Tema 2

11/02/2016
Microorganismos y Produccin Industrial. Tema 2 15/16
Tema 2. Aislamiento y seleccin de

microorganismos de inters industrial
Ventajas de las clulas microbianas para la
produccin industrial
Microorganismos de inters industrial
Criterios para la seleccin de un microorganismo
Aislamiento de microorganismos de inters
11/02/2016
Ventajas de las clulas microbianas

Pequeo tamao
Alta relacin superficie/volumen
Rpido transporte de nutrientes
Elevada tasa metablica
Elevada velocidad de crecimiento
Gran diversidad
Variedad de ambientes que colonizan (condiciones)
Amplio rango de temperaturas, pH, osmolaridad
Presencia/ausencia de aire
Extensa gama de reacciones metablicas

Variedad de productos
Amplio rango de fuentes de nutrientes
Nutrientes baratos
Fcil manipulacin gentica
11/02/2016
Bacterias de inters industrial

Escherichia coli
insulina,
hormona de crecimiento
Pseudomonas
biorremediacin
Xantomonas
xantano
Acidithiobacillus
biolixiviacin
Agrobacterium
transferencia de genes a
plantas
Zymomonas
etanol
Gluconobacter
vinagre, cido glucnico
11/02/2016
Bacterias de inters industrial

Clostridium
etanol, acetona, butanol
Bacterias del cido lctico derivados lcteos

Bacillus
enzimas, insecticidas,
antibiticos
Cellulomonas
etanol y SCP
Corynebacterium
glutmico
Streptomyces
antibiticos
Thermus
enzimas termoestables
11/02/2016
Penicillium roqueforti
Penicillium camemberti
11/02/2016
Penicillium nalgiovense
11/02/2016
Rhizopus oligosporus
11/02/2016
11/02/2016
Candida utilis
Miso
Aspergillus oryzae
11/02/2016
Hongos
Eucariotas heterotrofos no fotosintticos
Forman esporas
por reproduccin sexual y
asexual
Filamentosos y unicelulares
Nutricin por absorcin
Paredes celulares rgidas con polisacridos
Hbitats diversos, terrestres y acuticos
11/02/2016
Hongos filamentosos
(mohos)
Micelio
Hifa: cada filamento
11/02/2016
Hifa: elemento tubular compuesto

de citoplasma y ncleo
Septadas o no
Ramificadas o no
11/02/2016
Hongos filamentosos
reproduccin asexual
11/02/2016
Esporas asexuales
Conidio
Filide
Mtula
Conidiforo
Penicillium
11/02/2016
Aspergillus
Esporas asexuales
Aspergillus dispersin
http://www.youtube.com/watch?v=sbaWbiFt_Go
11/02/2016
Rhizopus
Esporas asexuales en esporangio
11/02/2016
Hongos
Hongos filamentosos
MOHOS
Hongos unicelulares
LEVADURAS
Hongos dimrficos
11/02/2016
MOHOS
LEVADURAS
11/02/2016
Saccharomyces
Levaduras
Rhodotorula
Brettanomyces
11/02/2016
Hongos dimrficos
Candida albicans
Tubo germinal
11/02/2016
Hongos de importancia industrial

Rhizopus
ac. ctrico (E330)
Rhizomucor
renina o quimosina
Saccharomyces
bebidas
alcohlicas,
pan
Aspergillus
ac. orgnicos (E-330)

alimentos,
enzimas
Penicilllium
antibiticos, queso
11/02/2016
Criterios para la seleccin de un

microorganismo para la
produccion industrial
11/02/2016
Criterios para la seleccin de un

microorganismo
Caractersticas nutricionales****
Caractersticas fisiolgicas:
temperatura y pH****
Fcil de manipular y genticamente estable

(SUPERPRODUCTORES)
Alta productividad
Facilidad de recuperacin del producto
Relacin del microorganismo con el equipo
Cultivos puros/mixtos
11/02/2016
Cultivos mixtos?
Varios microorganismos
colaboran en la degradacin de
un sustrato
Un microorganismo consume el
producto txico que se genera
durante el metabolismo de otro
11/02/2016
Ejercicio
cmo conseguiras un
microorganismo acidfilo,
formador de endosporas,
productor de antibiticos y capaz
de utilizar almidn como fuente
de carbono y energa?
11/02/2016
Aislamiento de un microorganismo
de inters industrial
1) Eleccin de la fuente del

microorganismo
2) Seleccin y enriquecimiento
3) Test sencillos detectores de
actividad
11/02/2016
Fuentes de microorganismos
Colecciones de cultivos
ATTC American Type Culture Collection
CECT Coleccin Espaola de Cultivos Tipo
http://www.cect.org/
Naturaleza (aislamiento complicado y costoso)

Buscar nicho ecolgico
Planificar muestreo
11/02/2016
Fuentes de microorganismos
Importancia de los EXTREMFILOS
Viven en ambientes extremos

Tienen EXTREMOENZIMAS
(enzimas activos en condiciones ambientales extremas)
Termozimas:
mayor resistencia frente a agentes desnaturalizantes
no requieren refrigeracin para su mantenimiento en forma activa
presentan vidas medias prolongadas
11/02/2016
EXTREMFILOS
Psicrfilos (Antrtida)
Ambientes extremos:
Reservorios de biodiversidad
Inexplorados
Termfilos
Yellowstone
Chimeneas
submarinas
Acidfilos
(Rio Tinto)
11/02/2016
Xerfilos (Desiertos)
11/02/2016
Halfilos (Salinas, Lagos salados)
Alcalfilos (Mono Lake)
11/02/2016
Bioprospeccin
Bsqueda sistemtica, clasificacin e investigacin
de (micro)- organismos con capacidades econmicas
tiles, como la produccin de nuevos frmacos,
enzimas, polmeros, etc.
Ejemplos:
Juanasa proteasa aislada del krill antrtico y clonada en E. coli
para fabricar detergentes en fro (Juan Asenjo, biotecnlogo chileno)
Protenas anticongelantes obtenidas de diversas bacterias, como
Marinomonas protea, Pseudomonas sp. y Moraxella sp.,
DNA polimerasas de termfilos (Taq, Pfu,)
FuelzymeTM amilasa para la produccin de etanol aislada en
fuentes termales submarinas
11/02/2016
11/02/2016
Por qu muchos microorganismos son no cultivables?

Las condiciones de laboratorio distan mucho de las naturales (T, pH,

concentraciones)
Requieren convivir con otros
Crecen muy lentamente
Compuestos txicos en los medios de laboratorio (doi: 10.1128/AEM.02741-14)

Estrategias para aislamiento:
Cultivos in situ (Cmaras de difusin)
trampas microbianas
11/02/2016
Culture medium:
Sterile seawater
plus minerals
Microtiter plates
Deposit single cells from seawater

into individual wells of microtiter
plates (obtain individual cells by
flow cytometric sorting or dilution
to extinction).
Inoculum source:
Seawater with 106 cells/ml
Incubate
Individual wells
Growth from single-cell inocula

Isolation of Pelagibacter ubique
Monitor for growth
using FISH or PCR
to identify target
species.
11/02/2016
iCHIP
https://www.youtube.com/watch?v=jdce2qIcCUM
A new antibiotic kills pathogens without detectable resistance

Nature (2015)
ac, The iChip (a) consists of a central plate (b) which houses growing microorganisms, semi-permeable membranes on each side of
the plate, which separate the plate from the environment, and two supporting side panels (c). The central plate and side panels have
multiple matching through-holes. When the central plate is dipped into suspension of cells in molten agar, the through-holes capture
small volumes of this suspension, which solidify in the form of small agar plugs. Alternatively, molten agar can be dispensed into the
chambers. The membranes are attached and the iChip is then placed in soil from which the sample originated.
11/02/2016
Metagenmica
Microorganismos no
cultivables
No podemos
cultivarlos, pero
podemos expresar
sus genes y buscar
los productos de
inters
http://hmpdacc.org/
http://femsre.oxfordjournals.org/content/39/4/567
MicrobIol Mol Biol Rev (2004) 68(4) 669-685
11/02/2016
Bioprospeccin
Bsqueda sistemtica, clasificacin e investigacin
de (micro)- organismos con capacidades
econmicas tiles, como la produccin de nuevos
frmacos, enzimas, polmeros, etc.
O GENES que codifican protenas de inters.

http://www.verenium.com/ourwork1.html
Protocolo de Nagoya
(acceso y participacin en los beneficios de los recursos genticos)
http://www.magrama.gob.es/es/prensa/noticias/el-ministerio-de-agricultura-alimentaci%C3%B3n-y-medioambiente-impulsa-la-aplicaci%C3%B3n-y-la-informaci%C3%B3n-sobre-el-protocolo-de-nagoya-para-el-accesoa-/tcm7-360130-16
11/02/2016
fragmentation
11/02/2016
11/02/2016
Aislamiento de un microorganismo
de inters industrial
1) Eleccin de la fuente del

microorganismo
2) Seleccin y enriquecimiento
3) Test sencillos detectores de
actividad
11/02/2016
Seleccin y enriquecimiento
El microorganismo deseado se encuentra en baja
proporcin y su aislamiento es poco probable
qu hacer?
1- Favorecer el enriquecimiento de aquellos

microorganismos que posean las caractersticas
deseadas en detrimento de otros
CULTIVOS DE ENRIQUECIMIENTO
(aumentan la proporcin de un tipo de
microorganismo)
2- Aislamiento
11/02/2016
Cultivos de enriquecimiento
A) Si la caracterstica deseada es una
VENTAJA SELECTIVA se emplea en el enriquecimiento
Capacidad para utilizar sustratos

Capacidad para crecer a pH extremos
Capacidad para crecer a Ts extremas
Capacidad para crecer a altas concentraciones de Na
Capacidad para crecer en presencia o ausencia de O2
Capacidad para producir endosporas
Se llevan a cabo en medio lquido y el

aislamiento posterior se hace en medio slido
11/02/2016
Cultivo de enriquecimiento
Muestra natural
Sustrato
Temperatura
pH
O2
NaCl
Cultivo de
enriquecimiento
Bacteria que queremos aislar
11/02/2016
B) Si la caracterstica deseada NO se puede utilizar

como una VENTAJA SELECTIVA
se busca el grupo o taxn
Por ejemplo:
Bsqueda de un productor de antibiticos
qu taxones buscaremos?
Penicillium y otros hongos filamentosos
Streptomyces y relacionados
Bacillus
11/02/2016
Cuidado: no confundir
Calentar
Seleccionamos termorresistentes
Incubar a altas temperaturas

Seleccionamos termfilos
11/02/2016
TERMFILO
crece ptimamente a altas temperaturas
Ej: Pirolobus fumarii crece mejor a 110C que a 30C
(90-113 C)
TERMORRESISTENTE
Resiste altas temperaturas, pero no crece o no lo
hace ptimamente
Ej: endosporas
11/02/2016
Qu medio de cultivo utilizamos?

En la bsqueda de un microorganismo con unas caractersticas
concretas:
Se utilizan medios de cultivo que permitan la mxima

expresin del material gentico
MEDIOS PARA SUPERPRODUCCIN
Nutrientes limitantes, C, N, P, O
Sin fuentes de C y N fciles
Con abundancia de cofactores, Fe, Mn, Co, Ni
Tamponados
11/02/2016
Test sencillos para detectar la

actividad
Productores de enzimas
Productores de antibiticos
Productores de aminocidos
y otros factores de crecimiento
11/02/2016
Deteccin de productores de proteasas

Agar leche
Para ver esta pelcula, debe
disponer de QuickTime y de
un descompresor TIFF (sin comprimir).
NO productor de
proteasas
Productor de proteasas
11/02/2016
Productores de antibiticos
Deteccin del productor (bsqueda del taxn Streptomyces)
Staphylococcus aureus
11/02/2016
Cmo detectar un productor de aminocidos

u otros factores de crecimiento?
Colonias a analizar
Auxotrofo + medio mnimo
Medio mnimo
(carece del factor)
SANDWICH
DE
AUXOTROFOS
Incubacin
PRODUCTOR
11/02/2016
Aislamiento en estra por agotamiento del inculo

Tomar un inculo de las colonias de los
productores y obtener cultivos puros
haciendo aislamientos
11/02/2016
cmo conseguiras un microorganismo acidfilo,

formador de endosporas, productor de antibiticos y
capaz de utilizar almidn como fuente de carbono y
energa?
11/02/2016
Buscar nicho ecolgico

explicar razones
Aadir agua
Seleccin
endosporas
Calentar 80 C
agitar
Muestra tierra
Solo endosporas
Almidn nica fuente de C y E
pH cido
Test
Actividad
Deteccin
productores
antibiticos
Diluciones
Cultivo
enriquecimiento
Seleccin amilolticos, y
acidfilos
Obtener colonias
aisladas
11/02/2016
Queso fabricado con las bacterias aisladas del ombligo de Michael Pollan,
amigo de Chistina Agapakis. Quesos de autor
11/02/2016
John Maier, maestro cervecero de la Rogue Brewing Company de Oregn

Tema 2

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Microorganismos y Produccin Industrial. Tema 2 15/16

Tema 2. Aislamiento y seleccin de

Criterios para la seleccin de un microorganismo

Aislamiento de microorganismos de inters

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Extensa gama de reacciones metablicas

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vinagre, cido glucnico

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Bacterias del cido lctico derivados lcteos

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Hongos de importancia industrial

ac. ctrico (E330)

ac. orgnicos (E-330)

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Criterios para la seleccin de un

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Criterios para la seleccin de un

Fcil de manipular y genticamente estable

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Alcalfilos (Mono Lake)

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