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ABBAS 4 E 5

EDGAR MACRIO
MEDUFES 96

ANTICORPOS: ONTOGENIA E FUNES


Os anticorpos so glicoprotenas circulantes produzidas em resposta
exposio a antgenos no prprios. Os anticorpos das clulas B e as
molculas de MHC e os TCR das clulas T so as molculas chave da
resposta imune adaptativa para a ligao a antgenos. Todas as molculas
que tm capacidade de reconhecer antgeno, tm potencial papel de
neutralizao de antgenos.
Os anticorpos esto presentes em fluidos biolgicos (plasma, linfa, lrimaI,
saliva) e na superfcie de algumas clulas linfoides (linfcito B, fagcito
mononuclear, NK, mastcitos).
Os anticorpos podem estar presentes sob duas formas: ligados a
membranas na superfcie de linfcitos B, sendo chamados de receptores
de clulas B ou imunoglobulinas de superfcie; ou como anticorpos
secretados residentes na circulao, nos tecidos e nas mucosas. A forma
secretada no tem a cauda citoplasmticas e a cadeia de aminocidos
hidrofbicos perdida. Sua funo a de eliminar o antgeno, sob vrias
formas:

Neutralizao de micro-organismos ou produtos microbianos txicos


Ativao do sistema complemento
Opsonizao de patgenos, aumentando a fagocitose
Citotoxidade mediada por clulas dependentes de anticorpos
(ADCC), em que anticorpos marcam clulas infectadas para sua lise
por clulas do sistema imune inato
Ativao de mastcitos mediada por anticorpos, que elimina vermes
parasitas

As clulas B expressam a forma integral de anticorpo ancorada na


membrana, que atua como seus receptores de antgeno (BCR). Aps
exposio a antgeno, a clula B nave se ativa e se diferencia em
plasmcitos secretores de antgenos.

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ESTRUTURA
A elucidao da estrutura foi possvel com a descoberta de que pacientes
com mieloma mltiplo (tumor de plasmcitos monoclonais) tendem a
apresentar grandes quantidades de anticorpos monoclonais do clone
neoplsico no sangue e na urina. Tradicionalmente, as protenas
plasmticas so separadas em albumina e globulinas.
Estas podem ainda ser separadas por Western blot em bandas,
sendo a terceira mais leve a das gamaglobulinas, onde se
encontram maioria das imunoglobulinas (Ig).
A estrutura bsica de todas as Ig consiste de duas
cadeias polipeptdicas pesadas idnticas e duas
cadeias polipeptdicas leves idnticas unidas por
pontes dissulfeto. As cadeias leves e pesadas contm
srie de unidades homlogas repetidas que se
dobram independentemente em uma forma globular
chamada domnio Ig (como VL e VH), formada por
folhas -pregueadas. A superfamlia Ig rene molculas
com domnios Ig e incluem TCR, MHC de classe I, CD4
(correceptor de linfcitos T), CD28 (receptor
coestimulador de linfcito T) e ICAM-1 (molcula de adeso).
As cadeias leves e pesadas so formadas
por
regies aminoterminais variveis (V)
e
por
regies
carboxiterminais
constantes (C). As regies V se ligam ao
antgeno e determinam a especificidade da
Ig e as regies C so responsveis pelas
propriedades fsico-qumicas e medeiam as
funes efetoras das Ig. Nas cadeias leves, a
regio V composta por um domnio Ig (V L) e a
regio C por um domnio Ig (CL). Nas
cadeias pesadas, a regio V composta
por um domnio Ig (VH) e a regio C, por 3
ou 4 domnios Ig (CH1, CH2, CH3, CH4). As
regies
VL
e
VH
participam
do
reconhecimento e ligao ao antgeno, ao passo
que os domnios Ig da
regio C da
cadeia
pesada so
responsveis pela interao com
outras molculas efetoras e clulas do
sistema imune. As cadeias leve e pesada,
bem como as duas cadeias pesadas, se
mantm unidas por pontes de dissulfeto entre
resduos de cistena.

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Quando tratadas com proteases, as Ig so separadas em pores, de


acordo com a enzima usada. A papana cliva as molculas de IgG em duas
molculas iguais, que contm a cadeia leve inteira (V L e CL) e parte da
pesada (VH e CH1), e uma composta por dois peptdeos idnticos ligados
por pontes de dissulfeto. Os dois segmentos idnticos mantm a
capacidade de ligao ao antgeno, sendo chamadas de poro Fab
(fragmento de ligao ao antgeno). O terceiro fragmento apresenta
tendncia a se cristalizar, sendo denominada poro Fc (poro
cristalizvel). Quando usada a pepsina, a molcula de IgG separada
em um fragmento de ligao ao antgeno chamado F(ab)2, sem afetar a
dobradia e as pontes dissulfeto intercadeias.

Regies variveis
Existem regies hipervariveis nas alas das lminas dos domnios V
das cadeias pesadas e leves das Ig. Os trs segmentos hipervariveis da
cadeia leve junto com outros trs segmentos hipervariveis da cadeia
pesada se unem como dedos de mos opostas e formam a superfcie de
ligao ao antgeno. Assim, as regies hipervariveis so chamadas
tambm de regies determinantes de complementariedade (CDR).

Regies constantes
As classes e subclasses de imunoglobulinas so determinadas com base
nas diferenas estruturais de suas regies C da cadeia pesada. Assim, IgG
possuem 4 subclasses (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) com 4 cadeias pesadas
diferentes entre si; IgA possui duas subclasses (IgA1 e IgA2) e ainda no
foram descritas subclasses para IgE, IgM e IgD. Esta variabilidade nas
classes de imunoglobulinas denominada variao isotpica. As cadeias
pesadas so designadas pela letra do alfabeto grego que corresponde ao
istipo do anticorpo. As regies C da cadeia pesada de todas as molculas
de anticorpo de um istipo ou subtipo apresentam, essencialmente, a
mesma sequncia de aminocidos. Essa sequncia, assim, diferente em
anticorpos de outros istipos ou subtipos. Em humanos, as regies C de
IgM e IgE contm 4 domnios Ig sequenciais, ao passo que IgA,
IgD e IgG possuem apenas 3 domnios Ig nas regies C.
Diferentes istipos e subtipos possuem funes diferentes,
determinadas pela ligao das regies C da cadeia pesada a
receptores de Fc a clulas como fagcitos, clulas NK e mastcitos e a
protenas plasmticas, como as do complemento. As diferentes funes
efetoras so devido s diferenas entre as regies C. Alm disso, as
regies de dobradia permitem que o anticorpo se ligue a duas
molculas de antgenos separadas por distncias variveis. Essas
regies de dobradia permitem a movimentao independente dos stios
de ligao ao antgeno em relao ao restante da molcula. A

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flexibilidade da regio em dobradia permite a ligao a superfcies ou


antgenos com vrios formatos e orientaes.
As cadeias leves das imunoglobulinas existem sob duas formas distintas
denominadas de cadeias kappa () e lambda () e qualquer um desses
tipos pode se combinar com qualquer um dos tipos de cadeia pesada, mas
em uma nica imunoglobulina as cadeias leves so idnticas, assim como
as pesadas.
As Ig existem na membrana como monmeros formados por duas cadeias
leves e duas cadeias pesadas. Contudo, algumas Ig secretadas podem
formar complexos multimricos. IgG e IgE so monmeros, enquanto que
IgA secretada como dmero e IgM secretada como pentmero. Esses
complexos so formados por interaes entre as regies Fc da cauda.
Complexos multimricos se ligam com maior avidez aos antgenos do que
as formas monomricas.
Anticorpos de diferentes espcies diferem entre si quanto s regies C e
partes estruturais das regies V. Diferenas sequenciais menores so
observadas em anticorpos provenientes de diferentes indivduos, mesmo
naqueles pertencentes mesma espcie.

Anticorpos monoclonais
So produtos de clones de clulas imortalizadas produtoras de anticorpos,
sendo especficos para nico eptopo de um antgeno, ou mistura de
antgenos, usado na identificao das clulas secretoras de Ig.

SNTESE, MONTAGEM E EXPRESSO DAS MOLCULAS DE Ig


So sintetizadas no REG, sofrem N-glicosilao no REL, os carboidratos
sofrem modificao no complexo de Golgi, ento so envolvidas por
vesculas e enviadas para a membrana plasmtica.
Os linfcitos B maduros coexpressam em sua superfcie IgD e IgM (cadeias
pesadas e associadas a cadeias leves ou ). Essas Ig de membrana
atuam como receptores de superfcie celular que reconhecem antgenos e
iniciam o processo de ativao do linfcito B. Quando os linfcitos B
maduros so ativados por antgenos e outros estmulos, diferenciam-se em
plasmcitos, acompanhado de alteraes no padro de produo de Ig.
A meia-vida das Ig curta. Entretanto, a meia-vida de IgG longa porque
as molculas de IgG so pinocitadas por receptores neonatais de Fc (FcRn)
no endotlio de adultos. O FnRc sequestra a IgG por um perodo e depois a
devolve circulao, ao voltar superfcie celular.

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LIGAO ENTRE ANTICORPOS E ANTGENOS


Um antgeno qualquer substncia que pode ser especificamente ligada
a uma molcula de anticorpo ou receptor de linfcitos T. Os anticorpos
reconhecem substncias solveis, como metablitos intermedirios
simples, acares, lipdeos, autacoides, hormnios, carboidratos
complexos, fosfolipdios, cidos nucleicos e protenas. Receptores de
linfcitos T reconhecem apenas peptdeos associados a molculas de MHC.
Antgenos que desencadeiam resposta imunolgica so chamados
imungenos. Somente macromolculas so capazes de estimular
linfcitos B, iniciando respostas imunes humorais, uma vez que a ativao
dessa clula requer a ligao cruzada de mltiplos receptores de antgeno
com os seus respectivos antgenos proteicos, para estimulao de
linfcitos T helper.
Os determinantes ou eptopos so regies dos antgenos aos quais se
ligam as Ig. Os determinantes podem ser sobrepostos (quando h
impedimento estrico) e no sobrepostos. A ligao de uma Ig ao antgeno
pode exercer efeitos alstericos. Os determinantes podem ser lineares,
quando os aa. esto em sequncia; conformacionais, quando os aa.
passam a ser justapostos na protena dobrada; ou neoantignicos, quando
sofrem modificaes ps-sintticas, como clivagem de pontes peptdicas.
Se a Ig for monmero, como IgE e IgG, podem haver dois stios de ligao,
um em cada Fab. Se for dmero, pelo menos quatro ligaes. Na IgM
pentamrica, so possveis dez ligaes. As ligaes so simultneas e
iguais porque a especificidade a mesma, ou seja, os stios de ligao de
antgeno de uma Ig possuem o mesmo reconhecimento da cadeia
peptdica antignica.
A afinidade a fora de ligao ente um nico stio de combinao de um
anticorpo e um eptopo do antgeno. representada pela constante de
dissociao Kd, que indica a facilidade de separao do complexo
antgeno-anticorpo em seus constituintes. Uma Kd baixa indica maior
afinidade de interao, uma vez que menor concentrao de antgeno ou
de anticorpo necessria formao do complexo. Os antgenos
polivalentes apresentam mais de uma cpia do determinante. Assim, a
fora de ligao do anticorpo ao antgeno deve considerar a interao de
todos os stios a todos os eptopos disponveis. Uma IgM de baixa afinidade
capaz de se ligar ao antgeno com alta avidez porque as interaes de
baixa afinidade se somam.

RELAES ENTRE ESTRUTURA E FUNO NAS MOLCULAS DE


ANTICORPO
1. Especificidade: os anticorpos so capazes de diferenciar uma nica
substituio aminocida que pouco interfere na estrutura
secundria. Contudo, alguns anticorpos produzidos contra um

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antgeno
podem
se ligar
a
antgenos
diferentes,
mas
estruturalmente similares, fenmeno conhecido como reao
cruzada, condio favorecida por situaes de homeostase
desfavorvel. Anticorpos naturais so especficos para um antgeno
mesmo sem exposio prvia. A natureza da ligao especfica, no
modelo chave-fechadura.
Diversidade: gerada pela recombinao V(D)J de linfcitos, que
determinam diferentes regies V das cadeias leve e pesada, assim
como pela adio de nucleotdeos durante o processo de
recombinao.
Maturao de afinidade: ocorre mutao somtica por mudanas
sutis nos segmentos V das imunoglobulinas durantes as respostas
imunes humorais dependentes de linfcitos T a antgenos proteicos.
Os linfcitos produtores de tais Ig sofrem seleo e passam a ser o
clone dominante.
Interao da poro Fc a receptores de Fc (FcR) especficos em
clulas: neutrfilos e macrfagos reconhecem a poro Fc da IgG
ligada a micro-organismos, que sofrem fagocitose. Mastcitos
reconhecem a poro Fc de IgE e desgranulam.
Ativao da via clssica do sistema complemento: discutida mais
adiante
Mudana de classe ou de istipo: aps estimulao, um nico clone
de linfcitos B pode produzir anticorpos de diferentes istipos que,
ainda assim, apresentam domnios V idnticos e, portanto,
especificidade idntica ao antgeno. Isso importante porque os
istipos e subtipos agora sintetizados (alm de IgM e IgD) so mais
adequados eliminao do antgeno, pois cada istipo desempenha
um diferente conjunto de funes efetoras.
Regies C da cadeia pesada das Ig tambm determinam a
distribuio tecidual das imunoglobulinas. O que determina a
distribuio so os mecanismos ativos das Ig: trofoblasto tem
protenas (os receptores FcRn) que reconhecem poro Fc da IgG, e
realiza o transporte da placenta para o feto. A IgA se liga a um
receptor do lado da matriz e passa

ativamente por
transcitose
para o muco
secrees

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ISTIPOS
1. IgA
i.
ii.
iii.
iv.

Subtipos IgA1 e IgA2


Cadeias H 1 e 2
Forma secretada monomrica, dimrica ou trimrica
Responsvel por imunidade das mucosas. Neutralizao de
antgenos, sejam patgenos, seja controle de bactrias
comensais. Controle de microbiota. Vacina oral da plio
(Sabin) tem como funo estimular a produo de IgA
especfica. Se liga a um receptor do lado da matriz e passa
ativamente por transcitose para o muco e secrees.

2. IgD
i.
ii.
iii.
iv.
3. IgE
i.
ii.
iii.
iv.

No tem subtipos
Cadeia H
Baixos nveis no soro
Receptora de antgenos das clulas B nave
No tem subtipos
Cadeia H
Forma secretada monomrica
Responsvel pela hipersensibilidade imediata. Envolvida em
reaes alrgicas e em infeces por helmintos.

4. IgG
i.
ii.
iii.
iv.

Subtipos IgG1-4
Cadeias H (1, 2, 3 e 4)
Forma secretada monomrica
Responsvel pela opsonizao, ativao do sistema
complemento,
imunidade
neonatal
(capacidade
de
atravessar a barreira placentria), inibio por feedback das
clulas B, desgranulao de componentes citotxicos com
receptor FcR de IgG (clulas NK). A citotoxicidade
mediada por clulas dependentes de anticorpos
(ADCC) um mecanismo de defesa imune mediada por
clulas no qual uma clula efetora do sistema imune
provoca a lise ativamente de uma clula alvo que sofreu
opsonizao, sendo mediada por clulas NK, macrfagos,
neutrfilos e eosinfilos. Macrfago e clulas NK tm
receptor chamado FcRIIIA ( cadeia pesada de IgG, Fc de
poro Fc, R de receptor): o acoplamento do complexo
antgeno-Ig ao receptor ativa a produo e secreo de
citocinas (IFN-) bem como a liberao do contedo dos
grnulos, os quais medeiam a morte celular. As clulas NK,
quando ativadas, liberam grnulos contendo perforinas,
que abrem poros nas clulas para a entrada de granzimas,
enzimas que iniciam a apoptose nas clulas-alvo. Alm
disso, clulas NK liberam catepsina B, que as protegem das
enzimas liberadas.

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v.
5. IgM
i.
ii.
iii.
iv.

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a mais encontrada nos espaos extra vasculares
No tem subtipos
Cadeia H
Forma secretada pentamrica, avidez mais alta
Receptor de antgenos das clulas B nave, responsvel por
ativao da via clssica do sistema complemento, junto
com IgG. Uma nica molcula de IgM capaz de ativar,
mas pelo menos duas de IgG so necessrias. a primeira
imunoglobulina a ser secretada.

Stio comum de mucosa: os stios se comportam de forma muito


semelhante aos tecidos linfoides associados mucosa, em termos de
estrutura fsica e composio de clulas. O NALT (tecido linfoide associado
ao nariz) estruturalmente semelhante, em termos de estrutura fsica e
funcionamento/composio de clulas, ao BALT (tecido linfoide associado
aos brnquios). As clulas tm capacidade de migrar entre as mucosas
porque as integrinas expressas nas mucosas so as mesmas e podem
reagir em consequncia dessa semelhana.

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As respostas no so compartilhadas quando antgenos so administrados


por via parenteral, pois atuam especificamente no local onde foram
colocados.

ATIVAO DO COMPLEMENTO
O sistema complemento composto por vrias protenas plasmticas que
trabalham juntas na opsonizao de micro-organismos, na promoo do
recrutamento de fagcitos para o stio de infeco e, em alguns casos, na
morte direta do patgeno. A ativao se d por 3 vias:
1. A via clssica um dos principais mecanismos efetores do brao
humoral das respostas imunes adaptativas. Tem participao de IgM
e IgG, ou seja, dependente das pores Fc de IgM e IgG para que
os componentes interajam com outras protenas do complemento.
2. A via alternativa mais antiga, filogeneticamente, que a clssica.
desencadeada quando a protena C3 reconhece diretamente
certas estruturas da superfcie microbiana. Relaciona-se com a
imunidade inata e independe de anticorpo.
3. A vias das lectinas desencadeada pela protena plasmtica
chamada lectina ligante de manose (MBL), protena circulante que
reconhece resduos terminais de manose presentes em
glicoprotenas e glicolipdios microbianos.
Algumas molculas do complemento podem ter atividade de opsonizao,
favorecendo atividade da resposta inata. Alternativa e lectina agem
primeiro porque no dependem de anticorpo e depois vem a clssica, aps
montagem da resposta adaptativa.
O reconhecimento de micro-organismos por qualquer uma das trs vias do
sistema complemento resulta no recrutamento sequencial e na montagem
de outras protenas deste sistema em complexos de proteases. Um destes
complexos, a C3 convertase, cliva a protena C3 em C3a e C3b, esta
sendo uma opsonina que promove a fagocitose de micro-organismos. A
molcula C3b se liga superfcie microbiana onde a via do sistema
complemento foi ativada. A molcula C3a liberada e estimula a
inflamao por agir como quimiottico para neutrfilos. O C3b se liga a
outros componentes do sistema complemento, formando uma protease
chamada C5 convertase, que cliva C5 em C5a e C5b. O fragmento C5a,
alm de ser quimiottico, induz alteraes nos vasos sanguneos, levando
ao extravasamento de protenas plasmticas e fluidos nos stios de
infeco, alm de promover a expresso de P-selectina, que promove a
ligao de neutrfilos. O fragmento C5b permanece ligado membrana
microbiana e inicia a formao de um complexo proteico do sistema
complemento (formado por C6, C7, C8 e C9). Esse complexo proteico

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forma o complexo de ataque membrana (MAC), que promove a lise


por choque osmtico de clulas em que o complemento ativado.
Cascata de coagulao: podem ter duas funes bsicas. Em situaes de
homeostases esto inativas no plasma, assim como protenas de
coagulao. Quando h extravasamento dessas molculas para o tecido,
h ativao e interao ente si. So protenas com atividade cataltica em
cascata.