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Centrifugacin :

La centrifugacin es un mtodo por el cual se pueden separar slidos de lquidos


de diferente densidad por medio de una fuerza giratoria. La fuerza centrfuga es
provista por una mquina llamada centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un
movimiento de rotacin que origina una fuerza que produce la sedimentacin de
los slidos o de las partculas de mayor densidad.
Los componentes ms densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de rotacin
de la centrfuga, mientras que los componentes menos densos de la mezcla se
desplazan hacia el eje de rotacin. De esta manera los qumicos y bilogos
pueden aumentar la fuerza de gravedad efectiva en un tubo de ensayo para
producir una precipitacin del sedimento en la base del tubo de ensayo de manera
ms rpida y completa.

Tipos :

Centrifugacin diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las


molculas. Esta diferencia debe ser grande para que sea observada al
centrifugar. Las partculas que posean densidades similares sedimentarn
juntas. Este mtodo es inespecfico, por lo que se usa como centrifugacin
preparativa para separar componentes en la mezcla (por ejemplo, para
separar mitocondrias de ncleos y membrana) pero no es til para separar
molculas.

Centrifugacin isopcnica: Partculas con el mismo coeficiente de


sedimentacin se separan al usar medios de diferente densidad. Se usa para
la separacin de ADN con mucha frecuencia.

Centrifugacin zonal: Las partculas se separan por la diferencia en la


velocidad de sedimentacin a causa de la diferencia de masa de cada una. La
muestra se coloca encima de un gradiente de densidad preformado. Por la
fuerza centrfuga las partculas sedimentan a distinta velocidad a travs del
gradiente de densidad segn su masa. Se debe tener en cuenta el tiempo de
centrifugacin ya que si se excede, todas las molculas podran sedimentar en
el fondo del tubo de ensayo.

Ultra centrifugacin: Permite estudiar las caractersticas de sedimentacin


de
estructuras
subcelulares
(lisosomas, ribosomas y microsomas)
y
biomolculas. Utiliza rotores (fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo.
Existen diferentes maneras de monitorear la sedimentacin de las partculas
en la ultracentrifugacin, el ms comn de ellos mediante
luz ultravioleta o interferones.

La centrifugacin se puede llevar a cabo a escala preparativa o escala analtica.


La primera se utiliza para aislar partculas para su aprovechamiento posterior y la
segunda permite determinar propiedades fsicas como la velocidad de
sedimentacin o el peso molecular.
La centrifugacin preparativa se utiliza para separar partculas segn la velocidad
de sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la
densidad (centrifugacin isopcnica). En el primer caso se obtiene un lquido
sobrenadante y un materioal sedimentado. En los otros dos casos las patculas se
distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido lquido
(centrifugacin mediante un gradiente de densidades).
Las partculas se pueden separar en funcin de la velocidad de sedimentacin
(centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad
(centrifugacin isopcnica). La centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica
constituyen ejemplos de centrifugacin mediante un gradiente de densidades.
Hay diferentes tipos de centrfugas segn el rango de velocidades de giro:

A. Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De pequeo


tamao y sin refrigeracin. Alcanzan una velocidad mxima de 5000 rpm.
Son tiles para la separacin de partculas grandes como clulas o
precipitados de sales insolubles.
Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores que permiten
llegar a velocidades de ms de 10.000 rpm, Los volmenes de trabajo son
muy pequeos. Son tiles en el campo de la biologa molecular.
B. Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y
25.000 rpm. Son refrigeradas y algunas tienen sistema de vaco para evitar
el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con el aire. Son tiles en
la separacin de fracciones celulares, pero insuficientes para la separacin
de ribosomas, virus o macromolculas en general.

C. Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas


auxiliares de refrigeracin i de alto vaco. Hay ultracentrfugas analticas
que permiten la obtencin de datos precisos de propiedades de
sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos moleculares), y
preparativas, tiles para aislar partculas de bajo coeficiente de
sedimentacin (microsomas, virus, macromolculas).

11.2.1 Centrifugacin diferencial


Es el proceso que tiene como resultado la obtencin de un sobrenadante y un
material sedimentado.

11.2.2 Centrifugacin mediante un gradiente de densidades:


Este tipo de centrifugacin es un proceso mediante el cual las partculas se
distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido lquido. El mtodo
es un poco ms elaborado que la centrifugacin diferencial, no obstante presenta
ventajas que compensan el trabajo aadido. La tcnica permite la separacin de
varios o todos los componentes de la muestra y la realizacin de medidas
analticas. El mtodo de gradiente de densidades implica la utilizacin de un
soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior. El
gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa molecular, de
tal manera que la muestra a analizar pueda ser suspendida en la solucin
resultante. Como solutos se utilizan la sacarosa, polisacridos sintticos,
derivados yodados del cido benzoico, o sales de metales alcalinos pesados como
el rubidio o el cesio, entre otros. La muestra se deposita en la parte superior del
gradiente como una fina banda y, tras centrifugar, la separacin de los
componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas que
pueden ser separadas (o fraccionadas).
Hay dos variantes de este mtodo, la centrifugacin zonal y la centrifugacin
isopcnica:

11.2.2.1 Centrifugacin zonal


En la centrifugacin zonal la muestra a analizar se deposita en la parte superior de
un gradiente de densidades previamente formado. A causa de la fuerza centrfuga
las partculas se mueven a velocidades que dependen de la masa y sedimentan
en diferentes zonas del gradiente. La densidad mxima del gradiente no ha de
exceder a la de las partculas a separar.

11.2.2.2 Centrifugacin isopcnica


La centrifugacin isopcnica separa les partculas en un gradiente de densidades
en funcin de la densidad de las mismas. Las partculas se mueven en el
gradiente hasta que llegan a un punto donde la densidad de stas i la del
gradiente son idnticas (de aqu el nombre de isopcnico). En este caso, es
condicin fundamental que la densidad mxima del gradiente final ha de exceder
siempre a la densidad de las partculas. Por este motivo la sedimentacin final no
se produce si se controlan las condiciones de centrifugacin, ya que las partculas
flotan sobre un "colchn" de material que posee una densidad superior a la de
stas. Esta tcnica se utiliza, por ejemplo, para separar partculas similares en
tamao pero de diferente densidad. En este sentido, la centrifugacin isopcnica
es un mtodo adecuado para separar cidos nucleicos o diferentes orgnulos
celulares.