INTRODUCCIN

Los metabolitos secundarios se definen como compuestos que, an sin ser esenciales para el
mantenimiento de las funciones vitales de la planta o su crecimiento, son de gran importancia para
la sobrevivencia de las plantas, ya que facilitan la interaccin y adaptacin de estas a su entorno,
cumpliendo diversas funciones tales como brindar proteccin contra patgenos, atraer bacterias
fijadoras de nitrgeno y agentes polinizantes, entre otras.
Dichos compuestos pueden clasificarse de acuerdo a sus rutas de biosntesis y su naturaleza
qumica en 4 grandes grupos:
-

Compuestos Fenlicos: Su estructura base est constituida por un anillo bencnico

sustituido por uno o ms grupos hidroxilo. Se sintetizan a travs de la ruta del cido
Shikimico, la cual tiene tambin como productos aminocidos aromticos. Dentro de los
compuestos ms destacados de esta categora es posible encontrar la lignina, componente

estructural fundamental de muchos tejidos vegetales.

Alcaloides: Estructuralmente, estn constituidos por sistemas policclicos que contienen
uno o ms tomos de nitrgeno en su estructura, lo cual les confiere a estos compuestos

propiedades dbilmente bsicas.

Terpenos: Constituyen el grupo ms grande y diverso de metabolitos secundarios
vegetales. Estructuralmente, son polmeros de isopreno sintetizados a travs de la ruta del
cido Mevalnico (MVA) a nivel citoplasmtico o la ruta del Metil Eritiol Fosfato (MEP) a

nivel de los cloroplastos. Son los principales constituyentes de los aceites esenciales.
Glicsidos: Compuestos sintetizados a partir de la unin de una azcar, generalmente
glucosa, y otra molcula, llamada aglicona por medio de una reaccin de condensacin y
formacin de un enlace glicosdico. Dentro de este grupo de metabolitos, es posible
distinguir sub-grupos tales como Glicsidos cardiacos, saponinas, y glucsidos
cianognicos.

Se han desarrollado una gran cantidad de mtodos colorimtricos que permiten detectar la presencia
de los diversos grupos de metabolitos secundarios en extractos vegetales. Durante la actividad
prctica descrita a continuacin, se utilizaron 3 de estas tcnicas: El mtodo de Folin-Ciocalteau
para detectar la presencia de fenoles en un extracto de Romero (Rosmarinus officinalis), El mtodo
de Dragendorff para detectar la presencia de alcaloides en un extracto de Boldo (Peumus Boldus) y
la tincin con p-anisaldehdo para detectar la presencia de terpenos en un extracto de Bailahun
(Haplopappus baylahuen).

OBJETIVOS:

Determinar la presencia de compuestos fenlicos en un extracto metanlico de Romero

(Rosmarinus officinalis) mediante la utilizacin del Mtodo de Folin-Ciocalteau

Determinar la presencia de alcaloides en un extracto metanlico de Boldo (Peumus Boldus)

mediante la utilizacin del Mtodo de Draggendorf

Determinar la presencia de terpenos en un extracto de diclorometano de Bailahun
(Haplopappus baylahuen) mediante la tincin con p-anisaldehido.

MATERIALES Y MTODOS
1

I.

Determinacin de la presencia de compuestos fenlicos en un extracto de romero

Se comenz por moler 250 mg de tejido en un mortero, para luego realizar una extraccin
utilizando como solvente 1 mL de metanol. Este extracto fue luego traspasado a un tubo Eppendorf
y centrifugado a 10000 rpm durante 3 minutos, tras lo cual se recuper el sobrenadante, se le cubri
de la luz y se transfirieron 40 L de este a un tubo de ensayo para luego aadir 560 L de Agua
Milli-Q y 100 L de reactivo de Folin-Ciocalteau. Posteriormente, se esper 15 minutos mientras la
reaccin tena lugar, tras lo cual se agregaron al tubo de ensayo 300 L de Na 2CO3 7%.
Para finalizar, se midi la absorbancia de la mezcla de reaccin a 660 nm y se utiliz una curva de
calibracin de cido Glico para estimar el contenido de fenoles en el extracto de romero.
II.

Determinacin de la presencia de alcaloides en un extracto de boldo

Para comenzar, se molieron en un mortero 2 g de tejido utilizando nitrgeno lquido hasta obtener
un polvo fino, el cual fue posteriormente lavado con 5 mL de hexano y traspasado a un matraz
Erlenmeyer para luego ser macerado con metanol, obteniendo as un extracto metanlico, al cual se
le aadieron posteriormente unas gotas de amoniaco. Luego de homogeneizar la solucin, se
colocaron gotas de esta en una placa de slica, la cual fue luego rociada con reactivo de
Draggendorf, registrando el cambio de color ocurrido y comparando con un estndar de Boldina.
III.

Determinacin de la presencia de terpenos en un extracto de bailahun.

Se comenz por introducir 500 mg de tejido en un matraz Erlenmeyer, para luego aadir 8 mL de
diclorometano y agitar con fuerza. Posteriormente, se filtr el extracto obtenido con una gasa, para
luego colocar gotas del filtrado en una placa de slica y rociar esta con p-anisaldehido, tras lo cual
se aplic calor con un secador de pelo, registrando el cambio de color ocurrido.

RESULTADOS
1.- Determinacin de la concentracin de Fenoles en muestras de Romero (Rosmarinus
officinalis).
Los fenoles totales se determinan mediante el mtodo espectrofotomtrico de Folin Ciocalteu
usando el cido glico como material de referencia.
A partir de la solucin patrn de cido glico de 0,1 g/L, se procedi a realizar una serie de
diluciones con agua destilada. Se le adicion el reactivo de Folin-Ciocalteau, se agit y luego se
agreg carbonato de sodio al 7%. Finalmente, se tom la lectura en el espectrofotmetro
ultravioleta-visible a 660 nm. El blanco tuvo los mismos componentes excepto el cido glico. [7]
Se midi la absorbancia de las soluciones de cido glico patrn. Con estos datos se elabor la
curva patrn respectiva.
Tabla 1.- Resultados obtenidos para la concentracin de fenoles totales
Muestras

Absorbancia a 660 nm

M1
M2
M3
M4

0,518
0,612
0,718
0,937

Concentracin cido glico [mg g-1

tejido seco]
2,73
3,23
3,78
4,94

La pendiente de la curva de calibracin proporciona la absortividad molar la cual sirve para

poder despejar la concentracin de las muestras problemas con la ecuacin de Lambert y beer
A= bc.

2.- Prueba de Dragendorff para alcaloides de boldo (Peumus boldus).

Figura 1: Placas con extractos de boldo previo a la tincin con el reactivo Dragendorff

Figura 2: Placas con extractos de boldo luego de la tincin con el reactivo Dragendorff

3.- Anlisis de Terpenos de Bailahun (Haplopappus bailahuen)

Figura 3: Placas con extractos de bailahun luego de la tincin p-anisaldehdo

DISCUSIN

Boldo (Peumus boldus Molina) es una planta endmica de Chile, que se utiliza como un
remedio herbal para el tratamiento de digestivo y / o trastornos hepatobiliares. Principios
activos en el boldo incluyen alcaloides, flavonoides, aceites esenciales y otros compuestos.
Entre ellos, boldina y catequina, que son la principal componentes del alcaloide y fracciones
de flavonoides en el boldo hojas, respectivamente, son fuertes agentes antioxidantes.
Boldina es el principal alcaloide presente en las hojas y la corteza de boldo (feumus boldus
Molina). Esta sustancia se produce en la corteza de boldo en concentraciones inusualmente
altas superiores a 7% (basado en peso seco) que, junto con la abundancia de la planta de
origen, hace que sea un producto natural particularmente barato.
Boldina, como la mayora de los alcaloides, es bastante lipoflica y bastante insoluble en agua,
pero muchos de sus sales, incluyendo el hidrocloruro, son solubles en agua; su toxicidad es
notablemente bajo. La molcula boldina presenta dos fenlico grupos adyacentes a dos restos
metoxi, caractersticas qumicas que se encuentran comnmente en los compuestos que
muestran altos actividades antioxidantes 1191.

En la realizacin del prctico se utiliz el reactivo de Folin-Ciocalteau que se obtiene ya

preparado de casas comerciales. Este reactivo contiene una mezcla de tungstato sdico y molibdato
sdico en cido fosfrico y reacciona con restos fenlicos presentes en las protenas (tirosinas) y en
compuestos como cido glico y sus derivados, flavonoides, etc. El cido fosfomolibdotngstico
(formado por las dos sales en el medio cido), de color amarillo, que al ser reducido por los grupos
fenlicos da lugar a un complejo de color azul intenso, que es el que medimos en esta prctica para
obtener el total de fenoles [3]. En el reactivo adems se utiliz el solvente metanol porque es el ms
adecuado delos compuestos fenlicos debido a su capacidad para inhibir la reaccin de polifenol
oxidasa que causa la oxidacin en dichos compuestos, adems de su facilidad de evaporacin en
comparacin con el agua. As se obtienen los mejores resultados para extraer los compuestos
fenlicos. [4]. En la curva de calibracin obtenida para este ensayo se presenta en la fig. 1
resultados de la tabla 3 muestran que, por lo menos, todos los extractos contienen compuestos
fenlicos en cantidades no muy significativas 0,350 0,119 mg/mL lo que indica que pudieron
haber errores personales en la realizacin del prctico, ya que segn la literatura la composicin
quimica del romero de los cidos fenlicos (cafeico, clorognico, rosmarnico) es de mayor
proporcin de la resultante, considerando que se tom 20 microlitros del extracto [6].
Los alcaloides y los terpenos son responsables del efecto teraputico de muchos materiales
vegetales, como en este caso del boldo (peumus boldus) y bailahun (Haplopappus bailahuen),
respectivamente. Los alcaloides son un grupo diverso de bases orgnicas que contienen aminas
secundarias, terciarias, o cclicas, que tienen efecto en diversos sistemas del cuerpo humano. Por
otro lado, los terpenos son una clase grande y diversa de compuestos orgnicos responsables de los
diferentes sabores y aromas de las plantas. A travs de distintos anlisis se determin la presencia de
estos metabolitos secundarios en las plantas anteriormente mencionadas. El reactivo de dragendorff
(basado en la formacin de complejo de bismuto amarillo en medio cido ntrico con tioureasolucin de metales pesados-) se utiliz para la determinacin de la presencia de alcaloides en el
boldo. En la figura 2 se presentan los resultados obtenidos a travs de este test, donde en la muestra
analizada en el laboratorio se logra observar una respuesta positiva que se presenta como un anillo
casi incoloro, comparado con la boldina (principal alcaloide existente en el boldo, y que se
encuentra presente en todos los componentes de la parte area) donde se observa un anillo bien
marcado y de coloracin ms oscura. El tamao del punto y la oscuridad en la placa de silica
pueden indicar la cantidad relativa de cada componente, tambin puede indicar que la muestra se
encuentra ms pura. La concentracin de alcaloides en hojas de boldo vara entre el 0,2 y 0,5% y su
mayor componente boldina corresponde al 25-30 % de los alcaloides totales (Montes y
Wilkomirsky, 1992) [8]. Por lo tanto, el tamao del anillo y la falta de color, de la muestra de
7

alcaloides del boldo, puede indicar la presencia de impurezas como la baja concentracin de estos
en la muestra analizada, tambin puede deberse a las interacciones del reactivo utilizado con las
muestras, ya que el reactivo de dragendorff identifica principalmente aminas terciarias y aminas
secundarias, donde estas ltimas generan manchas menos colorida. El mecanismo de accin se
produce a travs del acoplamiento del tomo del metal pesado presente en el reactivo con el
nitrgeno del alcaloide para formar pares de iones, por lo que principalmente funciona bien para
alcaloides que tienen alguna forma de basicidad, ya que el resultado positivo parece ser la
formacin del par inico. Los alcaloides que no son apreciablemente bsicos es muy probable que
no den manchas tan marcadas. En trminos de grupos funcionales nitrogenados pirroles, nitrilos,
grupos nitro, y amidas sern menos propensas a dar un resultado positivo o un resultado marcado
[10]. Por otro lado, se realiz el anlisis de terpenos en el bailahun utilizando el reactivo panisaldehdo (reactivo universal para detectar e identificar una amplia gama de productos naturales
y sintticos), donde en Figura 3 se puede observar los resultados obtenidos del anlisis que son
manchas fluorescentes bajo una longitud de onda larga (365 nm) de luz UV, donde se observan
tonalidades entre moradas y verdosas de las muestras. El terpeno referencial utilizado (el bcariofileno - sesquiterpeno presente en varios aceites esenciales-) presenta una mancha o anillo con
un mayor radio que la muestra de la planta, que en s son un poco ms pequeas pero se muestran
con igual intensidad. Esto muestra que el anlisis dio positivo y que pueden encontrarse una gran
cantidad de terpenos o tambin pueden ser productos que interfieren en la reaccin para reconocer
los terpenos, ya que, el p-anisaldehdo no solo reacciona con estos, sino que tambin puede detectar
compuestos ribosa y desoxirribonucleicos, antioxidantes, fenoles, saponinas, glucsidos [9]. Debido
a que la reaccin transcurre a travs de intermedios catinicos sensibles a travs del proceso de
Friedel-Crafts que lo hace extremadamente sensible a la presencia de otros compuestos. [11]

CONCLUSIN

REFERENCIAS
[1] Hopkins, W.G., Hner, N.P. (2008) Introduction to Plant Physiology. 4a Ed. Wiley & Sons
Publishers. (Ontario) pp: 460-472