Вы находитесь на странице: 1из 11

See

discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.net/publication/272478651

DETERMINATION DE L'EFFICACITE
PREVENTIVE ET CURATIVE DU
PROTHIOCONAZOLE SUR DES SOUCHES DE
MYCOSPHAERELLA GRAMINICOLA
LEGEREMENT ET MOYENNEMENT
RESISTANTES AUX INHIBITEUR DE L'-14...
Conference Paper December 2009

READS

81

4 authors, including:
Jean Sanssen

Sameh Selim

SAS JS Consulting

Institut Polytechnique Lasalle Beauvais-Esi

24 PUBLICATIONS 87 CITATIONS

38 PUBLICATIONS 135 CITATIONS

SEE PROFILE

All in-text references underlined in blue are linked to publications on ResearchGate,


letting you access and read them immediately.

SEE PROFILE

Available from: Sameh Selim


Retrieved on: 19 June 2016

AFPP 9me CONFRENCE INTERNATIONALE SUR LES MALADIES DES PLANTES


TOURS 8 ET 9 DCEMBRE 2009

DETERMINATION DE LEFFICACITE PREVENTIVE ET CURATIVE DU


PROTHIOCONAZOLE SUR DES SOUCHES DE MYCOSPHAERELLA GRAMINICOLA
LEGEREMENT ET MOYENNEMENT RESISTANTES AUX INHIBITEUR DE L-14DEMETHYLATION DES STEROLS

J. SANSSENE, C. ROISIN-FICHTER, L. DJERROUD, S. SELIM*

Institut Polytechnique LaSalle Beauvais, 19 rue Pierre Waguet, BP 30313, 60026 Beauvais
Cedex, France
GIS PhyNoPi: Groupement dIntrt Scientifique Phytopathologie Nord-Picardie,
France
*Correspondance : Tl: +33-3 4406 3825. E-mail: sameh.selim@lasalle-beauvais.fr
RESUME
Pour lutter contre la septoriose, principale maladie du bl en France, la lutte fongicide avec
les inhibiteurs de la 14- dmthylase (IDM) est trs dveloppe depuis plus dune vingtaine
dannes. Mais des souches moins sensibles du parasite Mycosphaerella graminicola
apparaissent depuis quelques annes. Nous tudions en conditions contrles sur plante
entire leur effet sur lefficacit prventive et curative du prothioconazole. Pour cela, nous
comparons les niveaux de symptmes et nous quantifions le pathogne dans les feuilles de
bl par PCR quantitative en temps rel. Le niveau de rsistance des souches naffecte pas
lefficacit prventive, mais elle diminue fortement lefficacit curative. Celle-ci devient
ngligeable partir du 7me jour aprs inoculation pour les souches moins sensibles de type
TriR4 et TriR7.
MOTS-CLES: Efficacit fongicide, rsistance aux fongicides, Mycosphaerella graminicola,
prothioconazole, PCR en temps rel
ABSTRACT
Septoria tritici blotch is the most important disease for wheat in France. Fungicides of the 14-demethylase inhibitors (DMIs) have been used for more than twenty years to control this
disease. But less sensitive strains are more frequently observed. We study on plants in
control conditions the effects on preventive and curative efficacy of prothioconazole. We
compare for that the level of symptoms and we quantify the pathogen in wheat leaves by
real-time PCR. The resistance level doesnt affect the preventive efficacy, but strongly
reduce the curative efficacy, which becomes negligible since 7 days post-inoculation, with
the less sensitive strains of the groups TriR4 and TriR7.
KEY-WORD: Fungicide efficacy,
prothioconazole, real-time PCR

fungicide

resistance,

Mycosphaerella

graminicola,

INTRODUCTION
La septoriose cause par Mycosphaerella graminicola (Fuckel) Schroeter (anamorph
Septoria tritici Roberge in Demaz) est la principale maladie du bl en France, pour son
omniprsence et sa nuisibilit (Eyal, 1999). Les pertes occasionnes sont dans les cas
extrmes de lordre de 30 40 p.100 (Eyal et al., 1987).
Comme la plupart des varits de bl sont sensibles ou partiellement rsistantes la
septoriose, la lutte contre cette maladie repose essentiellement sur lutilisation de produits
fongicides depuis les annes 1970.
Les inhibiteurs de l-14-dmthylation des strols (DMIs), dont font partie les triazoles, sont
les fongicides les plus couramment utiliss depuis une vingtaine dannes (Palmer et
Skinner, 2002 ; Leroux et al., 2006). Entre la fin des annes 1990 et le dbut des annes
2000, la famille des strobilurines, inhibiteurs du site Qo du cytochrome b des mitochondries
(QoIs), a aussi t massivement utilise.
Mais tous les fongicides subissent en lespace de quelques annes des pertes defficacit,
en raison de laccroissement de la frquence des souches rsistantes dans la population
pathogne. Lapparition de la rsistance aux strobilurines est survenue ds leur introduction
sur le march, et les rend maintenant totalement inefficaces contre la septoriose dans les
principales zones de production de bl en Europe (McCarthey et al., 2006 ; Heaney et al.,
2000 ; Fraaije et al., 2003). La rsistance aux strobilurines, dite qualitative, est dtermine
par une mutation sur le gne du cytochrome b, qui est monognique et monoalllique X. Les
strobilurines restent toutefois actives sur les rouilles et quelques autres parasites, ce qui
justifie encore leur emploi, en association avec dautres molcules, et notamment avec les
DMIs (McCarthey et al., 2006). Pour les DMIs, employs depuis plus de vingt ans, les
rsistances progressent plus lentement sans remettre en cause pour le moment en
conditions naturelles lemploi de cette famille fongicide, qui reste efficace. Les rsistances,
de nature quantitative, sont dues diffrents mcanismes impliquant un accroissement de
lefflux des molcules, une diminution de la fixation du fongicide sur la protine cible, par
modification de la squence du gne CYP 51, ou une surexpression de ce gne (Fraaije et
al., 2007). Huit phnotypes se caractrisent par leur niveau de rsistance aux DMIs et sont
classs en trois catgories principales : TriS (sensible), TriLR (faiblement rsistant) et TriMR
(moyennement rsistant) (Leroux et al., 2006). Depuis 2005 en Europe, la frquence des
mutants moyennement rsistants est devenue dominante dans les principales zones de
production de bl (Cousin et Moronval, 2008). Lors des campagnes 2008 et 2009, une
nouvelle catgorie de souches fortement rsistantes (Tri HR) a t mise en vidence en
France (Leroux et Walker, 2009).
Dans ce contexte, le prothioconazole, fongicide DMI de la toute nouvelle famille des
triazolinthiones, est dvelopp par la firme Bayer CropScience contre les maladies des
crales. Au champ, son efficacit sur septoriose est proche de celle de lpoxiconazole
(Moreau, 2006). Or lefficacit mesure en conditions naturelles est la rsultante de
linteraction de trois composantes : (i) lefficacit curative sur les feuilles contamines avant
le traitement ; (ii) lefficacit prventive sur les feuilles qui ne sont pas encore
contamines au moment du traitement ; (iii) la persistance daction du produit li sa
disparition progressive des feuilles traites par mtabolisation et par effet de systmie
ascendante, qui concentre la molcule la priphrie des feuilles.
Pour valuer sparment les efficacits prventives et curatives de fongicides IDM sur des
souches ayant des niveaux diffrents de sensibilit aux triazoles, nous avons conduit une
exprimentation sur plantes entires en conditions contrles. En complment dune
notation visuelle de symptmes effectue 21 jours aprs inoculation, nous effectuons le suivi
de la colonisation du parasite dans les feuilles de bl par PCR quantitative en temps rel, au
cours des trois semaines qui suivent linoculation.

MATERIEL ET METHODES
Cultures en pots
Les exprimentations sont conduites sur la varit de bl Scorpion 25 (Obtenteur Unisigma),
trs sensible M. graminicola, cultive en pot de 750 mL raison de 2 graines par pot. Les
graines sont pralablement tries et dsinfectes dans de lhypochlorite de sodium 1 p.100
pendant 10 minutes, puis rinces trois fois leau strile. Les pots contiennent un mlange
terreux (1/3 de terre limono-sablo-argileuse, 1/3 de terreau et 1/3 de vermiculite moyenne)
pralablement strilis pendant 20 minutes 121C. La premire phase de la culture est
effectue en serre entre 15 et 20C. Au stade 13 (chelle BBCH (Witzenberger et al., 1989 ;
Lancashire et al., 1991), une seule des deux plantules est conserve et les pots sont alors
placs dans une chambre climatique 15C avec une photopriode de 16h et un
rayonnement lumineux de 150 mol de photons.m2.s-1. Trois arrosages par semaine sont
pratiqus en remplissant les coupelles situes sous les pots avec de l'eau osmose, enrichie
une fois sur trois avec 25 p.100 de Murashige et Skoog (SIGMA Ref. M5519).
Inoculation des plants de bl
Trois souches de M. graminicola sont compares dans les exprimentations : ST38, TO249
et TO252. Elles ont chacune t isoles en France en 2005 de la varit de bl Orvantis
partir dun cirrhe sporifre. Elles ont t caractrises selon leur niveau de rsistance aux
fongicides. Les trois souches sont rsistantes aux strobilurines et diffrent par leur niveau de
rsistance aux triazoles. Leur phnotype de rsistance a t tabli par Pierre Leroux (INRA,
Versailles, France). ST38, TO249 et TO252 sont respectivement Tri R3, Tri R4 et Tri R7.
Ces souches, conservs -80C, ont t revitalises par culture sur un milieu Potato Dextro
Agar (SIGMA Ref. P2182) 18C avec une photopriode de 12h. Au bout de 10 jours, nous
ensemenons des erlenmeyers de 250 mL contenant 100 mL de milieu liquide Yeast Extract
Sucrose (SIGMA Ref. S7903 et Y0500) (Chungu, 2001), raison dune se de spores
levures par erlenmeyer. Les cultures sont incubes 18C dans un incubateur INNOVA
4230 sous agitation permanente (150 tours.min-1) et lumire permanente (100 mol de
photons.m2.s-1). Les milieux sont dcants 5C durant la nuit prcdant le jour de
linoculation. Le culot de spores levuriformes obtenu est dilu dans de leau strile afin de
parvenir une suspension de 107 spores/mL. Les plantes sont inocules au stade 39 sur les
feuilles F2 une concentration de 105 spores.mL-1.cm-2 la date dite J , l'aide d'un
arographe (0,5 bars). Les plantes en pot sont places dans des sachets zipps pendant 6
jours afin de conserver une hygromtrie leve (proche de 100 p.100).
Traitements fongicides
Les traitements fongicides sont raliss avec du prothioconazole en comparant 4 doses
diffrentes (25, 50, 75 et 100 p.100) et 5 dates successives : un jour avant linoculation (J-1)
et 3, 7, 10 et 14 jours aprs linoculation (soit J+3, J+7, J+10 et J+14). Les applications sont
ralises sur feuilles F2 l'aide d'un arographe (2 bars). Au cours de chaque
exprimentation, nous disposons de trois plantes de tmoin sain (ni inocules ni traites) et
six plantes de tmoin malade pour chaque souche (inocules et non protges).
Notation et analyse PCR
La colonisation fongique est suivie pendant 1 mois, sur 3 plantes tous les 2 jours pour
chaque isolat. Lanalyse PCR est pratique sur un fragment de feuille de 12 cm inocul de
faon homogne, obtenu aprs avoir limin les deux extrmits. Ce fragment a t
lyophilis pendant 48 heures et conserv -80C jusqu lanalyse par PCR quantitative.
La notation de maladie, par estimation du pourcentage de surface ncrose, est ralise sur
un fragment identique de feuille 21 jours aprs inoculation et entre le 21me et le 30me jour
pour ltude cintique en absence de fongicide.
PCR en temps rel
Aprs lyophilisation, chaque feuille prleve est broye l'aide dun broyeur billes
(TISSUELYSER QIAGEN) en plaques de 2 x 24 puits une frquence de 30 Hz pendant
une minute. Une fois les chantillons broys, 9 mg de poudre sont prlevs pour lextraction
de lADN, partir dun kit DNeasy 96 Plant Kit (QIAGEN). La concentration dADN total
3

extrait est value par mesure dabsorbance 260 nm laide dun spectrophotomtre
plaque (VARIAN 50 MRP).
La technologie de la PCR quantitative en temps rel par sonde Taqman ciblant le gne de la
-tubuline de M. graminicola est reprise de (Bearchell et al. 2005). Lintrt de ce gne est
sa variabilit entre les espces qui lui offre une grande spcificit. Par ailleurs, ce gne nest
pas rpt dans les cellules. Ainsi, le nombre de copies du gne de la -tubuline est
quivalent au nombre de cellules du parasite (Fraaije et al., 1999). Pour dtecter M.
graminicola, nous employons 0,2 l de sonde fluorescente Taqman MGB 6-FAM (5TTACGCCAAGACATTC-3) (Applied Biosystems, Courtaboeuf, France) et 0,3 l damorces
sens 5-GCCTTCCTACCCCACCAT-3 et antisens 5-CCTGAATCGCGCATCGTTA-3 pour
obtenir un fragment de 63 pb. Le volume ractionnel de la PCR tait de 25L contenant 100
ng dADN extrait des feuilles de bl. Lanalyse par PCR en temps rel est ralise en plaque
de 96 puits avec lappareil ABI Prism 7300 dApplied Biosystems. Le programme de la PCR
comprend 10 min 95C suivi de 40 cycles avec 15 secondes 95C et d1 min 60C. La
quantit dADN obtenue est calcule laide dune gamme talon et exprime pour 100 ng
dADN total (vgtal et fongique) dans lchantillon, ce qui correspond un mme nombre
de cellules de M. graminicola.
Une courbe talon est calibre partir dune srie de dilutions (102 1010) de clones du
gne de -tubuline, linaris dans le plasmide pGEM T easy Vectors (Promega).
Analyse statistique
Trois rptitions biologiques sont ralises successivement. Le pot reprsente lunit
exprimentale. Les traitements statistiques sont raliss avec le logiciel XLSTAT, version
2009.2.03, par ANOVA ou tests non paramtriques, au seuil =5 p.100.

RESULTATS
Evolution de la maladie
Lintensit de septoriose a t note entre le 23me et le 30me jour (Fig. 1). La souche TO249
est le plus agressive et ncrose totalement les feuilles ds le 26me jour. Lintensit de
maladie progresse jusquau 30me jour avec les deux autres souches. La souche ST38 est la
moins agressive des trois.

Fig. 1 : Evolution de lindice de maladie correspondant au pourcentage de surface malade de


feuille de la varit sensible Scorpion 25 (Unisigma, Froissy,) pour 3 souches de M.
graminicola (- -- -) ST38, () TO249 et () TO252. Les cultures sont conduites

15C avec une photopriode de 16 heures. Les barres reprsentent lerreur standard pour 3
rptitions. ( p souche x date < 0.0001).
Evolution de la colonisation de M. graminicola et de la septoriose sur feuilles
inocules
La colonisation fongique des feuilles est observe pour les trois isolats (ST38, TO249 et
TO252) pendant le mois qui suit linoculation (Fig. 2). Elle rpond toujours une fonction
logistique en fonction du temps. La biomasse fongique exprime en log du nombre de copies
dADN pour 100 ng dADN total est nettement plus leve le jour de linoculation pour ST38
compare TO249 et TO252 avec des valeurs respectives de 2.28 contre 0.40 et 0.35. Le
test de Kolmogorov-Smirnov confirme une diffrence de distribution trs hautement
significative entre ST38 et les deux autres souches. Ceci matrialise un meilleur taux de
russite de la contamination pour ST38, puisque la quantit dinoculum tait denviron 106
spores par feuille pour les trois isolats.
La biomasse fongique de chacun reste relativement stable pendant les deux premires
semaines, puis saccrot partir du 14me jour. La croissance est maximale au 26me jour pour
TO249 et TO252, et dcrot ensuite. Pour ST38, la croissance se poursuit jusquau 30me
jour, tout en subissant un fort ralentissement entre le 28me et le 30me jour.

Fig. 2 : Evolution de la quantit dADN fongique mesure par qPCR pour 3 souches de M.
graminicola (- -- -) ST38, () TO249 et () TO252 dans des feuilles de bl de la
varit sensible Scorpion 25 (Unisigma, Froissy) cultive en pots. La quantit dADN est
exprime selon le logarithme dcimal du nombre de copies dADN dans 100 ng dADN total.
Les barres reprsentent les erreurs standards pour 3 rptitions. (Ppds = 0.707).
Evolution de la maladie et de la colonisation fongique sous leffet du prothioconazole
Nous avons compar quatre doses demploi (25, 50, 75 et 100 p. 100) sur les trois souches
de M. graminicola : ST38, TO249 et TO252.
Comme leffet dose nest pas significatif, et afin daugmenter la robustesse de notre
exprimentation, les quatre doses ont t considres par la suite comme tant des
rptitions de mesure. Lefficacit fongicide est calcule pour chaque isolat par comparaison
au tmoin non protg.

Evolution de la maladie
Les indices de maladie correspondent au pourcentage de surface ncrose et ont t
raliss au 21me jour aprs inoculation. Lindice de maladie des tmoins est de 76,7% avec
la souche ST38 et de 85% avec les deux isolats TO249 et TO252. Cette diffrence nest pas
significative au seuil alpha de 5% (Fig. 3a). En situation dapplication prventive J-1
(application la veille de linoculation), lefficacit fongicide est comprise entre 87 et 95% sans
diffrence significative entre les souches (Fig. 3b). Avec un traitement curatif (application
post-inoculation), lefficacit fongicide est dautant plus faible que le traitement est tardif. Elle
reste leve J+3, au mme niveau qu J-1. Entre J+7 et J+14, lefficacit est globalement
plus leve avec la souche ST38 (toujours au dessus de 50%), tandis quavec les souches
TO249 et TO252, lefficacit dcroit graduellement et ne dpasse pas 20% pour une
application J+14.

(a)

(b)
Fig. 3 : (a) Indice de maladie correspondant au pourcentage de surface malade de feuille
de la varit sensible Scorpion 25 (Unisigma, Froissy) 21 jours aprs linoculation pour 3
souches M. graminicola (ST38, TO249 et TO252) en fonction de la date dapplication du
prothioconazole depuis linoculation. (p_ date = 0,0013; (b) Efficacit fongicide du
prothioconazole calcule en fonction de lindice de maladie du tmoin non protg. (ANOVA
et comparaison par test Tukey).

Effet des fongicides sur la colonisation fongique


Pour les applications fongicides J-1, J+3 et J+7, la colonisation fongique a t suivie par
analyse de PCR quantitative en temps rel, chacune des dates de prlvement postinoculation (J+3, J+7, J+10 et J+14).
Les valeurs ont t intgres dans un calcul daire sous la courbe de progession de la
colonisation (AUDPC) entre J+7 et J+21 (Fig. 4).
LAUDPC est plus leve pour ST38. Elle varie de 50 65, contre des valeurs de 20 45
pour TO249 et de 30 60 pour TO252.
Pour ST38, aucune diffrence significative nest observe entre les dates dapplications.
Pour TO249 et TO252, les AUDPC J+3 sont significativement infrieures au tmoin non
protg. Ces rsultats confirment une bonne efficacit fongicide pour une application J+3.

Fig. 4 : Aire sous la courbe de progression de la maladie (AUDPC) calcule sur le log10 de la
quantit dADN de M. graminicola pour 100 ng dADN total quantifi par PCR en temps rel,
entre le 7me et le 21me jour aprs inoculation pour 3 souches (ST38, TO249 or TO252),
selon la date dapplication du prothioconazole depuis linoculation. (Test Kruskal & Wallis, et
comparaison par procdure Dun).
DISCUSSION
La perte de sensibilit de M. graminicola aux triazoles a t continue en Europe depuis 2003
(Fraaije et al., 2007), et se trouve associe des mutations du gne cible CYP 51 (Leroux et
al., 2007; Fraaije et al., 2007). Daprs Brunner et ses collaborateurs (2008), ces mutations
sont rcentes et originaires du Danemark ou dUK, et se sont ensuite disperses par voie
arienne sur le continent europen.
Nous avons compar trois souches ST38, TO249 et TO 252 qui ont t dcrites par Pierre
Leroux (INRA, Versailles) pour appartenir respectivement aux phnotypes Tri R3, Tri R4 et
Tri R7 (Leroux et al., 2007).
Nous cherchons valuer la perte defficacit prventive ou curative des fongicides IDM
confronts ces souches. Cette approche ncessitait un travail sur plante entire, que nous
avons conduit en conditions contrles pour matriser le type de souche et les dates de
contamination. La maladie a t parfaitement reproduite aprs inoculation avec un
arographe sur lavant dernire feuille (F2) du bl.
La technique de PCR quantitative en temps rel a t dcrite par plusieurs auteurs sur M.
graminicola (Rohel et al., 2002 ; Guo et al., 2007 ; Guo et al., 2005 ; Fraaije et al., 2007)
comme une technique prcise et fiable pour quantifier le parasite pendant la phase
7

dincubation. En absence de protection fongicide, nos rsultats sont conformes ceux de


Fraaije et ses collaborateurs (1999), avec une forte augmentation de la quantit dADN
partir du 14me jour. Nos rsultats montrent aussi que la relation entre le niveau de symptme
(Fig. 1) et la quantit dADN (Fig. 2) dpend de la souche utilise : La souche ST38 prsente
la plus forte quantit dADN et les plus faibles symptmes. Le niveau de ncrose tant reli
la production de xylanase, de beta-xyloxidase et de polygalacturonase (Siah et al., 2007), il
est possible que cet isolat produise moins denzymes du pouvoir pathogne que les deux
autres.
Nous notons aussi quen phase terminale de la maladie, entre le 26me et le 30me jour, la
quantit dADN rgresse alors que la surface de ncrose augmente pour les deux souches
TO249 et TO252. A ces dates, le niveau de symptme est dj suprieur 60%. Il est donc
probable que lADN de M. graminicola se dgrade dans les zones trs ncroses des
feuilles. Le manque de relation entre la quantit dADN du pathogne et le niveau de
symptme sur des feuilles trs ncroses a dj t observ (Rohel et al., 2002; Guo et al.,
2007) . Ce phnomne conduit conseiller lusage de la technique de PCR en temps rel
pour suivre lvolution du parasite pendant la phase dincubation et au cours des tout
premiers stades de la maladie.
Dans les conditions de notre exprience, nous navons pas observ de diffrence
significative defficacit entre les doses fongicides entre 25 et 100% de la dose pleine, ce qui
nous a conduits considrer les diffrentes doses comme des rptitions de mesure.
Notons que notre dispositif ne visait pas valuer la persistance des fongicides, qui est
classiquement trs influence par la dose, et qui interagit au champ avec lefficacit
intrinsque pour expliquer le niveau de protection.
Lefficacit fongicide calcule sur les niveaux de symptmes (Fig. 3a) est trs bonne sur
toutes les souches avec une application prventive, ainsi quavec une application 3 jours
aprs inoculation. Par contre, le niveau de rsistance des isolats influe fortement sur
lefficacit curative des fongicides IDM, pour les applications tardives entre 7 et 14 jours
aprs inoculation. Lefficacit est trs faible et dcroissante dans le temps pour les deux
souches TO249 et TO252 (respectivement Tri R4 et Tri R7), alors quelle reste dun bon
niveau de 60 70% pour ST38 (Tri R3).
La perte defficacit curative partir du 7me jour aprs inoculation peut sexpliquer par la
progression du champignon dans la plante, tudie par Kema et ses collaborateurs (1996).
Aprs une pntration des tubes germinatifs par les stomates au bout de 24h, les hyphes
colonisent le msophylle de faon intercellulaire jusquau 7me jour. A partir du 8me jour, le
champignon pntre lintrieur des cellules, phnomne considrablement accru partir
du 10me jour. Cest alors que les tout premiers symptmes apparaissent. Au travers de cette
description de la colonisation du champignon, il semble logique que le traitement curatif
J+3 soit significativement plus efficace que les traitements curatifs J+7 ou J+14. En effet,
la colonisation du msophylle par le parasite J+3 reste intercellulaire et sa croissance na
pas encore augment considrablement. La chute des efficacits entre J+7 et J+14 peut
sexpliquer par une colonisation abondante devenue intracellulaire.
Notre suivi de la biomasse fongique par PCR quantitative en temps rel (Fig. 4) confirme les
rsultats defficacit fongicide J+3. Mais cette technologie ne distingue pas lADN de
cellules vivantes de celui des cellules mortes, conscutivement laction dun fongicide par
exemple. LADN est en effet une molcule stable, qui se dgrade peu pendant le mois qua
dur notre exprience. Cela a rendu difficile linterprtation des rsultats de la souche ST38,
dont le taux de russite de linoculum a t particulirement lev. Le mme problme nous
empche de confirmer la bonne efficacit prventive J-1 avec les souches TO249 et
TO252. Le remplacement de la PCR en temps rel par la technique de RT-PCR quantitative
en temps rel reprsente une solution ce problme, car elle vise un ARNm qui se dgrade
en quelques minutes (Guo et al., 2005). Ceci tant, en conditions naturelles o les quantits
dinoculum sont plus faibles, la technique de PCR quantitative en temps rel est
exprimenter pour juger de lefficacit fongicide en valuant le niveau de contamination des
feuilles pendant la priode dincubation de la septoriose.
8

CONCLUSION
Le niveau de rsistance des souches naffecte pas lefficacit prventive, mais elle diminue
fortement lefficacit curative. Celle-ci devient ngligeable partir du 7me jour aprs
inoculation pour les souches moins sensibles de type TriR4 (lgrement rsistantes) et TriR7
(moyennement rsistantes).

REMERCIEMENTS
Nous remercions Bayer CropScience, Lyon, France pour lappui cette recherche et Pierre
Leroux pour lidentification des phnotypes rsistance aux IDMs des trois souches de M.
graminicola utilises.
BIBLIOGRAPHIE
Bearchell, S., Fraaije, B., Shaw, M., Flitt, D. (2005). Wheat archive links long-term fungal
pathogen population dynamics to air pollution. PNAS, 102: 5438-5442.
Brunner, P., Stefanato, F., McDonald, B. (2008). Evolution of the cyp51 gene in
mycosphaerella graminicola: evidence for intragenic recombination and selective
replacement. Molecular Plant Pathology, 9: 305-316 .
Chungu, C. (2001). Septoria tritici bloth development as affected by temperature duration of
leaf wetness, inoculum concentration, and host. Plant Disease , 85: 430-435.
Cousin, A., Moronval, M. (2008). Septoriose et triazoles du laboratoire au champ. Phytoma La dfense des vgtaux, 611: 33-35.
Eyal, Z. (1999). The septoria tritici and stagnospora nodorum blotch diseases of wheat.
European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology, 105: 629641.
Eyal, Z. , Scharen, A. , Prescott, J. , Van Ginkel, M. (1987). The septoria diseases of wheat :
concepts and methods of disease management. . CIMMYT, Mexico City, DF, Mexico.
Fraaije, B., Cools, H., Kim, S., Motterram, J., Clark, W., Lucas, J. (2007). A novel substitution
i381v in the sterol 14-demethylase (cyp51) of mycosphaerella graminicola is differentially
selected by azole fungicides. Mol Plant Pathol , 8: 245-254.
Fraaije, B., Lovell, D., Rohel, E., Hollomon, D. (1999). Rapid detection and diagnosis of
septoria tritici epidemics in wheat using a polymerase chain reaction/picogreen.assay. J
Applied Microbio , 86: 701-708.
Fraaije, B. , Lucas, J. , Clark, W. , Burnett, F. (2003). Qoi resistance development in
populations of cereal pathogens in the uk.
Guo, J., Schnieder, F., Beyer, M., Vereet, J. (2005). Rapid detectionof mycosphaerella
graminicola in wheat using reverse transcription-pcr assay. Journal of Phytopathology, 153:
674-679.
Guo, J., Schnieder, F., Vereet, J. (2007). A real time pcr assay for quantitative and accurate
assessment of fungicide effects on mycosphaerella graminicola leaf bloth.
Phytopathologische Zeitschrift. Journal of phytopathology, 155: 482-487.
Heaney, S. , Hall, A. , Davies, S. , Olaya, G. (2000). Resistance to fungicides in the qoi-star
cross-resistance group : current perspectives.
Kema, G., Yu, D., Rijkenberg, F., Shaw, M., Baayen, R. (1996). Histology of the
pathogenesis of mycosphaerella graminicola in wheat. Bioch and cell bio, 86: 777-786.
Lancashire, P. , Beilholder, D. , Langeluddercke, P. , Strauss, R. , Van Den Boom, T. ,
Weber, E. , Witzen-Berger, A. (1991). An uniform decimal code for growth stages of crops
and weeks. Ann Appl Biol , 119: 561-601.

Leroux, P. , Albertini, C. , Gautier, A. , Gredt, M. , Walker, A. (2007). Mutations in the cyp51


gene correlated with changes in sensitivity to sterol 14-demethylation inhibitors in field
isolates of mycosphaerella graminicola. Pest management science, 63: 688-698.

Leroux, P. , Walker, A.
(2009). La septoriose du bl continue d'voluer.
Communiqu INRA - UMR Bioger - CPP, 2 juin 2009 : 1.
Leroux, P. , Walker, A. , Albertini, C. , Gredt, M. (2006). Resistance to fungicides in french
populations of septoria tritici, the causal agent of wheat leaf bloth. Aspect of Applied Biology ,
78: 153-162.
McCarthey, H., Mercer, P., Cooke, L., Fraaije, B. (2006). Effects of a strobilurin-based spray
programme on disease control, green leaf area, yield and development of fungicideresistance in mycosphaerella graminicola in northern ireland. Crop Protection, 26: 12721280.
Moreau, J. (2006). Le prothioconazole, un nouveau fongicide contre les maladies en
crales. livre blanc "crales". F.U.S.A. et CRA-W Gembloux (Ed.).
Palmer, C., Skinner, W.
(2002). Mycosphaerella graminicola: latent infection, crop
devastation and genomics. Mol Plant Pathol , 3: 63-70.
Rohel, E., Laurent, P., Fraaije, B., Cavelier, N., Hollomon, D. (2002). Quantitative pcr
monitoring of the effect of azoxysstrobin treatments on mycosphaerella graminicola
epidemics in the field. Pest Manag Sci , 58: 248-254.
Siah, A., Deweer, C., Reignault, P., Halama, P. (2007). Two mycosphaerella graminicola
french isolates differ in symptoms, in planta sporulation and cell wall degrading enzymes in
vitro production. Commun Agric Appl Biol Sci , 72: 867-874.
Witzenberger, A., Hack, H., Van Den Boom, T. (1989). Eriauterungen zum bbch-dezimalcode fur die entwicklungsstadien des getreides-mit abbildungen. Gesunde Pflanzen, 41: 384388.

10

Вам также может понравиться