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Temperatura
Tiempo de exposicin
Calor Hmedo
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a
dos razones:
El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son
producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la
produccin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan
mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas
temperaturas.
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los
materiales hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada
durante la condensacin.
El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que
no formen emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura
de 121 C (una atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir
organismos formadores de esporas.
Presin
[atm]
Temperatura
[C]
Descarga completa del
aire
1/3
109
100
90
72
2/3
115
109
100
90
121
115
109
100
4/3
126
121
115
109
5/3
130
126
121
115
133
130
126
121
Ventajas
Desventajas
Calor Seco
El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos
oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los
microorganismos que estn en contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms
lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos
requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a
que las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que son ms difciles de
romper por el calor seco.
La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere
mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C,
requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras
que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser esterilizados a ms de 160C.
Ventajas
Desventajas
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.
Existen otras formas de eliminar microorganismos por calor seco. La incineracin se utiliza para destruir material
descartable contaminado. La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al rojo el
material de metal como ansas, lancetas, agujas de diseccin.
Radiaciones
Su accin depende de:
Tipo de radiacin
Tiempo de exposicin
Dosis
Ionizantes
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y
componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas
descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.
Ultravioletas
Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes
que inducen errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas.
Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antispticos
La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan.
Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentracin del agente p
efecto diferente en distintos microorganismos.
Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los mic
mueren al mismo tiempo.
pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 increm
negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el grad
la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efectividad.
Alcoholes
Iodo
Antispticos
Oxido de Etileno
Compuestos Fenlicos
Acidos y Alcalis
Antispticos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan
fosfolipdica.
No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto n
que los de cadena larga.
Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.
Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas
oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc.
Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcoh
irritante.
Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.
Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la disposicin de las protenas y
fosfolpidos, por lo que se liberan metabolitos desde la clula, se interfiere con el metabolismo energtico y
activo.
No son esporicidas ni tubercolicidas an en altas concentraciones. Sus principales ventajas se hallan en que
no tien, no son corrosivos de metales, estables, no txicos y baratos.
Catinicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor actividad a pH alcalino y los Gram + son ms suscep
Aninicos: Jabones y cidos grasos. Tienen mayor actividad a pH cido y son eficaces contra Gram +.
Anfteros: Actan como catinicos o aninicos segn el pH.
Organo Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro d
mercuriales orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate.
Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.
Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o desc
gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y fo
Colorantes
Violeta de Genciana
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleicos
microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.
El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo
bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas.
La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forma
hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que po
puede penetrar fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplamtica. En cambio, el cido hipoclor
penetra fcilmente en la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.
El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcal
oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de sto, es que deben u
soluciones diluidas en agua corriente (que tiene un pH ligeramente cido), con el objeto de obtener cido h
Generalmente, se utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo.
Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias ca
reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos.
Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e
actividad enzimtica (Adicin nucleoflica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desinfectantes y ester
Destruyen esporas.
El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descon
edificios, ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo (OH
que produce las despolimerizacin de este compuesto y la liberacin de formaldehdo.
El formaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.
Compuestos Fenlicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin
y fosfolpidos. Esto causa filtracin de compuestos celulares, inactivacin de enzimas y lisis.
El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el
queda luego de tratar las superficies.
Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fe
son muy efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos contra
Oxido de Etileno
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carbox
sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso
someter la muestra. Hay que tener en cuenta que los filtros que se utilizan generalmente en los laboratorios
ni micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice.
Existen tres tipos bsicos de filtros:
Filtros profundos o Filtros de profundidad: consisten de un material fibroso o granular prensado, pleg
pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por u
absorcin y de retencin mecnica en la matriz.
Membranas filtrantes: tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao
Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efectos electr
Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son pelculas muy delgadas de policarbonato que son p
tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atrav
verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del po
La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, al
pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para
y soluciones de antibiticos y vitaminas.
Controles de Esterilizacin
Controles de
Esterilidad
Controles fisico-qumicos
Controles biolgicos
Transferencia a medios de cultivo
Test de promocin del crecimiento
Test de bacteriostsis
Filtracin por membranas
Controles de Esterilizacin
Son controles que se realizan sobre el mtodo de esterilizacin. Monitorean o controlan si el proceso de est
funciona correctamente.
Controles Biolgicos
Utiliza indicadores biolgicos como controles del proceso de esterilizacin. Estos indicadores son preparac
estandarizadas de microorganismos relativamente resistentes al mtodo de esterilizacin que se emplea. Lo
indicadores se procesan en forma conjunta con el material a esterilizar y el nmero de microorganismos pr
el indicador es mayor que el que se encuentra en el material.
Una vez concluido el proceso de esterilizacin los indicadores son inoculados en medios de cultivo adecua
incubados durante un determinado perodo de tiempo. Si el proceso de esterilizacin fue correctamente em
funciona bien no debe observarse desarrollo del indicador incubado.
Controles fisicoqumicos
Termocuplas: son mtodos directos que registran la temperatura a la que se desarrolla la esterilizacin.
Sustancias de punto de fusin conocido: se utilizan en autoclaves generalmente, son sustancias con un pu
similar al de la temperatura de esterilizacin del proceso. Estas sustancias estn mezcladas con un colorante y
indican si se alcanz la temperatura ptima de esterilizacin y el tiempo que se mantuvo.
Controles de Esterilidad
Permite controlar en forma probabilstica si el material qued completamente esterilizado pues se testea un
representativo de todo el material.
Las muestras representativas se incuban en estos medios durante un perodo de 14 das, al cabo del cual no
observar ningn tipo de crecimiento.
Puede ocurrir que la muestra no se encuentre estril pero que no se produzca crecimiento durante la incuba
algn motivo inherente al medio o a la muestra, por ejemplo presencia de algn inhibidor, etc.
Test de Bacteriostasis
Es un control que se realiza para determinar si la muestra supuestamente estril no posee propiedades bacte
De esta forma se previenen falsos negativos pues no se produce crecimiento habiendo en la muestra microo
viables. Para este test se toman los medios de cultivo con microorganismos de ensayo y se siembran en las
testear. Se incuban durante 7 das. Si se produce crecimiento esto indica que el material no contena inhibid
Se filtran los medios y se procesa el filtro como en un control de esterilidad para determinar si hay microor
presentes.
Cuando una poblacin bacteriana es sometida a un proceso de esterilizacin que le provoca la prdida de la
viabilidad, se observa una disminucin progresiva en el nmero de microorganismos sobrevivientes en fun
tiempo de exposicin al agente esterilizante. La muerte microbiana sigue un comportamiento de tipo expon
por lo que se hace asinttico y nunca se llega a un nmero de microorganismos igual a cero.
N = N0 . e - Kt
En donde D (min) se denomina Tiempo de reduccin decimal, esto es el tiempo requerido para reducir la
poblacin microbiana un 90% o un orden de magnitud. El valor de D se deduce cuando t=D y por lo tanto
N0. Comparando las ecuaciones anteriores se llega a que:
D = ln 10 / K = 2.303 / K
Esto significa que D est inversamente relacionado con k. Entonces, menores valores de D significan una m
tasa de muerte o una muerte ms rpida.
Graficando el logartmo del nmero de microorganismos sobrevivientes en funcin del tiempo de exposici
determinado agente esterilizante se obtiene una recta. La pendiente est dada por -1/D y la ordenada al orig
log N0. Por lo explicado anteriormente, la pendiente de la recta est determinada por las condiciones de
esterilizacin y de la resistencia del microorganismo.
Cuando el log del nmero de sobrevivientes es menor a cero se habla de probabilidad de sobrevivenci
lo tanto cuando el valor de la probabilidad sea -1 significa que hay 0.1 microorganismos viables por unidad
correctamente expresado una unidad contaminada por cada 10 unidades idnticas procesadas.
A mayor nmero de microorganismos y/o resistencia de la poblacin se necesitar mayor tiempo de esteril
o lo que es lo mismo mayor tiempo para alcanzar la probabilidad de sobrevivencia.
Durante el proceso de esterilizacin por calor debe tenerse en cuenta que el tiempo de esterilizacin comie
cuando se ha alcanzado la temperatura ptima en el interior del aparato (autoclave o estufa) y que generalm
contenido de un autoclave puede requerir tiempos ms largos para alcanzar la temperatura de esterilizacin
BIBLIOGRAFA
http://www.microbiologia.com.ar/