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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE LOS RECURSOS NATURALES RENOVABLES


ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA FORESTAL

Propagacin in vitro de caoba (Swietenia macrophylla King)

DOCENTE

: Dr. POCOMUCHA POMA, Vicente S.

ALUMNOS

: FERNANDEZ MEDRANO, Gil


MALPARTIDA GARAY, Celia Fiorella

CURSO

: Biotecnologa Forestal

SEMESTRE

: 2016-1

FECHA DE ENTREGA

: 15 de Abril del 2016

TINGO MARA PER

Propagacin in vitro de caoba (Swietenia macrophylla King)


RESUMEN
La caoba (Swietenia macrophylla) es una especie forestal maderable de
mltiples usos, apreciada por su dureza, resistencia, belleza y calidad. . Sin
embargo, su poblacin se ha visto afectada o disminuida por factores como la
deforestacin, el ataque de Hypsiphyla grandela (barrenador de la caoba) y la
erosin gentica. Esta ltima causada por el aprovechamiento selectivo de los
mejores individuos de los bosques naturales. Un diagnstico de la situacin de
la caoba en Mesoamrica considera que su existencia actual es de 36% (CCT
2000) donde los individuos adultos se presentan en una baja proporcin y
regeneracin natural en las poblaciones forestales tambin es pobre. El cultivo
in vitro es una tcnica que ayudara a disminuir este problema mediante la
produccin de plantas con alta robustez gentica. El objetivo de esta
investigacin fue establecer un mtodo que facilite la propagacin in vitro de
caoba a partir de segmentos nodales, empleados en la fase de establecimiento
con diferentes concentraciones de Ca(ClO)2 y tiempos de exposicin. La
contaminacin por microorganismos fue controlada con 15 g de Ca(ClO)2
durante 20 min, alcanzando el 95% de sobrevivencia. Los explantes sanos
fueron transferidos a un medio de cultivo MS/2 con distintos niveles de
bencilaminopurina (BAP) y cido indolbutrico (AIB) para su multiplicacin in
vitro, obtenindose 70% de brotes con 2 mg/L de BAP en combinacin con 1
mg/L de AIB. En ste estudio, la combinacin de BAP y AIB, en una relacin 2:1
mg/L fue suficiente para conseguir alto porcentaje de brotacin y aceptable
longitud de brotes de caoba. Los mejores brotes de la fase de multiplicacin se
colocaron en medio de cultivo MS/2 con diferentes concentraciones de ANA
para facilitar su enraizamiento, ninguno de los tratamientos ensayados permiti
generar races a los 21 das de su evaluacin, aunque el mayor porcentaje de
sobrevivencia (65%) se obtuvo al combinar 2 mg/L BAP y 1 mg/L ANA.
INTRODUCCIN
La caoba (Swietenia macrophylla King), est considerada como la especie
arbrea ms comercial del trpico. La creciente demanda de madera de caoba
sobrepasa la oferta disponible y aumenta la presin sobre esta especie, lo que
ocasiona una disminucin de las poblaciones naturales y ha provocado su
extincin comercial a lo largo de su rea de distribucin (Reynel et al., 2003).
La caoba (Swietenia macrophylla) se distribuye geogrficamente en Belice,
Brasil, Colombia, Costa Rica, El Salvador, Guatemala, Honduras, Mxico,
Nicaragua, Panam, Per, Venezuela y Ecuador en bosques nativos (Flora y
Fauna Internacional, 2006).

Una de las estrategias para superar las dificultades de propagacin y evitar la


extincin de especies valiosas, es el cultivo in vitro de tejido vegetal (Delgado
et al., 2008).
La propagacin in vitro va organognesis directa incrementa de forma rpida el
nmero de individuos, etapa importante en la produccin de plntulas a nivel
industrial y un banco de germoplasma con fines de rescate (Uribe et al., 2008).
MATERIALES Y MTODOS
Lugar de ejecucin
Este trabajo se realiz en el laboratorio de cultivo de tejidos vegetales de la
Universidad Tcnica Estatal de Quevedo, Ecuador, durante el ao 2012.
Material vegetal
Los explantes que utilizaron fueron segmentos nodales de plantas
de caoba de seis meses de edad de la Estacin Experimental Boliche del
Instituto Nacional Autnomo de Investigaciones Agropecuarias (INIAP)Ecuador.
Equipos
Cmara de flujo laminar. Utilizado para proporcionar aire
limpio a la zona de trabajo libre de partculas de hasta 0.1
micras, lo cual permanece limpia y estril.
Balanza analtica
Materiales

Tubos de ensayos
Pinzas
Balanza
Caja Petri
Vaso de precipitacin
Mechero de bunsen

Insumos
Agrimicin y Benlate. Se utilizaron para desinfectar a las
plantas de las cuales se recolectaran los explantes.
MS. Es un medio de cultivo formado por la mezcla de sales
complementado con glucosa, aminocidos, vitaminas,
auxinas y citoquininal.

Bacto-agar. Son agentes gelatinizadores derivados de algas


marinas, usado en la preparacin de medios de cultivo
microbiolgicos.
Vitrofural. Empleado en la esterilizacin qumica del medio
de cultivo.
Gentamicina. Aminoglucsido que se emplea como agentes
antimicrobianos.
Medios de cultivo
Se emple el medio de cultivo MS propuesto por Murashige y
Skoog (1962) y URIBE et al. (2008), suplementado con bacto agar (7 g/L) como
agente gelificante y los nitratos al 50% (MS/s) (COLLADO et al., 2004 y
PIERIK, 1990), sacarosa (20 g/L), 20 mg/L de gentamicina. El pH ajustado a
5.7 con hidrxido de sodio (NaOH) a una concentracin 0.1 N.
El medio fue qumicamente esterilizado con vitrofural al 0.116 g/L,
en la cmara de flujo laminar.
Reguladores de crecimiento
Bencilaminopurina. Es una hormona vegetal que puede
acelerar la divisin celular y la ampliacin; Inducir la
formacin de races inestables.
cido indolbutrico. Utilizados para facilitar el enraizamiento.
Metodologa
Preparacin de los explantes
Antes de la recoleccin de los explantes, las plantas fueron
trasladadas hasta el invernadero del Laboratorio de Biotecnologa. Fumigadas
dos veces por semana con mezcla de Agrimicin y Benlate a una concentracin
de 1 g/L (ARAYA, 2006) para disminuir la contaminacin de los segmentos
nodales en el establecimiento in vitro (REBOLLEDO et al., 2006 y FLORES et
al., 2009).
Establecimiento asptico del cultivo
Los explantes de 2.5 y 3.5 cm de longitud fueron sumergidos en
100 mL de agua destilada estril con 2 gotas de tween 20 (polioxietileno de
sorbitan, un detergente lquido) durante dos minutos, transferidos a 10 y 15 g
de hipoclorito de calcio Ca(ClO) 2 en 100 mL de agua destilada durante 10, 15 y
20 minutos, con tres enjuagues de agua destilada estril.

El ltimo enjuague los explantes fueron sumergidos en gentamicina


de 20 mg/L por 20 minutos en cmara de flujo laminar vertical.
Los explantes fueron sembrados en tubos de ensayos con 15 mL
de medio de cultivo e incubados a 25 C 1 C durante 21 das.
Fase de multiplicacin
Subsiguientemente, explantes libres de agentes contaminantes de
entre 1.5 y 2 cm de longitud, fueron transferidos a un medio de cultivo MS de
multiplicacin, con bencilaminopurina (BAP) (1, 2 y 3 mg/L) y cido indolbutrico
(AIB) (0.5 y 1 mg/L), siguiendo el mtodo descrito por GUPTA et al. (1980).
Se efectuaron tres siembras a intervalos constantes de 21 das.
Fase de enraizamiento
Luego seleccionaron brotes de 3 cm de longitud de la fase de
multiplicacin, se ubicaron en el medio de cultivo MS con cido indolbutrico a
concentraciones de 1; 1.5; 2 y 2.5 mg/L.
Los explantes fueron evaluados a los 21 das de su
establecimiento. En el Cuadro 1 se muestran los tratamientos y las variables
evaluadas en las distintas fases de la propagacin in vitro.
Incubacin y fotoperodo de vitroplantas
La incubacin en las tres etapas se efectu en una cmara de
cultivo con intensidad lumnica de 50 mol m-2 s-1 con un fotoperodo de 16 h
y temperatura de 25 1 C.
Diseo experimental y anlisis estadstico
Para analizar las condiciones del ensayo en la fase de
establecimiento, se emple un Diseo Completo al Azar (DCA) con arreglo
factorial (2x3) (Cuadro 1) con seis tratamientos, cuatro repeticiones. En la fase
de multiplicacin, se aplic un DCA con arreglo factorial (3x2) (Cuadro 1), con
seis tratamientos, cuatro repeticiones. La fase de enraizamiento, se evalu
mediante un DCA con cuatro tratamientos, cuatro repeticiones.
Se utilizaron cinco unidades experimentales en cada fase.
Los datos de cada una de las variables se sometieron a un anlisis
de varianza ANDEVA y separacin de medias al 95% de probabilidad,
empleando el programa estadstico MSTAT-C (Michigan State University, 1983).
Para establecer diferencias estadsticas entre tratamientos se efectu la

Prueba de Rangos Mltiples de Tukey (p<0.05). Los datos con valores cero
fueron transformados con la siguiente frmula: (x+0.5).
Cuadro 1. Tratamientos y variables evaluadas en las distintas fases de la
propagacin in vitro de Swietenia macrophylla King (caoba)

CONCLUSIONES
En la fase de establecimiento in vitro de explantes de caoba, se
demuestra que la aplicacin de 15 g de hipoclorito de calcio durante 20 min,
permite reducir significativamente la contaminacin de los explantes por
microorganismos. En la fase de multiplicacin in vitro, el medio MS
suplementado con 2 mg/L de bencilaminopurina (BAP) y 1 mg/L de cido
indolbutrico (AIB), permiti generar el 70% de brotes sanos.
El enraizamiento de brotes de caoba en dosis combinadas de
BAP/AIB y BAP/ANA, no present efecto alguno. La ausencia de races puede
estar asociada al corto periodo de evaluacin de los explantes y a las bajas
dosis. Siendo necesario, evaluar concentraciones de BAP, ANA y AIA
superiores a 2 mg/L. El establecimiento de segmentos nodales de caoba tiene
gran importancia ya que por vez primera se ha logrado obtener una
metodologa reproducible para la propagacin in vitro de esta especie en el
Ecuador.

REFERENCIA BIBLIOGRFICA
ARAYA, J. 2006. Establecimiento in vitro de cuatro variedades de caa de
azcar a partir de explantes foliares y yemas axilares. Proyecto
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