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CAPITULO I

MARCO TEORICO

1.1 ENFERMEDADES DIGESTIVAS CAUSADAS POR EL H. PYLORI


1.1.1 GASTRITIS, DUODENITIS Y LESIONES ULCEROSAS

El Helicobacter Pylori se ha asociado a diferentes enfermedades, la mayora de ellas


del tracto digestivo, aunque tambin existen pacientes colonizados por la bacteria y
en los que, sin embargo, no se observan manifestaciones clnicas, permaneciendo
asintomtico:
Gastritis
Ulcera pptica
Ulcera duodenal y gstrica
Linfoma MALT y cncer gstrico

GASTRITIS
La gastritis crnica es uno de los procesos inflamatorios ms frecuentes del ser
humano y actualmente el H. Pylori es considerado como el agente causante de esta
enfermedad.

Gastritis aguda.- Etiologa y patogenia


La gastritis hemorrgica y erosiva aguda se inicia como una lesin epitelial causada
por hipoxia de la mucosa o por la accin directa de frmacos antiinflamatorios no

esteroides u otros agentes o trastornos lesivos (por ej. cidos biliares, enfermedad
del sistema nervioso central (lcera de Cushing), o reduccin del flujo sanguneo a
causa de estrs, traumatismo, quemaduras o sepsis). Cuando se rompen las
defensas de las mucosas, penetran cido, proteasas y cidos biliares hasta la lmina
propia, sitio en el que producen lesin vascular, estimulan a las terminaciones
nerviosas y activan la descarga de histamina y de otros mediadores. La gastritis
aguda por H. Pylori se define como una infeccin primaria aunada a inflamacin
aguda intensa, inicio repentino de sntomas e hipoclorhidria.

Cuadro clnico y diagnstico


El clnico suele descubrir la gastritis hemorrgica erosiva cuando valora a un
paciente con hemorragia de la parte alta del tubo digestivo. Durante la exploracin
endoscpica se manifiesta por petequias y pequeas erosiones rojas o negras. Las
lesiones inducidas por estrs se inician en el fondo y el cuerpo del estmago, incluido
el antro. Los datos histolgicos guardan una mala correlacin con las anomalas
definidas desde el punto de vista endoscpico y pueden consistir en epitelio en
regeneracin e inflamacin escasa. A veces las lceras agudas son concomitantes
de gastritis, en especial en caso de estrs y suelen ser mltiples, de gran tamao
(0.5 a 2.0 cm. De dimetro) y estar ubicadas en el fondo y el cuerpo gstricos.

Quienes padecen gastritis por H. Pylori se quejan de dolor epigstrico agudo, nusea
y vmito. La valoracin endoscpica pone de manifiesto anomalas antrales
sobresalientes que dan la impresin de linfoma o carcinoma. Desde el punto de vista
histolgico hay infiltracin intensa por neutrfilos, edema e hiperemia; estas
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manifestaciones

desaparecen

cuando

se

administra

tratamiento

antibitico

apropiado.

Gastritis crnica.- Gastritis por Helicobacter pylori


Etiologa y patogenia
Aunque el H. Pylori se encuentra en muchos pacientes que experimentan dispepsia
no ulcerosa, es dudoso que ejerza una funcin de primera importancia en la
generacin de los sntomas de estos pacientes. Sin embargo, la mayora de los que
tienen infeccin por H. Pylori no experimenta sntomas ni muestra datos
endoscpicos, aunque puede encontrarse gastritis crnica en la biopsia de su
mucosa gstrica. Existe una correlacin estrecha entre la inflamacin crnica y la
reaccin inmunitaria a H. Pylori. Los ttulos sricos de IgG contra H. Pylori se
correlacionan con la intensidad de la inflamacin y con el nmero de folculos
linfoides; stos, en el caso de la gastritis por H. Pylori pueden participar en los
linfomas de tejidos linfoides relacionados con la mucosa.

Se sabe que la infeccin por H. Pylori produce gastritis crnica activa con neutrfilos
intraepiteliales e intersticiales, adems de linfocitos y clulas plasmticas. En la
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mayora de los individuos la gastritis se mantiene circunscrita al antro. Sin embargo,


en otros progresa y afecta todo el estmago. Los pacientes con gastritis antral
nicamente

tienen

ms

posibilidades

de

desarrollar

lceras

duodenales

subsiguientes, en tanto que aquellos con pangastritis, sobre todo acompaada de


atrofia

metaplasia

intestinal,

corren

el

riesgo

de

lceras

gstricas

adenocarcinoma.

Gastritis qumica crnica.- Etiologa y patogenia

Los frmacos antiinflamatorios no esteroides (nonsteroidal anti-inflamatory drugs,


NSAID) y la bilis son las causas principales de gastritis qumica crnica, aunque
pueden ser tambin lesivos los complementos de hierro y de potasio. Las personas
expuestas a los NSAID durante varias semanas manifiestan un fenmeno adaptativo
que protege la integridad de la mucosa, pero en muchos casos esta adaptacin es de
breve duracin. La gastritis biliar es un trastorno crnico que se caracteriza por
reflujo del contenido intestinal cargado de bilis, hacia el estmago. Se diagnostica
con mayor frecuencia en los pacientes que se han sometido a piloroplastia o a
reseccin gstrica parcial. Se sabe que cidos biliares y lisolecitina inducen lesin
aguda de la mucosa gstrica, que se intensifica adems por la accin de las enzimas
pancreticas.

Cuadro clnico y diagnstico


Los sntomas disppticos motivan la valoracin del paciente en quien se sospecha de
gastritis qumica crnica. La mucosa gstrica de la gastritis qumica pone de
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manifiesto inflamacin mnima, pero puede haber hipoplasia foveolar, edema,


aumento de fibras del msculo liso de la lmina propia y dilatacin y congestin
vasculares.

DUODENITIS CRNICA
Duodenitis pptica.- Etiologa y patogenia
La expresin duodenitis pptica se refiere a los cambios de la mucosa duodenal que
resultan de exposicin crnica al cido gstrico. Puede haber inflamacin aguda o
crnica, en especial en caso de infeccin por H. Pylori.
La metaplasia de las clulas mucosas gstricas se caracteriza por sustitucin de la
mucosa duodenal por clulas secretoras de moco del tipo gstrico. Es una reaccin
adaptativa a la exposicin al cido y es ms frecuente en pacientes con lcera
duodenal, en varones y en fumadores. Es muy firme la relacin entre H. Pylori y la
metaplasia de las clulas mucosas gstricas en la duodenitis activa y puede ser un
precursor del desarrollo de lcera duodenal.

Cuadro clnico y diagnstico


Los pacientes con duodenitis pptica pueden encontrarse asintomticos o manifestar
sntomas disppticos idnticos a los de la enfermedad ulcerosa pptica. La
valoracin endoscpica puede revelar eritema, edema y erosiones. Aunque rara vez
obtenidas, las muestras de biopsia duodenal pueden poner de manifiesto infiltracin
por neutrfilos y leucocitos mononucleares. Puede observarse colonizacin por H.
Pylori de la mucosa duodenal metaplsica, no as de la normal.

1.1.2 ULCERA PEPTICA


Es una erosin circunscrita que atraviesa la mucosa muscular y que aparece en el
duodeno, el estmago (sobre todo en el antro) y en la zona inferior del esfago. La
sintomatologa se caracteriza por la presencia de dolor y malestar epigstrico que
suele empeorar cuando el estmago est vaco o se ingieren comidas picantes,
alcohol, cafena o tabaco. Presentan nuseas, vmitos, cambios de apetito, prdida
de peso, dispepsia e intolerancia a las comidas. Las lceras ppticas pueden
presentar varias complicaciones entre las que cabe destacar la obstruccin intestinal,
la hemorragia y la perforacin que se acompaa frecuentemente de dolor de
espalda, sangrado y alteraciones sistmicas.

La etiopatogenia est relacionada con un desequilibrio entre los factores protectores


de a mucosa y los factores agresores de la misma, sobre todo el cido gstrico. La
produccin de ClH depende de las clulas parietales que estn en la mucosa
gstrica, las cuales estn estimuladas por la gastrina que procede de las clulas G,
la histamina y la acetilcolina liberadas por el sistema parasimptico, que a su vez,
sensibiliza a las clulas G para la histamina. En los ltimos aos ha acaparado
mucho inters el Helicobacter pylori en la etiologa de esta enfermedad. El h. Pylori
debilita el revestimiento mucoso que protege el estmago y el duodeno, lo cual
permite que el cido afecte la superficie sensible que se halla por debajo de dicho
revestimiento. Por efecto tanto del cido como de las bacterias, esa superficie
delicada se irrita y se forma una llaga o lcera.

El H. Pylori puede sobrevivir en el cido del estmago porque secreta enzimas que lo
neutralizan. Este mecanismo permite que H. Pylori se abra paso hasta la zona
segura, o sea, el revestimiento mucoso protector. Una vez que llega all, la forma de
espiral que tiene la bacteria le ayuda a perforar dicho revestimiento.

1.1.3 ULCERA GASTRICA Y DUODENAL


La prevalencia de la enfermedad ulcerosa es del 12 al 17% en los pases
desarrollados, y por tanto supone un importante problema clnico. La infeccin por H.
Pylori est presente en el 95 al 97% de los pacientes con lcera duodenal y en el
83% de los pacientes con lcera gstrica. La gastritis por H. Pylori es un factor de
riesgo de lcera gastroduodenal y no una consecuencia de la lcera. La probabilidad
de recurrencia de una lcera gastroduodenal es de alrededor del 1 11% cuando la
gastritis crnica est presente, comparada con alrededor del 1% en la ausencia de
gastritis crnica. Sin embargo, no hay una relacin de causa- efecto sitemtica,
puesto que la prevalencia de la gastritis crnica en la poblacin francesa, por
ejemplo, es de alrededor del 50% y la enfermedad ulcerosa est alrededor del 10%.

Si excluimos las lceras secundarias al uso de AINES y las muy raras enfermedades
como

el

Sndrome

de

Zollinger

Ellison,

prcticamente

todas

las

lceras

gastroduodenales estn asociadas a una gastritis crnica por Helicobacter pylori.

Con la erradicacin de helicobacter pylori y la desaparicin de la gastritis activa


desaparece casi completamente el riesgo de recidivas ulcerosas.

Sntomas de una lcera


El dolor es el sntoma ms comn. Generalmente, el dolor de la lcera:

Es de carcter sordo y persistente


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Aparece y desaparece durante varios das o semanas

Se presenta entre dos y tres horas despus de comer

Se presenta en la mitad de la noche (cuando el estmago est vaco)

Se mitiga ingiriendo alimentos.

Puede haber otros sntomas como:

Prdida de peso

Prdida del apetito

Distensin del abdomen

Eructos

Nuseas

Vmitos

Algunas personas presentan tan solo un sntoma leve o ningn sntoma.

Sntomas de urgencia:

Dolor de estmago de carcter agudo, repentino y persistente.

Evacuacin de heces fecales sanguinolentas o negras.

Vmito de sangre.

Estos pueden ser signos de un problema grave, como por ejemplo:

Perforacin: cuando la lcera perfora la pared del estmago o el duodeno.

Hemorragia: cuando el cido del estmago o la lcera rompen un vaso


sanguneo.

Obstruccin: cuando la lcera bloquea el trayecto de los alimentos que van a salir
del estmago.
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Diagnstico de la lcera

Para ver si los sntomas son causados por una lcera, el mdico puede ordenar una
serie esofagogastroduodenal (GI series) o una endoscopia. La serie es un estudio
con rayos X del esfago, el estmago y el duodeno.

Se da a beber al paciente un lquido de consistencia parecida al yeso que se llama


bario y que sirve para que estos rganos y cualquier posible lcera se vea ms
claramente en la radiografa.

La endoscopia es un examen que se hace con el endoscopio, que es un tubo fino


provisto de una luz y una cmara diminuta en la punta. Despus de haberle dado un
sedante ligero al paciente, el mdico introduce cuidadosamente el endoscopo por la
boca de la persona y lo va haciendo bajar por la garganta hasta llegar al estmago y
el duodeno. De esta manera, el mdico puede observar directamente el
revestimiento del esfago, el estmago y el duodeno.

El mdico puede valerse del endoscopio para tomar fotos de las lceras o para
extraer un fragmento diminuto de tejido para examinarlo con el microscopio. Por lo
general, esta prueba se realiza con ayuda de tranquilizantes.

Imagen de lcera duodenal observada mediante endoscopia digestiva

En la imagen se observa el aspecto de la mucosa del duodeno cuando se realiza una


endoscopia digestiva en un paciente con lcera duodenal asociada a H. Pylori

Imagen de una lcera gstrica observada mediante endoscopia digestiva

En la imagen se observa el aspecto de la mucosa del estmago cuando se realiza


una endoscopia digestiva en un paciente con lcera gstrica asociada a H. Pylori.

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1.1.4 LINFOMA MALT Y CANCER GASTRICO


Actualmente existen suficientes datos epidemiolgicos, experimentales y clnicos
para asociar a los linfomas MALT del estmago con la infeccin por H. Pylori. La
prevalencia de la infeccin por H.Pylori en pacientes con linfomas MALT vara entre
el 63 y el 97.7%. El linfoma gstrico constituye aproximadamente el 3% de las
neoplasias gstricas.

El H. Pylori ha sido clasificado como un carcingeno de grado 1, dicho ciertamente


por la agencia Internacional de bsqueda sobre el cncer (International Agency for
Research on Cancer, 1994). Una prevalencia ms elevada de infeccin por
Helicobacter pylori, evaluada por serologa, existe en los enfermos de cncer gstrico
en comparacin con los testigos.

11

Definicin
MALT: Tejido linfoide asociado a mucosas (Isaacson y Wright, 1983). El linfoma
MALT es un linfoma no Hodkin de clulas B, extranodal, encuadrado dentro del
grupo de los linfomas de la zona marginal.

Es un linfoma que predomina en la edad adulta, ms frecuente en mujeres y que


constituye el 5-10% de las neoplasias gstrica.

Etiologa
Suele existir antecedente de enfermedad autoinmune o inflamatoria. En concreto al
linfoma MALT se le asocia con el Sndrome de Sjgren, tiroiditis de Hashimoto y
gastritis asociada a Helicobacter pylori

Patogenia
El proceso comienza con una inflamacin de la mucosa gstrica con ms o menos
grado de destruccin de foveolas gstricas. El H. Pylori se aloja en ellas creando una
nube de amonio gracias a que posee una enzima, la ureasa, para defenderse del
medio cido. All acta extracelularmente sobre las vacuolas de mucina y
provocando en muchos casos una erosin de la mucosa. Inicialmente puede existir
una gastritis antral difusa y los linfocitos emigran a territorio gstrico, hasta los
capilares de la lmina propia. Posteriormente puede aparecer una colonizacin de
los folculos con rara infiltracin medular. En caso extremo se desarrollar el linfoma
tipo MALT gstrico.

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Clnica
Los pacientes con linfoma MALT suelen presentar sntomas como dolor abdominal,
prdida de peso, fatiga, sensacin de plenitud, nuseas y vmitos y hasta en un 1020 % de casos, segn algunos autores es posible palpar masa abdominal.

Cncer gstrico
El H. Pylori es considerado un factor de riesgo en el desarrollo del cncer de
estmago, con una prevalencia de infeccin por H. Pylori entre el 69 y el 94% en
pacientes con cncer gstrico, comparado con el 47 al 76% en el grupo control, lo
que supone un riesgo relativo de 3.8 para el desarrollo de cncer en los pacientes
infectados.

Esta bacteria fue integrada en el modelo de carcinognesis gstrica descrita por


Correa, como un agente promotor en la etapa inicial de la carcinognesis. Esta
primera etapa va de la inflamacin del corin a la atrofia progresiva, con metaplasia
intestinal, luego displasia que precede el cncer. Los mecanismos potenciales de
carcinognesis del H. Pylori pasaran por la produccin de radicales libres por los
polimorfos nucleares activos y la disminucin de la tasa de vitamina C intragstrica
de protegerse contra la acumulacin de nitrosaminas carcingenos alimentarios.

La infeccin por H. Pylori no es suficiente para inducir un cncer gstrico, se


necesitan tambin los factores ambientales y genticos que intervienen en las etapas
ms tardas de la carcinognesis. Como ilustracin tenemos a la China, que tiene
una alta tasa de infeccin por H. Pylori y una pobre incidencia de cncer. Otros
13

factores hipotticos pueden intervenir: esperanza de vida limitada, nutricin rica en


vitamina C, por ejemplo.

1.2 MICROBIOLOGIA DEL AGENTE


1.2.1 Definicin
El Helicobacter Pylori (anteriormente clasificado como Campylobacter Pylori) es
una bacteria gramnegativa de forma espiral, de 0.5 micrones de dimetro y que
flucta entre 2 y 6.5 micrones de longitud. Sus principales caractersticas
distintivas son los flagelos unipolares de mltiples vainas y su potente actividad
de ureasa. La forma y los flagelos del microorganismo le permiten penetrar y
moverse a travs de la mucosa gstrica. Su actividad de ureasa al parecer es
esencial para la colonizacin y la sobrevida. La ureasa tambin constituye la base
de las pruebas diagnsticas para la infeccin. Aunque se describieron
inicialmente bacterias gstricas en el estmago humano a fines del siglo pasado,
su importancia en la lcera pptica y en la gastritis crnica no se reconoci sino
hasta principios del decenio de 1980. El H. Pylori fue cultivado satisfactoriamente
por primera vez en 1982 por Marshall y Warren.

1.2.2 Clasificacin: de campylobacter a helicobacter


En los primeros estudios realizados con esta bacteria, se pens que poda ser
una nueva especie dentro del gnero Campylobacter por su aspecto en la tincin
de Gram y su requerimiento microaeroflico para lograr su cultivo, aunque
presentaba ciertas caractersticas atpicas. Sin embargo los estudios genmicos
14

modernos, especialmente el anlisis de secuencias del cido ribonucleico


ribosomal 16s (ARNr), permitieron demostrar que campylobacter y Helicobacter
eran dos gneros diferentes.

Desde su cultivo en 1983 ha recibido diferentes denominaciones hasta adquirir el


nombre definitivo:

CLO (Campylobacter like organism),

GCLO (Gastric campylobacter like organism),

Campylobacter pyloridis

Campylobacter pyloric

Campylobacter pylori

Helicobacter pylori: (1989) especie tipo de un nuevo gnero, helicobacter.

Helicobacter, Campylobacter, Arcobacter y Wolinella pertenecen a un grupo distinto


de bacterias (Superfamilia VI del ARNr) que est relacionado lejanamente con otras
eubacterias.

Las especies del gnero Helicobacter se han dividido en las que viven en el
estmago y las que viven en el intestino tanto del hombre como de los animales. Ver
tabla 1.

15

TABLA 1. Bacteria del gnero helicobacter y sus asociaciones (Dr. Martin Skirrow.
En: Helicobacter pylori: microbiologa , Clnica y tratamiento: Retos para el siglo XXI,
Prous Science, 1999)

Especies

Flagelos

Husped habitual Asociacin

Nmero

Tipo a

4-8

Up/Bp

Gstricas
bH.

Pylori

Hombre

Gastritis crnica activa; fuerte


asociacin con lcera pptica y

(especie tipo)

cncer gstrico

H. mustelae

4-8

Bp,L

Hurones

H. nemestrinae

4-8

Up/Bp

Macaco

H. acinonyx

4-8

Up/Bp

Leopardo

No patologa, a veces gastritis y


ulceracin
No patologa
Gastritis

H. felis

14-20

Bp,F

Gato, perro

No patologa/a veces gastritis

H. bizzozeronii

10-20

Bp

Perro

No patologa?

H. salomonis

5-7

Bp

Perro

No patologa?

>9

Bp

Gato y perro?

Gastritis crnica activa (no

H. Heilmannii

comn en hombre) gastritis en


gatos y perros?

Intestinales
b

H. Cinaedi

1-2

Up/Bp

Hmster

H. Fennelliae

1-2

Up/BP

H. Canis

Bp

Perro

No patologa en hmster;
proctocolitis en hombres
homosexuales
Proctocolitis en hombres

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H. Westmeadii

Up

homosexuales
Enteritis, hepatitis?Aislado de
un nio
Bacteriemia en hombres con
SIDA

H. Pullorum

Up (noE)

Pollo

Hepatitis vibrionica?

H. pametensis

Bp

Gaviotas, cerdo

H. cholecystus 1

Up

Hmster

Colangiofibrosis, pancreatitis

H. hepaticus

Bp

Ratones

Hepatitis; coloniza en ciego y

H. bilis

3-14

Bp,F

Ratones

H. rodentium

Bp (noE)

Ratones

H. muridarum

10-14

Bp,F

Roedores

H. trogontum

5-7

Bp,F

Rata

10-20

Bp,F

Ovejas, ratones colonizar en estmago y

Flexispira

rappini

colon
Hepatitis; coloniza en ciego y
colon

No patologa, puede
causar gastritis en roedores
viejos
No patologa conocida
Abortos ovinos; ha sido
aislado de pacientes con
diarrea crnica

Up: unipolar, Bp: bipolar, L: lateral, F: fibrillas periplsmicas, (noE): no envainados


*infecciones en el hombre.

1.2.3 Representacin del genoma


17

En Agosto de 1997 se public la secuencia completa del genoma de H. Pylori 26695,


solo 15 aos despus de que se cultivara por primera vez. Era el sexto genoma de
procariotas secuenciado . Posteriormente en Enero de 1999, se ha secuenciado el
genoma completo de J99, otra cepa de H. Pylori, permitiendo la comparacin de los
genomas.
El conocimiento del genoma permite estudiar los genes especficos de H. Pylori que
son esenciales para la colonizacin, la patogenicidad o la supervivencia de la
bacteria.
Representacin grfica del genoma de H. Pylori 26695
Se puede observar el tamao del genoma y los colores corresponden a regiones que
codifican para protenas con funciones diversas (Tomb et al. Nature 1997; 388: 539547).

1.2.4 Visin microscpica

18

El H. Pylori se tie como las bacterias Gram negativas y se pueden observar en


forma de bacilos curvados o espirales cuando se encuentran en la mucosa gstrica,
aunque algo ms rectos cuando se encuentran en medios de cultivo artificiales.
La visin microscpica cuando se utilizan colorantes cromognicos (por ejemplo,
bromuro de etidio), muestra imgenes muy definidas.

Imagen del H. Pylori en tincin de Gram


Cuando se realiza una tincin de Gram a partir de una extensin de biopsia de antro
gstrico se pueden observar los bacilos de morfologa curvada y Gramnegativos.

Tincin con Bromuro de Etidio a partir de biopsia gstrica


El bromuro de etidio es capaz de intercalarse entre las bases del ADN de la bacteria
y emite fluorescencia que permite su observacin en un microscopio de

19

fluorescencia. En esta imagen se puede observar la morfologa espiral o de


sacacorcho del H. Pylori.

Tincin de Gram a partir de un cultivo en placa de agar de H. Pylori


Cuando el H. Pylori crece en medios artificiales pierde su estructura completamente
espirilar o de sacacorcho y adquiere una estructura algo ms recta aunque sigue
siendo curvado. Se observa de color rosa debido a su estructura de bacilo
Gramnegativo.

20

1.2.5 Cultivo
Es una bacteria exigente y necesita:

Una atmsfera adecuada, microaeroflica, con una baja concentracin de oxgeno


y alta concentracin de anhidrido carbnico. (5-10%).

Un medio de cultivo rico en nutrientes y que contenga sangre de carnero, caballo


o humana o productos derivados de la sangre.

Un perodo de incubacin extraordinariamente prolongado (de 7 a 10 das a 35)


comparado con el resto de las bacterias Gramnegativas.

Cuando esta bacteria crece en los medios de cultivo se observa como colonias
pequeas, brillantes y transparentes. Se recomienda la utilizacin de un medio
21

selectivo para evitar la contaminacin con otros microorganismos. El H. Pylori puede


conservarse, una vez crecido en un congelador a 80C o en nitrgeno lquido.

El transporte de los microorganismos ya crecidos entre diferentes centros, puede


realizarse mediante transporte urgente sin atmsfera especial.

1.2.6 Caractersticas bioqumicas

El H. Pylori posee diferentes enzimas que utiliza para obtener energa o para
defenderse del ambiente hostil en el que se encuentra. Estas caractersticas
bioqumicas se han utilizado como mtodos de identificacin. Las enzimas
principales que pueden detectarse en el laboratorio y que permiten una identificacin
correcta de H. Pylori son:

Ureasa. Es una enzima capaz de hidrolizar la urea produciendo amonio y como


consecuencia

se

produce

una

alcalinizacin

del

ambiente

prximo.

Esta

22

caracterstica puede detectarse en el laboratorio mediante el cambio de color (rosa)


que se produce al variar el pH del medio que contiene urea.

Imagen de la pueba de la ureasa

En la imagen se pueden observar dos tubos que contienen urea. Cuando el tubo no
ha sido inoculado con H. Pylori el medio es de color naranja claro (tubo de la derecha
de la imagen). Sin embargo si se inocula con una suspensin de una bacteria
productora de ureasa, esta hidroliza la urea y el medio cambia de color como
consecuencia de un cambio en el pH (tubo de la izquierda de la imagen de color
rosa)

23

Catalasa. Es una enzima capaz de descomponer el agua oxigenada y convertirla en


agua liberando oxgeno. Esta liberacin de oxgeno se observa visualmente como
produccin de burbujas.

Imagen de la prueba de la catalasa

24

En la imagen se puede observar la liberacin de oxgeno como consecuencia de la


actuacin del enzima catalasa, a partir de un tubo con agua oxigenada que ha sido
inoculado con H. Pylori.

1.2.7. Caractersticas de virulencia


Las enzimas metablicas que posee pueden ser utilizadas por el H. Pylori para
producir dao en los tejidos y para defenderse de las condiciones adversas del
ambiente en el que debe sobrevivir. Pero, adems, el H. Pylori posee otras
caractersticas que le permiten colonizar la mucosa gstrica del estmago, inducir
daos en los tejidos o liberarse de los mecanismos de defensa del husped. Entre
las caractersticas de virulencia podramos destacar:

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La estructura espiral. La propia estructura de la bacteria le permite introducirse a


travs de la capa de moco gstrico actuando de forma similar a un sacacorchos y
favoreciendo por lo tanto el acercamiento a las clulas epiteliales gstricas.
La movilidad. Posee de 4 a 6 flagelos polares que le confieren una gran movilidad y
le permiten llegar a la mucosa y no ser eliminado por los mecanismos defensivos del
husped.
Las adhesinas. Posee una gran variedad de adhesinas que reconocen de forma
especfica a los receptores de la mucosa gstrica y se unen a ellos comenzando la
colonizacin bacteriana.
La toxina vacuolizante. Se ha descrito la presencia de una toxina que produce la
formacin de grandes vacuolas en las clulas eucariticas. Este efecto lo producen
ms de la mitad de los aislamientos clnicos de H. Pylori y aquellos que poseen la
toxina se han asociado con cuadros ms graves de enfermedad. La toxina est
codificada por un gen denominado vacA que est presente en todos los aislamientos,
produzcan o no la toxina, aunque la secuencia del gen parece ser diferente.

1.2.8 Transmisin
Se desconoce cul es el mecanismo exacto de transmisin pero parece que resulta
imprescindible que se produzca un contacto estrecho entre personas para que tenga
lugar. Aunque el cultivo de H. Pylori en muestras obtenidas de la boca (placa dental,
saliva, lengua o mucosa de la mejilla) es difcil y por ello las conclusiones de los

26

diferentes trabajos son controvertidas, se piensa que podra ocurrir una colonizacin
transitoria de la cavidad oral en casos de reflujo o en pacientes sometidos a
endoscopia; utilizando la tcnica de PCR para la deteccin de la bacteria, los
resultados de prevalencia en este tipo de muestras fluctan desde valores elevados,
hasta resultados prximos a cero y en algunos casos, las cifras son difcilmente
correlacionables con la prevalencia que por el mismo mtodo, se obtena en esos
estudios cuando se analizaban muestras de mucosa gstrica.
La transmisin instrumental, s est por el contrario perfectamente documentada;
estudios de prevalencia en gastroenterlogos, endoscopistas arrojan resultados ms
elevados que la encontrada en la poblacin general, e incluso que en otros
profesionales sanitarios como neumlogos u odontlogos que, por otra parte estn
expuestos de forma continua a aerosoles orales, lo que lleva a pensar que el riesgo
de infeccin no est tanto en las secreciones salivales como en las gstricas,
aseveracin apoyada por un trabajo reciente que detecta DNA en el canal del
endoscopio, por trabajos que consiguen cultivar la bacteria a partir de muestras de
jugo gstrico y por estudios que concluyen que el moco gstrico expulsado durante el
vmito constituye una va muy importante de transmisin de la infeccin en la
poblacin infantil.
Transmisin fecal- oral
El cultivo de formas viables de la bacteria en muestras de heces apoya la hiptesis
de esta va de transmisin. Sin embargo, los resultados de los diferentes trabajos son
poco coherentes, lo que podra justificarse aludiendo a la presencia en la muestra de

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sustancias capaces de disminuir o inhibir el crecimiento bacteriano (sales biliares,


polisacridos) o bien por la existencia de caractersticas ambientales (deprivacin de
nitrgeno y carbono que hacen que la bacteria adopte su forma resistente cocoide de
difcil replicacin en cultivo.
La transmisin intrafamiliar tampoco est suficientemente esclarecida y aunque
numerosos estudios sealan una mayor prevalencia de infeccin en familiares de
nios o cnyuges infectados, siempre queda la explicacin alternativa de la
existencia de una fuente comn de infeccin.
Situaciones de hacinamiento o de estrecha convivencia s se asocian en casi todos
los estudios a una mayor prevalencia de la infeccin, lo que tambin apoyara los
mecanismos de transmisin de persona a persona, de tipo oral oral y/o fecal oral
o tambin apuntara de nuevo hacia la existencia de una fuente comn de infeccin.
Reservorio animal
El hbitat especfico del H. Pylori es la mucosa gstrica del hombre, aunque otros
reservorios animales y algn tipo de transmisin zoontica es una posibilidad que ha
de tenerse en cuenta. Se ha detectado la bacteria en primates, en cerdos y en gatos
domsticos pero no se tiene evidencia de que estos animales sean fuente de
contagio para el hombre. El reciente aislamiento de la bacteria desde la mucosa
gstrica

inflamada

de

gatos

domsticos

la

posibilidad

de

infectar

experimentalmente a los mismos, aumenta la posibilidad de que exista una


transmisin zoontica desde y hacia animales que estn en contacto directo con los
humanos. Un estudio italiano analiz serolgicamente la prevalencia de infeccin en
28

trabajadores de mataderos encontrando valores ms elevados entre los matarifes y


despiezadores que entre los trabajadores de las oficinas y el resto del personal del
matadero. Tambin se especula con la posibilidad de que las moscas domsticas
sean capaces de ingerir bacterias viables desde las heces

y guardarlas en sus

tractos intestinales, haciendo as la funcin de reservorio.


Las moscas transportaran las bacterias y las eliminaran junto con sus excrementos
que se depositaran en forma directa sobre comidas o membranas mucosas de la
boca de nios pequeos; en este caso estaran ejerciendo de vectores de
transmisin, posibilidad que parece cumplirse en sociedades en vas de desarrollo en
las que las condiciones sanitarias no son muy estrictas.
Fig. 1. Mecanismo de transmisin de la infeccin por H pylori
H. Pylori

FLUIDO GASTRICO

H. Pylori

MUCOSA GASTRICA
REFLUJO

H. Pylori

GASTROESOFAGICO

EN INTESTINO

CAVIDAD
BUCAL:
Saliva
Placa dental
Mucosa dental

H. Pylori
EN HECES

Moscas
Aguas residuales

MEDIO AMBIENTE

29

1.2.9

Diagnstico

Existen diferentes mtodos para diagnosticar la infeccin producida por H. Pylori. Los
mtodos pueden diferenciarse segn el tipo de muestra que se utiliza, si requieren o
no la endoscopia (agresivos o no agresivos) y a la forma de detectar el
microorganismo (directamente la propia bacteria o de forma indirecta).
La Conferencia de consenso de la Sociedad Europea de Gastroenterologa en
Asistencia Primaria (ESPCG) celebrada en Zurich los das 9 y 10 de Mayo de 1998,
identific un conjunto de pruebas recomendadas para detectar la infeccin por H.
Pylori:
Pruebas en la consulta del mdico:

Prueba del aliento con urea marcada con C13 o C14: Prueba de gran fiabilidad
para el diagnstico y para confirmar la erradicacin. Es importante suspender
antisecretores, bismuto y antibiticos dos semanas antes del test.

Serologa o sangre completa: El mdico debe conocer la sensibilidad y


especificidad de estas pruebas.

Pruebas hospitalarias:

En el laboratorio (ELISA): Requiere validacin local para el diagnstico. No es


adecuado para confirmar la erradicacin.

Prueba del aliento con urea marcada con C13 o C14.


30

Endoscopia con biopsia para el test rpido de la ureasa: Prueba de gran fiabilidad
para el diagnstico y para confirmar la curacin. Es importante realizarla cuatro
semanas despus de finalizar el tratamiento.

1.2.10 Tratamiento
De la misma manera que en cualquier proceso infeccioso, es necesario el
conocimiento de la sensibilidad o resistencia del Helicobacter pylori a los distintos
antibiticos para erradicar el microorganismo y curar la infeccin.
Compuestos utilizados en el tratamiento
Compuestos no antibiticos:

Sales de bismuto

Inhibidores de la bomba de protones de las clulas parietales gstricas


(Omeprazol, Lansoprazol, Pantoprazol, Rabeprazol)

Antagonistas de los receptores H2 (Ranitidina, Famotidina, Cimetidina)

Ranitidina citrato de bismuto (RBC).

Antibiticos:

Betalactmicos: Amoxicilina

Macrlidos: Azitromicina, Claritromicina y Roxitromicina.

Tetraciclina.
31

Un esquema de tratamiento triple de dos semanas que combina bismuto,


metronidazol y tetraciclina o amoxicilina, elimina la infeccin en 75 a 90 % de los
pacientes. Es menos eficaz en el caso de microorganismos resistentes al
metronidazol. Adems, el rgimen es complicado y se acompaa de cumplimiento
deficiente as como de efectos secundarios.
Los

regmenes alternativos comprenden un esquema de dos semanas de un

inhibidor de la bomba de cido como el omeprazol y la amoxicilina o claritomicina.


Aunque son ms sencillos de tomar y se acompaan de menos efectos secundarios
que el tratamiento triple, tales regmenes son un poco menos eficaces; los ndices de
erradicacin fluctan entre 70 y 80 %. Para lograr una eficacia mxima, deber
iniciarse al mismo tiempo el tratamiento con omeprazol y un antibitico.

1.2.11 El punto dbil del Helicobacter Pylori


Hasta el momento se desconoca de qu manera el Helicobacter Pylori poda
sobrevivir en el medio cido del estmago. Pues bien, esto se ha descubierto y esta
revelacin hace que la bacteria comience a mostrar sus puntos dbiles.
Cientficos

de

la

Universidad

de

California

han identificado

un

canal

transmembrana ubicado en la superficie del H. Pylori que permite controlar el


volumen de lcali producido por la bacteria para combatir el cido gstrico y as
sobrevivir en ese hostil medio. Estos investigadores, adems, han podido ubicar el
gen que codifica la sntesis de dicho canal. La mayor importancia del descubrimiento

32

radica en la posibilidad de utilizar este gen como objetivo teraputico en un futuro no


muy lejano.
Cuando el cido gstrico ingresa al citoplasma del H. Pylori, ste activa su enzima
ureasa, la cual convierte la urea a dixido de carbono y amonio. Este ltimo logra
neutralizar el cido ingresado, permitiendo al germen la colonizacin del estmago
sin mayores problemas. Aparentemente, el pasaje de urea al citoplasma es regulado
por una protena denominada Ure I, miembro de la familia de las amidoporinas.
Si esta protena no est presente, menos cantidad de urea ingresa y, por lo tanto,
menos amonio se produce para neutralizar el cido. Sin la habilidad de neutralizar el
cido, el H. Pylori se destruye en forma inmediata. Es decir, todo aquello capaz de
inhibir a la protena Ure I sera potencialmente bactericida para dicha bacteria.
Todo parece indicar que se acabaron los secretos del Helicobacter y que este es el
punto de partida en la erradicacin de esta bacteria responsable de no pocos casos
de gastritis, lceras y algunos cnceres de estmago.

33

1.3

FACTORES ASOCIADOS A LA INFECCION POR H. PYLORI


Se consideran factores de riesgo para la infeccin con Helicobacter pylori: el
estado socioeconmico bajo, condiciones de hacinamiento y condiciones
sanitarias no ptimas. Los gastroenterlogos tienen una prevalencia de la
infeccin ms alta que la esperada, quiz por el contacto con las secreciones
gstricas infectadas y el equipo endoscpico. No obstante, en la actualidad tal
transmisin es menos probable ya que la mayora de los mdicos se apegan a las
precauciones universales durante los procedimientos endoscpicos. En Per, la
infeccin se ha relacionado desde el punto de vista epidemiolgico con el
suministro de agua municipal en comunidades de bajo nivel socioeconmico.
Al ser la infeccin por H. Pylori un proceso de larga evolucin con destruccin y
reparacin epiteliales constante, aunque de intensidad leve, una porcin de
pacientes infectados en los que concurran otros cofactores tales como dieta rica
en sal y baja en antioxidantes naturales, reflujo biliar y otros, va a desarrollar
gastritis crnica atrfica antral con metaplasia intestinal extensa en edades tanto
ms avanzadas cuanto ms tarda haya sido la adquisicin de la infeccin. Los
pacientes con esta lesin presentan un riesgo superior de padecer cncer
gstrico que los pacientes sin infeccin y sin atrofia.
Todos estos datos son consistentes con un modelo multifactorial en el que
adems de los ya mencionados, influyen otros factores exgenos como pueden
34

ser el tabaquismo, los AINE, la produccin de verduras en la dieta, la vitamina C,


la vitamina A y otros factores no conocidos.
1.3.1 Factores ambientales: Agua
Uno de los primeros ensayos que relacionaron la procedencia del agua
consumida con el riesgo de infeccin por la bacteria, se llev a cabo en poblacin
infantil (de 2 meses a 12 aos), en diversas comunidades de Per, mediante un
estudio epidemiolgico similar al que en 1855 llev a John Snow a desentraar
los orgenes de una epidemia de clera en Londres y por el que identificaba la
procedencia del agua como el principal factor de riesgo de la misma. El estudio
peruano llega a esta misma conclusin y demuestra que el agua es la variable de
riesgo ms importante, por encima incluso que el status socioeconmico de los
grupos poblacionales. Un estudio posterior confirma estos resultados analizando
en 28 muestras de agua de diversas zonas del Per la existencia de la bacteria;
utilizan un mtodo de separacin con bolas inmunomagnticas y reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR). La hiptesis del agua como factor de riesgo se
estableci en 1987 y se ha confirmado en estudios de laboratorio en los que se
ha demostrado en experimentos in vitro que la bacteria puede sobrevivir en
microambientes acuticos como forma viable, aunque en estado durmiente; estas
formas silentes se denominan cocoides y poseen una resistencia mayor que la
forma bacteriana normal, lo que las ayuda a sobrevivir en ambientes hostiles
durante largos perodos de tiempo gracias al desarrollo de un estricto
metabolismo endgeno. Cuando el ambiente se vuelve ms propicio, son
capaces de transformarse de nuevo en partculas infectantes helicoidales.
35

Las aguas residuales y de pozos o ros son ambientes hostiles y por ello,
favorables al desarrollo de estas formas cocoides y su utilidad para el consumo o
para el riego, las convierten, por tanto en un potencial vector de transmisin; esta
aseveracin se ha visto reforzada por un estudio realizado en Chile en el que se
encontr mayor prevalencia de infeccin en sujetos que consuman verduras
frescas frente a los que las consuman cocinadas. Aunque las formas cocoides no
son fcilmente cultivables, un estudio reciente por tcnicas de citometra de flujo
ha demostrado su viabilidad en agua durante largos perodos de tiempo en
especial a temperaturas bajas (4C- 15C), lo que confirma al agua como
reservorio y vector de transmisin, sobretodo la procedente de ros, fuentes,
manantiales y pozos que mantienen temperaturas prximas a los 15C durante
todo el ao.

1.3.2 Factores socioeconmicos


El hecho contrastado de que adultos mayores de 50 aos de pases desarrollados
presenten una elevada prevalencia, apunta hacia la hiptesis que los cambios
socioeconmicos que apoyan las mejoras de las condiciones higinicas y de
calidad de vida (empleo de aguas depuradas para el consumo, refrigeracin de
los alimentos, no hacinamiento en las viviendas) haya contribudo a la
disminucin de la adquisicin de la infeccin en esos mismos pases.
Recientemente se han publicado los resultados de un estudio de prevalencia de
la infeccin (medida por serologa) en nios en Suecia a los que se hizo
36

seguimiento desde los 6 meses hasta los 11 aos de edad. Este estudio concluye
que la prevalencia ms elevada (10%) es la correspondiente a los 2 aos de
edad, seguida por la encontrada a los 4 aos (7.5%) mientras que a los 11 aos
los valores haban disminudo hasta un 3%, deducen que la infeccin no tiene
carcter permanente en la mayora de los casos. Este fenmeno de aclaramiento
espontneo puede achacarse a mltiples causas: tratamiento con antibiticos,
diferencias infectivas entre las cepas encontradas en nios y en adultos,
diferencias en la expresin de los receptores celulares de la mucosa del
estmago, etc. Este estudio tambin seal que 3 nios que haban sido positivos
a los 6 meses se convirtieron a los 8, presumiblemente como consecuencia de la
disminucin/ desaparicin de los anticuerpos adquiridos de la madre.
En relacin a las curvas de prevalencia de la infeccin de diferentes comunidades
y/o pases los resultados son poco coherentes. Se piensa que las diferencias que
se encuentran entre ensayos estn determinadas por las diferencias entre
poblaciones en relacin a la incidencia de la infeccin de edades tempranas de la
vida. De acuerdo con esta variable, Pounder y col clasifican las reas geogrficas
en dos grandes grupos: Grupo 1: reas de incidencia elevadas en la infancia y
donde la infeccin se cronifica y persiste hasta la edad adulta. Pertenecen a este
grupo pases en vas de desarrollo en los que se alcanzan cifras muy elevadas de
prevalencia: 85% en Nigeria o 72% en Argelia y Grupo 2: reas donde la
incidencia es baja durante la infancia y la prevalencia de infeccin aumenta a lo
largo de las etapas de la vida. A este grupo pertenecen EEUU. Japn, Inglaterra,
Finlandia, Francia, Blgica pases donde los hbitos higinicos han mejorado
37

en los ltimos aos, lo que indica que la disminucin de la incidencia de la


infeccin es paralela al aumento de la calidad de vida y a los cambios en los
hbitos higinicos.
1.3.3

Factores genticos

No se conocen bien los factores dependientes del sujeto, pero los estudios en
gemelos demuestran que la mayor parte de la suceptibilidad a la infeccin
depende de la carga gentica y varias patologas asociadas a Helicobacter como
el adenocarcinoma gstrico son ms frecuentes en varones, cuando la infeccin
es igual de frecuente en ambos sexos. Estos datos indirectos sugieren que hay
factores individuales que influyen, pero nuestro conocimiento de este aspecto es
muy incompleto.
De hecho, la relacin biolgica entre helicobacter y el husped es muy compleja,
mantenindose habitualmente durante muchos aos en un estado en el cual una
bacteria con gran actividad replicativa (algo infrecuente en las infecciones
crnicas) sobrevive en el medio gstrico a pesar de una respuesta inmunolgica e
inflamatoria del husped, siempre presente en mayor o menor grado, pero que
elimina pocas veces la infeccin, ya que la tasa de seroconversin espontnea es
muy baja. El control del sistema inmunolgico del sujeto es un fenmeno muy
interesante e inexplicado y algunos autores han sugerido que un cierto grado de
inflamacin ser probablemente beneficioso para el germen.
1.3.4

Factores dependientes del germen

38

La virulencia del germen se ha atribudo a diferentes factores: forma espirilar que


le permite una movilidad en el moco gstrico, flagelos, ligandos especficos para
receptores presentes en la mucosa gstrica, presencia de enzimas como la
ureasa,

catalasa,

fosfolipasa,

particularmente la atencin

etc.

Sin

embargo

algunos

datos

llaman

de los investigadores. Aunque uniformemente

disponen de gen, solo una proporcin de las cepas (alrededor del 65%), producen
una denominada toxina vacuolante. En diversos estudios se encuentran cepas
vacA+ con ms frecuencia si hay patologa; estas cepas son ms citopticas in
vitro, y sobretodo en un reciente experimento se ha demostrado que son capaces
de producir una mayor lesin en un modelo.
La expresin de otra cititoxina (CagA) se ha relacionado tambin con cepas ms
patgenas, as como se ha demostrado una mayor reactividad inmunolgica
frente a esta toxina en pacientes con patologa asociada a la infeccin. En el caso
de la toxina vacuolante, aunque de momento solo es especulativa, resulta
especialmente interesante que la presencia del gen en todas las cepas sugiere y
podra expresarse de forma cambiante en diferentes momentos incluso por la
misma cepa bacteriana. Estos primeros datos sugieren fuertemente que la cepa
concreta del germen puede influir en las diferentes expresiones clnicas de la
infeccin. Se describen cada vez con ms detalle los mecanismos por los que el
Helicobacter pylori es capaz de producir inflamacin, pero su descripcin escapa
a los lmites de ste.

39

1.4

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA


Justificacin del problema

Al hacer el estudio observamos que:


1. Existen suficientes datos epidemiolgicos, experimentales y clnicos para
asociar al Helicobacter Pylori con la gastritis, lcera pptica, lcera gstrica y
duodenal e incluso con el cncer gstrico.
2. Las condiciones de vida y hbitos de los pacientes ayudan a que la bacteria
se desarrolle manifestndose en cualquiera de las enfermedades gstricas
descritas anteriormente.

1.5 HIPTESIS
Se consideran factores de riesgo para la infeccin con Helicobacter Pylori :
1. El estado socioeconmico bajo, condiciones de hacinamiento y condiciones
sanitarias no ptimas.
2. El agua es la variable de riesgo ms importante, por encima incluso que el
status socioeconmico de los grupos poblacionales.

40

3. Adems de otros cofactores como dieta rica en sal y baja en antioxidantes en


pacientes infectados que desarrollen gastritis crnica atrfica.

41

1.6 OBJETIVOS
1.6.1 Objetivo General
Contribuir al conocimiento de los factores de riesgo asociados a las
enfermedades digestivas por H. Pylori entre los pacientes adultos que acuden al
Laboratorio Clnico Freile y consultorio del Dr. Alfredo Dueas M. en el perodo
comprendido entre Octubre a Diciembre del 2001.

1.6.2 Objetivos especficos


1. Determinar la prevalencia de estos factores de riesgo en las enfermedades
gstricas: gastritis crnica, lcera pptica y lcera gstrica.
2. Establecer los factores de riesgo asociados a estas enfermedades causadas
por H. Pylori.

1.6.3 Objetivo Colateral


Optar por el ttulo de Doctor en Qumica y Farmacia.

42

CAPITULO II
MATERIALES Y METODOS
Se realiz un estudio de tipo prospectivo, descriptivo acerca de los factores
asociados a las enfermedades digestivas por H. Pylori en pacientes adultos que
acudieron al Laboratorio Clnico Freile y consultorio del Dr. Alfredo Dueas M.
2.1 UNIVERSO
Estuvo constitudo por todos los pacientes que acudieron al Laboratorio Clnico
Freile y consultorio del Dr. Alfredo Dueas M., en el perodo de estudio, con
sintomatologa de enfermedad digestiva y para realizarse una prueba serolgica
de determinacin de H. Pylori y endoscopa digestiva.

2.2 MUESTRA
Estuvo constituda por 100 pacientes diagnosticados con infeccin por H. Pylori
durante el perodo Octubre a Diciembre del 2001.

2.3 CRITERIOS DE INCLUSIN


Se incluyeron todos los pacientes de 20 a 60 aos de edad que acudieron al
Laboratorio Clnico Freile y consultorio del Dr. Alfredo Dueas que presentaron
valores elevados de H. Pylori, prueba positiva para biopsia y sintomatologa de
enfermedad digestiva, en el perodo de estudio.
43

2.4 OBTENCIN DE DATOS PRIMARIOS


Se confeccion una hoja de recoleccin de datos apta para ser procesada en
sistema IBM compatible, obtenindose informacin de las Historias Clnicas,
libros de resultados de laboratorio y anlisis de estadstica. Para relacionar los
datos se emple el diseo de las siguientes variables:

2.5 VARIABLES
2.5.1 Variables cualitativas

Sexo

Estado Civil

Estrato social

Tipo de trabajo

Manifestaciones clnicas

Tipo de comidas que ingiere regularmente

Hallazgos endoscpicos

Hbitos: fumador, bebedor, toma caf.

44

2.5.2 Variables cuantitativas:

Edad

Nmero de pacientes infectados

Nmero de muestras analizadas

Resultado de prueba antignica.

Procesamiento de la informacin
Toda la informacin fue procesada empleando medidas de resmenes simple
como el %, media desviacin standard. Los datos fueron tabulados en hojas de
clculo en Excell para realizar los grficos.
2.6 Mtodo empleado para la determinacin de Helicobacter Pylori
El mtodo empleado en esta investigacin es la determinacin de anticuerpos IgG
especficos para Helicobacter Pylori en suero humano por tcnica de ELISA:
GAP-IgG test (Prueba de gastritis y lcera pptica). Esta prueba cuando es usada
con otra informacin clnica, sirve para ayudar a diagnosticar la infeccin causada
por Helicobacter Pylori.

2.6.1 Principio del mtodo


La GAP-IgG test es una prueba ELISA para determinar la presencia de
anticuerpos IgG especficos para Helicobacter pylori en suero humano. Los

45

antgenos parcialmente purificados son inmovilizados en las microcubetas que


vienen en planchas, a las que se le aade el suero diludo de los pacientes. Los
anticuerpos IgG especficos para H. Pylori, si estn presentes en el suero, se
unen al antgeno. El exceso de anticuerpos IgG se lava con buffer y se aade la
enzima conjugada de IgG antihumano, para formar un complejo antgenoanticuerpo. El exceso de enzima conjugada se lava y se desarrolla un color con la
adicin de una enzima sustrato. La intensidad del color corresponde directamente
a la cantidad de anticuerpos presentes, la misma que se lee en espectrofotmetro
y es una interpretacin directa de los anticuerpos especficos de Helicobacter
Pylori en el suero de los pacientes.

2.6.2 Componentes del equipo


12 x 8 tiras de microcubetas cubiertas con antgenos inactivados de H. Pylori,
selladas en funda con desecante.
1.

Calibradores GAP IgG H. Pylori, con base de suero humano, en viales de 5


x 1.0 ml : Cal. 0, cal. 1, cal.2, cal. 3, cal. 4.

2.

Control negativo (1 x 1.0 ml.)

3.

Control positivo (1 x 1.0 ml)

4.

Conjugado Anti Humano IgG-HRP (1 x 10.0 ml)

5.

Solucin sustrato A (1 x 8 ml)

46

6.

Solucin sustrato B (1 x 8 ml)

7.

Diluyente de suero (concentrado 25x) (1 x 20 ml)

8.

Washing Buffer (concentrado 50x) (vial 1 x 20 ml)

9.

Solucin stop ( ClH 1 N) (1 botella x 6 ml)

Los sueros diludos, los calibradores y los controles contienen 0.01% de azida
sdica como preservante. Guardar el kit a 2 8 C

2.6.3 Materiales requeridos adicionalmente:


1.

Micropipetas de 25, 50 y 100ul con puntas descartables.

2.

Agua destilada

3.

Pipetas de 5 ml para la dilucin de las muestras.

4.

Probetas de 500 ml y 1000 ml.

5.

Fotmetro microelisa con longitud de onda de 450 nm.

6.

Toallas de papel absorbente.

7.

Tubos de vidrio (13 x 100 mm) para la dilucin de los sueros.

2.6.4 Advertencias y precauciones


1. Todos los reactivos deben manejarse como material potencialmente infeccioso
debido a que estn elaborados a base de suero humano.
47

2. La adhesin estricta al tiempo especificado y temperatura de incubaciones es


esencial para los resultados exactos.
3. No congele los reactivos
4. Mantenga los componentes del equipo de la prueba siempre a una
temperatura de 2-8C. No permita que los reactivos permanezcan a
temperatura ambiente por largos perodos de tiempo.
5. No mezcle reactivos de lotes diferentes.
6. No use reactivos expirados.
7. Las muestras de suero no deben tener turbiedad gruesa, hemlisis o cualquier
contaminacin microbiana.

2.6.5 Toma de la muestra


Tome aproximadamente 5ml de sangre venosa y separe el

suero

por

centrifugacin.
Puede guardarse muestras de suero refrigerado (2-8C) hasta 10 das. Si la
muestra no puede probarse en este perodo, congele a

20C. La hemlisis

excesiva, lipemia, la presencia de grumos grandes o el crecimiento bacteriano en


el espcimen, puede interferir con la exactitud de la prueba.

48

2.6.6

Preparacin del Reactivo y Almacenamiento

Buffer diluyente de suero (Dilucin 1:25)


Agregue todo el contenido del frasco en un recipiente de 500 ml que contenga
480 ml de agua destilada. . Mezcle completamente. Etiquete el recipiente como
Buffer diluyente de suero, y guarde a

2-8C

hasta el uso. El reactivo

reconstituido es estable a esa temperatura. Use 5 ml para cada muestra de suero.


Buffer lavador (Dilucin 1:50)
Agregue los volmenes enteros de los frascos en 980ml de agua destilada
contenida en un recipiente de 1000 ml. Mezcle completamente. Etiquete el
recipiente como Buffer lavador y guarde a 2-8C hasta el uso.
Reactivo sustrato
Mezcle solucin sustrato A y solucin sustrato B en la proporcin de 1:1 y
etiquete como Sustrato de trabajo. Prepare la solucin sustrato de trabajo con
una hora de anticipacin. Prepare slo el volumen requerido. Por ejemplo: para
seis microcubetas mezcle

2.5 ml de solucin del sustrato A con 2.5 ml de

solucin del sustrato B. El Sustrato de trabajo es estable 60 minutos a


temperatura del cuarto.
Almacenamiento
Todos los componentes del kit deben ser guardados a 2 8 C hasta la fecha de
expiracin. Despus de la apertura, los reactivos son estables por 60 das.

49

2.6.7

Procedimiento

El equipo de la prueba contiene 12 tiras de microcubetas. Desprenda las cubetas


de las tiras segn el nmero de muestras que van a probarse. Devuelva las tiras
sin usar a la funda original, empaquete y guarde a 2-8C.
Dilucin de la muestra: con precisin agregue 25 ul de cada suero paciente a 5 ml
de Buffer diluyente de suero en tubos de prueba de 13 x 100 mm (dilucin 1:200).
Mezcle completamente por inversin. Los sueros diludos son estables durante 2
semanas a 2-8C.
1. Incubacin del suero:
a) En las cubetas apropiadas, agregue 100ul de calibrador 0 hasta el 4, control
negativo, control positivo y el suero diludo de los pacientes.
b) Debe haber 100ul de solucin en cada microcubeta.
c) Suavemente agite el plato de las cubetas en una superficie plana durante 5
segundos.
d) Cubra el plato de las cubetas y djelo por una hora a temperatura ambiente
(22 26C).
2. Procedimiento de lavado
Despus de una hora de incubacin, deseche los volmenes de todas las cubetas
en el fregadero por decantacin rpida. Lave cada cubeta tres veces con 400ul de

50

Buffer de lavado. Deseche y seque con una toalla del papel, y entonces repita el
procedimiento dos veces ms.
3. Incubacin del conjugado:
a) Agregue 100ul de la Enzima conjugada de IgG Anti-humano HRP en todas
las cubetas.
b) Cubra el plato de las cubetas y djelo a temperatura ambiente por 30 minutos.
2

Lave (igual que el paso 2)

Incubacin del Sustrato:

a) Agregue 100ul del sustrato de trabajo en todas las cubetas. Suavemente


agite el plato en una superficie plana durante 5 segundos.
b) Cubra el plato y djelo en la oscuridad a temperatura ambiente (22 26C) por
10 minutos.
6. Detenga la reaccin:
a) Despus de exactamente 10 minutos, agregue 50ul de solucin Stop a todas
las cubetas. Suavemente agite el plato en una superficie plana durante 5
segundos.
b) Lea la densidad ptica de cada cubeta a 450 nm en un equipo apropiado. La
lectura debe hacerse dentro de los 30 minutos despus de la adicin de la
solucin stop.

51

2.6.8

Clculo de resultados

1. Lea la D.O de los calibradores, controles y muestras de pacientes y antelos.


2. Calcule la D.O. neta de los calibradores, controles y muestras de pacientes
por substraccin de la D.O del calibrador 0 de la D.O. de calibradores,
controles y muestras de pacientes.
3. Con esos datos elabore una curva de calibracin.

2.6.9 Control de Calidad


La D.O del calibrador 0 debe ser menor que 0.20.
El control negativo debe leer menos de 10 units/ml*
El control positivo debe de leer 25-50 units/ml*

2.6.10 Interpretacin
Resultado positivo: Muestras de pacientes con valores mayores o iguales a 20
units/ml son considerados positivos para la presencia de anticuerpos IgG
especficos para H. Pylori.
Resultado negativo: Muestras de pacientes con valores menores o iguales a 12.5
units/ml deben ser considerados negativos para la presencia de anticuerpos IgG
especficos para H. Pylori.
52

CAPITULO III
RESULTADO E INTERPRETACION
3.1 Anlisis de resultados y graficacin
Se estudiaron 100 casos de pacientes que presentaron sntomas de disfuncin
digestiva, comprendidos entre los 17 y 60 aos de edad que acudieron a consulta
con el Dr. Alfredo Dueas, quien les envi a realizarse exmenes de sangre para
la determinacin de Helicobacter Pylori y endoscopia con muestra para biopsia.
Se recogieron varios datos de la Historia Clnica de los pacientes como edad,
sexo, estado civil, estrato social, tipo de trabajo, alimentos que come
regularmente, es decir, grasas, fritos, harina y si tiene hbitos (bebe, fuma o toma
caf). Todo esto para tener una idea de la condicin social, cultural y de entorno
familiar de cada uno. Otros datos, como sntomas con que llegaron para
relacionarlos con los hallazgos endoscpicos y presencia de Helicobacter pylori,
para diagnosticar la enfermedad causada por el germen. Adems de los
antecedentes familiares y medicamentosos.
Toda esta informacin se traslad a una Hoja de datos que se proces en forma
computarizada y se obtuvieron valores y porcentajes, aplicndose pruebas
estadsticas. Finalmente se disearon tablas estadsticas para facilitar el anlisis
y presentacin de los resultados obtenidos.

53

Resultados:
Tabla I: Distribucin segn la edad:
Edad
17 - 30
31- 40
41 - 50
51 - 60
Total

Muestra en
%
31
27
25
17
100

En la tabla I, de un total de 100 pacientes observamos que el porcentaje mayor


de infectados con H. Pylori se ubica entre los 17 a 30 aos, seguido de un 27% y
un 25% de pacientes comprendidos entre los 31 a 40 aos y 45 a 50 aos
respectivamente.
Porcentaje de pacientes segn sus edades:

Distribucin segn la edad

100
90
80

Porcentaje

70
60
50
40
30
20
10
0
17 - 30

31- 40

41 - 50

51 - 60

Edad

54

Tabla II: Distribucin segn el sexo:


Sexo
Masculino
Femenino
Total

N de
muestras
45
55
100

Aunque la bibliografa dice que la bacteria ataca indiscriminadamente a hombres


y mujeres por igual, en la poblacin muestra de estudio, vemos que el nmero de
mujeres infectadas es mayor que el nmero de varones infectados.

Distribucin segn el sexo

M asculi no
45%

F emeni no
55%

55

Tabla III: Distribucin segn el estado civil:

Estado civil
Soltero
Casado
Viudo-Divorciado
Total

N Pacientes
41
55
4
100

De los 100 pacientes estudiados, el 55 % corresponde a casados, el 41 % a


solteros y apenas el 4 % a viudos o divorciados. Esto nos podra llevar a pensar
en una transmisin de la bacteria de persona a persona.

Distribucin segn el es tado civil

100

Prcentaje

80
60
40
20
0
Soltero

Casado

ViudoDivorciado

Estado civil

56

Tabla IV: Distribucin de acuerdo al estrato social:

Estrato social
Bajo
Medio
Alto
Total

N Pacientes
26
62
12
100

Distribucin segn el estrato social

Alto
12%

Bajo
26%

Medio
62%

Si bien las condiciones socioeconmicas influyen en forma inversamente


proporcional, es decir, mientras ms bajo es el nivel socioeconmico, mayor es la
prevalencia de la bacteria, en este caso dicho criterio no se aplica, debido a que
la poblacin muestra de estudio estuvo constituda por pacientes que acudieron a
consulta particular con un especialista, se tomaron exmenes de sangre en forma
particular, al igual que debieron realizarse endoscopias y biopsia; todo esto
resultando inalcanzable para personas de estrato social bajo. Por esta razn la
mayora de los pacientes estudiados corresponde a clase social media y media
57

alta, lo cual es importante tener en cuenta para definir que las condiciones de
hacinamiento y desaseo que favorecen la reproduccin de la bacteria en los
niveles ms pobres de la poblacin no son las mismas condiciones del grupo
estudiado.
Tabla V: Distribucin segn el tipo de alimento
Tipo de alimento
Grasas
Frituras
Harinas

N Pacientes
67
69
88

Al consultarle a los pacientes sobre el tipo de alimento que consumen ms, entre
las 3 categoras, vemos que 88 consumen ms harinas que grasas y fritos. Esto
se debe a que la alimentacin de nuestra poblacin se basa en harinas
especialmente (pan, verde, yuca, papa). La importancia radica en que la ingestin
de harinas va a provocar que se presenten sntomas tales como: agrieras,
flatulencia, llenura, tanto en pacientes que tengan la bacteria, como en aquellos
que no la tengan.

Distribucin segn el tipo de alimentos

90
80

Pacientes

70
60
50
40
30
20
10
0
Grasas

Fr it uras

Har inas

Tipos de alimentos

58

Tabla VI: Hbitos


Consumo de alcohol
Consumo de alcohol
SI
NO
36
64
Consumo de alcohol

SI
36%

NO
64%

Consumo de cigarrillos
Fumadores
SI
NO
20
80

Fum a dore s

SI
20%

NO
80%

59

Bebedores de caf
Toma caf
SI
NO
25
75

Toma Caf

SI
25%

NO
75%

La importancia de definir estas variables en la investigacin es porque estos tres


elementos son irritantes de la mucosa gstrica, y si el paciente presenta una
gastritis producida por H. Pylori, el cuadro clnico se agravar. Los resultados
obtenidos nos muestran que el consumo de alcohol se encuentra aumentado en
relacin al consumo de tabaco y caf.

60

Tabla VII: Antecedentes familiares


Enf. Dig. en la familia
SI
NO

N Pacientes
30
70

Enf.
digestivas

Enfermedades digestivas en la familia

NO

SI

10

20

30

40

50

60

70

N Pacientes

De los 100 pacientes, 30 reportaron antecedentes de enfermedades digestivas


entre los miembros de su familia: madre, padre, hermanos, abuelos y tos.
Entre las enfermedades digestivas reportadas entre los familiares de los
pacientes estn: cncer, dispepsia, lcera y gastritis, distribudas de la siguiente
manera:
Enf.
Digestivas
Gastritis
Dispepsia
Ulcera
Cncer
Otros
Total

N
Pacientes
2
4
13
9
2
30

61

Siendo la lcera la enfermedad de ms alto rubro y en cuanto al cncer, ste


corresponde a: cncer gstrico (5), cncer de colon (2), cncer de pncreas (1) y
cncer de esfago (1).

En fe r m e d ad e s d ig e s tivas

N Pacientes

30
25
20
15
10
5
0
Gastritis

Dis peps ia

Ulcera

S1

Cnc er

Otros

Enfe rm e d ad e s

Respecto

los

medicamentos,

solo

tres

Total

pacientes

reportaron

tomar

antiinflamatorios, de los cuales, 2 no tenan hbitos, pero ambos tenan padre y


madre ulcerosos; el otro no tena parientes don antecedentes de enfermedad
ulcerosa pero en cambio, beba, fumaba, tomaba caf y en la biopsia mostr
cantidades abundantes de bacteria (Helicobacter pylori).

62

CAPITULO IV
CONCLUCIONES Y RECOMENDACIONES
4.1 CONCLUSIONES

Los factores de riesgo para desarrollar infeccin por Helicobacter Pylori son:

El agua principalmente; ya que la bacteria se mantiene y se transporta en ella, al


hacer uso de agua contaminada para la preparacin de alimentos debido al
deficiente servicio de agua potable en nuestro medio a travs de tuberas
obsoletas y la poca precaucin de la ciudadana de por lo menos hervir agua para
beber.

Ingerir alimentos preparados en la calle, sin las elementales normas de higiene.

Los antecedentes familiares, especialmente cuando los padres han desarrollado


lcera y cncer gstrico.

El hbito de consumir alcohol, fumar y beber caf, agravan una gastritis


ocasionada por la bacteria, desarrollando a la larga una enfermedad ms grave
como es el cncer de estmago.

La costumbre de no visitar al mdico, sino solo cuando ya la enfermedad se ha


presentado, agravan el cuadro clnico tanto ms cuando los pacientes llegan
despus de haberse automedicado.

63

4.2 RECOMENDACIONES

Cualquier persona mayor de 45 aos, con presencia de anticuerpos anti


Helicobacter pylori en la sangre, fumador y/ o bebedor, con antecedentes de
dispepsia de larga evolucin y antecedentes familiares de lcera o cncer, debe
hacerse

endoscopa

con

biopsia,

para

determinar

lesiones

tempranas

relacionadas con el desarrollo de un cncer por la presencia de la bacteria en su


estmago.

Cumplir con el tratamiento recomendado, ya que con ste se puede erradicar el


H. Pylori fcilmente y la probabilidad de volver a adquirir la infeccin es muy baja.

Se deben cambiar hbitos alimenticios, como el consumir harinas o caf, que


puedan incidir en el deterioro de la salud.

Extremar las medidas de higiene en el hogar, a fin de evitar el contagio con los
dems miembros de la familia.

Evitar comer fuera de casa y consumir agua hervida.

Evitar o disminuir el consumo de bebidas alcohlicas.

Educar a la poblacin sobre los riesgos de mantener hbitos y costumbres


peligrosas para la salud, a fin de PREVENIR enfermedades de graves
consecuencias.

64

65

ANEXOS

ANEXO # 1
HOJA DE RECOLECCION DE DATOS
ENCUESTA
1 EDAD
2 SEXO

8 ESTRATO SOCIAL
BAJO
MEDIO
ALTO

M
F

3 ESTADO
CIVIL
SOLTERO
CASADO
VIUDO

9 TIPO DE TRABAJO
MANUAL
MENTAL
FISICO

4 COME REGULARMENTE
GRASAS
FRITOS
HARINA

10 HABITOS
FUMA
BEBE
CAF

5 SINTOMAS
DOLOR

11 ANTECEDENTES FAMILIARES
ALGUN MIEMBRO DE SU
FAMILIA
SUFRE DE ALGUNA
ENFERMEDAD
DIGESTIVA ?
SI

NAUSEAS

DIARREA
DISPEPSIA

6 HALLASGOS
ENDOSCOPICOS
(DIAGNOSTICO)
GASTRITIS
REFLUJO ESOFAGICO
ULCERA GASTRICA
ULCERA DUODENAL
OTRO

NO
INDIQUE
PARENTESCO
12 TOMA ALGUN TIPO DE
ANTINFLAMATORIO
SI
NO

7 PRUEBA PARA H. PYLORI


SUERO
BIOPSIA

66

67

68

69

70

71

72

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