Diferencia entre las poblaciones japonesas y caucsicas en el Frecuencia allica

del crecimiento receptores hormonales Polimorfismos

Resumen:
Antecedentes: Los polimorfismos gen receptor de la hormona de crecimiento
(GHR) se registraron en Poblaciones caucsicas. Sin embargo, la frecuencia de
los de otros orgenes tnicos sigue siendo incierto. Objetivo: Se investig la
presencia de polimorfismos en el gen GHR en una poblacin japons y se
comparo las frecuencias con los reportados en poblaciones caucsicas.
Poblacin: Se seleccionaron 30 nios talla baja idioptica y 30 adultos
japonesa de altura normal. Mtodos: Las secuencias de los exones 6 y 10 en el
Gen GHR se determinaron por secuenciacin directa por reaccin en cadena de
la polimerasa (PCR). Los delecin genmica del exn 3 (GHR-d3) era
investigado por PCR multiplex. Resultados: La frecuencia del genotipo GGG en
codn 168 fue significativamente mayor que la reportado en poblaciones
caucsicas. La frecuencia de GHR-d3 en japonses fue significativamente
menor que en poblaciones caucsicas. Conclusiones: La frecuencia de la
G168G polimorfismo y GHR-d3 en japoneses son diferentes de los que en los
caucsicos.
INTRODUCCIN
El principal papel de las hormonas de crecimiento (GH) durante la infancia es
promover crecimiento seo longitudinal. En los adultos, la GH afecta la
composicin corporal, mineralizacin del hueso, y el metabolismo de la glucosa
y lpidos 3 4. Las acciones de GH estn mediadas por su unin a una superficie
celular especfica, alta afinidad receptor, es decir, GHR. Las anomalas
genticas en el GHR gen causa el sndrome de insensibilidad a la GH que da
lugar a grave baja estatura, osteopenia, obesidad, resistencia a la insulina, la
hipercolesterolemia y en una etapa posterior en la vida si la funcin de la GHR
est gravemente perturbado. Por lo tanto es posible que polimorfismos de
nucletido nico (SNPs) en el gen GHR que causan disfuncin leve puede
resultar en leve baja estatura, alterando la composicin corporal, osteopenia, o
metablicas sndromes como la diabetes mellitus o la hiperlipidemia en las
poblaciones normales. SNPs en el gen GHR tienen han identificado en los nios
con
talla
baja
idioptica
(ISS).
Goddard et al. 6 informaron que algunos mutaciones y / o polimorfismos
heterocigotos en el gen GHR podra causar ISS y ser responsable de baja
estatura en poblaciones caucsicas. Snchez et una !. 1 y Sjoberg et al *
investig el GHR gen en 17 y 26 nios caucsicos con ISS, respectivamente, y
identific slo un heterocigoto mutacin, as como dos SNPs de alta frecuencia,
es decir, G168G (adenina a guanina en la posicin 3 del codn168) y L526I
(citosina a adenina en la posicin 1 de codn 526). Bonioli et al? informado de
que 22 de 37 nios con ISS y 23 de 50 nios normales poseer el genotipo en el

codn GGG 168 de la Gen GHR en una poblacin italiana. En el otro lado,
Pilotta et al. 10 informaron que 44 de 54 nios con deficiencia de GH (GHD)
poseer la GGG genotipo en el codn 168. Delecin del exn 3 del gen GHR se
asocia con aumento de la sensibilidad a GH11. Hay varios informes de Europa
en trminos de las frecuencias de GHR-d3 en el population12 normal "14, e ISS
", GHD10 y pequeos para la edad gestacional (SGA) groups13'14. En Japn, se
inform anteriormente varias mutaciones 15'16 y / o polimorfismos de 17 "19
en el gen GHR. La hiptesis de que la frecuencia de los polimorfismos en el gen
GHR pueden diferir entre poblaciones caucsicas y japonesas y podra explicar
en parte las diferencias tnicas en la estatura o la incidencia de trastornos
metablicos como la diabetes mellitus, hiperlipidemia, o la osteoporosis. En
este estudio, hemos examinado parte del gen GHR en 30 nios con ISS y 30
adultos japonesa de altura normal, y se compararon las frecuencias de la SNPs
identificados con los resultados publicados anteriormente de poblaciones
caucsicas.
POBLACIN Y MTODOS
Poblacin
Para el anlisis de genes, 30 nios con ISS (16 nios y 14 nias) fueron
seleccionados de los pacientes ambulatorios de la Clnica de la Universidad de
Kobe y la del Dr. Nariz Hospital. Los candidatos para el grupo ISS eran
seleccionados en base al siguiente criterio 20: (1) corta estatura (altura 2.0 SD
o ms por debajo de la media para edad y sexo de la population21 japons),
(2) nivel normal GH en suero (GH> 10 g / l) despus de una prueba de
provocacin con insulina o clonidina, y (3) el factor de crecimiento similar a la
insulina en suero normal de baja o baja I (IGF-I) niveles para la edad y el sexo
de los japoneses poblacin. Los pacientes con causas conocidas de corta
estatura, como endocrino identificable, gentica, y displasias esquelticas,
fueron excluidos del estudio. Treinta adultos (18 hombres y 12 mujeres) de lo
normal estatura fueron seleccionados al azar de los pacientes hospitalizados y
los pacientes ambulatorios de nuestro hospital. Ellos fueron tratados en el
hospital para diversos trastornos, con exclusin severa osteoporosis, diabetes
mellitus e hiperlipidemia. El consentimiento informado se obtuvo de los
participantes, y la investigacin fue aprobada por el Comit de tica de la
Universidad de Kobe.
El anlisis gentico
El ADN genmico se aisl a partir de leucocitos de sangre perifrica de
utilizando el ADN genmico Asistente kit de extraccin (Promega Corp.,
Madison, WI) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los exones 6 y
10, que inclua SNPs de alta frecuencia, se amplificaron mediante la reaccin
en cadena de polimerasa (PCR), como se describe anteriormente. La

amplificacin de productos fueron purificados utilizando el Gel QIAquick Kit de

extraccin (Qiagen, Tokio, Japn) y eran se analizaron por secuenciacin directa
con el BigDye Reaccin Kit Terminator Ready (Perkin Elmer, PE Applied
Biosystems, Foster, CA) usando un DNA secuenciador (modelo 310, Perkin
Elmer). El ensayo de PCR multiplex se realiz para el genotipado del GHR-exn
3 locus12.
Anlisis estadstico
La frecuencia allica en cada grupo se estim, y se realiz un anlisis
estadstico mediante la prueba de chi-cuadrado (GraphPad Software Inc, San
Diego, CA). Un valor de p <0,05 fue considerado significativo.

RESULTADOS
En este estudio, nos centramos en dos SNPs frecuentes, en el exn 6 (G168G) y
el exn 10 (L526I), as como GHR-d3 del gen GHR. Basado en una reporte
22anterior, que presume que la secuencia de tipo salvaje en el codn 168 es
GGA, mientras GG (G / A) y GGG son polimorfismos. En este caso, el amino
codificado cido es sin cambios (G168G). Las frecuencias de polimorfismos en
el codn 168 en la poblacin de estudio se enumeran en la Tabla 1, y se
compararon con resultados publicados anteriormente de populations6 Europeo
"10. La frecuencia de GGG en el codn 168 era 100% y el 97% en el grupo
control de adultos y nios con ISS, respectivamente; En contraste, en el
Cubana, caucsico, de Chile, y las poblaciones italiana reportada 6 "10, el
genotipo GGA fue ms frecuente (Mesa 1). La diferencia entre los japoneses y
Poblaciones caucsicas en trminos de la allica frecuencia de codn 168 fue
estadsticamente significativa. En el codn 526, se presume que la de tipo
salvaje secuencia es CTC, mientras que (A / C) TC y son ATC

Polimorfismos (L526I) 22. La frecuencia de la ATC en codn 526 era 40% y 48%
en el control de adultos grupo, y los nios con ISS, respectivamente. Ya est
hubo diferencias estadsticas entre los japoneses y las poblaciones caucsicas
en trminos de la frecuencia de la L526I SNP. Adems, no significativa se
observ diferencia en la altura asociada con el polimorfismo L526I, de acuerdo
con estudios previos en poblaciones caucsicas 6'7 9 A continuacin, se
analizaron las frecuencias de GHR longitud completa (RHC-fi) y delecin del
exn 3 del Gen GHR (GHR-d3). Como se muestra en la Tabla 2, la frecuencias
de hombzygous GHR-fl, heterocigotos GHR-fi / GHR-d3 y homocigotos GHR-d3
en Los nios japoneses con ISS fueron 80%, 15% y 5%, respectivamente,
mientras que las de los adultos japoneses con altura normal fueron 78%, 20% y
2%, respectivamente. La diferencia entre los japoneses y las poblaciones
caucsicas en trminos de la frecuencia allica de homocigotos GHR-FL fue
estadsticamente significativa 10-14.
DISCUSIN
En este estudio, hemos identificado las diferentes frecuencias de SNPs y GHRd3 en el gen GHR, y los compar con los de raza poblaciones caucsica
reportadas por otras investigaciones 6 "10. Varios estudios han sugerido la
presencia de polimorfismos homocigtico o heterocigtico en el Gen GHR en la
ISS, y estos podran explicar el ISS en aproximadamente el 5% de la pacientes
6 seleccionado. Sin embargo, todos los datos disponibles sobre los
polimorfismos en el gen GHR eran de poblaciones caucsicas. Creemos que
este es el primer informe sobre las variaciones de SNPs y GHR-d3 en el gen
GHR que se basa en el origen tnico.
Goddard et / 0.6 inform que algunos heterocigticos mutaciones y / o
polimorfismos en el gen GHR afectan a su funcin de receptor y el resultado es
insensibilidad parcial a la GH. Tambin sugirieron que G168G y L526I eran dos
SNPs frecuentes en el gen GHR. En el presente estudio, uno de los SNPs que se
centr fue una denominada mutacin silenciosa debido a que el aminocido se
mantuvo sin cambios (G168G). Sin embargo, ms de 98% de los alelos
examin en el presente estudio mostr una variante GGG en el codn 168.
Aunque el nmero de individuos examin en este estudio fue relativamente
pequeo, la frecuencia allica es estadsticamente diferente de la de poblacion
caucsica. Estos resultados nos llevaron a concluir que la frecuencia de la
variante en GGG codn 168 fue extremadamente alta en la poblacin Japnes,
independientemente de la altura del cuerpo. Pese A esta alteracin es poco
probable que deteriorar la funcin de la protena GHR per se, otras no
identificadas variantes funcionales pueden estar presentes en vinculacin
desequilibrio. Estas variantes son poco probable que sea secuencias de
codificacin en el gen GHR, porque examinado todas las secuencias de
codificacin en varios nios japoneses de baja estatura y no detectaron SNPs
adicionales, excepto para G168G y L526I, como esta anteriormente descrito.

Sin embargo, es posible que la variante G168G puede estar relacionado con un
mutacin en los elementos de regulacin y puede afectar los niveles de
expresin de GHR en los tejidos. Como alternativa, la variante G168G puede
estar relacionado con la alteracin de otro gen no identificado que es situado
adyacente al gen GHR. cabe destacar que la variante G168G tambin fue
identificado en una paciente con sndrome clsica de Laron (LS) con
heterocigosis.
Mutacin R43X en el gene GHR. Desde una mutacin heterocigota solo no
expresa el fenotipo tpico del sndrome de laron, la G168G variante puede
contribuir a la reduccin de la funcin del GHR. Hay evidencia que demuestra
diferencias entre los caucsicos y japoneses con respecto a frecuencia allica
en otros genes. Por ejemplo, una polimorfismo de repeticin dinucletido en el
intrn 1 del receptor del factor de crecimiento epidrmico gen (EGFR) era
reportado para regular la expresin de EGFR y estar asociada con el
crecimiento celular del cncer de EGFR mediada. Liu et al inform que no
fueron significativas diferencias intertnicas en las frecuencias allicas de el
intrn 1 polimorfismo del gen EGFR entre asiticos y caucsicos o
afroamericana poblaciones, que pueden contribuir a las diferencias tnicas en
la respuesta a los frmacos contra el cncer y EGFR inhibidores. Adems el
crecimiento del cuerpo longitudinal, GH es conocida para jugar un papel
en la regulacin de la glucosa, lpidos y metabolismo seo as como el
crecimiento local. Los P561T variante de GHR se informaron de que se asocia
con crecimiento mandibular, aunque esta variante No se encontr que tena
una correlacin con el crecimiento del cuerpo. Takada et al y Ihara et al
inform que la variante L526I de GHR modific el plasma HDL-colesterol
fenotipo en hipercolesterolemia familiar y el nivel de colesterol srico en nios
con GHD durante el tratamiento con GH, respectivamente, aunque esta
variante era uno de los ms SNPs frecuentes y no afectaron el crecimiento del
cuerpo. Recientemente, las frecuencias de genotipo GHR con o sin exn 3 se
reportaron en poblacin Europeo "14. Como se muestra en la Tabla 2, nuestro
estudio demostrado que la frecuencia de la GHR-d3 genotipo en la poblacin
japonesa fue significativamente inferiores a los de las poblaciones caucsicas.
La baja frecuencia de GHR-fl puede estar asociada con una disminucin de la
sensibilidad a la GH en japons poblaciones. Sin embargo, se necesitan ms
estudios para elucidar la importancia fisiolgica de la diferencia en las
frecuencias de polimorfismos. En conclusin, se determin la diferencia entre
poblaciones caucsicas y japonesas en trminos de frecuencia allica del gen
GHR. Los frecuencia del genotipo en el codn GGG 168 era significativamente
mayor que la reportada en Europeo poblaciones. La frecuencia de GHR-d3 en
japons fue significativamente menor que en caucsicos poblaciones.