PRACTICA N3

ESTERILIZACION
Resultados, discusin, conclusin, referencias
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Se logr emplear el correcto uso de esterilizacin del material de

laboratorio logrando envasar los materiales disponibles: matraces,
pipetas, tubos de ensayo, placas Petri.
Envolver material y dejarlo preparado para futuras practicas con el
papel craft fue nuestra prioridad en esta prctica, adems de
aprender el uso y funcionamiento de accesorios como tapones
(hechos de gaza y algodn).
El material preparado fue dispuesto a lavado, secado y pasar por el
enclave a una temperatura de 121 C, 15 libras de presin y en un
tiempo de 15 minutos.
El calor desnaturaliza estructuras y macromolculas (membranas,
protenas, etc.). Todos los microorganismos son susceptibles a la
accin del calor. Su sensibilidad vara con la especie y con el estado
en que se encuentren. En general las formas vegetativas bacterianas
mueren por calentamiento a 50-70C. Las endosporas, (las formas de
vida ms termoresistentes), requieren mayores temperaturas y
tiempo de exposicin. El calor puede utilizarse de dos formas en
presencia (esterilizacin
por
calor
humedo) o
ausencia
de
humedad (esterilizacin por calor seco).
Recordar que trabajar con una autoclave es ms seguro y mata a los
microorganismos, donde se destaca que al aumentar la temperatura
se disminuye el tiempo.

http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-ii/pb-ii-2-fisicos.html

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMi
cro/10_Esterilizaci%C3%B3n_qu%C3%ADmica.pdf

Trabajo Encargado
Mtodos de esterilizacin qumicos: fundamentos
Agentes Gaseosos:
xido de etileno: El xido de etileno es un agente alquilante que se ha
convertido en uno de los mtodos de esterilizacin qumica ms utilizados.
Cuando se emplea este mtodo se debe determinar cuidadosamente el
tiempo de exposicin a emplear ya que ste depende de factores como la
temperatura, humedad, concentracin del gas, la permeabilidad del
material que recubre los instrumentos a esterilizar y el tipo de
microorganismo a eliminar. Generalmente un perodo completo de
esterilizacin tarda varias horas. Cuando se usan estos equipos de
esterilizacin se deben tomar una serie de precauciones al colocar el
material dentro de la cmara de esterilizacin. Entre estas precauciones
podemos citar:

 Todos los trabajadores deben protegerse de la exposicin al xido de

etileno ya que es muy txico para la piel, ojos y mucosas. Por otra parte
este gas es inflamable, explosivo y carcinognico.
Colocar el material a esterilizar en cestas para facilitar la carga y descarga
del equipo y adems minimizar la exposicin del operador al xido de
etileno. Dentro de las cestas los materiales se deben colocar de manera que
se permita la libre circulacin del aire, humedad y la penetracin del xido
de etileno.
El material a esterilizar no debe tocar las paredes internas de la cmara.
Tambin existen equipos comerciales que traen ampollas de xido de etileno
envasadas dentro de una membrana difusora y una bolsa especial con
cierre. Estos equipos se pueden usar en cualquier lugar y en situaciones de
emergencia ya que para su empleo no se necesitan conexiones de aire, gas,
electricidad, ni reas especiales.
Agentes No Gaseosos
Glutaraldehido Es un agente alquilante que se usa en soluciones al 2% como
agente esterilizante. Para la esterilizacin se debe seguir el siguiente
procedimiento:
Limpiar y secar el material a esterilizar.
Sumergir el material en la solucin al 2% durante 10 horas. Se debe
asegurar que todas las superficies estn en contacto con la solucin.
Enjuagar con abundante agua estril. Este agente tiene como ventajas
que no es corrosivo y prcticamente no tiene ningn efecto daino para los
instrumentos, mantiene su actividad aun en presencia de materia orgnica.
Sin embargo, hay que tener en cuenta que el glutaraldehido puede resultar
irritante para los trabajadores y que las soluciones diluidas al 2% pierden su
efectividad aproximadamente en dos semanas (a menos que el proveedor
indique lo contrario). El glutaraldehdo se usa para la esterilizacin
instrumentos o equipos como endoscopios, termmetros, materiales de
goma o plstico, equipos para terapia respiratoria y anestesia, entre otros.
cido peractico: Es un agente oxidante que mantiene su eficacia en
presencia de materia orgnica. La esterilizacin con este agente tiene como
ventajas que incluye ciclos de esterilizacin relativamente cortos, el
material se puede utilizar inmediatamente y el cido se puede eliminar
directamente a los sitios de drenaje. Sin embargo, tiene como desventajas
que es sumamente corrosivo y el material se debe enjuagar con agua
destilada estril despus del proceso.
Perxido de hidrgeno: El perxido de hidrgeno es un agente qumico no
txico que permite la destruccin de los microorganismos por oxidacin de
sus componentes celulares. Cuando se emplea este mtodo de
esterilizacin se pone en contacto el material con una solucin de perxido
de hidrgeno en agua bajo la forma de vapor. Permite esterilizar equipos
mdicos como endoscopios, instrumentos quirrgicos, etc.

Diferencia entre sustancias bactericidas y bacteriostticas

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Bacteriosttico se refiere a filtros que no permiten la reproduccin de

microorganismos. Esto no quiere decir que los destruya, solo que no
permite su reproduccin, es decir, si al filtro entran 50 bacterias, no
se podrn desarrollar ms, pero en ningn caso las elimina.
Normalmente, son los filtros de carbn activado con algn contenido
de plata, a los que se les conoce como bacteriostticos.
Bactericida son los sistemas que s matan a los microorganismos
que causan enfermedades. Los purificadores UV son los bactericidas
ms eficientes.
PRACTICA N4
MORFOLOGIA BACTERIANA Y METODOS DE COLORACION

Resultados, discusin, conclusin, referencias

Trabajo Encargado
Cuestionario
1. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos
Gram positivos y explique. Qu funcin cumple cada uno de ellos?
2. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos
Gram negativos y explique la funcin que cumpla cada uno de ellos.
3. Explique el fundamento de la coloracin de Gram y esquematice.
4. A que se denomina mordiente y mencione tres ejemplos?
5. Mencione tres microorganismos (genero) que sean Cocos Gram
positivos, Bacilos Gram positivos, Cocos Gram negativos, y Bacilos
Gram negativos.
COCOS
GRAM POSITIVOS
Sthaphylococus aureus
Streptococus pyogenes

GRAM NEGATIVOS

BACILOS
GRAM POSITIVOS

GRAM NEGATIVOS

6. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos

acido alcohol resistentes y explique la funcin que cumple cada uno
de ellos.
7. Cul es el fundamento de la coloracin de Ziehl Neelsen y
esquematice?
8. Mencione cuatro lquidos biolgicos en los cuales se encuentre el
Mycobacterium tuberculosis.

9. Explique el mecanismo quimico de la tincin de Gram referiendo la

reaccin entre los reactivos y los componentes de los P.C
El primer paso en cualquier tincin debe ser siempre la fijacin con calor.
Posteriormente el cristal violeta penetra en todas las clulas bacterianas
(tanto Gram positivas como Gram negativas).
El lugol est formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio),
el cual est presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las clulas y
forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la
decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta.
Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram
negativos s lo hacen. La funcin del alcohol-acetona es la quitar el
colorante de las bacterias, as si la bacteria conserva el tinte, es Gram
positiva y si el tinte no se mantiene es Gram negativa.Para poner de
manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina
bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas
son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
10.Explique el mecanismo qumico de la reaccin de Zielh Neelsen
El mecanismo de la AAR es un fenmeno doble que requiere la penetracin
de la fucsina al citoplasma bacilar, as como su interaccin qumica con los
cidos miclicos de los pptidos glucolpidos presentes en la pared celular
de las micobacterias . Esta reaccin impide la salida de la fucsina atrapada
en el citoplasma bacilar. Se aseguran as la brillantez y el color rojo intenso
de los grmenes que resisten la decoloracin con alcohol y cidos. La AAR
se pierde cuando se remueve la pared externa de las micobacterias con
alcohol alcalino.
El papel del cido carblico como mordiente es definitivo porque fomenta la
penetracin de la fucsina en los pptidos-glucolpidos bacilares; la hace ms
liposoluble y menos hidrosoluble. El alcohol en que se disuelve la fucsina
tambin es esencial para obtener la AAR pero su forma de actuar es menos
conocida.

11.Investiga a que se debe la afinidad de los colorantes bsicos por las

bacterias y a que lo de los acidos .

La clula bacteriana intacta se tie fcilmente con colorantes bsicos

como el cristal, azul de metileno y fucsina bsica, pero relativamente
mal con colorantes cidos como la eosina.
Un colorante bsico es aquel constituido por un agrupamiento
de tomos orgnicos con carga positiva que ser la parte activa del
colorante ya que tendr afinidad por los cidos nucleicos. Un
colorante cido es aquel que se encuentra constituido por tomos
orgnicos con carga neta negativa por lo cual tiene afinidad por el
citoplasma.

12.Porque los colorantes negativos no penetran a la bacteria

la carga del in que imparte el color es negativa ejemplo, fucsina
cida, eosina. Los colorantes cidos no son atrados por la mayora de
las bacterias porque los iones negativos del colorante son repelidos
por la superficie bacteriana cargada negativamente. De modo que el
colorante es repelido por la bacteria y colorea en cambio el fondo de
la preparacin. Esta preparacin de bacterias incoloras sobre un
fondo coloreado se llama tincin negativa. Es til para la observacin
de la morfologa externa de la clula, del tamao y de la cpsula,
porque las clulas resultan muy visibles al contrastar con el fondo
oscuro.