PRCTICA N 3: LA ACCIN DE LAS ENZIMAS EN

DETERGENTES PARA LAVAR ROPA

CURSO: BIOQUMICA 1 PARA ESTUDIANTES DE FARMACIA
UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS CHICLAYO
I.

GENERALIDADES

Las enzimas son molculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan reacciones qumicas,
siempre que sean termodinmicamente posibles: una enzima hace que una reaccin qumica que
es energticamente posible , pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente
favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas
reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se
convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las clulas
necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por
enzimas se las denomina reacciones enzimticas.
Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad crece
solo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas en una clula determina el
tipo de metabolismo que tendr cada clula. A su vez, esta sntesis depende de la regulacin de la
expresin gnica.
Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de activacin (G)
de una reaccin, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reaccin. Las enzimas no
alteran el balance energtico de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el
equilibrio de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una
reaccin que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el
equilibrio mucho ms deprisa que la correspondiente reaccin no catalizada.
Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que
catalizan, ni alteran su equilibrio qumico. Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores
por ser ms especficas. Las enzimas catalizan alrededor de 4 000 reacciones bioqumicas
distintas.4 No todos los catalizadores bioqumicos son protenas, pues algunas molculas de ARN
son capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la que reside la
actividad peptidil transferasa). Tambin cabe nombrar unas molculas sintticas denominadas
enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones qumicas como las enzimas clsicas.

La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras molculas. Los inhibidores enzimticos
son molculas que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas, mientras que los activadores

son molculas que incrementan dicha actividad. Asimismo, gran cantidad de enzimas requieren de
cofactores para su actividad. Muchas drogas o frmacos son molculas inhibidoras. Igualmente, la
actividad es afectada por la temperatura, el pH, la concentracin de la propia enzima y del
sustrato, y otros factores fsico-qumicos.
Algunas enzimas son usadas comercialmente, por ejemplo, en la sntesis de antibiticos y
productos domsticos de limpieza. Adems, son ampliamente utilizadas en diversos procesos
industriales, como son la fabricacin de alimentos, destincin de vaqueros o produccin de
biocombustibles.
Estructuras y mecanismos:
Las enzimas son generalmente protenas globulares que pueden presentar tamaos muy variables,
desde 62 aminocidos como en el caso del monmero de la 4-oxalocrotonato tautomerasa,16
hasta los 2 500 presentes en la sintasa de cidos grasos.
Las actividades de las enzimas vienen determinadas por su estructura tridimensional, la cual viene
a su vez determinada por la secuencia de aminocidos.18 Sin embargo, aunque la estructura
determina la funcin, predecir una nueva actividad enzimtica basndose nicamente en la
estructura de una protena es muy difcil, y un problema an no resuelto.
Casi todas las enzimas son mucho ms grandes que los sustratos sobre los que actan, y solo una
pequea parte de la enzima (alrededor de 3 a 4 aminocidos) est directamente involucrada en la
catlisis.20 La regin que contiene estos residuos encargados de catalizar la reaccin es
denominada centro activo. Las enzimas tambin pueden contener sitios con la capacidad de unir
cofactores, necesarios a veces en el proceso de catlisis, o de unir pequeas molculas, como los
sustratos o productos (directos o indirectos) de la reaccin catalizada. Estas uniones de la enzima
con sus propios sustratos o productos pueden incrementar o disminuir la actividad enzimtica,
dando lugar as a una regulacin por retroalimentacin positiva o negativa, segn el caso.
Al igual que las dems protenas, las enzimas se componen de una cadena lineal de aminocidos
que se pliegan durante el proceso de traduccin para dar lugar a una estructura terciaria
tridimensional de la enzima, susceptible de presentar actividad. Cada secuencia de aminocidos es
nica y por tanto da lugar a una estructura nica, con propiedades nicas. En ocasiones, protenas
individuales pueden unirse a otras protenas para formar complejos, en lo que se denomina
estructura cuaternaria de las protenas.
La mayora de las enzimas, al igual que el resto de las protenas, pueden ser desnaturalizadas si se
ven sometidas a agentes desnaturalizantes como el calor, los pHs extremos o ciertos compuestos
como el SDS. Estos agentes destruyen la estructura terciaria de las protenas de forma reversible o
irreversible, dependiendo de la enzima y de la condicin. Una consecuencia de la
desnaturalizacin es la prdida o merma de la funcin, de la capacidad enzimtica
Cofactores:

Algunas enzimas no precisan ningn componente adicional para mostrar una total actividad. Sin
embargo, otras enzimas requieren la unin de molculas no proteicas denominadas cofactores
para poder ejercer su actividad.46 Los cofactores pueden ser compuestos inorgnicos, como los
iones metlicos y los complejos ferrosulfurosos, o compuestos orgnicos, como la flavina o el
grupo hemo. Los cofactores orgnicos pueden ser a su vez grupos prostticos, que se unen
fuertemente a la enzima, o coenzimas, que son liberados del sitio activo de la enzima durante la
reaccin. Las coenzimas incluyen compuestos como el NADH, el NADPH y el adenosn trifosfato.
Estas molculas transfieren grupos funcionales entre enzimas.
Un ejemplo de una enzima que contiene un cofactor es la anhidrasa carbnica, en la cual el zinc
(cofactor) se mantiene unido al sitio activo, tal y como se muestra en la figura anterior (situada al
inicio de la seccin "Estructuras y mecanismos").48 Estas molculas suelen encontrarse unidas al
sitio activo y estn implicadas en la catlisis. Por ejemplo, la flavina y el grupo hemo suelen estar
implicados en reacciones redox.
Las enzimas que requieren un cofactor pero no lo tienen unido son denominadas apoenzimas o
apoprotenas. Una apoenzima junto con cofactor(es) es denominada holoenzima (que es la forma
activa). La mayora de los cofactores no se unen covalentemente a sus enzimas, pero s lo hacen
fuertemente. Sin embargo, los grupos prostticos pueden estar covalentemente unidos, como en
el caso de la tiamina pirofosfato en la enzima piruvato deshidrogenasa. El trmino "holoenzima"
tambin puede ser aplicado a aquellas enzimas que contienen mltiples subunidades, como en el
caso de la ADN polimerasa, donde la holoenzima es el complejo con todas las subunidades
necesarias para llevar a cabo la actividad enzimtica.
Coenzimas
Las coenzimas son pequeas molculas orgnicas que transportan grupos qumicos de una enzima
a otra.49 Algunos de estos compuestos, como la riboflavina, la tiamina y el cido flico son
vitaminas (las cuales no pueden ser sintetizados en cantidad suficiente por el cuerpo humano y
deben ser incorporados en la dieta). Los grupos qumicos intercambiados incluyen el ion hidruro
(H-) transportado por NAD o NADP+, el grupo fosfato transportado por el ATP, el grupo acetilo
transportado por la coenzima A, los grupos formil, metenil o metil transportados por el cido
flico y el grupo metil transportado por la S-Adenosil metionina.
Debido a que las coenzimas sufren una modificacin qumica como consecuencia de la actividad
enzimtica, es til considerar a las coenzimas como una clase especial de sustratos, o como
segundos sustratos, que son comunes a muchas enzimas diferentes. Por ejemplo, se conocen
alrededor de 700 enzimas que utilizan la coenzima NADH.
Las coenzimas suelen estar continuamente regenerndose y sus concentraciones suelen
mantenerse a unos niveles fijos en el interior de la clula: por ejemplo, el NADPH es regenerado a
travs de la ruta de las pentosas fosfato y la S-Adenosil metionina por medio de la metionina
adenosiltransferasa. Esta regeneracin continua significa que incluso pequeas cantidades de

coenzimas son utilizadas intensivamente. Por ejemplo, el cuerpo humano gasta su propio peso en
ATP cada da.

II.

REACTIVOS Y MATERIALES
- Cocina elctrica
- Vasos de precipitado de 50 ml y 100 ml
- Gradilla
- Pipetas de 5 ml y 1ml
- Pizeta
- Agua destilada
- 8 tubos de ensayo
- Detergente que contenga enzimas biodegradables.
- Detergente que no contenga enzimas biodegradables.
- Bolsa de gelatina. Deben de traer gelatina preparada.
- Gasa Mdica
- Algodn

III.

PROCEDIMIENTO

1) Preparar la gelatina: por cada 50 ml de agua, usar 18 g de gelatina.

2) Llenar 8 tubos o vasos de precipitado graduado con 10 ml de la solucin de gelatina cada uno
(tubo 1, tubo 2, t 3, y t 4 y 1 A, 2 A, 3 A, y 4A) y colocarlos en heladera hasta que solidifique.
3) Sacar los tubos de la heladera. La gelatina debe estar slida.
4) Marcar sobre el vidrio de cada tubo con el marcador la altura de la gelatina slida.
5) Preparar una jarra con la solucin de detergente (10ml de detergente en 90ml agua = 10%).
(Con y sin enzima)
6) En el tubo 1 agregar 30 gotas de la solucin enzimtica sobre la gelatina slida.
7) En el tubo 2 agregar 60 gotas de agua sobre la gelatina slida.
8) En el t 3 agregar 30 gotas de solucin de detergente sobre la gelatina slida
9) En el t 4 agregar 60 gotas de solucin de detergente sobre la gelatina slida.
8) Dejar reposar durante la noche y chequear ambos tubos a las 24 horas. Marcar la posicin de la
gelatina slida.
9) Chequear nuevamente a las 48 horas, y marcar la altura de la gelatina slida.

10) Hacer lo mismo con los tubos A, pero guardar en refrigeracin.

PREGUNTAS PARA EL ANLISIS DE LA EXPERIENCIA

-

Reacciones de los diferentes experimentos

Cul es el principal componente de la gelatina?
A partir de la respuesta anterior, indicar qu tipo de enzimas tendra el detergente.
Qu cambio se pudo registrar en la altura de la gelatina slida?
Se sabe que la materia no desaparece sino que se transforma. Cmo se explica la
variacin en la altura de la gelatina?
Qu podra suceder si al agregar el detergente se dejara la gelatina en la heladera?
Cul es el objetivo del tubo 1, 2, 3 Y 4?
Cul debera ser el sustrato si se buscara comprobar la accin de la enzima lipasa, o de la
enzima amilasa?
Qu sucedera si se colocara sobre la gelatina un detergente que contenga lipasas?
Cmo se podra saber qu tipo de enzimas contiene un detergente?
Porque las diferentes coloraciones en cada tubo de ensayo?
Explique las razones de las reacciones en cada tubo de ensayo?
Cules son los factores que aceleran las reacciones?
Procedimiento