18/05/2016

Protenas: El camino secretorio y

modificaciones postraduccionales

Gentica Molecular - 2016

Universidad de Morn

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Modificaciones postraduccionales

Una modificacin postraduccional de una protena es un

cambio qumico ocurrido en sta despus de su sntesis. Las

modificaciones postraduccionales ocurren mediante cambios

qumicos de los aminocidos que constituyen las protenas y
pueden ser de muchos tipos.

Modificaciones postraduccionales
Funcin:
Regulacin de la actividad, estructura, estabilidad y vida media
de una protena
Interaccin con otras protenas
Localizacin celular
>200 tipos: gran variabilidad
presentes en el 80% de las protenas de eucariotas: alta
frecuencia
Cada modificacin ocurre en un aminocido determinado y a
veces hay otros aminocidos alrededor que determinan que exista
o no (-> secuencias consenso)
=> Se pueden predecir bioinformticamente los tipos de
modificaciones que una protena puede sufrir

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Las modificaciones postraduccionales aumentan significativamente la

complejidad del proteoma

Tipos de modificaciones postraduccionales

1. Formacin de enlaces covalentes:
- Puentes disulfuro entre Cys
- Unin de pequeas molculas
- Fosforilacin grupos fosfato
- O- y N-glicosilacin monosacridos
- Hidroxilacin grupos hidroxilo (-OH)
- Acilacin grupos acilo
- Metilacin grupos metilo (-CH3)
- Amidacin grupos amida

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2. Ruptura de enlaces covalentes

-

Clivaje de pptido seal

Proteolisis: escisin de un fragmento proteico (lleva normalmente a la

activacin de la protena). Puede ser autoprotelisis o por accin de una
enzima
Ejemplo: Procesamiento postraduccional de cisteina proteasas: La protena se
sintetiza como un pre-propeptido, que incluye una regin inhibidora (no hay
actividad enzimatica). La protena madura es activa porque se separa por
autoprotelisis de la regin inhibidora
propeptide
inhibitor

mature peptidase

Cisteina proteasa del hemoparasito Babesia ovis

Identificacin de las modificaciones postraduccionales

Secuencias consenso-> Prediccin bioinformtica
Herramientas bioinformticas para predecir modificaciones postraduccionales
Bases de datos & software: ExPASy the proteomic server, PFAM, SMART, ELM,
UNI-PROT, etc
Espectrometra de masas
Especialmente en combinacin con 2D SDS-PAGE, digestiones y HPLC
Incorporacin de grupos marcados radiactivamente
Anticuerpos especficos

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Ejemplo de modificacin postraduccional:

N-glicosilacin

- La modificacin postraduccional ms importante y ms compleja

- Adicin de unidades glucdicas: manosa, galactosa, fucosa, etc.
- Muy frecuente en protenas extracelulares de membrana plasmtica o secretadas
- Ocurre en el reticulo endoplsmico rugoso pero puede continuar en el Golgi
- Cada organismo tiene un patrn de N-glicosilacin particular, determinado por la
dotacin de enzimas glicosiltransferasas codificadas en su genoma

Importancia de la N-glicosilacin
Aumenta la solubilidad de la protena
Aumenta la vida media de las protenas secretadas=>proteccin contra proteasas
y otras enzimas proteolticas
Reconocimiento celular por protenas de membrana

Marcador especfico de tejidos

Desarrollo de tejidos y modificacin de seales extracelulares
Soporte estructural- Proteoglucanos de la matriz extracelular
Sobre Asn
Secuencia consenso : N-X-T/S/C; XPro =>prediccin bioinformtica
Ncleo comn para todas las N-glicosilaciones: NAcGlc2Man3
Reconocido por las lectinas y por las N-glicanasas (PNGaseF)

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Pasos de la N-glicosilacin en levaduras

Precursores tanto para N como para O-glicosilacin: nucletidos de

azcar (mono o di-P)

La existencia de los nucletidos de azcar fue descripta por primera vez por el
investigador argentino Luis Federico Leloir, premio Nobel de Qumica (1970).

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- Vesculas conteniendo protenas Nglicosiladas van a Golgi

- En las tres distintas partes del aparato de
Golgi (cis, medio y trans) hay diferentes
enzimas y ocurren distintas
transformaciones a los azucares ->
funcionan como tres organelas individuales
- Pueden removerse y agregarse azucares
aumentando la complejidad de los Nglicanos

Ejemplo de modificacin de Nglicano en el aparato de Golgi

de vertebrados

Si las reacciones no se producen, el

resultado sern azucares altos en manosas
Man8(GlcNAc)2 o Man5(GlcNAc)2

- El procesamiento de estos glicanos varia entre especies

- Por ej. la mayoria de los mamiferos (no los humanos y otros primates)
agregan una galactosa en lugar de un acido sialico, formando un extremo
Gal-Gal
- Humanos tienen anticuerpos contra el discarido Gal-Gal que es comun en
bacterias
- Dos consecuencias:
- Transplantes de organos desde mamiferos no primates (por ej. cerdo) a
humanos: provoca rechazo por reaccion de anticuerpos con el epitope
Gal-Gal
- Protenas recombinantes para tratamientos terapeuticos en humanos
producidas en mamferos no primates pueden ser rechazadas por la
misma razn

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Ejemplo de modificacin postraduccional:

O-glicosilacin
Estructura tpica de un O-glican: unido por N-acetil galactosamina al grupo
hidroxilo de una serina o treonina de la protena

Gal = galactosa
NANA = acido silico
GalNAc = N-acetil galactosamina

La GalNac se agrega a la proteina en el RE rugoso o en la cisterna cis del aparato de

Golgi. Luego se agregan otros azcares, uno por vez, en el Golgi trans. Intervienen
glicosiltransferasas especificas (tanto para el azcar que agregan como para el azcar al
que lo unen)

Azucares que determinan grupos sanguneos: presentes en lpidos y protenas de la

superficie de glbulos rojos y otras clulas. En el caso de protenas es una Oglicosilacin (estan unidos a serina o treonina). En su sntesis intervienen
glicosiltransferasas: personas con distintos grupos sanguineos tienen distintas
dotaciones de estas enzimas

Todos los humanos

tienen las enzimas para
sintetizar el antigeno O

Los de tipo A tienen una

glicosiltransferasa extra
que agrega una Nacetilgalactosamina

Los de tipo B tienen una

glicosiltransferasa extra que
agrega una galactosa

Los AB tienen ambas

enzimas y producen
ambos tipos de
antgenos

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Importancia de la presencia/ausencia de glicosiltransferasas especificas para

transfusiones de sangre: los individuos que no sintetizan por ej. antigeno A (tipo
sanguineo 0 o B) van a tener normalmente anticuerpos contra este en su sangre ->
rechazan sangre tipo A

Tipo sanguneo

Antgenos en los
glbulos rojos

Anticuerpos en
suero

Puede recibir
sangre tipo:

Anti-B

A and O

Anti-A

B and O

AB

A and B

None

All

None

Anti-A and anti-B

Ejemplo de modificacin postraduccional: Fosforilacin

La fosforilacin ocurre en residuos de serina, treonina o tirosina y es
catalizada por una protein quinasa, con gasto de ATP

Est asociada a la activacin de una funcin (por ej. enzimtica) y la reaccin

inversa (defosforilacin, a cargo de una fosfatasa) da lugar a desactivacin

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Ejemplo de modificacin postraduccional: Fosforilacin

La fosforilacin y desfosforilacin sucesiva de protein quinasas en una
clula da lugar a cascadas de sealizacin

Ejemplo de modificacin postraduccional: Fosforilacin

La protena finalmente activada luego de una cascada de fosforilacin puede ser
una enzima que pasa a ser activa y cataliza una reaccin enzimtica; o un factor
de transcripcin que al fosforilarse puede unirse al ADN y activar la expresin de
un gen

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Como sabe la clula si la protena es de secrecin o si debe ir por ej. a un

lisosoma: combinacin de modificaciones postraduccionales

Una enzima (GlcNAc fosfotransferasa) que reconoce motivos presentes en la enzima

lisosomal (signal sequences) agrega una GlcNAc-P a una o mas manosas del Nglicano en el Golgi. Luego otra enzima (fosfodiesterasa) cliva a la GlcNAc, queda
manosa fosforilada (Man-P).
Man-P es reconocida por un receptor (receptor Man-6-P) que dirige a la protena hacia
los lisosomas (la via de la Man-6-P: ver diapositiva siguiente).

Via de la Man-6-P

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https://www.youtube.com/watch?v=rTJoSSxG2sg

https://www.youtube.com/watch?v=u38LjCOvDZU

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