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OBTENCION Y PURIFICACIN DE SAPONINA EN LA QUINUA PRODUCIDA

EN EL DISTRITO PEDREGAL-AREQUIPA

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA


Durante muchos aos el cultivo de la quinua estuvo subvaluado, pero desde
que se hicieron pblicas sus propiedades nutricionales, ha tomado mayor
importancia en Per y en el mundo, siendo uno de los cereales menores de
mayor
demanda
en
Europa.
Si bien las potencialidades del mercado de la quinua son grandes, los
productores han tropezado con grandes obstculos como la baja produccin, la
putrefaccin de las plantas, y el principal problema: los granos amargos por las
saponinas.
En este sentido, se han realizado numerosos estudios sobre qu son las
saponinas, dnde se encuentran y qu efectos tienen, y en base a estos
estudios se han conseguido variedades dulces mediante mejoramiento
gentico. Sin embargo, no todos los problemas de la produccin de quinua se
han
solucionado
de
esta
manera.
Desde los inicios del consumo de la quinua, el sabor amargo del grano ha sido
un problema, que los antiguos pobladores del altiplano haban solucionado
parcialmente, realizando lavados sucesivos del grano antes de consumirlo, a fin
de eliminar el alcaloide responsable de esta amargura: la saponina.

2.-IMPORTANCIA Y JUSTIFICACION
Si bien la saponina se ha constituido en el principal obstculo para la
comercializacin y exportacin de la quinua Peruana, tambin se han
planteado algunas opciones para realizar un aprovechamiento de esta
sustancia, que dadas sus propiedades, puede ser empleada como ingrediente
para la fabricacin de cervezas y detergentes, como componente para la
fabricacin de extinguidotes de incendios, en la industria fotogrfica y en la
industria farmacutica (en la fabricacin de hormonas sintticas).
Lamentablemente, hasta hoy en da no se ha concretado nada respecto a la
utilizacin de las saponinas como producto secundario (subproducto) de la
quinua.

3. ANTECEDENTES

Arango, M tesis adgradum en el 2000. Evalu el contenido de sapogeninas


esteroideas en las hojas de ocho especies nativas del genero Cestrum (C.
anagris Duna in DC, C aurantiacum Lindley, C formosum Morton, C
glanduliferum Kerber ex Francey, Cluteovirescen Francey, C mortonianum J. L.
Gentry, C pacayense Francey, C regelii planchon in Fl) en comparacin con
Cestrum nocturnun, todas procedentes de poblaciones naturales de
Guatemala,
ninguna
de
las
especies
evaluadas
alcanzo
el
rendimientoobtenidoa partir de C nocturnum (5.26%)
Temaj S. tesis efectuada en 1995. Investigo las saponinas esteroidales
presentes en las hojas y rizomas de Smilax lundellii (zarzaparrilla), mediante
espectrofotometra. Encontr que los rizomas poseen un contenido de
sapogeninas de 12.05% mayor que en hojas 9.82%, esto demuestra su utilidad
potencial como fuente de materia prima en la elaboracin de hormonas
sexuales, cortisona y compuestos.
Uno de los primeros estudios de los que se tuvo conocimiento en Bolivia y
realizado con financiamiento del ex-COMPAC I, fue el: Estudio de la saponina
que se encuentra en la biblioteca de la ex-Prefectura de Oruro ahora Gobierno
Autnomo Departamental de Oruro.
En el caso de Agave americana, se hicieron estudios ya que tiene una variedad
de usos como diurtico, laxante y antiescorbtica. En 1991, en el
Departamento de Qumica de la Universidad de Dheli, India; se hicieron
investigaciones fitoqumicas, las cuales revelaron la presencia de glucsido
espirostanol, saponinas, saponinas
esteroidales y derivados de
tetratriacontanol. As mismo se da un reporte del aislamiento de un flavonoide,
llamado Agamanona (Parmar et al, 1991).
En el caso de Agave sisalana, se encontr una saponina esteroidal de una
planta cultivada. Este agave en especial es uno de los tantos que contribuye a
la obtencin de fibra, en China, y se cultiva al sur de este pas (Ding et al,
1988). Aqu se presenta el aislamiento de tres saponinas esteroidales.

En un Mxico tan antiguo, donde la flora y la fauna son de vital importancia


debido a sus propiedades, los pobladores prehispnicos hicieron de este un
elemento de vital importancia para sus vidas en donde descubrieron que
algunas plantas contribuan a mejorar la salud, a la supervivencia, etc. Nuestro
pas tiene una de las ms importantes y mayores biodiversidades en el mundo,
la cual permite que su estudio sea tan extenso y abundante; que provoca que
empresas que se dedican al desarrollo de nueva materias primas y medicinas
se interesen en las plantas que se obtienen en este pas.

Liberman (2002), plantea que para propiciar un desarrollo econmico de las


comunidades productoras de quinua, y para que ste sea un desarrollo
sostenible, es necesario recuperar las tecnologas tradicionales de cultivo de
este grano, puesto que se ha comprobado que las tcnicas tradicional dan
mejores resultados que las tcnicas de agricultura moderna (porque esta es
una especie adaptada a condiciones ambientales muy particulares) y adems
no degrada los ecosistemas, como sucede al aplicar tecnologa moderna. En
este sentido, Liberman plantea incentivar la economa familiar de produccin.
Estudios realizados por la Cooperacin Andina de Fomento (CAF et a. 2001),
muestran que la demanda del mercado de la quinua crece cada ao, para el
2001, se exportaron ms de 5 millones de dlares americanos y se
involucraron unos 70 mil productores, siendo que en toda la cadena productiva,
no se han invertido ms de 20 millones de dlares. De igual manera, la
superficie cultivada con este cereal se ha incrementado en los ltimos diez
aos.
Los principales mercados para la saponina actualmente son Estados Unidos,
India, Argentina y Dinamarca para la primera y Estados Unidos, Japn,
Alemania y Holanda, en orden de importancia, para la segunda.
Los precios promedio a los que se comercializ la corteza y saponina de quillay
durante 1996 fueron de 3,3 US$ FOB/kg y 25,2 US$ FOB/kg respectivamente.
Por su parte, los volmenes y montos exportados fueron de 1.216,6 toneladas
y 4,062 millones US$ FOB para la corteza y 665 kilogramos de saponina por un
valor de 16,7 miles US$ fOS.

4. HIPOTESIS
A menor contenido de Saponinas en CHENOPODIUM QUINOA WILLD mejor
sern los ndices de calidad de la misma.
El pericarpio del grano de quinua contiene saponinas, lo que le da un sabor
amargo y deben ser eliminadas para que el grano pueda ser consumido. Las
saponinas se caracterizan, adems de su sabor amargo, por la formacin de
espuma en soluciones acuosas.
Recursos Genticos y Variabilidad de la quinua en el Peru

El Per tiene la mayor variabilidad gentica de la quinua, especialmente en la


regin del altiplano, donde la Estacin Experimental Illpa-Puno y la Universidad
Nacional del Altiplano cuentan con un banco de germoplasma de ms de 1200
accesiones, una coleccin ncleo (Ortiz et al, 1999), con datos de pasaporte,
caracterizados y evaluados desde el punto de vista agronmico, con replicas en
otras estaciones experimentales del INIA y algunas universidades del pas. Este
banco constituye un recurso biogentico importante por ser la base gentica
para la obtencin de nuevas y mejores variedades que garantizan una
agricultura sostenible para mantener la seguridad alimentaria, regional,
nacional y mundial.
Su caracterizacin a travs de los diferentes mtodos de mejoramiento ha
permitido determinar y agrupar el cultivo en quinua de altura, de altiplano, de
valle del nivel del mar, de grano dulce y amargo (saponina), con una gama de
colores de grano que abarcan el negro, caf, plomo, marrn, rojo, rosado, gris,
amarillo, anaranjado y prpura. Se han generado y entregado a los agricultores
variedades con caractersticas de precocidad y buena calidad de grano (blanco,
dulce y grande) rendimientos que superan en un 100% a los ecotipos nativos
(600 - 800 kg/ha). (Cuadro 1).

CUADRO 1. Cultivares de Quinua Seleccionados, Liberados y Distribuidos por


el INIA en los ltimos 10 aos.
ESTACIONES
EXPERIMENTALES
Illpa-Puno

VARIEDADES

Kancolla, Blanca de Juli,


Cheweca
Tahuaco I, Salcedo INIA,
Illpa-INIA

Andenes - Cusco

Amarillo Marangani
Quillahuaman - INIA

Canan - Ayacucho

Ayacuchana-INIA,
Blanca de Junn
Huancayo, Amarillo
Marangan

Santa Ana - Huancayo

Blanca de Junn, Rosada

de Junn
Hualhuas, Mantaro,
Huancayo
Baos del Inca- Cajamarca Huacataz, Rosada de
Yanamango
Huacariz
Santa Rita - Arequipa

Roja de Coporaque

5. OBJETIVOS
GENERAL
-

Evaluar los niveles de saponina en chenopodium quinoa willd producida


en el distrito Pedregal - Arequipa.
Establecer informacin que contribuya con investigaciones dirigidas a
evaluar plantas que contengan saponina

ESPECIFICO
-

Cuantificar el contenido de saponinas que se encuentra en la quinua de


la regin Arequipa.
Purificacin de los crudos de saponina.

Caractersticas generales de las saponinas.


Las saponinas son un grupo de glucsidos (sustancias orgnicas donde la
funcin carbohidrato est formada de una o ms molculas de monosacridos;
estn combinados con ms grupos no azucarados, son fcilmente hidrolizables
por la accin de enzimas cidos) que se disuelven en agua y disminuyen la
tensin superficial de sta; por lo tanto, tienen la propiedad de producir
espuma abundante, y relativamente estable. Por hidrlisis de las saponinas se
obtienen carbohidratos y una aglicona, llamada generalmente sapogenina, la
cual puede tener un esqueleto esteroidal o de triterpeno (Domnguez, 1979).
Entre las plantas que contienen saponinas, se encuentran la espinaca, betabel
(remolacha), esprrago, alfalfa, soya, etc., tambin se encuentran en el veneno

de las serpientes y en el de las estrellas de mar (Oakenful, 1981, de acuerdo


con Palencia, 2003).
Las saponinas estn constituidas por grandes molculas orgnicas, esteroides
y triterpenos, unidas a una o varias molculas, por lo que contienen los
elementos necesarios para emulsionar la grasa: Una parte lipoflica, que es el
esteroide o el triterpeno, por medio del cual se unir la grasa y una parte
hidroflica, que es el azcar (pentosas, hexosas cidos urnicos) por medio
del cual se unir al agua. Se conocen ms de 200 saponinas esteroidales,
localizadas en las monocotiledneas principalmente, en las familias de las
liliceas, amarilidceas y dioscoreceas y las saponinas triterpenoides se han
aislado principalmente en dicotiledneas (Hernndez, 1996).
Saponinas triterpnicas.
Las saponinas triterpnicas, por lo general tienen un anillo oleano y ms
raramente ursano o damarano. Muchos son cidos, debido a la presencia de
uno o dos grupos carboxilo en la aglicona y/o la mitad de azcar y se
encuentran unidos en la posicin 3. Los grupos de carbohidratos usualmente
contenidos son unidades de 1-6 monosacridos, siendo los ms comnes la
glucosa, galactosa,
ramnosa, arabinosa, fucosa, xilosa, cido galacturnico y cido glucurnico
(Domnguez, 1979).
Las saponinas triteprnicas son raras en las monocotiledneas, abundan en
muchas familias de las dicotiledneas, especialmente en Caryophillaceae,
Sapindaceae, Polygalaceae y Sapotaceae, Compositae, Cucurbitaceae,
Linaceae.
Las saponinas triterpenoides se han clasificado en tres grupos, representados
por -amirina, -amirina y lupeol (esterol unido a una cadena corta de uno o
ms azcares). Los cidos triterpenoides relacionados, se forman por
sustitucin de un grupo metilo por un grupo carbonilo en las posiciones 4, 17
20 de las sustancias anteriormente citadas (Domnguez, 1979).
Saponinas esteroidales.
Las sapogeninas de las saponinas esteroidales, son principalmente derivados
de espirostanol y furostanol, que son normalmente convertidas en
espirostanoles durante el aislamiento. Estas sapogeninas no tienen grupos
carboxilo, no muchas unidades de azcar como las triterpnicas; la mayora de
los compuestos de este grupo, estn presentes en las plantas como glucsidos.
Las uniones glucosdicas estn usualmente unidas a C-1, C-8 y C-6 y los
glucsidos estn presentes en forma de antrona: los glicsidos encontrados
glucosa, ramnosa y apiosa (Domnguez, 1979).

Estn menos distribuidas en la naturaleza que las saponinas triterpenoides. Los


estudios fitoqumicos han demostrado su presencia en muchas familias de las
monocotiledneas, especialmente en Dioscoreaceae y Liliaceae. Entre las
dicotiledneas, en Leguminosae y Solanaceae.

6. AMBITO:
Con la creciente comercializacin de la quinua y el aumento de su valor
agregado se recolectara la muestra de quinua real que es la ms conocida en
el mercado peruano.
LUGAR: La muestra proveniente del Valle de Majes distrito Pedregal arequipa
Muestra: Quinua Real
Clasificacin taxonmica
Nombre Cientifico: chenopodium quinoa willd
La quinua es una planta de la familia Chenopodiacea, gnero Chenopodium,
seccin Chenopodia y subseccin Cellulata. El gnero Chenopodium es el
principal dentro de la familia Chenopodiacea y tiene amplia distribucin
mundial, con cerca de 250 especies (Giusti, 1970).
Dentro del gnero Chenopodium existen cuatro especies cultivadas como
plantas alimenticias: como productoras de grano, Ch. quinoa Willd. y Ch.
pallidicaule Aellen, en Sudamrica; como verdura Ch, nuttalliae Safford y Ch.

ambrosioides L.

Reyno: Vegetal
Divisin: Fenergamas
Clase: Dicotiledoneas
Sub clase: Angiospermas
Orden: Centrospermales
Familia: Chenopodiceas
Gnero: Chenopodium
Seccin: Chenopodia
Subseccin: Cellulata
Especie: Chenopodium quinoa Willdenow.
El fruto de la quinua es un aquenio; el perigonio cubre una sola semilla y se
desprende con facilidad al frotarlo. A su vez, la semilla est envuelta por un
episperma casi adherido.
El episperma ha sido estudiado por Villacorta y Talavera (1976) quienes
describen la presencia de cuatro capas:
-

Una capa externa que determina el color de la semilla y que es de


superficie rugosa, quebradiza y seca que se desprende fcilmente con el
vapor.
El color de la segunda capa difiere de la primera y se observa slo
cuando la primera capa es translcida.
La tercera capa es una membrana delgada, opaca, de color amarillo.
La cuarta capa es translcida y est formada por una sola hilera de
clulas que cubre el embrin.

La saponina se ubica en la primera membrana. Su contenido y adherencia en


los granos es muy variable y ha sido el motivo de diferentes estudios y tcnicas
para eliminarla, por el sabor amargo que confiere al grano.

Anatoma de la Quinua

7. MATERIAL Y METODOS:
7.1 Materiales y equipos
Equipo de filtracin al vaco
Rotavapor.
Estufa.
Pipetas de 10 mL.
Pipeta volumtrica de 5 mL.
Probetas de 250 mL.
Papel filtro.
Vasos de precipitacin 250 mL.
Vasos de precipitacin 500 mL.
Varilla de agitacin.
Tubos de ensayo con tapones, 160 mm de longitud y 16 mm de dimetro.
Cronmetro o reloj.
Balanza.
Regla, sensibilidad 0,1 cm.
Agua destilada.
Porta tubos.
REACTIVOS.
1 Agua destilada
2 Alcohol Antisptico
3 cido clorhdrico 2N
4 Etanol 95%
5 ter etlico
6 Cloruro de sodio
7 Cloroformo
8 cido clorhdrico (C)
9 Reactivo de Liebermann- Burchard
10 Reactivo de Fehling
11 Reactivo de Sudan

8. PROCEDIMIENTO
Recoleccin de la materia prima, la muestra proveniente del Valle de Majes
distrito Pedregal
Tipo de investigacin: experimental
Tipo de muestreo.
Las muestras son colectadas por un muestreo aleatorio
8.1 OBTENCIN DE SAPONINAS
8.1.1 SAPONINAS NO HIDROLIZADAS
Por lo general para la extraccin de las saponinas se llevan a cabo
metodologas que difieren poco entre s. Casi siempre se parte del material
vegetal seco, se desengrasa con benceno o ter de petrleo (este paso no es
imprescindible) y se macera 48 horas con metanol, etanol o mezcla
hidroalcohlica.
Descripcin:
Desecacin de los frutos entre 40C y 45C
Molienda de frutos
Macerado en mezcla alcohlica
Otras tcnicas:
-

Granos sin lavar, desmenuzados, hervidos y filtrados. El filtrado se


concentra en bao de mara, el residuo se hierve al reflujo con alcohol a
90%, se decolora con carbn y se deja enfriar. La Saponina bruta
separada se disuelve en alcohol hirviendo (95%) y se deja cristalizar.
Granos sin lavar, desmenuzados se tratan con alcohol potable y el
extracto se purifica con agua y ter. Extraccin de saponinas con
cloroformo y evaporacin al medio ambiente.
Granos sin lavar, desmenuzados, tratados con alcohol de 70%,
purificados con agua, ter de petrleo y alcohol absoluto.

Determinacin de solidos totales

DETERMINACIN DE SLIDOS
TOTALES
Pesar una cpsula (P1)
Adicionar 20 mL de la muestra en
la cpsula (V)
Evaporar sobre una fuente
calrica hasta sequedad.
Pesar la cpsula con su contenido

PROCEDIMIENTO CLCULOS
Slidos Totales:

S olidostotales =

P2P1
V mL

Donde:
ST = Slidos Totales

(P2)

P1 = peso de la cpsula vaca


P2 = peso de la cpsula con los
slidos
Despus de extradas las saponinas, estas se pueden separar por varias
tcnicas de separacin analticas y preparativas, una tcnica muy usada es la
cromatografa. Las saponinas se separan muy bien en cromatografa de papel o
cromatografa de capa delgada.

Tratamiento

De

La Muestra

El agua de lavado
en reposo unas 3
sedimenten
los
se toma 1000 ml
quinua
y
se
volumen de 250
volumen
es
separacin y se
para desengrasar
formacin de dos

de la quinua debe dejarse


horas
para
que
se
slidos presentes. Luego
de agua de lavado de
concentra
hasta
un
ml por evaporacin, este
colocado en un embudo de
aade 50 ml de hexano
la
muestra,
hasta
la
fases.

La fase interior es
a esta fase se le
con el fin de
ms extrae de
presente en el
quinua
(el
el metanol).

la que contiene saponina,


aade algunos solventes
determinar cul es el que
mejor manera la saponina
agua de lavado de la
solvente ms adecuado es

8.1.1.1
EXTRACTO

PREPARACIN
METANLICO

DEL

A
la
muestra
desengrasada se le aade
metanol caliente
hasta la formacin de un
precipitado y para
asegurarse
que
ha
precipitado toda la
saponina
se
lo
deja
aproximadamente
una hora lo centrifuga a
5000 rpm durante
5 min y se obtiene de este
modo un extracto bruto de saponina impura, este precipitado se diluye con una
mezcla de metanol - agua (1:1) para proceder con las pruebas de
identificacin.

8.1.1.2 SOLUCIONES DE SAPONINA NO HIDROLIZADA


- CONCENTRACIN 0,1%
Se pesa 0,1 g de la saponina no hidrolizada obtenida mediante la tcnica
detallada anteriormente se diluye en 50 mL de agua destilada y luego se afora
a 100 mL en un baln aforado
- CONCENTRACIN 0,5%
Se pesa 0,5 g de la saponina no hidrolizada obtenida mediante la tcnica
detallada anteriormente se diluye en 50 mL de agua destilada y luego se afora
a 100 mL en un baln aforado

8.1.2 SAPONINAS HIDROLIZADAS


8.1.2.1 HIDRLISIS CIDA DE LA SAPONINA
Se pesa 2 g el residuo del extracto metanlico y se disolvi en 20 ml de etanol,
se aadi igual volumen de cido clorhdrico 2 N y se refluj durante 3 horas;
se dej refrescar para luego evaporar hasta la tercera parte de su volumen
inicial y se verti sobre igual volumen de agua fra. La solucin acuosa
obtenida se extrajo con acetato de etilo y se concentr a sequedad en un
rotavapor.

8.1.2.2 SOLUCIONES DE SAPONINA HIDROLIZADA


- CONCENTRACIN 0,1%
Con la ayuda de una pipeta de 1 mL graduada se toma 0,1 mL del concentrado
de saponina hidrolizada obtenida mediante la tcnica detallada anteriormente
se diluye en 50 mL de agua destilada y luego se afora a 100 mL en un baln
aforado

- CONCENTRACIN 0,5%
Con la ayuda de una pipeta de 1 mL graduada se toma 0,5 mL del concentrado
de saponina hidrolizada obtenida mediante la tcnica detallada anteriormente
se diluye en 50 mL de agua destilada y luego se afora a 100 mL en un baln
aforado

8.2 TAMIZAJE FITOQUMICO DE SAPONINAS HIDROLIZADAS Y NO


8.2.1 HIDROLIZADAS
Para la adecuada identificacin se tomaron muestras provenientes de las
fracciones de inters obtenidas mediante la obtencin del crudo de saponinas y
su posterior hidrlisis, a las cuales se le realizaron los ensayos
correspondientes para identificacin cualitativa de los siguientes metabolitos
de inters:
cidos grasos
Tripterpenoides y esteroides
Saponinas
Azucares
Sapogenina

8.2.1.1 ENSAYO DE FEHLING.


Permite reconocer en un extracto la presencia de azcares reductores. Para
este ensayo, si la alcuota del extracto no se encuentra en agua, debe
evaporarse el solvente en bao de agua y el residuo redisolverse en 1-2 mL de
agua. Se adicionan 2 mL del reactivo y se calienta en bao de agua 5-10
minutos la mezcla. El ensayo se considera positivo si la solucin se colorea de
rojo o aparece precipitado rojo. El reactivo se prepara de la siguiente forma:
Solucin A: Se pesan 35 g de sulfato cprico hidratado cristalizado y se
disuelven con agua hasta un volumen total de 1000 mL. Solucin B: Se pesan
150 g de tartrato de sodio y potasio y 40 g de hidrxido de sodio y se disuelven
con agua hasta un volumen total de 1000 mL.
Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual
cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el
ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alcuota a evaluar.
8.2.1.2 ENSAYO DE LA ESPUMA.
Permite reconocer en un extracto la presencia de saponinas, tanto del tipo
esteroidal como triterpnica. Si la alcuota se encuentra en alcohol, se diluye
con 5 veces su volumen en agua y se agita la mezcla fuertemente durante 510 minutos.
El ensayo se considera positivo si aparece espuma en la superficie del lquido
de ms de 2 mm de altura y persistente por ms de 2 minutos.
8.2.1.3. CUANTIFICACIN POR ESPECTROFOTOMETRA DE SAPONINAS
PRESENTES EN EL AGUA DE LAVADO DE LA QUINUA
(HEMLISIS)

Las saponinas, adems de su sabor amargo, se caracterizan por producir


espuma y causar hemlisis en la sangre de los animales inferiores.
1. Homogenizar la muestra (agua de lavado de la quinua)
2. Filtrar en un lienzo
3. Tomar una alcuota de 100 mL, llevarlo a 250 mL con agua destilada
4. Concentrar la dilucin a la mitad de su contenido es decir 125 mL
5. Filtrar la dilucin con doble papel
6. Llevar este concentrado a 250 mL con citrato trisdico al 6%
7. Marcar tres series de diez tubos
8. Marcar seis tubos para los controles de 0 y 100% de hemlisis
9. Realizar las siguientes diluciones 0.15, 0.30, 0.40, 0.45, 0.50, 0.55, 0.60,
0.65, 0.70,
0.75 de agua preparada
10. Llevar cada tubo hasta 5 mL con citrato trisdico cada uno y homogenizar.
11. Colocar 20 L de una solucin de glbulos rojos preparada el da de la
prueba, en cada tubo y homogenizar
12. Llevar a todos los tubos a un Bao Mara a 37C por 30 min
13. Centrifugar los tubos por 10 min
14. Leer la absorbancia de cada tubo a 415 nm en un espectrofotmetro,
sacando el sobrenadante con una pipeta Pasteur
15. Anotar los resultados en una tabla de datos
16. Hacer una grfica y calcular por interpolacin el volumen de la dilucin que
permita el 50 % de la hemlisis
17. Calcular la concentracin del extracto preparado usando la constante de
calibracin K (0.13x10-3 g/mL), el % de la hemlisis y la concentracin de cada
dilucin
CUIDADOS PARA PIPETEAR LOS GLBULOS ROJOS.
1. Homogenizar el tubo con solucin de glbulos rojos una vez antes de colocar
en cada tubo de dilucin o siempre homogenizar el mismo nmero de veces
2. Pipetear los glbulos rojos con cuidado y siempre a la misma profundidad del
tubo y al mismo tiempo
3. Secar exteriormente la pipeta antes y despus de colocar los glbulos rojos
en cada tubo de dilucin
4. No interrumpir la sesin mientras se coloca los glbulos rojos ya que pueden
acumularse en las paredes de la pipeta ocasionando fallos en el ensayo
9. ANLISIS ESTADSTICO
Varianza.
Procedimiento estadstico que sirve para medir la variacin total de las
observaciones.
Para tal efecto se realiza las pruebas por triplicado.
Este anlisis indica la relacin entre una variable (Tipo de quinua) dependiente
y uno o ms factores independientes (Concentracin de saponina)

Coeficiente de variacin.
Indica el nivel de confianza que se puede tener en los datos, un valor bajo
indica que el ensayo ha sido bien planificado y que ha tenido un buen manejo;
en tanto que un valor alto puede ser un indicador en ciertos casos de que ha
existido una mala planificacin o el experimento ha sido mal manejado.
Tipo de muestreo: aleatorio
Poblacin: Variedades de quinua
Variable aleatoria: Contenido de saponina segn variedad
Tamao de muetra:
Distribucin T.
Nos sirve para poder comparar las variedades de quinua segn el contenido de
saponina.
Como muestras tomaremos a las variedades de quinua de la zona:
-

Quinua blanca real.


Quinua roja pasankalla.
Quinua negra collana.

Se necesitaba conocer cul de las variedades de quinua que se haban


establecido contiene ms saponina, por lo que el mtodo estadstico apropiado
para la realizacin de este objetivo fue el de Comparacin de Datos por Pares
utilizando la tabla de t de Student, el cual consiste en estudiar la eficiencia de
los mtodos de anlisis.
t- Student

Para aplicar este procedimiento se siguen los siguientes pasos:


1. Obtener resultados de prueba t de Student desde la comparacin de las
muestras, cada grupos separadamente. Esto puede referirse como para
comparacin 1 (variable t1) y la comparacin 2 (variable t2).
2. Estimar la diferencia D, entre en las variables t1 y t2, obtenidas en el
paso 1.
3. Estimar t crtico para usarlo en el contraste para D, usando los grados de
libertad n y m asociados a las variables t1 y t2, respectivamente.
4. Estimar Dn+m, que es el D crtico o valor nulo con el cual comparar el
valor D del paso 2. Esta se obtiene con los siguientes ecuaciones

Prueba de hiptesis con t-Student


Hiptesis Nula ( H0 ): Ho : 1 = 2
Hiptesis Alterna ( H1 ): H1: 1 2
Siendo: G.l. = n-1

tObtenido

X obtenido
S
n

n: tamao de la muestra
X: Media muestral
: Media poblacional
S: Desviacin estndar
9.1 ESTADISTICA.
Segn las estadsticas oficiales (Ministerio de Agricultura, 1955) en ese ao se
sembraron 32605 ha de quinua y caihua, que produjeron 35995 t de grano,
con un rendimiento promedio de 1104 kg/ha. En 1996 se sembraron 18704 ha
de quinua y 4392 ha de caihua con un rendimiento de 860 kg/ha de quinua y
de 680 kg/ha de caihua. Es decir, hace cuatro dcadas los cultivos de quinua
y caihua ocupaban el 8vo lugar entre las especies ms importantes cultivadas
en el Per, mientras que en 1996 ambos se encontraron por debajo del 30vo
lugar.
Segn el informe del Ing. O.B. Gonzlez Tafur, en 1930 en la Estacin
Experimental Agrcola de La Molina, se sembraba quinua procedente de
Cajamarca con un rendimiento de 2550 kg de grano pelado/ha.
Segn Martnez Claure, los estudios del cultivo de quinua en el Per se iniciaron
en 1936. Se estudiaron 100 variedades, de las cuales se seleccionaron 12,
considerndose la "blanca real" como la mas valiosa, por su grano grande y
achatado y cscara menos amarga.
En 1940, la estacin agrcola de Junn, inici trabajos de seleccinconsiguiendo
dos variedades denominadas "Blanca de Junn" y "Rosada de Junn", las cuales
desde 1945 sustituyeron a las variedades corrientes, cuyo grano era muy
amargo debido al alto contenido de saponina y no se prestaban bien para la
trilla mecnica. Desde 1951 se desarroll una campaa de cultivo de quinua en
los departamentos del Sur, usando semilleros oficiales en los que se
propagaban las dos variedades de Junn y tambin la "Real de Puno".
Durante los ltimos decenios se han desarrollado diversos programas y
proyectos para mejorar los rendimientos. Sin embargo, los niveles de
produccin y productividad no han logrado alcanzar an los de 1955.
Indudablemente uno de los factores que ha incidido en esta situacin es el
descuido en el mejoramiento del producto despus de la cosecha.

En la Universidad Nacional Agraria La Molina (Per) se ha diseado un mtodo


de lavado con un equipo experimental (Molina A., 1972) que utiliza un perodo
de remojo de 30 min; tiempo de agitacin, 20 min; y temperatura de agua de
lavado a 70C. El equipo, diseado por Torres y Minaya (1980), logr eliminar
las saponinas satisfactoriamente. Los productos procesados (quinua perlada)
tenan 0.04 - 0.25% de saponina.

BIBLIOGRAFA.
Mauricio Mastrogiovanni (2012), Extraccin, purificacin y caracterizacin
primaria de saponinas.
Ricardo Hernndez Royero (1997). Obtencin de crudos de saponinas
hipocolesteromizantes del Chenopodium quinoa Willd.
Rosa Hernndez S., Eugenia C. Lugo C. (2005). EXTRACCIN Y CUANTIFICACIN
INDIRECTA DE LAS SAPONINAS DE AGAVE LECHUGUILLA TORREY

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