Eficcia de agentes

antimicrobianos em
biofilmes para o controle de
contaminao na indstria
de domissanitrios
Autores: Eliane Gama Lucchesi1, Slvia Yuko Eguchi2
e ngela Maria Moraes1
Departamento de Processos Biotecnolgicos,

Faculdade de Engenharia Qumica,

Universidade Estadual de Campinas
Dosage Pesquisas Laboratoriais, Investiga Institutos

de Pesquisa

Eliane Gama Lucchesi

Slvia Yuko Eguchi
ngela Maria Moraes

Contato: ammoraes@feq.unicamp.br

1. Introduo

podem-se citar polissacardeos, protenas, cidos nuclicos e fosfolipdios [2]. Assim, esta matriz extracelular
formada em parte pelas prprias clulas, podendo tam-

Biofilmes microbianos tm sido estudados nos mais

diferentes segmentos industriais, onde so os principais
causadores de contaminaes de difcil controle.

bm incluir componentes do ambiente, como detritos,

materiais inorgnicos e at mesmo outros organismos.
Os biofilmes asssociados a doenas tm sido deta-

O histrico de problemas com biofilmes est invaria-

lhadamente estudados nas reas de medicina e odonto-

velmente presente em todos os segmentos industriais

logia, nas quais os problemas gerados so mais crticos

que possuem gua em seu sistema, tais como: torres de

por envolver diretamente vidas humanas. Nestes casos,

resfriamento, sistemas de tratamento de gua (resinas

ocorrem principalmente porque os fluidos corpreos so

de troca inica, osmose reversa) e em todos os demais

excelentes meios de cultivos, provendo nutrientes varia-

sistemas que tenham quaisquer fluidos em circulao.

dos para os micro-organismos. Estima-se que os biofil-

Biofilmes microbianos so definidos como associa-

mes estejam envolvidos em 65% dos casos de infeces

es de clulas bacterianas e de fungos [1], inclusas em

humanas de origem bacteriana [3]. Dispositivos mdicos

uma complexa matriz polimrica extracelular (MPE). A

propcios colonizao por biofilmes, como catteres,

MPE possui variada composio qumica, e no somen-

so responsveis diretos pelo fracasso de muitos trata-

te prov a estrutura orgnica do biofilme, como tambm

mentos tradicionais [4], pois permitem a instalao de

facilita o arranjo espacial das diferentes espcies que o

micro-organismos de difcil controle e que apresentam

compem. Dentre os principais componentes da MPE

maior resistncia erradicao por agentes antimicro-

Set/Out - 2012 - SBCC

41

artigo tcnico
bianos como antibiticos, biocidas e desinfetantes [5] do

para inibir ou erradicar cepas causadoras de infeces.

que as clulas planctnicas, pioneiras na formao de

Os testes da CIM e da CMM so ensaios padres para

biofilmes.

verificar a susceptibilidade de clulas planctnicas a an-

Supe-se que menos de 10% dos micro-organismos

tibiticos. Devido reprodutibilidade, os testes de CIM

presentes num sistema sejam, de fato, clulas planct-

e CMM passaram a ser utilizados para auxiliar na de-

nicas, estando mais de 90% na forma de biofilmes [6].

finio de dosagem mnima de outros antimicrobianos,

Nas comunidades microbianas possvel observar in-

tais como conservantes necessrios para preservao

teraes de mutualismo, comensalismo, antagonismo e

de produtos com gua em sua composio.

saprofismo, responsveis pela estabilizao do sistema,

Entretanto, em se tratando de biofilmes, este mtodo

podendo ocorrer entre micro-organismomicro-organis-

no deve ser aplicado, pois os ensaios de susceptibilida-

mo ou micro-organismoorganismo multicelular [2].

de mostram que a concentrao de agente ativo para a

A formao do biofilme est diretamente relacionada

erradicao do biofilme de 100 a 1.000 vezes maior do

adeso celular. Dentre os fatores que do incio ao pro-

que a determinada para clulas planctnicas [6]. Esta re-

cesso de adeso esto as cargas superficiais da parede

sistncia d-se principalmente pela MPE e pela compo-

celular das bactrias. A presena de fmbrias e pilis e

sio da membrana externa e da parede celular, e ocor-

fatores genticos inerentes possibilitam sua interao

re predominantemente com bactrias Gram-negativas

com variados tipos de superfcies [7], [8].

[10]. Degradao e inativao dos biocidas por enzimas

Segundo a American Society for Microbiology [9], a

e metablitos das clulas do biofilme podem ocorrer [11],

formao do biofilme divide-se em cinco etapas conse-

diminuindo drasticamente a sua eficcia na erradicao

cutivas. A etapa inicial, de adsoro reversvel, ocorre

das clulas.

em segundos, e nela predominam as foras fracas de

Variados sistemas vm sendo utilizados para o de-

atrao. Em seguida, ocorre uma etapa de adeso ir-

senvolvimento controlado de biofilmes in vitro para que

reversvel, na qual predominam foras fsicas e qumi-

se possa testar, de forma mais precisa e reprodutvel,

cas, que duram de segundos a horas. Aps esta etapa,

sua susceptibilidade aos antimicrobianos, determinando

por perodos de horas a dias, ocorrem o crescimento e

a concentrao inibitria mnima para clulas ssseis

a diviso celular, seguidos da formao da MPE [10].

e da concentrao inibitria mnima de erradicao de

Finalmente, na quinta e ltima etapa, ocorre a adeso

biofilmes (CIMEB) [12]. Sistemas como a imobilizao

de outros organismos e a liberao de micro-colnias

de clulas em hidrogis, o cultivo celular em quimios-

microbianas, que prolongam por perodos de dias as

tatos, o uso de fermentador de filme com espessura

meses [10].

constante, reatores de fluxo simples, o dispositivo de

Durante a adeso, as clulas modificam seu fenti-

Robbin modificado e o cultivo de clulas em placas

po em funo da proximidade do suporte, respondendo

com micro-poos como o dispositivo MBEC podem

s condies ambientais com padres de crescimento

ser empregados [1]. Entretanto, questes frequentes

diferentes dos observados em clulas livres [8]. Alm

como a dificuldade de operao e os custos elevados

da maior resistncia a agentes antimicrobianos, outros

limitam seu emprego como mtodos de uso rpido para

problemas esto associados presena dos biofilmes,

o diagnstico de problemas e a proposio de possveis

dentre estes, maior populao em comparao de

solues.

clulas planctnicas (podendo chegar a valores de at

Como alternativa aos sistemas citados anteriormen-

10 a 10 UCF/mL), maior dificuldade de remoo das

te, foi desenvolvida uma estratgia baseada no uso

clulas do sistema, limpeza, manuteno de equipamen-

de esferas de vidro como suporte para a formao de

tos, chegando at os efeitos deletrios sobre o produto

biofilmes sob condies cisalhantes e em sua utilizao

final [10].

para a determinao da CIM e da CIMEB em processos

11

42

12

A anlise da concentrao inibitria mnima (CIM) e

contaminados com micro-organismos ssseis [13]. Tal

da concentrao de morte mnima (CMM) muito utiliza-

estratgia permite gerar biofilmes in vitro de foram rpi-

da na rea mdica e veterinria com intuito de se verifi-

da e simultnea, de forma a possibilitar a realizao de

car a dosagem mnima de antimicrobianos necessrios

testes com variados tipos de agentes antimicrobianos,

SBCC - Set/Out - 2012

de forma simples, rpida, verstil, reprodutiva e menos

dispendiosa em comparao aos dispositivos encontrados no mercado. Esta abordagem j foi testada com
sucesso na determinao da CIM e da CIMEB em amostras de fluido de corte provenientes de processos de usinagem de metais contaminados por micro-organismos
formadores de biofilmes [13]. Alm do vidro, outros tipos
de materiais podem ser utilizados como suporte para
o desenvolvimento de biofilmes, como ao inoxidvel e
PVC, de uso comum em processos industriais.

Solues integradas
para seu projeto de
sala limpa

Um dos setores industriais que apresenta problemas com contaminao microbiana disseminada por
biofilmes o da produo de domissanitrios. Este segmento passou por grandes mudanas em 2009, quando
a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA),
atravs da RDC 035/2008, proibiu a utilizao de formaldedo como conservante nestas formulaes.
Devido ao microbicida e microbiosttica do formaldedo, a maior parte das ocorrncias de contaminao no processo fabril de domissanitrios era, de certa
forma, corrigida com suplementao do conservante,
uma vez que o baixo custo do formaldedo permitia o
aumento na dosagem usada. Com a proibio do uso

Produtos Swell:
Divisrias / Portas / Visores / Pass-trough
Acessrios / Sistema de ar condicionado para reas
classificadas / Controles de temperatura
Umidade / Pureza do ar / Gradiente de presso

de formol, buscar alternativas de preservao passou a

ser premente.
Devido intensa contaminao por biofilmes nos
processos de fabricao, proveniente de vrios fatores,
a simples troca do formaldedo por outros agentes antimicrobianos foi, num primeiro momento ineficaz, criando
a necessidade de repensar todos os conceitos no que
se refere contaminao microbiana neste segmento.
No presente estudo, o uso da tcnica de esferas de
vidro foi avaliada para o estabelecimento da dosagem
de erradicao de biofilmes e da estratgia de tratamento para o controle da contaminao em duas indstrias
do setor domissanitrio, que apresentavam graves
problemas de contaminao microbiana. A eficcia dos
antimicrobianos em clulas ssseis, pela abordagem de
desenvolvimento dos biofilmes em de esferas de vidro,
foi comparada com a erradicao das clulas planctnicas pela anlise da CIM tanto em detergentes quanto em
amaciantes de roupas, que apresentaram problemas de
contaminao. Testes comparativos, empregando a metodologia j estabelecida baseada no sistema MBEC,
foram realizados, assim como ensaios empregando esferas de ao inoxidvel em substituio s de vidro.

43

Rua Caravelas, 225 Jd. Vale do Sol

So Jos dos Campos SP CEP 12238-170
Tel.: (12) 3939.5854 comercial@swell.eng.br

artigo tcnico
235 (soluo aquosa de cloreto de alquil dimetil benzil

2. Material e mtodos

amnio), gentilmente cedidos pela empresa IPEL Itibanyl

Produtos Especiais Ltda. (Jarinu, SP, Brasil). O produto
BHD-208 empregado como agente preservante de

2.1. Material
No caso de detergentes, para efetuar os ensaios de
formao de biofilme e anlise de sua susceptibilidade

formulaes, enquanto o BP-600 e o BP-610 so utilizados como sanitizantes industriais e o BHD-235, como
desinfetante domstico.

a biocidas foi utilizado como inculo uma alquota de

Como diluente e soluo de lavagem foram utilizadas

detergente contaminado misturada a micro-organismos

gua destilada estril e/ou soluo de NaCl a 0,9% (m/v),

coletados na superfcie dos tanques, na forma de pool,

conforme sugerido por Capelletti et al. (2005)[14].

tendo-se por objetivo obter um consrcio microbiano em

que foram preservadas as interaes entre os micro-

2.2. Determinao da concentrao inibitria

-organismos e o meio ao qual estavam adaptados. Os

mnima (CIM) e da concentrao mnima de morte

micro-organismos foram coletados, com o auxlio de uma

(CMM) para clulas planctnicas

haste flexvel com ponta de algodo estril (Swab), nas

Todos os ensaios de anlise de eficcia de agentes

superfcies dos tanques de ao inoxidvel utilizados na

para o controle de biofilmes e clulas planctnicas con-

fabricao de detergente e transferidos para meio de cul-

taminantes foram realizados nos Laboratrios da IPEL

tura para crescimento de bactrias. Aps a proliferao

Itibanyl Produtos Especiais Ltda. Os testes foram exe-

celular, a cultura foi dividida em cinco partes iguais, em

cutados em cabine de segurana biolgica (VLFS-12,

frascos de vidro para reagentes (tipo Schott) contendo

Veco), em sala controlada com presso positiva.

meio de cultura lquido e estril. Este inculo foi mantido

Para a determinao da CIM, foi utilizado como in-

refrigerado. Nos estudos enfocando o amaciante, o incu-

culo, em ambos os casos, suspenses microbianas com

lo consistiu do prprio amaciante de roupas contaminado.

concentraes ajustadas em 1,0x108 UFC/mL com TSB.

No foi possvel efetuar a proliferao e a manuteno do

Foram preparadas, isoladamente, solues dos qua-

inculo em meios de cultura, pois os micro-organismos

tro antimicrobianos com concentraes iniciais ao dobro

contaminantes deste produto no se multiplicavam na au-

das concentraes normalmente utilizadas. Estas solu-

sncia do amaciante. Foram estudadas duas empresas

es foram diludas de forma seriada, na proporo de

situadas no Estado de So Paulo (Brasil).

1:1 (v/v), com meio TSB previamente contaminado com

Para a propagao celular, a anlise de bactrias

1% (v/v) de cada inculo, at que se atingisse 1,56%

heterotrficas totais, a formao de biofilmes e para os

da concentrao inicial de cada biocida. Para tal, foram

ensaios de susceptibilidade microbiana aos biocidas

empregados 3mL de soluo de biocida e 3mL do meio

foram utilizados os meios de cultivos Tryptic Soy Agar

de cultura TSB em cada etapa da diluio, totalizando

(TSA) e Tryptic Soy Broth (TSB), ambos da Difco. Para

sete transferncias. Os tubos controle continham: meio

o desenvolvimento dos biofilmes foram utilizados tubos

de cultura TSB como controle negativo, meio de cultura

de ensaio com tampa de rosquevel de 16mm x 100mm

com o inculo como controle positivo, e meio de cultura

contendo esferas de vidro de 0,85mm de dimetro m-

contendo biocida para o controle da turbidez. O cresci-

dio (modelo U 20, S Esferas, So Paulo, SP, Brasil) ou

mento bacteriano foi evidenciado pela turbidez do meio

esferas de ao inoxidvel de 1,0mm de dimetro mdio

de cultura. A menor concentrao na qual no houve

(AISI 304L - Nacional Esferas Ltda.).

crescimento foi assumida como a concentrao inibit-

Para o estudo foram utilizados biocidas comercial-

44

ria mnima.

mente disponveis: BHD-208 (soluo aquosa de 2-bro-

Aps a leitura dos resultados da CIM, de cada um

mo-2nitropropano-1,3-diol, 5-cloro-2-metil-4isotiazolin-

dos tubos que no apresentaram crescimento microbia-

-3ona e 2-metil-4-isotiazolin-3-ona), BP-600 (soluo

no visvel a olho nu, foi retirada uma alquota de 10L

aquosa de 1,5-pentanodial), BP-610 (soluo aquosa

com uma ala de inoculao calibrada, que foi estriada

de cloreto de alquildimetil benzil amnio, polihexameti-

na superfcie do meio de cultivo TSA solidificado em pla-

lenoguanidina hidroclorada e 1,5-pentanodial) e BHD-

cas de Petri, para a verificao de crescimento celular. A

SBCC - Set/Out - 2012

menor concentrao de cada agente antimicrobiano na

tantes foram semeadas (por estrias) em meio de cultivo

qual no se verificou crescimento celular foi assumida

TSA devidamente distribudo e solidificado em placas

como a CMM.

de Petri. A menor concentrao na qual no se verificou

crescimento de clulas foi denominada concentrao

2.3. Formao de biofilme na superfcie de

mnima de erradicao de biofilme (CMEB).

esferas de vidro ou ao inoxidvel e anlise de sua

susceptibilidade aos antimicrobianos
Os ensaios foram realizados com base na metodologia descrita por Lucchesi [15]. Para cada tipo de contami-

2.4. Formao de biofilmes no dispositivo

MBECHTP e anlise de sua susceptibilidade aos
antimicrobianos

nante os ensaios foram efetuados em triplicata, empre-

Assim como no procedimento envolvendo esferas de

gando os quatro biocidas em diferentes concentraes.

vidro, o ensaio com o dispositivo MBEC-HTP, produzido

Alquotas de 0,3g de esferas de vidro ou ao inoxidvel

em poliestireno, foi realizado em duas etapas, onde numa

previamente lavadas foram acondicionadas em tubos de

se inocula o contaminante formador de biofilme e nou-

ensaio com tampa de rosca (16mm x 100mm) e a cada

tra onde se avalia seu comportamento frente a agentes

um dos tubos foram adicionados 4,5mL de cada suspen-

antimicrobianos. A primeira etapa envolve um dispositivo

so microbiana contaminante (contendo 1,0 x 108 UFC/

formado por uma base retangular escavada provida de

mL), alm de 0,5mL de meio de cultivo TSB. Os tubos fo-

8 canais, onde colocada a populao contaminante, e

ram colocados em um homogeneizador (modelo AP-22,

uma tampa com 96 pinos onde as clulas se fixam, for-

Phoenix) e foram agitados por movimentos rotacionais

mando o biofilme. Na segunda etapa, a tampa contendo

(4 a 5 rpm) em estufa (modelo 320 L, Tecnal) ajustada

os pinos transferida para uma nova base onde se en-

temperatura de 361C por 48 horas para a gerao dos

contram 96 poos preenchidos com solues de biocidas

biofilmes em condies cisalhantes.

e de amostras para a realizao de ensaios controle.

Aps a incubao, as esferas de vidro ou ao ino-

Assim, para a primeira etapa, em bases distintas

xidvel foram removidas com o auxlio de uma cureta,

foram adicionados 22 mL de cada um dos inculos pa-

transferidas para novos tubos de ensaios estreis, e la-

dronizados (1,0x108 UFC/mL), e 2 mL de meio de cultura

vadas por duas vezes com gua destilada estril para a

TSB. Os dispositivos foram tampados e transferidos para

remoo das clulas no aderidas e dos nutrientes em

uma mesa agitadora com movimentos oscilatrios (4 a 5

contato com as partculas. Aps a lavagem foram adicio-

oscilaes por minuto e inclinao de 5), posicionando-

nados 2,5mL do meio de cultura TSB e 2,5mL de soluo

-os de forma que o fluxo do meio de cultura na base do

aquosa dos quatro biocidas testados nas concentraes

dispositivo ficasse direcionado no sentido dos canais. O

de 1%, 5%, 10%, 15% e 20% (em massa) de cada produ-

crescimento microbiano foi efetuado em estufa (modelo

to. Os tubos foram ento incubados em estufa a 361C

320 L, Tecnal) a 361C, por 48 horas para permitir a for-

por mais 24 horas, no caso das amostras provenientes

mao dos filmes em cada um dos pinos com populao

do processo de produo de detergente, e por 3 horas

microbiana superior a 1,0x10 6 UFC/pino.

no caso da amostra de amaciante contaminado. Aps

Aps a incubao, a tampa do dispositivo MBEC

o perodo de incubao, as solues de biocidas foram

foi retirada e lavada por duas vezes com soluo salina,

drenadas e as esferas lavadas com gua destilada estril

para remoo das clulas planctnicas. Esta lavagem foi

por duas vezes. Em cada tubo foi adicionado 5mL de meio

efetuada colocando-se a tampa do dispositivo em uma

de cultivo TSB, que foram sonicados (modelo USC1450,

placa do tipo ELISA com 96 poos, contendo 0,2mL de

25 khz, Thornton) por 30 minutos para a desagregao

soluo salina estril por poo. Aps a lavagem, a tampa

dos biofilmes e, aps 24 horas de incubao, a turvao

do dispositivo foi encaixada em outra microplaca do tipo

ou no dos meios de cultivo foi analisada visando deter-

ELISA com 96 orifcios, cada um contendo 0,1mL das di-

minar a menor concentrao de cada microbicida capaz

ferentes concentraes dos biocidas e 0,1mL do meio de

de inibir o crescimento das clulas ssseis, ou seja, a

cultura TSB, de modo a encaixar um pino em cada poo.

concentrao inibitria mnima de biofilme (CIMB). Para

As placas foram incubadas a 361C por 24 horas. Aps

os tubos sem turvao, as suspenses celulares resul-

o perodo de incubao, a tampa foi novamente lavada

Set/Out - 2012 - SBCC

45

artigo tcnico
com soluo salina e colocada em uma nova microplaca

recomendadas pelo fabricante [18] (estabelecidas com

contendo 200L de meio TSB fresco por poo. Aps 30

base em valores superiores CIM e CMM, na tentativa

minutos de sonicao, a placa foi incubada por mais 24

de antever e prevenir contaminaes em produtos aca-

horas, quando, ento, foi analisado o crescimento celu-

bados e que variam de acordo com o tipo de aplicao)

lar por turbidez ou por estrias em meio TSA. A menor

so de 1.000 a 2.000 ppm para o produto BHD-208, de

concentrao na qual no foi verificado o crescimento de

10.000 a 50.000 ppm para o BP-600 e o BP-610, e de

clulas foi denominada concentrao mnima de erradi-

5.000 a 10.500 ppm para o BHD-235.

cao do biofilme (CMEB).

Os resultados apresentados nas Tabelas 1 e 2 corroboram as afirmaes anteriores para as amostras de

2.5. Caracterizao das clulas contaminantes do

detergente contaminado tratadas com os antimicrobia-

amaciante

nos testados. Enquanto os dados coletados para micro-

A identificao dos micro-organismos contaminan-

-organismos planctnicos (Tabela 1) apontam eficcia

tes do amaciante foi efetuada pela equipe do Prof. Dr.

dos quatro microbicidas utilizados em concentraes

Welington Luiz de Arajo, da Universidade de Mogi das

muito abaixo das indicadas pelo fabricante, os resulta-

Cruzes (So Paulo). Uma amostra representativa do

dos obtidos para clulas em biofilmes mostram que as

amaciante contaminado foi inoculada em meio de cultura

concentraes requeridas para o controle da contamina-

TSB a 10% e aps 72 h, foi realizada a extrao de DNA

o so, de fato, muito superiores.

total. O gene 16S rRNA foi parcialmente amplificado por

Quando comparados os resultados das duas tabelas

PCR e os fragmentos amplificados foram clonados em

pode-se verificar o aumento significativo das dosagens

E. coli. A biblioteca de clones resultante foi caracteriza-

para erradicao dos biofilmes formados em relao aos

da por ARDRA, utilizando-se as enzimas de restrio

HaeIII e HhaI. Clones divergentes foram identificados
por sequenciamento. A anlise fentica foi realizada
com o programa MEGA 4.0 e a rvore de similaridade foi
construda pelo mtodo de neighbour-joining.

3. Resultados e discusso
Agentes microbicidas com ao preservante (ou
conservante) so aqueles que impedem ou retardam a
deteriorao de um produto acabado [16], normalmente
possuindo como caractersticas a dupla ao de redu-

Tabela 1
Agente antimicrobiano

CIM (ppm de
agente ativo)

CMM (ppm de
agente ativo)

BHD-208

13,5

13,5

BP-600

10,5

10,5

BP-610

10,0

10,0

BHD-235

9,0

9,0

Resistncia dos micro-organismos oriundos do

processo de produo de detergente aos agentes
antimicrobianos testados, para clulas planctnicas,
em termos de concentrao inibitria mnima (CIM)
e concentrao mnima de morte (CMM).

zir a contaminao inicial e de preservar o material de

Tabela 2

interesse por longos perodos. Os agentes sanitizantes,

Agente antimicrobiano

CIMB (ppm de
agente ativo)

CMEB (ppm de
agente ativo)

BHD-208

16.200

40.250

(da ordem de horas). A clara diferenciao entre estes

BP-600

10.005

10.005

dois tipos de produtos de relevncia na discusso de

BP-610

10.000

10.000

BHD-235

10.800

10.800

por outro lado, reduzem o nmero de contaminantes

bacterianos a nveis relativamente seguros [17], geralmente apresentando ao de morte microbiana rpida

resultados como os apresentados a seguir.

3.1. Formao e teste de susceptibilidade do
biofilme desenvolvido na superfcie das esferas de
vidro a partir de detergente contaminado

46

No caso dos produtos testados, as concentraes

Resistncia de biofilmes formados na superfcie de

esferas de vidro a partir de micro-organismos oriundos
do processo de produo de detergente aos agentes
antimicrobianos em termos de concentrao inibitria
mnima para biofilmes (CIMB) e concentrao mnima
de erradicao de biofilmes (CMEB).

SBCC - Set/Out - 2012

resultados obtidos para as clulas planctnicas. Varia-

formados nos dois tipos de materiais (Tabela 5). Pos-

es de 953 a 1200 vezes foram notadas na CIMB em

sivelmente, os biofilmes formados em vidro e em ao

relao CIM, e de 953 a 2981 para a CMEB em com-

inoxidvel possuem caractersticas similares.

parao CMM para os variados agentes microbicidas

Variaes idnticas, de 1009 a 1020 para a CIMB em

avaliados. As menores concentraes requeridas para

relao CIM, e de 1009 a 2032 para a CMEB em com-

o controle dos biofilmes foram obtidas com os produtos

parao CMM foram obtidos tanto para o vidro quanto

BP-600 e BP-610. A maior discrepncia foi observada

para o ao inoxidvel. Para todos os agentes microbicidas

para o microbicida BHD-208, que atua como um excelente preservante, porm apresentou-se pouco eficaz

Tabela 3

como agente sanitizante.

A Tabela 3 mostra os resultados do teste de erra-

Agente antimicrobiano

CIMB (ppm de
agente ativo)

CMEB (ppm de
agente ativo)

BHD-208

13,5

13,5

BP-600

10,5

10,5

BP-610

10,0

10,0

BHD-235

9,0

9,0

dicao de biofilmes efetuados empregando o sistema

MBEC. A total correlao nos dados obtidos no sistema
MBEC em relao aos biofilmes produzidos na superfcie das esferas de vidro confirma e valida de uso da
tcnica de esferas para este tipo de aplicao.

Resistncia de biofilmes formados, no dispositivo

MBEC, a partir de micro-organismos oriundos do
processo de produo de detergente aos agentes
antimicrobianos em termos de concentrao inibitria
mnima para biofilmes (CIMB) e concentrao mnima
de erradicao de biofilmes (CMEB).

3.2. Formao e susceptibilidade do biofilme

desenvolvido na superfcie das esferas de
vidro ou ao de inoxidvel a partir de amaciante
contaminado
Os resultados da CIM e da CMM obtidos para as
amostras de amaciante contaminado esto apresenta-

Tabela 4

dos na Tabela 4, enquanto que o comportamento quanto

CIMB e CMEB verificado em esferas de vidro e de

Agente antimicrobiano

CIM (ppm de
agente ativo)

CMM (ppm de
agente ativo)

BHD-208

25,8

51,6

BP-600

12,2

24,4

BP-610

10,05

10,05

BHD-235

12,2

12,2

ao inoxidvel apresentados na Tabela 5.

Assim como verificado para as amostras de detergente, os testes da CIM e da CMM com o amaciante
de roupas contaminado mostraram a eficcia dos antimicrobianos para o controle dos micro-organismos

Resistncia dos micro-organismos oriundos do

processo de produo de amaciante aos agentes
antimicrobianos testados, para clulas planctnicas,
em termos de concentrao inibitria mnima (CIM)
e concentrao mnima de morte (CMM).

planctnicos, foram em concentraes muito inferiores s indicadas pelo fabricante.

No foram observadas diferenas quanto s concentraes necessrias para a erradicao dos biofilmes

Tabela 5
Agente antimicrobiano
BHD-208

CIMB (ppm de agente ativo)

CMEB (ppm de agente ativo)

Vidro

Ao Inoxidvel

Vidro

Ao Inoxidvel

26.300

26.300

52.600

52.600

BP-600

12.322

12.322

24.644

24.644

BP-610

10.150

10.150

10.150

10.150

BHD-235

12.440

12.440

24.800

24.800

Resistncia de biofilmes formados na superfcie de esferas de vidro e de ao inoxidvel a partir de micro-organismos

oriundos do processo de produo de amaciante aos agentes antimicrobianos em termos de concentrao inibitria
mnima para biofilmes (CIMB) e concentrao mnima de erradicao de biofilmes (CMEB).

Set/Out - 2012 - SBCC

47

artigo tcnico
observa-se que as concentraes requeridas para o con-

plexo Burkholderia cepacia, Buttiauxella sp., Acidobac-

trole dos biofilmes foram maiores no caso das amostras

teriaceae e Gemmatimonadaceae, sendo que nestes

de amaciante que das de detergente contaminado, o que

dois ltimos no foi possvel avanar na identificao,

indica que a microbiota do amaciante contaminado mais

o que sugere que estas possam ser espcies ainda no

resistente, possivelmente por resultar de uma populao

descritas na literatura.

pr-existente que j havia sido exposta, por prolongado

perodo, a microbicidas com baixa ao residual, como

4. Concluses

o formol.
Durante os testes com amaciante de roupas
contaminado, verificou-se que os micro-organismos

Os resultados deste estudo mostram que caso o

possuam um comportamento peculiar. Mesmo utili-

tratamento para eliminar a contaminao dos sistemas

zando-se diversas tcnicas de manuteno e recupe-

de fabricao do detergente e do amaciante de roupas

rao de micro-organismos, no foi possvel efetuar

fosse baseado somente nos testes de CIM utilizando

a propagao deste consrcio microbiano em meios

clulas planctnicas, a eficincia seria comprometida

de cultivo tradicionais. Observou-se que estes micro-

necessitando rever toda a sistemtica de sanitizao e

-organismos somente se multiplicavam na presena

preservao.

do amaciante de roupas, e que quando se retirava o

Na prtica, definir o preservante mais eficaz, recupe-

produto, no havia crescimento de colnias em meio

rar os produtos devolvidos e aumentar a dosagem de mi-

slido distribudo nas placas de Petri ou no meio de

crobicida no foram aes que solucionaram o problema

cultivo lquido. Este comportamento levou ao inte-

de contaminao. Foi necessrio, concomitantemente,

resse de identificar a populao microbiana presente

efetuar um procedimento de limpeza mecnica com pos-

nesta amostra, atravs da caracterizao molecular

terior sanitizao, para que as empresas erradicassem

destes contaminantes. Os resultados obtidos so

a contaminao.

apresentados na Figura 1.
A comunidade bacteriana encontrada neste amaciante de roupas foi composta por organismos do com-

48

O sistema de esferas mostrou-se simples, eficiente,

com a vantagem de permitir a medida CIMB, alm de
representar um custo 40% inferior ao MBEC.

Figura 1 Padro de bandas dos isolados da amostra de amaciante, obtida por meio da tcnica de ARDRA. A:
resultados obtidos com a enzima HaeIII; B: resultados obtidos com a enzima Enzima HhaI; M: marcador molecular de
100pb; A01 a A18: isolados.

SBCC - Set/Out - 2012

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