Universidad Tecnolgica

de Honduras
Grupo: Christopher Andino Rodrguez -11351097
Victoria Hasbun

-11511024

Vianka Cedillo

-11456253

Docente: Dra. Lelany Pineda

Clase: Microbiologa e Inmunologa

Reporte: Clulas Del Sistema Inmune Reacciones Antgeno

Anticuerpo, Prctica #1

Fecha De Entrega: 02/05/16

Tegucigalpa, Francisco Morazn, Honduras M.D.C

Introduccin
En esta primera prctica de laboratorio, realizaremos dos pruebas que nos
va ayudar entender como el Sistema Inmune reacciona ante un antgenoanticuerpo. Gracias a esta prctica podremos interpretar bien el papel de
una respuesta inmune a cualquier enfermedad infecciosa, Enumerar los
factores que pueden afectar la reaccin antgeno anticuerpo, al igual
podremos hablar brevemente el fundadamente, la aplicacin y interpretacin
de la tcnica serolgica RPR, por ultimo podremos ver la reaccin de un
antgeno-anticuerpo microscpicamente.

Objetivos
Explicar el papel de la
enfermedades infecciosas.
Citar los factores
anticuerpo.

que

respuesta

afectan

la

inmune

reaccin

Discutir brevemente el fundamento, la

interpretacin de la tcnica serolgica RPR.
Observar
la
microscpicamente.

reaccin

antgeno

en

las

antgeno

aplicacin

anticuerpo

Marco Terico
Clulas del Sistema Inmunitario Tincin de
Wright:
El sistema Inmunolgico tiene 2 principales funciones:
1) Reconocer sustancias extraas del cuerpo
2) Reaccionar contra ellas. Estas sustancias pueden ser microorganismos que causan enfermedades infecciosas, rganos o
tejidos trasplantados de otro individuo, o hasta tumores en
nuestro cuerpo. Una de las funciones ms importantes del
Sistema Inmunolgico es la proteccin contra enfermedades
infecciosas.
Cualquiera que sea la infeccin, ya sea causada por una bacteria,
virus u hongo, si es relativamente seria, si es en la piel, la
garganta, en los pulmones o en el cerebro, el Sistema
Inmunolgico es el responsable de defender a esta persona
contra el microrganismo invasor; imitar el rea afectada y por
ltimo brindar la recuperacin.
El Sistema Inmunolgico normal brinda la habilidad de matar al
microorganismo invasor. La infeccin se puede distribuir y si no
es tratado puede morir. Por lo tanto pacientes con un Sistema
Inmunolgico defectuoso comnmente son susceptibles a
infecciones y esto se convierte en su mayor problema.

Componentes del Sistema Inmunolgico:

El Sistema Inmunolgico est compuesto de distintos tipos de
protenas, clulas tejidos y rganos. Cada componente tiene una
tarea especial enfocada a reconocer el material extrao y/o
reaccionar en contra de los materiales extraos.

Las clulas que componen el sistema inmune se originan de

clulas primordiales pluripotenciales de la mdula sea. Estas
clulas maduran en dos linajes diferentes. El linfoide y el
mieloide. Este tipo de clulas pueden ser estudiadas fcilmente a
partir de una muestra de sangre de un individuo.
Con el fin de estudiar satisfactoriamente las clulas inmunitarias
realizamos frotis sanguneos, los cuales necesitan ser coloreados.
En la mayora de los laboratorios los colorantes ms empleados
para la tincin hematolgica se basan en el de Romanowsky
constituido fundamentalmente con la mezcla de eosina y azul de
metileno (Acido- Base). Adems, se han incorporado el empleo de
derivados por oxidacin del azul de metileno que se conoce con el
nombre de los azures. Son los azures los responsables de la
coloracin prpura o roja de ciertas estructuras.
Tanto la eosina como el azul del metileno son muy sensibles a las
variaciones de pH de las diferentes estructuras celulares, de
forma que las que tienen carcter bsico fijan la eosina mientras
que las que poseen propiedades cidas fijan principalmente el
azul de metileno.
Esto explica que las estructuras basfilas se tian de color azul
mientras que los competente acidfilas adquieren un color
rosado. La diferente afinidad de ciertas granulaciones
citoplasmticas por dichos colorantes permite clasificar a los
leucocitos polimorfonucleares en 3 grupos:
- Granulocitos eosinfilos, en los que la granulacin especfica
contiene sustancias de carcter bsicos que fijan los
colorantes cidos que se tien de color azul oscuro.
- Granulocitos basfilos, en los que la granulacin especifica
posee sustancias de carcter neutro por lo que fijan ambos
colorantes simultneamente, de ah que se tien de color
pardo.
- Granulocitos Neutrfilos, en los que la granulacin especifica
posee compuestos de carcter neutro por lo que fijan ambos

colorantes simultneamente, de ah que se tien de color

pardo.
Dentro del grupo de colorante tipo Romanowsky los ms
utilizados son el de Wright, Giemsa y May-Grnwald-Giemsa,
entre otras.
Tincin de Wright:
Esta coloracin es conocida como policromtica debido que
produce varios colores. Es una solucin de alcohol metlico de
un colorante cido y otro bsico. El alcohol sirve como un
fijador del frotis sanguneo al portaobjetos. El amortiguador,
que consiste en una solucin tamponada, mantiene el pH del
colorante y favorece la mayor absorcin por los diferentes
celulares.

Reacciones Antgeno-Anticuerpo
Las reacciones antgeno-anticuerpo se estudian ms fcilmente
in vitro utilizando preparaciones de antgeno y antisueros.
El estudio de las reacciones antgeno-anticuerpo in vitro se
denomina serologa y es de especial importancia en la
microbiologa diagnostica.
En las reacciones antgeno-anticuerpo se distinguen 2 fases: la
primera consiste en la unin del antgeno con el anticuerpo y la
segunda en las manifestaciones que resultan de dicha unin,
La primera fase se realiza por la combinacin de reas
pequeas tanto de antgeno como del anticuerpo,
denominadas respectivamente determinante antignico y sitio
activo, que al unirse forman un complejo antgeno-anticuerpo.
La reaccin es reversible, siguiendo, por consiguiente, la ley de
accin de masas y existen factores externos que pueden
modificar dicha unin, como son: el pH, la temperatura y la
fuerza inica.

Dependiendo de la naturaleza del antgeno y del anticuerpo y

de las condiciones de la reaccin se pueden observar
diferentes reacciones serolgicas, por ejemplo:

Neutralizacin:
Mediante anticuerpos especficos
toxinas, virus o enzimas.

se

pueden

neutralizar

Un anticuerpo est compuesto por 2 cadenas pesadas y 2

ligeras. La nica regin variable permite a un anticuerpo
reconocer a un antgeno que le corresponder, y que sea su
complemento.

Aglutinacin: Se da cuando un antgeno particulado reacciona

con su anticuerpo especfico.
Se observa la formacin de grumos o agregados de estas
partculas, esto se conoce como aglutinacin. En estas
reacciones el determinante antignico est sobre la superficie
de una partcula o de una clula.
Estas reacciones son ms sensibles que las de precipitacin
para detectar pequeas cantidades de anticuerpos, debido a
que relativamente pocas molculas de anticuerpo pueden unir
efectivamente un gran nmero de partculas de antgeno en
grumos gruesos macroscpicamente visibles. Es por esto que
cuando queremos aumentar la sensibilidad de una reaccin de
un antgeno soluble con su anticuerpo especifico, se transforma
en antgeno soluble en particulado absorbindolo o unindolo
qumicamente a estructuras particuladas tales como esferas de
ltex o arcilla coloidal y esta manera pueden ser detectados los
anticuerpos, estos ensayos de aglutinacin.
Hoy en da existen pruebas diagnsticas como el RPR, que sirve
para diagnosticar sfilis, examinar personas que tengan

sntomas de enfermedades de transmisin sexuales, y de

manera rutinaria para examinar mujeres embarazadas en
busca de anticuerpos presentes en la sangre.
Algunas afecciones pueden ocasionar un examen falso positivo,
tales como:
Consumo de drogas intravenosas
Ciertos tipos de neumona
Malaria
Embarazo
Lupus
eritematoso
autoinmunitarios

sistemtico

algunos

otros

Tuberculosis

Un resultado positivo de la prueba puede significar que una

persona tenga sfilis. Si la prueba de deteccin es positiva, el
siguiente paso es confirmar el diagnstico con una prueba ms
especfica para sfilis, como FTA-ABS, que ayuda a diferenciar
entre sfilis y otras infecciones.

Materiales:
Centrifuga
Frasco de tornudas de alcohol
Portaobjetos
Cubre objetos
Pipetas de Pasteur
Jeringa desechable de 5 mL con aguja de 21x32mm
Tubos con EDITA de 13x100 mL
Palillos de madera
Recipientes de descarte con cloro al 5% o cualquier otro
desinfectante
Papel Toalla

Observaciones
En el laboratorio se nos encomend en que observramos los en
cual bamos a trabajar y al mismo tiempo el docente explico cmo
realizaramos la actividad dentro el laboratorio, se nos ense un
video de como nosotros bamos a usar la tcnica de Extendido
sangre en el portaobjetos, una vez vista la demostracin 3
compaeros fueron elegidos para sacar la muestra de sangre, en
la que el docente solicito en los tubos de ensayo tuvieran el
nombre del alumno en cual dono su sangre, una vez en los tubos
de ensayos elaborados con la dicha instruccin, Se hizo la primera
parte cual fue la Tincin de Wright el cual se aplic la tcnica de
la extensin en el portaobjeto, luego de haber cumplido el
procedimiento el cual haba que esperar que los colorantes que se
aplic, mientras se esperaba el proceso para el secamiento, se
hizo la 2da parte en donde el docente tomo una muestra de
sangre de centrifugo la muestra de sangre y luego puso la
muestra en el cartn donde se le indicaba luego de hacer la
reacciones donde se esper la reaccin para determinar la que se
indic en la prueba de RPR, una vez que los portaobjetos
cumplieron su labor, fueron puestos al microscopio para poder
observar los glbulos rojo y blancos los cuales fueron vistos con
un enfoque de 100x. Luego de realizar las dos pruebas se limpi
cada instrumento con la solucin de 5% de coloro y dejado en su
lugar.

Procedimientos
Tincin de Wright:
1. Realizar un extendido de sangre perifrica tambin llamado
frotis sanguneo.
2. Colocar el frotis secado al aire una rejilla o cubeta de tincin
con la sangre hacia arriba.
3. Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el
colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en
el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los
glbulos
sanguneos.
El
colorante
deber
cubrir
completamente el portaobjetos, pero no debe derrarse por
los bordes. Deber agregarse una cantidad adicional si este
comienza a evaporar.
4. Agregar directamente al colorante un volumen igual al
amortiguador de Wright, para evita la coloracin dbil.
Esperar la formacin de brillo metlico. Puede usarse de
igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15
minutos.

5. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la

extensin presente un aspecto rosado al examinarlo a simple
vista.
6. Limpiar el dorse del portaobjetos con una gasa o algodn
humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de
colorante.
7. Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de
inmersin.

Prueba RPR:
1.)
El docente tomar
una muestra de sangre 5 cc, entre los alumnos utilizando un
tubo sin anticoagulante.
2.)
muestra y separar el suero.

Centrifugar la

3.)
Una vez Separado
el suero, coloque una gota sobre la lmina de cartn
entregada posteriormente coloque, una gota del reactivo.
4.)
durante tres minutos.

Rotar suavemente

5.)
aglutinacin y realizar la interpretacin.

Ver la reaccin de

Resultados
Cuando tenamos el portaobjeto en el microscopio donde con un
enfoque de 100x pudimos observar los eritrocitos y sus cuerpos
blancos donde La mayora de los mesones pudieron observar un
Neutrfilo y un Eosinofilo, mas de algunos mesones tenan la
presencia de un Monocito y un Linfocito, y si hubieron tambin
presencia de plaquetas en todas las muestras, Lamentable mente
este informe no porta pruebas fotogrficas.
En la segunda parte cuando el docente roto las muestras
suavemente se pudo notar las reacciones que hubo dentro de la
prueba, y se pudo ver que no hubo aglutinacin debido a que no
se observ los aspectos de grumos que presentaba la parte
positiva (+) entonces se dedujo que por prevencin se tiene que
hacer otra prueba para que tenga una lectura ms precisa en
caso de que este paciente tuviera sfilis.

Conclusin
En esta prctica realizamos dos partes cual se observ como el
sistema inmune reaccionaba a la prueba de la segunda en cuanto
sirve para determinar varias enfermedades (Mas comn de
transmisin sexual) para una mayor prevencin y en la primera
parte que observamos el sistema inmune a un punto de vista
microscpico e identificamos cada glbulo blanco que se present
en cada muestra de sangre de los compaeros as podemos
reconocer su forma morfolgica y entender el funcionamiento
que ya conocemos de cada glbulo blanco que hace para
proteger cualquier sustancia desconocida que pueda introducirse
en nuestro cuerpo.