Universidad Autnoma del Estado de Mxico

Facultad de Qumica.

QUMICO FARMACUTICO BILOGO

EQUIPO: 5

Grupo: 62.

LABORATORIO DE QUMICA LEGAL.

SEXTO SEMESTRE.

Integrantes:
Garca Rodrguez Darissa Monserrat.
Vuelvas Galindez Silverio de Jess.

Profesora:
Q.F.B Cynthia Elena Enrquez Garca.

Paseo Coln Esq. Paseo Tollocan. Toluca, Mxico Febrero del 2015.

PRACTICA #3. IDENTIFICACION DE MANCHAS DE SEMEN MEDIANTE

VISUALIZACIN MICROSCPICA DE ESPERMATOZOIDES

OBJETIVO.
El alumno determinar la presencia de semen en una muestra de inters en Qumica legal mediante la
observacin con luz ultravioleta y la identificacin microscpica de espermatozoides.
MARCO TERICO.
Se denomina esperma, semen o lquido seminal, al producto de la secrecin del aparato genital
masculino, que aparece en el hombre despus de la madurez sexual, cuya funcin especfica estriba en
la fecundacin. Menos del 10% del volumen total del semen corresponde a los espermatozoides, el otro
90% al lquido seminal. Del minucioso estudio ordenado del semen o esperma, podrn obtenerse
conclusiones importantes para la investigacin de los hechos. Surgir as, si realmente hay semen en
las muestras analizadas y si dicho resto biolgico es humano. Asimismo, se determinar si hubo
eyaculacin interna y con ella penetracin. El elemento fundamental en la identificacin de esta
secrecin est en el hallazgo del espermatozoide, clulas cuyas caractersticas en el humano son las
siguientes:
Cabeza: Es de forma ovoide vista de frente y piriforme de perfil; mide de 4-5 micras de longitud. Contiene
el ncleo haploide cubierto por el acrosoma y un par de centriolos detrs del ncleo. El acrosoma
contiene enzimas como la hialuronidasa y la acrosina que facilitan la penetracin del espermatozoide al
ovocito.
Segmento intercalar: Regin que une la cabeza con la cola y que contiene la carga mitocondrial que
provee la energa necesaria (ATP) para la movilidad del espermatozoide. Es de forma cilndrica, mide 5
micras de longitud.
Cola: Da la movilidad al espermatozoide. Tiene una longitud de 40-50 micras de longitud.
Composicin qumica del esperma.
La mayora del lquido en el semen se compone de las secreciones de los rganos reproductivos
masculinos. Contiene cido ctrico, aminocidos libres, fructosa, enzimas, fosforilcolina, prostaglandina,
potasio y zinc, el 46 al 80 % del lquido es producido por las vesculas seminales. 13 a 33 % por la
glndula de la prstata. 5 % de los testculos y el epiddimo. 2-5 % de las glndulas uretrales y
bulbouretrales.
Manchas de semen.
Color y aspecto: Al estado fresco se presenta como un lquido filante, blanco lechoso, ligeramente
amarillento, que al secarse se forma amarillo franco y de aspecto acartonado. Colocado en una placa
tiene el aspecto heterogneo, con pequeos grumos, opaco, hacindose transparente, homogneo al
licuarse.
Olor: Caracteristico, que en la especie humana recuerda al castao comestible o al desmanche (leja).
Su intensidad depende del tiempo de abstinencia que tiene la persona.
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La bsqueda de manchas seminales en la prctica lo frecuente es hallarlo al estado seco, en diversos

materiales que con frecuencia se remiten al laboratorio de Criminalstica, en casos de investigacin
de los delitos sexuales, estos soportes son: las prendas de vestir de la vctima, del acusado o de
ambos, de los sospechosos de haber cometido el ultraje; envan tambin hisopos o liquido del lavado
vaginal de aquella, o exudados diversos de la misma (vaginal y rectal), en oportunidades por el
contrario se requiere recurrir al lugar de los hechos, en busca de rastros en muebles, alfombras, pisos,
etc.; y otros aparentes para llevar a efecto el acto sexual, toallas, pauelos, papel higinico,
preservativos, otros.
Se debe buscar pelos arrancados, restos biolgicos en las uas (sangre, piel, etc.) que puedan
corresponder al autor, tambin pelos de pubis, sobre los orificios naturales (vulva, boca, ano) de la
vctima.
Pruebas de Orientacin.
Las pruebas de orientacin tienen mayor utilidad cuando se trata de
localizar el vestigio entre las ropas de la vctima, en superficies
grandes tales como sbanas, mantas o entre manchas dubitadas
recogidas del lugar de los hechos. El papel de una prueba de
orientacin recae ms en su habilidad para descartar la presencia
de semen en una mancha cuestionada que en la de indicar la
presencia de semen. Es necesario un examen visual exhaustivo y
minucioso de las distintas prendas. Una de las tcnicas que se
utiliza es:
Luz ultravioleta: Bajo la accin de radiaciones ultravioletas, las
manchas de semen presentan una fluorescencia directa que si bien
no es especfica, pues existen otros materiales que producen similar efecto, constituyen un recurso
til, para localizar manchas sospechosas.
Fosfatasa cida: Es una enzima fosfomonoesterasa no especfica, se encuentra en niveles altos en
el semen, proviene de las clulas epiteliales de la glndula prosttica. El nivel de la actividad de la
fosfatasa cida es 500 a 1000 veces ms alta en el semen humano que en otros fluidos o secreciones
corporales. La deteccin de la fuerte actividad de la fosfatasa cida es considerada como un rpido
y confiable indicador de la presencia de semen
Pruebas Microscpicas: El mtodo ms utilizado actualmente, es la observacin de
espermatozoides al microscopio. Se han detectado espermatozoides mviles en lquido de lavado
vaginal hasta 24 horas despus de la violacin e inmviles 100 das despus deocurrido el hecho en
manchas secas.
Electroforticos: proponen mtodo bidimensional sobre papel, combinacin de electroforesis y
cromatografa, lo que permite separar la espermina de los aminocidos del semen y obtener una
separacin sumamente interesante de estos ltimos, que puede considerarse de relevante valor para
la identificacin de dicho humor.

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Mtodos enzimticos: el esperma tiene una elevada cantidad de fosfatasa acida, no hallada hasta
ahora e ningn otro material orgnico natural sea animal o vegetal. La fosfatasa cida prosttica
produce la hidrlisis de la fosforil colina en cido fosfrico y colina. Esta enzima acta entre un pH
4.5 5.
PROCEDIMIENTO.

Identificacin de espermatozoides a partir de una muestra indirecta

observar con luz
UV un trozo de tela
previamente
manchado con
semen para ubicar
la localizacion de
las manchas

tomar la tela impregnada de

semen y cortar trosos de aprox.
1x1 cm

VISUALIZACIN DIRECTA
DE ESPERMATOZOIDES

Tomar una muestra

para observacion
directa y colocar una
gota en un porta
objetos

agitar y dejar reposar durante una hora

para eluir la mancha de la tela, despues
retirar los trozos y colocar una gota de esta
solucion en un portaobjetos

realizar la busqueda en el
microscopio y realizar un
segundo frotis con la tincin
de Christmas y observar

adicionar una pequea

gota de azul de metileno
y cubrir con cubreobjetos

Colocar una gota diminuta

de azul de metileno, y
cubrir con cubreobjetos.

realizar un frotis con la

tinsion de Christmas Tree
y observar al microscopio

OBSERVACIONES.
Se pude observar que la tcnica en la tincin de Christmas Three no se realiz de manera adecuada,
debido a que en la observacin de los espermatozoides al microscopio, solo se vieron la cabezas teidas
de rojo y unas pocas colas verdes, pero la mayora de las colas no tena color, este factor se cre que
pudo haber sido debido a que no se dej el tiempo suficiente el colorante verde de malaquita o a que el
lavado fue hecho inadecuadamente.
No logramos identificar las manchas de semen utilizando la lmpara de Luz UV, por problemas tcnicos
con la lmpara, ya que esta no present suficiente intensidad luminosa para poder realizar la prueba, al
iluminar la muestra no logrbamos percibir diferencia alguna en ninguna parte de la muestra (se
esperaba observar las manchas por luz UV, por la diferencia de tonalidad en la muestra).
RESULTADOS.
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Tincin
Utilizada

Resultado de la
Prueba

Indirecta(Reconstruccin
de la muestra)

Azul de
Metileno

Positivo

Directa(Muestra en fresco)

Azul de
Metileno

Tipo de Prueba

Directa(Muestra en fresco)

Christmas
Three

Imagen

Muy pocos
espermatozoides

Positivo
Varios
espermatozoides
Positivo
Muchos
espermatozoides

CONCLUSIONES.
Se puede concluir que las manchas de semen son las segundas evidencias de inters despus de la
sangre debido a que en ella podemos encontrar tambin ADN y una de las ventajas es que podemos
reconstruir la muestra. Pero una de las desventajas es tambin que esta muestra se degrada en un corto
lapso de tiempo en comparacin a otras muestras como sangre, dificultando su identificacin para
elucidar un proceso legal. Adems tenemos una tincin simple la cual solo nos permite identificar que la
presencia de espermatozoides o si queremos una mayor precisin y a su vez diferenciar la estructura
de los espermatozoides podemos utilizar la tincin de Christmas Three, esta es de diferenciacin y
permite un anlisis mayor de la estructura que compone al espermatozoide.
Entonces que las pruebas de tincin de espermatozoides, son mtodos que se pueden considerar
sencillos y rpidos para la determinacin de presencia de semen en una muestra de inters, ya que, se
logran observar ntidamente al microscopio los espermatozoides teidos en nuestra muestra. Por otro
lado la prueba de luz UV es una manera rpida de identificar en qu lugar se encuentran las manchas
de semen o si estn dentro del rea de investigacin para poder de alguna manera obtener la muestra
para realizar el anlisis y obtener la mayor informacin posible.

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CUESTIONARIO.

1. Cul de las muestras presenta un mayor nmero de espermatozoides?

En la observacin directa, con tincin de Christmas Tree

2. Cul es el tiempo en el que los espermatozoides se mantienen viables posterior

a la eyaculacin?
La supervivencia de los espermatozoides viene definida por una serie de parmetros, pero
destacan dos: la temperatura, que debe estar comprendida entre los 37 C y los 37,5 C; y
el grado de acidez del ambiente (pH de 7-7,5). En este sentido, la vagina es un medio hostil
para las clulas reproductoras masculinas, sobre todo fuera del periodo ovulatorio. Durante este
tiempo, los espermatozoides mueren literalmente achicharrados en pocos minutos, ya que el
pH vaginal est por debajo de 6. En los das de la ovulacin, ste sube 1 1,5 puntos, lo que
permite que aguanten de 2 a 16 horas. Si son eyaculados en el exterior, a una temperatura de
15 C, permanecen vitales 1 2 das, y mucho menos si hace ms calor.
3. Cmo afecta un incorrecto embalaje de la tela presuntamente manchada con
semen para su identificacin?
Puede afectar en una mala declaracin, que tal si se reporta un caso donde una chica es violada y
tambin capturan a la persona que hizo tal acto, hacen pruebas y esta sale negativa por el mal embalaje
entonces se pueden dar falsos correctos, pero tambin esto no indica que esta sea la nica prueba si
no que tambin se pueden seguir realizando alguna otra.

4. En el caso de no visualizar espermatozoides al microscopio, se dictamina una

prueba negativa para semen? Fundamente su respuesta.
No del todo una respuesta negativa, ya que tambin se puede realizar una prueba de determinacin de
fosfatasa acida prosttica se tienen que agotar todas las posibilidades de bsqueda.

5. Investigue el fundamento qumico de la tincin Christmas tree.

La tincin ms conocida en los laboratorios criminalsticos a nivel mundial es la denominada
rbol de Navidad6. Usando el microscopio, los cientficos buscan los espermatozoides en
lminas preparadas a partir macerados desde hisopos, ropa, sabanas, etc. Las lminas se
colorean con la tincin de Kernechtrot-Picro-indigo-carmine, o "rbol de navidad", en la que los
ncleos de los espermatozoides se tien de rojo carmn brillante y las colas de color verdeazulado

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La tincin de rbol de Navidad provee excelentes detalles morfolgicos y una buena

discriminacin entre espermatozoides y clulas epiteliales. Esto es importante a la hora de
determinar los tipos de clulas en muestras problemas con mezclas.

EJERCICIOS DE INTEGRACIN

1. Dibuje un diagrama de la espermatognesis indicando cada una de sus fases.

2. Qu es la espermatobioscopa? Realice un esquema indicando los parmetros que se

evalan en ella y los valores normales de dichos parmetros.
parmetro

Descripcin

Parmetro

Licuefaccin

Completa 30 mm

Movilidad

apariencia

Translucido
palescente

viscosidad

normal

descripcin

o morfologia

<30%

vitalidad

>30%

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Volumen en

Mas 2 mL

concentracion

20 millones /mL

REFERENCIAS.
Polica Nacional del Per.2012. Manual de criminalstica. Lima, Per.
Carma, I. Mtodos de Reconocimiento, Identificacin e Individualizacin de manchas de semen.
Espaa. www.criminalistica.net
Rodrguez, E; Gamboa, M; Hernndez, F; Garca, J. 2005. Bacteriologa general: Principios y
Prcticas de Laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica.

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