Manual - Bsangre2014 Rev05 2014

v2014
FACULTAD DE SALUD
ESCUELA DE TECNOLOGA MDICA
UNIVERSIDAD SANTO TOMS
SEDE SANTIAGO
MANUAL DE LABORATORIO
BANCO DE SANGRE
&
INMUNOHEMATOLOGIA
Autor
Prof. TM MgCs Guillermo Jerez
Revisado por
Prof. TM Dr. Jos Caamao
Prof. TM MgCs Franco del Valle
Prof. TM Monserrat Bustamante
INDICE
I N D I C E.......................................................................................................................................... 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD ...................................................................................................... 5
PRECAUCIONES EN LOS LABORATORIOS ............................................................................. 12
REACTIVOS USO FRECUENTE EN BANCO DE SANGRE E INMUNOHEMATOLOGIA.. 14
CALIBRACIN DE CENTRFUGA INMUNOHEMATOLGICA ............................................ 15
PREPARACIN DE GLBULOS ROJOS SENSIBILIZADOS .................................................. 17
PREPARACIN CONTROL ANTI-D ............................................................................................ 19
CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS CLASIFICADORES ABO................................... 20
Inspeccin visual .............................................................................................................................. 20
Recomendaciones de la OMS........................................................................................................... 22
CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS Rh, anti D ............................................................. 23
Inspeccin visual .............................................................................................................................. 23
Especificidad..................................................................................................................................... 23
Potencia ............................................................................................................................................ 23
Avidez ................................................................................................................................................ 23
Recomendaciones de la OMS........................................................................................................... 24
Especificidad..................................................................................................................................... 25
Potencia ............................................................................................................................................ 25
CONTROL DE CALIDAD REACTIVOS MISCELANEOS .......................................................... 26
CONTROL DE CALIDAD DEL SUERO DE COOMBS ............................................................... 27
TTULO DE LA FRACCIN IgM y DE LA FRACCIN IgG DEL REACTIVO ANTI-D......... 30
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH EN LAMINA Y TUBO ................. 31
CLASIFICACIN Rh ..................................................................................................................... 35
CLASIFICACIN ABO Y RH EN MICROPLACAS .................................................................... 36
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO POR TCNICA EN GELES BIO-TYPE ..... 39
ANLISIS DE CAUSAS DE DISCREPANCIAS EN LA CLASIFICACIN ABO/Rh ............... 41
ANLISIS DE SUBGRUPOS SANGUNEOS ............................................................................... 41
CONCLUSIONES:........................................................................................................................... 44
ANTIGENO B ADQUIRIDO POR INDIVIDUOS A1................................................................... 45
Todos los derechos de copia e impresin total o parcial de este documento debe ser con la
autorizacin expresa del autors. 2009. Guillermo A. Jerez J.
Debilitamiento de antgenos A, B y H ............................................................................................. 45

Secretores y no secretores ................................................................................................................ 45
Aglutinacin de campo mixto .......................................................................................................... 45
Discrepancias entre pruebas con eritrocitos y suero....................................................................... 46
Resolucin de discrepancias ABO ................................................................................................... 46
Resolucin de discrepancias debidas a la ausencia de antgenos esperados ................................. 47
Resolucin de discrepancias debidas a reacciones inesperadas con anti-A y anti-B ................... 47
Eritrocitos revestidos por anticuerpo ............................................................................................... 48
Resolucin de discrepancias debidas a reacciones sricas inesperadas......................................... 48
DETECCIN DE ANTGENOS SOLUBLES EN SECRECIONES ............................................ 50
PRUEBA DE COOMBS DIRECTA E INDIRECTA EN TUBO ................................................... 52
TCNICA EN GEL PARA PRUEBA DE COOMBS DIRECTA E INDIRECTA ........................ 54
Coombs directo en gel ................................................................................................................ 56
INVESTIGACIN DE MUESTRAS Rh NEGATIVAS, Rh POSITIVAS DBILES o Rh
POSITIVA PARCIAL ...................................................................................................................... 57
DETERMINACIN DEL FENOTIPO Rh-Hr Y CLCULO DEL GENOTIPO MS
PROBABLE ...................................................................................................................................... 58
Tabla 1. Genotipos probables........................................................................................................... 60
Tabla 2. Frecuencia Gentica en Poblacin de Santiago. Cuadro Comparativo. ......................... 60
Tabla 3. Frecuencia Gentica de Antgenos Rh.............................................................................. 60
CLASIFICACIN ABO Y RH EN EL RECIN NACIDO ........................................................... 61
CLASIFICACIN ABO Y RH EN EL RECIN NACIDO EN GEL(Bio-type) .......................... 62
IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES ......................................................... 65
CALCULO DE PROBABILIDAD MTODO EXACTO DE FISHER ......................................... 67
TITULACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES .................................................................. 68
ESTUDIO DE MUESTRAS CON TEST DE ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTA
POSITIVA ........................................................................................................................................ 70
TCNICA DE AUTOADSORCIN DE ANTICUERPOS CALIENTES ..................................... 73
TCNICA DE ELUCIN CIDA .................................................................................................. 76
ESTUDIO DE CRIOAGLUTININAS ............................................................................................. 77
Ttulo de crioaglutininas ............................................................................................................. 79
ESTANDARIZACIN DEL LISS ................................................................................................... 81
INTRODUCCIN:........................................................................................................................... 81
MATERIALES ................................................................................................................................. 81
ACTIVIDAD PRCTICA ................................................................................................................ 82
RESULTADOS ................................................................................................................................. 83
TCNICA DEL POLIBRENE ........................................................................................................ 84
TECNICA ENZIMATICA PAPANA EN DOS ETAPAS ............................................................. 85
BANCO DE SANGRE Y MEDICINA TRANSFUSIONAL ................................................... 87
PUNCIN SANGRE VENOSA EN BANCO DE SANGRE .......................................................... 87
EXAMEN FSICO AL DONANTE DE SANGRE ......................................................................... 89
TCNICA DE DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA (Hb) ................................................. 91
INSTRUCTIVO PARA LA SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE .............................. 94
1.- INTRODUCCIN: ...................................................................................................................... 94
DONACION EN BANCO DE SANGRE GLOSARIO DE TERMINOS ................................... 95
2.- NORMAS PARA EL LLENADO DE LA ENCUESTA: ..................................................................... 97
7.- PREGUNTAS DE LA ENCUESTA: ............................................................................................... 99
MEDICAMENTOS DISPONIBLES EN CHILE QUE PUEDEN AFECTAR LA AGREGACIN
PLAQUETARIA ............................................................................................................................. 112
MEDICAMENTOS CONTRAINDICADOS PARA DONAR SANGRE ...................................... 115
RECONOCIMIENTO Y MANEJO INICIAL DE LAS REACCIONES ADVERSAS A LA
DONACION ................................................................................................................................... 117
MANEJO DE LAS REACCIONES ADVERSAS A LA DONACION DE SANGRE .................. 119
Medidas generales.................................................................................................................. 119
Desmayos ................................................................................................................................ 119
Nuseas y vmitos .................................................................................................................. 119
Espasmos musculares y calambres ........................................................................................ 119
Hematoma .............................................................................................................................. 120
Puncin arterial. ..................................................................................................................... 120
Convulsiones ........................................................................................................................... 120
PREPARACIN DE HEMODERIVADOS Y CONTROL DE CALIDAD ................................. 122
Clculo para la extraccin de sangre de donantes que pesan menos de 50Kg..................... 122
FRACIONAMIENTO DE LA SANGRE....................................................................................... 123
CONTROL DE CALIDAD DE LOS HEMOCOMPONENTES .................................................. 126
PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES ........................................................................................ 127
DESPACHO DE TRANSFUSIONES ........................................................................................... 128

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD EN GEL ............................................................................. 130
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD RUTINARIA SALINA-POPIETILENGLICOL ................ 130
(PEG) 37C- anti-IgG ..................................................................................................................... 130
INDICACION DE LA TRANSFUSION ....................................................................................... 132
REACCIONES ADVERSAS A LA TRANSFUSIN SANGUNEA ........................................... 142
SOLUCIONES INTRAVENOSAS Y SU RELACIN CON LA TRANSFUSIN SANGUINEA
Y HEMOCOMPONENTES ........................................................................................................... 146
BIBLIOGRAFA ............................................................................................................................ 147
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
Introduccin
Debido a la importancia que involucra el Servicio de Medicina Transfusional dentro de la actividad de
un Hospital Asistencial, por su apoyo en el tratamiento de los pacientes que lo requieren y porque su
trabajo lo realiza utilizando como elemento principal SANGRE, es que se hace necesario establecer
lneas de trabajo claras a fin de:
1.- Disminuir el riesgo de accidentes al manipular en forma incorrecta objetos contaminados
protegiendo al que ejecuta el procedimiento y a terceros.
2.- Facilitar el trabajo con objetos contaminados con fluidos de alto riesgo, cumpliendo con las
PRECAUCIONES UNIVERSALES establecidas.
PRECAUCIONES UNIVERSALES
Antes de avanzar en las normas propiamente tales, es necesario dejar claro algunos conceptos
importantes para realizar nuestro trabajo, que estn vigentes en todo el quehacer del personal de
salud de nuestro pas de las cuales daremos un resumen a continuacin:
"Las Precauciones Universales de sangre y fluidos corporales, son medidas destinadas a proteger al
personal de salud de la exposicin a productos biolgicos contaminados provenientes de cualquier
paciente, en relacin a la potencial infeccin laboral producida por grmenes patgenos cuya
transmisin sea por la sangre".
Sus objetivos son:
Prevenir en el personal de salud de las potenciales exposiciones de patgenos transmitidos

por sangre y fluidos de alto riesgo.
Determinar uso racional de barreras que reduzcan el potencial riesgo de exposicin a sangre
y fluidos de alto riesgo.
FLUIDOS CORPORALES
Son todas las secreciones o lquidos biolgicos fisiolgicos o patolgicos que se producen en el
organismo.
Dada la posibilidad de transmitir patgenos se han dividido en:
1.- Fluidos corporales de alto riesgo.
2.- Fluidos corporales de bajo riesgo.
3.- Otros fluidos en rea especial.
1.- Fluidos de alto riesgo: Son aquellos en los que se ha encontrado mayor concentracin de
patgenos y que facilitan su transmisin. En estos siempre se deben aplicar las Precauciones
Universales.
- Sangre y sus derivados.
- Semen, secreciones vaginales.
- Todos los tejidos.
- LCR, lquido sinovial, lquido pleural, lquido peritoneal, lquido pericrdico, lquido amnitico.
- Fluidos corporales que contengan sangre visible.
2.- Fluidos de bajo riesgo: Si bien se han aislado virus, la frecuencia y la cantidad aislada no
representa riesgo potencial de infectarse. Se requiere solo aplicar medidas de proteccin de sentido
comn.
- Deposiciones, orina.
- Secreciones nasales, ticas.
- Lgrimas, sudor.
- Expectoracin, vmito.
- Saliva en la piel.
3.- Otros Fluidos:

a) Saliva: La excrecin viral del VIH y VHB por la saliva es escasa y ocasional. La posibilidad de
infectarse por este tipo de fluido es remota y slo aquel personal en contacto prolongado debe
tomar medidas como por ejemplo: dentistas, anestesistas, etc.
b) Leche Materna: Ha sido implicada en la transmisin perinatal del virus VIH, as como tambin VHB
en madres infectadas. No se ha implicado en la transmisin del VIH y VHB al personal de salud.
Por lo tanto no se aplican las Precauciones Universales salvo en situaciones especiales (personal que
trabaje en Lactarios).
"EL RIESGO DEL PERSONAL DE SALUD DE ADQUIRIR LA INFECCION DE HEPATITIS B, C y VIH-SIDA
DURANTE LA PRACTICA PROFESIONAL EST ASOCIADO PRINCIPALMENTE A LA EXPOSICIN
PARENTERAL CON SANGRE INFECTADA".
Para disminuir el riesgo de exposicin a sangre, fluidos corporales de alto riesgo, fluidos corporales de
bajo riesgo y otros fluidos corporales en los cuales se hace necesario aplicar las Precauciones
Universales se deberan usar las Barreras Protectoras.
BARRERAS PROTECTORAS
Debern utilizarse rutinariamente en cualquier paciente independiente de su calidad de infectado o
no, ya sea en hospitales, laboratorios, atencin ambulatoria, dilisis y anatoma patolgica.
Las precauciones universales no son solo la aplicacin de barreras protectoras, sino un cumplimiento
a las recomendaciones de rutina para prevenir infeccin. Haciendo uso de ellas en forma racional por
su elevado costo y modificando tcnicas de rutina a fin de disminuir riesgos.
EL RIESGO DE TRANSMISION INTRAHOSPITALARIA DE GRMENES POTENCIALMENTE INFECCIOSOS
TRANSMITIDOS POR LA SANGRE U OTROS FLUIDOS CORPORALES PUEDEN MINIMIZARSE, SI EL
PERSONAL DE SALUD APLICA EN LA ATENCIN DE CUALQUIER PACIENTE LAS SIGUIENTES MEDIDAS:
I. LAVADO DE MANOS: Es una de las medidas ms sencillas y ms importantes para cortar la
cadena de transmisin de infecciones. El lavado de manos y otras superficies de la piel se
realizar con agua, jabn y/o antispticos, inmediata y cuidadosamente si han sido
contaminadas con sangre y fluidos corporales. Deber realizarse de rutina independiente del
uso de guantes, antes y despus de atender a cualquier paciente.
II. PREVENIR LESIONES: Causadas por material corto-punzante, durante la realizacin de
procesamientos clnicos, de laboratorio, limpieza del material y eliminacin de desechos.
1. Material Desechable Corto-Punzante: Material como agujas bistures, hojas de afeitar, mquinas
de rasurar, catteres, teflones, venoflex, lancetas, simplate, etc.,debern ser desechados en cuanto
cese su uso.
2. Manipulacin del Material Corto-Punzante: Material corto-punzante es todo aquel que habiendo
estado o no en contacto con sangre y fluidos corporales, es capaz de producir lesiones por puncin
y/o corte, por lo que significan un riesgo para los manipuladores y para la comunidad.
Para facilitar su manejo se dividen en:
2.1. Material Cortante: Principalmente material de vidrio que no ha estado en contacto con sangre y
fluidos de alto riesgo. Frascos, vidrios, botellas, ampolletas, tubos, etc., sin sangre ni fluidos
corporales, termmetros, lminas, porta objetos, etc.
En lo que respecta a su eliminacin destacamos, en este resumen solamente lo siguiente, puesto que
se aplicar en nuestro Banco de Sangre principalmente.
Los receptculos que los recepcionen deben ser de paredes semi-rgidas (cartn o plstico) y sern
llenados solo a 3/4 partes de su capacidad.
En el servicio de Banco de Sangre dichos receptculos sern las cajas de "SAFE BOX" que vienen
rotuladas con el logo de Riesgo biolgico PELIGRO MATERIAL CONTAMINADO (ROJO)
Precauciones :
-
Manipular con precaucin, no comprimir ni apretar para evitar accidentes.
No necesita descontaminacin previa a su eliminacin.
Destino: Basura o desechos comunes, los receptculos sern retirados de las respectivas
reas sucias por el personal de aseo para transportarlas al rea de recoleccin final (rea del
compactador) siempre separadas del resto de la basura.
2.2. Material Corto-punzante: Este material necesita descontaminacin e incineracin previa a su

eliminacin. Incluye material como: agujas, lancetas, capilares, tubos de vidrio con sangre o fluidos de
alto riesgo, bistures, hojas de afeitar, tubos venoject, simplate, etc., que han estado en contacto con
sangre o fluidos de alto riesgo.
- Recomendaciones: No debern manipularse, doblarse o retaparse las agujas. En caso de ser
necesario, en su manipulacin deber utilizarse como intermediario una pinza.
- Disposicin de eliminacin:
El material corto-punzante deber eliminarse en receptculos especiales y exclusivos para este fin,
como: cajas de cartn grueso, rgida o semi-rgida, metal, plstico semi-rgido que permitan la
descontaminacin por medio del calor.
- No debe manipularse el contenido por lo cual no se recomienda uso de recuperables.

- Los dispositivos o receptculos para la eliminacin debern estar localizados lo ms cerca posible de
las reas de uso, por ej.: clnica, sala rea sucia, unidad del paciente, bandeja de exmenes.
- Una vez lleno en sus 3/4 partes deber sellarse para ser trasladado al rea sucia de material
"CORTO-PUNZANTE".
- Si se usara receptculos de cartn, tenga especial precaucin de que no se moje o humedezca, en
estos casos cubrir el interior con una bolsa plstica antes de iniciar su uso.
- Las cajas sern retiradas desde el rea sucia por el personal de Higiene Ambiental en horarios y
recorrido especfico.
- Los servicios que no dependan del servicio de recoleccin, debern llevar los receptculos de
desechos corto-punzante directamente al rea de compactacin de basura.
Precauciones:
- Necesita descontaminacin previo a su eliminacin.
- No comprimir, apretar o estrechar ni cargar los receptculos, manipule con precaucin.
-
Si no es impermeable el dispositivo, evite que se humedezca o moje durante el perodo de

servicio (proteger con bolsa plstica antes de llenarlo).
III. USO DE GUANTES DE PLSTICO, GOMA O LTEX:

El uso de guantes, puede evitar la contaminacin de las manos con fluidos corporales de alto riesgo,
pero no protege de las heridas causadas por puncin con instrumentos corto-punzantes. La
probabilidad de contaminarse con fluidos de alto riesgo depende de mltiples factores personales y
ambientales, razn por la cual se deben tener presente los siguientes aspectos:
- Uso de guantes: Al realizar una puncin venosa o arterial u otro acceso vascular; Si va a tomar
contacto con fluidos de alto riesgo; Al manipular material sucio y/o contaminado; Al limpiar
superficies manchadas con sangre o fluidos de alto riesgo.
La Seleccin de los guantes depender del tipo de procedimiento y/o tcnica a realizar, en relacin al
riesgo.
10
Recomendaciones generales
Lavado de manos antes y despus de usar guantes.
Cambiarse los guantes entre cada paciente, si no fuera posible y est usando solo guantes limpios,
lavarse las manos con los guantes entre cada atencin y entre paciente y paciente.
-
Uso de guantes de ltex estriles: En procedimientos y tcnicas que conlleven contacto con
reas normalmente estriles del organismo, en procedimientos invasivos y en los que est
alterada la integridad de la piel. En general en todos los procedimientos que requieran de
tcnicas asptica.
Uso de guantes limpios de ltex : En procedimientos que impliquen que la persona que
ejecuta la accin est en contacto con fluidos de alto riesgo o sangre. Es una medida de
proteccin para el que realiza el procedimiento.
Uso de guantes de polietileno: Se utilizan en procedimientos en donde se tiene que tomar

contacto con fluidos de bajo riesgo.
Uso de guantes domsticos : En todas las funciones de aseo que lo requieran segn la
norma; en el lavado y preparacin de material o instrumental sucio; manipulacin de ropa
sucia y basura.
Para cualquier tipo de guante es necesario recalcar que:

- Deben ser de uso personal.
- Reponerse de inmediato si estn rotos o pinchados.
-
Cada usuario responde por su desinfeccin, secado y entalcado.
Deben estar identificados.
IV. USO DE PECHERA PLASTICA:

Es necesario el uso de pechera plstica impermeable en todos los procedimientos en los que con
frecuencia se producen derrames o salpicaduras con sangre o fluidos de alto riesgo.
Ejemplos:
- Lavado de material sucio y/o contaminado.
- Procedimientos invasivos.
- Trabajo en Laboratorio de Urgencia, Laboratorio de rutina y Unidad de Donantes.
11
Caractersticas de las pecheras:

- Impermeables.
- Largas (cubrir por lo menos bajo la rodilla).
- Es suficiente su desinfeccin con solucin de cloro(30 cc por 900 de agua).
- Si se contaminan deben desinfectarse de inmediato con solucin de cloro (100 cc por 900 de
agua).
V. USO DE MASCARILLA:
Su objetivo es proteger la mucosa bucal y nasal, as como tambin la piel de la cara de eventuales
salpicaduras y aerosoles de sangre y fluidos de alto riesgo.
VI. USO DE ANTEOJOS PROTECTORES:

Su objetivo es proteger la mucosa ocular ante eventuales salpicaduras o aerosoles de sangre y fluidos
de alto riesgo.
Recomendaciones:
Los anteojos no requieren esterilizacin, solo lavar con agua y jabn (solucin desinfectante) si se
contaminan con sangre.
12
PRECAUCIONES EN LOS LABORATORIOS

La sangre y otros fluidos de todos los pacientes deben considerarse infectados.
Recomendaciones:
1. Todas las muestras de sangre y fluidos corporales deben colocarse en cajas impermeables con una
tapa segura, para prevenir accidentes, derrames o salpicaduras durante su transporte.
Debe tenerse cuidado al recolectar las muestras para evitar contaminar el exterior del tubo.
2. Todo el personal que procesa muestras de sangre y fluidos corporales debe usar guantes y pechera
impermeable.
Se deben usar mascarilla y anteojos si se prevee que las membranas mucosas entrarn en contacto
con sangre y fluidos corporales. Los guantes deben cambiarse y lavarse las manos despus del
procesamiento de las muestras.
3. Se debern usar siempre pipetas mecnicas para manipular todos los lquidos en los laboratorios.
4. El uso de agujas y jeringas debe estar limitado a situaciones en las cuales no hay otra alternativa.
Para prevenir lesiones o accidentes se deben seguir las siguientes recomendaciones:
Uso de jeringas desechable: Se recomienda su uso en todas las atenciones de pacientes. En ningn
caso se reutilizan.
Disposicin de eliminacin: En lo posible se eliminarn junto con la aguja, de no ser as se debe retirar
la aguja por medio de una pinza y eliminarla directamente en el reservorio destinado a la eliminacin
del material corto-punzante; la jeringa se elimina en los dispositivos para basura contaminada.
Uso de Material de vidrio: En este tipo de material incluimos tubos de vidrio para exmenes, placas
de vidrio, lminas, pipetas, etc., y antes de comenzar el proceso de lavado se procede a su
desinfeccin, sumergindolos en una solucin de cloro desinfectante por 30 minutos, posteriormente
se eliminan los restos de la mezcla (solucin desinfectante y restos de muestra y/o reactivos) en el
desage. En este tipo de procedimientos se deben usar guantes domsticos.
5. La descontaminacin de superficies y para la limpieza de mesones al finalizar la jornada de trabajo,
siempre y cuando las superficies estn libres de derrames de sangre y/o fluidos corporales debe
realizar con solucin de alcohol al 70%. Cada vez que ocurran derrames de sangre y fluidos corporales
se debe limpiar la superficie afectada con hipoclorito de sodio al 0,5%.
Descontaminacin de material inerte:
- Autoclave.
- Inmersin en solucin desinfectante (hipoclorito de sodio al 0,5%).
13
- Incinerar.
- Despus de descontaminado se elimina a la basura comn, de acuerdo a las normas.
6. Los equipos cientficos que han sido contaminados con sangre u otros fluidos corporales deben
descontaminarse limpindolos antes de ser reparados o transportados donde el fabricante (alcohol al
70%).
7. No est permitido comer o fumar en las reas de trabajo y menos cuando se estn procesando
muestras.
8. Las personas deben lavarse las manos despus de terminadas las actividades en el laboratorio y
retirarse la ropa protectora antes de abandonar el laboratorio.
LA IMPLANTACION DE LAS PRECAUCIONES UNIVERSALES DE SANGRE Y FLUIDOS CORPORALES PARA
TODOS LOS PACIENTES ELIMINA LA NECESIDAD DE ETIQUETAR "CONTAMINADO" LAS MUESTRAS DE
LOS PACIENTES QUE SE CONSIDERAN INFECTADOS. LA ETIQUETA ACTUAL ES SLO PARA REFORZAR
LA PRECAUCIN.
Cada laboratorio debe establecer de acuerdo al rea y al procedimiento que se realiza en esa rea, las
medidas de proteccin necesarias.
14
REACTIVOS USO FRECUENTE EN BANCO DE SANGRE E

INMUNOHEMATOLOGIA
Solucin salina (NaCl 0,9% o 0,15 M)
Buffer fosfato salino
900 ml de salino
100 ml de mezcla de buffer (16 ml de solucin A + 84 ml de solucin B, Ph 7,3)
Solucin A - buffer cido
NaH 2 PO 4 H2 O 0,16 M en agua destilada
Ph= 5
Solucin B- buffer alcalino
Na2HPO 4 0,16 M en agua destilada
Ph= 9,0
EDTA 1,5% (en suero fisiolgico)
Ajustar a pH 7 con NaOH 10N o HCl 0.1 N
Uso y mantencin: suspensin de glbulos rojos testigos para la prueba inversa, se debe
mantener a 4 C.
Solucin de sulfato de cobre
Solucin de CuSO4 densidad 1.053 (Hb 12.5 gr./dl, varones)
Solucin de CuSO4 densidad 1.052 (Hb 12 gr./dl, damas)
CuSO2 x 5 H2O: 159 grs
Agua destilada: 1000 ml
Medir la densidad la que debe ser 1.053 (Hb= 12,5 g/dl), si es necesario, ajustar.
Uso y mantencin: medicin semicuantitativa de la Hb de donantes de sangre.
Preparacin de glbulos rojos testigos A1 y B
Glbulos seleccionados para uso en la prueba inversa. Se separan 2 unidades, una del grupo A
(cuyos glbulos deben ser A1) y otra del grupo B.
Reactivos: Lectina Dolichus Biflorus (anti A1).
Antisueros monoclonales Anti A, anti B, anti AB y anti Rh.
Los glbulos rojos A1 y B se lavan por 3 veces en abundante PBS y se resuspenden en EDTA 1,5% a
una concentracin de 2-4%.
Hacer control con sueros anti A y anti B, para cada clula testigo.
15
CALIBRACIN DE CENTRFUGA INMUNOHEMATOLGICA

Calibracin de centrifugas para determinar tiempo de lavados y lectura de las clulas.
Las centrifugas de inmunohematologa deben ser calibradas desde el momento de ser recibidas y
despus de ser ajustadas o reparadas.
La calibracin de lectura y lavados se realiza preparando una batera de 10 tubos control, 5
controles + y 5 controles utilizndose suero que produzca aglutinacin de 1 cruz y glbulos rojos
con el antgeno correspondiente para el anticuerpo. Para evaluar el tiempo de lavado se debe
observar sobrenadante transparente y botn de GR definido, se bota todo el PBS y el botn se
debe resuspender con facilidad.
Se debe elegir el tiempo que cumpla con todos los requisitos detallados en la siguiente tabla:
Criterio lectura
10
20
30
45
60
90
Sobrenadante Transparente
Botn celular definido
Resuspensin fcil de las clulas
Intensidad de aglutinacin
Control Negativo es negativo
Criterio lavados
Sobrenadante Transparente
Botn celular definido
Resuspensin fcil de las clulas
Materiales:
- Suero de Antiglobulina Humana
- 5 tubos control +
- 5 tubos control
- PBS
- Suero anti D
- Suspensin de glbulos rojos al 2-4%
16
Procedimiento:
5 tubos control +: Suspensin de Gr. D+ al 2-4% incubados 15 min. a 37 C con anti D que de 1+ al
agregar suero AGH
5 tubos control : suspensin de Gr. D+ al 2-4% incubados 15 min. a 37 C con solucin de
albmina al 6%.
Llenar con PBS todos los tubos
Centrifugar de a pares uno positivo y uno negativo a diferentes tiempos 45, 60,90, 120 segundos
Agregar PBS a ambos tubos + y que de el tiempo ptimo para el lavado.
Lavar 2 veces de acuerdo al tiempo de lavado establecido
Eliminar todo el sobrenadante
Agregar a los 2 tubos (control y control +) reactivo de Coombs
Evaluar el tiempo de lectura a los 10, 20, 30 segundos
17
PREPARACIN DE GLBULOS ROJOS SENSIBILIZADOS

Principio
La prueba de Coombs usa el suero Antinmunoglobulina Humana para la deteccin de anticuerpos
unidos al glbulo rojo in vivo e in vitro. En caso de resultados negativos en cualquiera de las dos
tcnicas se debe verificar la actividad del suero luego de realizar el anlisis. Para esto se requiere
la adicin de glbulos rojos cubiertos con anticuerpos, los que deben ser pesquisados por el suero
de Coombs.
Reactivos
-
GR R1R1, R1R2 o R2R2.

Plasma de donante con Anti D, previamente separado, titulado y alicuotado en tubos
Eppendorf, para su uso como control.
PBS.
Metodologa
Se deben mantener Glbulos Rojos R1R1, R1R2 o R2R2 para este objetivo.
Los glbulos se seleccionan de las unidades ms frescas disponibles para uso. Se determina su
genotipo Rh ms probable mediante el uso de los reactivos correspondientes.
Una vez que se tienen los Glbulos disponibles, se deben tomar 2 tubos Vacutainer rojos donde se
colocan aproximadamente 4 ml de glbulos rojos en cada tubo y estos son lavados 4 veces con
PBS. Una vez lavados los glbulos, se toman 4 Tubos de vidrio de 10 ml, donde se coloca 1 ml de
glbulos lavados a cada tubo.
Paralelo a esto, debe descongelarse el plasma control Anti D a usar. En caso de que el plasma
tenga un ttulo mayor o igual a 128, se debe usar en proporcin 1 es a 1, es decir, 1 ml de glbulos
por 1 ml de plasma Anti D. Por el contrario, si el ttulo es menor a 128 debe usarse 1 ml de
glbulos y 2 ml de plasma, ya que esta es la cantidad necesaria para lograr una sensibilizacin
ptima de los glbulos rojos (esto significa que al agregar dos gotas de suero de Coombs a una
gota de stos glbulos, se pueda leer una aglutinacin de intensidad ++ a +++), la que va a
depender del ttulo previo del plasma Anti D a usar.
Incubar posterior mente los tubos a 37C por 1 hora, Agitando por inversin al comienzo de la
incubacin y cada 15 minutos hasta su trmino.
Una vez finalizado el tiempo de incubacin, se debe controlar los glbulos obtenidos previo a su
lavado, para lo cual se toma una gota de los glbulos concentrados en un tubo Kahn y se le realiza
una prueba de Coombs Directo
Este resultado debe dar intensidad de aglutinacin entre ++ y +++.
Se debe lavar los glbulos sensibilizados 4 veces con PBS, para eliminar el suero con anticuerpos
que quede libre y que podra interferir al momento de usar los glbulos como control. Luego
resuspenderlos en PBS al 2-4%.
18
Los glbulos sensibilizados se deben alicuotar en frascos con gotario, los que deben ser rotulados
como tal, con fecha de sensibilizacin y vencimiento de esta, que corresponde a dos semanas
desde la fecha de su preparacin.
Consignar en la hoja de registro correspondiente la fecha, el nmero de la bolsa anti D utilizada, el
ttulo del Anti D, el nmero de la unidad de glbulos rojos utilizados y la intensidad del Coombs
Directo.
19
PREPARACIN CONTROL ANTI-D

Metodologa
1. Tomar 2 tubos Eppendorff de plasma con Anti D.
2. Diluir el anti D con PBS en un vaso precipitado. Si el ttulo es mayor a 1/128, diluir 3 ml
aprox. (lo que tienen los tubos Eppendorff) en 100 ml de PBS. Si es menor, diluir los 3 ml
en 50 ml de PBS.
3. Agregar a la dilucin 0.5ml de Azida de sodio al 10% . Mezclar.
4. Alicuotar el plasma diluido en frascos de vidrio con gotario.
5. Marcar cada frasco con la etiqueta correspondiente, indicando fecha de elaboracin y
fecha de vencimiento. La fecha de vencimiento es 1 mes despus de su elaboracin.
20
CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS CLASIFICADORES ABO

Cada uno de los antisueros clasificadores ABO y Rh, deben cumplir ciertas condiciones de
especificidad y potencia, y los criterios de avidez si se usan en lmina. El control de calidad de
estos reactivos se debe realizar diariamente antes de su uso en el laboratorio.
Estos sueros son anticuerpos de tipo IgM monoclonales, se usan y actan a temperatura
ambiente, causando aglutinacin directa de las clulas con su antgeno respectivo. Se conservan
entre 2-8 C.
Los reactivos anti A y anti B se deben controlar con clulas testigo A y B y para controlar el suero
anti D, se usan clulas O+.
Inspeccin visual
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Etiqueta clara y legible, donde se considere especificidad y fabricante.

Fecha de vencimiento.
Identificacin del Lote .
Incluye inserto, donde se especifique naturaleza del anticuerpo (monoclonal, policlonal) y
metodologas recomendadas (clasificacin en tubo, lmina, y/o microplaca).
Apariencia fsica no presentar hemlisis, turbidez, precipitados o gel.
Cumple con los colores empleados internacionalmente (azul= anti-A, amarillo = anti-B,
incoloro = anti-AB ).
Volumen es el correcto.
21
Avidez
Capacidad de un reactivo para dar una reaccin observable (aglutinacin) en un tiempo
determinado, debe dar como mnimo 3+ dentro de 1 minuto despus de mezclar. Reactivos
usados para aglutinacin en lmina con sangre total.
Los glbulos rojos deben estar resuspendidos al 35-45 %.
Procedimiento:
En la placa de vidrio deposite 2 gotas del antisuero a estudiar y agregue el antgeno adecuado a la
concentracin utilizada. Inmediatamente encienda el cronmetro.
Registre la intensidad de los aglutinados al tiempo adecuado para la concentracin de la
suspensin empleada.
Especificidad
Capacidad de un anticuerpo para reaccionar selectivamente con su antgeno conocido, mediante
la observacin y estimacin visual de la aglutinacin. Se mide en cruces.
Procedimiento:
Utilizar muestra con EDTA con hematocrito entre 35-45%
Depositar 2 gotas de los diferentes reactivos a evaluar anti A anti B anti AB y anti D en la
lmina.
Agregar una gota de la muestra de glbulos rojos conocidos.
Evaluar especificidad de los reactivos registrando la presencia o ausencia de aglutinacin
la que se informa como:
Presencia de aglutinacin = signo + (en grado de cruces +/-,1+,2+,3+,4+)
Ausencia de aglutinacin = signo menos encerrado entre parntesis (-).
Potencia
Mide la fuerza de reaccin del anticuerpo contenido en el suero con su antgeno respectivo. Se
realiza mediante diluciones del suero en estudio (Ttulo) y se expresa con el nmero recproco de
la dilucin ms alta en la cual se observe aglutinacin de una cruz.
1- Numerar 10 tubos Kahn con los ttulos correspondientes (2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256,
512,1024)
2- A cada tubo agregar 500 l de PBS. Posteriormente agregar al primer tubo 500l de suero
a titular (dilucin ) y mezclar por agitacin lateral.
3- De esta dilucin tomar 500l y agregar al tubo siguiente (tubo n4) y mezclar por agitacin
lateral. Hacer esto sucesivamente, en orden, con el resto de los tubos hasta obtener todas
las diluciones necesarias.
4- Numerar 10 tubos Kahn 1-10
5- Transferir a estos tubos 100l de cada uno de los tubos con diluciones madres.
22
6- Paralelamente lavar dos a tres veces, ms o menos 2ml de GR apropiados para realizar el
ttulo y luego dejarlos al 3%
7- Agregar a cada tubo 50l de glbulos al 3%, apropiados para el ttulo.
8- incubar todos los tubos a temperatura ambiente durante 45 min.
9- Centrifugar y leer, comenzando desde la dilucin ms alta.
10- Registrar resultados en cruces y/o score.
Valores de referencia de titulacin.
Anticuerpo evaluado
Clulas
Titulo mnimo
Clulas
Titulo mnimo
anti-A frente a A1
128
anti-A frente a A2
64
anti-B frente a B
128
anti-AB frente a A1B

128
anti-AB frente a A2B
64
Recomendaciones de la OMS.
23
CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS Rh, anti D

Inspeccin visual
1.
2.
3.
4.
Etiqueta clara y legible, donde se considere especificidad y fabricante.

Fecha de vencimiento.
Identificacin del Lote .
Incluye inserto, donde se especifique naturaleza del anticuerpo (monoclonal,
policlonal) y metodologas recomendadas (clasificacin en tubo, lmina, y/o
microplaca).
5. Apariencia fsica no presentar hemlisis, turbidez, precipitados o gel.
6. Cumple con los colores empleados internacionalmente ( incoloro = Sueros anti-Rh y
anti-D ).
7. Volumen es el correcto.
Especificidad
Corresponde a la capacidad de un reactivo de reaccionar selectivamente con antgenos
conocidamente positivos y negativos, sin dar falsos positivos.
Para su evaluacin se necesitan clulas positivas y negativas para los antgenos segn como
muestras el siguiente cuadro.
Clulas
anti-D
D positivas
D negativas
Potencia
Se titula con un pool de por lo menos 4 glbulos rojos Rh positivos; se debe obtener un ttulo
mnimo de 16.
Avidez
Se estudia con dos glbulos RhD positivos; deben dar un grado tres dentro del primer minuto si se
ocupan glbulos rojos al 35-45 % o 2 minutos en caso de ocupar glbulos rojos al 10-20 %.
24
Recomendaciones de la OMS.
25
CONTROL DE CALIDAD DE ANTICUERPOS DE OTRAS ESPECIFICIDADES
Esto se aplica para todos los otros anticuerpos utilizados en banco de sangre.
Especificidad
Estudiar por lo menos con dos glbulos rojos que tengan dosis simple para el antgeno
dependiendo del anticuerpo utilizado y 4 glbulos rojos que sean negativos para ese antgeno. Los
resultados deben ser positivos inequvocos y claros negativos.
Potencia
Deben dar un ttulo de 4 como mnimo con glbulos rojos que tengan dosis simple para el
anticuerpo estudiado. Tanto el suero puro como el diluido 1 en 2 deben dar una reaccin de +++
como mnimo
Control de calidad reactivos celulares
Clulas recubiertas con IgG (Clulas control Coombs)
Estas clulas se utilizan en la tcnica de antiglobulina humana, para controlar que la antiglobulina
humana no se neutralice total o parcialmente, se usa en todos los test de Coombs directos e
indirectos negativos.
Los glbulos rojos O Rh positivos se les deben agregar suficiente anti-D como para que den un
resultado negativo con antiglobulina humana, al agregar un volumen de glbulos rojos y un
volumen de suero diluido 1 en 1000, pero deben permanecer positivos si en vez de suero diluido
se adiciona un volumen se suero fisiolgico.
26
CONTROL DE CALIDAD REACTIVOS MISCELANEOS

La soluciones de salina de baja fuerza inica deben tener las siguientes parmetros:
pH 6,5 7 a 22 1 C.
Conductividad 3,4 4 mS/com
Osmolaridad 285 305 mOsmol/Kg.
27
CONTROL DE CALIDAD DEL SUERO DE COOMBS
ANTI-GLOBULINA HUMANA (SAGH)

Para analizar el ttulo y la sensibilidad del suero de Coombs se utilizan glbulos rojos sensibilizados
con anticuerpos a diferentes concentraciones.
Materiales:
-Pipetas de 1ml
-Bao termoregulado a 37 C
-Centrfuga inmunohematolgica
-Tubos de 10x75 mm
-Fuentes iluminadora
Reactivos
-Suero anti-D IgG Humano
-Glbulos rojos O Rh Positivo
Metodologa
Preparar diluciones seriadas del suero anti-D ( ......1/1024), 1 ml de cada solucin.

Preparar glbulos rojos lavados al menos 3 veces (3 a 4) con P.B.S. y resuspenderlos al
5%.
Agregar GR preparados Volumen /Volumen a cada dilucin del suero anti-D. Colocar
control negativo con PBS
Incubar 60 minutos a 37 C.
Luego de la incubacin centrifugar y leer. Anotar sus resultados.
Lavar 4 veces con PBS los GR sensibilizados y resuspenderlos en PBS a una concentracin
final de 2-4%.
28
En el ltimo lavado eliminar enrgicamente el sobrenadante, secar en toalla absorbente de tal

manera de dejar un botn globular lo ms seco posible.
Agregar 2 gotas de suero de Coombs conocido a cada suspensin de GR. Anotar sus
resultados.
Preparar el suero de Coombs en estudio haciendo diluciones seriadas desde a 1/64
teniendo presente de dejar un volumen final de 1,5 ml.
Preparar 54 tubos enumerados segn esquema adjunto (tablero Ajedrez)
Agregar 2 gotas de GR sensibilizados con una dilucin de a los tubos 1, 10, 19, 28, 37 y
46. Efectuar lo mismo con todas las diluciones de GRs.
Agregar 2 gotas de la dilucin de suero de Coombs a los tubos que estn en la fila 1, 2,
3, 4, 5,....9. Efectuar lo mismo con las dems filas.
Mezclar la gradilla y centrifugar todos los tubos con procedimiento estndar.
Leer en fuente luminosa, anotar sus resultados.
INTERPRETACIN
Ttulo mnimo del suero de Coombs de ser de 1/64 (tubo 46)
La sensibilidad del suero de Coombs debe ser como mnimo con un ttulo de
1/1024 (tubo 9), 200 a 300 IgG por GR.
El ttulo del suero de Coombs est dado por la columna que se utilizaron GRs
tratados con anti-D .
La potencia est determinada por la fila en donde se utiliza la dilucin de del
suero de Coombs.
El control de sensibilidad y potencia del suero de Coombs se debe realizar cada vez que se cambia
de lote y/o proveedor del reactivo y como control rutinario utilizando los ttulos de sensibilidad y
potencia lmites.
29
Diluciones
Glbulos Rojos Sensibilizados con anti-D IgG
SAGH
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64
1/128
1/256
1/512
1/1024
1/2
1/4
10
11
12
13
14
15
16
17
18
1/8
19
20
21
22
23
24
25
26
27
1/16
28
29
30
31
32
33
34
35
36
1/32
37
38
39
40
41
42
43
44
45
1/64
46
47
48
49
50
51
52
53
54
30
TTULO DE LA FRACCIN IgM y DE LA FRACCIN IgG DEL REACTIVO ANTI-D.

Ttulo de la fraccin IgM: Se realiza una dilucin madre del suero a evaluar y el suero de referencia
(Novaclone IgM/IgG). Se usan GRO R2R2 al 3% para el ttulo, los cuales estn previamente lavados
dos a tres veces.
Realizar ttulo, detallado anteriormente.
Ttulo de la fraccin IgG: Se debe tratar el suero para eliminar la IgM en forma previa, esto se
realiza con el tratamiento del suero con DTT (Dithiothreitol), el cual est congelado-30C.
Se diluye el DTT 0.2 M a una concentracin 0.01 M. Por ejemplo 100l de DTT 0.2M y 1900l de
PBS.
Mezclar con el suero a tratar en proporcin 1:1 (ej. 500l de DTT 0.01M y 500l suero).
Al mismo tiempo hacer un tubo control, el cual se agrega un volumen de suero y PBS en
proporcin 1:1. Incubar ambos tubos a 37C por 1 hora.
Una vez terminado el periodo de incubacin, probar la eliminacin de la fraccin IgM, para lo cual
se rotulan dos tubos, uno para el suero con DTT 0.01M y el otro con PBS.
Agregar dos gotas de suero con DTT 0.01M y dos gotas de suero con PBS a cada tubo segn
corresponda y agregar a los tubos una gota de GR O+.
Centrifugar y leer, El tubo tratado con DTT debe dar una aglutinacin negativa, mientras que el
control con PBS debe dar una aglutinacin fuertemente positiva, esto evidencia que el DTT fue
capaz de inactivar la fraccin IgM del Anti-D y que el suero no se inactiva por la incubacin (tubo
control).
Realizar ttulo, detallado anteriormente.
Despus del punto 7 incubar los tubos a 37 C por 5 minutos, luego de eso lavar tubos por 4 veces,
repetir lavado por 3 veces ms, luego del ltimo lavado eliminar todo el PBS, agregar 2 gotas de
suero de Coombs, centrifugar y leer.
Registrar en cruces y score.
El ttulo que se lee no es el real, puesto que el antisuero ya est diluido (tratado con DTT), por lo
tanto el ttulo es una dilucin ms de la que se observa, y el score son 10 puntos ms.
31
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH EN LAMINA Y TUBO

Introduccin
Los antgenos A y B pertenecientes a este sistema, han sido la base para clasificar a los
individuos en cuatro grupos sanguneos: A, B, AB y O.
Estn presentes en la mayora de las clulas del organismo, excepto en las del SNC y del
tejido conectivo.
Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan antgenos de tipo A
en su superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el suero de su sangre.
Las personas con sangre del tipo B tienen la combinacin contraria, glbulos rojos con
antgenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antgenos A en el suero de su sangre
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antgenos (A y B) en
la superficie de sus glbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras
que las personas con tipo AB expresan ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de
los dos anticuerpos.
Los anticuerpos contra el antgeno que no se expresa, son llamados anticuerpos naturales,
generalmente de tipo IgM y aparecen a los 3 meses de vida.
La clasificacin ABO consta de 2 mtodos:
Mtodo directo: se usan los sueros clasificadores, investigar antgenos en los glbulos rojos.
Mtodo inverso: Se usan los glbulos rojos testigos, investigar anticuerpos naturales (IgM) en el
suero en estudio.
1. Mtodo directo: prueba en lmina y tubo.
Muestra: sangre total con o sin anticoagulante
Materiales
-Pipetas Pasteur
-Tubos Kahn
-Centrfuga para Inmunohematologa.
-Fuente de luz.
-Lminas
-Bagueta
Reactivos
-Sueros anti A, anti B, anti AB.
-Glbulos rojos testigos A1 y B lavados y resuspendidos en EDTA o PBS, al 4 %.
La suspensin debe prepararse diariamente.
-EDTA
-PBS
32
Tcnica en lmina
Slo para reclasificar muestras sanguneas.
1.
2.
3.
4.
En lmina de vidrio disponer de 1 gota de cada antisuero monoclonal conocido

Agregar 1 gota de suspensin de glbulos rojos 50% en solucin salina, suero o plasma.
Mezclar con bagueta y hacer girar la lmina manualmente
Leer en un mximo de 2 minutos.
Tcnica en tubo
Los tubos de Kahn se rotularn de la siguiente manera: A, B, AB, TS (testigo salino), y con las
iniciales del paciente o nmero de donante.
1. Colocar una gota de anti-A monoclonal en un tubo limpio y rotulado.
2. Colocar una gota de anti-B monoclonal en un segundo tubo limpio y rotulado.
3. Colocar una gota de anti-AB monoclonal en un tercer tubo limpio y rotulado.
4. Aadir a cada tubo una gota de suspensin de glbulos rojos problema al
2-4%.
6. Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugarlos segn el tiempo estandarizado
de lectura.
7. Resuspender suavemente los sedimentos de glbulos rojos y examinar la aglutinacin.
8. Anotar los resultados de la prueba. Confirmar los resultados con los obtenidos en las pruebas
ABO en suero.
2. Mtodo inverso.
Muestra: suero o plasma
Materiales
-Pipetas Pasteur
-Tubos Kahn
-Centrfuga para Inmunohematologa.
-Fuente de luz.
Reactivos
Glbulos rojos testigos A1 y B lavados y resuspendidos en EDTA 1,5 % o
suspensin debe prepararse diariamente.
PBS, al
2-4 %. La
Tcnica en tubo
Los tubos de Kahn se rotularn de la siguiente manera: A1, B, (opcional A2), y con las iniciales del
paciente o nmero de donante.
33
1. Colocar una gota de glbulos rojos reactivos comerciales del grupo A1 en un tubo limpio y
rotulado.
2. Colocar una gota de glbulos rojos reactivos comerciales del grupo B en un segundo tubo limpio
y rotulado.
3. Colocar una gota de glbulos rojos reactivos comerciales A2 en un tercer tubo, si van a
realizarse pruebas en paralelo con este reactivo.
(Nota: las pruebas con glbulos rojos A2 son opcionales. Ej.: Discrepancias o subgrupo del sistema
ABO.)
4. Aadir a cada tubo una gota de suero problema.
5. Mezclar suavemente el contenido de los tubos e incubarlos a temperatura ambiente durante 5
minutos para potenciar reacciones dbiles.
6. Centrifugar segn el tiempo estandarizado de lectura.
7. Anotar los resultados de la prueba. Confirmar los resultados de la prueba en suero con los
obtenidos en la prueba globular.
Interpretacin
-La aglutinacin de los glbulos rojos en estudio y la hemlisis o la aglutinacin en el suero,
constituyen resultados positivos.
-La suspensin uniforme despus de la resuspensin de las clulas, constituye un resultado
negativo.
-Todas las discrepancias entre los resultados de las pruebas en el suero y las clulas deben
resolverse antes de registrar el informe del grupo ABO y Rh de la muestra.
Protocolo de registro de resultados
Muestra
Mtodo directo
Anti-A Anti B Anti-AB
Grupo Rh
Anti-D
Mtodo inverso
A1
A2
B
Interpretacin
1
2
3
4
Lectura de aglutinacin:
La lectura de aglutinacin debe hacerse en forma lenta y sobre una fuente de luz. De acuerdo a lo
que se vea en los tubos se grada en cruces (+), segn lo detallado:
4+ o ++++
3+ o +++
2+ o ++
1+ o +
W o +/-
:
:
:
:
:
Aglutinado grande y firme, fondo claro.

Varios Aglutinados grandes, fondo claro.
Aglutinados medianos y/o pequeos, fondo claro.
Aglutinados muy pequeos, fondo rosado, reaccin dbil a simple vista.
Aglutinados ms pequeos an, fondo rosado, reaccin muy dbil, difcil de leer.
34
Score de aglutinacin:
Este indicador se usa para hacer control de calidad en antisueros y el reactivo que muestre mayor
score en una titulacin posee mayor potencia.
El Score es la suma de cada uno de los scores individuales obtenidos, para ello se ha asignado
valores a cada grado de aglutinacin.
Interpretacin aglutinacin en tubo
Score(Puntaje)
Negativo
(-)
Suspensin de glbulos rojos uniforme
Positivo
Granularidad dbil en la suspensin de glbulos rojos.
Muchos aglutinados de pequeo tamao y un fondo de
+/1+
glbulos rojos libres.

2+
Aglutinados grandes en un mar de aglutinados ms
pequeos, sin glbulos rojos libres.

3+
Reaccin potente. Varios aglutinados grandes.
10
4+
Aglutinado nico. No se detectan glbulos rojos libres
12
Ref. Manual Tcnico AABB 13 Edicin.
35
CLASIFICACIN Rh
El sistema Rhesus, est constituido por unos 40 antgenos siendo 5 de estos importantes desde el
punto de vista clnico. Son los llamados antgenos mayores D, C, E, c, e.
En los bancos de sangre generalmente solo se estudia el antgeno D, ya que produce la
aloinmunizacin ms frecuente.
Los anticuerpos anti D son de tipo IgG y se producen por aloinmunizaciones previas, ya sea por
embarazo o transfusiones.
Reaccionan mejor en SAGH a 37 C.
El 85% de los individuos caucsicos expresan el antgeno D y se les denomina Rh positivos, si el
antgeno no se expresa 15% , se denomina Rh negativos.
Muestra
Sangre completa con o sin anticoagulante
Reactivos
Suero anti D (mezcla IgM e IgG)
PBS
Tcnica en lmina
1. En lmina de vidrio disponer de 1 gota de suero anti D
2. Agregar 1 gota de suspensin de glbulos rojos 50% en solucin salina, suero o plasma.
3. Mezclar con bagueta y hacer girar la lmina manualmente
4. Leer en un mximo de 2 minutos.
Tcnica en tubo
Los tubos de Kahn se rotularn de la siguiente manera: D, TA (testigo albuminoso), y con las
iniciales del paciente o nmero de donante.
1. Colocar una gota de antisuero anti-D en un tubo limpio y rotulado.
2. Colocar una gota de albmina al 30% como testigo en un segundo tubo limpio y rotulado.
3. Aadir a cada tubo 1 gota de la suspensin de glbulos rojos problema al 2-5%.
4. Mezclar y centrifugar segn el tiempo estandarizado de lectura..
5. Resuspender suavemente el sedimento de glbulos rojos y examinar la aglutinacin.
6. Anotar los resultados de la prueba y los controles.
Interpretacin
-Si hay aglutinacin, se denomina Rh D positiva
-Si no hay, seguir estudiando la muestra para investigar presencia de antgeno D dbil.
36
CLASIFICACIN ABO Y RH EN MICROPLACAS

Tipificacin ABO de los glbulos rojos y suero en microplacas.
La microplaca es una matriz de 96 microcubetas en forma de U o de V.
La ms utilizada es la microcubeta en forma de U, porque permite leer los resultados despus de
centrifugar la placa.
Las tcnicas en microplacas pueden usarse para investigar antgenos ABO en los glbulos rojos y
anticuerpos en el suero.
Materiales
Microplacas
Micropipetas automticas
Tubos khan
Equipos
Centrifuga con porta microplacas, estandarizadas
Agitador estandarizado para resuspensin de Gr.
Muestra
Sangre coagulada o anticoagulada.
Reactivos
Anti A monoclonal
Anti B monoclonal
Anti AB
Estandarizados para microplaca
Glbulos rojos A1, A2 (opcional) y B (suspensin al 2-5%)
Procedimientos:
Prueba en glbulos rojos
1.
2.
3.
4.
5.
Colocar 1 gota de cada antisuero en cada una en distintas microcubetas

Agregar 1 gota de suspensin de glbulos rojos al 2-5% en solucin salina
Mezclar, golpeando el borde de la microplaca
Centrifugar bajo condiciones apropiadas
Resuspender las clulas manualmente o mediante agitador mecnico
37
6. Leer. Comparar resultados con los obtenidos en el suero.

Pruebas en suero
1. Agregar 1 gota de glbulos rojos A1, A2 (opcional) y B (suspensin al 2-5%) en cada una en
distintas microcubetas
2. Agregar 1 gota de suero o plasma en estudio a cada microcubeta
3. Mezclar, golpeando el borde de la microplaca
4. Centrifugar bajo condiciones apropiadas
5. Resuspender las clulas manualmente o mediante agitador mecnico
6. Leer. Comparar resultados con los obtenidos en los glbulos rojos.
Nota: Para potenciar reacciones dbiles, es factible incubar las placas a temperatura ambiente
durante 5-10 minutos y repetir centrifugacin, lectura y registro.
Tipificacin Rh en microplacas.
Reactivos
Anti D monoclonal IgG o IgG + IgM, adems tener un suero anti D de otra marca para repetir las
muestras negativas en tubo o gel.
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Colocar 1 gota de anti D en 1 microcubeta de una microplaca

Agregar 1 gota de suspensin de glbulos rojos al 2-5% en solucin salina
Mezclar, golpeando el borde de la microplaca
Centrifugar bajo condiciones apropiadas
Resuspender las clulas manualmente o mediante agitador mecnico
Leer, interpretar y registrar los resultados.
Interpretacin
- La aglutinacin en las microcubetas de los glbulos rojos en estudio y la hemlisis o la
aglutinacin en las microcubetas del suero, constituyen resultados positivos.
- La resuspensin uniforme de las clulas, constituye un resultado negativo.
- Todas las discrepancias entre los resultados de las pruebas en el suero y las clulas deben
resolverse antes de registrar el informe del grupo ABO y Rh de la muestra.
38
Equipamiento Sistema Automatizado

Equipo de carga para microplacas.
Centrfuga.
Agitador.
Lector de reaccin.
Programa computacional
Reactivos
Antisueros diluidos.
Glbulos rojos testigos.
Diluyente.
Solucin de lavado.
Microplacas.
96 pocillos en forma de U.
Fila A dispensar 1 gota de anti-A
Fila B dispensar 1 gota de anti-B
Fila C dispensar 1 gota de anti AB
Fila D dispensar 1 gota de anti-D
Fila E dispensar 1 gota de anti-D
Fila F dispensar 1 gota de PBS
Fila G y H dispensar 1 gota glbulos rojos testigos a cada pocillo para prueba inversa.
39
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO POR TCNICA EN GELES BIOTYPE

Consiste en una tarjeta gel, constituida por 6 microtbulos, cada uno de ellos conformado por una
columna y una cmara de dispersin/ incubacin.
La tecnologa de microtipificacin en gel se basa en la separacin por tamao de los glbulos rojos
aglutinados, durante el proceso de centrifugacin en un gel poroso, los aglutinados grandes
quedan atrapados en la zona superior y los pequeos a lo largo de la columna, esta aglutinacin
se produce al reaccionar el antgeno con los anticuerpos correspondientes. Los eritrocitos que no
reaccionan quedan en el fondo de la columna.
Materiales
-
Pipetas automticas 100 l.

Puntas de pipetas desechables
Tubos de vidrio
Tarjetas Gel Bio-Type ABO/D/D/PI, ABO / Rh con Prueba Inversa
Incubador para Tarjetas Gel
Centrfuga para Tarjetas Gel
Hemates Testigos A1 y B para prueba inversa.
Solucin I (Liss)
Reactivos
La tarjeta Bio-Type ABO/D/D/PI contiene anticuerpos Monoclonales Anti-A Anti-B, Anti-D IgM,
Anti-D IgM/IgG y Anti-D IgG.
Suspensin neutra adecuada para realizar la prueba inversa en presencia de glbulos rojos A1 y B.
Preparacin de la muestra
a.- Determinacin ABO y Rh (prueba directa)
Preparar una suspensin de Glbulos Rojos al 1% en la solucin I de la siguiente forma:
Dispensar 2 volmenes de solucin I (Liss) (1 ml) a un tubo y agregar 10 ul de glbulos rojos
concentrados.
b.- Prueba Inversa.
Se puede utilizar suero o plasma. Los G.R. A1 + B deben se diluidos al 1% en solucin I, de acuerdo
a la siguiente proporcin:
Dispensar un volumen (500 ul)
: 4 gotas de GR.
Dispensar dos volmenes (1000 ul) : 8 gotas de G.R
Dispensar tres volmenes (1500 ul ) : 12 gotas de G.R
40
1.- Determinacin de antgenos de sistema ABO/Rh

- Identificar tarjetas y muestras a utilizar.
- Aadir 50 ul de la suspensin de glbulos rojos del paciente a c/u de los pocillos 1 al 4. ( A, B, D).
2.- Determinacin prueba inversa ABO
-
Aadir 50 ul de glbulos rojos A1 al pocillo 5, y 50 ul de glbulos rojos B al pocillo 6.

Agregar 50 l de suero o plasma del paciente a los pocillos 5 y 6.
Incubar 10 min a T Ambiente
Centrifugar 10 min a velocidad estandarizada, leer resultados.
Resultados
NEGATIVO
Banda de hemates al fondo de la columna, resto de la columna sin

aglutinados
POSITIVO
+/1+
2+
3+
4+
Escasos glutinados de pequeo tamao en la columna.

Algunos aglutinados pequeos en la columna
aglutinados pequeos en la columna y a lo largo de la columna
Banda superior de aglutinado
Banda de aglutinados en la parte superior de la columna.
Doble poblacin (doble banda de hemates , en el fondo y en la parte
superior.
DP
41
ANLISIS DE CAUSAS DE DISCREPANCIAS EN LA CLASIFICACIN ABO/Rh

Discrepancias en la clasificacin ABO/Rh
La mayora de los grupos sanguneos ABO que se determinan en el banco de sangre cumplen con
leyes establecidas de antgenos y anticuerpos correspondientes para ese sistema, pero hay una
poblacin que presenta discrepancias que deben ser resueltas para definir el grupo exacto. Estas
diferencias se pueden presentar al detectarse subgrupos dbiles de A ( A3, Am, Ax, Ael, Aend ) y de B
(B3, Bx y Bm) que se resuelven generalmente con tcnicas de adsorcin-elusin e investigacin de
sustancias A, B y H en la saliva de secretores que presentan estas incongruencias. Otro tipo de
discrepancias se presentan en personas con anticuerpos naturales irregulares como anti-A1, antiH, -M, -N, -P1, Lea, Leb; anticuerpos inmunes que se detectan en medio salino como producto de
una reaccin primaria o en pacientes con anemia hemoltica autoinmune y en sujetos con
complejos inmunes relacionados a SIDA o con protenas anormales como en el mieloma mltiple.
Las posibles causas de discrepancias en la clasificacin se pueden deber a diversos factores,
entre los cuales los ms comunes son:
Los subgrupos sanguneos
Doble poblacin
Presencia de gelatina de Wharton en las muestras de recin nacidos
Incompatibilidad materno-fetal, que en el momento de la clasificacin se hace evidente.
ANLISIS DE SUBGRUPOS SANGUNEOS

Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad de antgeno presente en los
eritrocitos y en la saliva de los secretores. Se hallan con mayor frecuencia y tienen ms relevancia
clnica los de A, que los de B.
Al utilizar lectinas se definen los subgrupos: A1 y A2: con el extracto de Dolichos biflorus se
aglutinan los eritrocitos A1, pero no los de A2; y el anti-H, proveniente de la semilla Ulex europeus,
aglutina los eritrocitos que tienen antgeno H. Los eritrocitos de recin nacidos que son
genticamente A1 reaccionan de forma relativamente dbil con el anti-A1 humano. Los eritrocitos
fetales A2 se comportan como los Ax adultos porque las transferasas actan de manera lenta en
los RN.
Cuando se comparan las reacciones de los eritrocitos de los nios y adultos de grupo A con sueros
anti-A, slo se encuentran pequeas diferencias en cuanto la aglutinacin de los eritrocitos
suspendidos en medio salino, pero las diferencias son ms evidentes en la prueba de antiglobulina
indirecta (anti-IgG) y las pruebas de LISS (Low Ionic Strength Solution).
42
Lectina Anti- A1 (Dolichos biflorus)

El sistema de grupos sanguneos ABO sigue siendo el primero a tener en cuenta en el momento de
realizar una transfusin de sangre. Los antgenos A y B son productos gnicos fcilmente
detectables y constituyen marcadores genticos de gran valor. Entre los individuos A, se
distinguen 2 categoras: A1 y A2.
La diferenciacin entre ambas se realiza mediante la utilizacin de anticuerpos monoclonales y
lectinas especficas de grupo sanguneo Dolichos biflorus (anti A1), la cual reacciona aglutinando
las clulas que poseen el antgeno A1.
MATERIAL Y EQUIPO
Tubos Kahn
Cronmetro
Marcador
Centrfuga serolgica
MUESTRA BIOLGICA
REACTIVO
Glbulos rojos de donante o Lectina anti-A1
paciente
Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados.

Adicione una gota de una suspensin de eritrocitos a una concentracin aproximada del 4% en
solucin salina (PBS). Mezcle completamente el contenido del tubo.
Centrifugar segn el tiempo estandarizado de lectura.

Agite suavemente el tubo y resuspenda el botn celular. Examine las reacciones resultantes
macroscpicamente. Registre resultados.
43
Lectina Anti H (Ulex europeaus)

La lectina Ulex europeaus tiene la propiedad de aglutinar las clulas que expongan el antgeno H
en su superficie.
Existe un fenotipo eritrocitario relativo a la ausencia del antgeno H en la superficie llamado
Fenotipo Bombay, en el cual el paciente que necesitase recibir transfusin de glbulos rojos,
necesita exclusivamente eritrocitos con la ausencia del antgeno H, ya que puede poseer
anticuerpos anti-H; antgeno presente en la mayor parte de la poblacin.
MATERIAL Y EQUIPO
Tubos Kahn
Cronmetro
Marcador
Centrifuga serolgica
MUESTRA BIOLGICA
REACTIVO
Glbulos rojos de donante o Lectina anti-H
paciente
Adicione una gota de una suspensin de eritrocitos a una concentracin aproximada del 4% en
solucin salina (PBS) en un tubo de ensayo debidamente marcado. Mezcle completamente el
contenido del tubo.
Adicione dos gotas de lectina anti-H y mezcle completamente el contenido del tubo. Incube
durante 5 minutos a temperatura ambiente.
Centrifugar segn el tiempo estandarizado de lectura.

Agite suavemente el tubo y resuspenda el botn celular. Examine las reacciones resultantes
macroscpicamente. Registre resultados.
44
Prueba positiva: Aglutinacin de los globulos rojos.

Prueba negativa: Ausencia de aglutinacin de los globulos rojos
CONCLUSIONES:
Para realizar una transfusin sangunea se debe tomar en cuenta los subgrupos del donante y del
receptor. Los subgrupos con mayor frecuencia y tienen ms relevancia clnica los de A, que los de
B. Se identifican por medio de lectinas. Los subgrupos A ms importantes son: A1 y A2.
45
ANTIGENO B ADQUIRIDO POR INDIVIDUOS A1

El B adquirido podra deberse a la accin de la desacetilasa bacteriana, que convierte la Nacetilgalactosamina en -galactosamina, la cual es muy similar a la galactosa, el principal
determinante de B. Las clulas B adquiridas se hacen ms reactivas frente al extracto de Dolichus
biflorus.
Tambin pueden presentar activacin T o Tk, estando mediadas todas esas alteraciones por
enzimas bacterianas en pacientes que cursan con una infeccin importante como la de colon.
Otro mecanismo de produccin de grupo B adquirido secundario a la absorcin de sustancias
bacterianas semejante al grupo B se observa en personas infectadas por Proteus vulgaris o
Escherichia coli.
Se ha descrito un grupo B adquirido que se detecta slo en clulas del grupo A de expresin dbil.
Debilitamiento de antgenos A, B y H
El debilitamiento de la expresin de antgenos AB puede observarse en las personas de edad
avanzada (aparentan ser grupo O); los anticuerpos anti-AB tambin pueden sufrir cambios en
estos sujetos.
En pacientes que estn recibiendo quimioterapia inmunosupresora la concentracin de
anticuerpos disminuye significativamente. En ocasiones la sangre parece contener una mezcla de
clulas de los grupos A y O, o de A1 y A dbil; en otros casos, los eritrocitos reaccionan dbilmente
con el anti-A y se comportan de manera parecida al A3 o al Am.
Secretores y no secretores
Los genes secretores Se y se controlan la secrecin de H, A y B. Alrededor de 80 % de los
individuos son secretores y segregan la sustancia H, independientemente de su grupo ABO; as la
saliva de secretores de grupo O contiene H y la de secretores de grupo A contiene A y H. 20% de
los individuos que no segregan sustancia H (no secretores) tampoco segregan A ni B.
Aglutinacin de campo mixto

Trmino que trata de describir la presencia de eritrocitos aglutinados y no aglutinados en
suspensiones tratadas con una aglutinina. Esto quiere indicar que existen dos poblaciones
fenotpicamente distintas, como sucede en pacientes transfundidos, en mujeres que contienen en
circulacin eritrocitos fetales, o cuando alguno de los eritrocitos de un sujeto ha sufrido
transformacin T o Tn.
46
Puede verse una morfologa similar en mezclas de suspensiones eritrocitarias de un nico

fenotipo, cuando los eritrocitos tienen pocos lugares antignicos (por ejemplo, variantes dbiles
de A), o cuando la aglutinina es de ttulo bajo.
Discrepancias entre pruebas con eritrocitos y suero

Los resultados de las pruebas con eritrocitos y con suero pueden ser discrepantes debido a los
problemas intrnsecos de los eritrocitos o del suero, debido a problemas relacionados con la
prueba, o a errores tcnicos, ya sea que se han obtenido resultados negativos cuando se
esperaban positivos o viceversa.
Falsos negativos
Pueden tener lugar debido a la omisin de:
- Agregar reactivo o suero de prueba a un tubo.
- No Identificar la hemlisis como una reaccin
positiva.
- Uso de una relacin inapropiada entre suero
(reactivo) y eritrocitos.
- Centrifugar insuficientemente las pruebas.
- Interpretar o registrar incorrectamente los
resultados de las pruebas.
Falsos positivos
Los resultados pueden ocurrir por:
- Sobrecentrifugacin de los tubos.
- Uso de reactivos, eritrocitos o solucin salina
contaminados.
- Uso de material de vidrio sucio.
- Autoaglutinacin de los eritrocitos del paciente y
realizacin slo del grupo directo sin autotestigo.
- Interpretacin o registros incorrectos de los
resultados de las pruebas.
Resolucin de discrepancias ABO

El primer paso debe ser la repeticin de las pruebas en la misma muestra. Si las pruebas iniciales
fueron efectuadas con eritrocitos suspendidos en suero o plasma, se debe repetir la prueba,
usando una suspensin salina de clulas lavadas. Si persiste la discrepancia se procede a lo
siguiente:
Obtener una nueva muestra (donante o receptor) y someter sta a prueba; esto resuelve
las discrepancias debidas a un rotulado equivocado o contaminacin de muestra.
Lavar los eritrocitos varias veces para eliminar componentes sricos o qumicos que
puedan estar causando reacciones positivas.
Someter a prueba los eritrocitos con anti-A, B, anti-A1 o anti-H, segn corresponda.
Si se sospecha anti-A1, examinar el suero contra varios ejemplos de eritrocitos del grupo
A2.
Revisar los resultados de la prueba de investigacin de anticuerpos contra eritrocitos del
grupo O para detectar efectos de interferencia por aloanticuerpos fros inespecficos.
Incubar las pruebas durante 30 minutos a temperatura ambiente para facilitar la
deteccin de antgenos o anticuerpos dbiles.
47
Resolucin de discrepancias debidas a la ausencia de antgenos esperados

Se pueden usar los siguientes procedimientos para intensificar la deteccin de antgenos
dbilmente expresados:
Incubar eritrocitos lavados con anti-A y anti-A, B durante 30 minutos a temperatura

ambiente para incrementar asociacin de anticuerpos con escasa cantidad de antgeno.
Incubar a 4 C puede intensificar an ms la fijacin del anticuerpo, pero deben ser
controladas con eritrocitos de grupo O y autlogos para asegurar que las reacciones son
debidas a anti-A y anti-B y no a otras aglutininas fras.
Tratar los eritrocitos del paciente con una enzima proteoltica, como ficina, papana, o
bromelina. El tratamiento enzimtico incrementa la reaccin antgeno-anticuerpo con
anti-A o anti-B. Paralelamente se deben incluir eritrocitos del grupo O tratados con
enzimas como control de la especificidad de la reaccin ABO.
Realizar adsorcin-elusin con anti-A o anti-B humanos para adsorber el anticuerpo a los
correspondientes antgenos eritrocitarios. No se debe usar anti-A1 o reactivos
monoclonales y debe hacerse en paralelo con eritrocitos de grupo O para control.
Buscar en la saliva la presencia de sustancias H, A o B.
Resolucin de discrepancias debidas a reacciones inesperadas con anti-A y anti-B

Las pruebas de agrupacin de eritrocitos dan reacciones inesperadas, pueden ser responsables
alelos variantes en el locus ABO o problemas no relacionados con los genes ABO. Para confirmar
que los eritrocitos del grupo A1 portan la estructura adquirida B:
Verificar el diagnstico del paciente. Los antgenos adquiridos B suelen relacionarse con
afecciones hsticas que permiten ingresar a las bacterias del colon a la circulacin.
Someter a prueba el suero del paciente contra eritrocitos autlogos. El anti-B del
individuo no aglutina sus propios eritrocitos que portan el B adquirido.
Someter a prueba los eritrocitos con suero anti-B humano que ha sido acidificado a pH
6,0. El anti-B humano acidificado no reacciona con el antgeno B adquirido.
Si el paciente es secretor, comprobar la presencia de A y B en la saliva. Los secretores

cuyos eritrocitos portan estructuras B adquiridas tienen sustancias A, pero no B en su
saliva.
48
Eritrocitos revestidos por anticuerpo

Los eritrocitos de lactantes con EHRN, o adultos que padecen de afecciones autoinmunes o
aloinmunes, pueden estar tan intensamente revestidos de molculas de anticuerpos IgG como
para aglutinarse en forma espontnea en presencia de diluyentes de reactivos que contengan
altas concentraciones de protenas.
Se puede usar una elusin suave a 45 C o con glicina a pH cido, para eliminar gran parte de este
anticuerpo de los eritrocitos de modo que se pueda someter a prueba en forma confiable con
anti-A y anti-B.
Los eritrocitos de una muestra que contenga autoaglutininas IgM reactivas con el fro pueden
aglutinar en forma espontnea en pruebas de solucin salina. Por lo comn, los anticuerpos
pueden ser eliminados incubando la suspensin celular a 37C y luego lavando varias veces con
solucin salina calentada a 37 C. Si la aglutinacin relacionada con IgM no es eliminada por esta
tcnica, los eritrocitos pueden ser tratados con ditiotreitol (DTT).
Resolucin de discrepancias debidas a reacciones sricas inesperadas

Algunos acontecimientos pueden ocasionar resultados inesperados o errneos de pruebas en
suero, que pueden ser resueltos.
Los pacientes inmunodeficientes pueden no producir niveles detectables de anti-A y antiB; estos anticuerpos estn ausentes del suero de recin nacidos, o ser muy dbiles en
personas seniles normales, pacientes que cursan con hipogamaglobulinemias y pacientes
con transplantes de medula sea. Cuando esto sucede en la prueba inversa:
aumentar el tiempo de incubacin 15-30 minutos a temperatura ambiente.
incubar a 4 C junto con tubo que lleve Gr O y un autocontrol (PA).
Concentraciones anormales altas de anti-A y anti-B han causado reacciones prozona que
dieron lugar a resultados falsos negativos; en estos casos, el grupo ABO se puede inferir
mediante pruebas en eritrocitos por dilucin del suero mediante el uso de suero tratado
con EDTA.
El anti-A en el suero de individuos A2, A2B u otros subgrupos aglutina eritrocitos testigos
A1.
Las autoaglutininas fras como anti-I y anti-IH, pueden aglutinar los eritrocitos de todos los
adultos, incluidas las clulas autlogas y eritrocitos testigos, cuando esta reactividad
interfiere en la interpretacin de las pruebas:
- Calentar el suero y los eritrocitos testigos a 37 C antes de mezclarlos y realizar las
pruebas en suero a 37 C y convertirlas a la fase antiglobulina si es necesario.
- Eliminar la autoaglutinina fra del suero mediante un mtodo de autoadsorcin fra, el
suero adsorbido puede ser sometido contra eritrocitos testigos A1 y B.
- Tratar el suero con DTT y usar el suero tratado para pruebas de agrupacin inversa.
49
Aloanticuerpos inesperados que reaccionan a temperatura ambiente como anti-P o

anti-M, pueden aglutinar los eritrocitos usados en las pruebas con suero si portan el
correspondiente antgeno, para ver el tipo correcto de ABO de un suero que contenga
otros aloanticuerpos fros realizar:
- Elevar la temperatura a 30-37 C antes de mezclar el suero y las clulas, si la temperatura
del aloanticuerpo es inferior a la cual reaccionan anti-A y anti-B, esto puede resolver la
discrepancia.
50
DETECCIN DE ANTGENOS SOLUBLES EN SECRECIONES

Identificacin de antgenos solubles A, B, H en la Saliva. Determinacin del estado secretor.
La secrecin de la sustancia ABH se produce en individuos que presentan el gen secretor ya sea
homocigotos SeSe o heterocigotos Sese para dicho gen.
Aquellos individuos secretores tienen en su saliva la sustancia H, independiente de su grupo ABO,
as los individuos del grupo O tienen o secretan en su saliva la sustancia H y los del grupo A, la
sustancia H y A.
La determinacin de individuos secretores o no, se basa en la deteccin de antgenos solubles
presentes en la saliva inactivada. Si esta est presente, neutralizar la actividad de sus anticuerpos
correspondientes por lo tanto, no se observar aglutinacin de los glbulos rojos una vez que
estos se agreguen, si el lquido orgnico no contiene el antgeno, no se producir la neutralizacin
del anticuerpo por lo que estos aglutinarn los glbulos rojos respectivos.
El 80 % de los individuos caucsicos, heredan el gen Se y son llamados secretores. El 20 % restante
no son secretores y de genotipo sese.
La determinacin de secretores tiene escasa importancia tanto clnica como de laboratorio, pero
puede ser til en la determinacin de grupo sanguneo ABO de un individuo si el grupo de sus
hemates no es constituyente.
Muestra
Saliva
Reactivos
Suero clasificador ABO
Lectina anti H
Glbulos rojos A-B-O lavados
PBS
Tcnica
1. Enjuagar la boca
2. Recolectar 5-10 ml de saliva en un tubo de centrifuga
3. Centrifugar durante 9 min.
4. Transferir el sobrenadante a un tubo limpio y colocar en bao termoregulado durante 810 min. Para inactivar la saliva.
5. Centrifugar 9 min. Extraer el sobrenadante transparente o algo opalescente en otro tubo,
descartar el material opaco o semi slido.
6. Diluir el sobrenadante (500ul) con un volumen igual de PBS (500ul).
7. Por otra parte prepare diluciones de los antisueros para tipificar, esta dilucin debe
permitir una aglutinacin de las clulas correspondientes de 2 +
51
8. Colocar una gota de reactivo para tipificar (antisuero diluido) en dos tubos, una marcado
como solucin salina (control +) y el otro como desconocido. Para cada anticuerpo en
anlisis.
9. Agregar una gota de solucin salina al tubo marcado como control+ y una gota de saliva
diluida e inactivada al tubo respectivo.
10. Mezclar e incubar a temperatura ambiente 10 min.
11. Agregar una gota de glbulos rojos testigos suspendidas al 3 % a cada tubo del grupo A, B
u O.
12. Mezclar e incubar a temperatura ambiente por 10 min.
13. Centrifugar bajo condiciones estandarizadas, leer y registrar los resultados.
Interpretacin
Ejemplo:
Saliva en estudio + anti A + Gr A
++
-
PBS+ anti A+ Gr A
++
++
Interpretacin
Sese o No Secretor
SeSe, Sese o Secretor
52
PRUEBA DE COOMBS DIRECTA E INDIRECTA EN TUBO

Tcnica de antiglobulina humana.
Para la deteccin de anticuerpos de tipo IgG o fracciones del complemento adheridos a los
glbulos rojos, es decir la sensibilizacin de estos, se utiliza el reactivo de Coombs o AGH
poliespecfica, la cual contiene anti IgG y anti C3d del complemento humano.
Este reactivo se prepara inmunizando animales con IgG y complemento C3 humano.
Hay 2 tipos de pruebas de la antiglobulina:
Prueba de Coombs directa y prueba de Coombs indirecta. Ambas tienen el mismo fundamento.
Las pruebas de Coombs directas positivas, son generalmente indicativas de glbulos rojos del
paciente que han sido sensibilizados in vivo por anticuerpos de tipo IgG y/o fracciones del
complemento C3d, como por ejemplo enfermedad hemoltica autoinmune y enfermedad
hemoltica del recin nacido.
La prueba de Coombs indirecta, detecta la sensibilizacin in Vitro de los glbulos rojos, esta se
utiliza para: detectar anticuerpos en el suero problema, determinacin de fenotipos y pruebas
cruzadas.
Prueba antiglobulnica directa en tubo

El tubo de hemlisis se rotular de la siguiente manera: PCD (prueba de Coombs directa) y con
las iniciales del paciente o el nmero del donante.
1. Tomar una alcuota de sangre conservada con anticoagulante.
2. Lavar los glbulos rojos 3 veces con solucin fisiolgica. Descartar totalmente el sobrenadante
del ltimo lavado. Preparar una suspensin globular al 2-5 %.
NOTA: Si se tratase de sangre de cordn umbilical, la muestra deber ser lavada con solucin
salina entre 6 y 8 veces con el objeto de eliminar al mximo los restos de gelatina de Wharton.
3. Tomar una gota de dicha suspensin y agregarle 1 gota de suero antiglobulina humana.
4. Mezclar, centrifugar y examinar la presencia de aglutinacin de los glbulos rojos.
Clasificar y anotar los resultados de la reaccin.
El modo en que se despegan los glbulos rojos del fondo del tubo de hemlisis es muy
importante. El tubo debe agitarse en primer lugar suavemente, para desalojar totalmente el
sedimento de glbulos rojos, y a continuacin agitar suavemente hasta producir una suspensin
uniforme de glbulos rojos o aglutinados.
53
5. En los estudios inmunohematolgicos (no rutinarios), incubar a temperatura ambiente

durante10 minutos, centrifugar y leer de nuevo.
6. En caso de un resultado positivo, repetir la reaccin con los sueros antiglobulina humana
monoespecficos anti-IgG, anti-C3d y eventualmente anti- IgA.
Interpretacin
Si se observa aglutinacin de los eritrocitos, indica de que estos fueron recubiertos por
anticuerpos IgG o fracciones del complemento in vivo.
Prueba antiglobulnica indirecta con albmina en tubo
Se rotularn 2 tubos de Kahn con las iniciales del paciente o el nmero de donante y nmero del
vial (ej.: I y II).
1. Aadir 1 gota de suero a dos tubos rotulados.
2. Aadir 1 gota de albmina bovina al 3%.
3. Aadir 1 gota de suspensin de glbulos rojos (reactivo o de donantes) al 2-5% a cada tubo y
mezclar.
4. Incubar a 37 C durante 30 minutos.
5. Centrifugar y observar en busca de hemlisis y/o aglutinacin. Clasificar y anotar los resultados.
6. Lavar los glbulos rojos 3 veces con solucin salina y descartar totalmente el sobrenadante del
ltimo lavado.
7. Aadir 1 gota de antiglobulina humana, centrifugar durante 15 segundos a 2.500 rpm.
Leer y anotar los resultados.
Interpretacin
Si despus de incubar a 37 C y de centrifugar hay aglutinacin significa que en el suero del
paciente hay anticuerpo tipo IgM, si se intensifica la aglutinacin a 4 C, significa que hay
presencia de una crioaglutinina.
Si despus de agregar la AGH y de centrifugar, se observa aglutinacin de los eritrocitos, indica de
que en el suero del paciente hay anticuerpos de tipo IgG o fracciones del complemento in vivo.
Control del test

Adicionar 1 gota de clulas sensibilizadas o clulas control de Coombs a todos los tubos negativos
para asegurar que la AGH est activa y no se ha neutralizado por alguna protena presente en el
tubo.
Estas deben ser aglutinadas por la antiglobulina, si no es as, esta prueba queda invalidada y se
debe volver a repetir.
Se debe obtener una lectura positiva de 1+ a 2+ .
54
TCNICA EN GEL PARA PRUEBA DE COOMBS DIRECTA E INDIRECTA

(Bio-Type)
Deteccin de anticuerpos irregulares en gel

PRINCIPIO
El reactivo de Coombs o prueba de Antiglobulina Humana Poliespecfica, es una prueba utilizada
de rutina en la deteccin de aloanticuerpos, pruebas de compatibilidad y pruebas de Coombs
Directo.
Sueros de Coombs poliespecficos contienen anticuerpos dirigidos hacia IgG de origen humano y el
componente C3d del complemento humano.
Indudablemente, la deteccin de la fraccin IgG es la de mayor importancia.
La importancia en la deteccin de fracciones de complemento como C3d se manifiesta
principalmente en las pruebas de Coombs Directo, en la investigacin de anemias hemolticas
autoinmunes.
Pruebas de Coombs Directo positivas, generalmente son indicativas de glbulos rojos
sensibilizados in vivo, por inmunoglobulinas y/o complemento.
Reactivo
La tarjeta Bio-Type AHG contiene suero de Coombs Poliespecfico con fraccin anti-IgG obtenida
de conejos inmunizados con IgG humana purificada, y anticuerpos Monoclonales Murinos
Anti-C3d. (BRIC 8).
Glbulos rojos sensibilizados con fraccin de complemento C4d no reaccionan con este reactivo.
Este reactivo ha sido formulado para uso en Deteccin e Identificacin de anticuerpos irregulares,
Pruebas de Compatibilidad y Coombs Directo.
Precauciones
Este reactivo contiene 0.1% p/v Azida de Sodio.
Puede ser txico al ser ingerido y reacciona con las tuberas de plomo y cobre.
55
Almacenaje
Almacenar entre 18-25C.
El reactivo se mantendr estable por todo el perodo indicado.
Toma de la muestra
La muestra de sangre debe ser extrada en forma asptica y preferentemente en Citrato, EDTA,
Heparina o CPD-A. Para obtener resultados confiables se recomienda el uso de sangre fresca.
Se puede utilizar suero o plasma frescos. Reacciones de Hemlisis dependientes de complemento
podran pasar desapercibidas al utilizar plasma en vez de suero.
La muestra de suero o plasma, una vez separada, puede ser almacenada durante 48 horas a
temperatura de refrigeracin (2-8 C), o congelarse entre 20 a 80 C por perodos mayores.
Al utilizar suero, este debe ser aclarado mediante centrifugacin a 1.500 g por 10 minutos, para
evitar residuos de fibrina que pudieran interferir con la reaccin.
1. Las Clulas de screening deben ser diluidas al 1% en Solucin I de acuerdo a la siguiente
proporcin, dependiendo del nmero de muestras diarias:
Vol. Gr (uL)
40
200 (4 gotas)
400 (8 gotas)
Vol. Solucin I (uL)

100
500 ( Dispensar 1 Volumen)
1000 ( Dispensar 2 Volmenes)
Vol. Total (uL)

140
700
1400
N de pruebas
2
14
28
2. Agregar 50 ul (1 gota) de Glbulos rojos I y II al 1% a cada pocillo

3. Agregar 25 ul de suero o plasma
4. Incubar 15 minutos a 37C
5. Centrifugar 10 minutos
6. Leer
56
Coombs directo en gel

1.
Agregar 50 ul de G.R. lavados y resuspendidos al 1% (diluidos en Solucin I) a cada

pocillo.
3. Leer
Falsos negativos
Neutralizacin del reactivo antiglobulnico humano.
Interrupcin de la prueba.
Almacenamiento incorrecto de los reactivos.
Procedimientos incorrectos.
Complemento.
Solucin salina.
Exceso de antgenos
Omisin de adicin de AGH
Tiempo de incubacin y temperatura inadecuada
Falsos positivos
Clulas aglutinadas antes de los lavados.
Presencia de cogulos de fibrina
Problemas con la limpieza de material
Clulas con PAD positiva.
Complemento.
Contaminacin de AGH
57
INVESTIGACIN DE MUESTRAS Rh NEGATIVAS, Rh POSITIVAS DBILES o Rh

POSITIVA PARCIAL
Principio
El antgeno Rh D puede expresarse de forma completa y por lo tanto estamos en presencia de un
resultado Rh D Positivo o simplemente no expresarse y por tanto ser un Rh D Negativo o hacerlo
de forma dbil o parcialmente y por lo tanto ser clasificado como un Rh D Positivo dbil. Dicha
expresin obedece al gen RHD que se encuentra en el brazo largo del cromosoma 1, siendo
heredado tanto del padre como de la madre
1. Colocar una gota de antisuero anti-D en un tubo limpio y rotulado.
2. Aadir una gota de la suspensin al 2-5% en solucin salina de glbulos rojos problema.
3. Mezclar y centrifugar durante 15 segundos a 1800 rpm o 10 segundos a 2000 rpm
4. Resuspender suavemente el sedimento de glbulos rojos y examinar en busca de
aglutinacin. Si se observara en este punto una aglutinacin mayor a 1+, informar como D
positivo. No ser necesario continuar con la fase de AGH.
5. Si los glbulos rojos problema no se hubiesen aglutinado o mostrasen una aglutinacin
dudosa, incubar por 15 a 30 minutos a 37 grados Celsius, una vez terminada la incubacin,
6. Lavar los tres a cuatro veces con abundante solucin salina tamponada (PBS). Despus del
ltimo lavado, descartar totalmente el PBS y secar los bordes, invirtiendo el tubo en forma
enrgica de una sola vez sobre papel absorbente.
7. Aadir 2 gotas de AGH, puede utilizarse un reactivo poliespecfico anti-IgG y anti-C3d o
monoespecfico anti-IgG.
8. Mezclar suavemente y centrifugar durante 15 segundos a 1800 rpm.
9. Posteriormente en la fase de lectura resuspender suavemente el sedimento de glbulos
rojos, examinar en busca de aglutinacin y anotar el resultado de la prueba.
10. Si el resultado fuera negativo, la reaccin podr confirmarse aadiendo glbulos rojos
sensibilizados por IgG, centrifugar de nuevo para lectura y volver a examinar en busca de
aglutinacin. La aparicin de aglutinacin en este punto confirma la presencia de
antiglobulina humana activa en la mezcla de la prueba.
Interpretacin
Si el resultado es negativo, se puede afirmar que esa persona es Rh D negativa.
Si el resultado es positivo puede ser porque la persona tiene un antgeno D dbil o un D parcial.
58
DETERMINACIN DEL FENOTIPO Rh-Hr Y CLCULO DEL GENOTIPO MS

PROBABLE
La existencia de genes estrechamente ligados en el mismo cromosoma, heredndose como una
unidad, en donde cada gen determina un antgeno eritrocitario especfico fue la propuesta de
Fischer y Race en el ao 1943 y le asignaron el nombre de Sistema Rh, siendo los tres alelos ms
importante: D, C-c, E-e que estn codificados por dos genes, el gen D y el gen CE.
La presencia de cada antgeno (D,C,c,E,e) puede realizarse con antisueros especficos, excepto
para el antgeno d cuyo anticuerpos an no ha sido descubierto, por tanto la ausencia de D se
debe anotar como d.
El clculo de la probabilidad genotpica se basa en la frecuencia con que se asocian los alelos en el
cromosoma.
Materiales.
- Centrfugas Inmunohematolgicas
- Pipetas Pasteur.
- Recipiente para desechos.
- Tubos Kahn.
- GR R1R2 como control positivo para cada antisuero del Sistema Rh-Hr
- GR R1R1 (E, c), R2R2 (C, e), como control negativo para cada antisuero del Sistema Rh-Hr
- Centrfuga para muestras.
- Pizetas plsticas con PBS.
- Papel desechable.
- Guantes.
- Parafilm.
- Refrigerador para guardar muestras y reactivos en general.
59
Tcnica
En el refrigerador de Inmunohematologa se deben mantener Glbulos Rojos R1R1, R1R2 o R2R2
como control (-) o +. Los glbulos se seleccionan de las unidades (Concentrados de Glbulos
Rojos) ms frescas disponibles para uso. Se determina su genotipo Rh ms probable mediante el
uso de los reactivos correspondientes.
1. Preparar 5 tubos de Kahn marcados como D, C, E, c, e
2. Colocar en cada tubo lo que corresponda, 1 gota del antisuero anti-Rh es decir una gota
de antisuero D al tubo marcado D, etc.
3. Hacer una suspensin de los glbulos rojos a estudiar del 2-4% en solucin salina y
aadir una gota a cada tubo.
No olvidar los controles Negativos y positivos para cada antisuero (D, C, c, E, e). Para los
controles se puede usar cada antisuero a una dilucin de en PBS. Para esto tomar 50
microlitros de antisuero y resuspenderlo en 150 microlitros de PBS quedando un volumen
final de 200 microlitros, que nos alcanza para realizar 2 determinaciones y 2 controles para
cada uno.
Luego de lavados los glbulos y hechas las diluciones,
4. Tomar 50 microlitros de antisuero diluido y ponerlo en un tubo Kahn,
5. Agregar 50 microlitros de glbulos a analizar mezclar. Realizar esto con los tubos
rotulados como Anti D, Anti C, Anti c, Anti E y Anti e, y tambin para los controles
Negativos y positivos de cada antisuero.
6. Centrifugar los tubos y leer sobre la fuente luminosa.
7. Validar los resultados con los controles.
8. Interpretar el resultado registrando la intensidad de aglutinacin observada de cada tubo
en la plantilla de resultados, luego segn lo observado asignar un genotipo Rh ms
probable de acuerdo a la tabla adjunta.
60
Tabla 1. Genotipos probables.

ANTI
D
Genotipo probable
c
E
Wiener
FischerRace
DCe/dce
Rr
R1R1
rr
R1R2
R2r
R2R2
Ror
rr
rr
DCe/DCe
dce/dce
DCe/DcE
DcE/dce
DcE/DcE
Dce/dce
dCe/dce
dcE/dce
Tabla 2. Frecuencia Gentica en Poblacin de Santiago. Cuadro

Comparativo.
Wiener
Haplotipo
1
R
r
R2
R0
r
r
Rz
ry
FischerRace
DCe
Chile
%
49,9
Frecuencia
Blancos
42
dce
22,2
37
26
DcE
22,2
14
11
Dce
2,3
44
dCe
0,9
dcE
1,4
DCE
0,9
dCE
Negros
17
Rev.Md.Chile 116:28-33, 1988
Tabla 3. Frecuencia Gentica de Antgenos Rh

GEN
D
d(Ausencia de D)
C
E
c
e
Frecuencia (%)
85
15
70
30
80
98
61
CLASIFICACIN ABO Y RH EN EL RECIN NACIDO

Tipo de muestra: sangre capilar anticoagulada
Sangre de cordn umbilical
Reactivos: sueros tipificadotes anti A, B, AB, D. PBS
Tcnica: Si es sangre de cordn, lavar 4 veces con solucin salina para eliminar la gelatina de
Wharton.
Hacer suspensin celular al 4 % en PBS
1.
2.
3.
4.
5.
Marcar 5 tubos A, B, AB, D y AGH. Agregar 2 gotas de los antisueros segn corresponda.
Agregar a cada tubo 1 gota de la suspensin de GR.
Mezclar y centrifugar
Remover los eritrocitos sedimentados, observar si existe aglutinacin.
Informar en cruces
Protocolo
Identificacin Anti A
Anti B
Anti AB
Anti D
TAD
Grupo ABO
No se realiza la prueba inversa debido a que los RN no presentan anticuerpos naturales

propios hasta los 4-6 meses de vida.
62
CLASIFICACIN ABO Y RH EN EL RECIN NACIDO EN GEL(Bio-type)

Principio
El fenotipo ABO de un individuo es determinado por la aglutinacin de sus glbulos rojos en la
presencia de suero Anti-A, Anti-B y Anti-AB. (Prueba directa). En adultos, la confirmacin del
grupo ABO puede llevarse a cabo por la reaccin del suero de este individuo con una suspensin
de glbulos rojos A1 y B. ( Prueba Inversa).
Debido a que la presencia de estos anticuerpos no ocurre antes de los 4-6 meses de vida, la
prueba inversa no puede llevarse a cabo en recin nacidos.
Los antgenos A y B no se encuentran totalmente desarrollados en los recin nacidos, motivo por
el cual sus reacciones de aglutinacin pueden ser ms dbiles y subgrupos no pueden ser
identificados.
La tarjeta Bio-Type Recin Nacido le permite al usuario efectuar la prueba directa, determinacin
del grupo Rh y la prueba de Coombs directo.
Los pacientes que presenten un grupo D (-) pueden ser llevados a Du de acuerdo a las normas de
cada institucin.
Sangre de cordn o de taln puede ser utilizada. Generalmente no es necesario lavar la sangre
previo a su clasificacin. Se recomienda lavar 1 vez la muestra de cordn en PBS, para una mejor
estandarizacin. Hay que lavar la sangre de cordn si no est anticoagulada para eliminar
microcogulos.
Reactivo
La tarjeta Bio-Type Recin Nacido consta de los siguientes pocillos:
1-Anticuerpos Monoclonales Anti-A (Lnea celular BIRMA-1).
2- Anti-B (Lnea celular KLB-2).
3- Anti-AB (Lnea celular BIRMA-1, ES-4, ES-15).
4 - Anti-D IgM/IgG (Anti-D IgM lnea celular TH-28 y Anti-D IgG derivado de la lnea celular MS-26).
5- Gel neutro para control Rh.
6-Suero de Coombs Poliespecfico con fraccin anti-IgG obtenida de conejos inmunizados con IgG
humana purificada, y anticuerpos Monoclonales Murinos Anti-C3d. (BRIC 8).
Glbulos rojos sensibilizados con fraccin de complemento C4d no reaccionan con este reactivo.
63
Este pocillo ha sido diseado para deteccin de muestras con Coombs Directo Positivo (+).
Precauciones
Este reactivo contiene 0.1% p/v Azida de Sodio.
Puede ser txico al ser ingerido y reacciona con las tuberas de plomo y cobre.
Almacenaje
Almacenar entre 18-25C.
El reactivo se mantendr estable por todo el perodo indicado.
Toma de la muestra
Sangre de cordn o puncin de taln puede ser utilizada. Generalmente no es necesario lavar la
sangre previo a su clasificacin. Cuando se utilice sangre de cordn debe evitarse la
contaminacin con gelatina de Wharton.
La muestra de sangre debe ser extrada en forma asptica y preferentemente en Citrato, EDTA,
Heparina o CPD-A. Para obtener resultados confiables se recomienda el uso de sangre fresca.
En un tubo de ensayo limpio, colocar 1 ml de Solucin I y 10 ul de sedimento de glbulos rojos.
Procedimiento.
No utilizar tarjetas que presenten deshidratacin o variacin en su presentacin al examen ocular.
No utilizar muestras hemolizadas o contaminadas.
1.- Identificar cada tarjeta con el nombre del paciente.
Retirar el sello que recubre la tarjeta.
2.- Aadir 50 ul de glbulos rojos suspendidos al 1% en solucin I a los pocillos 1 al 6.
3-Centrifugar por 10 minutos a la velocidad indicada.
4- Leer y anotar los resultados.
Interpretacin
Las muestras positivas se presentan como una lnea roja en la superficie del reactivo, (4+) o
dispersadas a travs del pocillo (1-3 +).
64
Las muestras negativas forman un botn compacto en el fondo del pocillo.

La reaccin en el tubo control debe ser negativa.
En el caso que diera positiva, la reaccin en el tubo D(Rh) es invalida y debe ser repetida de la
siguiente forma:
Lavar los glbulos rojos en solucin salina tibia o solucin I. Luego proceder a preparar
nuevamente la solucin de trabajo al 1%.
Una reaccin positiva en el tubo Coombs, indica que los glbulos rojos de la muestra se
encuentran sensibilizados.
65
IDENTIFICACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Los anticuerpos irregulares detectados en pacientes previamente expuestos a antgenos externos
como en politransfundidos, embarazos y menos frecuente en donantes, deben identificarse con el
objetivo de conocer su especificidad, importancia clnica y antes de realizar la prueba cruzada.
Para esta identificacin se utilizan un set de 11 clulas grupo O IV cada una de un solo donante,
suspendidas en una solucin preservante, en una concentracin del 2 al 4%, con antgenos de
importancia clnica conocidos que presentan expresin de doble dosis (homocigotos), estas se
utilizan para la determinacin de anticuerpos irregulares clnicamente significativos.
La identificacin de los anticuerpos detectados previo a la prueba cruzada tiene la finalidad de
encontrar sangre compatible para el paciente que la necesita, por lo tanto negativa para el
antgeno correspondiente al anticuerpo encontrado.
Es de importancia clnica la investigacin de estos anticuerpos en reacciones postransfusionales
(causen hemlisis), enfermedad hemoltica del recin nacido (atraviesen placenta) o anemia
hemoltica autoinmune, estos anticuerpos son en su mayora anticuerpos IgG que reaccionan a
37C y en antiglobulina humana.
La tcnica se realiza entre el suero en estudio y el panel o set de clulas (glbulos rojos) con
antgenos conocidos adems del medio y temperatura adecuada.
Reactivos:
Panel de GR (DE 11, 12 o 16 clulas)
Plasma o suero del paciente o donante
PBS
Suero de Coombs
Clulas control de Coombs
Tcnica en tubo
1. Rotular los tubos para cada una clula a usar (11), Se puede incluir una prueba autloga
como tubo nmero 12.
2. Poner 2 a 3 gotas de suero o plasma a ser evaluado en cada uno de los tubos.
3. Agregar una gota de la suspensin globular en los tubos correspondientes, en la prueba
autloga, agregar una gota de glbulos del paciente o donante al 2- 4%, resuspendidas en
PBS o en su propio suero.
4. Mezclar los tubos y centrifugar segn condiciones estandarizadas
5. Leer los tubos en busca de aglutinacin o hemlisis sobre la fuente de luz. Registrar
resultados positivos.
6. Incubar los tubos por 45 a 60 minutos a 37 C.
66
7. Centrifugar. Leer los tubos en busca de aglutinacin o hemlisis sobre la fuente de luz.
Registrar resultados positivos.
8. Lavar los tubos cuatro veces con PBS. En el ltimo lavado luego de botar el PBS, secar los
tubos sobre un papel absorbente, a fin de dejar el botn de glbulos seco en el fondo del
tubo.
9. Agregar dos gotas de suero de Coombs a cada tubo. Mezclar.
10. Centrifugar los tubos y leer.
Interpretacin:
Ausencia de aglutinacin en todos los tubos indica que no se encuentra antgeno para el
anticuerpo.
Presencia de antgenos para el anticuerpo, estos se deben comparar con la tabla de
antigenicidad que proporciona el kit.
Control de calidad
Se utilizan las clulas control de Coombs para validar los resultados con AGH negativos.
67
CALCULO DE PROBABILIDAD MTODO EXACTO DE FISHER

Compara el nmero de resultados positivos y negativos con el nmero de clulas que expresan o
carecen de los antgenos correspondientes.
El valor de p de 0,05 es el mximo aceptado para que la interpretacin se considere
estadsticamente valida, por lo tanto habra un 95% de posibilidades de que la interpretacin de
los datos sea correcta.
Interpretacin Resultados
Antgeno Presente
Antgeno Ausente
TOTAL
Positivo
A+B
Negativo
C+D
TOTAL
A+C
B+D
A=Nmero de reacciones positivas con clulas que poseen el Ag

B= Nmero de reacciones positivas con clulas que carecen el Ag
C= Nmero de reacciones negativa con clulas que poseen el Ag
D= Nmero de reacciones negativa con clulas que carecen el Ag
Luego p:
P: (A+B)! x (C+D)! x (A+C)! x (B+D)!

N! x A! x B! x C! x D!
68
TITULACIN DE ANTICUERPOS IRREGULARES

La titulacin de anticuerpos es un mtodo semicuantitativo usado para determinar la
concentracin de anticuerpos en muestras de suero o comparar la intensidad de la expresin
antignica en distintas muestras de glbulos rojos.
Durante el embarazo, la titulacin de anticuerpos se realiza para identificar a las mujeres con
niveles significativos de anticuerpos que podran provocar una EHRN.
En este caso es importante no utilizar tcnicas potenciadoras como albmina, PEG, LISS o glbulos
rojos tratados con enzimas, porque podran observarse ttulos falsamente elevados.
Para la titulacin de anti-D usar glbulos rojos R2/R2 para evitar efectos de posicin.
Aplicaciones:
1.
2.
3.
4.
Madres embarazadas alo inmunizadas.

Estudio de Auto anticuerpos.
Estudio de anticuerpos con alto ttulo y baja avidez.
Evaluar el efecto de reactivos sulfhidrilos usados en el reconocimiento de
inmunoglobulinas.
Muestras: suero a titular.

Reactivos y Materiales:
1. Glbulos rojos que expresan los antgenos correspondientes a los anticuerpos en
estudio, en suspensin al 2% - 5% en solucin salina.
2. Solucin salina.
3. Tubos de vidrio de 10x75 mm.
4. Pipetas de 0,1 0,5 ml.
5. Suero de antiglobulina humana.
Procedimiento
1. Rotular 10 tubos de acuerdo con la dilucin del suero 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512.
2. Colocar 1 volumen de solucin salina en todos los tubos (se recomienda usar
volmenes de 0,5 ml para evitar errores causados por la inexactitud de las
mediciones).
3. Agregar al tubo marcado como 2 un volumen de suero igual al agregado de solucin
salina ya adicionado.
4. Con una pipeta limpia, mezclar varias veces cuidando de no hacer burbujas el
contenido de la dilucin 1 en 2 y transferir 1 volumen al tubo siguiente (dilucin 1 en
4).
69
5. Repetir el paso anterior para todas las diluciones, cuidando de usar una pipeta limpia
para mezclar y transferir cada dilucin. Retirar 1 volumen de suero diluido del tubo
final y guardarlo para diluciones siguientes.
6. Marcar 10 tubos de 10x75 mm, para las diluciones apropiadas.
7. Usando pipetas individuales para cada dilucin, transferir 2 gotas de suero a cada uno
de los tubos del paso 6 y agregar 1 gota de la suspensin de glbulos rojos. Se puede
ocupar la misma pipeta si se comienza del tubo ms diluido al ms concentrado.
8. Mezclar bien e incubar segn la tcnica empleada para la deteccin e identificacin
del anticuerpo en estudio.
9. Examinar los resultados y registrar las reacciones. Se recomienda comenzar desde el
tubo ms diluido.
Interpretacin
1. Observar la dilucin ms alta que produce aglutinacin macroscpica de 1+.
2. En los estudios comparativos la diferencia significativa en los ttulos es de tres o ms
diluciones.
Observaciones
1. En el caso de madres sensibilizadas con especificidad anti-D se deben utilizar glbulos
rojos con fenotipo R2R2, al igual que para cualquier antgeno que presente efecto de
dosis se deben enfrentar glbulos rojos con antgeno en doble dosis.
2. Para cada control de ttulo se debe hacer en paralelo con la muestra de control
anterior y se debe realizar una nueva identificacin para cada control.
3. En los estudios con anticuerpos dirigidos contra antgenos de baja incidencia,
4. considerar el empleo de glbulos rojos paternos.
No usar tcnicas potenciadoras (como PEG y medios de baja fuerza inica LISS) o glbulos rojos
tratados con enzima porque podran obtenerse ttulos elevados.
70
ESTUDIO DE MUESTRAS CON TEST DE ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTA

POSITIVA
El estudio de muestras con PAD +, se emplea para determinar la existencia de glbulos rojos
recubiertos con anticuerpos IgG y/o complemento in vivo.
Sin embargo la presencia tanto de IgG o C3 en glbulos rojos no significa necesariamente que esos
glbulos rojos se destruyen in vivo, se debe buscar evidencia adicional, como presencia de
anemia.
Se utiliza la AGH poliespecfica que reaccione tanto con IgG como C3 presentes en los glbulos
rojos.
Si la PAD es + se podra utilizar y repetirse con reactivos anti IgG y anti C3 por separado.
Causas de pruebas de Coombs directas positivas

Enfermedad hemoltica del recin nacido
En esta patologa se puede observar una prueba de Coombs Directa positiva, debido a que el
eritrocito del recin nacido est recubierto por los anticuerpos maternos que se unen a los
antgenos complementarios presentes en la membrana del glbulo rojo.
Anemia hemoltica autoinmune por anticuerpos calientes y Lupus eritematoso sistmico
El Coombs Directo resulta positivo debido a que el paciente genera una respuesta inmune contra
sus propios antgenos, por lo que sus anticuerpos se unen a estos y atacan sus propias clulas con
el fin de hemolizarlas.
Transfusin previa incompatible con hemlisis extravascular
Si previamente el receptor estaba sensibilizado contra algn anticuerpo irregular o fue
transfundido con un plasma incompatible (grupo O a otro grupo sanguneo o donante con
anticuerpo irregular), genera una hemlisis extravascular, por lo que la prueba de Coombs Directo
resultara positiva.
Medicamentos e infecciones
Algunos medicamentos tales como el antihipertensivo alfa-metildopa, penicilina, cefalotina, o
infecciones virales pueden causar Coombs Directo positivo, lo importante en estos casos es saber
determinarlo, esto puede ser a travs de la ficha clnica del paciente y/o la comunicacin con el
mdico tratante.
71
Metildopa induce la formacin de autoanticuerpos mediante su efecto inhibidor sobre las clulas
T suprimiendo estas la produccin de anticuerpos por las clulas B. la mayor parte de estos
pacientes no presentan hemlisis pero si una PAD +.
Sndrome de Crioaglutininas
Las Crioaglutininas son anticuerpos inespecficos que generalmente se pueden visualizar a
temperatura de 4C, generalmente sin relevancia clnica pero que es necesario estudiarlas y
demostrar su inocuidad. Una crioaglutinina puede estar enmascarando un anticuerpo
clnicamente significativo (Aloanticuerpo; alo de griego Allo=otro) o estar relacionado con alguna
patologa como por ejemplo Sndrome de aglutininas frias, que se da en pacientes con
enfermedades lifoproliferativas, mononucleosis infecciosa, o neumona atpica por Mycoplasma
pneumoniae, Hemoglobinuria paroxstica por fro o Sndrome de Donath-Landsteiner,
hemoglobinuria paroxstica nocturna pueden desarrollar anticuerpos IgM debido a cierta similitud
antignica frecuentemente contra el antgeno I (antgeno i grande) del glbulo rojo generando un
fenmeno autoinmune lo que se refleja en la produccin de autoanticuerpos fros dirigidos en
contra del husped, por tanto hay una relacin directa entre el ttulo del anticuerpo y la severidad
del cuadro clnico de Neumona.
Estudio serolgico para evaluar la PAD +
- Analizar con anti IgG y anti C3d para determinar qu tipo de protenas recubren los glbulos
rojos.
- Analizar suero/plasma para detectar e identificar anticuerpos contra antgenos eritrocitarios
significativos.
- Examinar el eluato preparado a partir de los glbulos rojos recubiertos. Este se examina con una
batera de clulas reactivas, para determinar si son aloanticuerpos (reaccin transfusional o EHRN)
o fracciones del complemento en donde los eluatos no son reactivos.
Para facilitar los resultados de las pruebas, se debe revisar la historia clnica, el
diagnstico, antecedentes teraputicos, gestacionales y transfusiones recientes del paciente.
Adems complementar con los resultados de laboratorio: Hematocrito, bilirrubina,
haptoglobina y recuento de reticulocitos.
Observar destruccin eritrocitaria: reticulositosis, hemoglobinemia, hemoglobinuria,
disminucin de la haptoglobina srica, elevacin de la lactato deshidrogenada, adems paciente
se observa anmico.
Averiguar si el paciente fue transfundido en fecha reciente: La fijacin de anticuerpos en los
glbulos rojos, puede ser indicador de una respuesta inmunolgica en desarrollo. En la
inmunizacin primaria los anticuerpos podran aparecer ya a los 7-10 das de la transfusin y en la
secundaria a los 2-7 das.
Elucin:
Libera los anticuerpos de los eritrocitos sensibilizados y los recupera en forma utilizable.
Cuando no se conoce la causa de TCD se puede preparar eluido y probarlo contra un panel de
eritrocitos.
72
Por lo general se puede detectar la misma especificidad en el suero del paciente. Cuando
el eludo reacciona con todas las clulas del panel la explicacin ms probable es la de un
autoanticuerpo.
Cuando no hay presentes anticuerpos irregulares en el suero y el paciente no ha sido
transfundido recientemente no es necesaria otra prueba serolgica para la deteccin de un
autoanticuerpo aislado
Criterios para diagnosticar AHAI

- Evidencia serolgica de un autoanticuerpo:
TCD positivo
Autocontrol positivo
Identificacin de un autoanticuerpo en el eluato y suero.
- Evidencia clnica o de laboratorio de Hemlisis
Investigacin de autoanticuerpos AHAI
Suero debe ser separado a 37C; para permitir la cuidadosa evaluacin de la amplitud trmica y
titulacin de cualquier autoanticuerpo fro presente. Esto permite evitar la absorcin de
anticuerpo fro por los GR.
EDTA inhibe la activacin de complemento in vitro, por lo tanto cualquier componente del
complemento detectado ser debido a activacin in vivo
Test en eluatos de GR AHAI
-Para dilucidar la causa de un TCD positivo.
-Permiten conocer la clase de Inmunoglobulina presente
-Si no se encuentra anticuerpo en el eluato se puede deber a:
Drogas como Penicilina
Pacientes con grandes cantidades de complejos inmunes
-Se pueden encontrar aloanticuerpos que simulen un autoanticuerpo: EHRN, RHT
Problemas serologicos que plantean los autoanticuerpos:
- Si hay presencia de aglutininas fras lavar con PBS calentado las clulas y hacer clasificacin ABO
y Rh a 37C. Mantener la muestra a 37 C. Usar control paralelo de albmina al 6 % en solucin
salina para verificar si continua la autoaglutinacin. Para la prueba inversa hacer control autlogo
- Si se emplea soluciones de Albmina bovina o enzimas proteolticas los GR sensibilizados pueden
aglutinar espontneamente. Lavar previamente en PBS
-
Como las crioaglutininas casi siempre son IgM, tratar los glbulos rojos con reactivos
sulfidrilos DTT o ZZAP.
73
TCNICA DE AUTOADSORCIN DE ANTICUERPOS CALIENTES

Principio
La tcnica de autoadsorcin se realiza a pacientes en los que existe la presencia de
autoanticuerpos. Esto generalmente es solicitado cuando un paciente necesita transfusin.
El Suero del paciente es puesto en contacto con glbulos autlogos tratados, que permiten retirar
el autoanticuerpo de su suero, para as probarlo y eventualmente descartar aloanticuerpos.
Existen dos tcnicas para realizar la autoadsorcin, una usando ZZAP y otra usando PEG, las que
pueden usarse indistintamente dependiendo de la disponibilidad de muestra del paciente y
urgencia de la transfusin.
Esta autoadsorcin se hace ms efectiva, si se retiran primero los autoanticuerpos, se tratan las
clulas con enzimas, se dejan los sitios antignicos libres para que se unan los autoanticuerpos
libres del suero y as retirarse los aloanticuerpos del mismo. La autoadsorcin no debe realizarse
en pacientes que han sido recientemente transfundidos, ya que los eritrocitos transfundidos
circulantes, pueden adsorber los aloanticuerpos libres.
Materiales y Reactivos
-
Muestra de sangre total con EDTA

Clulas de Screening I y II R1R1, R2R2
Tubos de Khan, gradilla para tubos.
PBS.
Suero Antinmunoglobulina humana o suero de Coombs.
Glbulos rojos sensibilizados (Control Positivo).
Bao de incubacin a 37C.
Centrfuga inmunohematolgica.
Timer.
Lpiz Marcador.
Papel Absorbente.
Fuente de Luminosa
Papana al 1% (activada con cistena), almacenada a -18C.
DTT stock 0.2 M, almacenado a -18C.
Buffer fosfato salino (PBS) pH 7.3.
Gamma PEG (Gamma Biologicals INC).
ZZAP: Reactivo preparado con papana y DTT (Dithiothreitol), que permite limpiar la superficie
de los glbulos rojos a usar para la adsorcin.
PEG: Polmero soluble en agua usado como potenciador de reaccin antgeno-anticuerpo.
74
Metodologa
AUTOADSORCION CON ZZAP
Modificacin de los glbulos rojos con reactivo ZZAP
Preparacin del reactivo ZZAP. Para 1 ml de ZZAP preparar:
0,5 ml de DTT stock 0.2 M.
0,1 ml de papana stock 1%
0,4 ml de PBS.
Tratamiento de los Hemates:
Centrifugar los glbulos rojos autlogos con TAD positivo del paciente o glbulos rojos
control (+); remover el plasma de tal manera de dejar el concentrado de glbulos rojos, no
se requiere lavar.
Mezclar un volumen de GR concentrados (segn disponibilidad de muestra) ms 2
volmenes de ZZAP. Ej.
0,5 ml de GR autlogos con TAD +, y otro tubo control GR sensibilizados
Incubar 30min a 37 C. Mezclar por inversin cada 15 minutos durante la incubacin.
Terminada la incubacin, lavar 4 veces con abundante PBS (llenar hasta del tubo de
Khan) mediante el uso de la centrifuga inmunohematolgica.
En el ltimo lavado, centrifugar 3 minutos en vez de 1 minuto en High para dejar bien
concentrados los glbulos rojos tratados.
Realizar un TAD a los glbulos rojos tratados para verificar que la cantidad de IgG unida
haya disminuido (verificado en intensidades de cruces)
Adsorcin:
a. Agregar a razn de 1 /2 un volumen del suero paciente que se va a adsorber con dos
volmenes de GR modificados y tratados con ZZAP concentrados.
b. Incubar 15 minutos a 37C.
c. Centrifugar y extraer el suero autoadsobido.
d. Con el suero autoadsorbido hacer un TAI con clulas I y II, el cual debera ser
Negativo, si no lo es, repetir la autoadsorcin usando una nueva alcuota de GR
tratados con ZZAP.
75
AUTOADSORCION CON PEG

Mezclar
0.5 ml de plasma a autoadsorber
0.5 ml de glbulos rojos concentrados (no es necesario lavar los glbulos)
0.5 ml de PEG
Incubar 15 minutos a 37C.
Centrifugar 7 minutos a 1.200 rpm en centrfuga inmunohematolgica
Separar el plasma autoadsorbido.
Hacer un TAI al suero autoadsorbido para lo cual colocar
4 gotas de plasma autoadsorbido con 1 gota de clulas I , TUBO I y
4 gotas de plasma autoadsorbido con 1 gota de clulas II , TUBO II
Incubar 15 minutos a 37C.
Luego de la incubacin, lavar 4 veces con PBS, en el ltimo lavado no olvidar secar bien con tubo
invertido sobre toalla nova.
Agregar dos gotas de anti IgG (suero anti-Inmunoglobulina humana monoespecfico), tener
cuidado de NO usar suero anti-Inmunoglobulina humana poliespecfico ya que la presencia de
anti-Complemento genera falsos positivos.
Si este resultado es negativo, guardar el resto de plasma autoadsorbido para realizar pruebas de
compatibilidad, usar la misma relacin anterior, es decir, 4 gotas de plasma autoadsorbido + 1
gota de los glbulos a transfundir, incubar 15 minutos a 37C, lavar 4 veces con PBS,
resuspenderlos en PBS a una concentracin del 4% y finalmente agregar dos gotas de anti IgG
(suero anti-Inmunoglobulina humana monoespecfico)
Si el resultado es positivo, se debe repetir la autoadsorcin del plasma con un nuevo volumen de
GR concentrados, no se requiere agregar PEG de nuevo.
76
TCNICA DE ELUCIN CIDA

El Trmino elucin cida consiste en alterar las fuerzas de unin no covalente entre los complejos
antigenos anticuerpos, mediante la modificacin del Ph liberando los anticuerpos de los glbulos
rojos sensibilizados y permite recuperarlos.
Esta tcnica es usada para la investigacin de hemlisis producida por auto y/o aloanticuerpos
calientes. Tambin usada para la fenotipificacin de eritrocitos cubiertos con IgG en AHAI por
anticuerpos calientes.
Muestra
Glbulos rojos concentrados PAD positiva
Reactivos
Solucin de elucin: cido ctrico, fosfato de potasio monobsico y solucin salina cuyo pH es de
2,7
Solucin neutralizante: Buffer Tris pH 9,5, su funcin es neutralizar la acidez en el eluido.
Sobrenadante salino: salino del lavado final de los glbulos rojos en estudio.
Tcnica
1. Lavar 4 veces 1 ml de glbulos rojos concentrados PAD + con PBS.
2. Guardar el ltimo sobrenadante del lavado para utilizarlo posteriormente como control
negativo al realizar la identificacin del anticuerpo.
3. Agregar 1 ml de la solucin de elucin. Mezclar por inversin 5 a 6 veces. Dejar a
temperatura ambiente por 1,5 a 2 minutos.
4. Centrifugar de acuerdo al tiempo de lavado estandarizado. Remover el eludo
sobrenadante, colocarlo en un tubo kahn previamente rotulado que contenga la cantidad
de solucin neutralizante necesaria para que el pH del eludo quede entre 6,8 y 7,2. Esto
depende de la cantidad de eludo obtenido, es decir por cada ml de eludo, son 200
microlitros de sol. neutralizante.
5. Mezclar por inversin varias veces y centrifugar para remover algn precipitado que se
pudo haber formado despus de la neutralizacin. Traspasar el eludo neutralizado a un
tubo kahn limpio, previamente rotulado.
6. Realizar la identificacin del anticuerpo del eludo, sin dejar de incluir como control
negativo un test de Coombs indirecto con el sobrenadante del ltimo lavado reservado
previamente.
77
ESTUDIO DE CRIOAGLUTININAS
Crioaglutininas: Anticuerpos fros.
Las Crioaglutininas son anticuerpos inespecficos que generalmente se pueden visualizar a
temperatura de 4C, sin relevancia clnica pero que es necesario estudiar y demostrar su
inocuidad. Una crioaglutinina puede estar enmascarando un anticuerpo clnicamente significativo
(Aloanticuerpo; alo de griego Allo=otro) o estar relacionado con alguna patologa como por
ejemplo Sndrome de aglutininas fras, que se da en pacientes con enfermedades
lifoproliferativas, mononucleosis infecciosa, o neumona atpica por Mycoplasma pneumoniae,
Hemoglobinuria paroxstica por frio o Sndrome de Donath-Landsteiner, hemoglobinuria
paroxstica nocturna. Dichas patologas pueden desarrollar anticuerpos del tipo IgM debido a
cierta similitud antignica frecuentemente contra el antgeno I (antgeno i grande) del glbulo rojo
generando un fenmeno autoinmune lo que se refleja en la produccin de autoanticuerpos fros
dirigidos en contra del husped, por tanto hay una relacin directa entre el ttulo del anticuerpo y
la severidad del cuadro clnico ( Neumona).
Las crioaglutininas por sus caractersticas anteriormente sealadas se pueden fijar a los Glbulos
rojos causando activacin de la cascada del complemento, por tanto se puede obtener una
prueba de Coombs Directa positiva al utilizar suero antiglobulina Humana poliespecfico o mono
especfico anti-C3, por otro lado si se requiere asegurar la presencia de una IgG adherida al
glbulo rojo es conveniente utilizar un suero antiglobulina humana monoespecfico anti-IgG. En
este sndrome la aglutinacin se produce a temperaturas bajas y es mnima por sobre los 30 C. La
hemlisis intravascular en rara vez suficiente para causar hemoglobinuria y hemosideruria, pero
su presencia es ayuda diagnstica importante.
En algunos pacientes no se puede encontrar una causa subyacente, sta forma atpica suele
observarse en personas mayores. Mycoplasma pneumoniae es una etiologa ms comn en
jvenes. Independiente de la causa el sitio primario de destruccin es el hgado.
Para realizar el titulo la muestra debe cuidadosamente tratarse a 37 C, es decir; al momento de
extraer la muestra mediante puncin venosa, inmediatamente se de llevar a 37C, idealmente el
tubo donde se extraiga debera calentarse a bao mara o simplemente con agitacin con la palma
de las manos, transportar al laboratorio rpidamente conservando la cadena de temperatura
requerida.
Una vez recibida por el laboratorio de inmunohematologa, controlar la temperatura durante el
transporte, no debe ser inferior a 32C. Luego la muestra es dejada en el bao mara a 37C hasta
obtener una buena calidad del coagulo extrado o de lo contrario centrifugar la muestra en una
centrfuga con temperatura controlada , tomar suero y trasvasijarlo a un tubo Kahn previamente
rotulado con el nombre del paciente, dejar el tubo original en el bao a 37C.
78
Determinacin de crioaglutininas
Para este anlisis se requiere que la muestra sea extrada y puesta inmediatamente en un bao a
37C.
1. Marcar 3 tubos, I, II y PA.
2. Agregar 0.1 ml de suero del paciente a cada uno.
3. Agregar a cada uno de estos tubos 0.05 ml de glbulos correspondientes, es decir,
screening cells I y II y glbulos autlogos.
4. Incubar los tubos por 1 hora a 4C
5. Leer los tubos sin centrifugarlos previamente, en busca de aglutinacin o hemlisis sobre
la fuente de luz.
Interpretacin
Si no hay reaccin en ningn tubo luego de 60 minutos a 4C, el resultado es negativo.
Si existe aglutinacin en los tubos de clulas I, II o ambos y no en el tubo antlogo, no
estamos en presencia de crioaglutininas, sino de un aloanticuerpo fro.
Si aglutinan los tres tubos por igual, estamos en presencia de crioaglutininas.
Si va desde +/- hasta ++ en los tres tubos, se informa como dbilmente positivas, sin
realizar ttulo.
Si va de +++ o mayor, se realiza ttulo para lo cual se debe marcar 11 tubos con las
diluciones a realizar para titular. (1/2,1/4,.,1/2048).
79
Ttulo de crioaglutininas
Procedimiento
1. Marcar 3 tubos, I, II y PA.
2. Agregar 0.1 ml de suero a cada tubo.
3. Agregar a cada uno de estos tubos 0.05 ml de glbulos rojos de clulas de screening I y II y
glbulos autlogos.
4. Mezclar los tubos por agitacin lateral.
5. Incubar los tubos por 60 Minutos a 4C. Una vez terminada la incubacin.
6. Leer los tubos sin centrifugarlos previamente, en busca de aglutinacin o hemlisis sobre la
fuente de luz, anotar y registrar sus resultados. De no haber reaccin en ningn tubo, el resultado
es negativo.
7. Si existe aglutinacin en los tubos de clulas I,II o ambos y no en el tubo autlogo, no estamos
en presencia de crioaglutininas, sino de un aloanticuerpo fro.
8. Si aglutinan los tres tubos por igual, estamos en presencia de crioaglutininas.
9. Si la aglutinacin es desde +/- hasta ++ en los tres tubos, se informa como dbilmente
positivas, sin realizar ttulo.
10. Si la intensidad de aglutinacin es de +++ o mayor, se realiza ttulo para lo cual se debe marcar
11 tubos con las diluciones a realizar para titular. (1/2,1/4,.,1/2048).
11. Colocar a cada uno de los tubos 0.1 ml de PBS.
12. Agregar al primer tubo de dilucin (1/2) 0.1 ml de suero a investigar.
13. Mezclar por agitacin manual y tomar 0.1 ml de la mezcla. Transferir estos 0.1 ml al tubo con
PBS de la dilucin siguiente (1/4). Realizar esto hasta el ltimo tubo de la serie.
14. Preparar como primer tubo de la serie el tubo sin diluir, marcarlo como 1 y agregar 0.1 ml de
suero a analizar.
15. Agregar a cada uno de los tubos 0.05 ml de glbulos rojos, escoger screening cells I o II en la
cual la aglutinacin en el paso anterior haya sido ms alta.
16. Mezclar los tubos por agitacin lateral.
80
17. Incubar los tubos por 60 Minutos a 4C en BSUI-R1.

18. Leer los tubos sin centrifugarlos previamente, agitndolos en busca de aglutinacin o
hemlisis sobre la fuente de luz, desde el tubo de la dilucin mayor al menor.
Registrar el tubo de mayor dilucin donde se observa aglutinacin.
El informe se hace segn el siguiente ejemplo:

Crioaglutininas positivas +++ (aqu colocar la intensidad mayor)
Ttulo: positivo a dilucin 1/256. (aqu colocar la mayor dilucin a la que se observ aglutinacin).
Anotar en el libro de exmenes especiales el resultado obtenido.
Informar en el sistema SILC y revisar en conjunto a la auxiliar de turno.
Determinacin de rango trmico.

Esto debe realizarse solo en caso que lo soliciten expresamente en la orden del examen. El
rango trmico incluye la incubacin del set anterior de tubos correspondiente al ttulo a
distintas temperaturas. Deben incluirse incubaciones a 4C, 16C, 24C y 37C.
La de 4C se realiza en el refrigerador del Banco de Sangre. La de los 16C debe ser preparada,
tomando una caja de plumavit , y colocar all un ice-pack que se encuentran , agregar agua de
la llave y controlar temperatura, mantenindola a 16C por 1 hora. La incubacin a 24C se
hace en el plaquetario y la de los 37C en el bao termoregulador. La lectura de resultados
debe hacerse de la misma forma y el informe tambin, es decir en positividad de la reaccin y
el ttulo, para las distintas temperaturas.
81
ESTANDARIZACIN DEL LISS

INTRODUCCIN:
El medio de baja fuerza inica nos permite acortar el periodo de incubacin de un test de Coombs
indirecto o test de antiglobulina humana AGH de una hora a 15 minutos o menos.
Esto debido a que disminuye el potencial zeta. Este hecho es de particular importancia en la
unidad de transfusiones ya que nos permite tener las pruebas cruzadas de las transfusiones
solicitadas en menos de 30 minutos.
DEFINICIONES
LISS medio de baja fuerza inica preparado en nuestro laboratorio.
PANELES DE SCREENING E IDENTIFICACIN kits comerciales con glbulos rojos o clulas con
anfgenos conocidos. Nos permiten detectar e identificar a nuestros anticuerpos controles.
ANTICUERPOS CONTROLES sueros de nuestra seroteca con anticuerpos conocidos detectados e
identificados en nuestro trabajo diario que se guardan para este fin.
CLULAS O GLBULOS ROJOS CONTROL heterocigotos para el anfgeno investigado.
CLULAS CONTROL AGH glbulos rojos recubiertos con anticuerpos, se usan para control de
calidad de los test de AGH.
TIEMPO PTIMO tiempo mnimo que muestra una aglutinacin igual o superior a la lograda al
incubar durante una hora la prueba de AGH entre el suero control y las clulas apropiadas.
MATERIALES
-
Tubos Kahn
Centrifuga y lector de Inmunohematologa
Pipetas Pasteur y micro pipeta.
Bao termo regulable.
Timer.
Clulas o glbulos rojos Control heterocigotos para los anfgenos investigados
Anticuerpos Controles Anti D, Anti Fya, Anti con una reaccin dbil
Suero Antiglobulina Humana o Suero de Coombs
Suero AB sin anticuerpos o Coombs Indirecto negativo
Clulas control AGH
82
ACTIVIDAD PRCTICA
Sacar de nuestra seroteca los anticuerpos control. Un anti D marcado dbil, si no est disponible
el de ms bajo ttulo que se disponga. Tambin un anti Duffy A o B y un anti K.
Diluya los sueros 1: 4 o 1: 3 para que la reaccin al hacer un test de Coombs indirecto, la reaccin
obtenida sea de una a dos cruces.
Incube durante una hora los sueros control con los anticuerpos elegidos y diluidos segn
intensidad.
Ejemplo
Anti D dbil con clula del panel de identificacin R1 r
Anti Fya con clula del panel screening que contengan antgenos Fya+ Fyb+
Anti Kell con clula del panel screening que contengan antgenos K+ k+
Mientras se estn incubando estos Coombs indirectos lave dos veces en PBS una cantidad
suficiente (aprox. 1ml) de clulas control adecuadas a los anticuerpos elegidos, en el ejemplo
seran clula 4 del panel de identificacin R1/r y clula I del screening de anticuerpos, djelos
secos esperando diluirlos al 3- 4% en el nuevo lote de LISS.
Preparar una batera de tubos marcados con los diferentes tiempos de incubacin 8-10-12-15
minutos, en el ejemplo seria para anti D dbil, anti Fya, anti Kell y suero AB sin anticuerpos.
Una vez cumplido el tiempo de los Coombs indirectos lave y aplique la AGH. Registre los
resultados para luego compararlos con los diferentes tiempos del nuevo LISS.
Repartir los sueros a los tubos segn su marca en una proporcin idntica entre suero y glbulos o
clulas apropiadas, es decir tres gotas de suero para tres de glbulos rojos. Proporcin 1:1
Prepare los glbulos que haba dejado secos al 3 % en el nuevo LISS.
Comience a incubar los tiempos previamente establecidos comenzando por el mayor es decir 15
minutos. Coloque tres gotitas de glbulos apropiados a los tubos marcados D dbil, Fya, Kell y AB
C. Ind. Neg. Incube por 15 minutos a 37 C. Programe el timer en 15 min. Cuando el timer marque
12 min. 15 segundos reparta las tres gotas de glbulos apropiados a los tubos marcados 12
minutos e incube a 37 C .Repita lo mismo para los tiempos 10 minutos, a los 10 min. 15 seg. y a
los 8 min. 15 seg. para el tiempo 8 min.
Nota: Para el suero AB sin anticuerpos puede usar cualquiera de los glbulos preparados se
realiza para descartar reacciones falsas positivas de nuestro reactivo.
Al terminar los tiempos de incubacin se realiza un test de AGH a todos los tubos es decir se lavan
4 veces con PBS y se les agregan dos gotas de AGH a cada tubo.
83
Lea y registre los resultados cuidadosamente discriminando el grado de aglutinacin en cantidad

de cruces.
Valide los resultados negativos con clulas control AGH.
Ejemplo
MEDIO Y TIEMPO
DE REACCION
AGH COOMBS INDIRECTO

ANTI-D
ANTI - Fya
ANTI - K
SUERO AB
LISS 8
+/-
+/-
+/-
LISS - 10
+/-
LISS - 12
++
LISS - 15
++
AGH 1 Hr
++
RESULTADOS
El tiempo de incubacin a elegir para el nuevo lote es el que muestre una aglutinacin
igual o superior a la lograda al incubar los mismos sueros por una hora a 37 C y terminados en
AGH.
El tiempo ptimo en el ejemplo es de 12 minutos. Se selecciona el tiempo menor donde la
reaccin es igual a la obtenida en AGH en incubacin 1 hora.
MEDIO Y TIEMPO
DE REACCIN
AGH COOMBS INDIRECTO

ANTI-D
ANTI - Fya
ANTI - K
SUERO AB
LISS 8
LISS - 10
LISS - 12
LISS - 15
AGH 1 Hr
84
TCNICA DEL POLIBRENE

El Polibrene al igual que el LISS y el PEG incrementan la reactividad de los anticuerpos y abrevian
la incubacin.
El Polibreno es un polmero de amonio cuaternario catinico de baja potencia inica, que es capaz
de interactuar con las cargas negativas de los glbulos rojos sensibilizados con anticuerpos del
suero y producir su agregacin irreversible.
Se incuban los glbulos rojos con suero en un medio de baja fuerza inica que facilita la fijacin de
los anticuerpos y luego se aade polibreno, se centrifuga para lograr la agregacin de los
hemates. Luego se resuspenden las clulas adicionando citrato de sodio.
La aglutinacin mediada por anticuerpos persistir, pero las cedulas no recubiertas se dispersaran.
Su principal utilidad es potenciar la reactividad antgeno-anticuerpo de algunos sistemas como el
Rh, pero no del sistema Kell.
Usos: Deteccin e identificacin de anticuerpos
Determinacin de antgenos eritrocitarios.
Muestra: suero o plasma
Reactivos:
Solucin salina normal
Medio de baja fuerza inica o MBPI (dextrosa al 5%, EDTA disdico).
Solucin de trabajo: Polibreno al 0,05% de una solucin madre al 10% preparando 0,5 ml de
Polibreno + 99,5 ml de suero fisiolgico
Solucin de resuspensin: citrato trisdico 0,2 M, dextrosa al 5%
Antiglobulina Humana con Polibrene.
Tcnica
1. En un tubo Khan poner 0,1 ml de suero en estudio y una gota de glbulos rojos
resuspendidos 2-5% en PBS, adems agregar 0,1 ml de MBPI
2. incubar a TA por 1 minuto
3. agregar 0,1 ml de Polibreno 0,05%. Mezclar y centrifugar. Eliminar sobrenadante, sin
resuspender las clulas.
4. agregar 0,1 ml de solucin de resuspensin
5. leer muestra en estudio junto con los controles + y
6. informar en cruces
7. si desea continuar con AGH se deber lavar 4 veces y agregarle el reactivo de Coombs.
85
TECNICA ENZIMATICA PAPANA EN DOS ETAPAS

Es una tcnica enzimtica usada para el tratamiento de glbulos rojos en situaciones en que en las
tcnicas de rutina no se ha podido identificar un anticuerpo.
La papana es una enzima proteoltica que acrecienta la reactividad de los antgenos contra los
anticuerpos.
Reactivos
.
- Papana al 0.1%.
- Glbulos rojos concentrados, lavados 2 veces en PBS.
- Buffer fosfato salino (PBS).
- Panoscreen Cells.
Tcnica
Primera etapa
1. Diluir 10 veces la papana stock para que quede a una concentracin 0.1%.
2. Tomar un tubo kahn y poner un volumen de glbulos (panoscreen cells) concentrados y
lavados, con 4 volmenes de papana al 0.1 %.
3. Incubar por el tiempo determinado segn la estandarizacin hecha a la papana en uso, a 37C.
4. lavar los glbulos tratados 2 veces con PBS.
5. Preparar una suspensin de los glbulos rojos al 3% en PBS. Estos pueden ser guardados a 4C
por 48 horas.
Segunda etapa
1. Poner un volumen de los glbulos al 3% con un volumen de suero a estudiar, en tubos Kahn
numerados del 1 al 11. Incluir un tubo control de la tcnica donde se use Control anti D a
cualquiera de las clulas del panel papainizado que sea Rh positivo. Incubar 20 minutos a 37C.
2. centrifugar segn tiempo de lectura estandarizada y leer suavemente en busca de aglutinacin.
3. De ser negativo el resultado o muy dbil se puede lavar 4 veces con PBS los tubos, y agregar
suero de Coombs (siguiendo la tcnica de Coombs indirecto), leer en busca de aglutinacin.
Preparacin de un Stock de Papana
Reactivos
-
Agua destilada.
Papana Sigma.
Cistena Sigma (como hidrocloruro).
buffer sorensen.
86
Tcnica
1. Pesar 1 gr. de Papana Sigma y poner en un vaso pp.
2. Pesar 0.44 gr de Cistena Sigma y poner en el otro vaso pp.
3. Poner el gramo de papana en el mortero y pulverizar, adicionando 50 ml de buffer sorensen.
Preparacin Buffer Sorensen.
-
KH2PO4
2.2 grs.
Na2HPO4 x 2 H2O
0.09 grs.
Disolver en 100 ml aprox. De agua destilada.
Ajustar pH a 5.4, y llevar a volumen final de 250 ml.
Conservar refrigerado
4. Poner sobre un embudo Papel whatman sin que queden espacios entre el papel y el embudo.
Poner el embudo en un matraz de aforo de 100ml. Filtrar la mezcla sin mover.
5. Disolver los 0.44 grs de cistena en la solucin de papana filtrada.
6. Enrasar a 100 ml con buffer sorensen e incubar 60minutos a 37C.
7. Envasar en tubos Eppendorf en alcuotas de 0.5 ml.
87
BANCO DE SANGRE Y MEDICINA TRANSFUSIONAL
PUNCIN SANGRE VENOSA EN BANCO DE SANGRE

Preparacin del sitio de venupuncin.
Para la adecuada eleccin del sitio de puncin, se debe inspeccionar ambos brazos, extrayendo la
sangre finalmente, de una vena de la regin antecubital de gran calibre y libre de lesiones
cutneas. El torniquete incrementa la prominencia venosa, tambin es til que el donante abra y
cierre su mano varias veces.
Para preparar la piel, se utiliza una solucin antisptica yodada para desinfectar el sitio de puncin
de la vena, esta se debe secar completamente despus de su aplicacin o limpiar con una gasa
estril seca antes de la venopuncin (revisar las recomendaciones del fabricante). El rea
preparada no se debe tocar con los dedos antes de la puncin.
Donantes sensibles al yodo, usar clorhexidina o Alcohol al 70%.
Preparacin de las bolsas de extraccin de sangre.
Para la correcta recoleccin de sangre, se debe utilizar bolsas de extraccin aprobadas por la FDA,
las cuales deben cumplir con requisitos de esterilidad y ser apirgenas.
Las bolsas deben ser inspeccionadas en busca de cualquier defecto, tener fecha vigente y
anticoagulante suficiente de aspecto claro y transparente.
Si el envoltorio exterior de las bolsas estriles llega a estar hmedo estas no se deben utilizar.
Soluciones anticoagulantes-conservantes mg
Relacin solucin/sangre
Vida til das
Citrato de sodio
cido ctrico
Dextrosa
Fosfato de sodio monobsico
Adenina
CPD
CP2D
CPDA-1
1,4 : 10
21
1.660
188
1.610
140
0
1,4 : 10
21
1.660
188
3.220
140
0
1,4 :10
35
1.660
188
2.010
140
17,3
88
Venupuncin
Esta se debe realizar en una sala que sea cmoda, equipada y aireada.
Debe ser realizada por personal capacitado, mediante una venopuntura nica, con aguja de
dimetro de 16 G desechable y estril. Antes de romper el sello de la aguja de extraccin debe
estar pinzada la tubuladura que comunica con la bolsa (ASEGURA CIRCUITO CERRADO).
Durante la extraccin de la sangre es de suma importancia mezclarla con el anticoagulante
(agitacin mecnica o inversin manual de la bolsa).
La recoleccin de la sangre debe tener un flujo continuo, se puede extraer en un tiempo que vara
entre 8-10 minutos, aceptable hasta 15 minutos.
Reacciones adversas a la donacin:
Si bien el procedimiento es bien tolerado por la mayora de los donantes existe un nmero de
personas que reaccionan inesperadamente a la donacin de sangre, por lo que es necesario estar
preparado para reconocer y atender a estos donantes. Por lo mismo se hace necesario que exista
entrenamiento en Reanimacin Cardio Pulmonar (RCP) y los elementos bsicos para atender un
paro cardiorrespiratorio, as como manejar la cadena de sobrevivencia de apoyo vital bsico de la
institucin a que pertenece el banco de sangre.
89
EXAMEN FSICO AL DONANTE DE SANGRE

Introduccin
La seleccin del donante de sangre debe ser de forma obligatoria y se basa en un breve
examen fsico y en un historial clnico, que determina que la donacin no sea perjudicial para el
donante ni el receptor (Reacciones adversas).
Examen Fsico
El examen fsico considera adems de la impresin general el control de peso, pulso
perifrico, presin arterial, temperatura y hemoglobina.
Control de Peso
Determinar peso exacto en los donantes que no sepan su peso o que al entrevistador le
revista duda el peso aparente.
Personas que pesen menos del mnimo son ms propensas a experimentar efectos adversos
(mareos, debilidad) ya que la donacin representa una mayor proporcin de su volumen
sanguneo.
Materiales
Pesa o balanza
Valores de referencia
Peso mnimo es 50 Kg. en mujeres y 55 Kg. en hombres, la extraccin representa
aproximado el 12% del volumen sanguneo.
Pulso Perifrico
Son los latidos que experimentan las arterias producto del bombeo de la sangre realizado por el
corazn. Indica la frecuencia cardiaca, en otras palabras, el nmero de veces que el corazn late
por minuto.
Materiales
Reloj con segundero.
50-100 pulsaciones por minuto.
90
Presin Arterial
La presin arterial representa la presin ejercida por la sangre contra la pared de las arterias.
La presin arterial tiene dos componentes:
La presin sistlica: Se refiere al efecto de presin que ejerce la sangre eyectada del corazn
sobre la pared de los vasos.
La presin diastlica: Se refiere al efecto de distensibilidad de la pared de las arterias, es
decir el efecto de presin que ejerce la sangre sobre la pared del vaso.
La presin de pulso es la diferencia entre la presin sistlica y la diastlica.
La presin arterial vara en las personas a lo largo de las 24 horas. Los factores que influyen son las
emociones, la actividad fsica, la presencia de dolor, estimulantes como el caf, tabaco o algunas
drogas, etc.
Materiales
Esfigmomanmetro de mercurio
Sistlica 100-160 mm Hg.
Diastlica 60-100 mm Hg.
Valores fuera de los rangos normales son causa de exclusin.
Temperatura
La temperatura axilar del donante no debe ser superior a 37 C. Temperaturas inferiores a lo
normal, no suelen ser significativas.
Valor de referencia
No mayor a 37 C
91
TCNICA DE DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA (Hb)

Mtodo del Sulfato de Cobre
Principio
Este mtodo se basa en la gravedad especfica de una solucin de sulfato de cobre
equivalente a la concentracin de Hemoglobina de una gota de sangre analizada. La gota al caer
es encapsulada en un saco de proteinato de cobre que preserva su peso especfico durante 15
segundos; durante este tiempo la gota queda en suspensin, se va al fondo o queda suspendida
en la solucin, as la lectura se realiza dependiendo del lmite fijado de la hemoglobina.
Materiales
Solucin de CuSO4 densidad 1.053 ( Hb 12.5 gr./dl, varones)
Solucin de CuSO4 densidad 1.052 ( Hb 12 gr./dl, damas)
Estas soluciones deben ser cambiadas diariamente o despus de cada 25
determinaciones.
HemoCue
Celdilla capilar del HemoCue para calibrar
Metodologa
El sitio de puncin capilar debe limpiarse con una solucin antisptica y secarse con una
gasa o algodn limpio. La piel debe ser puncionada firmemente, a un costado del dedo en su parte
distal, con una lanceta estril o con dispensador de lanceta. La primera gota de sangre se debe
descartar.
92
Para medir la hemoglobina, se debe desinfectar la yema de uno de los dedos del donante con
alcohol 70%.
Puncionar rpida y suavemente la yema del dedo con una lanceta estril.
Con un algodn limpiar la primera gota de sangre. Tomar un poco de sangre en un capilar
y dejar caer una gota en un vaso con sulfato de cobre a una altura de 2 cm del lquido.
En caso de tener lector automtico, encender lector y calibrar. Con otra celdilla capilar de
HemoCue tomar una gota de sangre del donante que cubriendo el crculo central del capilar o
idealmente que este quede lleno.
Colocar en el lector de hemoglobina HemoCue y cerrar. El resultado aparecer en la pantalla en

unos segundos.
93
Interpretacin en sulfato de cobre

La gota debe observarse por 15 segundos. Si la gota de sangre tiene un peso especfico
ms alto que la solucin, se ir al fondo dentro de los 15 segundos, por el contrario, la gota se
quedara suspendida o subir.
Interpretacin en HemoCue
Hombres: > 12,5 g/dL
Mujeres: > 12,0 g/dL
Valores menores son causa de exclusin.
94
INSTRUCTIVO PARA LA SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE

1.- INTRODUCCIN:
La seguridad de la transfusin de sangre o de sus componentes comienza con la apropiada
seleccin del donante. Para lograr este objetivo se dispone de una serie de preguntas (encuesta),
las que formuladas durante una entrevista, la que debe ser realizada en un ambiente privado y
que asegure la confidencialidad, permita obtener una correcta seleccin de los donantes.
Enfatizando que este proceso tiene como objeto la proteccin de la salud del donante como
tambin proteger la salud del receptor. La entrevista debe ser apoyada con folletos informativos
acerca de las enfermedades que se transmiten por la sangre, de la seguridad de la extraccin
sangunea, de la importancia de la donacin de sangre y que entregue informacin que favorezca
la autoexclusin de los individuos con conducta sexual de riesgo. Es necesario ofrecer al Donante
en forma permanente un proceso seguro y controlado.
La atencin que se realiza al donante, consta de una entrevista, de un pequeo examen fsico y
del acto de donacin de sangre, todo lo cual debe quedar registrado en un documento escrito.
El registro de la atencin del donante debe tener los siguientes datos:
1. La Fecha y hora de atencin
2. La identificacin del donante: Contiene la informacin necesaria para identificar con
seguridad al donante, debiendo llenar con el mximo de precisin todos los datos.
3. Examen fsico que documente el estado general del donante: Incluye peso, pulso,
presin arterial, hematocrito y/o hemoglobina y aspecto general del donante.
4. La encuesta: Comprende una serie de preguntas especficas que tienen por objeto
recoger una clara informacin del donante, para determinar si cumple o no con los
requisitos exigidos por el Banco de Sangre.
5. El consentimiento informado escrito del donante: Todo donante debe firmar su
consentimiento al procedimiento, y declarar que entiende las preguntas formuladas y que
la informacin entregada es verdadera.
6. Tipo y causa de rechazo: debe registrarse la causa del rechazo y el tipo, si el donante no
cumple con los requisitos exigidos para una donacin de sangre segura.
7. Las caractersticas de la donacin: debe registrarse el tipo de puncin y la duracin de la
donacin.
95
8. Reacciones adversas a la donacin: Debe anotarse las caractersticas de cualquier

reaccin que presente el donante durante o despus de la donacin y su tratamiento.
9. Identificacin del encuestador y flebotomista: El responsable debe anotar su nombre en
el lugar correspondiente.
El encuestador debe incentivar la donacin voluntaria por lo tanto junto con dar los agradecimientos
por la donacin debe invitar al donante a ser donante voluntario altruista, y pedir el consentimiento
para ser llamado a donar sangre en el futuro.
DONACION EN BANCO DE SANGRE GLOSARIO DE TERMINOS

DONANTE POTENCIAL: Toda persona que acude al Banco de Sangre u otra unidad de recoleccin
de sangre, con la intencin de donar sangre completa o algn componente sanguneo en
particular.
DONANTE VOLUNTARIO : Toda persona que dona sangre o algn componente sanguneo en
forma voluntaria, altruista, no remunerada repetida en el tiempo y est libre de patgenos
trasmitidos por la sangre y no presenta conducta de riesgo.
DONANTE POR REPOSICION O RELACIONADO: Toda persona que an cumpliendo con los
requisitos anteriores dona sangre destinada a reponer transfusiones efectuadas a pacientes o
potencialmente en situaciones especficas como futura ciruga.
DONANTE ACEPTADO: Toda persona que acude a donar sangre o algn componente sanguneo y
que cumple con los requisitos establecidos por el, Banco de Sangre o Centro de Donacin.
DONANTE RECHAZADO: Todo donante potencial, que no cumple con los requisitos establecidos
por el Banco de Sangre y Centro de Donacin. EL RECHAZO PUEDE SER TEMPORAL O
DEFINITIVO
RECHAZO TEMPORAL: Aqul que no cumple con
susceptible de hacerlo en plazos definidos por la causalidad
los
requisitos establecidos pero
RECHAZO DEFINITIVO: Aqul que no cumple con los requisitos establecidos y no susceptible de
alcanzarlos en el tiempo.
DONACION EFECTIVA: Procedimiento que logr la Sangra; en donante aceptado en el tiempo - en
volumen (peso) en calidad adecuada, obteniendo una bolsa de Sangre o de un Hemocomponente
en particular, susceptible de ser fraccionada o transfundida.
96
DONACION FRUSTRA: Procedimiento que no logr ser efectivo por dificultad en acceso
venoso, dificultad en la Sangra, Reaccin Adversa a la donacin o por problema tcnico,
incluyendo fallas en las bolsas.
Si la causa es motivada por prolongacin en el tiempo de la Sangra, se le denomina donacin
lenta.
UNIDAD O BOLSA FRACCIONABLE: Es toda bolsa de recoleccin de sangre completa, que
cumple con los requisitos de calidad volumen/peso ; aspecto ; ausencia de cogulos, etc.
susceptible de ser fraccionada mediante procedimientos especficos para cada hemocomponente.
UNIDAD O BOLSA POR AFRESIS : Es toda unidad o bolsa colectada mediante mquina de
afresis, que contiene un hemocomponente programado, especfico y obtenida de
donante previamente seleccionado, y susceptible de ser transfundida.
REACCION ADVERSA A LA DONACIN FISICA/MENTAL : Es toda Reaccin negativa, que se presenta
en el donante, durante cualquier etapa del procedimiento y que puede tambin producirse
durante o post donacin. En este ltimo caso la relacin causa efecto depender de la patogenia
de la Reaccin Adversa.
DONANTE AUTOEXCLUIDO: Persona que acudiendo al Banco de Sangre con el fin de donar sangre
se autoexcluye sin necesidad de precisar causa en cualquier etapa.
AUTOEXCLUSION PRE DONACION: La autoexclusin ocurre en la pre seleccin o durante la
seleccin.
AUTOEXCLUSION POST DONACION: Aqul que por cualquier medio verbal - por escrito, en
documento Autoexclusin - telfono Mail - carta correo etc. indica al centro colector que su
sangre o hemocomponente no debe ser ocupada para transfusin.
DONANTE PARA AUTOTRANSFUSION: Es toda persona sana o enferma, en condiciones de
someterse al procedimiento de Sangra, que dona en forma autodirigida (Donante / Receptor) y
requiere cumplir los requisitos que el centro de coleccin determine.
97
2.- NORMAS PARA EL LLENADO DE LA ENCUESTA:
a) Quin: El personal profesional capacitado responsable de la seccin .

b) Cmo: Preguntando al donante uno a uno los aspectos que contiene la encuesta,
recogiendo la informacin pertinente, teniendo presente la importancia de explicar
en trminos simples cada punto y de ganar la confianza del donante para lograr
respuestas verdaderas. Dar las facilidades para la autoexclusin.
c) Cundo: Una vez que el posible donante ha ledo la informacin acerca de las
enfermedades de transmisin sangunea, del procedimiento de la extraccin y ha
decidido no autoexcluirse
3.- NORMAS DE SELECCION DEL DONANTE:
a) El donante ser entrevistado por un profesional capacitado .

b) Se evaluar la informacin recogida, determinando la aceptacin o rechazo del
posible donante.
c) En caso de rechazo se explicar al donante en la forma ms clara y completa posible,
si la causa es definitiva o transitoria, se darn las recomendaciones pertinentes,
verificando que el donante ha comprendido la situacin, y se registrar
detalladamente dicha causa en la ficha del donante.
d) Si no hay motivos de rechazo, se someter a un examen fsico dirigido a revisar
especialmente las zonas de puncin y a la toma de signos vitales. La piel de la zona de
venopuncin en ambos brazos no debe presentar lesiones o signos que indiquen que
es adicto a drogas endovenosas. Lesiones poco importantes como Dermatitis y Sarna
sern causa de rechazo temporal.
4.- CRITERIOS DE SELECCIN:
1.- EDAD: - 18 a 65 aos.

98
- La excepcin debe ser avalada por un mdico.

- Si se trata de una primera donacin, la edad mxima ser de 60 aos.
2.- PESO: -Mnimo 50 kilos.

Los donantes que pesan 50 Kg o ms, pueden donar 450+/- 45 ml de sangre ya
que tienen una volemia aproximada de 3750 ml, y por lo tanto la extraccin representa ms o
menos el 12% del volumen sanguneo, es importante que las muestras para los test
pretransfusionales del donante, no deben exceder los 30 ml. La obtencin de ms del 15% de la
volemia en un donante de 50 Kg puede significar una mayor frecuencia de reacciones adversas.
3.- PRESION ARTERIAL:
-Sistlica: 100 - 160

-Diastlica: 60 - 100
4.- PULSO: -
Entre 50 y 100 pulsaciones por minuto, regular y

palpado a lo menos por 30 segundos.
5.- HEMOGLOBINA:
12.5 gr/dl en hombre

12.0 gr/dl en mujeres
6.- HEMATOCRITO:
38% en hombres
36% en mujeres
99
7.- PREGUNTAS DE LA ENCUESTA:
1.- Se siente Ud. bien hoy y goza de buena salud?
Dirigida a detectar cualquier patologa o antecedentes que no estn cubiertos por las
preguntas de la encuesta y que pudieran causar dao ya sea al donante o al receptor. El
donante debe tener un aspecto saludable, sin sntomas o signos de intoxicacin por
alcohol o drogas. Donantes bajo la influencia del alcohol, deben rechazarse
transitoriamente hasta cumplir 12 horas sin ingesta de alcohol, debido a que
generalmente no es posible obtener antecedentes clnicos fidedignos, la donacin adems
puede ser daina para el propio donante.
Preguntar sobre antecedentes de alcoholismo crnico, dao heptico crnico,
hemorragias digestivas etc. Si existen estos antecedentes, rechazar en forma definitiva al
donante.
Una pequea cantidad de alcohol ingerida recientemente, en especial durante las
comidas, no es causa de rechazo ya que en ese caso no existe riesgo para donante ni
receptor.
Pregunta adicional:
a.- Ayuno de ms de 6 horas, en cuyo caso debe rechazarse temporalmente al donante
hasta que ingiera algn alimento.
2.- Ha donado sangre alguna vez, cuando, donde?:

Dirigida a tener antecedentes sobre el lugar, fecha, de donaciones previas, con el objeto
de proteger tanto al donante como al receptor.
SI:
Se acepta solo si su donacin fue hace ms de 3 meses. Si tiene acceso a

antecedentes previos del donante, estos deben estar de acuerdo con los
requisitos de cualquier donante.
NO:
Se acepta.
100
3.- Ha sido rechazado alguna vez como donante de sangre? por qu?
Dirigida a conocer alguna causa temporal o definitiva que lo inhabilite como donante.
Enfatizar acerca del conocimiento de resultados alterados de exmenes realizados a su
sangre. Rechazar todo donante con antecedentes de exmenes positivos para : Hepatitis,
Chagas, Sida, HTLV-I. En caso de Sfilis depender si hubo tratamiento, aceptndolo si existi
y fue dado de alta hace un ao por lo menos.
Evaluar si el rechazo anterior fue por una causa definitiva o transitoria, en este ltimo
caso, el donante se acepta si el plazo determinado se ha cumplido.
SI:
Preguntar la causa y verificar si es causal o no de rechazo.
NO:
Se acepta como donante.
4.- Tuvo algn problema con la donacin?:

Dirigida a detectar alteraciones o problemas en donaciones previas. Debe quedar
registrada las caractersticas de la reaccin adversa a la donacin.
SI:
Debe rechazarse todo aquel que haya presentado complicaciones mayores como
vmitos, palpitaciones, desmayo, etc.
NO:
5.- Ha consultado por problemas de salud en los ltimos 12 meses?:

Dirigida a detectar patologas que lo inhabiliten como donante.
a) Enfermedades Cardiovasculares: Se rechazan: Cardiopatas con insuficiencia cardaca,
Enfermedad reumtica en tratamiento y Enfermedad coronaria (angina, infarto), por la
posibilidad de una nueva crisis.
b) Diabetes: Se rechaza quienes estn bajo tratamiento con medicamentos normoglicemiantes.
Se aceptan los que controlan su diabetes slo con rgimen.
101
c) Hipertensin: Se rechaza aquellos que estn en tratamiento. En caso de detectar valores de

presin fuera de los rangos establecidos, se debe esperar 15 minutos y volver a tomar la
presin con el donante acostado.
d) Enfermedades Gastrointestinales: Se rechaza las diarreas agudas o crnicas reactivadas. Se
aceptan donantes con antecedentes de lcera pptica asintomticos y sin tratamientos. Otras
patologas como plipos rectales o hemorroides, pueden ser aceptados como donantes si en
el momento del interrogatorio estn asintomticos y sin tratamiento mdico.
e) Enfermedades Respiratorias: Se rechaza las enfermedades broncopulmonares activas,
Tuberculosis activa. Cuadros respiratorios agudos se rechazan hasta su curacin.
Se acepta a las personas que han padecido tuberculosis y que despus de 1 ao de haber
cumplido el tratamiento y dado de alta. Resfros activos se rechazan transitoriamente.
f)
Cncer: Se rechaza. Se aceptar solo con autorizacin mdica, despus de 5 aos sin tratamiento.
g) Enfermedades Hematolgicas: Se rechaza si ha presentado anemia crnica o enfermedades

oncohematolgicas como Linfomas, Leucemia, etc.
h) Enfermedades Inmunolgicas no alrgicas: Se rechaza en forma definitiva a quienes presenten
enfermedades tales como: Lupus Eritematoso Sistmico, Artritis Reumatodea, Enfermedad
Mixta del Tejido Conectivo, Esclerodermia.
i)
Enfermedades Endocrinolgicas: Se rechaza en forma definitiva como donante a las personas

que sufran endocrinopatas activas y las que han recibido hormona del crecimiento de origen
humano.
j)
Enfermedades Hepticas: Hepatitis ver pregunta N 15

Se rechaza en forma definitiva a quienes sufran Hepatopatas (cirrosis heptica).
k) Malaria: Se rechaza por un perodo de 3 aos a quienes hayan sufrido de Malaria, tomado drogas
antimalricas, o quienes han vivido en pases endmicos.
l)
Piel: Se rechaza a quienes presenten lesiones en la piel especialmente en las reas de puncin
venosa o vecinas. Lesiones poco importantes como dermatitis y sarna sern causa de rechazo
temporal.
m) Enfermedades Renales: Se rechaza personas con enfermedades crnicas. Se rechazan por 2

meses las pielonefritis aguda. No se rechaza personas con antecedentes de clculos renales
(Litiasis).
n) Retraso mental: Se rechaza en forma definitiva por no tener discriminacin y por pertenecer a
grupo de riesgo de enfermedades de transmisin sexual.
102
o) Sfilis y Gonorrea: Se rechaza por un perodo de 12 meses, ya que pudieran asociarse con
transmisin de VIH.
6.- Ha sido sometido a operaciones en los ltimos 12 meses?

NO:
Acepte al donante
SI:
Se rechaza toda ciruga por 12 meses.

Se acepta solamente ciruga menor localizada a nivel de piel.
7.- Ha recibido transfusiones en los ltimos 12 meses?
NO:
Acepte al donante.
SI:
Se rechaza hasta cumplir 12 meses desde el momento de la transfusin. Consultar
la causa de la transfusin y registrarla en la hoja de encuesta, seccin observaciones.
8.-Ha tenido sangramiento dentario, digestivo, y/o ginecolgico?
NO:
Acepte al donante.
SI:
Consultar causa, frecuencia y temporalidad. Se rechaza si es frecuente, importante y
activo.
9.-Ha tenido convulsiones, desmayos o sufre de epilepsia?

Dirigido a detectar personas que hayan sufrido desmayos frente a estmulos banales
(stress, extraccin de sangre, etc.), durante su vida adulta, o que estn en tratamiento por
epilepsia.
NO:
Acepte al donante.
103
SI:
Se rechaza si ha presentado desmayos frente a estmulos banales (stress,

extraccin de sangre, etc.).
Se acepta si ha cumplido 3 aos sin tratamiento para la epilepsia.
10.- Ha tomado aspirina o antinflamatorios en los ltimos 3 das?

La aspirina y productos que la contengan (Ewin, Mejoral, Gluspirin, Cafiaspirina,
Cardioaspirina etc.), inhiben la actividad plaquetaria durante 1 a 3 das. La sangre de
donantes que estn ingiriendo estos medicamentos hasta 3 das antes de la donacin, no
debe ser utilizada para preparar concentrados plaquetarios. Lo mismo se aplica para
aquellos que tomaron Piroxicam o similares.(antinflamatorio)
SI:
Se acepta como donante, rotulando la bolsa "NO PREPARAR PLAQUETAS".
NO:
11.- Ha tomado algn medicamento en el ltimo tiempo? Cul?

En general los medicamentos que toma un donante no son perjudiciales para el receptor.
Pueden ser aceptados como donantes la mayora de las personas que toman
medicamentos, incluso los que lo hacen por indicacin mdica.
Normalmente el rechazo debido a la ingesta de algn medicamento no se debe a las
propiedades de este sino a las caractersticas de la enfermedad que justifica su
administracin. Debe quedar registrado el medicamento que tom el donante y cuando.
NO:
SI:
Preguntar cual y en que dosis.

No son causa de rechazo: Anticonceptivos orales, analgsicos comunes, vitaminas,
sustitutos hormonales y pastillas para adelgazar.
La aspirina y productos que la contengan (Ewin, Mejoral, Gluspirin, Cardioaspirina etc.),

inhiben la actividad plaquetaria durante 1 a 3 das. La sangre de donantes que estn
ingiriendo estos medicamentos hasta 5 das antes de la donacin, no debe ser utilizada
para preparar concentrados plaquetarios. Lo mismo se aplica para aquellos que tomaron
Piroxicam.
Se rechazan personas con antecedentes de ingestin reciente (1 semana atrs) o actual de
los siguientes medicamentos:
104
Antibiticos
Antihistamnicos
Corticoides
Neurolpticos (Antipsicticos y tranquilizantes mayores)
Antiepilpticos - anticonvulsivantes.
12.- Tiene alguna enfermedad crnica?

NO:
SI:
Analizar si es o no causal de rechazo, en caso positivo, explicarle que nunca debe

donar sangre y por qu.
13.- Ha sufrido perdida inexplicable de peso?

El peso es el parmetro biomdico de gran importancia. En el adulto tiende a mantenerse
estable en el tiempo. La ganancia de peso por sobre los valores normales para estatura y
sexo se definen como obesidad.
La prdida de peso inexplicada (4 - 5 kg y ms en los ltimos meses sin causa aparente)
puede constituir un elemento de juicio mdico indicador de enfermedad crnica como:
cncer, SIDA, TBC, hipertiroidismo, anorexia psicgena, etc. Por lo tanto, constituye
motivo de rechazo como donante de sangre. Hace excepcin la baja de peso motivada por
rgimen, asistida por mdico.
NO:
SI:
Analizar si es o no causal de rechazo, en caso positivo, explicarle las razones, y

sugerirle que consulte un mdico
14.- Ha tenido diarrea en los ltimos 10 das?
105
La diarrea es a menudo, un signo de infeccin del aparato digestivo, especialmente de su

segmento intestinal. En este caso puede ser motivado por bacterias, virus, parsitos,
hongos. Como estas infecciones pueden traspasar la barrera intestinal y pasar a la sangre
constituyendo "bacteremias", "viremias". Al momento de la entrevista, al no poder hacer
diagnstico diferencial, con aquellas infecciones que no lo hacen, ni tampoco con diarreas
de causa no infecciosa (como la secundaria a colon irritable) se debe rechazar como
donante.
NO:
SI:
Se rechaza en forma transitoria hasta que cumpla 10 das del ltimo episodio.
Sugerirle que consulte un mdico
15.- .- Ha recibido hormona de crecimiento de origen humano?

Esta pregunta est enfocada a prevenir la transmisin de la enfermedad de CreutzfeldtJacob, una alteracin rara, degenerativa y fatal del sistema nervioso. No se ha demostrado
an la transmisin de la enfermedad por la transfusin sangunea, sin embargo, no hay test
para detectar la enfermedad, por lo tanto, se recomienda que no donen sangre aquellas
personas que han recibido hormona del crecimiento de origen humano, Hormona Pituitaria
de origen humano o injertos de duramadre o quienes tienen algn familiar que padezca de la
enfermedad de Creutzfeldt-Jacob.
NO:
SI:
Se rechaza en forma definitiva si la hormona recibida es de origen humano o con

historial familiar de la Enfermedad de Creutzfeldt-Jacob.
16.- Ha viajado fuera del pas en los ltimos 3 aos? Dnde?

Esta pregunta est enfocada a prevenir la transmisin de enfermedades parasitarias y
otras tales como la malaria, Babeiosis, y otras infecciones como el Dengue. Las personas
deben detallar su estada en las zonas endmicas para ser diferidas temporal o
definitivamente. La Historia de Babesiosis, Dengue es causal de rechazo definitivo.
NO:
SI:
Se acepta como donante

Se evala la condicin de diferido o rechazado.
106
Para la malaria , se recomienda que aquellos que la han tenido, deben ser diferidos por
tres aos desde que se vuelven asintomticos, diferir por un ao a aquellos que han
estado en alguna zona endmica para malaria (ver anexo zonas endmicas), y diferir por
tres aos a aquellos que han vivido en una zona endmica. Exposicin al riesgo con o sin
profilaxis, rechazar por 3 aos
17.- Ha estado privado de libertad en los ltimos 12 meses?

Los individuos que han estado en una institucin correccional (crcel o prisin), por ms
de 72 hrs. consecutivas, se rechazan como donantes por 12 meses desde la fecha de
ltima detencin, por riesgo sexual y/o drogas.
18.- Ha sido vacunado en los ltimos 12 meses?

NO:
SI:
Analizar si es o no causal de rechazo, en caso positivo, explicarle si es definitivo o

transitorio.
107
TIPO VACUNA
VACUNA
Agentes Vivos
Atenuados
BCG
PERIODO DE RECHAZO
FIEBRE AMARILLA
PAPERA
2 3 SEMANAS
POLIO ORAL (SABIN)

SARAMPION
Agentes Vivos
Atenuados
RUBEOLA
VARICELA ZOSTER
Agentes Muertos ,
Toxoides
4 SEMANAS
DIFTERIA
TIFOIDEA
TIFUS
Aceptar si el donante no presenta sntomas como

malestar y fiebre
PARATIFOIDEA
TETANOS
COLERA
COQUELUCHE
INFLUENZA
HEPATITIS B
ANTIGENO RECOMBINANTE
POLIO (SALK)
DIFTERIA
Anticuerpos
RABIA
1 AO
INMUNOGLOBULINAS:
PROFILACTICA: NO se rechaza
HEPATITIS B:
EXPOSICIN AL VIRUS
Rechazo por 1 ao.
ANTI-TETANOS:
Rechazo por 4 semanas
108
19.- Est Ud. embarazada, ha tenido parto o aborto en los ltimos 6 meses?
Mujeres embarazadas y que han tenido parto o aborto en los ltimos 6 meses, no deben
donar sangre debido a los altos requerimientos de fierro en ste perodo. Excepciones a
esta regla deben ser hechas por el mdico del Banco de Sangre.
NO:
SI:
Se rechaza transitoriamente.
20.- Ha tenido hepatitis despus de los 12 aos?

Dirigida a detectar antecedentes de hepatitis viral. Es necesario en algunos casos explicar
el trmino hepatitis en base a "ponerse amarillo".
NO:
Se acepta al donante.
SI:
Se rechaza. Debe instrursele en que nunca puede ser un donante de sangre. Solo
se acepta un donante que refiere ictericia de causa obstructiva comprobada. Si
documenta una hepatitis de tipo A, puede ser aceptado como donante.
21.- Ha tenido relaciones sexuales con personas con hepatitis, dializados o politransfundidos,
en los ltimos 12 meses?
Dirigida a identificar pacientes que pueden estar en fase de incubacin de Hepatitis.
Aunque el perodo de incubacin es generalmente menor de 6 meses, debe rechazarse
hasta 12 meses despus de la ltima exposicin.
Personal de salud no se considera grupo de riesgo, a menos que haya sufrido accidentes
corto-punzantes con material presuntamente contaminado, en cuyo caso debe rechazarse
por 12 meses.
NO:
Se acepta
SI:
Donantes con antecedentes de este tipo de contacto se rechazan por 12 meses.
22.-Usted o su pareja, se han inyectado drogas por va de piel o venas?

Dirigido a detectar personas que estn en riesgo de infeccin por VIH y otras
enfermedades infecciosas que podran ser transmitidas al receptor de productos
sanguneos. Averiguar el tipo de droga, el perodo en que se consumi, rechazar en forma
109
permanente si es drogadicto crnico, drogadicto endovenosos, o si ha tenido conductas

de riesgo en los ltimos 12 meses, producto de su drogadiccin..
NO:
SI:
Se rechaza en forma definitiva.
23.- Se ha hecho tatuajes, sometido a acupuntura o realizado perforaciones en el cuerpo en los

ltimos 12 meses?
Dirigida tambin a la identificacin de personas que pueden estar en fase de incubacin
de hepatitis u otra enfermedad de transmisin sangunea.
En caso de personal de salud pregunte sobre algn accidente como corte o puncin que
haya sufrido en los ltimos 12 meses, en cuyo caso debe rechazarse por igual perodo.
NO:
Se acepta al donante.
SI:
Tatuajes: se rechaza por un perodo de 12 meses.

Acupuntura y perforacin auricular: se rechaza por un perodo de 12 meses.
NOTA: Preguntar sobre tratamientos inyectables con material no desechable ya
que sera causal de rechazo por 12 meses.
24.-Si es hombre. Ha tenido relaciones sexuales con otros hombres?

sanguneos.
NOTA: Algunas personas pueden desear dar otro tipo de explicacin a sus acompaantes
por haber sido rechazados en cuyo caso podr ofrecerse respuestas factibles de ser
utilizadas: resfro, presin arterial elevada, etc.
NO:
Se acepta
SI:
110
25.- Ha tenido relaciones sexuales con prostitutos/as, drogadictos o personas privadas de

libertad?
sanguneos.
NO:
SI:
26.- Ha tenido relaciones sexuales con ms de una persona en los ltimos 12 meses?
sanguneos.
NO:
SI:
Evaluar el riesgo real , y la promiscuidad de la conducta sexual. Si es el caso,

rechazar por 12 meses.
27- Usted quiere donar sangre para hacerse el examen del SIDA?
Si es as consultar el porqu y enviarlo a los consultorios de CONASIDA en que lo hacen en
forma gratuita.
NO:
SI:
Rechazarlo como donante
28.- Ha sido trabajador sexual, o ha aceptado dinero o drogas por sexo?

sanguneos.
111
NO:
SI:
Rechazar en forma definitiva.
29.- Viene a donar sangre por dinero?

Dirigida a detectar donantes pagados. Explicar en forma clara y precisa la inconveniencia de
la donacin pagada. Asegurarse que el donante comprendi el concepto. Se le otorga al
donante la oportunidad de aclarar sus motivaciones para donar sangre.
NO:
SI:
Rechazarlo en forma transitoria, asegurndose que l comprendi el concepto.
NOTA: Cualquier duda que se presente frente a las respuestas entregadas por un donante, que
signifique aplicar un criterio diferente al escrito en este instructivo, o aparezcan aspectos no
consignados en l, deben ser consultados al mdico Jefe del Banco de Sangre.
112
MEDICAMENTOS DISPONIBLES EN CHILE QUE PUEDEN AFECTAR LA

AGREGACIN PLAQUETARIA
Ac Acetilsalicilico
Lertus (diclofenaco)
Action (piroxican)
Meclomen ( ac meclofenamico)
Adona (ibuprofeno)
Merpal (diclofenaco)
Alka- Seltzen (aspirina)
Midol (ibuprofeno)
Algipres (ketorolaco)
Mitrotil (tenoxicam)
Artren (diclofenaco)
Mobex (meloxicam)
Aspirina efervescente
Motrim (ibuprofeno)
Aspirina
Moviflex ( indometacina)
Astodol (ibuprofeno)
Naprosym ( naproxeno)
Antigripales Maver (ac. acetilsalicilico)
Naproxeno
Bioflan (tenoxicam)
Naproxeno Sodico
Bodil (ibuprofeno)
Niofen (Ibuprofeno)
Bladex (ibuprofeno)
Notagol (piroxican)
Brevedol (diclofenaco)
Pediaprofen ( ibuprofeno)
Brexicam (piroxican)
Pemar (piroxican)
Burten (ketorolaco)
Pevoran ( diclofenaco)
Butartrol (ibuprofeno)
Pirexyl ( sup.diclofenaco)
Cafiaspirina (ac acetilsalicilico)
Piroflan (diclofenaco )
Cardioaspirina (ac acetilsalicilico)
Pironal (ibuprofeno )
Cataflan (diclofenaco)
Piroxicam
Desinflan (tenoxicam)
Profenil (ketoprofeno)
113
Diclofenaco
Propalgin (piroxican)
Diclofenaco Sodico
Recaflex (tenoxican)
Dignofenac
Sicadol (ac mefenamico)
Diclotaren (diclofenaco sodico)
Silartrin (ibuprofeno )
Diclotaren-R ( diclofenaco sodico)
Sipirax (diclofenaco )
Dolgenal (Ketorolaco trometanol)
Syndol (ketorolaco trometanol)
Dolmix (ibuprofeno)
Talflex (ketoprofeno)
Dolofar ( ketoprofeno)
Templadol (ac mefenamico)
Dolo-Ketazon (ketoprofeno)
Tenoxicam
Dolonase (ibuprofeno)
Tepronac (piroxican )
Dolo-octirona (ibuprofeno)
Texicam DU (tenoxicam )
Ecotrin 100 (ac. acetilsalicilico)
Trigesico ( ac acetilsalicilico)
Ecotrin 325 ( ac acetilsalicilico)
Turbogesic (diclofenaco potasico)
Efexicam ( tenoxicam)
Veradin ( ac acetilsalicilico)
Ewin (ac acetil salicilico)
Voltaren ( diclofenaco sodico)
fabudol (piroxican)
Zadetin (ketotifeno )
Facitor ( ac acetilsalicilico)
Zolimin (tenoxicam)
Fastum (ketoprofeno)
Feldene ( piroxican)
Felis ( tenoxicam)
Flexono ( indometacina)
Foldox ( piroxican)
Hassapirin ( ac acetilsalicilico)
IBU-2 (ibuprofeno)
114
IBU-4
IBU-6
Ibupirac
Ibuprofeno
Indometacina
Ketoprofeno
Ketorolaco
Ketorolaco trometadol
Ketotisin (ketorolaco)
Kin (ibuprofeno)
115
MEDICAMENTOS CONTRAINDICADOS PARA DONAR SANGRE

Si el donante de sangre a estado tomando o alguna vez ha tomado uno de los medicamentos que
a continuacin se sealan deben diferirse como donante de sangre.
Proscar (finasteride) Tratamiento del agrandamiento prosttico
Avodart (dutasteride) Tratamiento del agrandamiento prosttico
Propecia (finasteride) Tratamiento para la calvicie
Accutane (Amnesteem, Claravis, Sotret, isotretinoin) Tratamiento para el acn

severo
Soriatane (acitretin) Tratamiento para la soriasis severa
Tegison (etretinate) Tratamiento para la soriasis severa
Hormona del crecimiento de la gldula pituitaria Utilizada slo hasta 1985 en nios
con retardo en el crecimiento
Insulina Bovina (Bovine, or Beef, Insulin) Usada en el tratamiento para la diabetes
Inmunoglobulina contra la Hepatitis B Utilizada en los que pudieron estar

expuestos a la Hepatitis B
NOTE: Esta es diferente a la vacuna, que es preventiva y que se da en tres dosis en
un perodo de seis meses.
Vacunas no licenciadas Usualmente asociadas con protocolos de investigacin
Si el donante est tomando Proscar, Avodart, Propecia, Accutane, Soriatane, or Tegison, debe
saber que estas drogas pueden causar malformaciones, la sangre donada a una embarazada
podra contener suficiente para causar dao al feto. Debe diferirse por un mes despus de la
ltima dosis.
Hormona del crecimiento de la glndula pituitaria . Se difiere en forma permanente, riesgo a

contraer Creutzfeldt-Jakob Disease (CJD, for short).
116
Insulina Bovina (Bovine, or Beef, Insulin), Esta insulina proviene de pases que tienen el mal de las
vacas locas, y por tanto puede estar infectada por los agentes causales de la enfermedad. Se
difiere en forma permanente.
Hepatitis B Immune Globulin (HBIG) Riesgo a exposicin de personas que han sufrido de hepatitis
B. Diferir por 12 meses.
Vacunas no licenciadas Diferir por al menos un ao, a no ser que el mdico jefe del servicio diga
lo contrario.
117
RECONOCIMIENTO Y MANEJO INICIAL DE LAS REACCIONES ADVERSAS A LA

DONACION
INTRODUCCIN:
Las reacciones adversas a la donacin de sangre ocurren en aproximadamente un 4% de los
donantes. Los ms propensos a las reacciones son los ms jvenes, aquellos que donan por
primera vez, los que antes de la donacin tienen un pulso alto, y aquellos con una presin arterial
baja. Tambin tienen importancia los factores ambientales, la experiencia del personal que realiza
la flebotoma, las caractersticas del local (lleno, caluroso), el tiempo de espera, y el estado
anmico del donante.
Las complicaciones se previenen con un personal amable, que transmita confianza y con una
buena tcnica de puncin venosa.
Se clasifican en tres grupos principales
Efectos vasovagales
Sncope
Bradicardia
Diaforesis
Palidez
Mareos
Nuseas
Convulsiones
Tetania
Venipuntura
Dermatitis local
Hematoma
Puncin arterial
Dao del nervio
Infeccin local
Tromboflebitis superficial
118
El sindrome vasovagal o fatiga es la complicacin ms frecuente. Es provocado por motivos

sicolgicos o neurofisiolgicos, pueden ser causados por la visin de la sangre, por ver a otros
donando o por motivos inexplicados. Se caracterizan por sensacin de debilidad general,
sudoracin, palidez, mareos, pudiendo llegar a prdida de conciencia, convulsiones y relajacin de
esfnteres. La piel es plida y sudorosa, el pulso disminuye en amplitud y frecuencia, lo que ayuda
a distinguir las reacciones vasovagales de las hipovolmicas en las que es frecuente encontrar
taquicardia.
El estado ansioso puede producir hiperventilacin que causa una disminucin del C02 sanguneo
que puede llevar a una alcalosis respiratoria y a tetania.
119
MANEJO DE LAS REACCIONES ADVERSAS A LA DONACION DE SANGRE

Medidas generales
Tranquilizar al donante
Aislar la persona de los otros donantes
Solicitar ayuda si el cuadro no cede con las medidas especficas, es muy intenso o se prolonga
en el tiempo.
Soltar la ligadura y retirar la aguja
Desmayos
Levantar las piernas
Soltar la ropa apretada (cinturones, corbatas, etc.,)
Mantener va area permeable
Monitoreo de pulso y presin arterial
Si el cuadro aparece durante la donacin, sta se debe suspender.
Mantener al donante en la camilla o silln hasta la recuperacin de la conciencia y

normalizacin de los signos vitales
Nuseas y vmitos
Colocar al donante en posicin confortable y rotar la cabeza hacia un lado
Instruirlo para que respire lento y profundo
Proveer al donante de un recipiente para que vomite y toallas desechables
Espasmos musculares y calambres
Se producen por hiperventilacin causada por estado ansioso
120
Pueden ocurrir en la cara, en los brazos y en las manos
El personal, al observar a un donante ansioso, debe tranquilizarlo, desviando su atencin a

travs de la conversacin, y as disminuir la hiperventilacin.
Si no cede se puede usar una bolsa de papel para que respire en ella
Hematoma
Puede ocurrir durante o despus de la flebotoma
Remover la ligadura, sacar la aguja e intentar vaciar el hematoma por medios mecnicos
Colocar parches de gasa estril sobre la zona de puncin y presionar firmemente durante 7 a
10 minutos, manteniendo el brazo elevado sobre el nivel del corazn
Puncin arterial.
Se debe sospechar puncin arterial si el llenado de la bolsa es muy rpido, si la sangre es muy
roja.
Se debe retirar la aguja, presionar firmemente por 10 minutos la zona de puncin , controlar el
pulso arterial, y si este es ausente, avisar al jefe del Banco de Sangre o al mdico de urgencia
en su ausencia.
Convulsiones
Pedir ayuda inmediatamente y prevenir que el donante se golpee.
Mantenerlo en el silln de donacin y si no es posible por la fuerza que desarrolla, colocarlo

en el suelo evitando que se golpee.
Mantener va area permeable, avisar al mdico del Banco de Sangre o al mdico de

urgencia en su ausencia.
Ante cualquier reaccin que no ceda en pocos minutos o que sea muy intensa se debe avisar al
mdico del Banco de Sangre. En su ausencia, se avisar o se referir al mdico residente o de
urgencia.
121
Todas las reacciones adversas a la donacin deben ser registradas en la ficha del donante, con
una indicacin clara si la persona es o no apto para una prxima donacin.
La mantencin de stock de medicamentos para tratar las reacciones adversas a la donacin ser
definida por el mdico jefe del Banco de Sangre, as como las personas autorizadas para
administrarlos
122
PREPARACIN DE HEMODERIVADOS Y CONTROL DE CALIDAD
Objetivo
El objetivo del servicio de banco de sangre, es la obtencin de hemoderivados producidos
por la separacin asptica de los componentes celulares de la sangre y del plasma, mediante un
sistema cerrado estril, el cual permite mantener la integridad de los hemocomponentes y as
asegurar la calidad y seguridad que beneficien al receptor de estos.
La sangre se recolecta en bolsas de extraccin plsticas con bolsas de transferencia o
satlite (doble, triple, cudruple) o con solucin aditiva. La bolsa de extraccin contiene
soluciones anticoagulantes-conservantes, destinada a evitar la coagulacin y preservar la
viabilidad y funcin celular, durante su almacenamiento.
Las bolsas de extraccin de sangre estn diseadas para un volumen de 450 45 ml (405495 ml) con un 63 ml de anticoagulante-conservante. Para los pacientes que pesan menos de 50
Kg para los casos de autotransfusin peditrica o en aquellas situaciones que el volumen extrado
supere el 15% de la volemia se deben extraer una parte del anticoagulante.
Clculo para la extraccin de sangre de donantes que pesan menos de 50Kg.

A = volumen a extraer (*) = (peso del donante Kg / 50 * 450 ml)
(*) = alrededor del 12 % de la volemia.
B = Cantidad de anticoagulante necesaria () A / 100 * 14
() = para las soluciones de CPD o ACDA-1 anticoagulante / sangre (1,4 / 10).
C = cantidad de anticoagulante a eliminar de la bolsa colectora 63 ml B.
La solucin anticoagulante usual contiene citrato (fija calcio del plasma), fosfato (sustrato
para mantener el 2,3-DPG), dextrosa (azcar), adenina (nucletido).
Segn el hemocomponente que se desee, depender la temperatura de conservacin y
velocidad de centrifugacin de la sangre recolectada.
123
FRACIONAMIENTO DE LA SANGRE
Comienza con un donante sano (evitar bacteriemia transitoria) y puncin venosa
limpia (minimizar contaminacin bacteriana).
La sangre se debe extraer de forma rpida (evitar activacin de la coagulacin) sin
traumatizar el tejido, esta se puede extender hasta 15 minutos sin alterar las plaquetas y el
plasma congelado. Al finalizar, la sangre se puede refrigerar a 1-6 C, excepto si se empleara para
la produccin de plaquetas.
La sangre se fracciona antes de 8 horas post extraccin.
La separacin se realiza de acuerdo al peso especfico de cada uno de los
componentes, mediante centrifugacin diferencial y de acuerdo a la calibracin establecida
(velocidad y duracin para cada componente).
Plasma
Plaquetas
Glbulos rojos
Densidad g/ml
1.023
1.03
1.100
Para clculo de volumen de la bolsa de hemocomponente:

Descontar al peso total del hemocomponente, el peso de la bolsa vaca.
El volumen se calcula por la relacin entre masa (g) y densidad (g /ml).
Sangre Total
Es la sangre fresca no separada, contiene la solucin anticoagulante y conservante
(450 ml sangre + 63 ml anticoagulante-conservante.).
Plaquetas y leucocitos dejan de ser funcionales.
Hematocrito 35-45%
Se conserva a 1-6 C
Sin factores de coagulacin lbiles
Actualmente los bancos de sangre no la utilizan, slo cuando es necesario reponer la
masa eritrocitaria y la volemia (hemorragia masiva).
Glbulos rojos
Son unidades de sangre casi sin plasma obtenidas por centrifugacin fuerte.
Este preparado contiene un concentrado de hemates de 200 ml ms unos 100 ml de plasma
residual.
Si la sangre se recoge en CPD-A, los concentrados pueden conservarse por 35 das a 4C.
Hematocrito 60-80% CPD-A
124
Si los glbulos rojos son suspendidos en 100 ml de solucin aditiva (SAG-M, ADSOL), pueden
conservarse por 42 das, hematocrito 55-65%.
Indicacin: componente de eleccin en las anemias sintomticas y en las transfusiones
quirrgicas.
Glbulos rojos leucodepletados
Consisten en la suspensin o concentrado de glbulos rojos contenidos en 5 x 106 leucocitos por
unidad, que se preparan mediante el paso de estos a travs de un filtro de leucodeplecin,
generalmente realizado antes de la transfusin.
Indicacin: Estos componentes pobres en leucocitos tienen valor en pacientes con reacciones
transfusionales no hemolticas febriles, evitar la aloinmunizacion HLA, disminuir transmisin de
algunos virus (CMV, Epstein Barr).
Glbulos rojos irradiados
Consiste en prevenir la proliferacin de linfocitos T transfundidos en los receptores con riesgo de
enfermedad injerto versus husped. La dosis mnima necesaria de irradiacin gamma es de 25 G.
Los glbulos rojos irradiados se conservan por un mximo de 28 das despus de la colecta y
procedimiento de irradiacin.
Indicacin: Transfusiones intrauterinas, inmunocompetentes sometidos a trasplantes de medula
sea, unidades de donantes consanguneos, neonatos bajo peso.
Glbulos rojos lavados
Se requiere realizar en condiciones de asepsia, en 1-2 litros de solucin salina normal, donde se
remueve protenas, electrolitos y anticuerpos plasmticos.
Estos deben usarse dentro de las 24 horas, debido a la realizacin del procedimiento con sistemas
abiertos y se corre el riesgo de proliferacin bacteriana.
Indicacin: En pacientes que tienen reacciones a las protenas del plasma y en aquellos con anti
IgA.
Plaquetas
Se preparan a partir de sangre total a temperatura ambiente. Se obtienen plasma rico en
plaquetas por centrifugacin suave, mediante el sistema cerrado, el PRP se transfiere a la segunda
bolsa (satlite), el que se centrifuga fuerte para obtener el concentrado plaquetario sedimentadas
y resuspendidas en 40-60 ml de plasma. Estas se conservan a temperatura ambiente 20-24 C por
no ms de 5 das en agitacin constante.
Indicacin: pacientes con trombocitopenias o disfuncin plaquetaria.
Para prevenir hemorragias espontneas o detener las existentes.
125
Plasma fresco congelado

Se obtiene a partir de la sangre total con menos de 6 horas de extrada. Se conserva congelado a
-30 C por 12 meses.
Contiene factores de la coagulacin lbiles y estables (cerca de 1 UI/ml).
Su volumen aproximado es sobre 100 ml.
Antes de usarse se debe descongelar en agua a 37 C.
Indicacin: se emplea para tratamiento de hemorragias secundarias a dficit de factores de la
coagulacin.
Crioprecipitado
Se prepara a partir de plasma congelado dentro de las 6 horas de extrada.
El PFC se descongela entre 1-6 C, luego se somete a centrifugacin fuerte para sedimentar el
crioprecipitado, este se resuspende en 15 ml de plasma y se conserva a -30C por 12 meses.
El crioprecipitado contiene aproximadamente 250 mg de fibringeno y 80 U de FVIII.
Antes de usarse se debe descongelar en agua a 37 C.
Indicacin: hemorragias secundarias a deficiencias de FVIII, hemofilia, enfermedad de Von
Willebrand.
126
CONTROL DE CALIDAD DE LOS HEMOCOMPONENTES

Se basa en la evaluacin de por lo menos 4 unidades de cada hemocomponente
preparado en el banco de sangre, bajo las condiciones estandarizadas de velocidad y tiempo de
centrifugacin.
Debe garantizar la efectiva separacin y efectividad del hemocomponente a transfundirse.
Control de calidad de los glbulos rojos:
-
Esterilidad: Cultivar sangre observar a las 24-48 horas. (hemocultivo)

Volumen de la unidad (peso) > 250 ml
Hematocrito: 60-80 CPDA , 55-65 SAG-M, ADSOL, OPTISOL
Control de calidad de plaquetas:

Se realiza al final del perodo de almacenamiento.
-
Esterilidad: sembrar sangre en placa de agar sangre observar a las 24-48 horas.
Determinacin del pH: > 6,2 o mas
Recuento plaquetario /U: > 5,5 x 1010
Rec. Leucocitos/ U: 0.2 x 10 9
Volumen 40-60 ml
Sin contaminacin con glbulos rojos.
Antes de entregarlas se debe inspeccionar:
Agregados
Aspecto arremolinado frente a una fuente de luz.
Tipo de hemocomponente
Volumen
Glbulo rojo
PFC
250-300 ml
100 ml
Crioprecipitado
10-30 ml
Temperatura
conservacin
1-4 C
-30 C
-80 C
-30 C
Plaquetas
40-60 ml
20-24 C
de Tiempo de almacenamiento
21-35-42 das
1 ao
2 aos
1 ao
Descongelado 24hrs a 4C
Mx. 5 das en agitacin horizontal
constante
127
PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES
Pruebas pretransfusionales
El objetivo de las pruebas pretransfusionales, es prevenir las reacciones adversas a la transfusin
por incompatibilidad entre donante y receptor.
Los estudios pretransfusionales comprenden:
Identificacin inequvoca del receptor de la transfusin.
Identificacin inequvoca de las muestras del receptor de la transfusin.
Comprobacin de los resultados obtenidos de las muestras con los obtenidos previamente y
registrados, en el caso de anteriores transfusiones.
Determinacin del grupo ABO y Rh en las muestras del receptor de la transfusin.
Descubrimiento de anticuerpos presentes en el suero del receptor de la transfusin.
Seleccin de los componentes sanguneos apropiados para el receptor de la transfusin.
. Reclasificacin del grupo sanguneo de la bolsa de GR del donante desde la tubuladura de esta.
Realizacin de las pruebas cruzadas de compatibilidad entre el suero del receptor y los hemates
del donante, excepto en casos de extrema urgencia en donde la falta de suministro de la sangre
comprometa la vida del paciente, esto debe ir indicado por escrito por el mdico responsable, en
el laboratorio se debe proseguir con el estudio de compatibilidad luego de entregar la sangre.
Etiquetado de los componentes sanguneos con la informacin adecuada del receptor de la
transfusin.
Tipo de muestra:
Sangre con EDTA para la determinacin del grupo ABO y Rh.
Sangre sin anticoagulante para obtener suero o con EDTA para determinar anticuerpos irregulares
y prueba cruzada. No deben utilizarse muestras hemolizadas.
(Las muestras pueden conservarse a 1-6 C hasta por 1 semana en el caso de necesitarse otra
transfusin dentro de la misma)
128
DESPACHO DE TRANSFUSIONES
Seleccin de unidades a cruzar
Antes de iniciar las pruebas de compatibilidad y una vez seleccionadas las unidades a
cruzar, se debe confirmar el grupo ABO y Rh de las unidades.
Compatibilidad ABO
Siempre que sea posible, todos los pacientes deben recibir unidades de concentrado de
hemates ABO idnticos. Cuando ello no es posible, pueden seleccionarse componentes de grupos
ABO compatibles, en funcin de los antgenos presentes en los hemates y de los anticuerpos
existentes en el plasma del receptor.
Compatibilidad Rh
Los componentes sanguneos Rh positivos deben destinarse a los receptores D positivos,
en tanto que las unidades Rh negativas, aunque sean compatibles con receptores D positivos,
deben reservarse para los receptores D negativos
En ocasiones y ante cuadros de urgencia y carencia de unidades Rh negativas un receptor
D negativo puede recibir unidades Rh positivas, siendo consciente de que se va a producir una
inmunizacin, valorando los riesgos y la posible administracin ulterior de inmunoglobulina antiRh.
Pruebas cruzadas de compatibilidad
En todo paciente que precisa una transfusin y en aquellos que son sometidos a
procedimientos quirrgicos en donde es muy probable la administracin de sangre, se deben
realizar las pruebas cruzadas de compatibilidad, que consisten en enfrentar el suero del receptor
con los hemates del donante.
Por medio de esta prueba debemos demostrar la compatibilidad ABO, Rh y la ausencia de
anticuerpos antieritrocitarios significativos. Si se identifican anticuerpos relevantes, el paciente
debe recibir sangre sin los antgenos correspondientes, aunque los glbulos rojos del donante con
los antgenos fuesen compatibles in vitro.
129
Mtodo:
Pruebas de compatibilidad en tubo
1. Marque un tubo con el No de la unidad a transfundir
2. Lavar 4 veces con PBS los eritrocitos del dador obtenidos de la tubuladura de la bolsa, en el
ltimo lavado eliminar todo el PBS.
3. Preparar una suspensin al 2 % en Liss (19 gotas de Liss por 1 gota de glbulos concentrados).
4. En un tubo previamente marcado colocar 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de eritrocitos
del dador previamente preparados.
5. Centrifugar y leer. Lea en busca de hemlisis o aglutinacin rotando suavemente el tubo frente
a una fuente de luz. Registre el resultado.
6. Incubar segn el tiempo estandarizado para el Liss a 37 C.

7. Centrifugar y leer.
8. Lavar 4 veces con abundante PBS y en el ltimo lavado tener la precaucin de eliminar la mayor
cantidad de salino.
9. Agregar 1 gota de suero antiglobulina humano poliespecfico.
10. Centrifugar y leer
11. En los tubos con resultados negativos colocar 1 gota de clulas control de antiglobulina
humana (Coombs). Centrifugar y leer.
130
PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD EN GEL

1. Glbulos rojos lavados 4 veces en PBS, se deben diluir de la siguiente manera:
Dispensar 1 volumen de Solucin I (LISS) (500 ml) a un tubo y agregar 10 ul de Glbulos Rojos
lavados
2. Agregar 50 ul de G.R. al 1% a cada pocillo
3. Agregar 25 ul de suero o plasma del receptor
4. Incubar 15 minutos a 37C
6. Leer
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD RUTINARIA SALINA-POPIETILENGLICOL

(PEG) 37C- anti-IgG
Mtodo
1. Rotular el tubo con las iniciales del receptor y nmero de unidad del donante.
2. Colocar 2 gotas de suero del receptor.
3. Aadir 1 gota de glbulos rojos (reactivo o de donante) en suspensin al 2- 5% y mezclar.
4. Centrifugar y observar la presencia de hemlisis y/o aglutinacin. Clasificar y anotar los
resultados.
5. Mezclar 2 gotas de polietilenglicol e incubar a 37 C durante 15 minutos.
6. NO CENTRIFUGAR. Lavar 3 veces con solucin salina. Eliminar el sobrenadante del ltimo
lavado. Agregar 1 gota de Suero de Coombs Anti-IgG. Centrifugar y leer en busca de aglutinacin.
Interpretacin de las pruebas de compatibilidad
Investigacin
anticuerpos irregulares
+
de Prueba
cruzada
-
Causa de la aglutinacin
Compatible para la
transfusin
algn Fenotipar donante
El anticuerpo reacciona con

antgeno de los hemates reactivos
El anticuerpo reacciona con antgeno de No
baja incidencia
Los hemates del donante son PAD +
Error en la tcnica
El anticuerpo reacciona con un antgeno No
del donante y de hemates del reactivo
No se detecta anticuerpo
si
131
Inspeccin de la unidad
Antes del despacho de la transfusin se debe verificar la integridad de la bolsa, evidenciar
hemlisis en el plasma, presencia de turbidez, grumos o burbujas, evidenciar grandes cogulos.
Identificacin de la unidad
Identificar la unidad a transfundir (etiqueta con nombre del receptor)
Identificacin del receptor
Al receptor de la transfusin para ser identificado se le pide que diga su nombre completo
o se puede identificar mediante un brazalete de identificacin si este est inconsciente. Sus datos
deben coincidir con su ficha clnica.
Explicar al paciente el procedimiento
Resolver la va de administracin (preexistente o instalar va)
Reclasificacin ABO y Rh del paciente en la cabecera, y debe concordar con la unidad a
transfundir y con la clasificacin original del paciente.
132
INDICACION DE LA TRANSFUSION
(Extractos: 2Edicin 2003 Sociedad Espaola de Transfusin Sangunea Apartado de correos 40078, 28080 Madrid Deposito Legal:
Copyright: SETS 2003 GUA SOBRE LA TRANSFUSIN DE COMPONENTES SANGUNEOS Y DERIVADOS PLASMTICOS)
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
REACCIONES ADVERSAS A LA TRANSFUSIN SANGUNEA

Se entiende por reaccin transfusional a cualquier efecto desfavorable que se presenta en
un paciente durante la administracin de sangre total o de algn derivado de ella. Los efectos
adversos y riesgos asociados a la transfusin de hemocomponentes se clasifican en:
Agudos: Aparecen durante el acto transfusional, o poco tiempo despus
(Hasta 24 horas).
Retardados: Tienen lugar ms all de las 24 horas despus del inicio de la transfusin.
Mecanismo productor inmune: Por reaccin antgeno del donante con anticuerpo significativo
del receptor.
Mecanismo productor no inmunolgico: Por administracin de sangre lisada in vitro, o por la
propia condicin clnica del paciente, donde la hemlisis se produce in vivo.
Principales reacciones transfusionales agudas

Tipo de reaccin
Hemoltica inmune
Etiologa
Incompatibilidad eritrocitaria
Hemoltica no inmune
Destruccin eritrocitaria por

agentes fsicos o qumicos
Anticuerpos antileucocitarios,
Antiplaquetarios, pirgenos.
Febril no hemoltica
Alrgica
Anafilctica
Sobrecarga circulatoria
Lesin pulmonar
aguda
Signos y sntomas
Escalofros, fiebre, dolor en la
zona de infusin, dolor seo,
hemoglobinuria, fallo renal
agudo, oliguria, coagulacin
intravascular diseminada
hemoglobinuria
Fiebre(>1C) cefalea, escalofros,

nauseas, vmitos, malestar
general
Alergia del paciente al producto eritema local, prurito
soluble en plasma del donante
Anticuerpos anti-IgA en pacientes con Tos, broncoespasmo, calambres
dficit de IgA
abdominales, vmitos, diarrea,
shock, prdida de conciencia
Anticuerpos
anti-HLA
o
anti Distres respiratorio agudo con o
neutrfilos en el plasma del donante sin hipotensin que aparece
generalmente entre 1-2 horas
post transfusin
Anticuerpos
anti-HLA
o
anti- Distres respiratorio agudo con o
neutrfilos en el plasma del
sin hipotensin que aparece
Donante
generalmente entre 1-2 horas
post transfusin
143
Hipocalcemia
Transfusin masiva de
hemocomponentes y disminucin del
metabolismo del citrato.
Parestesias, tetania, arritmias
Contaminacin
bacteriana
Administracin de hemoderivados
contaminados por bacterias
Hipotermia
Fiebre (generalmente
>40C), taquicardia,
shock, CID, nuseas y
vmitos, hipotensin,
colapso circulatorio
Arritmia cardiaca
Infusin rpida de
hemocomponentes fros
Administracin de varias unidades de Arritmia cardiaca
hemocomponentes con niveles altos
de potasio
Introduccin de aire
Hipotensin, cianosis,
en la va venosa
colapso circulatorio
Hiperkalemia
Embolia gaseosa
144
Principales reacciones transfusionales retardadas

Tipo de reaccin
Hemoltica
Aloinmunizacin
Enfermedad injerto
contra husped
Prpura posttransfusional
Sobrecarga frrica
Transmisin de
Enfermedades
Etiologa
Respuesta anamnsica
antgenos eritrocitarios
Signos y sntomas
a Malestar general,
inadecuado aumento
de los niveles de
hemoglobina, elevacin de la
bilirrubina srica
Respuesta inmune frente a Generalmente ninguno, pero
antgenos de las clulas puede dar un estado de
sanguneas
refractariedad a la transfusin de
plaquetas,
dificultad
para
encontrar unidades
compatibles, reacciones
hemolticas tardas
ulteriores
Accin de los linfocitos
Eritrodermia,rash maculopapular,
funcionales infundidos sobre anorexia,
nuseas,
vmitos,
el sistema inmune
diarrea, hepatitis, pancitopenia,
fiebre
Anticuerpos
Cuadro purprico,
Plaquetarios
hemorragia, a los 8-10 das posttransfusion
Mltiples transfusiones
Transtornos endocrinos,
de hemocomponentes en
arritmias,
pacientes con necesidades
miocardiopata, fallo heptico y
reiteradas
pancretico
Contaminacin por agentes
Las propias de cada agente
patgenos de las unidades
patgeno transmitido
administradas
145
Pasos a seguir frente a una reaccin adversa a la transfusin sanguinea

Detener inmediatamente la transfusin manteniendo la vena con suero fisiolgico.
Tomar los signos vitales, anotar y describir sintomatologa.
Verificar la etiqueta de la bolsa con los datos del paciente y que esta coincida, con el
destinatario a quien se transfunde.
Notificar la incidencia al mdico responsable del paciente para valorar la intensidad de la
reaccin, el tratamiento oportuno y la continuidad o no de la misma.
Realizar por otra va distinta a la de la transfusin, la extraccin de 10 mL de sangre con EDTA y
10 mL de sangre coagulada.
Enviar al banco de sangre la hoja de reaccin transfusional, la bolsa de sangre con su equipo de
infusin y las muestras extradas (incluida la orina).
Comprobar toda la documentacin administrativa, etiquetas, identificaciones en busca de
posibles contradicciones o diferencias.
Inspeccionar visualmente las muestras plasmticas pre y post-transfusionales para detectar la
presencia de hemlisis (color rosado) o ictericia.
Realizar una prueba de aglutinacin directa (Test de Coombs) en la muestra con EDTA pre y
post-transfusional
Repetir la determinacin de grupo ABO y Rh en las muestras pretransfusionales,
transfusionales y en el componente o hemoderivado administrado.
post-
Determinar el estudio de anticuerpos irregulares en las muestras pre y post-transfusionales del

paciente. Pueden ser negativos en un principio por estar adsorbidos sobre los hemates
transfundidos. En este caso hacer eluido si la PAD es positiva.
Pueden repetir las pruebas cruzadas con la muestra pre y post-transfusional.
Determinar la posible existencia de hemoglobina libre en la orina del paciente emitida tras el
incidente transfusional.
Realizar una tincin de Gram en una muestra de la unidad, as como cultivos microbiolgicos si
estn indicado.
146
SOLUCIONES INTRAVENOSAS Y SU RELACIN CON LA TRANSFUSIN SANGUINEA

Y HEMOCOMPONENTES
Hemocomponente
Sangre
Glbulos Rojos
Plasma
Plaquetas
Soluciones
INCOMPATIBLES
Soluciones en caso de
malos accesos
Soluciones
Compatibles
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Cloruro de sodio
hipotnico
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Cloruro de sodio
hipotnico
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Ringer Lactato
- Albmina 5%
Suero fisiolgico
Plasma Compatible
- Albmina 5%
- Suero fisiolgico
- Plasma Compatible
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Suero fisiolgico
- Suero glucosado
- Suero fisiolgico
- Soluciones que
contengan calcio
- Dextrosa
- Antibiticos
- Calmantes
Crioprecipitados
- Ringer Lactato
- Soluciones que
contengan calcio
- Antibiticos
- Calmantes
- Suero glucosado
- Dextrosa
- Suero fisiolgico
147
BIBLIOGRAFA
1. Manual de la AABB 13 Edicin 2001. Traducido por la Asociacin Argentina de
Hemoterapia e inmunohematologa.
2. Modern Blod Banking and Transfusin Practices. 4 Edicin. Denise M.Harmening. 1999.
3. Manual de la AABB. 15 Edicin. 2007. Traducido por la Asociacin Argentina de
Hemoterapia e inmunohematologa.
4. Methods in immunohematology. 2 edition. W.John Judd, FIBMS, MIBiol. 1994
5. Blood Transfusion Therapy. A Physicians Handbook. 7 edition. 2002
6. Administracin de sangre y hemoderivados. Compendio de medicina transfusional. Elias
Aguilar Ligorit. 2004
7. Gua para el uso clnico de la sangre. Tercera edicin enero 2007. Asociacin Mexicana de
Medicina Transfusional, A.C.
8. Transfusin sangunea. Bases tericas y aplicacin clnica. J.G. Kelton. Ed. Doyma 1988.
9. Revised Preventive Measures to Reduce the Possible Risk of Transmission of CreutzfeldtJakob Disease (CJD) and Variant Creutzfeldt-Jakob Disease (vCJD) by Blood and Blood
Products FDA Center for Biologics evaluation and Research (CBER) - 8/27/2001
10. Transfusion Medicine. Jeffrey Mc Cullough Mc Graw Hill 1998
11. Recommendations for Donor Questioning Regarding Possible Exposure to Malaria. FDA
CBER June 2000
Th
12. Guide to the preparation, use an quality assurance of blood components 5 Edition.
Council of Europe publishing 1999.

Manual - Bsangre2014 Rev05 2014

Загружено:

Сведения о документе

Оригинальное название

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Manual - Bsangre2014 Rev05 2014

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

v2014

Debilitamiento de antgenos A, B y H ............................................................................................. 45

DESPACHO DE TRANSFUSIONES ........................................................................................... 128

Prevenir en el personal de salud de las potenciales exposiciones de patgenos transmitidos

3.- Otros Fluidos:

Manipular con precaucin, no comprimir ni apretar para evitar accidentes.

No necesita descontaminacin previa a su eliminacin.

2.2. Material Corto-punzante: Este material necesita descontaminacin e incineracin previa a su

- No debe manipularse el contenido por lo cual no se recomienda uso de recuperables.

Si no es impermeable el dispositivo, evite que se humedezca o moje durante el perodo de

III. USO DE GUANTES DE PLSTICO, GOMA O LTEX:

Uso de guantes de polietileno: Se utilizan en procedimientos en donde se tiene que tomar

Para cualquier tipo de guante es necesario recalcar que:

Cada usuario responde por su desinfeccin, secado y entalcado.

Deben estar identificados.

IV. USO DE PECHERA PLASTICA:

Caractersticas de las pecheras:

VI. USO DE ANTEOJOS PROTECTORES:

PRECAUCIONES EN LOS LABORATORIOS

REACTIVOS USO FRECUENTE EN BANCO DE SANGRE E

CALIBRACIN DE CENTRFUGA INMUNOHEMATOLGICA

PREPARACIN DE GLBULOS ROJOS SENSIBILIZADOS

GR R1R1, R1R2 o R2R2.

PREPARACIN CONTROL ANTI-D

CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS CLASIFICADORES ABO

Etiqueta clara y legible, donde se considere especificidad y fabricante.

Valores de referencia de titulacin.

anti-AB frente a A1B

CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUEROS Rh, anti D

Etiqueta clara y legible, donde se considere especificidad y fabricante.

CONTROL DE CALIDAD DE ANTICUERPOS DE OTRAS ESPECIFICIDADES

Control de calidad reactivos celulares

Clulas recubiertas con IgG (Clulas control Coombs)

CONTROL DE CALIDAD REACTIVOS MISCELANEOS

CONTROL DE CALIDAD DEL SUERO DE COOMBS

ANTI-GLOBULINA HUMANA (SAGH)

Preparar diluciones seriadas del suero anti-D ( ......1/1024), 1 ml de cada solucin.

En el ltimo lavado eliminar enrgicamente el sobrenadante, secar en toalla absorbente de tal

Glbulos Rojos Sensibilizados con anti-D IgG

TTULO DE LA FRACCIN IgM y DE LA FRACCIN IgG DEL REACTIVO ANTI-D.

DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH EN LAMINA Y TUBO

En lmina de vidrio disponer de 1 gota de cada antisuero monoclonal conocido

Aglutinado grande y firme, fondo claro.

Interpretacin aglutinacin en tubo

Suspensin de glbulos rojos uniforme

Granularidad dbil en la suspensin de glbulos rojos.

Muchos aglutinados de pequeo tamao y un fondo de

glbulos rojos libres.

Aglutinados grandes en un mar de aglutinados ms

pequeos, sin glbulos rojos libres.

Reaccin potente. Varios aglutinados grandes.

Aglutinado nico. No se detectan glbulos rojos libres

Ref. Manual Tcnico AABB 13 Edicin.

CLASIFICACIN ABO Y RH EN MICROPLACAS

Colocar 1 gota de cada antisuero en cada una en distintas microcubetas

6. Leer. Comparar resultados con los obtenidos en el suero.

Colocar 1 gota de anti D en 1 microcubeta de una microplaca

Equipamiento Sistema Automatizado

DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO POR TCNICA EN GELES BIOTYPE

Pipetas automticas 100 l.

1.- Determinacin de antgenos de sistema ABO/Rh

Aadir 50 ul de glbulos rojos A1 al pocillo 5, y 50 ul de glbulos rojos B al pocillo 6.

Banda de hemates al fondo de la columna, resto de la columna sin