Вы находитесь на странице: 1из 16
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR FACULTAD DE CIENCIAS AGRONOMICAS UNIDAD DE PROYECCION SOCIAL PLAN DE TRABAJO SERVICIO SOCIAL TEMA: "EVALUACION DE TRES METODOS DE DESINFECCION DE EXPLANTES PARA LA MICROPROPAGACION DE PAPA (So/anum tuberosum L.), EN LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS AGRONOMICAS, UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR" PRESENTA: BR. QUINTEROS HERNANDEZ, FREDY ALEXANDER CARNET: QHO9008 TUTOR INTERNO: ING. AGR. MARIO ANTONIO ORELLANA NUNEZ. CIUDAD UNIVERSITARIA, NOVIEMBRE DE 2015 O INDICE. INTRODUCCION OBJETIVOS. METODOLOGIA, CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES. PRESUPUESTO. BIBLIOGRAFIA: INTRODUCCION. La papa (Solanum tuberosum L.), es el cultivo mas importante como fuente de alimentacién humana, ocupa el cuarto lugar en el mundo entre los principales cultivos alimenticios, es superada por gramineas como el trigo, atroz y maiz. En El Salvador actualmente se siembran entre 420 a 560 hectareas de papa al afio en la zona de Las Pilas Chalatenango, produccién que solo cubre el 20 % de la demanda nacional, por lo cual hay necesidad de importar papa para cubrir la demanda nacional. (CENTA, 2002) La principal forma de propagacién es asexual, a través de tubérculos un medio ideal de perpetuacién y diseminacién de un gran ntimero de patégenos (hongos, bacterias, virus y viroides) causantes de enfermedades en el cultivo, esto influye tanto en los rendimientos del mismo como en la calidad de la semilla obtenida. Por ello se considera necesario el conocimiento de todos aquellos factores que lo afecten negativamente a fin de realizar a tiempo un control preventivo y efectivo que asegure la calidad del producto final o “semilla” que se suministra al productor. (Marcano D, 1993) Con el presente proyecto de investigacién se pretenden determinar cual es el métodos de desinfeccion més efectivo para obtener plantas libres de patogenos que afectan a las vitroplantas, ayudando a si al desarrollo del cultivo y beneficiando a los productores de papa en el pais. OBJETIVOS. OBJETIVO GENERAL. + Evaluar tres métodos de desinfeccién para la produccién de semilla de papa (Solanum tuberosum L.), en Laboratorio de Biotecnologia Agricola de la Facultad de Ciencias Agronémicas, Universidad de El Salvador. OBJETIVOS ESPECIFICOS. 1. Determinar el método de desinfeccién externa, mas eficaz para producir plantas /a vitro libres de patégenos y enfermedades, 2. Producir plantas de papa libre de patogenos, usando meétodos de desinfeccién externa de explantes de papa METAS. . Evaluar tres protocolos de desinfeccién de explantes de papa (Solanum tuberosum L.) de plantas desarrollados en invernaderos para la produccion masal de plantulas de papa en un perodo de 175 horas . Desinfectar 120 explantes de papa (Solanum tuberosum), a través del protocolo de mayor eficacia en un periodo de 200 horas para promover la induccion embriogénica METODOLOGIA. La investigacion se realizara durante los meses de Enero, Febrero, Marzo, Abril y Mayo de 2016. En el Laboratorio de Biotecnologia Agricola (Agricutural Biotechnology Lab), en la Facultad de Ciencias Agronémicas de la Universidad de El Salvador, para lo cual se evaluaran tres protocolos de desinfeccién posteriormente se desinfectaran 120 explantes de papa (So/anum tuberosum) para semilla libre de patogenos y enfermedades, en un periodo de 375 horas las cuales se describirdn las actividades a continuacién. Descripcion de las actividades. Meta I: Actividad 1: cotizacién, compra de materiales y desinfeccién del equipo: Se realizara compra de reactivos, materiales, recipientes, entre otros utensilios ha usar en el laboratorio. (Perfodo de 25 horas) Actividad 2: Limpieza de! material vegetal: Se realizar una desinfeccion general la cual consistird en; desinfectar el lugar de trabajo con alcohol al 90 % y se desinfectara el material extraido del invernadero. (Periodo de 60 horas) Actividad 3: Preparacién y prueba de verificacion de los protocolos: se preparara el protocolo de acuerdo a las fases a seguir luego se verificard la efectividad o funcionalidad. (Periodo de 30 horas) Actividad 4: Obtencién de los explantes: Se seleccionaré y manejara adecuadamente la parte de las plantas clonantes donde se extraeran los explantes. (Periodo de 60 horas) Meta IL Actividad 5: Limpieza de los explantes: Se limpiaran con agua y jabén el material elegido (hojas y tallos) dando preferencia a las partes jévenes. (Periodo de 50 horas) Actividad 6: Desinfeccion de explantes: Se desinfectaran con el agente quimico hipoclorito de sodio (NaClO con 1% de principio activo) en solucién, a la que se agregaré una gota de detergente liquido. (Periodo de 50 horas) Actividad 7: Verificacion de explantes desinfectados y libres de patégenos: Esta actividad se realizara para observar y evaluar el material ademas para verificar si el protocolo de Desinfeccién esta funcionando. (Periodo de 50 horas) Actividad 8: Preparacion de explantes a la induccion embriogénica: Se realizara atraves un medio de induccién usando el medio 2, 4 D(Acido 2,4-diclorofenoxiacético). (Periodo de 50 horas) Descripcién de la metodologia. Protocolo ntimero uno: desinfeccién de explantes de semilla de papa (So/anum tuberosum). Se procederé a la preparacién, experimentacién y evaluacién de tres protocolos de desinfeccién de explantes de papa (Solanum tuberosum). > Obtencién de los explantes. Limpiar cuidadosamente con agua y jabén el material elegido (hojas y tallos) dando preferencia a las partes jévenes y saludables. > Desinfeccién de la superficie del explante. Sumergir el material retirado de la planta madre en etanol 70°, durante dos minutos, antes de desinfectarlo con el agente quimico hipoclorito de sodio (NaCIO con 1% de principio activo) en solucién, a la que se agregar una gota de detergente liquido. La concentracion de la solucién de hipoclorito y el tiempo necesario para la desinfeccién varia con el tipo de explante. La funcién del detergente es disminuir la tension superficial, favoreciendo el contacto entre el explante y el desinfectante. > Lavado en agua destilada esteril. El hipoclorito de sodio sera eliminado mediante tres lavados con agua destilada estéril en la camara de flujo laminar. Una vez desinfectado el explante, se retirara el hipoclorito sodio mediante tres lavados sucesivos con agua destilada estéril. La duracién de los lavados es de 1,3 y5 minutos. Para el lavado existen dos técnicas, cuya eleccién depende del tamajio y del numero de explantes a esterilizar. La primera consiste en retirar el material y transferirlo a los recipientes con agua estéril, un procedimiento practico si el nimero de explantes es pequeiio. Para ello la segunda se abrira ligeramente el frasco para descartar el liquido, desechando el contenido. Protocolo ntimero dos: desinfeccién de explantes de semilla de papa (Solanum tuberosum). Los hongos y bacterias crecen en la superficie de los explantes y contaminan los medios de cultivo, cuando no son eliminados. El proceso de introduccién de material vegetal ia vitro dependen de la fase de desinfeccién que involucra el uso de explantes. (Toledo, 1998) Por lo cual se empleard el siguiente protocolo desinfeccién, aplicado a explantes de papa (Solanum tuberosum). Durante el proceso de introduccién al laboratorio hay una estrecha conexin entre invernadero y laboratorio. a) En el invernadero. > Cortar los explantes de yemas de tubérculos crecidos en invernadero. b) En el laboratorio. > Sumergir los explantes durante 10 minutos en un vaso debidamente rotulado que contenga una solucién acaricida y fungicida de 0.5 % y tres gotas de tween 20. > Desechar la solucién acaricida y fungicida enjuagar los explantes con agua destilada, Se prepara la cémara de flujo laminar + Sumergir los explantes en alcohol al 70% durante 30 segundos y llevarlos inmediatamente a la cémara de flujo laminar. ©) en la cémara de flujo laminar. > Eliminar el alcohol y reemplazarlo por una solucién de hipociorito de calcia al 2% y sumerge los explantes durante 10 minutos. + Desechar la solucién de hipoclorito de calcio y enjuagar tres veces con agua destilada estéril los explantes. Mantener los explantes sumergidos en agua destilada esteril hasta el momento de la extraccién de las yemas. Colocar las yemas en el medio de cultivo Protocolo numero tres: desinfeccién de explantes de semilla de papa (Solznum tuberosum), Seguin Chévez & Ramiréz (2013) Obtener los explantes de yemas de tubérculos en invernadero Lavar con unas gotas de jabén liquide y eliminar los residuos mediante tres lavadas con agua estéril Sumergir los brotes en solucién de hipoclorito de sodio al 3% 0 utilizar cloro comercial al 40% mas tween-20 al 1% durante 10 minutos. A partir de este paso se debe trasladar a la cémara de flujo lamina Lavar con agua destilada esteril tres veces, cada lavado debe durar cinco minutos para eliminar los residuos de cloro. Proceder a la diseccién para la obtencidn del apice meristemético, Induccién a la embriogenesis La embriogenesis puede ser directa con células embriogénicas desarrolladas directamente del explante, 0 puede ser indirecta, con desorganizados ciclos mitéticos no embriogénicos interpuestos entre el explantes del tejido diferenciado y estructuras embriogénicas conocidas. (Merkle, 1990) La embriogénesis somatica es un proceso andlogo a la embriogénesis cigstica, donde una célula o un pequefio grupo de células sométicas son precursoras La caracteristica mas destacada de la embriogénesis somatica es que se producen estructuras bipolares capaces de formar raiz y brote, estos a su vez pueden llegar a formar plantas completas. (Martinéz, 2014) La regeneracion de plantas via embriogénesis somatica consta de cinco pasos: 1 Inicio del cultivo embriogénico cultivando el explante en medio suplementado con reguladores de crecimiento en su mayoria auxinas pero también citocininas 5. Proliferacién del cultivo embriogénico en un medio semisélido 0 liquide suplementado con reguladores de crecimiento en condiciones similares al inicio. Pre-maduracién de los embriones somaticos en medios sin reguladores de crecimiento. Maduracién de embriones somaticos en un cultivo suplementado con ABA y/o reduciendo el potencial osmotico. Regeneracién de plantas en medio sin reguladores de crecimiento Tipo de explantes. La embriogénesis ha sido inducida a partir de una gran variedad de tipos de explantes generalmente de embriones somaticos, cigoticos e inmaduros, semilla germinada, brotes meristematicos inflorescencias inmaduras, évulos, hojas, estigmas, estilo, células de raiz. (Martinéz, 2014) Fuentes de los explantes La papa ha mostrado una gran plasticidad en su desarrollo haciendo posible la regeneracién de plantas enteras a partir de diferentes fuentes de explantes. Asi por ejemplo se ha logrado regenerar plantas de papa (So/anum tuberosum 1). (Martinéz, 2014) Y Y Y > Discos de tubérculo, Brotes del tubérculos Anteras Hojas Raices Tamafio del explantes. El tamaiio del explantes sera de 2 a 5 milimetros de longitud esto para facilitar el manejo de desinfeccidn e inoculacién en el medio de cultivo. Medio de induccién. El medio de induccién para cultivos embriogénicos que se utilizara 2,4 D (Acido 2, 4-diclorofenoxiacético) este produce diferentes respuestas en el explante dependiendo de la concentracién sada. Induce a la divisién célular, atin en una misma concentracién puede inducir diferentes respuestas dependiendo de la citoquinina con que este combinado. (Medina, 1991) CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES. ACTIVIDADES: Enero Febrero | Marzo Abril | Mayo /2,3°4°1/2)3 4/1)2 3 4) 1/2) 3) 4/1) 2)3 Compra de materiales y x desinfeccién del equipo Limpieza del material x] x] x vegetal preparacion de los protocolos Prueba de verificacién de x) protocolos Obtencion de los X| x! explantes de papa limpieza de los explantes x| |x ‘Semana santa x Desinfeccion de x| x] x| explantes Verificacién de explantes x| desinfectados y libres de patégenos Preparacion de explantes x a la induccion embriogénica PRESUPUESTO. Contenido Cantidad | Precio unitario | Precio total Reactivos Hipoclorito de sodio NaCLO al 1%. 2g! us$ 5 us$ 10 Hipoclorito de calcio Ca(CLO)2 al 2% 209 us$ 2.5 us$ 50 Alcohol 90% 3a) us$ 10 us$ 30 Alcohol 70% 3g) usS 7 us$ 21 Celest (fungicida/acariciada) vit us$ 20 us$ 20 Tween 20 (desinfectante no ionico) 100 ml us$ 36 us$ 36 materiales Probeta de vidrio de 1000 ml 1 us$33.90 us$33.90 Enlemeyer de vidrio de 1000 ml 1 us$9.04 us$9.04 Beaker de vidrio de 100 ml 1 us$4.52 us$4.52 Agitador de vidrio 1 us$2.26 us$2.26 termémetro 1 us$45.20 us$45.20 Caja Petri de vidrio 4 us$6.78 us$27.12 Papeleria Fotocopias 60 us$0.02 us$1.20 Impresién blanco y negro 100 us$0.05 us$5.00 Impresién a color 15 us$0.15, us$2.25 Total us$ 297.49 13 BIBLIOGRAFIA. CENTA (Centro Nacional de Tecnologia Agropecuarias y Forestal "Enrique Alvarez Cérdova"). 2002. Guia Técnica Cultivo de la Papa. Ciudad Arce. SV. 36p. Chavez G, Ramirez A. 2013, Manual para la produccion de semilla certificada de papa. Quetzaltenango. GT. ICTA. 42 p Martinez P. 2014. Embryogenic response of potato (Solanum tuberosuml.) implemented different types of explants in tissue culture. Tesis para optar el titulo profesional de Maestro en Ciencias en Biotecnologia Agricola. Universidad Auténoma de Chapingo. MX. 85 p Marcano D, Pire A, Pire A. 1993. Evaluacion de diferentes medios de desinfectantes y fungicidas en el control de sarna comun Streptomyces scabies en semilla prebasica de papa Solanum tuberosum L. San Felipe. VE. Instituto Universitario Tecnolégico del Yaracuy. Volumen 43 Merkle S A. 1990. Maturation of yellow-poplar somatic embryos. US. New York. 186 p Medina L. 1991. Organogénesis in vitro a partir de Entrenudos Raices y Hojas de nueve Cultivares de Camote /pomoea batatas L. Aspectos Hormonales e Histolégicos. Tesis para optar el titulo profesional de Licenciado en Biologia. Universidad Peruana Cayetano Heredia. Lima. 179 p Toledo J, Espinosa N, Golmirzaie 4.1998. Cultivo de tejidos. Manejo de plantillas IN VITRO en la produccién de semilla de papa. CIP. Lima. PE. 429 15

Вам также может понравиться