QU ES BIOLOGA

MOLECULAR Y
BIOTECNOLOGA
Julio A. Carrasco Vallejo
Julio 2014

Definiciones
Biologa Molecular:
Estudio de los flujos de informacin gentica en una clula

Biotecnologa:
Uso de sistemas u organismos vivos para generar un producto til

Historia
Biologa Molecular
1866: Teora de herencia Mendeliana
1940: Una fraccin cida purificada es

capaz de transformar pneumococo

1944: Se demuestra que en el DNA

reside la informacin gentica

1953: Doble hlice de DNA

Historia Biologa Molecular

1960-1965:
El producto de ciertos genes regulan la expresin de otros
Existencia RNA mensajero
Codigo gentico (codones que cofican para aminocidos)

3 nucletidos por 1 aminocido

1970s:
Secuenciacin DNA

DNA recombinante, primera clonacin de DNA

1980s:
Vector de clonacin pBR322 en Mxico
PCR (polymerase chain reaction)

Historia Biotecnologa
4000 AC Mediterrneo: Fermentacin para

hacer cerveza
1798: Jenner descubre la primera vacuna para

viruela
1861: Pasteur descubre que la fermentacin se

debe a bacterias
1866: Teora de herencia Mendeliana
1928: Se descubre la penicilina derivada de un

cultivo de un hongo

Historia Biotecnologa
1942: Fermentacin industrial para producir penicilina
1975: Produccin de anticuerpos monoclonales
1979: Produccin de Insulina humana en bacterias
1980: Produccin de Interfern
1990s: Aprobacin de medicamentos biotecnolgicos para

uso humano

DNA, RNA Y PROTENAS

Dr. Julio A. Carrasco Vallejo

Julio 2014

Conceptos Fundamentales

DNA:

Acido Desoxiribonuclico
4 nucletidos: Adenina (A),
Timina (T), Guanina (G) y
Citosina (C)
Nucletidos unidos por enlaces
covalentes entre azcar y
fosfato de cada nucletido,
forman UNA hebra de DNA

Conceptos Fundamentales

DNA:

Dos cadenas apareadas por

puentes de hidrgeno entre
A/T, y G/C= Estructura
CLASICA del DNA
Las dos cadenas se aparean
en direcciones opuestas o
en antiparalelo

Conceptos Fundamentales

RNA

Acido Ribonuclico
Sintetizado a partir de DNA a
travs de una Polimerasa de RNA
4 ribonucletidos: Adenina (A),
Uracilo (U), Guanina (G) y
Citosina (C)
Nucletidos unidos por enlaces
covalentes entre el azcar y
fosfato de cada nucletido
forman una hebra
Molcula tpicamente de una
sola cadena

Conceptos Fundamentales

RNA

Funciones biolgicas
activas:

RNA mensajero: Molde

para sntesis de protenas
RNA transferencia:
Acarreador de
aminocidos para sntesis
de protenas
RNAs con actividad
cataltica
RNA reguladores: RNA de
interferencia o snRNAs

Conceptos Fundamentales

Protenas:

Cadenas largas de aminocidos (al menos 20 residuos)

Generadas a partir de RNAm
Funciones biolgicas:

Enzimas
Toxinas
Transporte

Modificaciones post-traduccionales:

Metilacin
Fosforilacin
Glicosilacin

Estructura de las protenas

Primaria
Cadena de
aminocidos

Secundaria
Hlices Alfa y
Beta Plegadas

Terciaria
Plegamiento
Monmero

Cuaternaria
Dmeros,
Trmeros,
Tetrmeros

Modificaciones postraduccionales

Posible impacto en la actividad biolgica

Glicosilacin
Adicin de azcares (uno o varios)

Metilacin
Adicin de grupos CH3

Fosforilacin
Adicin de grupos PO4

QU ES EXPRESIN GENTICA?

Julio A. Carrasco Vallejo

Julio 2014

Expresin Gentica

Qu es y cmo se expresa un gene?

Cmo es la estructura general de un gene?

Del DNA a la Protena

Qu es un gene?

GENOMA: Material gentico de un organismo

Gene:

Contiene la informacin de un organismo y es capaz pasar sus

rasgos genticos a la siguiente generacin
Regin del genoma que corresponde a una unidad hereditaria
asociada a regiones reguladoras
Regin transcribible que codifica para un producto difusible ya sea
una protena o un RNA

Cmo se expresa un gene?

Transcripcin

DNA

Traduccin

RNA

Protena

Estructura General de un Gene

Expresin Gentica

Del DNA a la Protena

DNA
Promotor

Gene

Terminador

Transcripcin

RNAm

Expresin Gentica
RNAm
Traduccin

Modificaciones
Postraduccionales

Protena

Replicacin de DNA

Replicacin es el proceso para generar dos copias idnticas a partir

de una sola molcula de DNA

Proceso:
DNA polimerasa se localiza en un sitio definido llamado origen
de replicacin
DNA se desnaturaliza (se abre la doble hlice)
Una molcula pequea de RNA llamada primer se une a la
cadena a replicar.
La DNA polimerasa inicia la replicacin a partir del primer y
avanza aadiendo nucletidos complementarios

Transcripcin

Primer paso en la expresin gentica donde un segmento de DNA es

transcrito a RNA

Pasos
RNA polimerasa se localiza en la regin promotora del gene
DNA se desnaturaliza (se abre la doble hlice)
RNA polimerasa avanza sobre el DNA generando una cadena de RNA
RNA polimerasa termina la transcripcin en regiones terminadoras
RNA es procesado para adquirir su funcin biolgica (RNA o protena)

Traduccin

Proceso donde a partir de una molcula de RNA se sintetiza una

protena mediante un ribosoma

Pasos
RNA se une al ribosoma
El ribosoma lee la molcula de RNA
Un aminocido es adicionado cada vez que se leen 3 nucletidos
del RNA 1 aa = 3 nucletidos (codn)
El primer aminocido adicionado siempre es Metionina (Start
codon)
Una vez terminada la lectura el ribosoma se separa (Stop codon)

CONCEPTOS GENERALES DE
INGENIERA GENTICA

Generalidades

Organismo Genticamente Modificado

Cualquier organismo cuyo material gentico ha sido alterado:
cambios en un gen, gen de ms, gen de menos, etc

Organismo transgnico
Aquel que ha recibido material gentico de otra especie

Generalidades

Clonacin:

Introducir un fragmento/inserto de DNA en un vector de expresin

Construccin: vector con inserto

Enzimas de restriccin
Enzimas que digieren DNA de doble cadena en una secuencia especfica

Nucleasa: cualquier enzima que digiere cidos nucleicos (DNA y RNA)

DNAsa: enzima que solo digiere DNA
RNAsa: enzima que solo digiere RNA

PROCESO DE CLONACIN

Diseo del gene y Vector de Expresin

Protena a expresar

Estructura del marco de lectura del gene

Start

Stop

Gene

Solo secuencia codificante

Codon de Inicio/Start (ATG) y Paro/Stop(TAA,TAG TGA)
3 bases = 1 Codn = 1 aminocido

Diseo del gene y Vector de Expresin

Sistema de expresin

Vector: sistema de transporte del gene a expresar (plsmido o

virus)

Origen de replicacin
Sitios de clonacin
Sitios de insercin al genoma del huesped (si aplica)
Promotor adecuado
Terminador
Insulators (si aplica)

Diseo del gene y Vector de Expresin

Sistema de expresin
PROMOTOR
adecuado

Espacio para
insertar gen de
inters

SELECCIN ejemplo.
Resistencia a
antibiticos

Diseo del gene y Vector de Expresin

Seleccin
Marcadores de resistencia a un compuesto o antibitico
Sitios de insercin
Secuencia especifica para integracin en el genoma
Integracin aleatoria
Expresin Eficiente
Promotor
Insulators

Introduccin de DNA a una clula

Introduccin de DNA exgeno a una clula

Transformacin: introduccin de DNA en bacterias
Transfeccin: introduccin de DNA en plantas y animales
Transduccin introduccin de DNA mediante vectores virales

Electroporacin

Gene gun (biobalstica)

Por choque elctrico, apertura de poros en membrana celular y se introduce

DNA
Partculas de oro o tungsteno, recubiertas de DNA y disparadas a embriones
o clulas jvenes

Transformacin con bacterias

Algunas bacterias pueden introducir DNA a plantas en proceso de
infeccin

CONCEPTOS ADICIONALES

Induccin de cambios genticos

Mutagnesis: tcnicas para para inducir cambios genticos

Al azar
Luz UV o qumicos mutagnicos
No es posible predecir el tipo de mutacin

Dirigida
A travs de oligonucletidos se disea la mutante deseada
y se genera un cambio en un gene
Diseo de genes sintticos in vitro
Usualmente cambios de aminocidos, no genes completos

Insercin de genes y Knock out

Plsmidos

Transforma/Transfecta un plsmido incapaz de replicarse

Selecciona este plsmido mediante un marcador (resistencia a
un compuesto)
Organismos seleccionados contienen el gene de inters en el
genoma

Transposones

Elementos mviles de DNA

Transforma/transfecta el elemento transponible
Se induce la transposicin o movimiento en el genoma
Se selecciona el cambio deseado (insercin o eliminacin de un
gene)

GRACIAS !!!