungos Basidiomycetes foram coletados no Bosque do IFAM Campus
Parintins e nas proximidades da comunidade do Aninga, regio Peri urbana do municpio de
Parintins, baixo Amazonas.
3.3 ASSEPSIA E ISOLAMENTO
O isolamento dos fungos foi realizado conforme a tcnica de isolamento por
fragmentao (ARAJO et al., 2001). As amostras dos fungos foram retiradas com os fragmentos
do basidiocarpo e submetidas ao processo de assepsia mergulhando em solues de lcool 70%
com a finalidade de quebrar a tenso superficial, o hipoclorito de sdio a 20 % para eliminar
microrganismos agregados e gua destilada para retirar o excesso das solues e evitar oxidao,
por um perodo de 1-2 minutos em cada soluo.
3.4 REPICAGEM DOS FUNGOS
O processo de repicagem dos fungos selecionados ocorreu atravs do melhor
crescimento linear e dos testes prvios realizados para deteco de excreo de enzimas, diante
o teste de Bavendamm (DAVIDSON, et al., 1938). Para isso, discos de miclio com 5 mm de
dimetro foram retirados das bordas das colnias aps cinco dias de crescimento e transferidos
para Placas de Petri contendo meio BDA e cido tnico (5gL-1). Para o preparo do meio utilizou-se
500 mL do meio de cultura BDA com 50 mL a menos de gua destilada, que foi esterilizada
separadamente em autoclave. Aps esterilizao e resfriamento acrescentou-se na gua em
condies asspticas 2,5g de cido tnico e agitou-se at a formao de mistura homognea.
Posteriormente adicionou-se esta soluo ao meio de cultura BDA levemente morno ou
aquecido. Os fragmentos fngicos previamente miceliados foram inoculados no centro da placa e
incubados em estufa BOD a 30C. Aps 48 horas de incubao, realizou-se a avaliao visual
quanto a formao de um halo marrom. Os fungos que apresentaram reao positiva em menor
tempo foram utilizados para teste no meio BDA, procedimento este que necessita ser executado
em ambiente estril (interior da cmara), para obter culturas puras. As Placas de Petri foram
identificadas e lacradas com fita plstica (Parafilm M) e as culturas armazenadas em estufa
BOD onde posteriormente foram utilizadas nos teste.
3.5 MEIO DE CULTURA E INOCULO
O potencial das cepas para degradar derivados do petrleo foi avaliado cultivando-as em
meio contendo gar e leo queimado como nica fonte de carbono e energia para o
desenvolvimento do microrganismo. A fermentao ocorreu em Placa de Petri, previamente
esterilizada em autoclave a 1 atm por 20 minutos, onde foi vertido o meio constitudo de Agar e
gua nas diferentes concentraes de leo queimado (1%, 3% e 5%).
3.6 DETERMINAO DO CRESCIMENTO MICELIAL E BIOMASSA

A avaliao do crescimento do fungo foi realizada a cada 24 horas, medindo-se o avano
radial da fronteira micelial com rgua milimtrica em um perodo de 30 dias. A produo de
biomassa se desenvolveu utilizando alquotas de 50 mL, que foram retiradas por filtragem a
vcuo do miclio, utilizando papel filtro previamente pesado e gua destilada. O material filtrado
foi usado para o teste de toxicidade. Aps a filtragem, o papel filtro foi levado estufa eltrica
em uma temperatura +50C e a biomassa seca estimada em porcentagem atravs da seguinte
formulao: B(y) = [Pf-Pi) / Pi] x 100.
3.7 TESTE DE TOXICIDADE
Realizou-se o teste de toxicidade descrito por (IANAZAK et al., 2001) a partir do caldo
enzimtico filtrado, os incubados mostraram um determinado resultado no crescimento da raiz
para cada fungo utilizado. Foram utilizados bulbos de Allium cepa (cebola) adquiridos
comercialmente, sendo que em todos os bioensaios, foram utilizadas cebolas da mesma
procedncia. Os bulbos foram inicialmente preparados e colocados em gua destilada durante 24
horas a temperatura ambiente para estimular o desenvolvimento do meristema radicular. Aps
este perodo, os bulbos foram colocados nas solues-teste por um perodo de cinco dias (RANK
et al., 1997).
4. RESULTADOS E DISCUSSO
4.1 SELEO DOS FUNGOS
Dos oito fungos testados trs apresentaram potencial positivo para produzir enzimas
oxidativas, atravs do aparecimento do halo marrom ao redor da colnia no Teste de Bevedam.
Os fungos FBA-04, FBA-01 e FBI-02 que foram selecionados para os testes esto na tabela a
seguir.
Tabela 1: Fungos produtores de enzimas oxidativas em perodos de 24, 48 e 72 horas.
N
Fungos
24h
48h
72h
1
FBA-01
FBA-02
FBA-03
FBA-04
FBI-01
FBI-02
FBI-03
FBI-04
Fonte Laboratrio Multidisciplinar de CinciasIFAM-Campus Parintins.
A escolha desses trs fungos se deu a partir de seu desempenho em uma linha de tempo
de 72h. Nas primeiras 24h (um dia) todos os fungos selecionados no tiveram desempenho
satisfatrio, com isso havendo a necessidade de esperar por mais algum tempo. Ao final de 48h
pde-se observar o surgimento razovel do halo marrom nos fungos FBA-01 e FBA-04. Ao final de
72h foi observado que trs fungos conseguiram desenvolver o halo marrom, sendo eles o FBA-01,
FBA-04 e FBI-02, sendo os mesmos utilizados nos testes.
O fungo FBA-04, encontrado nas proximidades da comunidade do Aninga, se destacou no
crescimento micelial diante a visualizao do cultivo nas Placas de Petri contendo as
concentraes de leo lubrificante (1%, 3% e 5%). O crescimento micelial na concentrao de 1%
obteve como resultados para o fungo FBA-04 um crescimento de 5,3 cm, seguido do fungo FBA01 com 5,2 cm e posteriormente o FBI-02 com 4,5 cm, sendo satisfatrio quando comparados
com o controle realizado em meio BDA. O substrato transformado no produto de interesse para
o organismo (LEHNINGER et al., 2002).
Tabela 02: Crescimento micelial na concentrao 1% durante 5-30 dias.
Fungos / Situao
FBA 01
FBA 04
FBI 02
Controle
4,6 cm
4,4 cm
4,8 cm
Cresc. Micelial
5,2 cm
5,3 cm
4,5cm
Assim o crescimento micelial ficou mensurado, na concentrao de 1% foi possvel

observar que tiveram resultados significativos, onde os fungos foram capazes de se adaptarem
no meio contendo a concentrao, obtendo um bom desenvolvimento nas placas. Deste modo
fica evidente a participao de adaptao e excreo enzimtica dos fungos na bioconverso dos
componentes presentes no resduo oleoso, onde a produo e a atividade enzimtica no
processo de degradao por fungos de decomposio branca so dependentes de fatores
nutricionais e o de maior relevncia a relao carbono/nitrognio (VANCE e CHAPIN, 2001). O
controle serviu como parmetro para analisar o crescimento micelial dos fungos, onde se
realizou em meio BDA (batata, dextrose e gar), pois o mesmo possui condies essenciais para o
cultivo dos microrganismos. Quando comparado com a concentrao (1%) conclui-se que obteve
um resultado inferior para FBA-04 e FBA-01 e superior para o fungo FBI-02.
Na produo de biomassa, os resultados para cada fungo na concentrao de 1% foram os
seguintes: FBA-04 com 41,11%, FBA-01 em 26,53% e FBI-02 com 21,30%. Comparados ao
controle os resultados foram positivos para dois fungos: o FBA-04 (34.58%) e FBA-01 (16,60%) e
para o fungo FBI-02 (22,84%) o resultado ficou abaixo do institudo.
Tabela 03: Produo de Biomassa na concentrao 1% durante 30 dias.

Fungos / Situao
FBA 01
FBA 04
FBI 02
Controle
16,60 %
34,58%
22,84%
Produo de Biomassa
26,53%
41,11 %
21,3%
A produo de biomassa nos mostrou uma dimenso quantitativa diante da produo do

miclio pelos fungos. Em muitas placas observamos que mesmo com o crescimento e
preenchimento micelial as variaes eram visualizadas na espessura do miclio formado. No
entanto, para a concentrao de 1% a biomassa produzida na fermentao semisslida esteve de
acordo com o crescimento micelial, onde os fungos que mais se destacaram foram os mesmos
que produziram biomassas, mostrando que os microrganismos foram hbeis nas condies
estabelecidas nessa concentrao. Portanto na concentrao de 1% os fungos demonstraram sua
capacidade em biodegradar o resduo contido no meio. Assim, pode-se sugerir que a
biorremediao seja considerada como uma nova tecnologia para tratar ambientes
contaminados utilizando-se agentes biolgicos capazes de modificar ou decompor poluentes
alvos (MARIANO, 2006).
Tabela 04: Produo de Biomassa na concentrao 3% em meio semisslido aps 30 dias
encubados.
Fungos / Situao
FBA 01
FBA 04
FBI 02
CONTROLE
4,6 cm
4,4 cm
4,8 cm
CRESC. MICELIAL
4,5 cm
4,8 cm
4,3 cm
Tabela 05: Crescimento micelial na concentrao 3% em meio semisslido durante 5-30 dias.
Fungos / Situao
Controle
Produo de Biomassa
FBA 01
16,6 %
32,55%
FBA 04
34,58%
70,77 %
FBI 02
22,84%
67,97%
O crescimento do miclio e da biomassa na concentrao de 3% para o fungo FBA-04 foi

positivo obtendo um desenvolvimento de 4,8cm (70,77%), para o fungo FBA-01 o crescimento no
miclio foi considerado bom 4,5cm, mesmo tendo ficado abaixo do controle, pois, ele se
desenvolveu de forma em que a placa ficasse parcialmente preenchida, j na produo de
biomassa (32,55%) o desenvolvimento foi considerado timo em relao ao controle. Para o
fungo FBI-02 seu crescimento teve um desenvolvimento razovel para o miclio com um
acrscimo de 4,3cm tendo um crescimento parcial na placa e um desenvolvimento excelente na

produo de biomassa (67,97%).
Na concentrao de 5% no houve crescimento significativo do miclio, os fungos
estudados apresentaram apenas a produo micelial aleatria, desta maneira optou-se por no
determinar a produo de biomassa. Sendo assim, nveis ainda indesejveis do contaminante
podem ser insuficientes para induzir a produo ou atividade das enzimas, diminuindo o
processo de biodegradao (MATHEUS 1998, MORENO et al,. 2004).
4.2 TESTE DE TOXICIDADE
Para que fosse observada a ao dos microrganismos no processo de degradao de leo
lubrificante em meio semisslido, realizou-se o teste de toxicidade descrito por Ianazak et al.
(2001) em que a partir do caldo enzimtico filtrado os incubados mostraram um melhor
resultado no crescimento da raiz para o fungo FBA-01 em quase todas as concentraes testadas
(1%, 3% e 5%), sendo que este fungo foi o segundo a se destacar no crescimento micelial e
produo de biomassa.
Tabela 06: Crescimento da raiz da cebola no Teste de Toxicidade durante 5 dias, em todas as
trs concentraes.
Fungos / Situao
FBA 01
FBA 04
FBI 02
Controle
2,5 cm
2,8 cm
2,0 cm
1%
2,9 cm
2,2 cm
2,0 cm
3%
2,1 cm
1,8 cm
2,1 cm
5%
1,5 cm
1,5 cm
0,8 cm
Na concentrao de 1% o fungo FBA-01 obteve 2,9 cm de crescimento da raiz, seguido do

fungo FBA-04 com 2,2 cm e posteriormente o fungo FBI-02 com 2,0 cm. Para a concentrao de
3% o fungo FBA-01 teve um crescimento de 2,1 cm e o fungo FBA-04 de 1,8 cm e o FBI-02 com
2,1 cm. Na concentrao de 5% o FBA-01 apresentou um crescimento de 1,5 cm, o fungo FBA-04
com 1,5 cm e o fungo FBI-02 com 0,8 cm. Nos controles realizados os fungos obtiveram os
seguintes crescimentos: FBA-01 com 2,5 cm, o fungo com FBA-04 2,8 cm e o FBI-02 com 2,0 cm.
Comumente avalia-se a inibio da germinao e tambm a elongao da raiz, cujo
crescimento inibido por pequenas concentraes do composto txico, tornando-se um
indicador mais sensvel dos efeitos biolgicos (KAMIDA, 2005). Em virtude dessa caracterstica
conclui-se que muito relativo, pois nas concentraes de 1% e 3% as razes da cebola
cresceram, enquanto na concentrao de 5% no houve desenvolvimento satisfatrio. Logo se
justifica que nessa concentrao os fungos no conseguiram quebrar totalmente os compostos
recalcitrantes que existiam no leo, com isso a concentrao txica inibiu o crescimento da
cebola.
5. CONSIDERAES FINAIS
Os Basidiomicetos encontrados na regio Peri urbana do municpio de Parintins e
utilizados no presente trabalho obtiveram um efeito positivo nos testes realizados, tendo
capacidade de degradar o leo lubrificante presente no meio de cultura nas concentraes
propostas.
Em todas as concentraes o desenvolvimento dos fungos perante o meio de cultura em
fermentao semisslida utilizado teve um crescimento/desenvolvimento satisfatrio, assim
sabemos que alm de ser um bom excretor de enzimas, esses fungos utilizados tm capacidade e
potencial de se adaptarem e absorverem compostos essncias para seu desenvolvimento, pois
quebraram as molculas nocivas ao meio ambiente transformando-as em substratos nutritivos
para seu desenvolvimento. A produo de biomassa foi tima, assim como o crescimento micelial
dos fungos e posteriormente o teste de toxicidade que apresentou um crescimento satisfatrio
para as concentraes analisadas.
Portanto fica evidente a participao de enzimas na atuao dos fungos para a
degradao do leo lubrificante, onde as enzimas produzidas ainda no identificadas neste
trabalho so capazes de agir como agente apropriado para quebrar as molculas de difcil
degradao que esto presente no leo lubrificante.
6. REFERNCIAS
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