LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR DE LA CLULA II

PRACTICA 4
Carbohidratos
Introduccin.
Los carbohidratos estn distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales
tienen participacin estructural, funcional y metablica. Los carbohidratos se clasifican
dependiendo del nmero de tomos de carbono que posee y el grupo funcional
aldehdo o cetona, estas a su vez le confiere la base para la mayora de las reacciones
usadas para su identificacin y cuantificacin. Cuando el azcar est formando por una
sola molcula de carbohidrato, se denomina monosacrido, por dos, disacridos y por
tres, trisacrido y por ms de diez, polisacrido.
Los disacridos son azcares formados por la unin de dos monosacridos mediante el
enlace glucosdico. Si este enlace se efecta entre dos carbonos anomricos, el
disacrido no tendr potencial aldehdo o cetona libre, por lo tanto o dan positivas
aquellas pruebas que involucren la participacin de stos grupos, recibiendo el nombre
de azcar NO reductos. Todos los disacridos que posean un carbono anomrico libre,
darn positiva estas reacciones, llamndose azcares reductores, debido a que
promueven la reduccin del reactivo usado y ellos mismos se oxida.
Las reacciones con Timol y con alfa-naftol son generales para la identificacin de los
carbohidratos en los materiales biolgicos. Mediante la accin del cido sulfrico
concentrado se forma furfural a partir de las pentosas y 5-hidroxi-metilfurfural a partir de las
hexosas.
Pruebas a realizar:
1. Reaccin de Molish: Es una reaccin general para carbohidratos que contienen
ms de 5 tomos de carbono
2. Prueba de Bial: Es una prueba especfica para pentosas. La positividad se
reconoce por la formacin de una coloracin verde botella brillante.
3. Prueba de Lugol: Es una prueba que se usa para identificar almidn. El color azul,
se debe, posiblemente a la formacin de un complejo: Ioduro de almidn.
4. Prueba de Benedict y de Fehling: Es una prueba especfica para las sustancias
reductoras con grupos carboxilos libres.

Objetivos
1. Identificar carbohidratos mediante diferentes ensayos qumicos.
2. Reconocer las diferencias entre azcares reductores y no reductores.
3. Determinar la presencia de azcares reductores en algunos alimentos mediante
las pruebas de Benedict
4. De acuerdo a los resultados de las pruebas realizadas, determinar qu tipo de
azcar contiene la muestra problema

Material

Reactivos

1 esptula

Glucosa al 5 %

2 gradillas

Xilosa al 5 %

1 tela de asbesto

Fructuosa al 5 %

1 tripie

Lactosa al 5 %

22 tubos de ensaye

Reactivo de alfa- naftol

3 vasos de precipitado de 100 ml

Reactivo de Bial

5 pipetas Pasteur

cido sulfrico concentrado

5 pipetas graduadas de 5 mL

Reactivo de Fehling

1 mechero

Reactivo de Benedict

1 balanza

Reactivo de Lugol

1 vaso de precipitado de 500 ml

Solucin problema 1 y 2

Material que deben traer POR EQUIPO

1 sobre de canderel o de nutrasweet (preparar 10 ml de una solucin al 1 %, p/v)

1 lata de refresco de dieta sin colorante
1 lata de refresco normal sin colorante
1 lata de jugo de manzana (que NO tenga pulpa)
azcar de mesa (preparar 10 mL de una solucin al 5 %, p/v )

Reactivo de Fehling
Solucin A (3.5 g de CuSO4 en agua y aforar a 50 ml).
Solucin B (17.5 g de tartrato de sodio y potasio, 5 g de NaOH en agua y aforar a 50 ml)

Reactivo de Benedict
En 60 ml de agua disolver 17.3 g de citrato de sodio y 10 g de Na 2CO3 anhidro. Esta
mezcla se aade lentamente y con agitacin a una solucin previamente preparada de
1.73 g de CuSO4 pentahidratado en 15 ml de agua. La solucin final se afora a 100 ml.

Procedimiento

A. Prueba de Molish

Numerar una serie de diez tubos.

Adicionar a cada tubo las cantidades de soluciones indicadas en la Tabla 1

Tabla 1. Prueba de Molish

No. Tubos

10 11

Soluciones
Glucosa (mL)

Fructosa (mL)

Xilosa (mL)

Lactosa (mL)

Jugo de manzana (mL)

Refresco normal sin colorante (mL)

Refresco de dieta sin colorante (mL)

Canderel o Nutrasweet (mL)

Azcar de mesa (mL)

Solucin problema 1

Solucin problema 2

Solucin de -naftol (gotas)

H2SO4* (mL)

* En todos los tubos de ensayo se vierte con cuidado por la pared y sin mezclar, 1 ml de
cido sulfrico concentrado, al contacto con la capa acuosa aparece una coloracin
roja en presencia de carbohidratos.

B. Prueba de Bial.

Numerar una serie de diez tubos.

Adicionar a cada tubo las cantidades de sustancias indicadas en la Tabla 2

Tabla 2. Prueba de Bial

No. Tubos

10

11

Soluciones
Glucosa (mL)

Fructosa (mL)

Xilosa (mL)

Lactosa (mL)

Jugo de manzana (mL)

Refresco normal sin colorante (mL)

Refresco de dieta sin colorante (mL)

Canderel o Nutrasweet (mL)

Azcar de mesa (mL)

Solucin problema 1

Solucin problema 2
Reactivo de Bial (ml)

1
1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

1.5

*Llevar a bao de mara durante 3 min. La aparicin de un color verde botella, brillante y
totalmente transparente, indica la presencia de una pentosa. Algunos azucares dan con
el Bial una coloracin verde, pero est es opaca.

1.5

B. Prueba de Lugol

Numerar una serie de diez tubos.

Adicionar a cada tubo las cantidades de sustancias indicadas en la Tabla 3

Tabla 3. Prueba de Lugol

No. Tubos

10

11

Soluciones
Glucosa (mL)

Fructosa (mL)

Xilosa (mL)

Lactosa (mL)

Jugo de manzana (mL)

Refresco normal sin colorante (mL)

Refresco de dieta sin colorante (mL)

Canderel o Nutrasweet (mL)

Azcar de mesa (mL)

Solucin problema 1

Solucin problema 2
Reactivo de lugol (gotas)

1
3

* Mezclar y observar. La aparicin de una coloracin azul indica la presencia del almidn
y una coloracin roja, indica el glucgeno o eritrodextrina. Si el color no cambia, el
carbohidrato es un monosacrido o un disacrido.

C. Prueba de Fehling

Numerar una serie de diez tubos.

Adicionar a cada tubo las cantidades de sustancias indicadas en la Tabla 4

Tabla 4. Prueba de Fehling

No. Tubos

10

11

Solucin A (mL)

Solucin B (mL)

Glucosa (gotas)

Soluciones

Fructosa (gotas)
Xilosa (gotas)
Lactosa (gotas)
Jugo de manzana (gotas)
Refresco normal sin colorante (gotas)
Refresco de dieta sin colorante (gotas)
Solucin de canderel o nutrasweet
(gotas)
Solucin de azcar de mesa (gotas)
Solucin problema 1 (gotas)
Solucin problema 2 (gotas)

3
3
3
10
10
10
10

10
3
3

Calentar a ebullicin durante 5 minutos.

La formacin de un precipitado rojo y la decoloracin de la solucin indican
prueba positiva para azcar reductor.

D. Prueba de Benedict

Preparar una serie de diez tubos.

Aadir las soluciones como se indica en la Tabla 5

Tabla 5. Prueba de Benedict

No. Tubos

10 11

Reactivo de Benedict ( mL)

Glucosa (gotas)

Soluciones

Fructuosa (gotas)
Xilosa (gotas)
Lactosa (gotas)
Jugo de manzana (gotas)
Refresco normal sin colorante (gotas)
Refresco de dieta sin colorante (gotas)
Solucin de canderel o nutrasweet (gotas)
Solucin de azcar de mesa (gotas)
Solucin problema 1 (gotas)
Solucin problema 2 (gotas)

5
5
5
10
10
10
10
10
5
5

Calentar a ebullicin durante 5 minutos y dejar enfriar a temperatura ambiente.

La presencia de un precipitado cuya coloracin vara desde amarillo hasta rojo,
con decoloracin de la solucin, indica prueba positiva para azcar reductor.

Resultados
Procesamiento de los datos
1. Anotar los resultados en el siguiente cuadro y describir lo que se observa en cada tubo
(color, formacin de precipitado, etc)

Muestra

Prueba
Molish

Prueba
Bial

Prueba
lugol

Reaccin de
Fehling

Reaccin de
Benedict

Glucosa
Fructosa
Xilosa
Lactosa
Jugo de manzana
Refresco normal sin
colorante
Refresco de dieta sin
colorante
Canderel o
Nutrasweet
Azcar de mesa
Solucin problema 1
Solucin problema 2

Gua para discusin

1. Comparare los resultados y diga si la glucosa, lactosa y sacarosa son azcares
reductores
2. De los alimentos probados cules contienen azcares reductores. Discutir la respuesta.
3. Las determinaciones en esta prctica son cuantitativas o cualitativas? Por qu?
4. Para qu tipo de carbohidratos utilizas las pruebas de Molish?
5. Qu similitud en su composicin presentan el reactivo de Fehling y el reactivo de
Benedict?
6. Qu tipo de carbohidrato contiene la solucin problema?
7. Cul es la reaccin qumica de cada una de las reacciones probadas?