PRCTICA 5

MEDIOS DE CULTIVOS

I.

Introduccin.

Los medios de cultivo contienen los nutrientes necesarios para cultivar microorganismos, tales
como bacterias, hongos y otros. Los microorganismos no pueden estudiarse individualmente
debido a su tamao tan pequeo, por lo que slo pueden ser estudiados en poblaciones. Para
ello es necesario cultivarlos en medios artificiales, los cuales pueden los cuales pueden ser
slidos, lquidos o semislidos. Los medios lquidos se pueden transformar en slidos al
adicionarles agar, gelatina o gel de slice. Al disminuir la cantidad del agente solidificante, se
obtiene el medio semislido.
Antes de preparar un medio de cultivo para el cultivo de cualquier microorganismo, es
necesario entender sus necesidades bsicas. Cualquier medio de cultivo debe contener los
siguientes factores: agua, carbono, energa, nitrgeno, minerales, pH y factores de crecimiento.
Los componentes de los medios son muy variados. La eleccin del medio se basa en el
propsito del estudio.
En la actualidad el trabajo requerido en la preparacin de medios se ha simplificado mediante
la utilizacin de medios deshidratados que se obtienen comercialmente en las variedades
deseadas, slo se requiere disolver una cantidad conocida en un volumen medido de agua,
repartir en los recipientes necesarios (tubos de ensayo, matraces, cajas petri) y esterilizar.

II.

Objetivo

Que el alumno sea capaz de preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes
para el desarrollo de los microorganismos in vitro adquiriendo practica en el manejo de los
instrumentos en el laboratorio de microbiologa.

III.

Materiales y equipo
III.1 Material
6 Tubos de ensaye de 16x150mm con rosca
2 Cajas Petri estriles.
3 Matraces erlen meyer 500 ml
2 Mecheros Fischer
Esptula
Gradilla
Algodn
3 Pipetas 10 ml

III.2 Equipo
Autoclave
Balanza analtica
Termoagitador magntico
III.3 Reactivos
Agar nutritivo
Caldo nutritivo
IV.

Mtodo

a) Preparacin de medio slido en caja Petri. (Placa)

1. En un matraz, disolver los componentes del medio agar nutritivo en agua destilada siguiendo
las instrucciones del fabricante o del profesor para 250 ml.
2. Calentar el preparado hasta la ebullicin agitando en el termoagitador, para asegurar una
completa disolucin del agar.
3. Se tapan los matraces con tapn de algodn y cubrir con papel sin cerrar hermticamente.
4. Esterilizar (121C) durante 15-20 minutos.
5. Una vez estril, dejar enfriar hasta que la temperatura del medio se soporte con el dorso de
la mano, verter en las cajas Petri en la zona de esterilidad (cerca del mechero) colocando una
cantidad del medio que apenas cubra la mitad del volumen de la caja.
6. Las cajas se dejan enfriar para que el medio solidifique.
b) Preparacin de medio solido en tubo (Slant)
1. Cada tubo llevar de 2 a 4 mL aproximadamente de medio previamente elaborado. (Agar
nutritivo)

2. Con agitacin continua para evitar la sedimentacin del agar, se colocan de 2 a 4 mL de

medio en cada uno de los tubos etiquetados. Es importante que cada vez que tome medio del
matraz agite la suspensin para evitar que el agar se distribuya de manera no homognea.
4. Se cierran los tubos de manera que no quede hermticamente cerrados para evitar que se
rompan por la presin del vapor.
5. Se esterilizan en la autoclave (121C) durante 15-20 minutos

o de acuerdo con las

instrucciones del profesor.

6. Una vez estriles y antes de que solidifiquen, se inclinan en un ngulo de 10
aproximadamente (puede ser con la ayuda de un cuaderno) y se dejan solidificar.
c) Preparacin de medios semislidos. (gelatina)
1. Para la preparacin de medios semislidos, se mezcla en una relacin de 2.5 gr/Lt de agar
nutritivo en agua destilada. Preparan en un matraz solo la cantidad necesaria.
2. Calentar el preparado hasta la ebullicin agitando en el termoagitador, para asegurar una
completa disolucin del agar.
3. Con agitacin continua para evitar la sedimentacin del agar, se colocan de 2 a 4 mL de
medio en cada uno de los tubos etiquetados. Es importante que cada vez que tome medio del
matraz agite la suspensin para evitar que el agar se distribuya de manera no homognea.
4. Se cierran los tubos de manera que no quede hermticamente cerrados para evitar que se
rompan por la presin del vapor.
5. Se esterilizan en la autoclave (121C) durante 15-20 minutos

o de acuerdo con las

instrucciones del profesor.

6. Colocarlos en la gradilla y dejar que se solidifiquen.

d) Preparacin de medios lquidos

1. Se pesa la cantidad necesaria de caldo nutritivo para preparar 50 mL de caldo nutritivo.
2. Se disuelve el medio en 50 mL de agua destilada.

3. Se colocan 3 mL en cada uno de los tubos con tapn de malaquita etiquetados como Caldo
nutritivo.
4. Se cierran los tubos de manera que no quede hermticamente cerrados para evitar que se
rompan por la presin del vapor.
5. Se esterilizan en autoclave de acuerdo con las instrucciones del profesor.

V.

Resultados

1. Realiza la secuencia operacional detallada de los equipos que se utilizaron (como un manual
de operacin). Incluir los diagramas de flujo.
2. Reportar los resultados y sus observaciones.
3. Evidencia de forma grfica de los resultados obtenidos de esta prctica.

VI.
1.

Cuestionario

Cules son los requerimientos mnimos con los que debe contar cualquier medio de

cultivo?
2. En qu momento se esteriliza un medio de cultivo y por qu?
3. Por qu es ms conveniente utilizar concentraciones menores de agar que utilizar gelatina
al preparar medios semislidos?
4. Cul es el punto crtico para preparar un medio de cultivo slido?
5. Adems de clasificarse segn su consistencia, los medios de cultivo se clasifican en otras
categoras. Cules son? Menciona algunos ejemplos.
6. De qu depende la eleccin del medio de cultivo?

VII.

Bibliografa

Barry, A. y S. Gibson. 2002. Control de calidad en microbiologa, en Dharan, M. Control de

Calidad en los Laboratorios Clnicos. Ed. Revert. Sevilla, Espaa

Daz, R., G. Gamazo e I. Lpez Goi.1995. Manual Prctico de Microbiologa. 1 edicin.

MASSON, S. A. Espaa
Ramrez-Gama, R. M., B. Luna Milln, O. Velsquez Madrazo, L. Vierna Garca, A. Meja
Chvez, G. Tsuzuki Reyes, L. Hernndez Gmez, I. Mggenburg, A. Camacho Cruz y M del C.
Urza Hernndez. 2006. Manual de Prcticas de Microbiologa General. 5 edicin. Facultad de
Qumica, UNAM. Mxico.