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1.- MICROORGANISMOS
A.- Concepto de Microorganismo: Con el nombre de microorganismos se designa al conjunto de
seres vivos que se caracterizan por tener un tamao tan pequeo que no pueden ser observados a
simple vista, sino slo con ayuda del microscopio ptico o electrnico.
Los hay sin estructura celular, p.e. los virus, pero la mayora son unicelulares (procariotas o
eucariotas), y existen tambin microorganismos pluricelulares (p.e. algas y mohos)
La ciencia que se dedica a su estudio se denomina Microbiologa.
B.- Principales grupos:
a.- Formas acelulares: a.- Introduccin: Desde 1892 se conoce la existencia de partculas
infecciosas, a las que se dio el nombre de grmenes filtrables, ya que traspasaban cualquier filtro
cuyo tamao de poro retuviese a los dems agentes infecciosos. Posteriormente se les denomin
virus, aunque no fue posible observarlos hasta que apareci el microscopio electrnico. Hoy se
conocen otros tipos de partculas infecciosas de organizacin acelular, aunque en algunos casos no
hay acuerdo unnime para considerarlas virus atpicos o formas totalmente distintas, aunque todas
ellas se clasifican y estudian aparte, sin adscribirlas a ningn reino. Al carecer de estructura celular,
no pueden alimentarse, ni crecer y slo se reproducen dentro de una clula husped, de la que utilizan
sus estructuras vitales.
b.-Virus: a.- Caractersticas generales: Son formas acelulares que vienen definidos por las
siguientes caractersticas:
Tamao: Oscila entre 10 y 300 nm, o sea, muy inferior al de cualquier clula y prximo al de las
macromolculas. Siempre tienen la misma forma y tamao, mientras que los de una clula
cambian a lo largo de su vida.
Estructura u organizacin: Es molecular, no celular. Consta de cido nucleico, que puede ser
ADN o ARN, pero nunca ambos a la vez, envuelto en una cubierta de protenas.
Actividades vitales: Son parsitos intracelulares obligados, pues para autoperpetuarse utilizan los
materiales y maquinaria celular de la clula husped, que, debido a esto, suele desorganizar su
propia actividad, llegando incluso a morir. Por eso la mayora de los virus causan graves
enfermedades. No poseen metabolismo ni sensibilidad.
b.- Composicin y estructura: Las partculas vricas se denominan viriones. Para que un
virus pueda infectar una clula es necesario que presente su estructura completa. sta se compone de:
cido nucleico: Tanto el ARN como el ADN, pueden ser de cadena doble o de cadena sencilla, y,
en el caso del ADN, lineales o circulares. Los genomas ARN de cadena doble y algunos de
cadena sencilla, se presentan en los viriones en forma de varias cadenas independientes, con
genes distintos (genoma segmentado). Ciertos virus con ARN simple (retrovirus) son capaces de
copiar, a partir de una hebra simple de ARN, una doble hlice de ADN.
Protenas: Son, casi todas, estructurales (aunque existen virus que poseen algunas enzimas). Cada
molcula proteica se denomina Capsmero, y se ensamblan
dando lugar a la Cpsida, una cubierta externa de forma
variada. Al conjunto de cido nucleico y cpsida se le
denomina nucleocpsida
Envoltura membranosa: No todos los virus la presentan. Se
compone de una bicapa lipdica procedente de la clula
parasitada, (de su membrana plasmtica, RE o envoltura
nuclear), y cantidades variables de glcidos, todos ellos
asociados a protenas vricas (lipoprotenas y
glucoprotenas).
c.- Tipos de virus: Los virus se clasifican atendiendo
a las caractersticas de las envolturas proteicas, al tipo de cido nucleico que contienen y
segn las clulas que infectan.
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metabolismo propio, para ello han de utilizar las estructuras y materiales (ribosomas, ARNt, ATP,
nucletidos, aminocidos...) de la clula parasitada.
e.- Ciclo vital: Se entiende por ciclo vital o ciclo infeccioso de un virus el conjunto de
acontecimientos que tienen lugar desde su incorporacin a la clula husped hasta su salida de la
misma, y cuya finalidad es la multiplicacin del virus.
En los seres pluricelulares hay que tener en cuenta que existe una etapa previa, en la infeccin del
virus, desde que penetra en el organismo hasta que alcanza las clulas especficas en las que van a
producir el ciclo infeccioso.
Los detalles de cada etapa del ciclo vital difieren enormemente de unos tipos de virus a otros, pero, en
general, se considera que existen las siguientes etapas:
a.- Fase de adsorcin: Se establece el contacto entre la cpsida o la envoltura del virus y
la superficie de la clula, mediante receptores especficos de ambos. Esto hace que cada virus infecte
un tipo celular especfico de cada organismo.
Los bacterifagos (virus que parasitan bacterias) toman contacto a travs de los receptores de las
protenas que forman las espinas y las fibras de la placa basal con la pared bacteriana, y terminan por
anclarse a ella.
b.- Fase de penetracin: El virus supera la barrera de la membrana celular,
introducindose completo en el citoplasma o slo su genoma y
algunas protenas acompaantes.
En el caso de los bacterifagos, las espinas y fibras de la placa
basal, junto con enzimas hidrolticas de la cpsida, rompen la
pared. La cola se contrae y el cido nucleico se inyecta en la clula
husped.
En las clulas animales
normalmente entra todo el virin
mediante la fusin de las
membranas celulares y vricas. Si
no poseen envoltura penetran por un mecanismo de endocitosis
mediada por receptores. En las clulas vegetales atraviesan la pared
celular a travs de pequeas grietas producidas, sobre todo, por
picaduras de insectos.
c.- Fase de eclipse: En ella se produce la replicacin, transcripcin y traduccin del
material gentico. Se denomina as porque el virus desaparece como tal entidad y difcilmente se
puede observar al microscopio electrnico: pierde sus envueltas y se integra en el metabolismo de la
clula, sacando copias de su genoma y dirigiendo la sntesis de nuevas protenas vricas.
Segn la duracin de esta fase se distinguen dos modalidades de ciclo vital vrico:
Ciclo ltico: En cuanto el cido nucleico se encuentra en el citoplasma se inicia la replicacin y la
sntesis de protenas del virus, hasta formarse numerosas copias de los mismos.
Ciclo lisognico: En el caso de algunos bacterifagos, como el fago lambda (), el genoma del
virus, despus de la penetracin, se incorpora al ADN bacteriano y permanece en ste latente. El
virus no se manifiesta, pero su cido nucleico se duplica al mismo tiempo que el de la bacteria,
por lo que puede transmitirse a las clulas hijas durante varias generaciones. Cuando esto ocurre,
el ADN del virus recibe el nombre de profago, y la clula portadora, denominada bacteria
lisognica, es resistente a una nueva infeccin por ese virus.
Bajo ciertos estmulos externos (rayos X, ultravioleta...), puede producirse la induccin o
activacin del profago, que se separa del cromosoma bacteriano e inicia un ciclo ltico, originndose
nuevos viriones infecciosos. Existen numerosos agentes inductores, pero todos ellos tienen en comn
el producir daos en el ADN, es decir, poner en peligro la vida de la clula husped; por tanto, la
induccin sera un mecanismo de escape para el virus.
A semejanza de los profagos, algunos virus de clulas eucariotas tambin pueden integrarse en el
ADN celular. Cuando esto ocurre reciben el nombre de provirus. A diferencia de lo que ocurre con
los profagos, el ADN integrado en el de la clula husped se transcribe para sintetizar nuevas
molculas de ARN y de protenas vricas, por lo que son activos. Esto sucede, p.e. en el caso del VIH
(virus del SIDA), que son virus ARN, en concreto retrovirus, que, gracias a la enzima transcriptasa
inversa (que se encuentra dentro de la cpsida junto al ARN), sintetizan un ADN bicatenario, que es
el que se integra en el ADN de la clula infectada.
d.- Fase de ensamblaje: Consiste en la reunin de las copias del nuevo material gentico
del virus con las protenas vricas.
e.- Fase de liberacin: Los nuevos virus salen de
la clula, para infectar nuevas clulas y repetir el ciclo. Los
bacterifagos producen lisis de la clula. Los virus sin
envoltura lo hacen mediante exocitosis, aprovechando la
salida de otras sustancias; los que poseen envoltura se
ensamblan en la membrana plasmtica de la clula, y se
liberan por gemacin, llevndose consigo parte de la
membrana que formar su envoltura lipdica. Si la envoltura
se forma a partir de membranas internas, los virus llegan
embalados en ellas hasta la membrana, como si fueran
protenas transportadas por vesculas.
f.- Origen de los virus: Su sencillez estructural hizo que se consideraran durante mucho
tiempo como preclulas, es decir, organismos en las primeras etapas de la evolucin biolgica.
Actualmente se mantiene, sin embargo, que los virus podran ser restos evolutivos de
microorganismos parsitos celulares muy sencillos, que, tras perder su complejidad al adaptarse al
parasitismo, conservaron nicamente la informacin esencial para su replicacin.
Otros cientficos opinan que los virus se han originado a partir de elementos gnicos de las clulas
hospedadoras, que en el curso de la evolucin alcanzaron su independencia replicativa de la clula
inicial. Seran un ejemplo de evolucin hacia atrs, desde organismos ms complejos a entidades
ms simples.
Tambin hay que tener en cuenta la aparicin de nuevos virus, originados por cambios gnicos o
por la transferencia a otros hospedadores (el virus del SIDA humano, p.e., parece que procede de un
retrovirus que afecta al chimpanc).
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b.- Formas celulares: a.- Introduccin: Los tipos de microorganismos con estructura celular
existentes se incluyen en tres de los cinco reinos existentes: Moneras (Arqueobacterias y
Eubacterias), Protoctistas (Protozoos y Algas ) y Hongos (Mohos y Levaduras).
b.- Arqueobacterias: Son organismos unicelulares procariotas, filogenticamente separados
tanto de Eubacterias como de eucariotas, por lo que en la actualidad muchos autores ya no las
consideran bacterias, sino un grupo independiente, al que denominan Arqueas. Se caracterizan por:
En la pared celular no presentan peptidoglucano, sino glucoprotenas y protenas simples.
Los lpidos de su membrana no llevan cidos grasos, sino que el glicerol se une mediante
enlaces tipo ter a cadenas hidrofbicas derivadas del isopreno.
Viven en condiciones extremas, diferencindose tres grupos de Arqueas:
- Halofticas: Viven en ambientes de elevada salinidad (aguas saladas, como el Mar Muerto,
p.e. o salazones de carne o pescado)
- Metangenas: Viven en ambientes estrictamente anaerobios, en los que producen metano,
siendo ste el origen del denominado gas de los pantanos. Se encuentran en ambientes
ricos en materia orgnica en descomposicin, como el fondo de pantanos, aguas
estancadas, depsitos de tratamiento de aguas residuales o el tracto digestivo de
rumiantes.
- Termoacidfilos: Viven en ambientes muy cidos y de elevada temperatura, como aguas
termales cidas o zonas volcnicas submarinas, siendo su T ptima de crecimiento
superior a los 80C, pudiendo vivir incluso a temperaturas de ebullicin del agua.
c.- Eubacterias: Son microorganismos unicelulares procariotas, de dimensiones comprendidas
entre 1 y 5 de dimetro. Pueden habitar en todos los medios terrestres y acuticos, e incluso en el
interior de otros seres vivos. Su estructura celular corresponde a la de una clula procariota, que,
aunque esbozada en el tema II, vamos ahora a describir con algo ms de detalle.
a.- Estructura de la clula bacteriana: La clula
bacteriana est constituida por pared celular, membrana
plasmtica, citoplasma, y material gentico. En ocasiones
presenta diversos tipos de apndices bacterianos.
a.- Pared celular: Es una cubierta rgida, no
celulsica, compuesta fundamentalmente por murena, un
peptidoglucano formado por la unin de monmeros de Nacetilglucosamina y cido N-acetilmurmico, molculas que
se unen por medio de enlaces O-glucosdicos. Existen dos
tipos de pared celular que difieren en su grosor y forma, lo
que permite dividir a las bacterias en dos grupos:
Pared celular de las Gram positivas: Poseen una sola
capa gruesa muy rgida compuesta por murena, a cuya
estructura reticular (como la de una tela de saco) se unen
protenas, polisacridos y cidos teicoicos (polmeros de
derivados de monosacridos, aminocidos y alcoholes
como la glicerina). Contiene muy pocos lpidos.
Pared celular de las Gram negativas: Es delgada, y
formada por dos capas, una interna de murena, y otra
externa de protenas, lipoprotenas y lipopolisacridos,
organizados formando una bicapa lipdica (LPS).
Algunas bacterias poseen una cubierta de naturaleza
glucdica, denominada Cpsula bacteriana, por fuera de su
pared celular. Sirve de proteccin frente a fagocitos y
anticuerpos, actan como receptores de virus y permiten la
adherencia a clulas eucariotas previa a la invasin microbiana.
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b.- Membrana plasmtica: Posee una estructura semejante a la de las clulas eucariotas y,
al igual que sta, regula el intercambio entre el interior celular y el medio. Esta membrana puede
invaginarse, formando los mesosomas, donde se localizan numerosas enzimas que intervienen, entre
otros procesos, en la respiracin celular, la duplicacin del ADN, la fotosntesis en aquellas bacterias
que la realizan y la asimilacin del nitrgeno atmosfrico en las bacterias fijadoras de N2.
c.- Citoplasma: Su composicin es semejante al de las clulas eucariotas, pero carece de la
mayor parte de los orgnulos caractersticas de las mismas, conteniendo una gran cantidad de
ribosomas 70s, y unos grnulos denominados inclusiones, constituidos por diferentes sustancias de
reserva (glucgeno, azufre, gases, protenas...)
d.- Material gentico: Se encuentra en el nucleoide, zona situada en la regin central del
citoplasma, no protegida por una membrana nuclear. Est constituido por:
El cromosoma bacteriano, formado por una molcula de ADN bicatenario, circular y
fuertemente plegada. El plegamiento de la molcula se estabiliza por medio de protenas
estructurales, aunque no se observan histonas ni unidades de tipo nucleosoma.
Pequeos anillos de ADN, dispersos por el citoplasma, independientes del cromosoma y
capaces de duplicarse, denominados plsmidos. Pueden contener desde 2 hasta 30 genes que,
aunque no son estrictamente necesarios para la vida de la bacteria, confieren importantes
propiedades a las clulas que los albergan (no todas los presentan, o presentan los mismos).
Entre ellos destacan:
- Plsmido o factor F: Otorga a la clula la capacidad de conjugacin, proceso que permite una
recombinacin gnica, con el
consiguiente aumento de la
variabilidad
gentica.
Se
aproximan dos bacterias, una
con el plsmido F (F +) y otra sin
l (F-) y establecen un puente
citoplasmtico mediante una
fimbria, a travs del cual pasa el
plsmido de la bacteria F+ a la F. Si el plsmido se halla
incorporado al cromosoma
bacteriano, parte de ste tambin se transfiere, aunque normalmente no entero, ya que el
puente se suele romper antes. De esta manera la bacteria F- aparece con un genoma nuevo,
porque ha incorporado genes procedentes de otra bacteria.
- Plsmidos R: Codifican enzimas que proporcionan resistencia frente a los antibiticos, y un
solo plsmido puede contener hasta 10 genes de resistencia diferentes. Tales genes de
resistencia no slo pasan de la clula madre a la hija en la divisin celular, sino que tambin
pueden ser transferidos desde los plsmidos a los virus y a otras bacterias, incluso de distinta
especie que la portadora del plsmido. Esta capacidad de las bacterias para transferir genes
de resistencia a los medicamentos de una clula a otra, plantea un serio problema sanitario,
pues constituye la causa del resurgimiento actual de enfermedades infecciosas que se crean
prcticamente controladas, como es el caso de la tuberculosis.
e.- Apndices bacterianos: Son estructuras filiformes, que sobresalen en la superficie
celular, entre los que destacan:
Flagelos: Filamentos muy largos y finos, que proporcionan movilidad a las bacterias que los
poseen. Su estructura es ms sencilla que los de las clulas eucariotas, y estn compuestos por
una protena denominada Flagelina. Puede haber uno o varios en una misma clula.
Pelos y Fimbrias: Estructuras tubulares y huecas, cuya pared est compuesta de protenas. La
funcin de las fimbrias, cortas y numerosas, es adhesiva, mientras que los pelos, ms largos y
escasos, intervienen en el proceso de conjugacin, pues sirven para el paso del ADN de una
clula a otra durante este proceso.
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Los mohos son hongos Cigomicetos, cuyo cuerpo vegetativo est constituido por filamentos
celulares denominados hifas; el conjunto de hifas constituye el micelio. Aguantan condiciones
ambientales extremas (altas concentraciones de azcares, acidez extrema, falta de humedad...). El
ms conocidos es el moho del pan (Rhizopus), frecuente tambin en frutas y otros vegetales
Las levaduras son Ascomicetos unicelulares y se reproducen por gemacin. Muy difundidas en la
naturaleza, son utilizadas en procesos fermentativos, como sucede con Saccharomyces cerevisiae,
responsable de la fermentacin alcohlica.
Dentro de los Deuteromicetos, de reproduccin sexual desconocida destaca el gnero Penicillium,
productor de penicilina.
Procariotas
Eucariotas
Enfermedad
Rabia
Agente
Rhabdovirus
Sarampin
Paramixovirus
Virus
Gripe
Ortomixovirus
Poliomielitis
Enterovirus
Paperas
Paramixovirus
Rubola
Paramixovirus
Picornavirus
Hepatitis B
Hepadnavirus
Herpes genital
Herpesvirus
SIDA
VIH
Meningitis
Meningococcus,
Haemophyllus B
Ttanos
Clostridium tetani
Faringitis
Streptococcus
Clera
Fiebre tifoidea
Gastroenteritis
Mycobacterium
tuberculosis
Corynebacterium
diphteriae
Bordetella pertussis
Clostridium
botulinum
Bacillus anthracis
Mycobacterium
leprae
Vibrio cholerae
Salmonella typhi
Escherichia coli
Peste
Yersinia pestis
Neumona o
pulmona
Streptococcus
pneumoniae
Neisseria
gonorrhoeae
Tuberculosis
Difteria
Tos ferina
Botulismo
Bacterias ntrax
Lepra
Gonorrea
Sfilis
Paludismo o
malaria
Disentera
Protozoos
amebiana
Tricomoniasis
Hongos
Sntomas
Excitacin, hidrofobia, parlisis
Goteo nasal, enrojecimiento de ojos,
fiebre, tos, exantema general
Goteo nasal, congestin
Fiebre, malestar general, dolor de
cabeza, vmitos y diarreas
Estado catarla inicial; a los 8 das
subida de fiebre. Parlisis
Inflamacin de glndulas salivares.
Hinchazn de cuello y mandbula
Como el sarampin, pero ms suave.
Puede afectar al feto de embarazadas
Exantema, erupciones cutneas. Dos
variedades: simple y zster
Trastornos hepticos. Color corporal
amarillo
Fiebre, dolores abdominales, vmitos
e ictericia. A veces asintomtico
Tratamiento
Vacuna de animales
Vacuna triple vrica
Descongestivos,
Vacuna
Vacuna
Vacuna triple vrica
Vacuna triple vrica
Globulinas
Vacuna y
gammaglobulinas
Preservativo. Vacuna
Preservativo.
Quimioterapia
Preservativo.
Quimioterapia
Antibiticos
Antitoxina. Tratamiento
sntomas
Antibiticos
Antibiticos
Vacuna
Vacuna. Antibiticos
Antitoxina botulnica
Vacuna. Antibiticos
Quimioterapia
(sulfonas)
Antibiticos
Antibiticos
Antibiticos
Antibiticos
Preservativo.
Quimioterapia
Chancro en genitales. Exantema. Preservativo.
Treponema pallidum
Infeccin del sistema nervioso
Antibiticos
Infeccin de la uretra
Plasmodium sp.
Fiebre recurrente
Entamoeba
histolytica
Trichomonas
vaginalis
Candidiasis
Candida albicans
Tias
Pie de atleta
Microsporum sp.
Microsporum
Vacuna. Quimioterapia
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2.- BIOTECNOLOGA
A.- Concepto: En trminos generales, biotecnologa es el uso de organismos vivos o de algunos de
sus componentes para obtener productos de valor para el hombre.
Como tal, la biotecnologa ha sido utilizada por el hombre desde los comienzos de la historia en
actividades tales como la preparacin del pan y de bebidas alcohlicas o el mejoramiento de
cultivos y de animales domsticos. Hoy en da, los importantes avances, en ingeniera gentica y
nuevas tecnologas productivas han llevado a una redefinicin de Biotecnologa: Se entiende por
"biotecnologa moderna la que incorpora el uso de tcnicas de biologa molecular (ingeniera
gentica), y es la que, por el amplio abanico de posibilidades que ofrece, recibe actualmente mayor
atencin.
B.- Microorganismos utilizados en biotecnologa: Para alcanzar sus objetivos, la biotecnologa se
sirve de seres vivos, tales como microorganismos, clulas vegetales o animales, o constituyentes
de stas, como enzimas, cidos nucleicos, etc.
Hay tres grupos de microorganismos que tienen inters biotecnolgico: Bacterias (aerobias y
anaerobias estrictas o anaerobias facultativas, pero nunca fotosintticas), Levaduras y Mohos.
C.- Principales tcnicas empleadas en biotecnologa:
a.- Introduccin: La biotecnologa consiste en un gradiente de tecnologas que van desde las
tcnicas de la biotecnologa "tradicional", largamente establecidas y ampliamente conocidas y
utilizadas (fermentacin de alimentos o diseo de tcnicas de cultivo de microorganismos idneas
a escala industrial, p.e.), hasta la biotecnologa moderna.
Los primeros aos de la dcada de 1970 marcan un antes y un despus en la utilizacin de
seres vivos en las tecnologas humanas. A partir de esa fecha, estamos asistiendo a una revolucin
tecnolgica sin precedentes, fruto del extraordinario desarrollo de las tcnicas biotecnolgicas y,
en especial, de los avances logrados en la manipulacin gentica de los seres vivos. As, la
ingeniera gentica incluye un conjunto de tcnicas biotecnolgicas avanzadas como la tecnologa
del ADN recombinante, la reaccin en cadena de la polimerasa y la terapia gnica, entre otras,
gracias a las cuales es posible aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para
introducirlo en otro, aumentar el n de copias de un fragmento determinado de ADN o corregir un
defecto gentico hereditario reemplazando en las clulas de un organismo el gen defectuoso por
otro activo, capaz de fabricar la protena necesaria en cantidad suficiente.
b.- Clonacin de genes: Tcnicas de obtencin de ADN recombinante: Los procedimientos de
ingeniera gentica suelen comenzar con la denominada clonacin gnica, es decir, la obtencin
de un conjunto de copias de un gen determinado. Un clon de genes es, por tanto, un conjunto de
genes idnticos procedentes de un gen concreto. La clonacin de genes comprende varias etapas:
a.- Obtencin del ADN que contiene el gen: Se emplean distintos procedimientos.
Si el gen que
se
desea
clonar
procede de
una clula
procariota,
que
no
contiene
intrones, se
obtiene
directamente
del ADN de
la clula que
porta dicho gen. Se utilizan enzimas de restriccin, endonucleasas que cortan el ADN por puntos
donde existen secuencias especficas de bases nitrogenadas.
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Existen varios mtodos para introducir ADN en clulas vivas, que difieren en funcin de los tipos de
clula hospedadora (eucariota o procariota), y del vector de clonacin:
Transformacin: Se usa principalmente en clulas procariotas, que tienen la capacidad de captar
molculas de ADN que se encuentran en el medio externo, introducirlas en su interior e
incorporarlas a su genoma mediante recombinacin.
Transduccin: Si el vector de clonacin es
el genoma de un virus, el ADN es
introducido en la clula hospedadora por
el mismo virus. Sirve tanto para clulas
procariotas como eucariotas. Si el genoma
es de un virus ltico, es necesario suprimir
los genes responsables de la lisis celular,
ya que, de lo contrario, la clula
hospedadora se lisara como consecuencia
de la infeccin vrica. En el caso de virus
lisognicos, que insertan su genoma en
bacterias, hay que modificar tambin el
genoma vrico, para que se exprese el gen
que se desea clonar sin inducir el ciclo ltico.
d.- Deteccin del gen clonado: Ya dentro del organismo hospedador, el gen se replica. Como
no todas las clulas
contienen el gen que se
desea
clonar,
es
necesario seleccionar
aquellas
que
lo
contiene, para lo que se
utilizan los marcadores
antes
mencionados.
Una vez seleccionado
el clon deseado, al ser
alta la velocidad de
reproduccin, se puede
producir gran nmero
de clulas que lo
contengan, para su
aislamiento, estudio y
utilizacin.
c.- Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): Es una tcnica desarrollada en 1985, mediante
la cual, y a partir de la capacidad de la ADN polimerasa para replicar el ADN, se obtienen en el
laboratorio mltiples copias de un fragmento determinado de ADN a partir de un n muy pequeo
de molculas (amplificacin del ADN in vitro), a diferencia de las tcnicas anteriores de clonacin
que amplificaban el ADN in vivo.
a.- Procedimiento: Primero se desnaturaliza la molcula o fragmento de ADN que se desea
replicar, para separar las dos hebras de la doble hlice, sometiendo el ADN a elevadas temperaturas.
Cada una de las hebras sirve como molde para sintetizar otra cadena complementaria. A fin de que la
ADN polimerasa pueda actuar copiando cada una de las cadenas complementarias, son necesarios unos
cebadores adecuados. En la mezcla de reaccin debe existir, asimismo, una concentracin suficiente de
nucletidos trifosfatos, que se utilizarn para construir las nuevas cadenas.
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La elaboracin del pan consiste en mezclar, en un primer paso, harina, agua, sal y levadura. Al
entrar en contacto con el agua, las amilasas presentes en la harina se activan e hidrolizan el almidn a
mono y disacridos, azcares que son rpidamente fermentados por la levadura. El CO2 resultante
queda atrapado en el interior de la masa y forma un gran n de pequeas burbujas que determinan el
aspecto esponjoso del mismo.
La coccin de la masa elimina el etanol producido en la fermentacin y destruye las clulas de
levadura. Asimismo, tiene lugar una importante reduccin en el contenido de agua.
b.- Fabricacin del vino y la cerveza: Intervienen tambin levaduras de la especie
Saccharomyces cerevisiae que llevan a cabo una fermentacin alcohlica semejante a la del pan, pero
usando como sustrato los azcares presentes en el mosto, el zumo natural de las uvas, rico en fructosa
y glucosa. La levadura se encuentra de forma natural en la piel de las uvas. Se obtiene etanol y CO2.
El proceso de fabricacin del vino se inicia con el prensado de las uvas para obtener el mosto. Las
levaduras de la uva comienzan la fermentacin rpidamente, aunque en la produccin industrial del
vino se aaden cepas de levaduras seleccionadas con el fin de acelerar el proceso y de incrementar el
contenido de etanol.
La fermentacin dura unos pocos das. Durante este tiempo es necesario controlar la velocidad
mediante la temperatura, ya que si sta aumenta mucho puede llegar a destruir las levaduras. Cuando
termina la fermentacin, el vino se aclara (mediante filtrado y aadiendo compuestos que facilitan la
precipitacin de los elementos en suspensin) y se embotella, si se desea obtener vinos jvenes, o se
somete a un proceso de maduracin en barricas apropiadas, para envejecerlo.
El vino blanco y el tinto se elaboran a partir del mosto de uvas blancas o negras. Para obtener vino
tinto hay que dejar la piel de la uva negra (el hollejo) en el vino. El alcohol producido en la fermentacin
extrae los pigmentos del hollejo que son los que dan el color al vino.
El CO2 resultante se evapora o se elimina artificialmente. En el caso de los vinos espumosos, se
les aade una cantidad extra de azcar para que se produzca una segunda fermentacin alcohlica que se
realiza a presin. En ella se libera el CO2 que constituye las burbujas.
La obtencin de cerveza es algo ms complicada, pues se elabora a partir de cereales que contienen
en sus granos almidn, que no fermenta directamente. Al germinar sus semillas producen amilasas, que
convierten el almidn en glucosa. As, la malta (granos de cebada germinados y tostados), cuando se
muele con agua, libera las amilasas que hidrolizan al almidn a glucosa, que es el sustrato para la
fermentacin alcohlica, que dura de 5 a 10 das. El producto final se consigue mediante la
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incorporacin de algunos aditivos, como las flores de lpulo, responsables del sabor amargo de la
cerveza. Tambin se filtra y se pasteuriza, antes de que pueda ser bebida.
c.- Fabricacin del queso y leches fermentadas: En la elaboracin del queso y productos
como el yogur o la cuajada interviene las llamadas bacterias lcticas (pertenecientes a diversos gneros,
como Streptococcus, Lactobacillus y Lactococcus), que fermentan azcares sencillos para producir cido
lctico.
La reaccin de la fermentacin lctica es la siguiente:
C6H12O6
2 CH3 CHOH COOH + 2 ATP
La elaboracin del queso se lleva a cabo en 3 etapas:
Adicin a la leche de renina, tambin llamada cuajo, una enzima que se encuentra en el estmago
de los rumiantes. En combinacin con el cido lctico producido por las bacterias lcticas de la
leche, la renina precipita (coagula) las protenas lcticas, formando un producto slido, la
cuajada, que se separa posteriormente del componente lquido, el suero lcteo.
Separacin del suero y la cuajada, mediante un proceso de filtracin, haciendo pasar el conjunto a
travs de telas limpias. A continuacin se aade sal a la cuajada y se prensa para expulsar el agua.
Maduracin del queso: Segn el tipo de queso, en esta etapa final intervienen otras bacterias y
mohos, responsables del sabor y el olor propios de cada variedad de queso. Los agujeros
caractersticos de algunos de ellos son el resultado del CO2, desprendido durante la fermentacin,
que queda atrapado en la masa del queso y forma burbujas.
c.- Procesos de inters ambiental: Como ya explicamos, algunos microorganismos son tiles en
la lucha frente a la contaminacin, un proceso denominado Biorremediacin. Actualmente se
utilizan microorganismos capaces de consumir diversas sustancias txicas que pueden utilizarse
para descontaminar reas de la superficie, del subsuelo o de las aguas subterrneas.
La ingeniera gentica est empezando a estudiar diversas bacterias procedentes de medios
naturales, en las que se ha detectado la existencia de genes para la biodegradacin de desechos
txicos, como pesticidas clorados, clorobencenos, naftaleno, tolueno, anilinas... Los genes
deseados se aslan de especies como Pseudomonas y Alcaligenes y posteriormente se clonan
mediante plsmidos. As se consigue aumentar su efectividad.
Adems de las aplicaciones ya estudiadas, se estn potenciando mediante ingeniera gentica la
capacidad natural de muchas plantas para concentrar metales pesados, a fin de utilizarlas para
recuperar suelos contaminados (p.e. en el caso del cauce del ro Guadalquivir despus del vertido
de la balsa minera de Aznalcllar). Actualmente se est procediendo a la seleccin de las formas
adecuadas y a su experimentacin.
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2.- BIOTECNOLOGA
A.- Concepto
B.- Microorganismos utilizados en biotecnologa
C.- Principales tcnicas empleadas en biotecnologa
a.- Introduccin
b.- Clonacin de genes: Tcnicas de obtencin de ADN recombinante
a.- Obtencin del ADN que contiene el gen
b.- Insercin del gen en un vector de clonacin
c.- Introduccin del vector de clonacin en la clula hospedadora
d.- Deteccin del gen clonado
c.- Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
a.- Procedimiento
b.- Aplicaciones
D.- Algunas aplicaciones de la Biotecnologa
a.- Farmacia y Sanidad
b.- Alimentacin
a.- Fabricacin del pan
b.- Fabricacin del vino y la cerveza
c.- Fabricacin del queso y leches fermentadas
c.- Procesos de inters ambiental