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Practica 4

Introduccin
La identificacin de enterobacterias se realiza mediante sus
atributos fisiolgicos que definen a la bacteria y la diferencian de las
dems. Entre los mtodos utilizados para la diferenciacin se tiene los
siguientes; Catalasa, oxidacin, rojo de metilo, citrato de Simmons,
Indol, caldo de urea y agar hierro triple azcar, estas pruebas
bioqumicas nos permiten identificar la familia y en especial el gnero,
ya que tienen reacciones diferentes al ser sometidas a estas pruebas.
Esta prctica consisti en el anlisis de los resultados anteriores
principalmente las que no manifiestan pruebas al instante al ser
sometidas a las pruebas bioqumicas, sino que, con la incubacin se
manifestaron horas despus, y estas se determinan positivas o por el
contrario negativas.
Marco Terico
Voges-Proskauer
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un
microorganismo de fermentar la glucosa con produccin de cido por la
va cido mixta o con produccin de un producto final neutro (acetona)
por la va butanodilica.

Rojo de metilo
Es un indicador de pH acta entre pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo
(pH 4,2) a amarillo (pH 6,3). Por lo tanto, permite determinar la
formacin de cidos que se producen durante la fermentacin El rojo de
metilo se prepara con 0,1 g de este reactivo en 1500 ml de metanol. Una
reaccin positiva indica que el microorganismo realiza una fermentacin
acidolctica de la glucosa por la va cido-mixta.

Citrato de Simons
Determina la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato como
nica fuente de carbono si hay un crecimiento en color azul intenso en la
pendiente la prueba es positiva, es decir, las bacterias si utilizan el citrato como
fuente de carbono y si permanece verde es negativa.

Indol
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de las bacterias
para producir indol a partir del triptfano la produccin de indol es una

caracterstica importante para la identificacin de muchas especies de


microorganismos.

Medio SIM
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad,
produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til
para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae

Ureasa
Medio utilizado para la identificacin de microorganismos en base
a la actividad uresica. Es particularmente til para diferenciar Proteus
spp. de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae. Presenta bajo
contenido de nutrientes y alta capacidad buffer. Aquellas bacterias que
poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrogeno proveniente de la
urea, la hidrolizan, liberando amonaco y dixido de carbono.

Hierro triple azcar


Gracias a su composicin es uno de los medios de cultivo ms
empleados para la diferenciacin de enterobacterias, Si la bacteria
problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a
amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es
fermentadora de glucosa, el medio permanecer de color rojo, Si la
bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su
superficie volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la
superficie del medio continuar de color rojo Si produce cido sulfhdrico
(debido a la reduccin de las sales de hierro), se presentar un
ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente
ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa
(fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria
es fermentadora de glucosa. Si aparece rotura o desplazamiento del
medio, significa que la bacteria es productora de gas

Materiales y reactivos

1 frasco gotero con indicador rojo de metilo.

2 pipetas de 1 ML.

1 frasco gotero con solucin etlica de naftol a 5%.

1 frasco gotero con solucin de hidrxido de potasio (KOH) al 40%.

1 frasco gotero con reactivo de kovac.

1 perilla o propipeta

Procedimiento
Primera Parte
Primero se hizo la prueba en el caldo Voges-Proskauer aplicamos .6
mililitros de la solucin etlica de naftol al 5%, agitamos el tubo y lo
dejamos en reposo durante 15 minutos, en lo que esperbamos el
resultado realizamos la prueba de rojo metilo, en la cual aplicamos dos
gotas de indicador rojo de metilo al otro tubo que contena el caldo
Voges-Proskauer lo agitamos y observamos la reaccin (vase tabla de
resultados), y en seguida realizamos la observacin en el citrato de
Simmons en el cual pudimos observar el cambio de color en referencia a
la prueba control, en cuanto a la prueba Indol agregamos las 2 gotas del
reactivo Kovac esperamos un tiempo y obtuvimos el resultado. Tambin
observamos las pruebas de cido sulfrico en el cual vimos que no ava
ningn
cambio en respecto a la prueba control, este mismo
procedimiento lo realizamos el medio SIM solo observamos el resultado
de la incubacin de la bacteria en el cual pudimos ver que el medio SIM
estaba turbio, determinando as, que la prueba sala positiva. En cuanto
a la ureasa no se observ ningn cambio por lo que se determin como
negativa, y para culminar con esta parte se observ el Hierro Triple
Azcar una vez obtenido todos los resultados de las pruebas bioqumicas
se procedi a compararlas con la enterobacterias ya identificadas.

Segunda Parte: Manejo de Material Contaminado


Cuando finaliz la sesin se realiz lo siguiente

Lavamos la mesa con hipoclorito de sodio

Recogimos la basura

Sacamos las cajas de cultivo y tubos

Lavamos los tubos

Tiramos las cajas de cultivo en una bolsa roja de polietileno

Resultados
No.

TSI

Cultiv

GA

H2S

RM

VP

IND

CIT

URE

MOV

o
Roja

A/A

Blanca

Alc/Alc

Control

Tabla 1. Resultados a las pruebas bioqumicas comparadas con la


muestra control.
Enterobacter

TSI

GAS

H2S

RM

VP

IND

CIT

A/A

URE MOV

ia
P. Neumoniae

Tabla 2. Resultados a las pruebas bioqumicas de la enterobacteria con


mayor semejanza a los resultados obtenidos.

Voges-Proskauer / Rojo de Metilo.


Lectura e interpretacin:

El RM es positivo si se observa un anillo de color rojo en la superficie del


medio al agregar 2gts de reactivo rojo de metilo.
El VP es positivo si se observa un anillo de color zapote intenso en la
superficie del medio. Al agregar 4gts de KOH al 40% y 6gts de alfa
naftol.
En las muestras recolectadas, se obtuvo un RM positivo y un VP
negativo, lo que indic que las bacterias seleccionadas no producen
acetona pero si mantienen estables los productos cidos de la
fermentacin de la glucosa.
Citrato de Simmons.
Lectura e interpretacin: Un viraje de color verde al azul marino y
crecimiento en la superficie da una reaccin positiva, de lo contrario es
negativa.
Las muestras probadas resultaron positivas a la prueba bioqumica el
Citrato de Simmons, lo que indica que las bacterias empleadas pueden
utilizar el citrato como nica fuente de carbono.
Indol.
Lectura e interpretacin: La prueba de indol est basada en la formacin
de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo del
p-dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio activo del reactivo de
Kovacs. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.
El resultado negativo que se obtuvo en ambos cultivos, indic que las
bacterias sembradas no posean triptofanasa, y por esta razn no es
posible la deshidrolizacin y la desaminizacin del triptfano.
Movilidad.
Lectura e interpretacin: La movilidad se observa por turbidez del
medio, si slo se observa crecimiento en la estra realizada es negativa.

En la primera (roja) muestra utilizada se encontr movilidad, mientras


que en la segunda muestra (blanco) dio negativa la movilidad.
Urea.
Lectura e interpretacin: Una color rosado intenso indica reaccin
positiva, si el
medio conserva su color original de amarillo plido o un poco ms
intenso indica reaccin negativa.
En ambas muestras, la prueba bioqumica dio negativa. Esto indica que
no hay presencia de la enzima ureasa en las bacterias utilizadas.
Agar Hierro Triple Azcar:
Lectura e interpretacin:

Alcalino/Alcalino (Alc/Alc): Se observa tubo color rojo, no fermenta

ninguno de los azcares.

Acido-Acido A/A: Se observa todo el tubo de color amarillo,

fermenta la glucosa, lactosa y sacarosa, con produccin o no de gas, la


cual se representa con (G) si es abundante y (g) si es poca.

Alcalino-Acido Alc/A: Se observa el tubo en la parte inclinada color

rojo y amarillo el fondo, fermenta solo la glucosa, con produccin o no de


gas, la cual se representa con (G) si es abundante y (g) si es poca.

Alcalino- Acido Alc/A: Se observa el tubo parte inclinada rojo y

amarillo el fondo, con enecrecimiento, fermenta la glucosa, con


produccin de H2S la cual se representa por (+), con produccin o no de
gas, la cual se representa con (G) si es abundante y (g) si es poca.
Los resultados obtenidos indican que la muestra bacteriolgica roja fue
cido-cido, lo que indica que fermentan glucosa, sacarosa y lactosa con
una produccin de gas leve.
Conclusin

La variacin de nuestros resultados se debe principalmente a los


factores que pudieron haber influido, factores ambientales en los cuales
pudieron alterar la naturaleza de la bacteria, invalidando algunas
pruebas que se le hicieron, otro factor que creemos que pudo haber
existido fue la falta de esterilizacin suficiente del aire principalmente
porque mientras se realizbamos nuestras pruebas, otros compaeros
hablaban expulsando as otros microrganismos, en la discusin del
equipo determinamos por las caractersticas ms cercanas P. neumoniae
puesto que casi en todas las pruebas bioqumicas realizadas salieron
parecidas a las caractersticas de dicha bacteria.