Escuela de Qumica

Ctedra de Qumica y Bioqumica

Laboratorio de Biotecnologa Industrial

Produccin microbiolgica de piruvato

Resumen
La etapa inicial del catabolismo de glucosa es la fermentacin, que consta de la
produccin de Piruvato. En la prctica, se demostr la formacin de cido
pirvico durante la fermentacin de glucosa por parte de la levadura por medio
de reacciones coloridas.
Introduccin
Metodologa
En la industria, los microorganismos
son utilizados en relacin con
cultivos masivos para obtener
productos metablicos, inicialmente
utilizados
en
fermentacin
alcohlica
(1).
Los
procesos
microbianos
se
orientan,
principalmente, a la parte qumica,
obtencin de alcoholes y cetonas,
farmacia, obtencin de antibiticos
e industria alimenticia (1).
En
condiciones
aerbicas,
la
respiracin celular produce energa
(ATP) en presencia de oxgeno; en
condiciones
anaerbicas,
la
fermentacin ocurre despus de la
glucolisis,
produciendo
varios
productos (etanol, cido lctico,
cido actico, etc.); ambas rutas
son iguales hasta la produccin de
piruvato
(2).
El
piruvato
es
ampliamente utilizado en farmacia,
cosmtica
y
sntesis
de
aminocidos; a su vez, es de fcil
produccin debido a la variedad de
microorganismos que lo producen,
materia prima barata, condiciones
determinadas de operacin y alto
grado de pureza y rendimiento (3).
La reaccin total de una molcula
de glucosa produce dos molculas
de piruvato, dos molculas de ATP y
dos molculas de NADH; en el
proceso de fermentacin el aceptor
de electrones final es un compuesto
orgnico que se reduce (3).

En dos series de tres tubos de

ensayo,
llamadas
A
y
B,
respectivamente, se adicionan 3 ml
de
glucosa
en
varias
concentraciones a cada serie, 3 ml
de suspensin de levadura con
fostato de sodio a la serie A y 3 ml
de suspensin de levadura con
fosfato de potasio a la serie B y se
colocan ambas en bao Mara a 37
C durante una hora. Luego de este
periodo de incubacin, se aade 1
ml de cido tricloroactico 10% y se
centrifuga; separando, luego, el
lquido sobrenadante.
Para la identificacin del piruvato,
se coloca 1 ml del sobrenadante y
se hierve, luego se adiciona 0.5 g de
sulfato de amonio, y dos gotas de
hidrxido de amonio sin mezclar por
las paredes del tubo. Para la
reaccin
con
2,4
dinitrofenilhidracina se coloca 1 ml del
sobrenadante, se adiciona 1 ml de
la solucin de 2,4 dinitrofenilhidracina saturada en HCl 2 M,
pasando a otro tubo la mitad de la
solucin elaborada; se adicionan 1
ml NaOH, 1 ml agua destilada y se
deja reposar por 15 minutos. Se
anotan las observaciones en todos
los casos.
Resultados
Cuadro 1. Observaciones obtenidas
para la serie A al reaccionar con

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ucin de
0.5
1.0
2.0

nitroprusiato de sodio y con 2,4

En la suspensin de levadura en la
dinitrofenil-hidracina
disolucin de fosfato di-cido de
potasio
(KH2PO4-) existe un sistema
Reaccin con nitroprusiato
Reaccin
con 2,4
glucosa
amortiguador
de sodio
dinitrofenil-hidracina donde se presentan
los ionesrojo
fosfato di-cido (H2PO4-),
Anillo violeta tenue
Gran Precipitado
fosfato
cido
(HPO42-) e iones
Anillo violeta
Precipitado rojo
hidronio
(H3O+);
La presencia de
Anillo violeta intenso
Poco Precipitado rojo
estos iones mantiene la variacin
del pH al mnimo, sin embargo, el
sistema en equilibrio presente
Cuadro 2. Observaciones obtenidas
mantiene
un
pH
de
para la serie B al reaccionar con
aproximadamente
7
(5).
Por
otro
nitroprusiato de sodio y con 2,4
lado, la suspensin de levadura en
dinitrofenil-hidracina
disolucin de fosfato cido de sodio
Reaccin
Reaccin
Disoluci
(Na2HPO4) presenta un sistema
con
con 2,4
amortiguador de pH ms alcalino
n de
nitroprusiat dinitrofenil
debido a las especies presentes; los
glucosa
o de sodio
-hidracina
iones fosfato cido (HPO42-) y
Anillo
fosfato (PO43-), junto con el
Precipitad
equilibrio del agua (5).
0.5
violeta
o rojo
Pese a ello, los iones en disolucin
intenso
van a impactar el medio donde se
Anillo
Precipitad
encuentra la levadura, debido a que
1.0
violeta
o rojo
en la suspensin de la levadura se
tenue
emple una disolucin de una sal
Anillo
cida y una sal bsica, los cationes
Precipitad
2.0
violeta muy
en estas sales tiene un papel
o rojo
tenue
importante en la basisidad de la
suspensin porque la disociacin en
Discusin de resultados
cationes y aniones cobra ms
importancia (6).
En
la prctica, la levadura fue
El ion potasio, comparado con el ion
tratada en dos disoluciones de
sodio, tiende a estar disociado en
fosfato, que forma una suspensin,
disoluciones acuosas, afectando las
con el fin de mantener un medio
suspensiones debido a que puede
alcalino y observar sus efectos (4).
ocurrir un poco de fermentacin y
Estas disoluciones presentan un
producir alcohol por la escasa
efecto amortiguador, ya que las
basisidad del medio para inhibir
sales pretenecen a un cido
este proceso; caso contrario sucede
poliprtico (cido fosfrico) por lo
con la disolucin de sodio, aunque
que mantienen un pH estable
haya o no una disociacin total
dependiendo de los equilibrios del
entre el fosfato y el sodio, el medio
agua y de los iones fosfato, as
es suficientemente bsico para
como la presencia de los cationes
inhibir los procesos de fermentacin
de sodio y potasio (4).
para que haya acumulacin de
Al calentar las soluciones, se nota
cido pirvico, y poderlo detectar,
un desprendimiento de CO2, dada la
inactivando la enzima piruvato
degradacin de la glucosa en CO2 y
descarboxilasa (7).
agua (8).
De esta forma, lo anterior se
demuestra en los cuadros de

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pruebas, con la prueba de 2,4

dinitrofenil-hidracina, ya que la
cantidad de precipitado que se
forma es mayor en la serie A
(suspensin con sodio) que el la B
(suspensin
con
potasio);
se
observo una coloracin naranja en
cada tubo, seguida de turbidez y
una precipitacin que se dio
minutos mas tarde cuando esto se
encontraban en reposo. En el tubo A
que contena la levadura en
condiciones cidas se precipit el
piruvato que posea un color naranja
oscuro quedando el etanol en gran
proporcin con un color naranja muy
tenue. En el tubo B que contena la
levadura en condicin bsica o
alcalina el piruvato se precipito en
mayor cantidad, presentado un
color naranja oscuro y el etanol se
presento en la superficie en una
cantidad menor en comparacin a la
primer sustancia con una coloracion
naranja muy tenue (7).
En cuanto a la prueba con el
nitroprusiato de sodio (que detecta
grupos cetnicos como el presente
en los piruvatos), este funciona
como un agente que atrapa el
intermediario y forma un compuesto
que no puede metabolizarse por la
enzima piruvato descarboxilasa, y
sta no es activa en soluciones
ligeramente alcalinas, de manera
que el piruvato se acumula, se
desactiva
la
enzima
piruvato
descarboxilasa en solucion alcalina
dbil, entonces el nitroprusiato de
sodio reacciona con el piruvato
formando un anillo verde (7).

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