CROMATOGRAFIA DE REPARTO

Tcnicas de separacin
Facilitador: Beatriz Adriana Rocha Gutirrez
Resumen elaborado por:
Karen Chvez, Joselyn Mndez, Vanelly Sosa, Pedro Velzquez

La cromatografa de reparto ha llegado a ser el tipo de cromatografa de lquidos

ms ampliamente utilizado. En el pasado, la mayora de las aplicaciones se ha
referido a compuestos polares no inicos de baja a moderada masa molecular <
3000. Sin embargo, recientemente se han desarrollado algunos mtodos que han
extendido las separaciones de reparto a los compuestos inicos.
La cromatografa de reparto se puede subdividir en cromatografa:
Lquido-lquido
Cromatografa con fases unidas qumicamente (enlazadas).
La diferencia entre estas tcnicas radica en la forma como se retiene la fase
estacionarla sobre las partculas soporte del relleno.
La cromatografa de reparto, al principio era del tipo Lquido-lquido; sin embargo,
en la actualidad los mtodos de fase enlazada son los que predominan debido a
las desventajas de los sistemas Lquido-lquido.
Cromatografa de reparto
Lquido lquido

Diferencias
La fase estacionaria
liquida se retiene sobre
la superficie del soporte
por adsorcin fsica.

Desventajas
Perdida
de
fase
estacionaria
por
disolucin en la fase
mvil, lo que hace
necesario un peridico
recubrimiento de las
partculas del soporte.
Con
fases
unidas La fase estacionaria se El problema de la
qumicamente
une qumicamente a la solubilidad de la fase
superficie del soporte.
estacionaria impide el
uso de los rellenos de
fase liquida en la elucin
con
gradiente.
La
discusin se centrar
exclusivamente en la
cromatografa de reparto
con
fases
unidas
qumicamente.
Tabla1: divisiones de la cromatografa de reparto, diferencias y desventajas
Columnas para cromatografa con fases unidas qumicamente
Los rellenos con fases unidas qumicamente se preparan con slice rgida o
composiciones constituidas bsicamente por slice. Estos solidos estn formados
por partculas mecnicamente resistentes, porosas y uniformes, con dimetros de
3, 5 o 10 nm.

Los recubrimientos de fase enlazada ms utilizados son los siloxanos, que se

forman por reaccin de la superficie hidrolizada con un organoclorosilano.
Rellenos de fase inversa y de fase normal.
En relacin con las polaridades relativas de las fases mvil y estacionaria, se
distinguen dos tipos de cromatografa de reparto.
Cromatografa
reparto
Fase normal

Fase
(reversa)

de Fase estacionaria
Fases
estacionarias
de
elevada polaridad
tales como el agua
o el trietilenglicol
colocadas
sobre
partculas de slice
o almina.

inversa La
fase
estacionaria es no
polar,
con
frecuencia se trata
de un hidrocarburo,
y la fase mvil es
relativamente polar
(como el agua, el
metanol
o
el
acetonitrilo).

Fase mvil
El
componente
menos polar se
eluye
primero,
debido
a
que
relativamente es el
ms soluble en la
fase mvil y un
aumento
de
la
polaridad de la fase
mvil provoca una
disminucin
del
tiempo de elucin.
Los componentes
ms
polares
aparecen primero,
y un aumento de la
polaridad de la fase
mvil aumenta el
tiempo de elucin.

Fase
enlazada
El
recubrimiento
contiene
grupos
funcionales
polares.

El
recubrimiento
unido
qumicamente
tiene
un
carcter
no
polar

Tabla 2: Clasificacin de los rellenos en la fase normal y la fase inversa, Los

rellenos de fase enlazada se clasifican como de fase inversa cuando y de fase
normal cuando
Por lo general, el grupo R del siloxano en estos recubrimientos es una cadena C8
(n-octilo) o una cadena C18 (n-octadecilo). En estas preparaciones, los grupos de
hidrocarburo de cadena larga se alinean el uno junto al otro y en perpendicular a la
superficie de la partcula, dando una estructura semejante a una brocha o a un
cepillo.
Para el Establecimiento del mtodo en cromatografa de reparto
En cromatografa de lquidos, el establecimiento del mtodo tiende a ser ms
complejo debido a que cuando la fase mvil es lquida, los componentes de la
muestra interaccionan con ambas fases, la estacionaria y la mvil. El xito de una
separacin cromatografa de reparto depende de que la fase mvil sea acetonitrilo,
hexano o bien dioxano.

Seleccin de la columna en las separaciones cromatografas de reparto.

Una buena cromatografa con fases mviles interactivas, requiere un equilibrio
adecuado entre las fuerzas intermoleculares existentes entre los tres participantes
activos en el proceso de la separacin
El soluto
La fase mvil
La fase estacionaria.
Estas fuerzas intermoleculares se describen cualitativamente en trminos de
polaridad relativa de cada uno de los reactivos.
Las polaridades en orden creciente para varios grupos funcionales del analito son:
hidrocarburos < teres < esteres < cetonas < aldehdos < amidas < aminas <
alcoholes. El agua es ms polar que cualquier compuesto que contenga alguno de
los anteriores grupos funcionales.
Al elegir una columna para una separacin cromatogrfica de reparto, la polaridad
de la fase estacionaria ha de ser bastante similar a la de los analitos, y para la
elucin se utiliza entonces una fase mvil con una polaridad considerablemente
distinta. Si se quieren obtener buenas separaciones en un tiempo razonable, las
polaridades del soluto, de la fase mvil y de la fase estacionaria se han de
armonizar cuidadosamente.
Aplicaciones de la Cromatografa de Reparto.
edulcorantes artificiales,
antioxidantes,
aflatoxinas,
aditivos en bebidas refrescantes,
colorantes,
aminocidos, protenas,
carbohidratos,
lpidos