AISLAMIENTO DE Serratia marcescens A PARTIR DE MUESTRA DE HARINA DE MAIZ

ISOLATION OF Serratia marcescens FROM SAMPLE OF CORN FLOUR

1

Llorente Herrera Any Carolina 1Ortega Martnez Yodis Yohana 1Oviedo Prez Estela Margarita
1Serna Gmez Deivid Santiago.

RESUMEN
Con el objetivo de emplear los conocimientos adquiridos a lo largo del curso de Microbiologa
General, se trabaj en el aislamiento de la bacteria Serratia marcescens a partir de harina de maz.
Para la obtencin de la muestra utilizada en el aislamiento se toman 20 gramos de harina que son
diluidos en 80 mililitros de agua peptona, con el fin de enriquecer la muestra y permitir la proliferacin
de la bacteria deseada, posteriormente se incuba a 37C por 24 horas para as obtener una mayor
homogenizacin de la muestra; para aislar Serratia marcescens se procede enriquecer la muestra en
caldo Brain Heart Infusion (BHI) y posteriormente se incuban a 20 y 37C por 24 horas. Se toman
inoculo del caldo BHI y se siembran en agar xld y agar macckonkey, luego son incubado a 20 y 37C
por 24 horas. Presentndose crecimiento de Serratia marcescens en la muestra de harina de maz, lo
cual se evidenci a travs de colonias de color rojo, su morfologa se logro confirmar por la aplicacin
de la tincin de Gram observndose como bacilos Gram negativos.
Palabras claves: Serratia marcescens, agua peptona, caldo BHI, agar macckonkey, Agar xld, tincin
de Gram.

ABSTRACT
With the aim to make use of the expertise acquired over the course of General Microbiology, worked in
the isolation of the bacteria Serratia marcescens from maize flour. For obtaining the sample used in
the isolation was taken 20 grams of flour that are diluted in 80 ml of peptone water, in order to enrich
the sample and allow the proliferation of the bacterium desired, subsequently incubated at 37C for 24
hours to obtain a greater homogenization of the sample; to isolate Serratia marcescens is applicable
to enrich the sample in broth Brain heart infusion (BHI) and subsequently incubated at 20 and 37C for
24 hours. Take inoculum broth BHI and planted in agar XLD agar macckonkey and they are then
incubated at 20 and 37C for 24 hours. Appearing growth of Serratia marcescens in the sample of
maize flour, which is evidenced through colonies of red color, its morphology is achieving confirm by
the application of the Gram stain observed as Gram negative bacilli.
Keywords: Serratia marcescens, peptone water, broth, macckonkey BHI Agar Agar, XLD, Gram stain.

INTRODUCCIN

diferentes mtodos, como cultivo tradicional de

los pueblos originarios de Amrica es en esta
parte del mundo donde se consume ms
asiduamente, especialmente en Iberoamrica

Se denomina harina de maz al polvo fino que

se obtiene moliendo
el cereal mediante

1 Estudiante de Ingeniera de Alimentos, IV semestre, Universidad de Crdoba, Facultad

de Ingenieras, Programa de Ingeniera de Alimentos, Berstegui - Crdoba.
1

donde es parte fundamental. Serratia

marcescens es un bacilo Gram negativo,
anaerobio facultativo, perteneciente a la familia
Enterobacteriaceae y que crece con facilidad
en medios hmedos y comestibles, sobre todo
en aqullos que contienen almidn y
carbohidratos, donde las colonias pigmentadas
que aparecen en los alimentos son fcilmente
confundidas con sangre.

Para este aislamiento se us el laboratorio de

microbiologa y biotecnologa de la universidad
de Crdoba en la sede de Berstegui, para
poder realizar este asilamiento se tuvo en
cuenta los materiales y equipos disponibles
para la obtencin de Serratia marcescens a
partir de una muestra de harina de maz.
Materiales y equipos

Los medicamentos en solucin, instrumental

mdico, nebulizadores, catteres, agujas,
monitores y las cerdas de los cepillos de aseo
tambin resultan ser una fuente de
contaminacin y causa de epidemias ocurridas
en unidades de terapia intensiva. Otros
factores de adquisicin de infeccin por S.
marcescens
incluyen
pacientes
inmunodeprimidos que han sido sometidos a
ciruga o que han tenido una terapia con
corticoides. Por tanto, S. marcescens es un
patgeno oportunista, asociado con un gran
nmero de enfermedades que pueden
conducir a la muerte del paciente, entre las
que se incluyen infecciones nosocomiales.
S. marcescens puede ser miembro de la micro
biota intestinal, tracto respiratorio, vas
urinarias y aparato cardiovascular; se le
encuentra en ambientes y reservorios pobres
en nutrientes como el agua potable, caeras e
insumos hospitalarios (jabones, antispticos,
entre
otros).
Su
adquisicin
es
mayoritariamente hospitalaria, especialmente
en la unidad de terapia intensiva, siendo las
secreciones respiratorias, heridas y orina, los
productos ms frecuentes que provienen de
sitios
colonizados
por
esta
bacteria.
Clnicamente, las bacteriemias por S.
marcescens se presentan con mayor
frecuencia en pacientes con enfermedad de
base como diabetes, neoplasias e insuficiencia
renal crnica.

MATERIALES Y METODOS

80 ml de agua de peptona
Esptula
Balanza analtica
Incubadora 37
Asa redonda
Mechero
Incubadora 20
Harina de maz
Portaobjetos
Algodn
Alcohol
tubos de caldo nutritivo
tubos de caldo BHI
cajas de Agar macconkey
cajas con Agar xld
Asas bacteriolgicas en punta
Microscopio
colorante cristal violeta
Lugol
alcohol acetona
safranina de Gram
Frasco con agua destilada.
Prueba Catalasa (Perxido de
hidrogeno)
tubos con prueba Kia
tubos con prueba TSI
tubos con prueba Indol (CPT)
tubos con prueba Motilidad y H2S
(SIM)
tubos con simmons citrato
tubo de medio (LIA)
tubo de medio nitrato
Discos impregnados con oxidasa
tubos de medio RM-VP

Mtodos
2

1. Recoleccin de harina de maz : Para

la recoleccin y obtencin de la Serratia
marcescens a partir de una muestra de
harina de maz. nos dirigimos a un
distribuidor de maz. Ubicado en el
municipio de cinaga de oro en el
departamento de Crdoba.
La harina de maz se puede adquirir en
cualquier mercado o supermercado
primeramente en grano y despus se
realizara la molienda del respectivo
grano para de este obtener la muestra
de harina de maz.

crecimiento del microorganismo (segn

teora relacionada), de los cuales, cada
caja de los dos medios ser incubado a
20C y 37C durante 24 horas.
5. Identificacin
morfolgica:
Posteriormente se realizar la tincin
de Gram para la identificacin
morfolgica de la serratia marcescens.
6. Pruebas bioqumicas: En esta etapa
del procedimiento partimos de las
colonias desarrolladas en el Agar
macckonkey a 20 y 37C para
evidenciar la presencia de serratia
marcescens se realizaron las pruebas
bioqumicas de catalasa para identificar
la presencia de la enzima catalasa, TSI
y KIA que determina la capacidad de la
bacteria de atacar un hidrato de
carbono especifico, incorporado en
medio de crecimiento bsico, con
produccin o no de gases, junto con la
posible formacin de H2S, Indol para
determina la capacidad de una bacteria
de desdoblar el Indol de la molcula de
triptfano y Motilidad y H2S para as
poder observar la movilidad del
microorganismo, gracias a la baja
concentracin de agar, lo cual nos
indica la presencia de flagelos, por otro
lado poder determinar si se ha liberado
H2S por la accin enzimtico de los
aminocidos que contienen azufre
produciendo una reaccin visible de
color negro, descarboxilasa mide la
capacidad enzimtica de un organismo
para descarboxilar un aminocido para
formar una amina, con la consiguiente
alcalinidad,
tambin
se
observa
formacin de H2S. En este medio (LIA)
se evala la lisina Descarboxilasa (LD),
los microorganismos LD+ transforman
la lisina en cadaverina, amina que en
medio cido provoca el viraje del
indicador prpura de bromocresol; los
LDfermentadores
de
glucosa
producirn otro viraje.
Nitrato
Est
prueba
permite
determinar la capacidad de un
organismo de reducir el nitrato en
nitritos o en nitrgeno libre.

2. Preparacin de la muestra: El
aislamiento de serratia marcescens se
realizara a partir de harina de maz.
serratia
marcescens
se
puede
encontrar en harina de maz , debido a
que este posee altos contenidos de
almidn y carbohidratos por lo tanto
este microorganismo puede realizar sus
procesos metablicos en esta muestra ,
por tal razn es posible hallarla en esta
zona.
Se deben tomar 20 gr de harina de
maz e introducirlo en 80ml de agua
peptona para enriquecer la muestra y
permitir la proliferacin de la bacteria
deseada y incubarla de 20-37 C por 24
horas.
3. Enriquecimiento de la muestra: AL
finalizar el perodo de incubacin se
debe inocular a una proporcin 1:10 en
dos caldos enriquecidos caldo BHI
(Infusion Heart Brain), los cuales
posteriormente deben incubarse a 20 y
37 C durante 24 horas.
4. Siembra en medios slidos: Al
finalizar el perodo de incubacin se
sembrarn microorganismos tomando
inoculos del caldo BHI en 2 medios de
cultivo, los cuales son 2 cajas de Agar
macconkey y 2 cajas de Agar xld Se
escogieron estos dos medios debido a
la que son medios que inhiben a las
gram
positivas
y
permiten
el
3

oxidasa: Determina la presencia de la

enzima oxidasa, se debe a la presencia
de un sistema de citocromo oxidasa
que activa la oxidacin del citocromo
reducido por el oxgeno molecular.
citrato: Determina si una bacteria es
capaz de utilizar el citrato como nica
fuente de carbono para el metabolismo
provocando alcalinidad. La utilizacin
de cidos orgnicos y sus sales como
fuente de carbono produce carbonatos
alcalinos en nueva degradacin.
Rojo de metilo: Es un indicador de pH.
Acta entre un pH 4,2 y 6,3 variando
desde
rojo
hasta
amarillo
respectivamente. Mediante esta prueba
se comprueba la capacidad de un
microorganismo de producir y mantener
estables los productos terminales
cidos de la fermentacin cido-mixta.
Se utiliza como parte de la
identificacin a nivel especie de los
bacilos entricos Gram negativos.
Voges-Proskauer: Permite observar si
el microorganismo fermenta la glucosa
por la va butanodilica. Se usa en la
identificacin de bacilos entricos Gram
negativos.
Un tubo de cada prueba es incubado a
20C y 37C por 24 horas.

enriquecimiento de la muestra ya enriquecida

utilizando los caldos BHI que aportan
nutrientes que proporciona un adecuado
desarrollo microbiano. La infusin de cerebro
de ternera, la infusin de corazn vacuno y la
peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y
vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico y el fosfato disdico otorga
capacidad buffer (describe cuanto acido o base
puede absorber una sustancia sin modificar su
pH).
Al realizar la siembra de nuestra muestra
previamente enriquecida se siembra en los dos
tipos de medios Agar macckonkey y agar xld
se pudo observar que en el macckonkey se
present crecimiento de colonias de color
rojizo.
Propias de Serratia marcescens en mayor
concentracin a temperatura de 37C mientras
que a 20C hubo crecimiento pero con menos
colonias esto se debe a que la temperatura de
crecimiento de este microorganismo es de
cosntante crecimiento a 37C no obstante, se
ha observado crecimiento entre 0C y 37C por
esta razn tambin observamos crecimiento a
20C. No evidenciamos crecimiento con Agar
xld en ningn rango de temperatura aun siendo
este un medio selectivo diferencial, utilizado
para el aislamiento y diferenciacin de
patgenos entricos Gram negativos.
Realizando la
tincin de Gram para la
identificacin
morfolgica
de
Serratia
marcescens se tomaron colonias de la caja de
macckonkey a 20 y 37C observndose
bacterias Gram- negativas
de color fucsia y con formas de bacilos ,
caractersticas fundamentales de los Serratia
marcescens.
Las pruebas bioqumicas que se utilizaron en
el laboratorio para ayudar a la identificacin de
la bacteria en estudio fueron catalasa dando
como resultado positivo con frotis de colonias a
20 y 37C debido a la formacin inmediata de
de burbujas. En tanto a la prueba de TSI
observamos
a
temperatura
de
20C
observamos rojo en pico flauta y en
profundidad gas y a 37C se observ el pico de
flauta amarillo por fermentacin de sacarosa y
lactosa en aerobiosis y gas en profundidad, en
KIA a temperatura de 20C en el pico de flauta
se observ alcalino en el pico flauta no hubo

RESULTADOS Y DISCUSIN
Los resultados obtenidos despus de la
preparacin de la muestra evidenciaron una
mayor proliferacin de la bacteria deseada
gracias a haber enriqueciendo la harina de
maz con agua peptona la cual es un medio
selectivo,
que
proporciona
nutrientes
necesarios para el desarrollo de Serratia
marcescens.
Con el fin de obtener una mayor
homogenizacin se llevo a cabo un pre4

fermentacin de lactosa en aerobiosis y en

profundidad se present gas a 37C se
observen pico flauta alcalino y en profundidad
gas, en la prueba de Indol se observo la
formacin del anillo rojo luego de agregado el
reactivo de kovacs a 20 y 37C
respectivamente, en tanto Motilidad y H2S se
observ el medio se solidifico a 20 y 37C.

BIBLIOGRAFA
1. Abbott
S.:
Klebsiella,
Enterobacter,
Citrobacter, and Serratia. In: Manual of
Clinical Microbiology. Murray P., Baron E.,
Pfaller M., Tenover F., Yolken R. eds 7th ed.
American
Society
of
Microbiology.
Washington D.C. 1999.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

2. . Berthelot P., Grattard F., Amerger C., et al:

Investigation of a nosocomial outbreak
due to Serratia marcescens in a maternity
hospital. Infect. Control Hosp. Epidemiol.
20:233, 19994. Fleisher F., ZimmermanBaer U., Zbinden R., et al: Three
Consecutive
Outbreaks
of Serratia
marcescens in a Neonatal Intensive Care
Unit. Clin. Infect. Dis. 34: 767, 2002.

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos

de las siembras, las pruebas bioqumicas y
tincin de Gram, se puede inferir que se aisl
Serratia marcescens a partir de una muestra
de harina de maz; esto se pudo deducir
debido a que el microorganismo arroj
resultados tales como crecer en anaerobiosis,
formar colonias de color rojo, observndose
ms abundancia de colonias a temperatura de
37C que de 20C porque la temperatura en la
cual se desarrolla esta bacteria es de 0C a
37C aunque su mxima escala de crecimiento
es de 20 a 37C y al observar su morfologa
como bacilos Gram-negativo, las cuales todas
estas descripciones corresponden a este
gnero de bacterias aun as aunque no se
present crecimiento en el Agar xld siendo este
un medio selectivo diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciacin de patgenos
entricos Gram negativos. Es uno de los ms
aptos para el aislamiento e identificacin de
este gnero bacteriano cabe concluir que si se
aisl la bacteria a partir de la muestra harina
de maz.

3. . Grimont F. & Grimont P.: The Genus

Serratia In: Starr M., Stolp H., Tr_per H et
al (eds), The Prokaryotes: a Handbook on
Habitants, Isolation, and identification of
Bacteria. Springer-Verlag, Berlin, Gerrnany,
19816. Janda J. & Abbott S.: The
Enterobacteria
Lippincott-Raven,
Philadelphia PA, USA, 1998.
4. Miranda G., Kelly C. Solrzano F., et al:
Use of pulsed-field gel electroforesis typing
to study an outbreak of infection due
toSerratia marcescens in a neonatal
intensiva care unit. J.Clin.Microb. 34: 31,
1996.

As mismo se recomienda la desinfeccin del

sitio de trabajo ya que es fundamental para
llegar a nuestros resultados y evitar el
crecimiento de microorganismos indeseados y
las posibles contaminaciones en el medio,
tambin tener un adecuado manejo de las
temperaturas de incubacin en la muestra. De
igual manera llevar el procedimiento de
manera ordenada con el propsito de aislar el
microorganismo deseado.

5. Zaidi M., Sifuentes J., Bobadilla M. et al:

Epidemie
of Serratia
marcescens bacteremia and meningitis in a
neonatal unit in Mxico City. Infect. Control
Hosp. Epidemiol. 10: 14, 1989

ANEXOS
TABLA DE RESULTADOS DE PRUEBAS BIOQUMICAS TEORICAS
5

REGISTRO FOTOGRAFICO

Imagen N1 Muestra de harina molida.

Imagen N4 Enriquecimiento en caldo BHI e

incubarla a 20C por 24

Imagen N2 muestra de harina llevada al

laboratorio y pesada.

Imagen N5 Enriquecimiento en caldo BHI y

Nutritivo despus de incubacin a 37C.

Imagen N3 Enriquecimiento de la muestra de

harina de maz en agua peptona.

Imagen N6 Siembra de inoculo de caldo BHI

en Agar XLD despus de incubado a 20C y
37C.

Imagen N10 Prueba bioqumica de Catalasa

a partir de frotis de Agar macconkey a 20C.

Imagen N8 Siembra de inoculo de caldo BHI

en macckonkey despus de incubado a 20C y
37C.

Imagen N12 Prueba bioqumica de citrato

20C

Imagen N11 Prueba bioqumica de Catalasa a

partir de frotis de Agar macckonkey a 37C.

Imagen N14 Tincion de Gram a partir de frotis

de Agar macConkey a 20 C.
Imagen N13 Prueba bioqumica de citrato a
37C.

Imagen N 18 prueba bioquimica lia despues

de incubacion a a 20C y a 37C.

Imagen N 15 Tincion de Gram a partir de

frotis de Agar macconkey a 37 C.

Imagen N 19 pruebas bioquimicas TSI y KIA a

20C y 37C.

Imagen N16 Prueba bioqumica de Indol

despus de incubacin a 20C y agregado el
reactivo de kovacs.
Imagen N 20 pruebas bioquimicasde nitrato a
20C y 37C.

Imagen N17 Prueba bioqumica de Indol

despus de incubacin a 37C y agregado el
reactivo de kovacs.

Imagen N 21 pruebas bioquimicasde Sim y

MR-VP a 20C y 37C.